NO820248L - Fremgangsmaate ved fremstilling av monoklone antistoffer og celler istand til aa produsere slike antistoffer - Google Patents
Fremgangsmaate ved fremstilling av monoklone antistoffer og celler istand til aa produsere slike antistofferInfo
- Publication number
- NO820248L NO820248L NO820248A NO820248A NO820248L NO 820248 L NO820248 L NO 820248L NO 820248 A NO820248 A NO 820248A NO 820248 A NO820248 A NO 820248A NO 820248 L NO820248 L NO 820248L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cells
- tumor
- lymphocytes
- hybrid
- antibodies
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 40
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 74
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 55
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 40
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 32
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 32
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 32
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 claims description 28
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 12
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 claims description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 claims description 4
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 14
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N diethyl pyrocarbonate Chemical compound CCOC(=O)OC(=O)OCC FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 8
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 6
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 6
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 6
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 5
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000000306 component Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 231100000668 minimum lethal dose Toxicity 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 2
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 2
- 229920002535 Polyethylene Glycol 1500 Polymers 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical compound O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000008217 Pregnancy Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010035746 Pregnancy Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000630 fibrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000007392 microtiter assay Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- VUYXVWGKCKTUMF-UHFFFAOYSA-N tetratriacontaethylene glycol monomethyl ether Chemical compound COCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO VUYXVWGKCKTUMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/34—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against blood group antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av monoklonale antistoffer og andre lymfocyt-produkter slik som lymfokiner og fremstilling av celler som er istand til å fremstille slike monoklonale antistoffer og andre lymfocytprodukter.Fremgangsmåten er særlig egnet for fremstilling av monoklonale antistoffer for humant bruk, men fremgangsmåten er likeledes egnet for fremstilling av. monoklonale antistoffer for bruk i dyr, spesielt gårdsdyr og større hus-dyr under anvendelse av materialer som er egnet for de bestemte dyr.
Den etterfølgende beskrivelse beskriver fremgangsmåten hovedsakelig under henvisning til fremstilling av humane monoklonale antistoffer og humane celler som er istand til å fremstille slike antistoffer, men de substitusjoner som er nødvendig for å fremstille monoklonale antistoffer og celler for fremstilling av slike antistoffer for behandling av dyr og for fremstilling av andre lymfocytprodukter vil være inn-lysende for fagmannen.
Fremmede celler eller substanser (antigener) som inntrer i legemet bevirker at hvite blodceller svarer på deres nærvær. Visse av disse blodceller, kjent, som lymfocyter, erkjenner bestemte determinantgrupper av antigenet og produserer spesifikke antistoffer som er i stand til å nøytrali-sere og eliminere den fremmede substans. Da et antigen vanligvis bærer flere slike determinanter, vil et antall antistoffer bli dannet mot hver antigen komponent. Hvert antistoff syntetiseres av en lymfocyttype og i enhver normal situasjon hvor et legeme utsettes for. et fremmed middel, vil derfor mange lymfocyter svare og produsere spesifikke antistoffer mot hver antigenisk komponent.
Det er et ubegrenset antall antigener som kroppen kan utsettes for, slik at selv blant det store antall av lymfocyter tilstedeværende i legemet, er det bare et relativt lite antall som er istand til å produsere antistoffer som er spesifikke overfor et bestemt antigen. Selv når et antigen innføres i et legeme og de bestemte lymfocyter stimuleres til å produsere antistoffer som er spesifikke for antigenet, tar det således betydelig tid, som kan oppgå i uker, før lymfo- cytpopulasjonen som produserer de spesifikke antistoffer har øket til det nivå hvor antigenet kan fjernes av antistoffene. Den naturlige forsinkelse i produksjonen av spesifikke antistoffer av legeme kan omgås ved administrering, eksempelvis ved injeksjon., av spesifikke antistoffer som forventes å for-korte sykdomsforløpet og lede til en tidlig legning.
Forsøk er blitt gjort på å dyrke antistoff-produserende lymfocyter i kulturer. Uheldigvis kan antistoff-utskillende celler bare dyrkes i kultur med store vanske-ligheter og har en begrenset levetid i kulturmediet..Produk-sjonsgraden av antistoffer er meget lav, i første rekke på grunn av den korte levetid av cellene og følgelig deres lille grad av vekst.
