NO834433L - Fremgangsmaate for fremstilling av 3`,5`-diarabinosider - Google Patents

Fremgangsmaate for fremstilling av 3`,5`-diarabinosider

Info

Publication number
NO834433L
NO834433L NO834433A NO834433A NO834433L NO 834433 L NO834433 L NO 834433L NO 834433 A NO834433 A NO 834433A NO 834433 A NO834433 A NO 834433A NO 834433 L NO834433 L NO 834433L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
ara
volume
mmol
solution
evaporated
Prior art date
Application number
NO834433A
Other languages
English (en)
Inventor
Jean-Louis Barascut
Jean-Louis Imbach
Jean De Rudder
Original Assignee
Synthelabo
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from FR8220274A external-priority patent/FR2537144A1/fr
Application filed by Synthelabo filed Critical Synthelabo
Publication of NO834433L publication Critical patent/NO834433L/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C07H19/207—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids the phosphoric or polyphosphoric acids being esterified by a further hydroxylic compound, e.g. flavine adenine dinucleotide or nicotinamide-adenine dinucleotide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av monofosfat-dinukleosider med formel Ara A-p-Ara C, Ara C-p-Ara A og Ara A-p-Ara-A
hvori
Ara A er 9-3-D-arabinofuranosyl-adenin,
Ara C er 1-3-D-arabinofuranosyl-cytosin, og
p er monofosfat-gruppen og
det karakteristiske ved oppfinnelsen er at
1) man fremstiller syntonene adenin og cytosin som bærer en fri OH-gruppe i 3'-stillingen, 2) man fremstiller syntonene adenin og cytosin som bærer en fri OH-gruppe ved 5'-stillingen, 3) man gjennomfører syntesen av monofosfat-dinukleosidene ved - fosforylering av syntonet som bærer en fri OH-gruppe i 3'-stillingen ved hjelp av et bifunksjonelt fosforyleringsmiddel ,
- kondensering av den oppnådde diester med det
valgte nuklesid ved hjelp av et kondensasjonsmiddel, og - avbeskyttelse av de oppnådde forbindelser for å oppnå de ønskede diir.erer i form av trietylammoniumsaltene.
Disse og andre trekk ved oppfinnelsen fremgår av patentkravene.
Nukleosidene av arabinose eller arabinosidene, som har analoge strukturer ribosidene, har interessante antivirale og antitumorale egenskaper som tillater deres anvendelse innen terapien for visse av forbindelsene, som 9-3-D-arabinofuranosyl-adenin (adenin-arabinosid) og 1-3-D-arabinofuranosyl-cytosin (cytosin-arabinosid).
En ulempe som opptrer ved anvendelsen av terapeutiske former av disse substanser skyldes deres dårlige oppløselighet (omtrent 1 del pr.1000 deler ved vanlig temperatur) som nødvendiggjør anvendelse av løsningsmiddel som DMSO i topiske preparater eller perfusjon av betraktelige væskevolum når man går frem på vanlig måte.
Man har forsøkt å avhjelpe denne vanskelighet ved i stedet for nukleosidene å anvende deres 5'-monofosfater som er godt oppløselige. Disse molekyler bærer imidlertid to negative elektriske ladninger som bare vanskelig trenger gjennom cellene og deres antivirale og antitumorale virkning er derfor meget lav. I motsetning hertil har dinukleotidene med generell formel arabinosid-3',5'-fosfat-arabinosid bare en enkel elektrisk ladning for to nukleosid-molekyler og erfaringen viser at deres biologiske aktivitet er lik med nukleosid-bestanddelene. Deres oppløselighet er tilfredsstillende.
Det er tidligere vist (Brivat de Garilhe og De Rudder Progr. Antimicr. & Anticancer Chemother., bind II,
sidene 180-184, Tokyo 1970) at det mellom adenin-arabinosid og cytcsin-arabinosid eksisterer en synergistisk aktivitet vist spesielt overfor askitisk Ehrlich-tumor i mus.
Formålet for den foreliggende oppfinnelse er ut fra de tidligere påvisninger å fremstille molekyler av 3',5'-diarabinosider hvor oppløseligheten er tilfredsstillende og som fremviser en meget god aktivitet.
Fremgangsmåten for fremstilling av forbindelsene fremgår av etterfølgende reaksjonsskjemaer: I det første trinn fremstilles de to utgangs-syntoner som bærer en fri OH-gruppe i 3'-stiIlingen (fig. 1 og 2).
I et annet trinn fremstilles de to utgangssyntoner som bærer en fri OH-gruppe i 5'-stillingen (fig. 3 og 4).
Og til slutt fremstilles i henhold til oppfinnelsen monofosfat-dinukleotidene Ara A-p-Ara C, Ara C-p-Ara A
og Ara A-p-Ara A (reaksjonsskjemaer 5, 6, 7) ved metoden med fosforsyretriestere som krever to trinn: det første trinn består i en fosforylering av syntonet som bærer en fri OH-gruppe i 3'-stillingen
(fig. 5)
det annet trinn består i en kondensering av den oppnådde diester og nukleosidet ved hjelp av et kondensasjonsmiddel som f.eks. 1-mesitylensulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazol (MSNT) (fig. 6) og deretter avbeskyttes de til slutt oppnådde dimerer i form av trietylammoniumsaltet (fig. 7) .
Fosforyleringen av syntonet som bærer en fri OH-gruppe i 3'-stillingen kan gjennomføres ved hjelp av et bifunksjonelt fosforyleringsmiddel som o-klorfenyl-fosfor-dikloridat.
