CS752987A2 - Method of lipophilic proteins extraction - Google Patents
Method of lipophilic proteins extraction Download PDFInfo
- Publication number
- CS752987A2 CS752987A2 CS877529A CS752987A CS752987A2 CS 752987 A2 CS752987 A2 CS 752987A2 CS 877529 A CS877529 A CS 877529A CS 752987 A CS752987 A CS 752987A CS 752987 A2 CS752987 A2 CS 752987A2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- protein
- lipophilic
- soluble fraction
- cells
- hepatitis
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 41
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 claims description 8
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 6
- ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M potassium thiocyanate Chemical compound [K+].[S-]C#N ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 241000235648 Pichia Species 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 4
- AMXOYNBUYSYVKV-UHFFFAOYSA-M lithium bromide Chemical compound [Li+].[Br-] AMXOYNBUYSYVKV-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 2
- 108091023022 Phosphatidylserine decarboxylase Proteins 0.000 claims description 2
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 claims description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000005875 phosphatidylserine decarboxylase Human genes 0.000 claims description 2
- 229940116357 potassium thiocyanate Drugs 0.000 claims description 2
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 claims description 2
- VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M sodium thiocyanate Chemical compound [Na+].[S-]C#N VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims 3
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 claims 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 5
- -1 halide ions Chemical class 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N Abietic-Saeure Natural products C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000005369 Alstonia scholaris Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N Rosin Natural products O(C/C=C/c1ccccc1)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Inorganic materials Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000935 solvent evaporation Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N trans-cinnamyl beta-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC=CC1=CC=CC=C1 KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/06—Lysis of microorganisms
- C12N1/063—Lysis of microorganisms of yeast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/165—Yeast isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/84—Pichia
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/938—Pichia
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Botany (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Tento vynález se týká získáváníproteinu a jeho čištění. Podle jednoho aspektu sevynález týká oddělování rozpustného proteinu z roz-drcených buněk. Podle jiného aspektu se vynález tý-ká selektivní extrakce bílkwin.
Technologie používající rekombi-nantní DNA se rychle stává účinným nástrojem pro vý-robu pepiidů a proteinů, které jsou zajímavé při růz-ných diagnostických, therapeutických a chemickýchaplikacích apod. Jedenz problému , se kterým se všaktato technologie často střetává, spočívá v potřebězískat požadovaný protein v přečištěné formě bez zne- v čištujících proteinů, které rovněž vznikají v průběhuexprese požadovaného produktu. Tento vynález je zamě-řen na zlepšené způsoby získávání proteinů vyrobe-ných technologiemi s použitím rekombinantní DNA. Úkolem předloženého vynálezu jeproto vyvinout způsob účinné izolace požadovaných proteinů vyrobených geneticky modifikovanými kvasinkový-mi organismy.
Tento a další úkoly vynálezu jsouzřejmé z dalšího popisu a připojené definice předmětuvynálezu. 3
V souladu s vynálezem se Vže lipofilní proteiny vyrobené geneticky modifik kmeny Píchla je možno selektivně získávat za použitípufru pro lysí obsahujícího chaotropické soli. Při roz-bíjení buněk kmenů Píchla v přítomnosti takových pufrůpro lysí dochází ke snížení celkového množství extrahova-ného proteinu, přičemž účinek na extrakci požadovaných li-pofilní ch proteinů je jen malý. Rozpustný buněčný extraktzískaný při realizaci tohoto vynálezu obsahuje tedy zvýše-nou koncentraci lipofilního proteinu vzhledem ke všemostatním proteinům obsaženým v extraktu, čímž se zjedno-dušují další čisticí stupně, kterým se požadovaný lipofil- ní protein podrobuje. Předmětem je způsob extrakce lipofil-ních proteinů majících tendenci k asociaci s lipidovými mem-bránami nebo aglomerujících do struktur micellárního typuv přítomnosti ií lipidů nebo látek podobných lipidům, z hos-titelských buněk rodu Pichia, vyznačující se tím, že se a) buňky rozbijí zpracováním při teplotě od O do 10 °C vprůběhu 0,5 do 30 minut, přičemž rozbíjeni buněk se provádí v přítomnosti extřakčního media obsahujícího alespoňjednu chaotropickou sůl v jednomolární až osmimolárňíkoncentraci v prostředí tlumeném na hodnotu pH vhodnoupro udrženi lipofilního proteinu ve stabilní formě, vrozmezí od 6 do 8 a b) izoluje se rozpustná frakce získaná ze stupně a), c) načež se popřípadě rozpustná frakce získaná ze stupně b)zpracovává za účelem izolace koncentrovaného podílu li-pofilního proteinu.