Det er allerede funnet at myelomaceller fra musefamilien kan sammensmeltes med lymfocyter av musefamilien og derpå danne hybrid-myeloma eller såkalte. "hybridoma"-celler som utviser de essensielle karakteristika fra begge foreldre-celler, dvs. den spesifikke antistoffproduksjonsevne til lymfocyten og den-relative udødelighet av myelomacellen. Dette har gjort det mulig å velge individuelle hybridkloner som med en lang levetid og følgelig høy vekstevne kan syntetisere store mengder av en type antistoff ovenfor en enkel antigenisk determinant og dyrke disse kontinuerlig i kultur. Hittil har det vært vanskelig å oppnå en brukbar mengde hybridceller som er istand til å kunne anvendes- i antistoffproduk-sjon på grunn av det hittil uunngåelige nærvær i enhver gruppe av hybridomaceller av fri tumor-liknende celler som ikke for-enes med lymfocytene, og på grunn av den uheldige antistoff produksjon av de tumor-liknende celler. Selv om hybridomas fra musefamilien blir funnet anvendbare for å tilveiebringe antistoffer egnet for bruk i forskjellige diagnostiske tester anvendt i hospitalene, kan disse antistoffer, vanligvis ikke anvendes uten risiko ved behandling av mennesker da de virker som antigener i mennesker.
Et mål med oppfinnelsen er å unngå eller redusere en eller flere av de ovenfor angitte ulemper, og i særdeleshet å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling i stor mengde, stabile kondenserte cellehybrider som er istand til å syntetisere monoklonale antistoffer mot et gitt målantigen uten nærvær av f ri tumor-liknende celler og deres produkter, og en fremgangsmåte for fremstilling av antistoffer som er spesifikke overfor et gitt målantigen uten nærvær av fri tumor-liknende celler.
Ifølge oppfinnelsen er det tilveiebragt en fremgangsmåte for dannelse av celler som er istand til å produsere et monoklonalt antistoff mot et målantigen og andre lymfocyt-produkter ved sammensmelting av tumor-liknende celler og sensibiliserte lymfocyter under dannelse av hybridceller hver omfattende minst en lymfocyt og minst en tumor-liknende celle, hvilken fremgangsmåte er kjennetegnet ved at de tumor-liknende celler før sammensmelting med lymfocytene behandles slik at minst en enzymatisk aktivitet deri som er vesentlig for overlevelsen av cellene i fri tilstand elimineres, og at lymfocytene før sammensmeltning med de tumor-liknende celler, stimuleres til å bli aktive, hvoretter lymfocytene og de tumor-liknende celler bringes sammen under betingelser hvori enkelte av disse sammensmeltes under dannelse av hybridceller, og hvor det resulterende produkt som inneholder hybridceller og fri lymfocyt- og tumor-liknende celler som ikke er sammensmeltet, suspenderes i et cellekulturmedium hvori hybridcellene fortsetter å vokse mens de ikke-sammensmeltede tumor-liknende celler dør som et resultat av angitte behandling av cellene for å fjerne en enzymatisk aktivitet, og de ikke-sammensmeltede lymfocyter som normalt har kort levetid også dør.
Et eksempel på et annet-lymfocytprodukt fremstilt ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er lymfokiner.
Uttrykket "tumor-liknende celler" er definert som enhver celle som utviser udødelighets karakteristikane til en tumorcelle, dvs. evnen til å gjennomgå kontinuerlig celle-deling.
For fremstilling av monoklonale antistoffer er de anvendte lymfocyter B-lymfocyter, men for bestemte virkninger, f.eks. for å aktivere stimulering i bestemte betingelser kan leucocyter, f.eks. T-lymfocyter i en på forhånd bestemt mengde blandes med B-lymfocytene.
For å tilveiebringe tumor-liknende celler med den karakteristika at de ikke kan overleve uten en spesifikk enzymatisk aktivitet, kan normale tumor-liknende celler behandles med en cytotoksisk substans som blokkerer produksjonen og/eller aktiviteten av en eller flere enzymer som er essensielle for den fortsatte overlevelse av cellene i det bestemte cellekulturmedium.
En særlig egnet cytotoksisk substans for det ovenfor angitte formål ble funnet å være den biokjemiske inhibitor diethylpyrocarbonat (DEP) men mange andre lett. tilgjengelig cytotoksiske substanser er kjent.
En viktig fordel ved anvendelse av diethylpyrocarbonat er at denne er effektiv for et meget, vidt område av tumor-liknende celler, slik at tumor-liknende celler fra praktisk talt hvilken som helst kilde, enten fra mennesket eller ikke-menneske kan gjøres enzym-mangelfull på en enkel og økonomisk måte. En ytterligere fordel er at den fremkalte enzym-mangel er slik at de uønskede ikke-sammensmeltbare celler dør raskt i et hvilket som helst konvensjonelt cellekulturmedium, slik at det ikke er behov for spesielle kulturmedia, slik som f.eks. HAT (hypoxantin-aminopterin-tymidin) medium.
