NO330776B1 - Anvendelse av en adenovirus som har et funksjonelt thymidinkinase-gen, for fremstilling av et medikament for anvendelse i terapi av hjernetumor. - Google Patents
Anvendelse av en adenovirus som har et funksjonelt thymidinkinase-gen, for fremstilling av et medikament for anvendelse i terapi av hjernetumor. Download PDFInfo
- Publication number
- NO330776B1 NO330776B1 NO20012220A NO20012220A NO330776B1 NO 330776 B1 NO330776 B1 NO 330776B1 NO 20012220 A NO20012220 A NO 20012220A NO 20012220 A NO20012220 A NO 20012220A NO 330776 B1 NO330776 B1 NO 330776B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- adenovirus
- tumor
- thymidine kinase
- gene
- patients
- Prior art date
Links
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 title claims abstract description 35
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 title claims abstract description 16
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 title claims abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 title claims description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 28
- 238000002271 resection Methods 0.000 claims description 24
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N ganciclovir Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2COC(CO)CO IRSCQMHQWWYFCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229960002963 ganciclovir Drugs 0.000 claims description 9
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 7
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 claims description 7
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 claims description 7
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 5
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 18
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 18
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 16
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 14
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 9
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- 102000053171 Glial Fibrillary Acidic Human genes 0.000 description 3
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 2
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 2
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 238000007428 craniotomy Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 2
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010855 neuropsychological testing Methods 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 206010073128 Anaplastic oligodendroglioma Diseases 0.000 description 1
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 1
- 241000713862 Moloney murine sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 201000010133 Oligodendroglioma Diseases 0.000 description 1
- 208000007542 Paresis Diseases 0.000 description 1
- 241001068263 Replication competent viruses Species 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 206010002224 anaplastic astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003556 anti-epileptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 1
- 201000007201 aphasia Diseases 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 230000001037 epileptic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- LGMLJQFQKXPRGA-VPVMAENOSA-K gadopentetate dimeglumine Chemical compound [Gd+3].CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.CNC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O LGMLJQFQKXPRGA-VPVMAENOSA-K 0.000 description 1
- 229940044350 gadopentetate dimeglumine Drugs 0.000 description 1
- 210000003976 gap junction Anatomy 0.000 description 1
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010019465 hemiparesis Diseases 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000002075 inversion recovery Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 238000011545 laboratory measurement Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000003924 mental process Effects 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000036651 mood Effects 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000003557 neuropsychological effect Effects 0.000 description 1
- 231100001079 no serious adverse effect Toxicity 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- KRCQSTCYZUOBHN-UHFFFAOYSA-N rabeprazole sodium Chemical compound [Na+].COCCCOC1=CC=NC(CS(=O)C=2[N-]C3=CC=CC=C3N=2)=C1C KRCQSTCYZUOBHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001373 regressive effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000037152 sensory function Effects 0.000 description 1
- 230000006403 short-term memory Effects 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000001321 subclavian vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/861—Adenoviral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Oppfinnelsens område
Foreliggende oppfinnelse angår anvendelse av en adenovirus som har et funksjonelt tymidinkinase-gen, for fremstilling av et medikament for anvendelse i terapi av hjernetumor.
Bakgrunn for oppfinnelsen
Behandling av ondartet gliom er fortsatt en utfordring for leger og forskere. Tymidinkinase-genterapi, ved anvendelse av Herpes Simplex virus tymidinkinase- (HSVtk) genet, er én av de mest lovende behandlingsformer i forsøk på å forbedre overlevelsen hos pasienter med ondartet gliom. HSVtk-genterapi er basert på evnen til tymidinkinase til å katalysere fosforyleringen av ganciclovir (GCV). Fosforylert GCV virker som en toksisk nukleotidanalog som fører til død hos målcellene. Dette fenomen blir ytterligere forbedret ved en ytterligere effekt, hvor naboceller også blir ødelagt, selv uten transfeksjon. Denne effekt er antatt å skyldes frigjøring av toksiske nukleotidanaloger fra de transfekterte celler til naboceller via gap-forbindelser.