Rozpustná frakce izolovaná způso-bem podle tohoto vynálezu se může dále zpracovávat tech-nologiemi známými v tomto oboru za účelem další koncentra-ce a čištění požadovaného proteinu. Protein v rozpustnéfrakci je tedy možno koncentrovat dialýzou, průchodem přespryskyřici a reversní fází a následující elucí minimálnímobjemem rozpouštědla, srážením, ultrafiltrací, lyofiliza-cí apod. Jako technologie, které jsou k dispozici pro dal-ší čištění požadovaného proteinu, je možno uvést použitípryskyřice s určitou vylučovací mezí velikosti, vysoceúčinnou kapalinovou chromátografii (HPLC), iontovou vý-měnu, hydrofobní chromatografii apod.
Označení "lipofilní protein” sev tomto popisu používá pro proteiny, které mají tendencik asociaci s lipidovými membránami nebo které se v pří-tomnosti lipidů nebo látek podobných lipidům organizujído struktur připomínajících micelly. Takové
O - 5 - proteiny obsahují obvykle vysoký podíl hydrofobníchaminokyselin, t j . isoleueinu, valinu, leucinu, fenyl-alaninu, tryptofanu a alaninu.
Jako příklady lipofilních protei-nů, na které se však tento termín neomezuje, je mož-no uvést všechny formy povrchového antigenu hepatitisB, včetně S-formy, preS^-formy, preS^-formy apod. fosfatidylserin dekarboxylázu ( z E. coli)$ lambda hakteriofágový D-protein;nízkohustotní lipoprotein (LDL);vysokohustotní lipoprotein (HDL) adihydroorotát dehydrogenázu.
Pod pojmem "chaotropická sůl” se k v tomto popisu rozumějí soli, jejichž anionty podpo-rují převádění apolárních skupin do vody. Tyto solizahrnují sloučeniny, které obsahují thiokyanatanovýion, halogenidové ionty, jako jodidové a bromidovéionty, halogennanové ionty jako chlornanové ionty ataké kationty, jako například lithium, vápník a ba-rium. - 6 -
Jako příklady chaotropických solí,které jsou užitečné při způsobu podle vynálezu, jemožno uvést thiokyanatan sodný, thiokyanatan draselný,jodid sodný, jodid draselný, chlornan sodný, chloridlithný, bromid lithný, guanidinium hydrochlorid, gua-nidinium thiokyanát, močovinu apod.
Produkce lipofilních proteinů po-mocí Piíchia se může provádět genetickou modifikacívhodných hostitelských kmenů Pichia pomocí sekvencíDNA, které kódují požadovaný protein. Vhodné sekvenceDITA, které kódují požadovaný lipofilní protein jsoupro odborníky snadno dostupné, například izolací zpřírodních zdrojů, konstrukcí syntetické sekvence DNAapod. Specifické technologie manipulace DNA v kmenechPichia jsou zveřejněny v článcích ve svazku 5 časopisuMolecular and Cellular Biology, str. 1111 a 3376 (1985)
Způsob extrakce podle vynálezu se v provádí tak, že se buňky podrobí působení podmínekzpůsobujících jejich rozbití po dobu postačující prorozbití v podstatě všech buněk, přičemž toto rozbíje-ní se provádí v přítomnosti extrakčního media obsahu-jícího alespoň jednu chaotropickou sul v asi jednomo-lární až asi osmimilární koncentraci v prostředí tlu- - 7 - meném na hodnotu pH vhodnou peo udržení požadovanéhoproteinu ve stabilní formě, obvykle na pH v rozmezíod asi 6 do asi 8. Aby se minimalizovala degradaceproteinu během extrakčního postupu mohou se k pufrupro lysi popřípadě přidávat antiproteázová činidla,jako fenylmethylsulfonylfluorid.
