NO874357L - Rensing av pichia-produserte lipofile proteiner. - Google Patents
Rensing av pichia-produserte lipofile proteiner.Info
- Publication number
- NO874357L NO874357L NO874357A NO874357A NO874357L NO 874357 L NO874357 L NO 874357L NO 874357 A NO874357 A NO 874357A NO 874357 A NO874357 A NO 874357A NO 874357 L NO874357 L NO 874357L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- protein
- stated
- lipophilic
- cells
- proteins
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 43
- 238000000746 purification Methods 0.000 title description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 19
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 11
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 claims description 10
- 241000235648 Pichia Species 0.000 claims description 8
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 5
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 4
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 4
- AMXOYNBUYSYVKV-UHFFFAOYSA-M lithium bromide Chemical compound [Li+].[Br-] AMXOYNBUYSYVKV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M potassium thiocyanate Chemical compound [K+].[S-]C#N ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 3
- 108010052167 Dihydroorotate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 2
- 102100032823 Dihydroorotate dehydrogenase (quinone), mitochondrial Human genes 0.000 claims description 2
- 108091023022 Phosphatidylserine decarboxylase Proteins 0.000 claims description 2
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 claims description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 102000005875 phosphatidylserine decarboxylase Human genes 0.000 claims description 2
- 229940116357 potassium thiocyanate Drugs 0.000 claims description 2
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 claims description 2
- VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M sodium thiocyanate Chemical group [Na+].[S-]C#N VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 claims 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 34
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- -1 halide ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M perchlorate Inorganic materials [O-]Cl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000935 solvent evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/06—Lysis of microorganisms
- C12N1/063—Lysis of microorganisms of yeast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/165—Yeast isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/84—Pichia
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/938—Pichia
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Oppfinnelsen angår utvinning og rensing av proteiner. En
side ved oppfinnelsen angår separasjonen av oppløselig protein fra nedbrutt cellemateriale. En annen side ved oppfinnelsen angår den selektive ekstraksjon av proteiner.
Rekombinant DNA-teknologi er i ferd med å bli et virknings-fullt verktøy for produksjonen av peptider og proteiner av interesse for en rekke forskjellige diagnostiske, terapeutiske og kjemiske anvendelser og lignende. Ett problem som man ofte støter på, er imidlertid behovet for å oppnå det ønskede protein i en renset form fri for forurensende proteiner som også produseres i løpet av ekspresjonen av det ønskede pro-dukt. Den foreliggende oppfinnelse er rettet på forbedrede fremgangsmåter til utvinning av proteiner fremstilt ved rekombinant DNA-teknikker.
En hensikt med oppfinnelsen er derfor å skaffe en fremgangsmåte til effektiv utvinning avønskede proteiner som produseres ved genetisk modifiserte gjærorganismer.
Denne og andre hensikter med oppfinnelsen vil fremgå av beskrivelsen og de tilhørende krav.
I henhold til oppfinnelsen er det funnet at lipofile proteiner fremstilt ved genetisk modifiserte stammer av Pichia kan utvinnes selektivt ved bruk av en lysebuffer inneholdende kaotropiske (chaotropic) salter. Oppbrytningen av stammer av Pichia i nærvær av slike lysebuffere reduserer den samlede mengde protein som ekstraheres, men utøver liten virkning på ekstraksjonen av de ønskede lipofile proteiner. Således inneholder det oppløselige celleekstrakt som fås ved utførelse av oppfinnelsen, et øket nivå av lipofilt protein i forhold til alle andre proteiner som foreligger i ekstraktet, hvilket forenkler eventuelle ytterligere rensetrinn som detønskede lipofile protein underkastes.
I henhold til oppfinnelsen blir lipofile proteiner fremstilt av vertsceller av slekten Pichia ekstrahert ved en fremgangsmåte som omfatter: (a) cellene underkastes celleoppbrytningsbetingelser i et tidsrom som er tilstrekkelig til å bevirke oppbrytning av stort sett alle cellene, idet oppbrytningen utføres i nærvær av et ekstraksjonsmedium som omfatter: en konsentrasjon i området 1-8 molar av minst ett kaotropisk salt
i et medium buffret ved en pH-verdi egnet til å opprettholde det ønskede protein i stabil form,
typisk i området 6-8, og
(b) den oppløselige fraksjon som fås fra trinn (a) utvinnes.
