NO820943L - Fremgangsmaate ved gjenvinning av produkter produsert av vertsorganismer. - Google Patents
Fremgangsmaate ved gjenvinning av produkter produsert av vertsorganismer.Info
- Publication number
- NO820943L NO820943L NO820943A NO820943A NO820943L NO 820943 L NO820943 L NO 820943L NO 820943 A NO820943 A NO 820943A NO 820943 A NO820943 A NO 820943A NO 820943 L NO820943 L NO 820943L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- code
- dna sequences
- polypeptides
- host organism
- dna
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 35
- 238000011084 recovery Methods 0.000 title description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 22
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 16
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 16
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 14
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 9
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 9
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 5
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 claims description 5
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 claims description 5
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 claims description 5
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 claims description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 3
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 claims description 3
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 claims description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 3
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 claims description 3
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 claims description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 2
- 108010001478 Bacitracin Proteins 0.000 claims description 2
- DYDCUQKUCUHJBH-UWTATZPHSA-N D-Cycloserine Chemical compound N[C@@H]1CONC1=O DYDCUQKUCUHJBH-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 2
- DYDCUQKUCUHJBH-UHFFFAOYSA-N D-Cycloserine Natural products NC1CONC1=O DYDCUQKUCUHJBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 2
- 108010040201 Polymyxins Proteins 0.000 claims description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 2
- 108010081391 Ristocetin Proteins 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960003071 bacitracin Drugs 0.000 claims description 2
- 229930184125 bacitracin Natural products 0.000 claims description 2
- CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N bacitracin A Chemical compound C1SC([C@@H](N)[C@@H](C)CC)=N[C@@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]1C(=O)N[C@H](CCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2N=CNC=2)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCCCC1 CLKOFPXJLQSYAH-ABRJDSQDSA-N 0.000 claims description 2
- BGTFCAQCKWKTRL-YDEUACAXSA-N chembl1095986 Chemical compound C1[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]1C(N[C@H](C2=CC(O)=CC(O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=C2C=2C(O)=CC=C(C=2)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3C=4C=C(C(=C(O)C=4)C)OC=4C(O)=CC=C(C=4)[C@@H](N)C(=O)N[C@@H](C(=O)N3)[C@H](O)C=3C=CC(O4)=CC=3)C(=O)N1)C(O)=O)=O)C(C=C1)=CC=C1OC1=C(O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO[C@@H]5[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O5)O)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)C4=CC2=C1 BGTFCAQCKWKTRL-YDEUACAXSA-N 0.000 claims description 2
- 229960003077 cycloserine Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003317 industrial substance Substances 0.000 claims description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 claims description 2
- 238000004064 recycling Methods 0.000 claims description 2
- 229950004257 ristocetin Drugs 0.000 claims description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims 4
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 52
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102100040019 Interferon alpha-1/13 Human genes 0.000 description 6
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 3
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 3
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 3
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 3
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 3
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 2
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 2
- 108010087005 glusulase Proteins 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- -1 zancomycin Chemical compound 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000966481 Mus musculus Dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 1
- 101000868151 Rattus norvegicus Somatotropin Proteins 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 102000005262 Sulfatase Human genes 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010923 batch production Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000011437 continuous method Methods 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011027 product recovery Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 108060007951 sulfatase Proteins 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/06—Lysis of microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Control And Other Processes For Unpacking Of Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører fremgangsmåter ved fremstilling av proteiner, polypeptider eller andre produkter i dannet i vertsorganismer. Mere spesielt vedrører den en Ifrem-gangsmåte for gjenvinning av et ønsket protein, polypeptid j eller andre produkter fra en vertsorganisme som produserer ! dette produkt. Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er særpreget ved at vertsorganismen utsettes for minst en blanding som forårsaker lyse eller i det minste permeabilisering av verten og frigjørelse av det ønskede produkt inn i kultur- i mediet i en fjernbar form. Det vil forstås av den etterfølg-ende beskrivelse at foreliggende fremgangsmåte er generelt nyttig ved fremstilling av forskjellige proteiner, polypeptider og andre produkter i forskjellige vertorganismer. Et
1 i ikke ubetydelig problem ved storproduksjon av proteiner, ! polypeptider og andre produkter i potensielt farlige verts-
<:>i organismer er hvorledes man skal inaktivere eller drepe vertsorganismen i kulturmediet og samtidig være i stand til
å gjenvinne det ønskede produkt...