Pro rozbíjení buněk se při prak-tickém provádění způsobu podle vynálezu obvykle po-užívá homogenizace v kulovém mlýmu nebo podobném za-řízení. Doba potřebná pro rozdrcení buněk je závislána citlivosti buněčných stěn k rozlomení, ostrostihomogenizačních podmínek, přítomnosti a koncentracipřídavných složek v pujífru pro lysi apod. Obvykle se v buňky podrobují působení podmínek způsobujících jejichrozbití po dobu v rozmezí od asi 0,5 do asi 30 minut,přednostně po dobu v rozmezí od asi 1 do asi 5 minut.
Teplota použitá pro rozbíjení bu-něk se obvykle reguluje, aby se minimalizovalo půso-bení enzymů degradujících enzymy. Rozbíjení buněk seproto obvykle provádí při teplotě v rozmezí od asi 0do asi 10 °C, přednostně asi 0 °C. Tím se minimalizujerozsah degradace požadovaného proteinu během stupněŠtěpení buněk a zvyšuje se výtěžek požadovaného pro-teinu izolovaného z rozdrcených buněk.
Po rozdrcení buněk se rozpust/náfrakce izoluje oddělením rozbitých buněk technologie-mi známými v tomto oboru, například odstředěním nebotangenciální filtrací. Výsledná kapalina prostá buněkje bohatší na požadovaný lipofilní protein ve srovná-ní s kapalinou získanou pouhým rozdrcením buněk a izolácí rozpustné frakce.
Je-li to žádoucí, může se taktozískaná kapalina podrobovat dalšímu zpracování zaúčelem získání koncentrovaného podílu požadovaného lipofilního proteinu pomocí různých technologií, kteréjsou známé v tomto oboru, jako je například sraženíkyselinou, filtrace, chromatografie, odpařování roz-pouštědla apod.
Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech praktického provedení. Příkladymají pouze ilustrativní charakter a rozsah vynálezuv žádném ohledu neomezují. - 9 -
Příklad I
Extrakce povrchového antigenuhepatitis B (HBsAg) ve formě 22 nm částic z buněkPichia transformovaných vektorem pBSAGI5I (dostup-ným v hostiteli E. coli ve výzkumném ustavu minister-stva zemědělství USA (jíorthern Regional Research Cen-ter of the US Department of Agriculture, Peoria,Illinois) pod registračním číslem NNRL B-18021 se pro-vádí takto:
Kultury P. Pastoris se nechajínarůst do hustoty buněk v rozmezí od 10 do 100 jedno-tek optické hustoty (600 nm) na milimetr. Alikvotnívzorek 100 jednotek optické hustoty se přenese do bo-rosilikátové kultivační zkumavky o rozměrech 13 x 100 mma dvakrát promyje 20 objemy pufru pro lysi (o složeníuvedeném dále). v K peletizovéným buňkám (pomocíklinické centrifugy IEC) se přidá 0,5 g skleněnýchkuliček opraných kyselinou o průměru 0,5 mm a pak v 0,35 ml pufru pro lysi. Pufr pro lysi obsahuje bud0,5 M NaCl a 0,1 fy Triton X-100 (hmotnost/objem) , v pří-padě kontrolního pufru nebo 2M nebo 3M koncentraci chao- - 10
tropické soli v přítomnosti nebo nepřítomnosti 0,1 %látky Triton X-100. Všechny roztoky se tlumí na pH 7,5 pomocí 10 mM fosforečnanu sodného. Směs se mícháosmkrát vždy po dobu jedné minuty při maximální rych-losti za použití vířivého mixeru. Mezi míchacími in- v tervaly se směs chladí na ledu po dobu alespoň jednéminuty. Během vířivého míchání se zkumavky přednostněudržují pod uhlem 20 až 40°, aby se dosáhlo maximálního učinku rozbíjení buněk. Po dokončení lyse se roz-tok rozdrcených buněk oddělí, skleněné kuličky se pramyjí 0,35 ml pufru pro lysi a oba roztoky se spojí a v podrobí patnáctiminutovému odstředování při 13000 x gSupernatanty se oddělí a zkouší na immunoreaktivníHBsAg částice (stanovení Ausria) a na celkový protein(Bradford). Výsledky jsou uvedeny v tabulce I (a).