Retrovirus og adenovirus har vært anvendt som vektorer for genterapi. Begge vektorer har visse fordeler og begrensninger. Hjernetumorer er spesielt egnet for retrovirus-mediert genoverføring, siden retrovirus bare kan infisere prolifererende celler, mens normale, ikke-delende hjernevev forblir intakt. Genoverførings-effektiviteten til retrovirus er relativt lav, men kan forbedres ved anvendelse av retrovirus pakkende celler istedenfor isolert virus. Transduksjonstiden kan teoretisk forlenges og antallet transfekterte celler økes. Med retrovirus innføres det transfekterte gen i genomet av målcellen og langvarig gen-ekspresjon kan derfor oppnås.
Eek S.L. et al., "Treatment of Advanced CNS Malignancies...", Human Gene Therapy, 1996, vol. 7, s. 1465-1482, Izquierdo M. et al., "Gene Therapy in Brain Tumours:...", Acta Neurochir (supply), 1997, vol. 68, s. 111-117 og Stockhammer G. et al.," Gene therapy for glioblestome multiforme:...", J Mol Med, 1997, vol. 75, s. 300-304 beskriver behandling av hjernetumorer med virus-mediert overføring av HSV-TK i kombinasjon med GCV etter en initiell reseksjon av tumoren.
Oppsummering av oppfinnelsen
Foreliggende oppfinnelse er derimot basert på det overraskende funn at behandling av hjernetumorer ved anvendelse av tymidinkinase-genterapi kan gjennomføres mer effektivt hvis et adenovirus blir anvendt som bærer for overføring av genet inn i tumorceller. Foreliggende oppfinnelse vedrører følgelig anvendelse av en adenovirus som har et funksjonelt tymidinkinase-gen, for fremstilling av et medikament for anvendelse i terapi av hjernetumor. Spesielt blir tumoren behandlet etter administrering av gangciclovir eller en ekvivalent forbindelse. Tymidinkinase-genet vil typisk være et avledet fra Herpes Simplex virus (HSVtk).
Adenovirus/tymidinkinase-genkonstruksjonen er vist å være mer fordelaktig enn retrovirus-genoverføring.
Beskrivelse av foreliggende oppfinnelse
Foreliggende oppfinnelse vedrører følgelig anvendelse av en adenovirus som har et funksjonelt tymidinkinase-gen, for fremstilling av et medikament for anvendelse i terapi av hjernetumor, ved administrering av adenovirus i en mengde på 3x10<10>pfu/10ml i 0,1-0,3ml kvantiteter, 10mm dypt med 30-70 injeksjoner/pasient inn i veggen til hjernetumor-hulen etterfulgt av administrasjon av ganciclovir, etter reseksjon av tumoren.
Denne oppfinnelsen vedrører videre at i anvendelsen ifølge krav 1, er reseksjonen total, dvs. mer enn 98% av tumorvolumet er fjernet. Videre omfatter oppfinnelsen at i anvendelsen i følge oppfinnelsen er adenoviruset fritt for proteiner forskjellig fra de naturlig forbundet med adenoviruset. I denne oppfinnelsen er tymidinkinase-genet Herpes Simplex virus tymidinkinase-gen. Videre omfatter medikamentet som fremstilles en stabilisator, idet stabilisatoren er glycerol.
Ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter anvendelsen ifølge foreliggende oppfinnelse at hjernetumoren er ondartet gliom.
Medikamentet som fremstilles i foreliggende oppfinnelse blir fortrinnsvis formulert uten tilsetning av proteiner (andre enn de forbundet med adenoviruset). Dette er antatt å være foretrukket fremfor de preparater hvor albumin blir tilsatt for å redusere virkningene av nedbrytende enzymer på de aktive komponenter. Fortrinnsvis omfatter dette preparat glycerol som en stabilisator.
Mengden av aktive produkter som bør administreres til en pasient kan bestemmes av fagfolk på området, basert på informasjon gitt her og på de vanlige hensyn, så som administreringsveien, lidelsen som behandles og dens status, etc.
Det følgende Eksempel illustrerer oppfinnelsen.