Dette problem er blitt av større viktighet som følge av ut-viklingen av rekombinant DNA-teknologi. Slik teknologi muliggjør produksjon av fremmede produkter i vertsorganismer> som er transformerte med fremmede DNA-sekvenser som koder for disse produkter. Eksempler på slike prosesser innebefatter fremstilling av human insulin, human interferoner, hepa-titt B virusantigener, munn- og klovsykevirusantigener.og menneskelige veksthormon i bakterier eller andre vertsorganismer. To generelle måter for å løse dette problem er tidligere anvendt. I henhold til den første inaktiveres vertsorganismene i vekstkulturene under passende fysikalske betingelser, eksempelvis ved varme- syre eller annen inakti-verende behandling før oppsamling av organismene. Deretter blir de inaktiverte vertsorganismene oppsamlét og de ønskede proteiner eller polypeptider utvunnet. I henhold til den andre av de kjente fremgangsmåter blir organismene oppsamlet: og ekstrahert under fysikalske betingelser i henhold til gjeldende retningslinjer. Deretter blir eventuelle gjenværende levende celler inaktivert eller drept og de ønskede proteiner eller polypeptider utvunnet. i ! Imidlertid har ingen av disse fremgangsmåter vist seg tilfreds-stillende ved utvinning av de ønskede produkter ved storskala-fermentering av vertsorganismer som fremstiller disse produk-f ter. F.eks. i det tilfellet hvor humanleukocyttinterferon j (IFN-a) fremstilles ved .mikrobiell produksjon fra E.coli I I transformert med en DNA sekvens som koder for IFN.-a (slike ! mikroorganismer er eksempelvis beskrevet i europeisk patent- • søknad nr. 81.300050.2 av 7. januar 1981) ga den første gene-[ reile fremgangsmåte, dvs. inaktivering av den transformerte vertsorganisme enten ved varme-, syre- eller annen inaktiv-erende behandling etterfulgt av innsamling, et utbytte som ikke var mindre enn ca. 10% av interferonet eller de inter' feronlignende produkter som var produsert av mikroorganismene. Dette skyldes trolig at andre produkter i vertsorganismen danner kompleks med eller inneslutter det ønskede interferon-. produkt og forhindrer dets gjenvinning fra den inaktiverte og innsamlede kultur.
Den andre generelle behandlingsmåte som muligens er.anvendbar i laboratorieskala er teknisk vanskelig å anvende i stor' skala. F.eks. er kompleksiteten og omkostningene for fer-menteringen og bearbeidelsesutstyret for å tilveiebringe de nødvendige betingelser under innsamling og ekstraksjon av storskalakulturer av levende celler meget høye. Ytterligere er prosedyrene som må anvendes uhåndterlige og er ikke foretrukket både fra et utstyrs- og personellsynspunkt.
Foreliggende oppfinnelse løser de ovenfor nevnte problemer, ved å tilveiebringe en fremgangsmåte for gjenvinning av et ønsket protein, polypeptid eller annet produkt fra en vertsorganisme som produserer dette produkt.
Ved hjelp av oppfinnelsen er det mulig å frigjøre i kulturmediet, i gjenvinnbar form, i det vesentlige alt av det ønskede protein, polypeptid eller annet produkt fremstilt av vertsorganismen, samtidig som denne inaktiveres. Foreliggende fremgangsmåte adskiller seg derfor fra de kjente fremgangsmåter ved at den muliggjør en i det vesentlige fullstendig gjenvinning av de ønskede produkter fra en kultur av vertsorganismer og samtidig unngås ulempene, som de kjente
teknikker er belemret med.
Fremgangsmåten skal nærmere beskrives i det følgende. i]
denne beskrivelse er betegnelsen "vertsorganisme" anvendt bredt. F.eks. innebefatter de gramnegative og grampositive| bakterieverter såsom stammer av E.coli, eksempelvis E.coli HB101, E.coli X1776, E.coli X2882, E.coli DS410, E.coliMRCI, og stammer av Pseudomonas, Bacillus subtilis, Bacillus stear<i>eo-thermophilus og andre basiller, gjær og andre fungi, dyr-eller planteverter. såsom dyr, (innebefattet mennesket) eller' planteceller i kulturer eller andre verter. Valget av en spesiell vert er ikke noen del av foreliggende oppfinnels1 e. i;
Oppfinnelsen er i stedet generelt anvendbar for utvinning i av produkter fra alle verter som er lyserbare eller som i det minste kan gjøres gjennomtrengelige ved eksponering ovenfor blandingene i henhold til oppfinnelsen.