Den oppløselige fraksjon som utvinnes i henhold til oppfinnelsen, kan deretter behandles ytterligere ved teknikker som er kjent av fagfolk for ytterligere konsentrasjon og rensing av det ønskede protein. Således kan proteinet i den oppløselige fraksjon konsentreres ved dialyse, -passasje gjennom en reversfaseharpiks, fulgt av eluering med et mini-mumsvolum av oppløsningsmiddel, utfelling, ultrafiltrering, lyofilisering og lignende. Teknikker som er tilgjengelige for ytterligere rensing av det ønskede protein, omfatter størrelsesfraksjonering ved anvendelse av størrelseseksklu-sjonsharpikser, væskekromatografi med høy ytelse, ione-veksling, hydrofob kromatografi og lignende.
Uttrykket "lipofilt protein", slik det her anvendes, betegner de proteiner som har en tendens til å forbinde seg med lipid-membraner eller i nærvær av lipid eller lipidlignende materiale settes sammen til micellærlignende strukturer. Slike proteiner har typisk et høyt innhold av hydrofobe aminosyrer, dvs. isoleucin, valin, leucin, fenylalanin, tryptofan og alanin.
Eksempler på lipofile proteiner innbefatter, men er ikke begrenset til: alle former av hepatitt-B-overflateantigenet, innbefattet S-formen, preSi-formen, preS2-formen og lignende;
fosfatidylserindekarboksylase (fra E. coli);
lambdabakteriofag-D-potein;
lavtetthetslipoprotein (LDL);
høytetthetslipoprotein (HDL); og
dihydroorotatdehydrogenase.
Slik det anvendes i den foreliggende søknad, betegner uttrykket "kaotropisk salt" salter hvis anioner begunstiger overføringen av apolare grupper til vann. Slike salter innbefatter forbindelser som inneholder tiocyanationet, halogenid-ioner såsom jodid og bromid og hypo-NaCl-ioner (hypohalite ions) såsom perklorat, samt kationer som f.eks..litium, kalsium og barium.
Eksempler på kaotropiske salter som er nyttige ved utførelsen av oppfinnelsen, omfatter natriumtiocyanat, kaliumtiocyanat, natriumjodid, kaliumjodid, natriumhypokloritt, litiumklorid, litiumbromid, guanidiniumhydroklorid, guanidiniumtiocyanat, urea og lignende.
Fremstillingen av lipofile proteiner ved Pichia kan utføres ved genetisk modifikasjon av egnede vertsstammer av Pichia med DNA-sekvenser som koder for det ønskede protein. De riktige DNA-sekvenser som koder for et ønsket lipofilt protein, er lett tilgjengelige for fagfolk, f.eks. ved isolasjon fra naturlige kilder, konstruksjon av en syntetisk DNA-sekvens og lignende. Spesielle teknikker for håndtering av DNA i stammer av Pichia er angitt i artikler som er publisert i volum 5 av Molecular and Cellular Biology på side lill og 3376 (1985) .
Ekstraksjonsprosessen ifølge oppfinnelsen utføres ved at cellene underkastes celleoppbrytningsbetingelser i et tidsrom som er tilstrekkelig til å bevirke oppbrytning av stort sett alle cellene. Denne celleoppbrytning utføres i nærvær av et ekstraksjonsmedium som omfatter en konsentrasjon på
1-8 molar av minst ett kaotropisk salt i et medium buffret ved en pH-verdi egnet til å opprettholde det ønskede protein i en ønsket form, typisk i området pH 6-8. Valgfritt, for å bringe på et minimum proteinnedbrytningen i løpet av ekstrak-sjonsbehandlingen, kan anti-proteasemidler såsom fenylmetyl-sulfonylfluorid innlemmes i lysebufferen.