Příklad II
Pro další ilustraci způsobu podlevynálezu se 80 ml suspenze (jeden objemový díl aglo-merovaných buněk na dva objemyvé díly pufru pro lysi)podrobí působení zařízení pro štěpení buněk (Impandex lne.) za použití 64 mm míchacího kotouče při frek- -1 *věnci otáčení 4500 min . Pufr pro lysi obsahuje bud 11 - 0,5M NaCl a 0,1 Tritonu (hmotnost/objem) nebo 3MKSCN. Supernatanty se zkouší na HBsAg (Ausria) a nacelkový obsah proteinu (Bradford). Výsledky jsou uve-deny v tabulce I(b).
Tabulka I
I II III
Podmínky lyse HBsAg částice veškerý HBsAg/protein (yug/ml) protein (mg/ml) (c/o hmotnostní). (a) sůl (konc). NaCl (0,5M) + Triton 230 10,1 2,3 KI(2M) + Triton 14 1,4 1,0 KI(2M) - Triton 169 2,4 7,0 KSCN (3M) + Triton < 10 1,9 <0,5 KSCN (3M) - Triton 222 3,5 6,3 (b) zařízení pro štěpení bunšk
NaCl (0,5M) + Triton 600 32,5 !,8 KSCN(3M) 803 10,6 7,6 - 12
Zatímco Žádné z podmínek v pří-padě použití chaotropickó soli (KI nebo KSCN) nevedouk podstatně vyšším hodnotám HBsAg částice ve srovnánís kontrolním pokusem (sloupec I), je zřejmé, že chao- v tropické soli inhibují uvolňování veškerého proteinu(sloupec II) a tím zvyšují specifickou aktivitu HBsAgčástice dvoj- až pětinásobně (sloupec III). v
Claims (4)
- 7523-^ 13 PATENTOVÉ NAROK1. Způsob extrakce lipoflíních pro-teinů majících tendenci k asociaci s lipidovými membránaminebo aglomerujících do struktur micellárního typu v přítom-nosti lipidů nebo látek podobných lipidům, z hostitelskýchbuněk rodu Pichia, vyznačujúící se tím, že se a) buňky rozbijí zpracováváním při teplotě od O do 10 °Cv průběhu 0,5 do 30 minut, přičemž rozbíjení buněk seprovádí v přítomnosti extrakčního media obsahujícíhoalespoň jednu chaotropickou sůl v jednomolární až osmi-molární koncentraci v prostředí tlumeném na hodnotu pHvhodnou pro udržení lipofilního proteinu ve stabilní for-mě, v rozmezí od 6 do 8 a b) izoluje se rozpustná frakce získaná ze stupně a), c) načež se popřípadě rozpustná frakce získaná ze stupně b)zpracovává za účelem izolace koncentrovaného podílulipofilního proteinu·
- 2, Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že lipofilní protein je zvolen ze souboru zahrnu-jícího- 14 - S-formu povrchového antigenu hepatitis B,preS^-formu povrchového antigenu hepatitis B,preSg^formu povrchového antigenu hepatitis B,fosfatidylserin dekarboxylázu (z E. coli),lambda bakteriofágový D-protein, nízkohustotní lipoprotein (LDL),vysokohustotní lip&rotein (HDL) adihydroorotót dehydrogenázu.
- 3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, 2e chaotropická sůl je zvolena ze souboruzahrnujícího: thiokyanatan sodný,thiokyanatan draselný,jodid sodný,jodid draselný,chlornan sodný,chlorid lithný,bromid lithný,guanidinium hydrochlorid,guanidinium thiokyanát,močovinu a směsi kterýchkoliv dvou nebo více těchto látek. - 15 - 4« Způsob podle bodu 1, vyznačují- cí se tím, že stupeň b), spočívající v izolaci roz-pustné frakce, se provádí odstřelováním roztoku ob-sahujícího rozštěpené buňky.