I tillegg kan foreliggende fremgangsmåte anvendes for et'' vidt antall proteiner, polypeptider og andre produkter. F.eks. gjenvinning av produkter såsom aktive bestanddeler
i vaksiner eller andre farmasøytiske eller internt nyttige blandinger, enzymer, alkaloider, aminosyrer, industrielle kjemikalier, antibiotika, matvarer og lignende er en del av oppfinnelsen. Igjen er valget av det spesielle produkt ingen del av oppfinnelsen, men oppfinnelsen er generelt anvendbar for gjenvinning av alle slike ønskelige produkter.
Sluttligen utgjør heller ikke de mange teknikker og frem-^gangsmåter for dyrkning eller fermentering av kulturer av vertsorganismer eller rensning av produkter derfra noen del av oppfinnelsen. I steden utgjør oppfinnelsen et nyttig komplement til disse teknikker og muliggjør en forbedret gjenvinning av det ønskede produkt fra disse.
Det må naturligvis forstås at ikke enhver, vert eller hver dyrknings- eller rensningsteknikk med fordel kan. produsere et gitt produkt i en spesiell vertsorganisme ved foreliggende fremgangsmåte. En fagmann må vurdere de forskjellige kjente faktorer for å velge en foretrukket vert og fore-<1>
i ■ trukne betingelser for produksjon og rensning av det ønskedej
produkt.
F.eks. har et stort antall vert/kloningsbærerkombinasjoner vært anvendt innen rekombinant DNA teknologi for å fremstille transformerte organismer som produserer et ønsket, fremmed produkt. F.eks. kan.nyttige kloningsbærere bestå av et seg-; ment av kromosomalt, ikke-kromosomalt eller syntetiske DNA sekvenser såsom de forskjellige kjente bakterieplasmider, eksempelvis plasmider fra E.coli innebefattende col El, pCRl, pBR322 og deres derivater, et bredt antall plasmider, eksempelvis RP4, fag DNA, eksempelvis de mange derivater av fag Aj eksempelvis NM989, og vektorer avledet fra kombinasjoner,av plasmider og fag DNAer såsom plasmider som er modifisert1. til å anvende DNA eller andre ekspresjonskontrollsekvenser
eller gjærplasmider såsom 2 p plasmider eller derivater derav.
Forskjellige DNA sekvenser kan også innføres i disse kloningsbærere i velkjente posisjoner for å danne hybrid DNA molekyler. Disse molekyler er nyttige, enten som fremstilt eller etter passende modifisering for å forbedre deres ekspresjonskarak-teristika eller for å modifisere produktet som i realiteten uttrykkes fra disse for å transformere vertsorganismer som ovenfor beskrevet og for å produsere1 produkter kodet av de innskutte DNA sekvenser eller ønskede fragmenter derav.
Eksempler på fremmede produkter som er produsert av slike transformerte vertsorganismer er hepatitis B virusantigener, munn- og klovsykevirusantigener,leukocyttinterferon, fibro-blastinterferon, A- og B-kjedene i humaninsulin, rottevekst-hormon, musedihydrofolatreduktase, somatostatin, menneskelig veksthormon og lignende.
Innen den ovenfor generelle teknologi er foreliggende oppfinnelse særpreget ved at vertsorganismen eksponeres ovenfor minst en blanding eller et middel,ovenfor hvilket vertsorganismen reagerer ved lyse eller i det minste blir perme-abel slik at det ønskede produkt frigjøres til kulturmediet. Disse blandinger faller i to generelle klasser. Den første klassen oppløser lipider i cellemembranen og ødelegger vertsorganismens impermeabilitet. Eksempel på denne klasse er detergenter såsom tritron og natriumdodecylsulfat ("SDS") og; enzymer såsom "Glusulase" (et 3~glukuronidase sulfatasepre- ' parat). Den andre klasse sprenger celleomhylningen i verts-;
organismen eller blokkerer enzymer som er nødvendige i célle-' ..! i veggsystemet. Eksempler på denne klasse er penicillin, I cykloserin , bacitracin, zancomycin, ristocetin, polymyxin, samt deres naturlige, syntetiske eller halvsyntetiske derivater.- j
' • ! Det må naturligvis forstås at visse vertsorganismer er mere følsomme overfor en klasse eller element i en klasse av i blandingene enn andre. F. eks. er mennes'keceller lett på-virkelige av ikke-ioniske og ioniske detergeneter. På den annen side er E.coli celler mere lettpåvirkelig mot eksponering for penicillin eller dets derivater eller mot eksponering av. SDS etter en lysozym/EDTA behandling. Gjærceller er mere påvirkelig av "Glusulase".