Eksempel
I dette eksemplet ble sikkerhet og effektivitet av retrovirus-pakkende celle-mediert og adenovirus-mediert HSVtk genterapi sammenlignet, for behandling av ondartet gliom. Ved forsøket forbedret ikke retrovirus-pakkende celle-genterapi overlevelsen hos pasienter med ondartet gliom, sammenlignet med en lacZ-transfektert kontrollgruppe. Tumorprogresjon fant sted hos alle pasienter, som evaluert ved magnetisk resonansavbildning (MRI) tre måneder etter tumor-reseksjon og genoverføring. Adenovirus-genterapi forbedret imidlertid betydelig resultatet for pasientene. I tillegg viste MRI hos tre av de syv adenovirus-behandlede pasienter at tumorene forble stabile.
Retrovirus og retrovirus-pakkende cellelinje
En PA317/tk pakkende cellelinje ble fremstilt som beskrevet i Poptani et al, Cancer Gene Ther. 5:101-109 (1998). 1,2 kb HSV1-TK cDNA (McKnight, Nukleic Acid Res. 8:5949-5964 (1980)) ble subklonet inn i pLXSN retroviralt plasmid (Miller et al, Mol. Cell. Biol., 5:2985-3902 (1986)) for å skape et pLTKSN-plasmid. Ekspresjon av HSV1-TK er drevet av 5' Moloney murin sarkom-virus LTR. Vektoren inneholder også en indre SV40-promoter som driver neomycin-resistens- (NEO) gen. PA317-cellelinje ble transfektert med pLTKSN-plasmid ved anvendelse av kalsiumfosfat-utfelling. PA317/3.0D5 cellelinje (PA317/tk) produserte 106 cfu/ml retrovirus som bestemt i 209F fibroblast-forsøk (Ylå-Herttuala et al, J. Clin. Invest. 95: 2692-2698 (1995)). Før injeksjonene ble pakkende celler ble ekspandert, trypsinert og fortynnet til 10<9>celler/10 ml Optimem (Gibco BRL). Cellene ble vist å være fri for mykoplasma, andre mikrobiologiske forurensninger og villtype virus.
(3-galactosidase (lacZ)-inneholdende BAG-retrovirus ble produsert i (pCRIP. Titere med 6x10<5>cfu/ml ble produsert og anvendt som ukonsentrert kultur-supernatant (DMEM, 0,5 % NCS, Gibco).
Adenovirus
Hos HSVtk-adenovirus ble ekspresjonskassetten bestående av human cytomegalovirus (hCMV) enhancer og promoter element -HSV 1-TK cDNA -simian virus 40 (SV40) polyadenyleringssignal subklonet i pAdenogal-plasmid (Barr et al, Gene Ther. 1:51-58 (1994)) for å skape pAdCMVTK-plasmid. Linearisert pAdCMVTK og sub360 adenoviral DNA (McClane et al, Hum. Gene Ther. 8:739-746 (1997)) ble kotransfektert inn i 293 celler (ATCC CRL1573) og rekombinant adenovirus, AdCMVTK, ble dannet gjennom homolog rekombinasjon. Virusklonen ble renset ved tre runder plaque-assay og etter hver runde ble tilstedeværelsen av TK-ekspresjonskassett i adenovirus-genom bekreftet ved PCR. Storskala-produksjon av AdCMVTK ble utført i 293 celler og virus-lysatet ble renset og konsentrert i CsCI gradient, dialysert og lagret ved -80°C. Virustiter ble bestemt ved plaque-assay i 293 celler. Adenovirus-preparater ble analysert for integritet av TK-ekspresjonskassett ved anvendelse av restriksjonsenzym-spaltning fulgt av Southern blot analyse. Fravær av villtype replikasjonskompetent virus ble bekreftet ved cytopatisk forsøk på HeLa- (ATCC CCL-2) og A549 (ATCC CC185) celler. Virus- preparatet ble også testet for at det var fritt for mikrobiologiske forurensninger og lipopolysakkarid (Limulus-assay, Sigma).