- 5. Způsob podle bodu 1, vyznačují-cí se tím, že se navíc c) rozpustná frakce získaná zestupně b) zpracovává za účelem izolace koncentrova-ného podílu lipofilního proteinu.MP-540-87-Ho
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/920,385 US4683293A (en) | 1986-10-20 | 1986-10-20 | Purification of pichia produced lipophilic proteins |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS752987A2 true CS752987A2 (en) | 1991-08-13 |
Family
ID=25443644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS877529A CS752987A2 (en) | 1986-10-20 | 1987-10-19 | Method of lipophilic proteins extraction |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4683293A (cs) |
| EP (1) | EP0271667A1 (cs) |
| JP (1) | JPS63105693A (cs) |
| KR (1) | KR880005259A (cs) |
| CN (1) | CN1006808B (cs) |
| AU (1) | AU586758B2 (cs) |
| CA (1) | CA1277272C (cs) |
| CS (1) | CS752987A2 (cs) |
| DD (1) | DD262673A5 (cs) |
| DK (1) | DK545187A (cs) |
| FI (1) | FI874597L (cs) |
| HU (1) | HU202554B (cs) |
| IE (1) | IE872807L (cs) |
| IL (1) | IL83402A0 (cs) |
| IN (1) | IN166069B (cs) |
| NO (1) | NO874357L (cs) |
| NZ (1) | NZ221296A (cs) |
| PH (1) | PH23461A (cs) |
| PL (1) | PL154027B1 (cs) |
| PT (1) | PT85935B (cs) |
| YU (1) | YU46080B (cs) |
| ZA (1) | ZA875698B (cs) |
Families Citing this family (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4935235A (en) * | 1979-05-24 | 1990-06-19 | The Regents Of The University Of California | Non-passageable viruses |
| US5124256A (en) * | 1985-11-13 | 1992-06-23 | Labofina, S.A. | Process for recovering polypeptides localized in the periplasmic space of yeast without breaking the cell wall by using an non-ionic detergent and a neutral salt |
| US4816564A (en) * | 1986-01-31 | 1989-03-28 | Merck & Co., Inc. | Method for producing hepatitis B virus proteins in yeast |
| US4742158A (en) * | 1986-04-25 | 1988-05-03 | Merck & Co., Inc. | Purification of hepatitis pre-S antigens by polymerized serum albumin affinity binding |
| US5026828A (en) * | 1987-02-27 | 1991-06-25 | Merck & Co., Inc. | Method of purifying recombinant pres-1/S-2/S/S hepatitis B antigen from yeast |
| US5011915A (en) * | 1987-10-26 | 1991-04-30 | Merck & Co., Inc. | Process for purifying recombinant hepatitis antigens |
| US5004688A (en) * | 1988-04-15 | 1991-04-02 | Phillips Petroleum Company | Purification of hepatitis proteins |
| US5030720A (en) * | 1988-09-01 | 1991-07-09 | Merck & Co., Inc. | Pres2+S hepatitis B vaccine derived from plasma |
| US6509192B1 (en) * | 1992-02-24 | 2003-01-21 | Coulter International Corp. | Quality control method |
| US6362003B1 (en) | 1992-02-24 | 2002-03-26 | Coulter Corporation | Hematological reference control composition containing leukocyte analogs, methods of making, and uses thereof |
| US5855902A (en) * | 1992-11-02 | 1999-01-05 | Protatek International, Inc. | Method of administering a vaccine comprising tritrichomonas foetus membrane surface antigens between 45 and 300 kilopaltons |
| US5863894A (en) * | 1995-06-05 | 1999-01-26 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| CA2202351A1 (en) * | 1994-10-18 | 1996-04-25 | George Phillip Vlasuk | Nematode-extracted serine protease inhibitors and anticoagulant proteins |
| US5866542A (en) * | 1994-10-18 | 1999-02-02 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| US5872098A (en) * | 1995-06-05 | 1999-02-16 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| ES2276396T3 (es) * | 1994-10-18 | 2007-06-16 | Dendreon Corporation | Proteinas anticoagulantes e inhibidores de la serina proteasa extraidos de nematodos. |