Reaksjonen av nukleosid-derivatene beskyttet i 2'-stillingen og 5'-stillingen (6) og (12) med et overskudd av 0- klorf enyl-f osf ordi-(L, 2 , 4-triazolid) (19) fremstilt in situ i pyridin fører etter behandling med trietylamin til fosforsyrediestere (20a) og (20b). De siste isoleres i form av trietylammoniumsaltet etter ekstrahering med kloroform og utfelling i petroleter (fig. 5).
I det annet trinn er det valgte kondensasjonsmiddel 1- mesitylen-sulfonyl-3-nitro-l,2,4-triazol (MSNT) (13).
En oppløsning i pyridin av fosfodiester-nukleosidene (20a) eller (20b) og syntonene (15) eller (18) behandles med 2,5 til 3 ekvivalenter MSNT i 45 min. ved vanlig temperatur. Den rå reaksjonsblanding helles deretter ut i en vandig mettet oppløsning av natriumhydrogenkarbonat og ekstraheres med kloroform (fig. 6) .
De tre monofosfatdinukleosider (21a), (21b) og (21c) oppnås etter rensing over silikagel-kolonne og utfelling fra petroleter. Avbeskyttelsen av forbindelsen (21a), (21b) og (21c) gjennomføres på følgende måte: o-klorfenyl-gruppene avblokkeres med en oppløsning av 4-nitro-benzaldoksim (0,3M) og trietylamin (0,3M) i en blanding dioksan/vann (1/1, volum/volum) i 24 timer ved 35°C.
benzoyl-gruppene fjernes ved hjelp av ammoniakk ved 50°C i 24 timer.
monometoksytrityl-gruppen hydrolyseres med 80% eddiksyre i 1 time 15 min.
Etter ekstraksjon renses dimerene (22a), (22b) og (22c)
på en kolonne med DEAE-Sephadex A2 5 og renses deretter på nytt ved hjelp av halvpreparativ HPLC på kolonne C18 i invers fase med en gradient vann/acetonitril (fig. 7).
Forbindelsene oppnås i form av sine trietylammoniumsalter.
Reaksjonsskjemaene er angitt i det følgende.
De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.
Analyser og spektra UV, IR og RMN bekrefter strukturen av forbindelsene.
Eksempel 1:
Synton Ara-adenocin som bærer en fri OH-gruppe i 3'-stillingen.
1.1 N 3-benzoyl-D-9-arabinofuranosyl-adenin (2)
Til en suspensjon av 1 g (3,74 mmol) arabinosyl-adenin
(1) i 30 ml vannfritt pyridin tilsettes dråpevis under avkjøling 18 ml (150 mmol) benzoylklorid. Etter 36 timers omrøring ved vanlig temperatur tilsettes 100 ml isblandet vann. Reaksjonsblandingen ekstraheres med kloroform (4 x 60 ml).
Den organiske fase vaskes med vandig natriumhydrogenkarbonat-oppløsning (5 x 70 ml) og deretter med vann (5 x 50 ml), tørkes over natriumsulfat, filtreres,
inndampes og avdampes deretter sammen med toluen (2 x 50 ml) .
Etter rensing på silikagel-kolonne (elueringsmiddel CHCl^) oppløses de oppnådde nukleosider i 25 ml pyridin. Denne oppløsning tilsettes til 40 ml NaOH (2N) og omrøres deretter i 20 min. 80 ml harpiks "Dowex 50 - X2(pyridinium)
(pH = 6-7) tilsettes deretter. Harpiksen frafiltreres, vaskes med vann (3 x 50 ml). Den vandige fase ekstraheres med eter (6 x 100 ml), inndampes, det dannede bunnfall filtreres og krystalliseres deretter fra vann. Man oppnår forbindelsen (2).
Smp. = 145 - 147°C (vann)
1.2 3',5'-TIPDSi-N<6>3-benzoyl-D-9-arabinofuranosyl-adenin (3)
Til 1,98 g (6,71 mmol) TIPDSiCl2tilsettes 1,34 g
(19,66 mmol) imidazol, 1,66 g (4,47 mmol) av forbindelsen (2) og 50 ml vannfritt DMF.
Etter 1 times omrøring ved vanlig temperatur tilsettes
50 ml vann. Blandingen inndampes under redusert trykk. Resten oppløses på nytt i 100 ml vann og ekstraheres deretter med kloroform (3 x 80 ml). Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres og inndampes til tørrhet. Etter rensing på silikagel-kolonne (elueringsmiddel CHC^/AcOEt, 50/50, volum/volum) oppnås forbindelsen (3) i form av et hvitt skum.
1.3 3' ,5'-TIPDSi-2' ,N 3-dibenzoyl-D-9-arabinofuranosyl-adenin (4)
I 3 timer ved vanlig temperatur omrøres en oppløsning inneholdende 2,1 g (3,42 mmol) av forbindelsen (3)
0,851 g (3,76 mmol) benzosyreanhydrid og 0,138 g (1,14 mmol) 4-dimetylamino-pyridin i 15 ml vannfritt pyridin.
Etter avdamping under redusert trykk av pyridinet
oppløses resten i 100 ml kloroform. Den resulterende oppløsning vaskes i rekkefølge med en mettet natriumhydrogenkarbonat-oppløsning og med vann (2 x 100 ml). Den organiske fase tørkes over natriumsulfat, filtreres og inndampes under redusert trykk.