I praksis er det enkelte ganger vanskelig eller ikke mulig å oppnå store nok lymfocytpopulasjoner sensibilisert utelukkende mot et enkelt målantigen, og det kan derfor være nødvendig å innbefatte det ytterligere trinn at det sammensmeltede hybridprodukt erholdt ved den ovenfor angitte fremgangsmåte klones for å oppnå en hybrid cellepopulasjon som er istand til å produsere monoklonalt antistoff, dvs. bare en enkel type av antistoff som er rettet mot bare målantigenet (eller en enkel antigenisk determinant derav).
For å oppnå det ønskede antistoff fra hybridomaceller fremstilt ved fremgangsmåten, kan hybridomacellene stimuleres til å produsere antistoffet f.eks. ved at de utsettes for et mitogen eller for målantigenet, hvoretter antistoff isoleres fra kulturmediet hvori hybridomacellene dyrkes eksempelvis ved en fraksjoneringsprosess.
Oppfinnelsen innbefatter også hybridceller og monoklonalt antistoff erholdt fra hybridceller fremstilt ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen.
Sensibiliserte lymfocyter kan erholdes fra en pasient som nylig har hatt en naturlig infeksjon med målantigenet. Alternativt kan lymfocyter sensibiliseres in vitro, f.eks. ved inkubasjon av lymfocyter med målantigenet, og dette kan være foretrukket forsåvidt som det tilveiebringer et sensibilisert lymfocytutgangsmateriale med større spesifisitet enn hva ellers ville kunne være tilgjengelig.
Ved hjelp av oppfinnelsen er det mulig å oppnå en hybridcelle som lett kan anvendes for å produsere store mengder av humant monoklonalt antistoff mot et spesifikt målantigen ved utnyttelse av bare celler av human opprinnelse og uten noen fare for nærvær av fri aktive tumor-liknende celler og uønskede antistoffer. Anvendelse av celler av ikke-human opprinnelse unngås totalt og derved eliminering av de forskjellige problemer forbundet med bruk av antistoffer produ-sert under anvendelse av celler av ikke-human opprinnelse.
I særdeleshet er muligheten for at det erholdte antistoff skal kunne virke som et antigen i en human pasient meget mindre enn hva som ville kunne forventes fra bruk av xeno-antistoffer.
Det skal også forståes at da oppfinnelsen muliggjør produksjon i stor skala mot målantigener enten disse er av bakteriell, viral, neoplastisk eller annen opprinnelse, mulig-gjør oppfinnelsen også en sikker, effektiv og hurtig behandling og/eller profylakse av pasienter som lider av eller er utsatt for et vidt antall av sykdommer, selv sykdommer hvor bakteriet eller viruset ennå ikke er blitt identifisert. Ved å kombinere egnede ekstra korporalt-fremstilte antistoffer med cytotoksiske midler kan også ondartede tumorceller sikkert behandles da antistoffene, som er spesifikke for de ondartede tumorceller begrenser virkningen av de cytotoksiske midler til tumorcellene. Andre muligheter innbefatter lang-tidsprevensjon under anvendelse av humane monoklonale antistoffer som er spesifikke for placentalproteiner, f.eks. B-HCG, og forhindring av podnings- og transplantatavvisning.
Et monoklonalt antistoff fremstilt ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan blandes med en fysiologisk akseptabel bærer. Et eksempel på et slikt medium er 0,02 molar fosfatbuffer med pH 7,4 inneholdende 0 ,147 molar NaCl.
Oppfinnelsen angår også et diagnostisk reagens for anvendelse ved kvalitativ og/eller kvantitativ bestemmelse av et målantigen, hvilket reagens omfatter en løsning av antistoffet i et egnet medium som også kan være 0,02 molar fosfatbuffer med pH 7,4 inneholdende 0,147 molar Nacl.
Selvom tumor-liknende celler erholdt direkte fra en levende giver kan anvendes som de tumor-liknende celler for å kombineres med lumfocyter under dannelse av hybridcellene, er det generelt foretrukket å anvende en etablert cellelinje for fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, da adferden av en slik etablert cellelinje er mere forutsigelig og resulterer vanligvis i større effektivitet.
Oppfinnelsen angår således også et cellekultur-system omfattende hybridcellelinjen i et næringsmedium. Et eksempel på et slikt næringsmedium er RPMI 1640 inneholdende 10 % v/v kalvefosterserum.
De tumor-liknende celler anvendt ved utførelse av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan være istand til, kan tidligere ha vært istand til, eller kan være avledet fra celler som er istand til eller som tidligere har vært istand til å produsere antistoffer, imidlertid foretrekkes det å anvende en tumor-liknende celle som er ikke-immunoglobulin utskillende da dette forhindrer muligheten for produksjon av uønskede antistoffer, dvs. andre antistoffer enn de som er spesifikke overfor målantigenet.