De forskjellige blandinger som ovenfor er beskrevet som nyttige blandinger ved foreliggende oppfinnelse har et velkjent aktivitetsspektrum ovenfor forskjellige vertsorganismer. Derfor må valget av blandingen eller middelet i henhold til oppfinnelsen for en spesiell anvendelse bestemmes av et antall faktorer. Disse innebefatter vertsorganismenes lettpåvirke-lighet av blandingen, følsomheten for vertsorganismen etter transformering, eventuelt med et hybridplasmid til blandingen, aktiviteten og stabiliteten av blandingen eller midlet i kulturmediet, stabiliteten' av det ønskede produkt i kulturmediet og i dé etterfølgende bearbeidelsestrinn, samt et eventuelt samspill mellom blandingen og det ønskede produkt.
Ved anvendelse av disse prinsipper kan en fagmann velge en spesiell blanding innen omfanget av foreliggende oppfinnelse og på nyttig måte anvende fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen for å gjenvinne et ønsket produkt.
i
"Fastleggelse" av eksponeringen av vertsorganismen for den
valgte blanding i henhold til foreliggende fremgangsmåtej styres også i en viss grad av den spesiel\ le vertsorganismej blandingen som anvendes og de ønskede produkter. F.eks. I
visse behandlinger såsom lysozym/EDTA etterfulgt ved ekspo-|nering mot SDS krever at veksten av verftskulturen i mediet ' i det vesentlige må være fullstendig før man begynner å f; ri-t i • i
gjøre produktet. På den annen side vil eksponering mot
penicillin eller dets derivater, såsom ampicillin eller
andre lignende virkende blandinger muliggjøre et bredt antall "timeplaner" som kan følges. F.eks. kan man variere mengden
av tilsatt blanding, tilsetningstidspunktet i organismens j vekstsyklus, antall additiver, antall av tilsetninger eller ,
periode for vertsorganismens vekst etter tilsetning og før produktgjenvinning kan alle varieres av en fagmann uten å avvike fra oppfinnelsens omfang.
F.eks. i henhold til en utførelsesform av oppfinnelsen ble en enkelt, stor dose penicillin tilsatt en voksende mikro-organisme kultur ved slutten av dens vekstperiode. Eventuelle vertsorganismer som var tilbake etter det valgte tidspunkt for en slik eksponering ble derved inaktivert og det ønskede produkt gjenvunnet. I et annet eksempel ble konsentrasjonen av penicillinet i kulturen holdt ved et lavt, mere eller mindre konstant nivå for å tillate at mikroorganismene fortsatte å vokse å produsere det ønskede produkt med ca. den samme hastighet som mikroorganismene ble lysert eller i det minste permeabilisert av penicillinet for å fri-gjøre det ønskede produkt. Derfor vil riktig valg av til-setningsskjemaer muliggjøre at det i kulturen oppnås en tilnærmet likevektstilstand. Slike prosedyrer er åpenbart nyttige i halvkontinuer1ige og kontinuerlige fermenterings-og gjenvinningsprosesser.
Det er antatt at utøvelse av foreliggende fremgangsmåte forårsaker lyse eller i det minste delvis permeabilisering av en del eller alt av vertsorganismene i den voksende kultur og derved frigjør de ønskede produkter fremstilt av disse vertsorganismer til kulturmediet. En eventuell ikke- lysert del av kulturen kan naturligvis fortsatt vokse og' produsere det ønskede produkt inntil det lyseres eller per-meabiliseres ved hjelp av foreliggende fremgangsmåte eller på annen måte inaktiveres.
