PL128164B1 - Process for preparing aureofacine preparation - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania preparatu eureofacyny. Aureofacyna znana takze pod nazwe ayfaktyny /AYF/ oraz patracyny jest antybiotykiem z grupy makroli- dów polienowych. Na skutek swojej duzej aktywnosci przeciwgrzybowej i korzystnych wlasno¬ sci terapeutycznych stwarza duze mozliwosc jej wprowadzenia do lecznictwa* Antybiotyk aureofacyna wyodrebniana dotychczas z brzeczki fermentacyjnej szczepu Streptomyces aureofaclens jest w postaci kompleksu antybiotyków.Surowy preparat aureofacyny otrzymuje sie wedlug znanej metody na drodze fermentacji szczepu Streptomyces aureofaclens w hodowli glebinowej przewietrzanej na pozywce i w wa¬ runkach powszechnie stosowanych fermentacji promieniowców, po czym brzeczke fermentacyj¬ ne poddaje sie ekstrakcji n-butsnolem, zas oddzielony ekstrakt butanolowy zageszcza sie w prózni do malej objetosci i surowe aureofacyne wytreca sie nadmiarem acetonu, oddziela wytracony osad, przemywa kilkakrotnie suchym acetonem, pozostalosc suszy w prózni w poko¬ jowej temperaturze.Wyodrebniona w ten sposób aureofacyna wykazuje E £ ¦ 500 - 600 przy dlugosci fali A * 380 nm. Tak wyodrebniona aureofacyna jest toksyczna oraz nierozpuszczalna w wodzie i plynach fizjologicznych* Niedogodnosci te w istotny sposób ograniczaj 9 stosowa¬ nie aureofacyny w lecznictwie i dlatego nie jest ona dotychczas lekiem. Dotychczas nie stosowano oczyszczania preparatu uzyskanego z brzeczki fermentacyjnej.Celem wynalazku jest otrzymanie aureofacyny pozbawionej wyzej wymienionych niedo¬ godnosci* Wedlug wynalazku sposób wytwarzania preparatu aureofacyny, z surowego prepa¬ ratu uzyskanego z brzeczki fermentacyjnej otrzymanej na drodze fermentacji szczepu Streptomyces aureofaclens w hodowli glebinowej przewietrzanej, na pozywce 1 w warunkach stosowanych fermentacji promieniowców, z zastosowaniem butanolu jako rozpuszczalnika aureofacyny, charakteryzuje sie tym, ze surowe aureofacyne traktuje sie butanolem z toluenem w proporcji 1 : 1, w temperaturze 20 - 50 C, po czym po oddzieleniu ekstraktu pozostalosc zawierajece antybiotyk przemywa sie toluenem i heksanem i ekstrahuje sie aureofacyne metanolem z dodatkiem kwasnego weglanu potasu lub sodu uzytego w ilosci po-2 128 164 trzebnej do stanu nasycenia roztworu, do ekstraktu dodaje butanolu w ilosci okolo jednej czwartej czesci objetosciowej metanolu, po czym wytreca sie czysty antybiotyk aureofacyne przez odparowanie polarnych rozpuszczalników, zas wytrecony osad aureofacyny przemywa sie toluenem i heksanem i ponownie rozpuszcza sie w metanolu z dodatkiem kwasnego weglanu potasu lub sodu uzytego w ilosci potrzebnej do uzyskania stanu nasycenia, do roztworu dodaje butanolu w ilosci okolo jednej czwartej czesci objetosciowej metanolu, po czym wytreca sie antybiotyk aureofacyne przez odparowanie rozpuszczalników.Korzystnym jest, iz po pierwszej ekstrakcji metanolem z dodatkiem kwasnego weglanu potasu albo sodu,, pozostalosc ekstrahuje sie kilkakrotnie mieszanine ozpuszezaIników butanol : metanol : woda