I lacZ ble adenovirus nukleært målrettet (3-galactosidase cDNA under en (3-aktin-promoter og en CMV-enhancer, klonet inn i E1-deletert region av adenoviralt genom ved anvendelse av homolog rekombinering. Adenovirus ble konsentrert til titer 3 x 10<10>pfu/ml ved ultrasentrifugering. Renset virus ble oppsamlet og dialysert med 5 mM Hepes (pH 7,8) og til slutt med 5 mM Hepes (pH 7,8) inneholdende 20% glycerol.
Pasienter
Femten tumorer hos 14 pasienter ble behandlet med HSVtk-genterapi. I tillegg ble 7 kontrollpasienter transfektert med kontroll lacZ markørgen 4-5 dager før reseksjon. Alle pasientene hadde en Karnofsky-score over 70. Gjennomsnittlig alder av pasientene var 51 år (fra 20-70 år). Tumoren var tilbakevendende i 13 tilfeller (59 %). Alle pasientene mottok kortikosteroider og antiepileptisk medisinering og strålingsterapi ble anvendt for de novo tumorer.
Operasjon og genoverføring
Alle pasienter ble underkastet kraniotomi og tumor-reseksjon. Reseksjonen var så radikal som mulig under mikroskop. Diagnose av ondartet gliom ble bekreftet av frosne seksjoner på operasjonstidspunktet. Etter tumor-reseksjon ble HSVtk retrovirus-pakkende celler (10<9>celler/10 ml) eller adenovirus (3x10<10>pfu/10 ml) injisert inn i veggen av tumorhulen i 0,1-0,3 ml mengder, 10 mm dypt, med 30-70 injeksjoner/pasient. GCV-behandling (5 mg/kg/d) ble gitt intravenøst gjennom subclavian-venen to ganger pr. dag i 14 dager. Medisineringen startet 14 dager eller 5 dager etter tumor-reseksjon og genoverføring til henholdsvis retrovirus eller adenovirus-pasienter.
(3-galactosidase-gen ble overført til syv kontrollgruppe-pasienter via et kateter som var stereotaktisk innsatt i tumoren. Kateteret ble holdt på plass inntil tumoren var resektert ved kraniotomi. Genoverføringsvektorer (BAG retrovirus, titer 6x10<5>cfu og adenovirus, titer fra 3x10<8>til 3x10<10>pfu) ble injisert i tumoren i løpet av tre påfølgende dager, fulgt av tumor-reseksjon 1-2 dager senere. Pasienter med (3-galactosidase markørgen ble ikke behandlet med GCV. Alle
pasienter ble behandlet i henhold til standard klinisk praksis med strålingsterapi.
Magnetisk resonans-avbildning
HSVtk-behandlede pasienter ble fulgt med MRI på første postoperative dag, 4, 8 og 12 uker etter genoverføringen og hver andre måned deretter. MRI-avbildning ble utført med 1,5 T Magnetom Vision (Siemens) og besto av T1-vektede (580/14/1 -'repetition time/echo time/aquicition") aksiale, koronale og sagittale sekvenser også etter kontrastmedium (gadopentetat-dimeglumin 0,1 mmol/kg); turbo-T2 vektede (5400/99/2) og FLAIR- ("fluid attenuated inversion recovery"; TR=9000, TE=119, AC=1) sekvenser. Alle bilder ble tatt med 5 mm tykke tilgrensende seksjoner og 256x256 matriks. I henhold til MRI første postoperative dag ble kirurgisk reseksjon gradert som total reseksjon, når mer enn 98% av tumorvolumet var fjernet; subtotal reseksjon, når mer enn 66%, men mindre enn 98% av tumorvolumet var fjernet og partiell reseksjon, når mindre enn 66% av tumorvolumet var fjernet. I henhold til oppfølgings-MRI, ble tumoradferd gradert som: progressiv når det var selv det minste tegn til tumor-gjenvekst, stabil når tumorstatus forble den samme og regressive når tumorvolum var redusert.
Analyse av blod, urin og vevprøver
Blod- og urin-prøver ble analysert ved anvendelse av rutinemessige metoder før genoverføring, på første postoperative dag og ukentlig i løpet av sykehusoppholdet bortsett fra leukocytt-differensialtelling som ble målt hver andre dag under GCV-medisineringen. Anti-virus-antistoffer ble målt før og to uker etter genoverføringen. PCR- og villtype-virus-forsøk ble utført med plasma- og urin-prøver før genoverføring og 3, 5, 7 og 21 dager etter gen-overføringen.