De sensibiliserte lymfocyter kan stimuleres ved ytterligere å utsettes for målantigenet. Alternativt kan disse sensibiliserte lymfocyter stimuleres ved å utsettes for et mitogen. Eksempler på mitogenet som er istand til å sti-mulere sensibiliserte lymfocyter er kermesbær mitogen (PWM)
og protein A fra Staphylococcus Aurus. Disse mitogener er særlig foretrukne, men andre egnede mitogener er bakteriell lipopolysaccharid (LPS) og dekstransulfat (DS).
Stimulering av de sensibiliserte lymfocyter utføres fortrinnsvis 3 eller 4 dager før fusjonen av lymfocytene og de tumor-liknende celler utføres. Dette resulterer i et høyere antall fusjonstilfeller, med resulterende forøket antall hybridcellekulturer.
Betingelsene for å forårsake fusjonen av lymfocytene og de tumor-liknende celler kan etableres.ved å utsette disse for et fusjonsaktiverende middel. Et foretrukket fusjonsaktiverende middel er polyethylenglycol (PEG), f.eks. PEG 1500.
Ytterligere foretrukne trekk og fordeler ved .oppfinnelsen vil fremgå fra de etterfølgende eksempler. I eksempel 1 er for klarhetens skyld de enkelte trinn ved fremgangsmåten for fremstilling av humane og monoklonale antistoffer separat beskrevet.
Eksempel 1 - Fremstilling av human monoklonal antistoff-E£2i?us^r^nde_hybridcelle _ _ _ _ _
A. Isolering av sensibiliserte humane lymfocyter.
Perifert blod ble oppsamlet fra humane blodgivere som var immune ovenfor anti-RhD antigen av humane røde celler. Blodet ble underkastet Ficoll-Isopaque (Fl) separasjon. Det oppsamlede cellemateriale ble funnet å inneholde mere enn 90 % lymfocyter. Om ønsket kunne dette materialet ytterligere fraksjoneres på kjent måte under dannelse av et materiale inneholdende bare B-lymfocyter uten andre celler, f.eks. T-lymfocyter og monocyter, men dette er vanligvis ikke vesentlig. Forskjellige andre kjente metoder for isolering av lymfocyter kunne ha vært anvendt med den ovenfor beskrevne metode ble funnet å være særlig hensiktsmessig.
B. Stimulering av sensibiliserte lymfocyter.
De ovenfor erholdte lymfocyter ble vasket to ganger i serumfritt vevkulturmedium RPMI 1640 inneholdende 2 mM "HEPES", 200 mM glutamin, 5 mM natriumbicarbonat og penicillin 100 IU og streptomycin 100 ug pr. ml, og ble til slutt sus-pendert i RPMI 16 40 med 10 % humant AB. serum til en konsentrasjon på 10^ celler/ml. 2 ml's aliquoter av.den erholdte suspensjon ble pipettert i "Linbro"-plater (flatbunnet, vev-kulturbehandlet, 24 x 3,5 ml brønnkapasitet) og kermesbær-mitogen (PWM, 80 yg pr. brønn) ble tilsatt.
"Linbro"-platen ble deretter anbragt i en inkubator
gassbehandlet med 95 % luft og 5 % CC^og fuktet og opprett-holdt ved en temperatur på 37°C. På den tredje/fjerde dag av stimuleringen ble lymfocytene anvendt for fusjon.
C. Enzymblokkering.
RPMI 8226 humane tumor-liknende celler (ATCC culture collection deposit number CCL155 til 2,5 x 10^/ml) ble behandlet med den minimale lethale dose av diethylpyrocarbonat (DEP 0,022 % w/V) i serumfrittRPMI 1640 medium i 30 minutter ved 4°C. Cellene ble deretter vasket to ganger i serumfritt RPMI 1640 medium. Den minimale lethale dose av DEP ble bestemt ved behandling av prøvene av de tumor-liknende celler med et område av konsentrasjoner av DEP, hvor den minimale lethale dose er definert som den minimale dose ved hvilken ingen vekst ble påvist etter 1 uke.
