NO852617L - Fremgangsmaate til fremstilling av l-fenylalanin. - Google Patents
Fremgangsmaate til fremstilling av l-fenylalanin.Info
- Publication number
- NO852617L NO852617L NO852617A NO852617A NO852617L NO 852617 L NO852617 L NO 852617L NO 852617 A NO852617 A NO 852617A NO 852617 A NO852617 A NO 852617A NO 852617 L NO852617 L NO 852617L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- acid
- phenylalanine
- microorganism
- phenylpyruvic
- phenylpyruvic acid
- Prior art date
Links
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 title claims description 36
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 title claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- BTNMPGBKDVTSJY-UHFFFAOYSA-N keto-phenylpyruvic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)CC1=CC=CC=C1 BTNMPGBKDVTSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 15
- 239000001903 2-oxo-3-phenylpropanoic acid Substances 0.000 claims description 13
- DEDGUGJNLNLJSR-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C(O)=CC1=CC=CC=C1 DEDGUGJNLNLJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 7
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- 241000589597 Paracoccus denitrificans Species 0.000 claims description 4
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000223252 Rhodotorula Species 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- 241000223253 Rhodotorula glutinis Species 0.000 claims description 2
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 2
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 claims description 2
- 241000006364 Torula Species 0.000 claims description 2
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 claims description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 claims description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 2
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 4
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 150000004716 alpha keto acids Chemical class 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187180 Streptomyces sp. Species 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- -1 ammonium ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N oxaloacetic acid Chemical compound OC(=O)CC(=O)C(O)=O KHPXUQMNIQBQEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/22—Tryptophan; Tyrosine; Phenylalanine; 3,4-Dihydroxyphenylalanine
- C12P13/222—Phenylalanine
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Description
Fenylalanin er en aminosyre som forekommer i enhver lévende organisme. De fleste bakterier og sopp, innbefattende gjær,: syntetiserer selv det til vekst nødvendige fenylalanin.
De dertil nødvendige enzymsystemene er imidlertid bare til-stede med så liten aktivitet at det ikke mer fenylalanin dannes enn cellene nøyaktig krever.
De langsomste trinn i biosyntesen av fenylalanin ligger i oppbygningen av den aromatiske ring. Det ble derfor allerede forsøkt å overføre aromatiske fortrinn ved biotransformasjon med Rhodotorula-gjær eller E. coli til fenylalanin. Utbyttene var riktignok så små at de ikke kom på tale for en teknisk produksjon.
Det er allerede foreslått (tysk Offenlegungsschrift
3 427 495), å fremstille L-aminosyrer av a-ketosyrer ved at den ønskede a-ketosyren tilføres mikroorganismer under den logaritmiske vekstfase. Fenylpyrodruesyre omsettes på
denne måte av Brevibacterium til 1-fenylalanin.
På mange mikroorganismer, bl.a. også på de som anvendes
ifølge oppfinnelsen, virker fenylpyrodruesyre imidlertid toksisk. Det var derfor overraskendé at ved adaptasjon av økende mengder fenylpyrodruesyre kunne mikroorganismer selekteres, som méd dette fortrinn produserer inntil ca.
15 g L-fenylalanin pr. liter kulturmedium.
Oppfinnelsen vedrører således en fremgangsmåte til fremstilling av L-fenylalanin fra fenylpyrodruesyre og en nitrogenkilde for amineringen med hjelp av mikroorganismer, idet fremgangsmåten erkarakterisert vedat det adapteres e,n" mikroorganisme fra rekken E. coli, Paracoccus denitrificans, Torula, Rhodotorula eller Streptomycespå fenylpyrodruesyre resp. fenylpyruvat.
Foretrukkede mikroorganismestammer er E. coli ATCC e 11303, Paracoccus denitrificans DSM 65, Rhodotorula glutinis
DSM 70398 samt forskjellige fra jordprøver isolerte
Streptomyceter.