o skladzie objetosciowym 10 : 2 : 3,a przesecz po tej ekstra¬ kcji laczy sie z pierwszym przeseczem metanolowym^po czym wytreca czysty antybiotyk przez odparowanie rozpuszczalników, przy czym butanol wprowadza sie wówczas do ukladu, przed odparowaniem rozpuszczalników, w mieszaninie rozpuszczalników butanol : metanol : woda.Alternatywny sposób wytwarzania preparatu aureofacyny z surowego preparatu uzyskane- go z brzeczki fermentacyjnej otrzymanej na drodze fermentacji szczepu Streptomyces aureofaciens w hodowli glebinowej przewietrzanej, na pozywce i w warunkach stosowanych fermentacji promieniowców, z zastosowaniem butanolu jako rozpuszczalnika aureofacyny i acetonu jako substancji wytrecajecej aureofacyne z roztworu, charakteryzuje sie tym, ze surowe aureofacyne traktuje sie butanolem z toluenem w proporcji 1 : 1 w temperatu¬ rze 20 - 50°C, po czym po oddzieleniu ekstraktu pozostalosc zawierajece aureofacyne przemywa sie toluenem i heksanem 1 ekstrahuje sie aureofacyne metanolem z dodatkiem kwasnego weglanu potasu lub sodu uzytego w ilosci potrzebnej do stanu nasycenia roztwo¬ ru, po czym wytreca sie czysty antybiotyk przez wprowadzenie do ukladu acetonu albo izopropanolu, a odseczone aureofacyne ponownie rozpuszcza sie w metanolu z dodatkiem kwasnego weglanu potasu lub sodu w ilosci potrzebnej do uzyskania stanu nasycenia i do¬ daje sie butanolu w ilosci okolo jednej czwartej czesci objetosciowej metanolu, po czym wytreca sie aureofacyne przez odparowanie rozpuszczalników, Wedlug wynalazku uzyskuje sie preparat aureofacyny w postaci nieznanego doted kom¬ pleksu z kwasnym weglanem sodu lub potasu. Preparat aureofacyny o ekstynkcji 1 ^ £1 cm * 200° Przy dlugosci fali A ¦ 377 nm uzyskuje sie w pierwszym etapie ekstrahowa¬ nia metanolem z dodatkiem kwesnego weglanu potasu lub sodu, po czym przez powtórne roz¬ puszczenie oczyszczonej aureofacyny w metanolu z kwasnym weglanem potasu lub sodu prze¬ prowadza sie je w forme rozpuszczalne w plynach fizjologicznych.Wyizolowana aureofacyne sposobem wedlug wynalazku wykazuje wysoke absorpcje w ultra- i *y fiolecie E1 £n okolo 2000 przy \ * 377 nm, co stanowi o Jej wysokiej czystosci i rzu¬ tuje na aktywnosc biologiczne charakteryzujece sie wartoscie stezenia antybiotyku hamu- jecego rozwój drozdzy Sacharomyces cereviciec, IC Q - 0,0005 Aig/ml oraz miare aktywno¬ sci lizowania komórek na przykladzie krwinek ludzkich SH_Q « 4jug/ml. Otrzymana aureo- facyna Jest doskonale rozpuszczalna w wodzie i roztworach fizjologicznych, ponadto na¬ daje sie równiez do stosowania na drodze iniekcji. Tak wyizolowana aureofacyna jest t rwa la.Przedmiot wynalazku ilustruje ponizsze przyklady wykonania.Przyklad I. a/ Odtluszczenie. 