Typisk anvendes der for celleoppbrytning ved utførelse av oppfinnelsen homogenisering i en perlemølle eller lignende apparat. Den tid som er nødvendig for celleoppbrytning, er en funksjon av celleveggenes tendens til å brytes opp, streng-heten av homogeniseringsbetingelsene, nærværet og konsentra-sjonen av tilsatte komponenter i lysebufferen og lignende. Typiske celler underkastes oppbrytningsbetingelser i et tidsrom på 0,5-30 min, fortrinnsvis anvendes tider på 1-5 min.
Temperaturen som anvendes under celleoppbrytning, reguleres generelt slik at den bringer på et minimum virkningen av proteinnedbrytende enzymer. Således utføres celleoppbrytningen generelt ved en temperatur i området 0-10°C, fortrinnsvis ca. 0°C, for å bringe på et minimum mengden av nedbrytning av det ønskede protein under celleoppbrytningstrinnet, hvilket øker utbyttet av detønskede protein som utvinnes fra de celler som brytes opp.
Når cellene er blitt brutt opp, blir den oppløselige fraksjon utvunnet ved at det overflødige cellemateriale (cell debris) fjernes ved teknikker som er kjent for fagfolk, f.eks. sentrifugering eller tangentiell filtrering. Den resulterende cellefrie væske er anriket på det ønskede lipofile protein i forhold til den væske som fås når man bare bryter opp cellene og utvinning av den oppløselige fraksjon derfra.
Om ønskelig kan den således behandlede væske behandles ytterligere for utvinning av en konsentrert fraksjon av det ønskede lipofile protein ved forskjellige teknikker som er kjent for fagfolk, f.eks. syreutfelling, filtrering, kromatografi, oppløsningsmiddelfordamping og lignende.
Oppfinnelsen skal nå beskrives i nærmere detalj under hen-visning til de følgende ikke-begrensende eksempler.
Eksempel I
Ekstraksjonen av hepatitt-B-overflateantigen (HBsAg) 22 nm-partikler fra Pichia-celler transformert med vektor pBSAGI5I (tilgjengelig i en E. coli-vert fra the Nothern Regional Research Center ved USA's landbruksdepartement, Peoria, Illinois, med aksesjonsnr. NNRL B-18021) er beskrevet nedenunder.
Kulturer av P. pastoris ble dyrket til en celletetthet i området 10-100 optisk tetthets-enheter (600 nm)- pr. ml. En porsjon av 100 optisk tetthets-enheter ble overført til et borsilikat-kulturrør på 13 x 100 mm og vasket to ganger med 20 volumer av lysebuffer (oppskrift som angitt nedenunder).
Til de pelleterte celler (IEC klinisk sentrifuge) ble der tilsatt 0,5 g syrevaskede glassperler (0,5 mm) fulgt av 0,35 ml lysebuffer. Lysebufferen inneholdt enten 0,5 M NaCl eller 0,1% Triton X-100 (vekt/vol.) som en sammenlignings-prøve, eller en konsentrasjon på 2 M eller 3 M av et kaotropisk salt i nærvær eller fravær av 0,1% Triton X-100. Alle oppløsninger ble buffret ved pH 7,5 med 10 mM natriumfosfat. Blandingen ble agitert i åtte intervaller på 1 min hver ved maksimal hastighet ved bruk av en virvelmikser. Mellom intervaller ble blandingen avkjølt på is i ikke mindre enn 1 min. Rørene ble fortrinnsvis holdt med en vinkel på 20-40° under virvlingen for oppnåelse av maksimal oppbrytning. Etter at lysen var fullført, ble oppløsningen av oppbrutte celler fjernet, glassperlene ble vasket med 0,35 ml lysebuffer og de to oppløsninger kombinert og underkastet sentrifugering i 15 min ved 13 000 x g. De ovenpåflytende væsker ble fjernet og analysert for immunoreaktiv HBsAg-partikkel (Ausria-ana-lyse) og samlet protein (Bradford). Resultatene er vist i tabell I (a).
Eksempel II
For ytterligere å illustrere fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen ble 80 ml oppslemming (én del pakkede celler/to deler lysebuffer, v/v) underkastet virkningen av et celleoppbryt-ningsapparat (Impandex, Inc.) ved bruk av en 64 mm's agitator-skive ved 4500 o/min. Lysebufferen inneholdt enten 0,5 M
NaCl og 0,1% Triton (w/v) eller 3 M KSCN. De ovenpåflytende væsker ble analysert for HBsAg (Ausria) og samlet protein (Bradford). Resultatene er vist i tabell I (b).