Histologisk diagnose ble utført fra frosne seksjoner på tidspunktet for operasjon og senere bekreftet med paraffin-seksjoner ved anvendelse av hematoksylin-eosin- og GFAP- (Boehringer) merking. Proliferasjonsaktivitet av tumorene ble målt ved Ki67- (Dako) merking. Etter reseksjon ble lacZ-transfekterte tumorer analysert ved X-gal-merking som beskrevet i Puumalainen et al, Hum. Gene Ther., 9:1769-1774 (1998).
Nevropsykologi
Nevropsykologisk testing ble utført for å bestemme kognitive funksjoner og livskvalitet før operasjonen og hver andre måned etter behandlingen. Evaluering av hukommelsesfunksjoner anvendte Wechsler Memory Scale (WMS), som inneholder syv undertester for korttids hukommelsesevne, assosiert læringstest, forsinket minne, oppmerksomhet og fleksibilitet ved mentale prosesser. Livskvalitet ble målt i henhold til en standardisert evaluering av søvnvanskeligheter, tretthet, hukommelsesfunksjoner, somatiske lidelser, humør, sensoriske og motoriske funksjoner, spenninger, aktivitet, depresjon, irritasjon, ineffektivitet og usikkerhet. LacZ-transfekterte pasienter ble ikke underkastet nevropsykologisk testing.
Statistikk
Statistisk analyse av MRI-resultater ble utført med Kruskal Wallis test for SPSS. Resultat for pasientene ble analysert med Fisher's eksakte test for SPSS. Statistikk for laboratorie- og nevropsykologiske analyser ble evaluert med Anova for SPSS.
Resultater
Tabell 1 viser resultatene fra genterapi-forsøkene.
Alle pasienter ble behandlet med tumor-reseksjon. Retrovirus pakkende celler (PA317/tk) ble anvendt for syv pasienter og adenovirus (Adv/tk) for syv pasienter. Én pasient (#) fikk gjentatt behandling med PA317/tk-celler for to forskjellige tumorer. Seks av tilfellene var de novo tumorer, andre var tilbakefall etter tidligere operasjon (op), strålingsterapi (rd) eller kjemoterapi (ch). Tumor var lokalisert i temporal (temp), occipital (occ), frontal (front) eller parietal (pariet) lobus. (Sin) indikerer venstre side og (dx) høyre side. Virus-antistoffer ble målt fra perifert blod før og to uker etter genterapien. Diagnose ble bekreftet som glioblastom (gb) hos 82% av pasientene, to pasienter hadde anaplastisk astrocytom (aa) og to anaplastisk oligodendrogliom (ao). Proliferasjonsaktivitet av tumorene ble målt ved ki67 immunohistokjemisk merking. Tumoridentitet ble bekreftet ved glial fibrillær syreprotein (GFAP) immunomerking. Resultatet ble målt i måneder og (<*>) indikerer død av pasienten. Forskjell mellom retro- og adeno-viralt behandlede pasienter i henhold til overlevelse var betydelig (p<0,05) ved Fisher's eksakte test. Den første postoperative MRI ble utført 1 eller 2 postoperative dager etter tumor-reseksjonen og genterapien og den andre postoperative MRI ble utført 3 måneder senere. Reseksjonen var total hvis mer enn 98% av tumormassen ble resekert, subtotal hvis reseksjonen var mellom 66-98% og partiell hvis mindre enn 66% av tumoren ble resekert. Ved oppfølgings-MRI ble veksten evaluert som progressiv (prog) hvis det var selv det minste tegn til tumor-gjenvekst. Forskjell i progressiv vekst mellom retro- og adenoviralt behandlede pasienter var i henhold til MRI-resultater betydelig (p<0,05); Kruskal Wallis test. NA = ikke analysert.