D. Fusjon av tumor-liknende celler med lymfocyter.
De stimulerte sensibiliserte lymfocyter fra avsnitt
1 B og de enzym-blokkerte tumor-liknende celler fra avsnitt
1 C ble blandet sammen i tilnærmet likt antall (10 7 av hver/ml) i serumfritt RPMI 1640 medium. Cellesuspensjonen ble sentri-fugert og supernatantvæsken dekantert. Cellekaken ble resuspendert under omrøring i polyethylenglycol (PEG) 1500
(40 % w/v, 2 ml). Etter 2 minutter ble suspensjonen gradvis fortynnet over en periode på fra 3 til 5 minutter med serumfritt RPMI (20 ml). Cellesuspensjonen ble deretter, sentri-fugert ned og resuspendert i RPMI 1640 medium med 10 %-ig humant AB serum (5 ml). Denne suspensjon ble deretter inkubert ved 37°C i fra 1 til 3 timer. Etter inkubasjonen ble cellesuspensjonen fortynnet til en konsentrasjon svarende til 10 5enzym-blokkerte tumor-liknende celler pr. ml med.RPMI 1640 medium med 10 % humant AB serum, idet humane fibrocyter (10^/ml) ble tilsatt som matelag. (Andre materialer som kan anvendes i matelaget innbefatter humane monocyter, rottethymus epitelceller, og fibroblast kondensjonert medium for å tilveiebringe de nødvendige vekstfaktorer til hybridcellene). Aliquoter (200 yl) av denne cellesuspensjon inneholdende hybridcellene ble deretter anbragt i mikrotiterplater og platene fikk stå i to uker ved 37°C, hvoretter prøver av super-
natantvæsken kunne taes for bestemmelser.
Som et alternativ til det ovenfor angitte RPMI
1640 medium kan forskjellige andre kulturmedia som er vel kjent innen faget anvendes. Et slikt medium som kan anvendes er Dulbecco<1>s modifikasjon av Eagle's minimale essensielle medium.
E. Kloning av hybridceller og monoklonal antistoff-produksjon.
Supernatantvæske (100 yl) ble tatt fra brønnene i mikrotiderplaten ifølge eksempel 1 D og hvori signifikant cellevekst hadde funnet sted og ble testet i en enzymimmuno-bestemmelse.
En mikrotiterbestemmelsesplate ble fremstilt ved å belegge brønnene derav med anti-humant IgG fra geit (GAHI), under anvendelse av en løsning av 12,5 yg/ml i 0,02 M "Tris" HC1, pH 9. GAHI-løsningen (100 yl) ble inkubert i brønnene over natten ved 4°C. Neste dag ble platene vasket to ganger med "Tris" vaskebuffer, en gang med "Tris"/Tween®-buffer og igjen en gang med "Tris" vaskebuffer. "Tris" vaskebuffer inneholder 0,2 M "Tris" med pH 7,4 pluss NaCl 0,2 M og "Tris/ Tween®-buffer er et "Tris" vaskebuffer inneholdende Tween® 20 (0,05 % v/v). Platene ble deretter ristet tørre. Supernatantvæske (100 yl) fra fusjonssystembrønnene ble tilsatt til en tilsvarende brønn i en mikrotiterbestemmelsesplate og inkubert ved 18-20°C i 45 minutter. Etter inkubasjonen ble brønnen vasket tre ganger med "Tris"/Tween®-buffer og ristet tørre som tidligere.
GAHI - Pepperrotperoxydase (HRP) enzymkonjugater (kjedet med glutaraldehyd under anvendelse av en to-trinns-prosedyre) ble tilsatt, under anvendelse av en konsentrasjon på 10 yg/ml i 0,147 M NaCl med 20 % normalt saueserum til 100 yl pr. brønn, og ble inkubert i 30 minutter ved 18-20°C. Etter inkubasjonen ble brønnene vasket tre ganger med "Tris/ Tween®-buffer og platene ble ristet tørre som tidligere.
Enzymsubstratet (100 yl) inneholdende orthofenylen-diamin (0,4 mg/ml) og hydrogenperoxyd (0,32 yl av en 30 %-ig W/V løsning/ml) i 0,2 M fosfat/citratbuffer med pH 6, ble til satt til hver brønn og inkubert i 30 minutter ved 18-20°C i mørket. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 50 yl av 2 M ^SO^ til hver brønn. Den optiske densitet av supernatantvæsken ble deretter avlest ved 4 92 nm i et spektrometer under dannelse av en A 4 92 verdi som er beslektet med mengden av humant immunoglobulin tilstedeværende i prøven tatt fra en gitt fusjonsbrønn.
Det cellulære innhold av positive brønner i mikro-titerplaten ifølge eksempel 1 D ble overført til Linbro-brønner^ for å ekspandere klonene. Etter ytterligere to uker ble super-natantvæskene fra brønnene undersøkt for å fastslå spesifikk antistoff-produksjon, under anvendelse av en passende bestemmelsesmetode, f.eks. en antigen spesifikk enzymimmuno-bestemmelsesmetode.
Det skal forståes at antistoff-prduksjonen av hybrid-cellen finner sted mer eller mindre kontinuerlig etter fusjon. Det er normalt nødvendig å klone hybridcellepopulasjonen som nedenfor beskrevet for å oppnå en stabil hybridcellelinje som produserer monoklonalt antistoff før produksjonen i stor måle-stokk og gjenvinning av antistoff foretas.