Etter kromatografering på silikagel-kolonne (eluerings-middl: CHCl3/eter, 98/2, 95/5, 90/10, volum/volum) oppnås forbindelsen (4) i form av et hvitt skum.
1.4 2',N 3-di-benzoyl-D-9-arabinofuranosyl-adenin (5)
Man oppløser 100 mg (0,139 mmol) av forbindelsen (4) i
6 ml av en oppløsning av (0,5M) av tetrabutylammonium-fluorid i tetrahydrofuran. Etter 45 min. omrøring ved vanlig temperatur inndampes oppløsningen under redusert trykk. Resten kromatograferes på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH, 99/1, 98/2, volum/volum). Forbindelsen (5) oppnås etter utfelling fra kloroform.
Smp. = 124 - 126°C (CHC13) 1.5 5'-monometoksytrityl-2',N^3-dibenzoyl-D-9-arabinofuranosyl- adenin (6)
En oppløsning inneholdende 0,900 g (1,89 mmol) av forbindelsen (5) og 1,10 g (3,78 mmol) av monometoksytritylklorid i 20 ml vannfritt pyridin omrøres i 22 timer ved vanlig temperatur i fravær av fuktighet og lys. Etter tilsetning av 150 ml isblandet vann ekstraheres reaksjonsblandingen med kloroform (3 x 70 ml). Den organiske fase tørkes over natriumsulfat, filtreres, inndampes til tørrhet, inndampes deretter sammen med toluen (2 x 30 ml). Resten kromatograferes på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/Et3N 100/0,1, volum/volum). Produktet (6) oppnås etter utfelling fra petroleter.
Eksempel 2:
Synton-Ara-cytidin som bærer en fri OG-gruppe i 3-stillingen.
2.1 N 4 3- benzoyl- Q- 1- arabinofuranosyl- cytosin (8)
Til en suspensjon av 500 mg (1,79 mmol) av hydrokloridet av Ara-C i 5 ml vannfri metanol tilsettes 10 ml (1,79 mmol natrium ) av natriummetylat.
Etter 15 min. omrøring ved vanlig temperatur inndampes resten, det avdampes sammen med etanol 100 og deretter med vannfritt pyridin. Til det hvite oppnådde bunnfall tilsettes 10 ml pyridin og 8 ml benzoylklorid ( ved 0°C). Etter omrøring over natten helles blandingen ut på 50 ml isblandet vann og ekstraheres med kloroform (3 x 50 ml).
Den organiske fase vaskes med vann (3 x 30 ml), med natriumhydrogenkarbonat-oppløsning, filtreres og inndampes med toluen (2 x 10 ml). Reaksjonsblandingen renses på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCI3)• Det oppnådde skum oppløses i 22 ml pyridin og tilsettes deretter 11 ml
NaOH (2N) .
Etter 20 min. omrøring nøytraliseres oppløsningen med harpiks Dowex-50 W X2(pyridinium). Harpiksen frafiltreres, vaskes med vann (3 x 80 ml) og den vandige fase ekstraheres med eter (5 x 100 ml) og inndampes deretter under redusert trykk. Produktet (8) krystalliseres fra metanol.
Smp. = 186 - 190°C (metanol)
2.2 3',5'-TIPDSi-N<4>3-benzoyl-D-l-arabinofuranosyl-
cytosin (9)
200 mg (0,82 mmol) av forbindelsen (8) oppløses i 4 ml pyridin og til denne oppløsning tilsettes 0,3 ml (0,97 mmol) TIPDSiCl,,. Etter 1 times omrøring ved vanlig temperatur inndampes blandingen til tørrhet. Den oppnådde rest oppløses på nytt i 10 ml kloroform, vaskes med 20 ml vann og ekstraheres med (3 x 20 ml) kloroform. De organiske faser samles, tørkes over magnesiumsulfat, filtreres og inndampes under redusert trykk. Den resulterende olje fraksjoneres på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl^,
CHCl^/MeOH, 99/1, volum/volum). Man oppnår forbindelsen (9) .
2.3 3',5'-TIPDSi-2',N 43-dibenzoyl-D-1-arabinofuranosyl-cytosin (10)
En oppløsning av 250 mg (0,42 mmol) av forbindelsen (9),
105 mg (0,46 mmol) benzosyreanhydrid og 17 mg (0,14 mmol) 4-dimetylaminopyridin i 2 ml vannfritt pyridin omrøres ved vanlig temperatur i 2 timer. Reaksjonsblandingen helles ut over 10 ml vann og ekstraheres med kloroform (3 x 10 ml). Den organiske fase vaskes med vann (3 x 10 ml) tørkes over magnesiumsulfat, filtreres, inndampes og avdampes deretter med toluen (2x5 ml). Resten fraksjoneres på silikagel-kolonne (elueringsmiddel:CHCl3/MeOH, 99,5/0,5, volum/volum.
Forbindelsen (10) oppnås i form av et hvitt skum.
2.4 2',N 43-dibenzoyl-D-l-arabinofuranosyl-cytosin (11)
Man oppløser 245 mg (0,35 mmol) av forbindelsen (10) i
6.5 ml av en oppløsning (0,5M) av tetrabutylammonium-fluorid i vannfritt tetrahydrofuran. Etter 45 min. omrøring ved vanlig temperatur innfampes oppløsningen under redusert trykk. Resten kromatograferes på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH, 98/2, volum/volum). Man oppnår forbindelsen (11).