1 g surowej aureofacyny o ekstynkcji Ej - 450 przy A « 377 nm rozciera sie poczetkowo z i ml rozpuszczalnika skladajecego sie w równych czesciach objetosciowych z butanolu i toluenu, a nastepnie miesza sie z 75 ml tego rozpuszczalnika podczas podgrzewania na lazni o temperaturze 50°C. Po czasie okolo pól godziny odsecza sie rozpuszczalnik, a antybiotyk przemywa toluenem i heksanem. Do rozpuszczalnika przechodze substancje tluszczopodobne nieaktywne biolo¬ gicznie w ilosci okolo 20 % ciezaru poczetkowego antybiotyku.128 164 3 b/ Usuwania innych zanieczyszczen zawartych w preparacie. Odtluszczony antybiotyk • rozciera sie z 1 ni metanolu i 0,15 g kwasnego weglanu potasu, miesza na lazni o tempera¬ turze 50°C z 75 ml metanolu przez pól godziny, a nastepnie saczy 1 ekstrahuje sie anty¬ biotyk trzykrotnie ukladem rozpuszczalników o skladzie objetosciowym butanol 10 : meta¬ nol 2 : woda 3 zbierajec przesacze. Polaczone przesecze ekstraktów wraz z ekstraktem me¬ tanolowym zageszcza sie prózniowo do 100 ml, a wytracony antybiotyk odsacza sie i prze¬ mywa toluenem 1 heksanem. Uzyskuje sie okolo 700 g antybiotyku. c/ Przeprowadzenie preparatu w forme rozpuszczalna w plynach fizjologicznych. Oczy¬ szczony preparat dodatkowo ekstrahuje sie 150 ml metanolu z 50 mg kwasnego weglanu po¬ tasu w sposób podany wyzej. Osad nierozpuszczalny wraz z pozostaloscia po poprzedniej ekstrakcji zawiera jeszcze nikle ilosci antybiotyku i moze byc wykorzystywany ponownie.Przesaczony ekstrakt metanolowy traktuje sie 40 ml butanolu, zageszcza prózniowo do objetosci 30 ml. Wytracony antybiotyk w ilosci okolo 500 mg odsacza sie 1 przemywa tolu¬ enem i heksanem. W tej formie rozpuszcza sie doskonale w wodzie 1 plynach fizjologicz¬ nych, a jego absorpcja przy dlugosci fali A. m 377 nm wynosi E, ¦ 1080. Aktywnosc biolo¬ giczna tak oczyszczonej aureofacyny w stosunku do Sacharomyces cerevlsiac IC50 ¦ 0,0005 jag/ml, a wlasciwosci lityczne oznaczone na krwinkach ludzkich EH5Q ¦ 4jug/ml.Przyklad II. 5 g aureofacyny wstepnie odtluszczonej, jak w przykladzie I rozciera sie z mala iloscia metanolu i 500 g weglanu sodu, miesza na lazni o temperatu¬ rze 50°C z 400 ml metanolu przez pól godziny, a nastepnie saczy. Przesaczony ekstrakt metanolowy traktuje sie 100 ml butanolu,zageszcza prózniowo do objetosci 80 al,a wytra¬ cony antybiotyk przemywa sie toluenem i heksanem 1 ponownie rozpuszcza w 900 ml mstanolu z dodatkiem 300 mg kwasnego weglanu sodu w sposób podany wyzej. Przesaczony ekstrakt me¬ tanolowy traktuje 200 ml butanolu, zageszcza prózniowo,po czym wytracony antybiotyk przemywa toluenem i heksanem. Otrzymuje sie 4,5 g czystej, rozpuszczalnej w wodzie aureofacyny o podobnych wlasnosciach fizycznych i biologicznych do antybiotyku otrzyma¬ nego w przykladzie I.Przyklad III . 5 g aureofacyny odtluszczonej Jak w przykladzie I ekstra¬ huje sie 400 ml metanolu zawierajacego 500 mg kwasnego weglanu sodu. Przesaczony ekstrakt zadaje sie 1000 ml acetonu. Wytracony osad czystej aureofacyny przemywa sie toluenem 1 heksanem i ponownie rozpuszcza w 900 ml metanolu z dodatkiem 400 mg kwasnego weglanu sodu. Przesaczony ekstrakt metanolowy traktuje sie 200 ml butanolu, zageszcza prózniowo, a wytracony antybiotyk przemywa toluenem 1 heksanem.Przyklad IV. 20 g aureofacyny surowej o bardzo niskim stopniu czystosci /E* » 150/ w wyniku oczyszczenia sposobem,Jak w przykladzie I daje produkt o E. ¦ 1080 w ilosci 0,40 g.