Skjønt ingen av betingelsene inneholdende et kaotropisk
salt (Kl eller KSCN) gir HBsAg-partikkelverdier vesentlig høyere enn sammenligningsprøven (kolonne I), er-det klart at de kaotropiske salter hindrer frigjøringen av samlet protein (kolonne II), hvilketøker den spesifikke aktivitet av HBsAg-partikkelen med 2-5 ganger (kolonne III).
Eksemplene er gitt bare for å belyse utførelsen av oppfinnelsen og skal ikke anses som begrensende for omfanget av oppfinnelsen eller de tilhørende krav på noen som helst måte. Rimelige variasjoner og modifikasjoner som ikke avviker fra oppfinnelsens omfang og ånd, anses å ligge innenfor den patentbeskyttelse somønskes og søkes.
Claims (9)
1. Fremgangsmåte til ekstraksjon av lipofile proteiner fra vertsceller av slekten Pichia, karakterisert ved at
(a) cellene brytes opp i nærvær av et pH-buffret ekstraksjonsmedium omfattende i en konsentrasjon på 1-8 molar minst ett kaotropisk salt, og
(b) den oppløselige fraksjon som fås i trinn (a), uvinnes.
2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at pH-verdien holdes i området 6-8.
3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 eller 2, karakterisert ved at det lipofile protein er et protein som har en tendens til å forbinde seg med lipidmem-braner.
4. Fremgangsmåte som angitt i krav 1 eller 2,- karakterisert ved at det lipofile protein er et protein som settes sammen til micellærlignende strukturer i nærvær av lipid eller lipidlignende materiale.
5. Fremgangsmåte som angittt i et av de foregående krav, karakterisert ved at det lipofile protein velges fra gruppen bestående av: S-formen av hepatitt-B-overflateantigenet, preSi-formen av hepatitt-B-overflateantigenet, preS2 -formen av hepatitt-B-overflateantigenet, fosfatidylserindekarboksylase (fra E. coli), lambdabakteriofag-D-protein, lavtetthetslipoprotein (LDL), høytetthetslipoprotein (HDL) og dihydroorotatdehydrogenase.
6. Fremgangsmåte som angitt i et av de foregående krav, karakterisert ved at celleoppbrytningen utfø res ved en temperatur på 0-10°C i et tidsrom på 0,5-30 minutter.
7. Fremgangsmåte som angitt i et av de foregående krav, karakterisert ved at det kaotropiske salt velges fra natriumtiocyanat, kaliumtiocyanat, natriumjodid, kaliumjodid, natriumhypokloritt, litiumklorid, litiumbromid, guanidiniumhydroklorid, guanidiniumtiocyanat, urea og blandinger av hvilke som helst to eller flere derav.
8. Fremgangsmåte som angitt i et av de foregående krav, karakterisert ved at trinn (b) utvinning av den nevnte opplø selige fraksjon ledsages av sentrifugering av oppløsningen som inneholder oppbrutte celler.