Smp. = 219 - 222°C (kloroform).
2.5 5'-monometoksytrityl-2',N 43-dibenzoyl-D-1-arabinofuranosyl- cytosin (12)
Man omrører en oppløsning av 140 mg (0,31 mmol) av den vannfri forbindelse (11) og 184 mg (0,62 mmol) monometoksytrityl-klorid i 2 ml vannfritt pyridin i 22 timer ved vanlig temperatur under utelukkelse av fuktighet og lys.
Etter tilsetning av 10 ml isblandet vann ekstraheres reaksjonsblandingen med kloroform (3 x 10 ml). Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres, inndampes og medavdampes med toluen (2 x 5 ml). Den oppnådde olje kromatograferes på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/Et3N/, 99/1/0,1, volum/volum/ volum. Man oppnår forbindelsen (12).
Eksempel 3:
Synton Ara-adenosin som bærer en fri OH-gruppe i 5'-stillingen.
3.1 5'-monometoksytrityl-N<6>0-benzoyl-D-arabinofuranosyl-adenin (13)
Man omrører en oppløsning av 400 mg (1,08 mmol) av forbindelsen (12) og 650 mg (2,16 mmol) monometoksytritylklorid i 7 ml vannfri pyridin ved vanlig temperatur i 22 timer under utelukkelse av fuktighet og lys. Etter tilsetning av 25 ml isblandet vann ekstraheres reaksjonsblandingen med kloroform (3 x 15 ml). Den organiske fase tørkes over natriumsulfat, filtreres, inndampes og medavdampes med toluen (2 x 10 ml).
Resten kromatograferes på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/Et3N, 98/1/1, volum/volum/volum). Man oppnår forbindelsen (13).
3.2 5'-monometoksytrityl-2',3',3-tribenzoyl-D-9- arabinofuranosyl- adenin (14)
Man omrører en oppløsning av 200 mg (0,31 mmol) av forbindelsen (13), 146 mg (0,69 mmol) benzosyreanhydrid og 13 mg (0,10 mmol) 4-dimetylamino-pyridin i 2 ml vannfritt pyridin ved vanlig temperatur i 1 time og 15 min. Etter tilsetning av 30 ml vandig natriumhydrogenkarbonatløsning ekstraheres oppløsningen med kloroform (3 x 20 ml). Den organiske fase vaskes med vann (3 x 15 ml), tørkes over natriumsulfat, filtreres, inndampes, saminndampes med toluen (2 x 10 ml). Resten renses på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/heksan/Et3N, 80/19/1, volum/volum/ volum.
Forbindelsen (14) oppnås etter utfelling fra heksan.
3.3 2', 3' ,N6(3-tribenzoyl-D-9-arabinofuranosyl-adenin (15)
Man oppløser 200 mg (0,24 mmol) av forbindelsen (14) i
9 ml av en blanding kloroform/metanol (7/3, volum/volum) inneholdende 2% benzensulfonsyre. Reaksjonsblandingen omrøres i 20 min. ved 0°C. Man tilsetter 10 ml vandig natriumhydrogenkarbonatløsning. Blandingen ekstraheres med kloroform (3 x 8 ml). Den organiske fase vaskes med 10 ml vannfri hydrogenkarbonatoppløsning og deretter med vann (3 x 10 ml), tørkes over natriumsulfat, filtreres og inndampes under redusert trykk. Resten renses på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl^/MeOH, 99/1, volum/volum).
Produktet (15) oppnås etter krystallisering fra etanol.
Smp.=135 - 137°C (etanol).
Eksempel 4:
Synton-Ara-cytidin som bærer en fri OH-gruppe i 5'-stillingen. 4.1 5'3-monometoksytrityl-D-l-arabinofuranosyl-cytosin (16) Man omrører blandingen inneholdende 100 mg (0,41 mmol) Ara-C(7) og 186 mg (0,61 mmol) monometoksytritylklorid i 3 ml vannfritt pyridin ved vanlig temperatur i 10 timer under utelukkelse av fuktighet og lys. Etter tilsetning av
10 ml isblandet vann ekstraheres reaksjonsblandingen med
(3 x 10 ml) kloroform. Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres, inndampes, samavdampes med toluen (2 x 10 ml). Resten kromatograferes på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/Et3N, 95/5/0,1, volum/volum/volum) som gir forbindelsen (16).
4.2 5'-monometoksytrityl-2',3',N 43-tribenzoyl-D-1- arabinofuranosyl- cytosin (17)
En oppløsning inneholdende 415 mg (0,82 mmol) av forbindelse (16), 615 mg (2,72 mmol) benzosyreanhydrid, 34 mg (0,27 mmol) 4-dimetylamino-pyridin i 3 ml pyridin omrøres over natten ved vanlig temperatur. 20 ml vann tilsettes. Den resulterende oppløsning ekstraheres med kloroform (3 x 20 ml). Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres, inndampes og samavdampes med toluen. Resten kromatograferes på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl^/heksan/Et^N, 79/20/1, volum/volum/volum). Man oppnår forbindelsen (17).
4.3 2',3',N 43-tribenzoyl-D-1-arabinofuranosyl-cytosin (18)
Man oppløser 672 mg (0,82 mmol) av forbindelsen (17) i
20 ml av en blanding kloroform/metanol (7/3, volum/volum) inneholdende 2% benzensulfonsyre, reaksjonsblandingen omrøres i 20 min. ved 0°C. 20 ml vandig natriumhydrogen-karbonatløsning tilsettes, blandingen ekstraheres med kloroform (3 x 20 ml). Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres, inndampes under redusert trykk. Resten fraksjoneres på silikagelkolonne (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH, 98,5/1,9, volum/volum). Produktet (18) oppnås etter krystallisering fra etanol 95%.