Adaptasjonen av egnede stammer foregår ved gjentatt tilsetning av en liktblivende mengde eller ved tilsetning av økende mengder fenylpyrodruesyre til de tilsvarende virkningsmedier. Før eller under seleksjonen mot dette aromatiske utgangs-stoff kan fortrinnsvis til akselerering av adaptasjonen også foregå en mutasjon av mikroorganismen etter i og for seg kjente metoder. Herved eller ved optimering av de anvendte medier og vekstbetingelser kan de opprinnelig oppnådde fenylalanin-utbytter fra vanligvis ca. 0,01-0,5 g/l, i sær-tilfeller til ca. 2,4 g, økes inntil 15 g/l.
Fortrinnsvis anvendes mikroorganismer i fiksert form.
For fikseringen kommer det i betraktning de kjente fremgangsmåter, fordelaktig metodene ifølge de tyske Offen-legungsschrifter 3 237 341 og 3 243 591, samt de deri om-talte fremgangsmåter. De således immobiliserte biokataly-satorer kan anvendes i en reaktor etter slyngeprinsippet, spesielt i en Airliftreaktor, slik det ble foreslått i det tyske Offenlegungsschrift 3 247 214.
Som nitrogenkilde foretrekkes på den ene side urinstoff
samt ammoniakk i form av dets salter, spesielter salter av mono- og polykarboksylsyrer, og på den annen side aminosyrer, spesielt glycin, asparagin, asparaginsyre, glutamin eller glutaminsyre.
Fenylpyrodruesyre kan anvendes i form av den frie syre
eller egnede salter (tilsvarende det anvendte medium).
Dens tilsetning kan foregå like ved begynnelsen av den
podede mikroorganismekultur eller etter en vekstfase på
ca. 10-90 timer, fortrinnsvis 2-48 timer, i en mengde på ca. 0^1-2%", referert til mediets vekt. Dette funn er likeledes overraskende, da ifølge det tyske Offenlegungsschrift 3 427 495 det beste utbyttet er bundet til en tilsetning av a-ketosyren under den logaritmiske vekst-
fase. Referert til nitrogenkilden anvendes fenylpyrodruesyre i et lite støkiometrisk underskudd. Med disse utgangsmaterialer dyrkes kulturene videre ca. 10-90 timer, fortrinnsvis 12-48 timer, respektivt tilpasset til den anvendte stamme. Man kan anvende utgangsmaterialene under vekstfasen også i mindre konsentrasjon,;ca. 0,02-0,5%, hvorpå deretter mot avslutningen eller etter vekstfasen, f.eks. i løpet av 24-48 timer, foregår den ytterligere tilsetning av ovennevnte angitte mengde.
Den gunstigste fremgangsmåte for den respektive stamme kan fastslås i enkle forforsøk.
Tilsetningen av fumarsyre resp. dens salter til fermenterings-mediet har en positiv innvirkning på omsetningen av fenylpyrodruesyre til L-fenylalanin. Spesielt fordelaktig er tilsetningen av ammoniumsaltet, da da kan ammoniumionene tjene som nitrogendonor for omsetningen.
Optimeringen av de anvendte medier og vekstbetingelser, eksempelvis pH-verdi, oksygenforsørging, temperatur, kon-sentrasjoner av utgangsmaterialene og eventuelt fikserings-betingelsene, er likeledes lett mulig ved hjelp av enkle forforsøk.
De ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen dyrkede frie
celler kan immobiliseres og produserer deretter L-fenyl-
alanin ved kontinuerlig tilsetning av næringsoppløsning med godt rom-tidsutbytte. En foretrukket utførelsesform er immobiliseringen etter avsluttet L-fenylalaninsyntesen i "batch"-systemet. Det kan deretter enda syntetiseres inntil ca. 10 g fenylalanin pr. liter næringsoppløsning over lengere tid kontinuerlig.
I de følgende eksempler refererer prosentangivelsene
seg til vekt.