Genoverføringer var klinisk sikre med både retro- og adenovirus-vektorer og ga ingen alvorlige ugunstige effekter. Imidlertid ble epileptiske anfall øket hos to pasienter som mottok adenovirus selv om begge disse pasienter hadde opplevet epileptiske symptomer tidligere. Én pasient hadde delvis reversibel hemiparese og afasi som en komplikasjon ved bifokal frontal tumorreseksjon. Hun fikk retrovirus-pakkende celle genterapi kombinert med tumorreseksjon. To pasienter fikk feberreaksjoner etter adenovirus-mediert genoverføring med ventrikulære åpninger. Kroppstemperaturen ble så høy som 39,0°C, men reaksjonene var kortvarige og reversible uten noen gjenværende symptomer.
Ingen vesentlige endringer ble sett ved rutinemessige laboratorie-målinger. Bare én pasient hadde mild og reversibel leukopeni under GCV-behandlingen uten symptomer. Adenovirus-antistoffer øket bemerkelsesverdig hos 3 av 7 Adv/tk-behandlede pasienter; to hadde også en feberreaksjon. Det var ingen betydelige endringer i lever- og nyre-funksjoner. Ingen systemisk levering av virus i plasma- og urin-prøver ble detektert ved anvendelse av PCR og villtype-virus-undersøkelser. Post-mortem prøver fra én pasient ble analysert ved PCR, som viste at tumoren og alt annet analysert vev var negativt for transgen 6 måneder etter genoverføringen.
MRI-oppfølgnings-resultater viste ingen eller meget begrenset effekt for retrovirus-pakkende celle genterapi. Alle pasienter hadde progressiv sykdom tre måneder etter tumor-reseksjon og genterapi. For adenovirus-mediert genterapi var MRI-resultatene betydelig (p<0,05) bedre med stabil sykdom hos 3 av 7 pasienter tre måneder etter behandlingen.
Sammenlignet med den lacZ-behandlede kontrollgruppen, viste overlevelse av pasientene i retrovirus-gruppen ingen forbedring. Forskjellen mellom resultat for retro- og adeno-viralt behandlede pasienter var betydelig (P<0,05).
Claims (7)
1. Anvendelse av en adenovirus som har et funksjonelt tymidinkinase-gen, for fremstilling av et medikament for anvendelse i terapi av hjernetumor, ved administrering av adenovirus i en mengde på 3x10<10>pfu/10ml i 0,1-0,3ml kvantiteter, 10mm dypt med 30-70 injeksjoner/pasient inn i veggen til hjernetumor-hulen etterfulgt av administrasjon av ganciclovir, etter reseksjon av tumoren.
2. Anvendelse ifølge krav 1, idet reseksjonen er total, dvs. mer enn 98% av tumorvolumet er fjernet.
3. Anvendelse ifølge krav 1 eller krav 2, hvor adenoviruset er fritt for proteiner forskjellig fra de naturlig forbundet med adenoviruset.
4. Anvendelse i henhold til hvilket som helst av de foregående krav, hvor tymidinkinase-genet er Herpes Simplex virus tymidinkinase-gen.