9. Fremgangsmåte som angitt i et av de foregående krav, karakterisert ved at den omfatter (c) å behandle den oppløselige fraksjon som fås fra trinn
(b) for utvinning av en konsentrert fraksjon av det lipofile protein derfra.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/920,385 US4683293A (en) | 1986-10-20 | 1986-10-20 | Purification of pichia produced lipophilic proteins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO874357D0 NO874357D0 (no) | 1987-10-19 |
| NO874357L true NO874357L (no) | 1988-04-21 |
Family
ID=25443644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO874357A NO874357L (no) | 1986-10-20 | 1987-10-19 | Rensing av pichia-produserte lipofile proteiner. |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4683293A (no) |
| EP (1) | EP0271667A1 (no) |
| JP (1) | JPS63105693A (no) |
| KR (1) | KR880005259A (no) |
| CN (1) | CN1006808B (no) |
| AU (1) | AU586758B2 (no) |
| CA (1) | CA1277272C (no) |
| CS (1) | CS752987A2 (no) |
| DD (1) | DD262673A5 (no) |
| DK (1) | DK545187A (no) |
| FI (1) | FI874597A (no) |
| HU (1) | HU202554B (no) |
| IE (1) | IE872807L (no) |
| IL (1) | IL83402A0 (no) |
| IN (1) | IN166069B (no) |
| NO (1) | NO874357L (no) |
| NZ (1) | NZ221296A (no) |
| PH (1) | PH23461A (no) |
| PL (1) | PL154027B1 (no) |
| PT (1) | PT85935B (no) |
| YU (1) | YU46080B (no) |
| ZA (1) | ZA875698B (no) |
Families Citing this family (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4935235A (en) * | 1979-05-24 | 1990-06-19 | The Regents Of The University Of California | Non-passageable viruses |
| US5124256A (en) * | 1985-11-13 | 1992-06-23 | Labofina, S.A. | Process for recovering polypeptides localized in the periplasmic space of yeast without breaking the cell wall by using an non-ionic detergent and a neutral salt |
| US4816564A (en) * | 1986-01-31 | 1989-03-28 | Merck & Co., Inc. | Method for producing hepatitis B virus proteins in yeast |
| US4742158A (en) * | 1986-04-25 | 1988-05-03 | Merck & Co., Inc. | Purification of hepatitis pre-S antigens by polymerized serum albumin affinity binding |
| US5026828A (en) * | 1987-02-27 | 1991-06-25 | Merck & Co., Inc. | Method of purifying recombinant pres-1/S-2/S/S hepatitis B antigen from yeast |
| US5011915A (en) * | 1987-10-26 | 1991-04-30 | Merck & Co., Inc. | Process for purifying recombinant hepatitis antigens |
| US5004688A (en) * | 1988-04-15 | 1991-04-02 | Phillips Petroleum Company | Purification of hepatitis proteins |
| US5030720A (en) * | 1988-09-01 | 1991-07-09 | Merck & Co., Inc. | Pres2+S hepatitis B vaccine derived from plasma |
| US6362003B1 (en) | 1992-02-24 | 2002-03-26 | Coulter Corporation | Hematological reference control composition containing leukocyte analogs, methods of making, and uses thereof |
| US6509192B1 (en) * | 1992-02-24 | 2003-01-21 | Coulter International Corp. | Quality control method |
| US5855902A (en) * | 1992-11-02 | 1999-01-05 | Protatek International, Inc. | Method of administering a vaccine comprising tritrichomonas foetus membrane surface antigens between 45 and 300 kilopaltons |
| US5866543A (en) * | 1995-06-05 | 1999-02-02 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| US5866542A (en) * | 1994-10-18 | 1999-02-02 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| CA2202351A1 (en) * | 1994-10-18 | 1996-04-25 | George Phillip Vlasuk | Nematode-extracted serine protease inhibitors and anticoagulant proteins |
| US5945275A (en) * | 1994-10-18 | 1999-08-31 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| US5863894A (en) * | 1995-06-05 | 1999-01-26 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| WO1996012021A2 (en) * | 1994-10-18 | 1996-04-25 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted serine protease inhibitors and anticoagulant proteins |