Eksemgel_l
Escherichia coli ATCC e 11303 ble mutert med N-metyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin på i og for seg kjent måte. De behandlede celler ble som 3%-ig inokulum hatt i 100 ml av adaptasjonsmediet av sammensetningen av
og økende mengder av fenylpyruvat og asparaginsyre og inkubert ved en pH-verdi på 7,5 og en temperatur på 37°C på en rystemaskin i 48 timer. Kulturene ble overpodet flere ganger, idet mengdene av fenylpyruvat og asparaginsyre ble øket etter de i tabell 1 angitte verdier.
Deretter ble kulturene fortynnet rundt faktoren 10<5>med fysiologisk koksaltoppløsning og utplattert på plater som inneholdt et medium med ovennevnte sammensetning i tillegg av 16 g/l asparaginsyre, 24 g/l fenylpyruvat og 15 g/l agar. Etter inkubasjon ved 37°C over et tidsrom på 1-2 dager ble det utvalgt godt voksne, store kolonier. På denne måte ble det bl.a. isolert mutantene Escherichia coli E-196 og Escherichia coli E-197.
Eksemgel_2
Ifølge eksempel 1 muterte og seleksjonerte kulturer av E. coli ATCC e 11303, samt villstammen som kontroll, ble podet i
100 ml av følgende medium:
Etter 2 dager ble det herav med 3% inokulum igjen satt
en lik kultur og likeledes to ytterligere ganger etter hver gang 2 dager. Kulturene ble dyrket på en rystemaskin ved 3 7°C. Fra den siste kultur ble en ny blanding på
4 1 fordelt i 8 Erlenmeyer-kolber (2 1 bruttovolum) med hver gang 500 ml fylling, podet med samme medium og dyrket ved 3 7°C. Etter 2 dager ble det oppnådd de i tabell 2 oppførte fenylalanininnhold.
Ved økning av konsentrasjonen av fenylpyruvat til 1,7%
og konsentrasjonen av asparaginsyre til 1% ble det oppnådd et fenylalanininnhold på 15 g/l. Cellene ble høstet etter 2 dager ved sentrifugering og immobilisert etter fremgangsmåten ifølge tysk Offenlegungsschrift 3 237 341, eksempel 1.
Eksemp_el_3
En ifølge oppfinnelsen seleksjonert kultur av Paracoccus denitrificans DSM 65 ble podet med et poderørøye fra en skråagarkultur til 100 ml av følgende medium:
Kulturene ble dyrket i en Erlenmeyer-kolbe (bruttovolum 300 ml) på en rystemaskin ved 30°C. Etter 2 dager ble herav en laboratoriefermenterer med 10 1 fyllvolum podet med det samme medium. Etter 24 timers veksttid ved 500 opm og 10 1 luft/min. og en temperatur på 3 0°C ble det av hver tilsatt 50 g glycin og fenylpyruvat. Etter to ytterligere dager oppnådde kulturen en optisk tetthet (ekstinksjon ved 580 nm) på 6,2. Fenylpyruvatet ble derved omdannet til 56% til fenylalanin.
Kulturen ble høstet ved sentrifugering og cellene immobi-' lisert etter fremgangsmåten ifølge tysk Offenlegungsschrift 3 237 341, eksempel 2.
Eksemp_el_4
50 Streptomyces sp.-isolater fra jordprøver ble respektivt overpodet i 100 ml av følgende medium:
I tillegg ble stammene overpodet i 100 ml av et tilsvarende medium som i stedet for asparaginsyre innehdldt glycin. Kulturene ble dyrket 5 dager på en rystemaskin ved 3 0°C. Prøver ble uttatt etter 3 og 5 dager. 7 stammer av de undersøkte kulturer omsatte fenylpyruvat til 30-60% til fenylalanin, således at dette egnet seg for den videre adaptasjon.
Eksemp_el_5
100 g av de ifølge eksempel 2 oppnådde immobiliserte celler ble hatt i en ved 30°C termostabilisert glassøyle og blandet med en substratoppløsning av sammensetningen
Ved en gjennomstrømningshastighet på 50 ml/time, en pH
på 7,5 og 30°C oppnådd man en konsentrasjon av L-fenylalanin på 9,8 g/l. Frigjort oksaleddiksyre dekarboksylerte herved til ca. 50% i pyrodruesyre. Produktoppløsningen ble oppkonsentrert ved avdestillering av vann til den halve, pH-verdien innstilt på 5,5 og ved avkjøling til 5°C ble L-fenylalanin bragt til krystallisering.