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania preparatu aureofacyny, z surowego preparatu uzyskanego z brze¬ czki fermentacyjnej otrzymanej na drodze fermentacji szczepu Streptomycas eureofaciens w hodowli glebinowej przewietrzanej, na pozywce 1 w warunkach fermentacji promieniowców, z zastosowaniem butanolu jako rozpuszczalnika antybiotyku, znamienny tym, ze surowa aureofacyne traktuje sie butanolem z toluenem w proporcji 1:1, w temperaturze 20 - 50°C, po czym po oddzieleniu ekstraktu, pozostalosc zawierajaca antybiotyk przemywa sie toluenem 1 heksanem 1 ekstrahuje sie aureofacyne metanolem z dodatkiem kwasnego we¬ glanu potasu lub sodu uzytego w ilosci potrzebnej do stanu nasycenia roztworu, do ekstra¬ ktu dodaje sie butanolu w ilosci okolo jadnej czwartej czesci objetosciowej matanolu, po czym wytraca sie czysty antybiotyk aureofacyne przez odparowanie polarnych rozpuszczal¬ ników, zas wytracony osad aureofacyny przemywa sie toluenem 1 heksanem i ponownie rozpu¬ szcza sie w metanolu z dodatkiem kwasnego weglanu potasu lub sodu uzytego w ilosci4 128 164 potrzebnej do uzyskania stanu nasycenia, do roztworu dodaje sie butanolu w ilosci okolo jednej czwartej czesci objetosciowej metanolu;po czyn wytraca sie antybiotyk aureofacyne przez odparowanie rozpuszczalników* 2. Sposób wedlug zastrz* 1, znamienny tym. ze po pierwszej ekstrakcji metanolem z dodatkiem kwasnego weglanu potasu albo sodu, pozostalosc ekstrahuje sie kilkakrotnie mieszanine rozpuszczalników butanol : metanol : woda o skladzie objetoscio¬ wym 10 : 2 : 3,a przesacz po tej ekstrakcji laczy sie z pierwszym przesaczem metanolo¬ wym, po czym wytreca sie czysty antybiotyk przez odparowanie rozpuszczalników, przy czym butanol wprowadza sie wówczas do ukladu, przed odparowaniem rozpuszczalników, w miesza¬ ninie rozpuszczalników butanol : metanol : woda. 3. Sposób wytwarzania preparatu aursofacyny, z surowego preparatu uzyskanego z brzeczki fermentacyjnej otrzymanej na drodze fermentacji szczepu Streptomyces aureo- faciens w hodowli glebinowej przewietrzanejr na pozywce i w -warunkach fermentacji pro¬ mieniowców, z zastosowaniem butanolu jako rozpuszczalnika antybiotyku i acetonu jako substancji wytrecajecej antybiotyk z roztworu, znamienny, tym, ze surowe aureofacyne traktuje sie butanolem z toluenem w proporcji 1 : 1, w temperaturze 20 - 50°C, po czym po oddzieleniu ekstraktu pozostalosc zawierajece antybiotyk aureo¬ facyne przemywa sie toluenem i heksanem, ekstrahuje sie aureofacyne metanolem z dodat¬ kiem kwasnego weglanu potasu lub sodu uzytego w ilosci potrzebnej do stanu nasycenia roztworu, po czym wytreca sie czysty antybiotyk przez wprowadzenie do ukladu acetonu albo izopropanolu/a odseczona aureofacyne ponownie rozpuszcza sie w metanolu z dodat¬ kiem kwasnego weglanu potasu lub sodu w ilosci potrzebnej do uzyskania stanu nasycenia i dodaje sie butanolu w ilosci okolo jednej czwartej czesci objetosciowej metanolu, po czym wytreca sie antybiotyk aureofacyne przez odparowanie rozpuszczalników.Pracowni* Poligraficzna UP PRL. Njklad 100 egz.Cena 100 zl PL