| US5866543A (en) * | 1995-06-05 | 1999-02-02 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| US5945275A (en) * | 1994-10-18 | 1999-08-31 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| MX9605082A (es) | 1996-10-24 | 1998-04-30 | Univ Autonoma De Nuevo Leon | Levaduras metilotroficas modificadas geneticamente para la produccion y secrecion de hormona de crecimiento humano. |
| GB2338236B (en) * | 1998-06-13 | 2003-04-09 | Aea Technology Plc | Microbiological cell processing |
| US7455990B2 (en) * | 1999-11-24 | 2008-11-25 | Danisco A/S | Method of extracting recombinant hexose oxidase |
| GB9927801D0 (en) | 1999-11-24 | 2000-01-26 | Danisco | Method |
| US7625756B2 (en) | 2000-06-28 | 2009-12-01 | GycoFi, Inc. | Expression of class 2 mannosidase and class III mannosidase in lower eukaryotic cells |
| US7598055B2 (en) * | 2000-06-28 | 2009-10-06 | Glycofi, Inc. | N-acetylglucosaminyltransferase III expression in lower eukaryotes |
| US8697394B2 (en) * | 2000-06-28 | 2014-04-15 | Glycofi, Inc. | Production of modified glycoproteins having multiple antennary structures |
| US7863020B2 (en) | 2000-06-28 | 2011-01-04 | Glycofi, Inc. | Production of sialylated N-glycans in lower eukaryotes |
| EP2339013B1 (en) * | 2000-06-28 | 2014-07-02 | GlycoFi, Inc. | Methods for producing modified glycoproteins |
| US7449308B2 (en) | 2000-06-28 | 2008-11-11 | Glycofi, Inc. | Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes |
| US7118901B2 (en) * | 2002-12-18 | 2006-10-10 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Recombinant bovine pancreatic desoxyribonuclease I with high specific activity |
| ATE387494T1 (de) * | 2002-12-20 | 2008-03-15 | Hoffmann La Roche | Hitzelabile desoxyribonuklease i-varianten |
| US7332299B2 (en) | 2003-02-20 | 2008-02-19 | Glycofi, Inc. | Endomannosidases in the modification of glycoproteins in eukaryotes |
| EP1460425A1 (en) * | 2003-03-17 | 2004-09-22 | Boehringer Mannheim Gmbh | Deglycosylated enzymes for conjugates |
| ES2337684T3 (es) * | 2003-12-05 | 2010-04-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Carboxipeptidasa b recombinante y su purificacion. |
| CN100388381C (zh) * | 2004-10-14 | 2008-05-14 | 联发科技股份有限公司 | 光学储存媒体的数据记录方法及其装置 |
| CN101253196B (zh) * | 2005-09-14 | 2012-09-05 | 塞诺菲-安万特德国有限公司 | 通过胰蛋白酶变体切割胰岛素前体 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4540668A (en) * | 1979-06-05 | 1985-09-10 | Phillips Petroleum Company | Alcohol oxidase from Pichia-type yeasts |
| US4427580A (en) * | 1982-09-01 | 1984-01-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for separation and recovery of proteins and nucleic acids from nucleoproteins using water destructuring salts |
| US4512922A (en) * | 1982-12-22 | 1985-04-23 | Genentech, Inc. | Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins |
| KR850001534A (ko) * | 1983-08-22 | 1985-03-30 | 제임스 에프. 나우톤 | 형질전환된 효모로 부터 유도된 면역원성 HBsAg |
| US4559307A (en) * | 1983-10-17 | 1985-12-17 | Phillips Petroleum Company | Treatment of yeast cells with proteolytic enzymes |
| US4569790A (en) * | 1984-03-28 | 1986-02-11 | Cetus Corporation | Process for recovering microbially produced interleukin-2 and purified recombinant interleukin-2 compositions |
| US4604377A (en) * | 1984-03-28 | 1986-08-05 | Cetus Corporation | Pharmaceutical compositions of microbially produced interleukin-2 |
| GB8414354D0 (en) * | 1984-06-05 | 1984-07-11 | Biogen Nv | Purifying protein |
| US4572798A (en) * | 1984-12-06 | 1986-02-25 | Cetus Corporation | Method for promoting disulfide bond formation in recombinant proteins |