Ved en ikke-kontinuerlig fremgangsmåte avsluttes fermenter-ingen ved et visst tidspunkt, fortrinnsvis ved tilsetning i av en tilstrekkelig mengde av blandingen eller midlet ifølge; oppfinnelsen. Deretter blir eventuelle vertsorganismer som er tilbake i ikke-lysert tilstand drept ved syre eller varmebehandling, idet sistnevnte behandling velges i henhold til stabiliteten for det ønskede produkt, som deretter isoleres
i og renses pa en passende mate. F.eks. renses syrestabile og syrepresipiterbare produkter (eksempel IFN-a, IFN-Ø). yed presipitering med syre og utvinning ved hjelp av ekstrak-j- I sjon. Andre produkter gjenvinnes frå det klarede lysat ved absorpsjon på ionebytterharpikser eller affinitetsharpiks eller ved presipitering med hvilken som helst av de mange velkjente additiver, såsom salter, metallioner og lignende.
I en satsprosess kan en del av kulturen fjernes ved passende tidspunkter og behandles som ovenfor angitt for å gjenvinne det ønskede produkt mens den gjenværende del av kulturen fortsetter å vokse å produsere det ønskede produkt. I en kontinuerlig prosess kan det ønskede produkt .gjenvinnes på samme måte som angitt fra mediumstrømmen etter at den har passert gjennom den imobiliserte eller på annen måte loka-liserte kultur av vertsorganismer. Oppfinnelsen skal i det etterfølgende belyses ved hjelp av de følgende eksempler.
i
Eksempel I
E.coli DS410 ( (3-Lac-AUG (a2) ) , en E.coli DS410 (ara azide'Ton' A lac y Tsx min a min b gal A xyl step<R>) stamme ble transformert med plasmid 3-lac-AUG(a2) som beskrevet i den ov' éIn-for nevnte europeiske patentsøknad. Den er deponert i the American Type Culture Collector under ATCC nr. 317 69.; Den transformerte vert inneholdt IFN-a2 genet forbundet via en AUG initiator kondon til penicillinase (3-lac) ekspresjons-kohtrollsekvensen til pBR322. Verten er resistent mot tetra-cyklin og streptomycin. Organismen ble dyrket til en celle-, densitet på 5xl0<9>(OD =6) i en 120 1 kultur ved 30°C og
i en prøve ble det bestemt hvor meget IFW som var produsert j av vertsorganismene. Kulturmediet bestod av casaminosyrer ■
(enzymatisk casein hydrolysat "C-0626", "Sigma") (30 g/l),
glycerol (98% PHHVI, rent, "Siegfried") (20 g/l), gjærekstrakt
(BBL) (2 g/l), KH2P04(ren, n.A. "Fluka") (5 g/l), NaOH (p.A. Merck, nr. 6498) (1,2 g/l), "Silikon DX31DB" (Dow Chemical)
(0,1 ml/l), MgS04 • 7H20 (Merck, z.Analyse, nr. 5886) (1 g/l)<:>.
og NaOH (som ovenfor) (ca. 2 g/l). Mediet ble fremstilt'ved varmebehandling i autoklav av kasaminosyrene, glycerolet, gjærekstraktene, Kr^PO^og silisiumoksydet i 20 min. ved 120°C. Etter avkjøling ble MgSO^-7H20 i vann som på for-
hånd var varmebehandlet tilsatt og pH justert til 7 ved hjelp av NaOH i vann. Lufting og omrøring ble utført for å sikre et innhold av oppløst oksygen på minst- 80% (i for-
hold til luft ved atmosfærisk trykk) på ethvert tidspunkt.
pH ble holdt på 7 ved tilsetning av lOM NaOH.
75 mg/l ampicillin (et penicillinderivat) ble tilsatt ved ODgj-Q - 6 og lufting og omrøring fortsatt som tidligere.
Etter at OD^rn var sunket til 4 (30-50 min.) ble kulturen
obl)
avkjølt til 10 C og H2S04(ca. 4 M) ble langsomt tilsatt for å justere pH til 1,9. I visse tilfeller ble trikloreddik-syre anvendt for å justere pH til 1,3 for således å fremme en fullstendig presipitering av det ønskede IFN produkt.