| US5872098A (en) * | 1995-06-05 | 1999-02-16 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| MX9605082A (es) | 1996-10-24 | 1998-04-30 | Univ Autonoma De Nuevo Leon | Levaduras metilotroficas modificadas geneticamente para la produccion y secrecion de hormona de crecimiento humano. |
| GB2338236B (en) | 1998-06-13 | 2003-04-09 | Aea Technology Plc | Microbiological cell processing |
| GB9927801D0 (en) | 1999-11-24 | 2000-01-26 | Danisco | Method |
| US7455990B2 (en) * | 1999-11-24 | 2008-11-25 | Danisco A/S | Method of extracting recombinant hexose oxidase |
| EP1297172B1 (en) * | 2000-06-28 | 2005-11-09 | Glycofi, Inc. | Methods for producing modified glycoproteins |
| US8697394B2 (en) * | 2000-06-28 | 2014-04-15 | Glycofi, Inc. | Production of modified glycoproteins having multiple antennary structures |
| US7625756B2 (en) | 2000-06-28 | 2009-12-01 | GycoFi, Inc. | Expression of class 2 mannosidase and class III mannosidase in lower eukaryotic cells |
| US7449308B2 (en) | 2000-06-28 | 2008-11-11 | Glycofi, Inc. | Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes |
| US7863020B2 (en) | 2000-06-28 | 2011-01-04 | Glycofi, Inc. | Production of sialylated N-glycans in lower eukaryotes |
| US7598055B2 (en) * | 2000-06-28 | 2009-10-06 | Glycofi, Inc. | N-acetylglucosaminyltransferase III expression in lower eukaryotes |
| DE60335602D1 (de) * | 2002-12-18 | 2011-02-17 | Roche Diagnostics Gmbh | Rekombinante Desoxyribonuclease I aus Rinder-Pankreas mit hoher spezifischer Aktivität |
| DE60319333D1 (de) * | 2002-12-20 | 2008-04-10 | Roche Diagnostics Gmbh | Hitzelabile Desoxyribonuklease I-Varianten |
| US7332299B2 (en) | 2003-02-20 | 2008-02-19 | Glycofi, Inc. | Endomannosidases in the modification of glycoproteins in eukaryotes |
| EP1460425A1 (en) * | 2003-03-17 | 2004-09-22 | Boehringer Mannheim Gmbh | Deglycosylated enzymes for conjugates |
| JP4411192B2 (ja) * | 2003-12-05 | 2010-02-10 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 組換えで発現されるカルボキシペプチダーゼｂおよびその精製 |
| CN100388381C (zh) * | 2004-10-14 | 2008-05-14 | 联发科技股份有限公司 | 光学储存媒体的数据记录方法及其装置 |
| AU2006291780B2 (en) * | 2005-09-14 | 2011-12-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Cleavage of precursors of insulins by a variant of trypsin |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4540668A (en) * | 1979-06-05 | 1985-09-10 | Phillips Petroleum Company | Alcohol oxidase from Pichia-type yeasts |
| US4427580A (en) * | 1982-09-01 | 1984-01-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for separation and recovery of proteins and nucleic acids from nucleoproteins using water destructuring salts |
| US4512922A (en) * | 1982-12-22 | 1985-04-23 | Genentech, Inc. | Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins |
| EP0135435A3 (en) * | 1983-08-22 | 1987-03-25 | Merck & Co. Inc. | Immunogenic hbsag derived from transformed yeast |
| US4559307A (en) * | 1983-10-17 | 1985-12-17 | Phillips Petroleum Company | Treatment of yeast cells with proteolytic enzymes |
| US4604377A (en) * | 1984-03-28 | 1986-08-05 | Cetus Corporation | Pharmaceutical compositions of microbially produced interleukin-2 |
| US4569790A (en) * | 1984-03-28 | 1986-02-11 | Cetus Corporation | Process for recovering microbially produced interleukin-2 and purified recombinant interleukin-2 compositions |
| GB8414354D0 (en) * | 1984-06-05 | 1984-07-11 | Biogen Nv | Purifying protein |
| US4572798A (en) * | 1984-12-06 | 1986-02-25 | Cetus Corporation | Method for promoting disulfide bond formation in recombinant proteins |
| US4649192A (en) * | 1985-05-30 | 1987-03-10 | Smith Kline-Rit | Method for the isolation and purification of hepatitis B surface antigen using polysorbate |