Smp. = 169 - 171°C (etanol 95).
Eksempel 5: trietylammonium-3'-o-klorfenylfosfat-(5'-monometoksytrityl-2 ',N6-dibenzoyl-Ara A) (20 a).
Man fremstiller in situ en oppløsning av o-klor-fenyl-fosfordi(1,2,4-triazolid) (12) i 1 ml vannfritt pyridin ved å gå ut fra 100 mg (0,408 mmol) o-klorfenylfosfordikloridat og 162 mg (2,347 mmol) 1,2,4-triazol. Etter 20 min. omrøring ved vanlig temperatur tilsettes 80 mg (0,107 mmol) av forbindelsen (6). Omrøringen fortsettes i 20 min. Man tilsetter så en oppløsning sammensatt av 0,75 ml trietylamin, 0,5 ml vann og 0,5 ml pyridin. Reaksjonen stanses 10 min. deretter under tilsetning av 8 ml vandig natriumhydrogen-karbonatløsning. Blandingen ekstraheres med kloroform
(3 x 8 ml) .
Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres, inndampes, saminndampes med toluen (2 x 5 ml).
Etter rensing på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/Et3N, 98/2/0,1 volum/volum/volum) oppnås forbindelsen (20 a) etter utfelling fra petroleter.
Rf = 0,11 (elueringsmiddel CHCl3/MeOH, 90/10, volum/volum)
U.V.:m^ks(etanol 95): 278 mm (e = 20.700) 232 nm
(e = 33.500)
Fullstendig beskyttet dimer- Ara- Ap- Ara C( 21 a)
Til en oppløsning av 601 mg (0,578 mmol) av fosfordiesteren (20 a) og 305 mg (0,549 mmol) 2' , 3' , N4-tribenzoyl-Ara-
C (18) i 2,9 ml pyridin tilsettes 513 mg (1,735 mmol) mesi-tylen-l-sulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazol. Reaksjonen stanses etter 45 min. omrøring ved vanlig temperatur ved tilsetning av 0,8 ml natriumhydrogenkarbonatløsning. Etter 10 min. uthelles den oppnådde oppløsning på 20 ml vandig natrium-hydrogenkarbonatbppløsning og ekstraheres deretter med kloroform (4 x 20 ml). Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres, inndampes og saminndampes med toluen (2 x 10 ml). Resten fraksjoneres på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/Et3N, 100/1, volum/volum). Dimeren (21 a) oppnås etter utfelling av petroleter.
Rf = 0,20; 0,34 to diastereoisomerer (elueringsmiddel:
CHCl3/MeOH; 97/3; volum/volum).
U.V.:m^ks(etanol 95): 269 nm (e=11.00) 234 nm(e-20.000).
Eksempel 6: trietylammonium-3'-o-klorfenylfosfat-(5'-monometoksytrityl-2',N<4>-dibenzoyl-Ara C) (20 b).
Man fremstiller in situ en oppløsning av o-klorfenyl-fosfordi-(1,2,4-triazolid) (12) i 2 ml vannfritt pyridin fra 272 mg (1,11 mmol) o-klorfenylfosforodikloridat,
377 mg (5,54 mmol) 1,2,4-triazol. Etter 20 min. omrøring ved vanlig temperatur tilsettes 160 mg (0,22 mmol) av forbindelsen (12). Omrøringen fortsettes deretter i 20 min. Man tilsetter så en oppløsning bestående av 0,5 ml trietylamin, 0,3 ml vann og 0,3 ml pyridin. Reaksjonen stanses etter 10 min. Reaksjonsblandingen behandles ved samme arbeidsmåte som ved syntesen av (20 a). Resten kromatograferes på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/Et3N, 97/3/0,1, volum/volum/volum).
Forbindelsen (20 b) oppnås etter utfelling fra petroleter.
Rf = 0,2 3 (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH, 90/10, volum/volum)
U.V. :m_^s(etanol 95): 303 nm (e = 12. 300)
261 nm (e = 31.700)
232 nm (e = 54.100)
Fullstendig beskyttet dimer- Ara C- p- Ara A ( 21 b)
Til en oppløsning av 200 mg (0,197 mmol) fosfodiester
(20 b) og 110 mg (0,191 mmol) 2',3'-N<6->tribenzoyl-Ara- A (15) i 1 ml pyridin tilsettes 175 mg (0,591 mmol) mesitylen-1-sulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazol. Reaksj onen stanses etter 45 min. omrøring ved vanlig temperatur og behandles som tidligere angitt. Den oppnådde rest renses på silikagel-kolonne (elueringsmiddel benzen/MeOH/Et3N, 99/0,9, 0,1, volum/volum/volum). Dimeren (21 b) oppnås etter utfelling fra petroleter.
Rf = 0,20. To diastereoisomerer (elueringsmiddel:
CHCl3/MeOH, 9 7/3, volum/volum)
U.V.: ^ (etanol 95): 269 nm (e = 9.700)
maks
232 nm (e =17.600)
Eksempel 7: Trietylammonium-3'-o-klorfenylfosfat-(5'-monometoksytrityl-2',N -dibenzoyl-Ara-A) (20 c).