Eksemp_el_6
100 g av de ifølge eksempel 2 blandede immobiliserte celler ble hatt i en til 30°C termostatisért glassøyle. En sub-stratoppløsning av sammensetningen
ble ved en pH-verdi på 8,0 rundt 30°C med en gjennomstrøm-ningshastighet på 20 ml/time pumpet over søylen. Det
dannet seg derved 9,7 g/l L-fenylalanin. Ved oppkonsentrerin<g>og utkrystallisering ifølge eksempel 5 ble L-fenylalanin ut-vunnet i høy renhet.
Eksemp_el_7
100 g av de ifølge eksempel 2 ved sentrifugering høstede celler ble utrørt med 80 ml av en 8%-ig natriumalginatoppløs-ning og dryppet gjennom en dyse i et fornetterbad bestående av 0,5 m kalsiumkloridoppløsning. De dannede småkuler ble frafiltrert, hatt i en glassøyle og blandet med en substrat-oppløsning ifølge eksempel 5. Ved en gjennomstrømnings-hastighet på 70 ml/time ble det dannet 9,8 g L-fenylalanin.
Eksemp_el_8
100 g av de ifølge eksempel 3 dannede immobiliserte celler ble hatt i en til 30°C termostatisert glassøyle og blandet med en substratoppløsning av sammensetningen
Ved en pH-verdi på 7,0 og en gjennomstrømningshastighet på 20 ml/time får man 9,6 g/l L-fenylalanin.
Claims (7)
1. Fremgangsmåte til fremstilling av L-fenylalanin fra fenylpyrodruesyre og en nitrogenkilde for aminering ved hjelp av mikroorganismer, karakterisert ved at det adapteres en mikroorganisme fra rekken E. coli, Parco-ccus denitrificans, Torula, Rhodotorula eller Streptomyces til fenylpyrodruesyre.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at før eller under seleksjonen av mikroorganismen mot fenylpyrodruesyre gjennomføres en mutasjon.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at som mikroorganisme anvendes E. coli ATCC e 11303, Paracoccus denitrificans DSM 65, Rhodotorula glutinis DSM 70398 eller en fra jord-prøver isolert Streptomycet.
4. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at som nitrogenkilde anvendes et mono- eller polykarboksylsyresalt av ammoniakk, glycin, asparagin, asparaginsyre, glutamin eller glutaminsyre.
5. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at mikroorganismen selekteres mot økende mengder fenylpyrodruesyre.
6. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at mikroorganismen anvendes i form av immobiliserte celler.
7. Fremgangsmåte ifølge et eller flere av de foregående krav, karakterisert ved at fumarsyre eller dens salter tilsettes til næringsoppløsningen, hvori omsetningen finner sted til fenylalanin.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843423936 DE3423936A1 (de) | 1984-06-29 | 1984-06-29 | Verfahren zur herstellung von l-phenylalanin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO852617L true NO852617L (no) | 1985-12-30 |
Family
ID=6239424
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO852617A NO852617L (no) | 1984-06-29 | 1985-06-28 | Fremgangsmaate til fremstilling av l-fenylalanin. |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4745059A (no) |
| EP (1) | EP0167058A3 (no) |
| JP (1) | JPS6121092A (no) |
| AU (1) | AU4440785A (no) |
| DE (1) | DE3423936A1 (no) |
| DK (1) | DK296485A (no) |
| ES (1) | ES8609214A1 (no) |
| FI (1) | FI852552L (no) |
| GR (1) | GR851582B (no) |
| IL (1) | IL75674A0 (no) |
| NO (1) | NO852617L (no) |
| PT (1) | PT80735B (no) |
| ZA (1) | ZA854906B (no) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4600692A (en) * | 1983-02-10 | 1986-07-15 | Purification Engineering, Inc. | Immobilized cells for preparing phenylalanine |