| US4649192A (en) * | 1985-05-30 | 1987-03-10 | Smith Kline-Rit | Method for the isolation and purification of hepatitis B surface antigen using polysorbate |
| US4895800A (en) * | 1985-11-26 | 1990-01-23 | Phillips Petroleum Company | Yeast production of hepatitis B surface antigen |
-
1986
- 1986-10-20 US US06/920,385 patent/US4683293A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-05-28 CA CA000538267A patent/CA1277272C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-31 NZ NZ221296A patent/NZ221296A/xx unknown
- 1987-07-31 ZA ZA875698A patent/ZA875698B/xx unknown
- 1987-07-31 PH PH35608A patent/PH23461A/en unknown
- 1987-08-02 IL IL83402A patent/IL83402A0/xx unknown
- 1987-08-10 IN IN621/CAL/87A patent/IN166069B/en unknown
- 1987-08-11 CN CN87105519A patent/CN1006808B/zh not_active Expired
- 1987-08-18 AU AU77178/87A patent/AU586758B2/en not_active Ceased
- 1987-09-02 KR KR870009721A patent/KR880005259A/ko not_active Withdrawn
- 1987-09-03 JP JP62219311A patent/JPS63105693A/ja active Pending
- 1987-10-15 PT PT85935A patent/PT85935B/pt not_active IP Right Cessation
- 1987-10-16 HU HU874664A patent/HU202554B/hu not_active IP Right Cessation
- 1987-10-16 YU YU191387A patent/YU46080B/sh unknown
- 1987-10-19 FI FI874597A patent/FI874597L/fi not_active Application Discontinuation
- 1987-10-19 PL PL1987268298A patent/PL154027B1/pl unknown
- 1987-10-19 DD DD87308079A patent/DD262673A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-10-19 NO NO874357A patent/NO874357L/no unknown
- 1987-10-19 DK DK545187A patent/DK545187A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-10-19 IE IE872807A patent/IE872807L/xx unknown
- 1987-10-19 CS CS877529A patent/CS752987A2/cs unknown
- 1987-10-19 EP EP87115255A patent/EP0271667A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4683293A (en) | 1987-07-28 |
| FI874597A0 (fi) | 1987-10-19 |
| HUT45079A (en) | 1988-05-30 |
| IN166069B (cs) | 1990-03-10 |
| KR880005259A (ko) | 1988-06-28 |
| NZ221296A (en) | 1989-07-27 |
| IL83402A0 (en) | 1988-01-31 |
| CN1006808B (zh) | 1990-02-14 |
| YU191387A (en) | 1989-06-30 |
| AU586758B2 (en) | 1989-07-20 |
| FI874597A7 (fi) | 1988-04-21 |
| CA1277272C (en) | 1990-12-04 |
| DK545187D0 (da) | 1987-10-19 |
| AU7717887A (en) | 1988-04-21 |
| FI874597L (fi) | 1988-04-21 |
| PT85935A (en) | 1987-11-01 |
| ZA875698B (en) | 1988-04-27 |
| NO874357D0 (no) | 1987-10-19 |
| JPS63105693A (ja) | 1988-05-10 |
| PL154027B1 (en) | 1991-06-28 |
| PH23461A (en) | 1989-08-07 |
| IE872807L (en) | 1988-04-20 |
| PT85935B (pt) | 1990-07-31 |
| PL268298A1 (en) | 1988-07-07 |
| DK545187A (da) | 1988-04-21 |
| DD262673A5 (de) | 1988-12-07 |
| EP0271667A1 (en) | 1988-06-22 |
| CN87105519A (zh) | 1988-05-04 |
| NO874357L (no) | 1988-04-21 |
| HU202554B (en) | 1991-03-28 |
| YU46080B (sh) | 1992-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS752987A2 (en) | Method of lipophilic proteins extraction | |
| EP0337492B1 (en) | Purification of hepatitis proteins | |
| CA1305284C (en) | Method for the recovery of cellular proteins in active form | |
| JPH0449999B2 (cs) | ||
| JPH0660198B2 (ja) | タンパク質の採取方法 | |
| US5151358A (en) | Processes for the recovery of naturally produced chymosin | |
| CA2058948C (en) | Processes for the recovery of naturally produced chymosin | |
| US5139943A (en) | Processes for the recovery of microbially produced chymosin | |
| JPH01502556A (ja) | イー・コリにおいて発現したピー・ファルシパラム・ｃｓタンパク質ワクチンの単離および精製方法 | |
| AU2019249933B2 (en) | Process for producing a membrane protein | |
| JP3040190B2 (ja) | タンパクの精製方法 |