5. Anvendelse i henhold til hvilket som helst av de foregående krav, hvor medikamentet omfatter en stabilisator.
6. Anvendelse ifølge krav 5, hvor stabilisatoren er glycerol.
7. Anvendelse i henhold til hvilket som helst av de foregående krav, hvor hjernetumoren er ondartet gliom.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9824437.9A GB9824437D0 (en) | 1998-11-06 | 1998-11-06 | Gene therapy |
| PCT/EP1999/009017 WO2000028059A1 (en) | 1998-11-06 | 1999-11-05 | Adenovirus-mediated gene therapy |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20012220L NO20012220L (no) | 2001-05-04 |
| NO20012220D0 NO20012220D0 (no) | 2001-05-04 |
| NO330776B1 true NO330776B1 (no) | 2011-07-11 |
Family
ID=10842035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20012220A NO330776B1 (no) | 1998-11-06 | 2001-05-04 | Anvendelse av en adenovirus som har et funksjonelt thymidinkinase-gen, for fremstilling av et medikament for anvendelse i terapi av hjernetumor. |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6579855B1 (no) |
| EP (1) | EP1135513B2 (no) |
| JP (1) | JP4733833B2 (no) |
| KR (1) | KR20020013473A (no) |
| CN (1) | CN1184321C (no) |
| AT (1) | ATE341639T1 (no) |
| AU (1) | AU749451B2 (no) |
| CA (1) | CA2348624C (no) |
| CY (1) | CY1106198T1 (no) |
| DE (1) | DE69933468T3 (no) |
| DK (1) | DK1135513T4 (no) |
| ES (1) | ES2273521T5 (no) |
| GB (1) | GB9824437D0 (no) |
| HU (1) | HUP0104046A3 (no) |
| NO (1) | NO330776B1 (no) |
| PL (1) | PL193076B1 (no) |
| PT (1) | PT1135513E (no) |
| WO (1) | WO2000028059A1 (no) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0910950D0 (en) | 2009-06-24 | 2009-08-05 | Ark Therapeutics Ltd | Filtration |
| GB0916997D0 (en) * | 2009-09-28 | 2009-11-11 | Ark Therapeutics Ltd | Combination therapy |
| GB201100804D0 (en) * | 2011-01-18 | 2011-03-02 | Ark Therapeutics Ltd | Drug combination |
| US20130296407A1 (en) * | 2011-01-18 | 2013-11-07 | Ark Therapeutics, Ltd. | Combination Therapy for Cancer |
| SG10201609345QA (en) | 2012-02-07 | 2017-01-27 | Global Bio Therapeutics Inc | Compartmentalized method of nucleic acid delivery and compositions and uses thereof |
| US20160058888A1 (en) * | 2013-05-08 | 2016-03-03 | Gliotherapy Limited | Treatment of Operable High-Grade Glioma With Sitimagene Ceradenovec Gene Therapy and Ganciclovir |
| ES2733911T3 (es) | 2013-08-08 | 2019-12-03 | Global Bio Therapeutics Inc | Dispositivo de sujeción para procedimientos minimamente invasivos |
| DE102019000490A1 (de) | 2019-01-23 | 2020-07-23 | HAEMES Verwaltungsgesellschaft mbH | Verwendung von Oligonukleotiden für die Behandlung von Tumoren |
| US20210187027A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Novel il2 agonists and methods of use thereof |
| CN115667290A (zh) | 2020-05-12 | 2023-01-31 | 再生元制药公司 | 新型il10激动剂及其使用方法 |
| CN117597365A (zh) | 2021-05-04 | 2024-02-23 | 再生元制药公司 | 多特异性fgf21受体激动剂及其应用 |
| WO2023004282A2 (en) | 2021-07-19 | 2023-01-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Il12 receptor agonists and methods of use thereof |
| CA3238029A1 (en) | 2021-11-11 | 2023-05-19 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Cd20-pd1 binding molecules and methods of use thereof |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0662441B2 (ja) * | 1986-02-18 | 1994-08-17 | 花王株式会社 | 抗腫瘍物質徐放性製剤 |
| US5631236A (en) * | 1993-08-26 | 1997-05-20 | Baylor College Of Medicine | Gene therapy for solid tumors, using a DNA sequence encoding HSV-Tk or VZV-Tk |
-
1998
- 1998-11-06 GB GBGB9824437.9A patent/GB9824437D0/en not_active Ceased
-
1999
- 1999-11-05 JP JP2000581225A patent/JP4733833B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-05 WO PCT/EP1999/009017 patent/WO2000028059A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-11-05 DK DK99971860.4T patent/DK1135513T4/da active
- 1999-11-05 PL PL349489A patent/PL193076B1/pl unknown