| US4783403A (en) * | 1984-02-08 | 1988-11-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing l-phenylalanine |
| FR2583432B1 (fr) * | 1985-06-13 | 1988-11-04 | Inst Francais Du Petrole | Procede de production enzymatique de l-a-aminoacides a partir d'a-cetoacides |
| DE3613952A1 (de) * | 1986-04-24 | 1987-10-29 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von l-aminosaeuren durch transaminierung |
| ES2058076T3 (es) * | 1986-06-04 | 1994-11-01 | Hoechst Ag | Procedimiento para la obtencion de l-fosfinotricina por transaminacion. |
| GB2194247A (en) * | 1986-08-19 | 1988-03-02 | Allelix Inc | Mutant microorganisms |
| DE3842025A1 (de) * | 1988-12-14 | 1990-07-05 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung von l-phosphinothricin |
| US7202070B2 (en) * | 2000-10-31 | 2007-04-10 | Biocatalytics, Inc. | Method for reductive amination of a ketone using a mutated enzyme |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3183170A (en) * | 1961-10-03 | 1965-05-11 | Sanraku Ocean Kabushiki Kaisha | Method of l-amino acid manufacture |
| US3660235A (en) * | 1969-08-22 | 1972-05-02 | Ajinomoto Kk | Method for producing phenylalanine by fermentation |
| CH563344A5 (no) * | 1970-09-30 | 1975-06-30 | Nisshin Flour Milling Co | |
| GB2084155B (en) * | 1980-09-17 | 1984-01-11 | Grace W R & Co | Process for production of l-amino acids using immobilized microorganisms |
| DE3237341A1 (de) * | 1982-10-08 | 1984-04-12 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur herstellung von perlfoermigen biokatalysatoren und ihre verwendung |
| DE3243591A1 (de) * | 1982-11-25 | 1984-05-30 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Vinylencarbonat-polymerysate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung |
| US4600692A (en) * | 1983-02-10 | 1986-07-15 | Purification Engineering, Inc. | Immobilized cells for preparing phenylalanine |
| NL8401049A (nl) * | 1983-08-05 | 1985-03-01 | Grace W R & Co | Werkwijze voor de bereiding van l-aminozuren uit alfa-ketozuren. |
| DE3482982D1 (de) * | 1983-09-01 | 1990-09-20 | Genetics Inst | Herstellung von l-aminosaeuren durch transaminierung. |
| US4518692A (en) * | 1983-09-01 | 1985-05-21 | Genetics Institute, Inc. | Production of L-amino acids by transamination |
| US4525454A (en) * | 1983-09-01 | 1985-06-25 | Genetics Institute, Inc. | Production of L-4-phenyl-2-aminobutanoic acid by transamination |
| GB2152503B (en) * | 1984-01-05 | 1986-03-19 | Grace W R & Co | Process for producing l-phenylalanine |
| JPS60160890A (ja) * | 1984-01-30 | 1985-08-22 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Ｌ−フエニルアラニンの製造法 |
| GB8403244D0 (en) * | 1984-02-07 | 1984-03-14 | Searle & Co | Aminoacids via bioconversion |
| US4783403A (en) * | 1984-02-08 | 1988-11-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for producing l-phenylalanine |
-
1984
- 1984-06-29 DE DE19843423936 patent/DE3423936A1/de active Granted
-
1985
- 1985-06-19 EP EP85107546A patent/EP0167058A3/de not_active Withdrawn
- 1985-06-27 US US06/749,465 patent/US4745059A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-06-27 FI FI852552A patent/FI852552L/fi not_active Application Discontinuation
- 1985-06-27 ES ES544622A patent/ES8609214A1/es not_active Expired