Presipitatet ble oppsamlet i en "Westphalia" separator og
det konsentrerte faststoff sentrifugert til en pasta i en "Sharples" sentrifuge. Pastaen (ca. 133 g/l, fuktig) ble
suspendert i 5 ganger dens vekt i avionisert vann, homogeni-''
i
sert ved hjelp av en "Silverson" homogenisator og pH justert
til 7,2 med 2 M NaOH (ca. 31 NaOH er vanligvis krevet). En analyse viste at i det vesentlige alt av IFN produkter
produsert av vertsorganismen var gjenvunnet. Det oppsamlede og ekstraherte IFN-a kan deretter behandles på et antall I !
forskjellige måter for rensning av produktet. Som tidligere
!I
angitt omfattes de etterfølgende teknikker ikke av oppfinn- j
eisen.. j
■ i ■ ' Eksempel II
E. coli DS410 (3-lac.AUG(a2), som ovenfor beskrevet ble dyrket til en celledensitet på 10 9/ml under de samme betingelser
i og under anvendelse av det ovenfor beskrevne medium. Også i dette tilfellet ble en prøve analysert for å bestemme nivået av IFN produksjonen. 5 ampicillin pr. ml av kulturen, ble deretter tilsatt og inkuberingen fortsatt med full lufting og omrøring. Det ble ikke observert noen forøkelse i ! antall av levende celler så trolig ble den fraksjon av cellene som ble lysert eller i det minst permeabilisert av ampicil-linet og derved avga IFN-a2 til mediet, erstattet,i alle fall innenfor grensene av den anvendte påvisningsmetode,
ved fortsatt deling av de gjenværende celler. Disse celler vil naturligvis fortsatt produsere ytterligere IFN-a2. Etter ca. 1 time viste en bestemmelse en så høy titer som 2,0 x 10<8>enheter IFN/1. Kulturen ble deretter behandlet som beskrevet i eksempel 1 og i det vesentlige all IFN aktivitet ble gjenvunnet fra kulturen i syreutfellingen.
Eksempel III
En 1 1 kultur av E.coli DS410 (3"Lac AUG(a2), som ovenfor beskrevet ble dyrket ved 3 7°C i det samme kulturmedium som ovenfor beskrevet til en celledensitet på ca. 10 ^. Kulturen ble deretter inkubert med 20 mM EDTA, 100 ;jg/ml lysozym i 30 min. ved 37°C og deretter lysert med 0,4% SDS. Etter avkjøling til 10°C ble lysatet justert til pH 2 med svovel-syre og fikk henstå i 60 min. for å avlive alle gjenværende celler. Presipitatet ble oppsamlet ved sentrifugering og homogenisert med vann (1/2 0 av det opprinnelige kulturvolum) mens pH ble justert til 7,3 med NaOH. Fjerning av uopp- j løselige bestanddeler ga en klar oppløsning med 50-100% av den opprinnelige IFN-a aktivitet. I dette tilfellet var!en
ytterligere rensing av IFN-a vanskelig trolig p.g.a. IFNj-kompleksering med hydrofobe membranproteiner som også ble ekstrahert med SDS. En slik kompleksering vil naturligvis I ikke være noen ulempe ved gjenvinning av andre ikke-inter- | feronprodukter.. |
Claims (10)
1. Fremgangsmåte ved gjenvinning av et produkt fra en ve! rtsI-organisme som produserer dette produkt,karakterisert vedå utsette vertsorganismen for i det minste en blanding eller et middel som forårsaker lyse eller i det j minste permeabilisering av vertsorganismen for derved å fri-! gjøre det ønskede produkt.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakteris e!r t véd at vertsorganismen velges fra gruppen beståendej av stammer av E.coli, Pseudomonas, bacillus subtilis, bacillus stearothermophilus, andre basiller, gjær, andre fungi, j dyr- eller planteceller eller andre vertsorganismer. ; '
! i
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 eller 2, karakter i -
i sert ved at vertsorganismen er en stamme av E. : coli.