Man fremstiller in situ en oppløsning av o-klorfenyl-fosfordi-(1,2,4-triazolid) (12) i 1 ml vannfritt pyridin ved å gå ut fra 100 mg (0,408 mmol) o-klorfenylfosfordikloridat og 162 mg (2,347 mmol) 1,2,4-triazol. Etter 20 min. omrøring ved vanlig temperatur tilsettes 80 mg (0,107 mmol) av forbindelsen (6). Omrøringen fortsettes i 20 min. Man tilsetter deretter en oppløsning sammensatt av 0,75 ml trietylamin 0,5 ml vann og 0,5 ml pyridin. Reaksjonen stanses etter 10 min. ved tilsetning av 8 ml vandig natriumhydrogenkarbonatløsning. Blandingen ekstraheres med kloroform (3 x 8 ml).
Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres, inndampes, saminndampes med toluen (2x5 ml).
Etter rensing på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/Et3N, 98/2/0,1, volum/volum/volum) oppnås forbindelsen (20 a) etter utfelling fra petroleter.
Rf = 0,11 (elueringsmiddel CHCl3/MeOH, 90/10, volum/volum)
U.V.:m^ks(etanol 95): 278 nm (e= 20.700)
232 nm (e= 33.500)
Fullstendig beskyttet dimer- Ara- A- p- Ara- A ( 21 a)
Til en oppløsning av 106 mg (0,103 mmol) av fosfodiesteren (20 a) og 58 mg (0,100 mmol) 2' , 3' ,N6-tribenzoyl-Ara-A (15)
i 0,5 ml pyridin tilsettes 91 mg (0,307 mmol) mesitylen-1-sulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazol. Reaksjonen stanses etter 45 min. omrøring ved vanlig temperatur ved tilsetning av 0,2 ml natrium hydrogenkarbonatløsning. Etter 10 min. uthelles den oppnådde oppløsning i 12 ml vandig natrium-hydrogenkarbonatløsning og ekstraheres deretter med kloroform (4 x 10 ml). Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres, inndampes, saminndampes med toluen (2x5 ml). Resten fraksjoneres på silikagel-kolonne (elueringsmiddel: CHCl3/MeOH/pyridin, 99/1/0,1, volum/volum/volum). Dimeren (21 a) oppnås etter utfelling fra petroleter.
Rf = 0,57 - to diastereoisomerer (elueringsmiddel: CHCl^/MeOH
95/5, volum/volum).
Eksempel 8:
Avbeskyttelse og rensing av dimerer Ara-A-p-Ara C (21 a)
og Ara C-p-Ara-A (21 b).
a) Avbeskyttelse.
En oppløsning av 0,020 mmol fullstendig beskyttet oligo-nukleotid (21 a) eller (21 b) av 0,3 M 4-nitro-syn-benzaldoksim og 0,3 M trietylamin, i en blanding av dioksan - vann (4 ml, 1/1, volum/volum) omrøres i 24 timer ved 30°C. Etter inndamping ved redusert trykk tilsettes til den oppnådde bløte gummi 5,5 ml konsentrert ammoniakk ( 20%). Denne oppløsning oppvarmes i 24 timer ved 50°C i et forseglet rør.
Den rå reaksjonsblandingen nøytraliseres med harpiks
Dowex 50 W-X2(pyridinium-form). Harpiksen frafiltreres, vaskes med vann (3 x 20 ml) og EtOH (3 x 20 ml). Vann - etanolfasen inndampes til tørrhet. Resten oppløses i 40 ml vann. Den vandige fase vaskes med eter (10 x 30 ml) og inndampes under redusert trykk. Til den oppnådde rest tilsettes 4 ml vandig 80% eddiksyre. Den oppnådde oppløsning omrøres ved vanlig temperatur i 1 time og 15 min. og inndampes, saminndampes med vann til nøytral pH og vaskes i rekkefølge med kloroform (15 x 30 ml) og etyleter (5 x 20 ml).
Den vandige fase inndampes under redusert trykk,
b) Rensing.
Resten renses på kolonne med DEAE Sephadex A-2 5 (lineær
_3
gradient 10 M til 0,3 M, vandig trietylammonium-hydrogen-karbonatbuffer, pH = 7,5).
Fraksjonene inneholdende dimeren (21) forenes igjen og inndampes. Det oppnådde produkt renses på nytt ved hjelp av halvpreparativ HPLC. Denne gjennomføres i kolonne C"18med en vanngradient, CH^CN (5%) i løpet av 13 min.
Fraksjonene inneholdende dimeren (21) inndampes til tørrhet, saminndampes med vann og frysetørkes.
Man oppnår da trietylammoniumsaltene (22 a) og (22 b) av dimerene Ara-A-p-Ara-C og Ara-C-p-Ara-A.
Eksempel 9:
Avbeskyttelse og rensing av dimeren Ara-A-p-Ara-A (21 c).
1 g av blandingen (dimer 21 c + forurensning) saminndampes med vannfritt pyridin (3 x 20 ml) og oppløses i 5 ml pyridin. 2 ml benzoylklorid tilsettes. Etter 24 timers omrøring tilsettes 100 ml vann, blandingen ekstraheres med kloroform (5 x 20 ml). Den organiske fase vaskes med vann (5 x 10 ml), med vandig natriumhydrogenkarbonat-løsning (5 x 10 ml), med vann (5 x 10 ml), tørkes over magnesiumsulfat, filtreres, inndampes, saminndampes med toluen, og med vannfri metanol. Resten oppløses i 15 ml metanol og tilsettes 6 ml (0,92 M) natriummetylat. Etter 4 timersomrøring nøytraliseres med harpiks Dowex 50 W-X2(pyridiniumform), harpiksen frafiltreres, vaskes med vann
(3 x 50 ml). Oppløsningen inndampes under redusert trykk. Den oppnådde bløte gummi oppløseliggjøres i 20 ml vann, vaskes med kloroform (15 x 20 ml) og med eter (10 x 20 ml).