Så snart en monoklonal antistoff-produserende hybrid-celleklon er blitt etablert, kan denne dyrkes på hvilken som helst konvensjonell måte, f.eks. på plater eller i spinnkar, eller i dyr, supernatant eller kroppsvæsker fjernes ved egnede intervaller og. erstattes om nødvendig med friskt medium, og antistoff gjenvinnes fra supernatantvæsken ved hjelp av konvensjonelle teknikker for isolering av antistoff og separasjon, fra kulturmediumbestanddeler.
Egnede teknikker for isolering av antistoff og separasjon fra kulturmediumbestanddeler er velkjent og innbefatter f.eks. en eller flere av elektroforeser, forskjellige sentri-fugeringsteknikker, immunodiffusjon, molekyl eller affinitets-kromatografi, dialyse og fraksjonert utfelling.
Eksempel 2 - Fremstilling av hybridceller og humant monoklonalt antistoff
Prosedyren ifølge eksempel 1 ble gjentatt med det unntak at.det i stedet for RPMI 8226 cellelinje ble anvendt i fusjonstrinn D cellelinjen avledet fra den humane lymfoblas-toidcellelinje som beskrevet ovenfor under anvendelse av fusjonsprosedyren ifølge eksempel 1 B. DEP-behandlingen av denne tumor-liknende cellelinje (trinn 1 C) ble utelatt. Cellesuspensjonen ble til slutt fortynnet, til en konsentrasjon svarende til 10 /ml tumor-liknende celler i HAT medium.
Eksempel 3 - FarmasøY<_>isk_prepa<rat>_<o>g_<m>etode_for_behandlin2
Antistoff ble fremstilt ved metoden ifølge eksempel
1 eller eksempel 2, mot en valgt organisme eller antigen forbundet med en gitt sykdom. Etter rensing ved konvensjonelle teknikker ble antistoffimmunoglobulin eller produktet derav, slik som f. eks. F(ab^)2fragmenter tilberedt i en løsning i fysiologisk saltvann (0,147 M NaCl) med en valgt protein-konsentrasjon, f.eks. 3,0 % w/v. Løsningen ble deretter sterilisert ved filtrering og fylt på steril måte i ampuller som ble forseglet under vakuum.
En pasient som lider av en gitt sykdom ble gitt parenteralt med antistoffpreparatet beskrevet i dette eksempel i doser passende til infeksjonen som bestemt ved eksisterende laboratorieprosedyrer for påvisning og karakterisering av infekserende midler. Løsningene må være sterile, isotoniske med kroppsvæsker, fri for aggregater og pyrogen-fri.
I enkelte sykdommer forutsees det at andre admini-streringsmåter slik som f.eks. med aerosol til respirasjons-traktus eller med tidsutløsende kapsel til fordøyelseskanalen kan anvendes, hvor det er ønskelig å oppnå en terapeutisk effekt av antistoffet slik som i dette eksempel ved overflaten av en slimhinne hvor infeksjonen har kommet fra en organisme som er kjent for å ha sin sykdomsfremkallende effekt ved en slik plass. Spesifikke parenterale administreringsmetoder som kan nevnes innbefatter, intramuskulær, intraperitoneal, subc.utan og intravenøs injeksjon.
Eksempel 4 - Diagnostiske materialer og enzymimmuno-bestem-m§i§§§lr§§t
A. Antistoffløsning.
Antistoff erholdt fra eksempel 1 ble oppløst i
0,02 M "Tris": HC1 med pH 9.
B. Mikrotiterplate
Aliguoter (100 pl) av den ovenfor angitte antistoff-løsning fortynnet til 1:5000 - 1:500,000 ble utlevert i individuelle brønner i en mikrotiterplate og inkubert der over natten ved 4°C. Den etterfølgende dag ble platene vasket to ganger med "Tris" vaskebuffer, en gang med "Tris"-Tween®-buf-fer og en gang med "Tris" vaskebuffer og ble deretter ristet tørre og lagret.
C. Antistoffenzymkonjugat
Antistoff erholdt fra eksempel 1 ble kjedet med pepperrotperoxydase under anvendelse av glutarandehyd.
D. Enzymimmuno-bestemmelsesmetode
Den ovenfor angitte mikrotiterplate og konjugatet ble anvendt for å bestemme nærvær og innhold av anti-RhD antigen (celle-fri) ved å følge metoden beskrevet i eksempel 1.
Andre bestemmelser av bestemte antigener og materialer kan derfor lett erholdes ved sensibilisering av lymfocytene anvendt ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen mot det bestemte ønskede, alternative målantigen.