i
4. Fremgangsmåte ifølge kravene 1-3,karakterisert vedat vertsorganismen er en vertsorganisme som er transformert med en vektor omfattende en DNA sekvens som koder for produktet.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 4,karakterisertved at DNA sekvensen velges fra gruppen bestående av DNA sekvenser som koder for proteiner, DNA sekvenser som koder for polypeptider, DNA sekvenser som koder for enkle eller multiple aminosyrer, DNA sekvenser som koder for enzymer, DNA sekvenser som koder for industrielle kjemikalier og DNA sekvenser som koder for næringsmidler.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 4 eller 5,karakterisert vedat DNA sekvensen velges fra gruppen bestående av DNA sekvenser som koder for polypeptider som utviser en immunologisk eller biologisk aktivitet for leukocyttinterferon, DNA sekvenser som koder for polypeptider'som, utviser en immunologisk eller biologisk aktivitet som fibro-,
i blastinterferon, DNA sekvenser som koder for polypeptider
I med antigenaktivitetene tilsvarende den for FMDV virusanjti-
■ gener, DNA sekvenser som koder for polypeptider. med antij-
genaktivitet tilsvarende hepatit B virusantigener og DNA;
i sekvenser som koder for andre polypeptider og proteiner som utviser en immunologisk eller biologisk aktivitet tilsvarende den for animalske eller humane produkter. !
7. Fremgangsmåte ifølge kravene 4-6, karakteri sert ved at DNA sekvensen koder for polypeptide<r>i i som utviser en immunologisk eller biologisk aktivitet'til-
i svarende den for leukocyttinterferon. i
i I
8. Fremgangsmåte ifølge kravene 1-7, karakteri sert ved at blandingen eller midlet velges fraj gruppen bestående av detergentér, enzymer, penicillin,, cykloserin, bacitracin, zancomycin, ristocetin, polymyksin, samt j deres derivater.
9. Fremgangsmåte ifølge krav 8/karakterisertved at blandingen eller midlet velges fra gruppen be,- ] stående av ampicillin og derivater derav.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 9, karakteris e,rt ved at penicillinet tilsettes til kulturen med en celle- ■
densitet på ca. 10 9celler/ml i en mengde på 15 mg/l til ca. 75 mg/l.
i
i-
I
! i i<!.>
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8108982 | 1981-03-23 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO820943L true NO820943L (no) | 1982-09-24 |
Family
ID=10520572
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO820943A NO820943L (no) | 1981-03-23 | 1982-03-22 | Fremgangsmaate ved gjenvinning av produkter produsert av vertsorganismer. |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0061250A3 (no) |
| JP (1) | JPS57198090A (no) |
| AU (1) | AU8150282A (no) |
| BR (1) | BR8201591A (no) |
| DD (1) | DD202044A5 (no) |
| DK (1) | DK127782A (no) |
| ES (1) | ES8303521A1 (no) |
| FI (1) | FI820997L (no) |
| IL (1) | IL65275A0 (no) |
| NO (1) | NO820943L (no) |
| PT (1) | PT74632B (no) |
| ZA (1) | ZA821783B (no) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4582799A (en) * | 1983-04-15 | 1986-04-15 | Damon Biotech, Inc. | Process for recovering nonsecreted substances produced by cells |
| BG49718A3 (en) * | 1983-07-15 | 1992-01-15 | Bio Technology General Corp | Method for preparing of polypeptid with superoxiddismutasne activitty |
| US4637980A (en) * | 1983-08-09 | 1987-01-20 | Smithkline Beckman Corporation | Externalization of products of bacteria |
| EP0145233B2 (en) * | 1983-11-23 | 1991-11-06 | Imperial Chemical Industries Plc | Separation processfor a 3-hydroxybutyrate polymer |
| GB8409208D0 (en) * | 1984-04-10 | 1984-05-23 | Genetics Int Inc | Rapid purification of quinoproteins |
| US4680262A (en) * | 1984-10-05 | 1987-07-14 | Genentech, Inc. | Periplasmic protein recovery |
| US4966844A (en) * | 1985-09-03 | 1990-10-30 | Amgen | Method for microbial cell killing |