Etter rensing på DEAE-Sephadex A-25 med lineær gradient
_3
(10 M til 0,3M) med trietylammoniumhydrogenkarbonat (pH = 7,5) renses fraksjonene inneholdende dimeren (21 a)
på nytt ved hjelp av halv-preparativ HPLC på C^g kolonne med en lineær gradient (CH^CN 4% til 20%, 15 min., mengde 10 ml/min.), inndampes. saminndampes med vann, og fryse-tørkes. Man oppnår da trietylammoniumsaltet (22 c) av dimeren Ara-A-p-Ara A.
De ved oppfinnelsen fremstillbare forbindelser ble underkastet farmakologiske forsøk som viser at de er interessante på det antitumorale område. Virkningen av forbindelsene på utviklingen av Erlichs askites-tumor i mus ble iakttatt.
Prøvene ble foretatt med grupper på 5 eller 6 mus Swiss
med vekt 12 til 15 g. Hvert dyr mottok 2 x 10 maligne celler ved peritoneal tilførsel. Behandlingen begynte 16 timer etter inokkuleringen og besto i to injeksjoner pr. døgn av 0,75 ml av en oppløsning av dinukleotidet på 2 mg/ml i bukhinnen, dvs. 3 mg pr. dyr pr. dag eller 200 mg/kg. Varigheten av behandlingen er 4 døgn.
Dinukleotidene fremstilt ved oppfinnelsen ble testet på angitt måte og resultatene er gitt i de etterfølgende tabeller.
De ved oppfinnelsen fremstillbare forbindelser har antitumorale egenskaper og kan anvendes for behandling av forskjellige lidelser som visse virale affeksjoner bevirkes av ADV-virus: . Herpes i alle lokaliseringer, herpes 1 og herpes 2,
. Varicella
. Zona
. Cytomegalia
. Smittsom mononukleose, Burkitt-tumor (Epstein-Barr-virus)
. Hepatit B
. Sykdommer i gruppen Variola-vaksine
. Adenovirus
. Retrovirus
visse maligne affektasjoner som er sensible for Ara A (kroniske myeloide leukemier med akutt forløp) eller Ara C (akutt myeoloblast-leukose).
Farmasøytiske preparater med forbindelsene kan være flytende eller faste og foreligger i form av oppløsninger, salver, dispersjoner, pomader.
Det aktive prinsipp kan innlemmes i preparatene og tilsetningsmidler kan utgjøres av vanlige oppløsnings-midler, stabiliseringsmidler, mykningsmidler, vaseliner, lanoliner, polyetylenglykoler, fettsyreestere av sorbitan som eventuelt er polyhydroksyetylert.
Konsentrasjonen av aktivt prinsipp i farmasøytiske preparater varieres alt etter tilfellet og tilførselsmåten og kan f.eks. være mellom 0,1% og 5%.

Claims (4)

1. Fremgamgsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive monofosfat-dinukleosider med formel Ara A-p-Ara C, Ara C-p-Ara A og Ara A-p-Ara A hvori Ara A er 9-3-D-arabinofuranosyl-adenin Ara C er 1-3-D-arabinofuranosyl-cytosin, og p er monofosfat-gruppen, karakterisert vedat
1) man fremstilles syntonene adenin og cytosin som bærer en fri OH-gruppe i 3'-stillingen,
2) man fremstiller syntonene adenin og cytosin som bærer en fri OH-gruppe i 5'-stillingen,
3) man gjennomfører syntesen av monofosfat-dinukleosidene ved - fosfcrylering av syntonet som bærer en fri OH-gruppe i 3'-stillingen ved hjelp av et bifunksjonelt fosforyleringsmiddel, - man kondenserer den oppnådde diester med det valgte nukleosid ved hjelp av et kondensasjonsmiddel, og - man avbeskytter de oppnådde forbindelser for å komme frem til de ønskede dimerer i form av trietylammoniumsaltene.
2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1,karakterisert vedat det som bifunksjonelt fosforyleringsmiddel anvendes o-klor-fenyl-fosfor-dikloridat.
3. Fremgangsmåte som angitt i krav 1,karakterisert vedat det som kondensasjonsmiddel anvendes mesitylen-1-sulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazol (MSNT).
4. Fremgangsmåte som angitt i krav 1,karakterisert vedat man avbeskytter o-klor-fenyl-gruppene med en oppløsning av 4-nitrobenzal-doksim og trietylamin, man fjerner benzoyl-gruppene med ammoniakk, og man hydrolyserer monometoksytrityl-gruppen ved hjelp av eddiksyre.