Claims (10)
1. Fremgangsmåte for dannelse av celler.som er istand til å produsere et monoklonalt antistoff mot et målantigen og andre lymfocytprodukter ved sammensmeltning av tumor-liknende celler og sensibiliserte lymfocyter under dannelse av hybridceller hver omfattende minst en lymfocyt og minst en tumor-liknende celle,
karakterisert ved at de tumor-liknende celler før fusjon med lymfocytene behandles slik at minst en enzymatisk aktivitet deri som er vesentlig for overlevelsen av cellene i fri tilstand fjernes, og at lymfocytene før fusjonen
med de tumor-liknende celler stimuleres til å bli aktive, hvoretter lymfocytene og de tumor-liknende celler bringes sammen under betingelser hvori enkelte av disse sammensmeltes under dannelse av hybridceller, det resulterende produkt som inneholder hybridceller og fri lymfocyt og fri tumor-liknende celler som ikke har blitt sammensmeltet suspenderes i et cellekulturmedium hvori hybridcellene fortsetter å ..vokse mens de ikke-sammensmeltede tumor-liknende celler dør som et resultat av den ovenfor angitte behandling av cellene for å fjerne en enzymatisk aktivitet, idet de ikke-sammensmeltede lymfocyter som har en normal kort levetid også dør.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at lymfocytene er B-lymfocyter blandet i et på forhånd bestemt forhold med leucocyter.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at de tumor-liknende celler i hvilket enzymatisk aktivitet som er vesentlig for deres overlevelse i :et bestemt cellekulturmedium er fraværende,
er erholdt ved behandling av normale tumor-liknende celler med en cytotoksisk substans som blokkerer produksjonen og/eller aktiviteten av minst et enzym som er vesentlig for den fortsatte overlevelse av cellene i det bestemte cellekulturmedium.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at de sammensmeltede cellehybridceller. som isoleres fra kulturmediet klones.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at hybridcellene stimuleres til å produsere antistoff ved at disse utsettes for et målantigen.
6. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at hybridcellene stimuleres til å produsere antistoffet ved at de utsettes for et mitogen.
7. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at de tumor-liknende celler er ikke-immunoglobulin-utskillende celler.
8. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at de sensibiliserte lymfocyter stimuleres til å bli aktive ved at de utsettes for målantigenet.
9. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at de sensibiliserte lymfocyter stimuleres til å bli aktive ved at de utsettes for et mitogen.
10. Hybridceller fremstilt ved fremgangsmåten ifølge krav 1.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB8102872 | 1981-01-28 | ||
| GB8118902 | 1981-06-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO820248L true NO820248L (no) | 1982-07-29 |
Family
ID=26278283
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO820248A NO820248L (no) | 1981-01-28 | 1982-01-27 | Fremgangsmaate ved fremstilling av monoklone antistoffer og celler istand til aa produsere slike antistoffer |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0057107A3 (no) |
| AU (1) | AU530649B2 (no) |
| DE (1) | DE57107T1 (no) |
| DK (1) | DK36482A (no) |
| IL (1) | IL64883A0 (no) |
| NO (1) | NO820248L (no) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6011889B2 (ja) * | 1981-10-28 | 1985-03-28 | 電気化学工業株式会社 | 継代可能なリンホカイン産生ヒトｔ細胞融合株及びその取得方法 |
| US4675295A (en) * | 1981-10-28 | 1987-06-23 | Denki Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Process for producing subculturable lymphokine-producing human T cell hybridomas |
| DE3379055D1 (en) * | 1982-06-09 | 1989-03-02 | Asahi Chemical Ind | Method for producing human antibody |
| EP0109861A3 (en) * | 1982-11-23 | 1986-05-14 | Bio-Response Inc. | Method for isolating cells |
| US4574116A (en) * | 1983-01-13 | 1986-03-04 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University | Methods and cell lines for immortalization and monoclonal antibody production by antigen-stimulated B-lymphocytes |
| IL70686A (en) * | 1983-01-20 | 1988-07-31 | Suntory Ltd | Mutant tumor cell lines for use in the preparation of hybridomas and the hybridomas obtained therefrom |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US4652522A (en) * | 1983-07-05 | 1987-03-24 | The University Of Pennsylvania | Continuous lymphocyte cell lines, their production and use |