| CA2012833A1 (en) * | 1989-03-22 | 1990-09-22 | Shi-Hsiang Shen | Excretion of proteins from yeast cells |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1141940A (en) * | 1966-10-28 | 1969-02-05 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Process for producing proteins by fermentation |
| GB1288843A (no) * | 1969-07-12 | 1972-09-13 | ||
| CH544809A (fr) * | 1972-05-03 | 1973-11-30 | Nestle Sa | Procédé d'obtention de substances intracellulaires d'origine microbienne |
| JPS5918039B2 (ja) * | 1976-05-26 | 1984-04-25 | 味の素株式会社 | 微生物による蛋白質の製造法 |
| JPS5747479A (en) * | 1980-09-01 | 1982-03-18 | Juzo Udaka | Production of enzyme |
-
1982
- 1982-03-08 EP EP82301163A patent/EP0061250A3/en not_active Withdrawn
- 1982-03-15 AU AU81502/82A patent/AU8150282A/en not_active Abandoned
- 1982-03-17 ZA ZA821783A patent/ZA821783B/xx unknown
- 1982-03-17 IL IL65275A patent/IL65275A0/xx unknown
- 1982-03-20 JP JP57043738A patent/JPS57198090A/ja active Pending
- 1982-03-22 BR BR8201591A patent/BR8201591A/pt unknown
- 1982-03-22 FI FI820997A patent/FI820997L/fi not_active Application Discontinuation
- 1982-03-22 NO NO820943A patent/NO820943L/no unknown
- 1982-03-22 ES ES510629A patent/ES8303521A1/es not_active Expired
- 1982-03-22 DK DK127782A patent/DK127782A/da not_active IP Right Cessation
- 1982-03-22 DD DD82238349A patent/DD202044A5/de unknown
- 1982-03-22 PT PT74632A patent/PT74632B/pt unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0061250A2 (en) | 1982-09-29 |
| PT74632A (en) | 1982-04-01 |
| IL65275A0 (en) | 1982-05-31 |
| ES510629A0 (es) | 1983-02-01 |
| DD202044A5 (de) | 1983-08-24 |
| EP0061250A3 (en) | 1983-09-28 |
| DK127782A (da) | 1982-09-24 |
| JPS57198090A (en) | 1982-12-04 |
| PT74632B (en) | 1983-10-20 |
| ZA821783B (en) | 1983-01-26 |
| BR8201591A (pt) | 1983-02-08 |
| ES8303521A1 (es) | 1983-02-01 |
| AU8150282A (en) | 1982-09-30 |
| FI820997L (fi) | 1982-09-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Spizizen | Transformation of biochemically deficient strains of Bacillus subtilis by deoxyribonucleate | |
| CA1176980A (en) | Extraction of interferon from bacteria | |
| Amrane et al. | Lactic acid production from lactose in batch culture: analysis of the data with the help of a mathematical model; relevance for nitrogen source and preculture assessment | |
| EP0195078A1 (en) | Bacillus strains with reduced extracellular protease levels | |
| CN104593388B (zh) | 一种鲫鱼疱疹病毒病jdorf25疫苗及制备方法和应用 | |
| US4364863A (en) | Extraction of interferon from bacteria | |
| NO820943L (no) | Fremgangsmaate ved gjenvinning av produkter produsert av vertsorganismer. | |
| GB2042554A (en) | Method for preparation of recombinant dna | |
| Horowitz et al. | Growth cycle of predacious Bdellovibrios in a host-free extract system and some properties of the host extract | |
| DK174889B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af væksthormoner | |
| EP0342892B1 (en) | Extraction of human interleukin-4 from bacteria | |
| EP0064680A2 (en) | Novel lysozyme-sensitive microorganism | |
| KR100212770B1 (ko) | 세균으로부터 이종성의 불용성 단백질의 추출방법 | |
| White | Cell interactions and the control of development in myxobacteria populations | |
| EP0291294B1 (en) | Extraction of granulocyte macrophage colony stimulating factor from bacteria | |
| US3093551A (en) | Production of nisin | |
| US5021340A (en) | Cloning vector, molecules of recombinant DNA, bacillus subtilis strains transformed with the said molecules and methods for the expression of heterologous genes and the production and secretion of proteins coded by the said genes | |
| US3345269A (en) | Process for the production of proteolytic enzymes | |
| CN115851632B (zh) | 一种漆酶突变体及其应用 | |
| US4874697A (en) | Novel Host e. coli and use thereof | |
| EP4166663A1 (en) | Method for producing target protein | |
| JPH02312590A (ja) | プラスミドｐＴＹ１ | |
| CN106834161B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌z12及应用 | |
| Hodges | Studies on Transformation in Bacillus Subtilis | |
| CN116514950A (zh) | 一种重组猪α-干扰素的制备方法 |