| US4895800A (en) * | 1985-11-26 | 1990-01-23 | Phillips Petroleum Company | Yeast production of hepatitis B surface antigen |
-
1986
- 1986-10-20 US US06/920,385 patent/US4683293A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-05-28 CA CA000538267A patent/CA1277272C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-31 NZ NZ221296A patent/NZ221296A/xx unknown
- 1987-07-31 PH PH35608A patent/PH23461A/en unknown
- 1987-07-31 ZA ZA875698A patent/ZA875698B/xx unknown
- 1987-08-02 IL IL83402A patent/IL83402A0/xx unknown
- 1987-08-10 IN IN621/CAL/87A patent/IN166069B/en unknown
- 1987-08-11 CN CN87105519A patent/CN1006808B/zh not_active Expired
- 1987-08-18 AU AU77178/87A patent/AU586758B2/en not_active Ceased
- 1987-09-02 KR KR870009721A patent/KR880005259A/ko not_active Application Discontinuation
- 1987-09-03 JP JP62219311A patent/JPS63105693A/ja active Pending
- 1987-10-15 PT PT85935A patent/PT85935B/pt not_active IP Right Cessation
- 1987-10-16 HU HU874664A patent/HU202554B/hu not_active IP Right Cessation
- 1987-10-16 YU YU191387A patent/YU46080B/sh unknown
- 1987-10-19 NO NO874357A patent/NO874357L/no unknown
- 1987-10-19 FI FI874597A patent/FI874597A/fi not_active Application Discontinuation
- 1987-10-19 IE IE872807A patent/IE872807L/xx unknown
- 1987-10-19 EP EP87115255A patent/EP0271667A1/en not_active Withdrawn
- 1987-10-19 DK DK545187A patent/DK545187A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-10-19 PL PL1987268298A patent/PL154027B1/pl unknown
- 1987-10-19 CS CS877529A patent/CS752987A2/cs unknown
- 1987-10-19 DD DD87308079A patent/DD262673A5/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DD262673A5 (de) | 1988-12-07 |
| FI874597A0 (fi) | 1987-10-19 |
| HUT45079A (en) | 1988-05-30 |
| PT85935A (en) | 1987-11-01 |
| AU7717887A (en) | 1988-04-21 |
| YU191387A (en) | 1989-06-30 |
| PT85935B (pt) | 1990-07-31 |
| AU586758B2 (en) | 1989-07-20 |
| CS752987A2 (en) | 1991-08-13 |
| FI874597A (fi) | 1988-04-21 |
| NZ221296A (en) | 1989-07-27 |
| CA1277272C (en) | 1990-12-04 |
| ZA875698B (en) | 1988-04-27 |
| IL83402A0 (en) | 1988-01-31 |
| YU46080B (sh) | 1992-12-21 |
| JPS63105693A (ja) | 1988-05-10 |
| KR880005259A (ko) | 1988-06-28 |
| NO874357D0 (no) | 1987-10-19 |
| IE872807L (en) | 1988-04-20 |
| PL268298A1 (en) | 1988-07-07 |
| EP0271667A1 (en) | 1988-06-22 |
| DK545187A (da) | 1988-04-21 |
| PL154027B1 (en) | 1991-06-28 |
| DK545187D0 (da) | 1987-10-19 |
| HU202554B (en) | 1991-03-28 |
| PH23461A (en) | 1989-08-07 |
| CN87105519A (zh) | 1988-05-04 |
| US4683293A (en) | 1987-07-28 |
| CN1006808B (zh) | 1990-02-14 |
| IN166069B (no) | 1990-03-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO874357L (no) | Rensing av pichia-produserte lipofile proteiner. | |
| KR960004707B1 (ko) | B형 간염 표면 항원의 정제 방법 | |
| EP1679368B1 (en) | Methods for purifying viruses | |
| FI70927C (fi) | Extration av interferon fraon bakterier | |
| JPH04243899A (ja) | 第ｖｉｉｉ因子の精製およびこの方法で得られた第ｖｉｉｉ因子 | |
| US5151358A (en) | Processes for the recovery of naturally produced chymosin | |
| SU784784A3 (ru) | Способ выделени протеина | |
| JP2534587B2 (ja) | 微生物学的に生成されたキモシンの回収方法 | |
| EP0138167B1 (en) | Method for purification of hbs antigen | |
| US5139943A (en) | Processes for the recovery of microbially produced chymosin | |
| EP0295859B1 (en) | Production of proteins in active forms | |
| EP1699811B1 (en) | A process for the preparation and purification of recombinant proteins | |
| CN108570098A (zh) | 一种百日咳多种抗原成分的分离纯化方法 | |
| Harve et al. | Separation of nucleic acids and proteins | |
| JP3040190B2 (ja) | タンパクの精製方法 | |
| Poison | 18. Isolation of a Cytoplasmic Polyhedrosis Virus by Physical and Immunological Techniques |