- 1985-06-27 GR GR851582A patent/GR851582B/el unknown
- 1985-06-28 DK DK296485A patent/DK296485A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-06-28 PT PT80735A patent/PT80735B/pt unknown
- 1985-06-28 ZA ZA854906A patent/ZA854906B/xx unknown
- 1985-06-28 AU AU44407/85A patent/AU4440785A/en not_active Abandoned
- 1985-06-28 IL IL75674A patent/IL75674A0/xx unknown
- 1985-06-28 NO NO852617A patent/NO852617L/no unknown
- 1985-06-28 JP JP60140703A patent/JPS6121092A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU4440785A (en) | 1986-01-02 |
| PT80735B (de) | 1987-03-17 |
| GR851582B (no) | 1985-11-25 |
| ES544622A0 (es) | 1986-07-16 |
| FI852552L (fi) | 1985-12-30 |
| EP0167058A2 (de) | 1986-01-08 |
| ZA854906B (en) | 1986-02-26 |
| DK296485A (da) | 1985-12-30 |
| US4745059A (en) | 1988-05-17 |
| JPS6121092A (ja) | 1986-01-29 |
| IL75674A0 (en) | 1985-10-31 |
| FI852552A0 (fi) | 1985-06-27 |
| DE3423936A1 (de) | 1986-01-02 |
| PT80735A (de) | 1985-10-01 |
| ES8609214A1 (es) | 1986-07-16 |
| DE3423936C2 (no) | 1989-12-21 |
| EP0167058A3 (de) | 1987-03-25 |
| DK296485D0 (da) | 1985-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100249532B1 (ko) | L-트레오닌의 제조방법 | |
| JPH06343462A (ja) | 新規微生物、Ｌ−α−アミノ酸の製法、新規微生物の突然変異種及び変体の培養法、カルバモイラーゼ及び／又はヒダントイナーゼ及び／又はヒダントインラセマーゼをコードする遺伝子の獲得法、及びカルバモイラーゼ及び／又はヒダントイナーゼ及び／又はヒダントインラセマーゼをコードする遺伝子の微生物又は細胞中への挿入法 | |
| KR100198039B1 (ko) | 발효에 의한 l-글루탐산의 제조방법 | |
| NO852617L (no) | Fremgangsmaate til fremstilling av l-fenylalanin. | |
| US4535059A (en) | Muconic acid productivity by a stabilized mutant microorganism population | |
| KR20020067623A (ko) | 발효에 의한 ｏ-아세틸-ｌ-세린의 제조방법 | |
| WO2000009661A1 (en) | Novel microorganisms and method for producing l-threonine using the same | |
| Shah et al. | Optimization of culture conditions for L-lysine fermentation by Corynebacterium glutamicum | |
| GB2147579A (en) | Production of L-amino acids from alpha-keto acids by fermentation | |
| US4584273A (en) | Method for the production of phenylalanine ammonia-lyase by fermentation | |
| NO147927B (no) | Anordning for aa skille fra hverandre to medier som befinner seg i hvert sitt rom paa hver sin side av en ringformet aapning mellom to deler som er bevegelige i forhold til hverandre | |
| GB2161159A (en) | Improved transamination process for producing L-amino acids | |
| JPS60160891A (ja) | Ｌ‐フエニルアラニンの製造方法 | |
| US3293141A (en) | Fermentation process for producing l-tryptophan | |
| GB2147580A (en) | Improved process for producing L-amino acids from alpha-keto acids by fed-batch fermentation | |
| Igarashi et al. | Excretion of L-tryptophan by analogue-resistant mutants of Pseudomonas hydrogenothermophila TH-1 in autotrophic cultures | |
| JPH0823993A (ja) | ウリジン二リン酸ｎ−アセチルグルコサミンの製造方法 | |
| US4859591A (en) | Transamination process for producing amino acids | |
| KR0146493B1 (ko) | 발효법에 의한 l-알라닌의 제조 방법 | |
| US4906572A (en) | Method of culturing amino acid racemase-producing microorganism of genus pseudomonas | |
| EP0138526B1 (en) | Method of producing l-phenylalanine by fermentation, and bacteria therefor | |
| JP3006907B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アラニンの製造法 | |
| US5478733A (en) | Process for producing L-alanine by fermentation with arthrobacter | |
| HU215248B (hu) | Eljárás L-lizin előállítására | |
| US3674639A (en) | Method of producing l-glutamic acid by fermentation |