Claims (3)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania preparatu aureofacyny, z surowego preparatu uzyskanego z brze¬ czki fermentacyjnej otrzymanej na drodze fermentacji szczepu Streptomycas eureofaciens w hodowli glebinowej przewietrzanej, na pozywce 1 w warunkach fermentacji promieniowców, z zastosowaniem butanolu jako rozpuszczalnika antybiotyku, znamienny tym, ze surowa aureofacyne traktuje sie butanolem z toluenem w proporcji 1:1, w temperaturze 20 - 50°C, po czym po oddzieleniu ekstraktu, pozostalosc zawierajaca antybiotyk przemywa sie toluenem 1 heksanem 1 ekstrahuje sie aureofacyne metanolem z dodatkiem kwasnego we¬ glanu potasu lub sodu uzytego w ilosci potrzebnej do stanu nasycenia roztworu, do ekstra¬ ktu dodaje sie butanolu w ilosci okolo jadnej czwartej czesci objetosciowej matanolu, po czym wytraca sie czysty antybiotyk aureofacyne przez odparowanie polarnych rozpuszczal¬ ników, zas wytracony osad aureofacyny przemywa sie toluenem 1 heksanem i ponownie rozpu¬ szcza sie w metanolu z dodatkiem kwasnego weglanu potasu lub sodu uzytego w ilosci4 128 164 potrzebnej do uzyskania stanu nasycenia, do roztworu dodaje sie butanolu w ilosci okolo jednej czwartej czesci objetosciowej metanolu;po czyn wytraca sie antybiotyk aureofacyne przez odparowanie rozpuszczalników*
2. 2. Sposób wedlug zastrz* 1, znamienny tym. ze po pierwszej ekstrakcji metanolem z dodatkiem kwasnego weglanu potasu albo sodu, pozostalosc ekstrahuje sie kilkakrotnie mieszanine rozpuszczalników butanol : metanol : woda o skladzie objetoscio¬ wym 10 : 2 : 3,a przesacz po tej ekstrakcji laczy sie z pierwszym przesaczem metanolo¬ wym, po czym wytreca sie czysty antybiotyk przez odparowanie rozpuszczalników, przy czym butanol wprowadza sie wówczas do ukladu, przed odparowaniem rozpuszczalników, w miesza¬ ninie rozpuszczalników butanol : metanol : woda.
3. 3. Sposób wytwarzania preparatu aursofacyny, z surowego preparatu uzyskanego z brzeczki fermentacyjnej otrzymanej na drodze fermentacji szczepu Streptomyces aureo- faciens w hodowli glebinowej przewietrzanejr na pozywce i w -warunkach fermentacji pro¬ mieniowców, z zastosowaniem butanolu jako rozpuszczalnika antybiotyku i acetonu jako substancji wytrecajecej antybiotyk z roztworu, znamienny, tym, ze surowe aureofacyne traktuje sie butanolem z toluenem w proporcji 1 : 1, w temperaturze 20 - 50°C, po czym po oddzieleniu ekstraktu pozostalosc zawierajece antybiotyk aureo¬ facyne przemywa sie toluenem i heksanem, ekstrahuje sie aureofacyne metanolem z dodat¬ kiem kwasnego weglanu potasu lub sodu uzytego w ilosci potrzebnej do stanu nasycenia roztworu, po czym wytreca sie czysty antybiotyk przez wprowadzenie do ukladu acetonu albo izopropanolu/a odseczona aureofacyne ponownie rozpuszcza sie w metanolu z dodat¬ kiem kwasnego weglanu potasu lub sodu w ilosci potrzebnej do uzyskania stanu nasycenia i dodaje sie butanolu w ilosci okolo jednej czwartej czesci objetosciowej metanolu, po czym wytreca sie antybiotyk aureofacyne przez odparowanie rozpuszczalników. Pracowni* Poligraficzna UP PRL. Njklad 100 egz. Cena 100 zl PL