| JPS6054687A (ja) * | 1983-07-19 | 1985-03-29 | スロ−ン−ケツタリング インステイテユ−ト フオ− キヤンサ− リサ−チ | ヒト モノクロ−ン抗体の製法 |
| JPS60231699A (ja) * | 1983-11-09 | 1985-11-18 | Aichiken | 正常及び悪性ヒト造血器細胞に対するモノクローナル抗体 |
| US4834975A (en) * | 1984-05-25 | 1989-05-30 | Genetics Corporation | Human monoclonal antibodies to serotypic lipopolysaccharide determinants on gram-negative bacteria and their production |
| EP0233289B1 (en) * | 1984-12-26 | 1993-03-10 | Teijin Limited | Hybridomas producing anti-pseudomonas aeruginosa human monoclonal antibody |
| US4677070A (en) * | 1985-04-26 | 1987-06-30 | Cetus Corporation | Pseudomonas aeruginosa exotoxin A antibodies, their preparation and use |
| CA1341552C (en) * | 1988-09-23 | 2007-10-02 | Kenneth Alonso | Method of producing human-human hybridomas, the production of monoclonal and polyclonal antibodies therefrom, and therapeutic use thereof |
-
1982
- 1982-01-27 NO NO820248A patent/NO820248L/no unknown
- 1982-01-27 EP EP82300418A patent/EP0057107A3/en not_active Withdrawn
- 1982-01-27 DK DK36482A patent/DK36482A/da not_active Application Discontinuation
- 1982-01-27 DE DE198282300418T patent/DE57107T1/de active Pending
- 1982-01-27 AU AU79882/82A patent/AU530649B2/en not_active Ceased
- 1982-01-28 IL IL64883A patent/IL64883A0/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IL64883A0 (en) | 1982-03-31 |
| DK36482A (da) | 1982-07-29 |
| EP0057107A2 (en) | 1982-08-04 |
| DE57107T1 (de) | 1983-04-14 |
| AU530649B2 (en) | 1983-07-21 |
| EP0057107A3 (en) | 1982-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0014519B1 (en) | Cell lines, process for preparing them and process for producing antibodies | |
| EP0043718B1 (en) | Improvements in or relating to cell lines | |
| JPH0198478A (ja) | ＩｇＧモノクローナル抗体−生産性ハイブリドマ | |
| NO820248L (no) | Fremgangsmaate ved fremstilling av monoklone antistoffer og celler istand til aa produsere slike antistoffer | |
| EP0038642B1 (en) | A monoclonal antibody against hepatitis b and its production, a hybridoma producing the monoclonal antibody and compositions containing it, the propagation of the hybridoma and the monoclonal antibody for use as an antiviral agent against hepatitus b and in isolating hepatitus b surface antigen from a sample | |
| JP2002507398A (ja) | ヒト・モノクローナル抗体およびそのための使用の開発 | |
| Lagace et al. | Parameters affecting in vitro immunization of human lymphocytes | |
| EP0093775A1 (en) | Monoclonal antibodies against brugia malayi | |
| BE1001517A5 (fr) | Heterohybridomes produisant des anticorps monoclonaux anti-rhesus d humains. | |
| US4816404A (en) | Late differentiation antigens associated with helper T lymphocyte function | |
| CA1213227A (en) | Human nonsecretory plasmacytoid cell line | |
| US5004694A (en) | Complement-dependent cytolytic anti-Trichomonas vaginalis monoclonal antibodies | |
| EP0093776A1 (en) | Monoclonal antibodies against schistosoma | |
| SU1721092A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L.-продуцент моноклонального антитела к гликопротеиду миелина головного мозга, угнетающего активность естественных киллеров человека | |
| JPS59186925A (ja) | カンジダ菌感染症治療用薬剤 | |
| RU1801117C (ru) | Способ получения монокло- нального антитела к моноклональному антителу к белку т4 лимфоцита человека, культивируемая клетка гибридомы jthfs-про- дуцентмоноклонального антитела к моноклональному антителу к белку т4 лимфоцита чело- века, культивируемая клетка гибридомы jti-if3-f5 - продуцент моноклонального антитела к моноклональному антителу к белку т4 лимфоцитачеловека, культивируемая клетка гибридомы jti-id7 - про- дуцент моноклонального антитела к моноклональному антителу к белку т4 лимфоцита человека, культивируемая клетка гибридомы jt2-n15 - продуцент моноклонального антитела к моноклональному антителу к белку т4 лимфоцитачеловека | |
| Price | Hybridoma technology | |
| EP0198039A1 (en) | $i(AOTUS) INTERSPECIES HYBRIDOMAS AND MONOCLONAL RECEPTORS PRODUCED THEREBY | |
| CS276448B6 (cs) | Způsob výroby permanentních buněčných lini-í živočišného i lidského původu | |
| Nicol | An Investigation of the Antigenic Characteristics of the Renal Glomerulus in the Rat | |
| JPS61152281A (ja) | 抗緑膿菌ヒト抗体を産生するマウス−ヒトハイブリド−マ及びその製造法並びにその使用方法 | |
| WO1986000928A1 (en) | Cell treatment | |
| JPS59186926A (ja) | アスペルギルス菌感染症治療用薬剤 | |
| JPH01500722A (ja) | 膵臓α‐アミラーゼに対する抗体の産生及び診断への使用 | |
| JPH03271235A (ja) | 抗カンジダ菌抗体分泌ハイブリドーマ |