NO834433A 1982-12-03 1983-12-02 Fremgangsmaate for fremstilling av 3`,5`-diarabinosider NO834433L (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR8220274A FR2537144A1 (fr) 1982-12-03 1982-12-03 3',5'-diarabinosides, leur preparation et leur application en therapeutique
FR8304123A FR2542744B2 (fr) 1982-12-03 1983-03-14 3',5'-diarabinosides, leur preparation et leur application en therapeutique

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO834433L true NO834433L (no) 1984-06-04

Family

ID=26223174

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO834433A NO834433L (no) 1982-12-03 1983-12-02 Fremgangsmaate for fremstilling av 3`,5`-diarabinosider

Country Status (13)

Country Link
EP (1) EP0121635A1 (no)
JP (1) JPS59112998A (no)
KR (1) KR840007090A (no)
AU (1) AU2192783A (no)
DK (1) DK555683A (no)
ES (1) ES527737A0 (no)
FI (1) FI834429A (no)
FR (1) FR2542744B2 (no)
GR (1) GR79109B (no)
IL (1) IL70361A0 (no)
MA (1) MA19965A1 (no)
NO (1) NO834433L (no)
PT (1) PT77767B (no)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5879700A (en) * 1991-10-15 1999-03-09 Hostetler; Karl Y. Nucleoside analogue phosphates for topical use
US6015573A (en) * 1993-05-12 2000-01-18 Hostetler; Karl Y. Nucleoside phosphate therapy for viral infection
WO1994026273A1 (en) * 1993-05-12 1994-11-24 Hostetler Karl Y Acyclovir derivatives for topical use
US6025335A (en) * 1995-09-21 2000-02-15 Lipitek International, Inc. L-Nucleoside Dimer Compounds and therapeutic uses
GB201317166D0 (en) * 2013-09-27 2013-11-06 Astex Therapeutics Ltd Pharmaceutical compounds

Also Published As

Publication number Publication date
DK555683D0 (da) 1983-12-02
FI834429A (fi) 1984-06-04
AU2192783A (en) 1984-06-07
IL70361A0 (en) 1984-03-30
EP0121635A1 (fr) 1984-10-17
PT77767B (fr) 1986-05-30
GR79109B (no) 1984-10-02
DK555683A (da) 1984-06-04
FI834429A0 (fi) 1983-12-02
FR2542744A2 (fr) 1984-09-21
JPS59112998A (ja) 1984-06-29
FR2542744B2 (fr) 1985-06-14
ES8406504A1 (es) 1984-08-01
KR840007090A (ko) 1984-12-05
PT77767A (fr) 1984-01-01
ES527737A0 (es) 1984-08-01
MA19965A1 (fr) 1984-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Prisbe et al. Halo sugar nucleosides. V. Synthesis of angustmycin A and some base analogues
Cottam et al. New adenosine kinase inhibitors with oral antiinflammatory activity: synthesis and biological evaluation
AU2018284131B2 (en) Synthesis of substantially diastereomerically pure phosphate protides
US20040266996A1 (en) Methods of manufacture of 2&#39;-deoxy-beta-L-nucleosides
CN103052646A (zh) 用于制备非对映异构体纯氨基磷酸酯前药的方法
JP6994197B2 (ja) 架橋型核酸ＧｕＮＡ、その製造方法および中間体化合物
Lin et al. Synthesis of several pyrimidine L-nucleoside analogues as potential antiviral agents
CA2093020A1 (en) Nucleoside derivatives
CS233665B1 (en) Processing of isomere o-phosphonylmethylderivative of anantiomere racemic vicinal diene
CZ273193A3 (en) N4-alkoxycarbonyl -5°-deoxy-5-fluorocytidine derivatives, pharmaceutical preparations in which they are comprised and process for preparing thereof
CZ541288A3 (cs) 4&#39; -fosfátu epipodofyllotoxinglukosidů, způsob jejich výroby a farmaceutický prostředek s jejich obsahem
EP3684780B1 (en) Floxuridine synthesis
NO834433L (no) Fremgangsmaate for fremstilling av 3`,5`-diarabinosider
JPS58177999A (ja) 新規アゾ−ルジヌクレオチド化合物およびその製造方法
WO2023114746A1 (en) Functionalized n-acetylgalactosamine analogs
Doboszewski et al. Synthesis of C-nucleoside analogs of 2', 3'-dideoxycytidine, 3'-azido-2', 3'-dideoxyuridine (CS-87), and 2', 3'-dideoxy-2', 3'-didehydrocytidine
HIROTA et al. Synthesis and Anti-human Immunodeficiency Virus (HIV-1) Activity of 3'-Deoxy-3'-(triazol-1-yl) thymidines and 2', 3'-Dideoxy-3'-(triazol-1-yl) uridines, and Inhibition of Reverse Transcriptase by Their 5'-Triphosphates
Chen et al. Studies on the synthesis of nicotinamide nucleoside and nucleotide analogues and their inhibitions towards CD38 NADase
CS270235B2 (en) Method of carbocyclic purine nicleotides preparation
SU1053474A1 (ru) 3-Фтор-2,3-дидезоксигуанозин,про вл ющий цитостатическую активность
Točík et al. Electrophile-promoted addition of hydroxymethylphosphonate to 4′, 5′-didehydronucleosides: A way to novel isosteric analogues of 5′-nucleotides
DK149026B (da) Analogifremgangsmaade til fremstilling af adeninnucleosidderivater
SU961354A1 (ru) 3-Фтор-2,3-дидезоксиаденозин,про вл ющий цитостатическую активность
Li et al. Synthesis of tetradialdose phosphonate nucleosides as mimics of l-nucleotides
Chen et al. Practical Synthesis of AZT and AZDU from Xylose: Efficient Deoxygenation via Nucleoside 2′-Xanthates