- 1999-11-05 US US09/830,725 patent/US6579855B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-05 EP EP99971860A patent/EP1135513B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-05 CA CA2348624A patent/CA2348624C/en not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-05 CN CNB998129305A patent/CN1184321C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-11-05 PT PT99971860T patent/PT1135513E/pt unknown
- 1999-11-05 KR KR1020017004945A patent/KR20020013473A/ko not_active Application Discontinuation
- 1999-11-05 HU HU0104046A patent/HUP0104046A3/hu not_active Application Discontinuation
- 1999-11-05 AU AU13851/00A patent/AU749451B2/en not_active Ceased
- 1999-11-05 ES ES99971860T patent/ES2273521T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-05 AT AT99971860T patent/ATE341639T1/de active
- 1999-11-05 DE DE69933468T patent/DE69933468T3/de not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-05-04 NO NO20012220A patent/NO330776B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-10-13 CY CY20061101473T patent/CY1106198T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CY1106198T1 (el) | 2011-06-08 |
| ATE341639T1 (de) | 2006-10-15 |
| CN1184321C (zh) | 2005-01-12 |
| AU1385100A (en) | 2000-05-29 |
| HUP0104046A3 (en) | 2003-09-29 |
| JP2002529097A (ja) | 2002-09-10 |
| DE69933468T3 (de) | 2012-01-19 |
| PL193076B1 (pl) | 2007-01-31 |
| EP1135513B1 (en) | 2006-10-04 |
| NO20012220L (no) | 2001-05-04 |
| CA2348624A1 (en) | 2000-05-18 |
| DE69933468D1 (de) | 2006-11-16 |
| DE69933468T2 (de) | 2007-01-11 |
| JP4733833B2 (ja) | 2011-07-27 |
| DK1135513T3 (da) | 2006-11-27 |
| DK1135513T4 (da) | 2011-11-21 |
| NO20012220D0 (no) | 2001-05-04 |
| PL349489A1 (en) | 2002-07-29 |
| KR20020013473A (ko) | 2002-02-20 |
| GB9824437D0 (en) | 1999-01-06 |
| HUP0104046A2 (hu) | 2002-01-28 |
| EP1135513A1 (en) | 2001-09-26 |
| AU749451B2 (en) | 2002-06-27 |
| WO2000028059A1 (en) | 2000-05-18 |
| EP1135513B2 (en) | 2011-08-10 |
| PT1135513E (pt) | 2006-12-29 |
| ES2273521T5 (es) | 2011-12-28 |
| ES2273521T3 (es) | 2007-05-01 |
| US6579855B1 (en) | 2003-06-17 |
| CA2348624C (en) | 2012-07-31 |
| CN1325450A (zh) | 2001-12-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6979677B1 (en) | Inhibition of vascular smooth muscle cell proliferation | |
| US6632427B1 (en) | Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons | |
| EP0755454B1 (en) | Aav-mediated delivery of dna to cells of the nervous system | |
| US11951183B2 (en) | Adeno-associated virus compositions for PAH gene transfer and methods of use thereof | |
| AU708870B2 (en) | Gene therapy using ovine adenoviral vectors | |
| US20020187127A1 (en) | Methods of increasing distribution of nucleic acids | |
| US20020091094A1 (en) | Glutamic acid decarboxylase (GAD) based delivery system | |
| JP2002516295A (ja) | Ａａｖベクターの対流増加送達 | |
| NZ547243A (en) | Targeted retrograde gene delivery to motor neurons | |
| NO330776B1 (no) | Anvendelse av en adenovirus som har et funksjonelt thymidinkinase-gen, for fremstilling av et medikament for anvendelse i terapi av hjernetumor. | |
| US6410011B1 (en) | Gene therapy for restenosis using an adenoviral vector | |
| EP1478236B1 (en) | Targeted retrograde gene delivery to motor neurons | |
| US20030223966A1 (en) | Treatment for pompe disease | |
| WO2022255906A1 (en) | Drug for genetic and gene-cell-based therapy | |
| Jani et al. | Modulation of cell-mediated immunity prolongs adenovirus-mediated transgene expression in sciatic nerve | |
| US7405284B2 (en) | Reducing cellular dysfunction caused by mitochondrial gene mutations | |
| Shimizu et al. | Infectious retrovirus is inactivated by serum but not by cerebrospinal fluid or fluid from tumor bed in patients with malignant glioma | |
| MXPA01004410A (es) | Terapia de gen mediada por adenovirus | |
| Murphy et al. | Gene therapy approaches to Duchenne muscular dystrophy | |
| Jimenez | Gene therapy for malignant brain tumors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |