NO752373L

NO752373L -

Info

Publication number: NO752373L
Application number: NO752373A
Authority: NO
Inventors: C Berger; D Farge; G Gros; M N Messer; C Moutonnier
Original assignee: Rhone Poulenc Ind
Priority date: 1974-07-01
Filing date: 1975-06-30
Publication date: 1976-01-05
Also published as: EG11675A; AU8264775A; AT337898B; SE7507481L; CH612976A5; ES439055A1; IL47611A; DE2529300A1; IE41420L; CH605996A5; GB1468102A; US4034090A; HU170059B; SU603342A3; IL47611A0; JPS5123291A; FI751930A; LU72859A1; ATA504675A; IE41420B1

Description

Foreliggende oppfinnelse angår fremgangsmåte for fremstilling av nye cefalosporinderivater med den generelle formel

samt salter derav.

I den generelle formel I betegner symbolet R-^et hydrogenatom, en acetoksygruppe, en azidogruppe eller en heterocyklyltio- eller heterocyklylkarbonyltiorest valgt blant følg-

ende grupper:

(1,3,4-"tiadiazol-2-yl) tio , eventuelt substituert med en alkyl-, alkoksy-, alkyltio-, alkylsulfonyl-, amino- eller acetylaminogruppe, (1,2 ,3,4--tetrazol-5-yl)tio , eventuelt substituert i 1-stilling med en alkyl-, hydroksyalkyl-, fenyl- eller hydroksyfenylgruppe eller i 2-stilling med en alkyl- eller hydroksyalkylgruppe, (1,2,4-triazol-3-yUtio, (4-metyl-l,3-tiazol-2-yl)tio, (3-metyl-l,2,4-tiadiazol-5-yl)tio og (1,2,3-tiadiazol-4-yl)karbo-nyltio, hvorved alkylgruppene og alkyIdelene består av rette eller forgrenede kjeder inneholdende 1-4 karbonatomer; og symbolet betegner en. karboksygruppe eller en gruppe med den generelle formel

der R^betegner et hydrogenatom eller en rett eller forgrenet

alkylgruppe inneholdende 1-4:karbonatomer, og R^betegner en rett eller forgrenet alkylgruppe inneholdende 1-4 karbonatomer eller en cykloheksylgruppe, hvorved gruppen

er en gruppe som er lett å eliminere på enzymatiske måter; eller R-^betyr en pyridinogruppe og R£betyr et karboksylation. Ifølge oppfinnelsen kan de nye forbindelsene med formelen I fremstilles ved at (l,3-ditiol-2-on-4-yl)eddiksyre med formelen eller et derivat av denne syre, slik som et halogenid,.. anhydrid eller et blandet anhydrid, omsettes med et cefalosporin med den generelle formel

der R-j^og Rg har ovenfor angitte betydning.

Når man anvender syren med formelen IV og Rp betyr en karboksygruppe, foretrekker man først å beskytte syregruppen i'forbindelsen med formelen V med en gruppe som er lett å eliminere, slik som en tert.butylgruppe. Vanligvis .gjennomføres kondensasjonen i et organisk oppløsningsmiddel slik som dimetyl-formam.id i nærvær av et kondensasjonsmiddel, slik som dicykloheksylkarbodiimid, ved en temperatur mellom 0 og 40°C, hvoretter man eliminerer beskyttelsesgruppen for syregruppen, f.eks. ved spalting i surt medium.

Når man anvender syren med formelen IV i form av et halogenid, anhydrid eller blandet anhydrid, er det ikke nødven-dig å beskytte syregruppen i forbindelsen med formelen V. Det er imidlertid mulig å anvende en'forbindelse med formelen V, hvis syregruppe på forhånd er beskyttet med en gruppe som er lett å eliminere, slik som en 2,2,2-trikloretylgruppe, hvilken man derefter eliminerer med zink i eddiksyre. Vanligvis gjennom-føres kondensasjonen i et organisk oppløsningsmiddel, slik som kloroform i nærvær av en syreakseptor, slik som en nitrogenholdig organisk base, f.eks. trietylamin, eller i et vannholdig organisk medium i nærvær av et alkalisk kondensasjonsmiddel, slik som natriumbikarbonat, hvorefter man eventuelt eliminerer beskyttelsesgruppen for syregruppen.

Når R^i forbindelsen med formel V betegner en gruppe med formelen II ifølge det som er angitt ovenfor, gjen-nomføres kondensasjonen vanligvis i et organisk oppløsningsmiddel slik som dimetylformamid, i nærvær av et kondensasjonsmiddel, slik som dicykloheksylkarbodiimid, ved en temperatur mellom 0 og 40°C.

Den forbindelse med'formelen V der.R-^betegner et hydrogenatom og Rg betegner en karboksygruppe, er 7-aniino-3-desacetoksycefalosporansyre (7-ADCA), hvilken kan fremstilles enten ved å gå ut fra en penicillin, f.eks. ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i det belgiske patent nr. 747*382, eller ved desacetoksylering av en forbindelse med formelen V, der R-^betegner en acetoksygruppe og R^ betegner en karboksygruppe, f. eks. ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i det belgiske patent nr. 779.<O>34. ;Den forbindelse med formelen V der R-^betegner en acetoksygruppe og Rg betegner en karboksygruppe, er 7-aminocefalosporansyre (7-ACA), hvilken f.eks. kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i det belgiske patent nr. 615.955 eller i det amerikanske patent nr. 3.239.394. ;De forbindelser med formelen V der R-^har ovenfor angitte.betydning foruten et hydrogenatom og en acetoksygruppe, og Rg betegner en karboksygruppe, eller der R-^betegner en pyridinogruppe og R^betegner et karboksylation, kan fremstilles ved at natriumnitrid, et 2-tiokso-l,3,4-'tiadiazolin, eventuelt substituert .med en alkyl-, alkoksy-, alkyltio-, alkylsulfonyl-, amino- eller acetylaminogruppe, et 5-tiokso-l,2,3,4-tetrazolin, eventuelt substituert i 1-stilling med en alkyl-, hydroksyalkyl-, fenyl- eller hydroksyfenylgruppe eller i 2-stilling med en alkyl- eller hydroksyalkylgruppe, 3-tiokso-l,2,4-triazolin, 4-me_ tyl-2-tiokso-l, 3-tiazolin, 3_me'tyl-5-'ti0kso-l, 2 ,4-tiadiazolin, (l,2,3-tiadiazol-4-yl)tiokarboksylsyre eller pyridin (alkylgruppene og alkyIdelene utgjøres.av rette eller forgrenede kjeder inneholdende 1-4 karbonatomer) omsettes med en forbindelse med ;den generelle formel V, der R-^betegner en acetoksygruppe og Rg betegner en karboksygruppe. ;Reaksjonen gjennomføres vanligvis ved oppvarming i vannholdig medium ved en temperatur mellom 40 og 80°C, fortrinnsvis i nærvær av en aktivator, slik som et alkalimetalljodid eller et alkalimetallsulfocyanid. ;De forbindelser med formelen V der.R-^ betegner et hydrogenatom, en acetoksygruppe, en azidogruppe eller en heterocyklyltio- eller heterocyklylkarbonyltiorest valgt blant gruppene (1,3,4-'tiadiazol-2-yl) tio , eventuelt substituert med en alkyl-, alkoksy-, alkyltio-, alkylsulfonyl-, amino- eller acetylaminogruppe, (1,2,3,4-tetrazol-5-yl)tio, eventuelt substituert i 1-stilling med en alkyl-, hydroksyalkyl-, fenyl-eller hydroksyfenylgruppe eller i 2-stilling med en alkyl- eller-hydroksyalkylgruppe, (1,2,4-triazol~3-yl)tio, (4-metyl-l,3-tiazol-2-yl)-tio, (3-metyl-l,2,4-tiadiazol-5-yl)tio og (1,2,3-tiadiazol-4-yl)-karbonyltio, hvorved alkylgruppene og alkyldelene utgjøres av rette eller forgrenede kjeder inneholdende 1-4 karbonatomer, og Rg betegner en gruppe med formelen II, der R^og R^har ovenfor angitte betydninger, kan fremstilles ved å gå ut fra en forbindelse med formelen V, der R-^har ovenfor angitte betydning og Rg betegner en karboksygruppe, ved tillempning av en hvilken som helst kjent måte for fremstilling av en ester ved å gå ut fra en syre uten at resten av molekylet påvirkes. ;Vanligvis omsettes et alkalimetallsalt eller et salt med et tertiært amin av en forbindelse med formelen V, der R-^ har den ovenfor angitte betydning<p>g R^betegner en- karboksygruppe, med et halogenid med den generelle formel ; ; der R^og R^har den ovenfor angitte betydning, og Y betegner et halogenatom, i et•inert oppløsningsmiddel, slik som dimetylformamid, ved en temperatur mellom 0 og 30°.C. ;Syren med formelen IV kan fremstilles ved at et kalium- eller natriumalkylxantat omsettes med et alkyl-}f-halogen-acetoacetat, hvorefter det oppnådde alkyl-4-alkyloksytiokarbonyl-tio-3-oksobutyrat ringsluttes i surt medium. ;2-Tiokso-l,3,4-tiadiazolin og 2-tiokso-5-alkyl-l,3, 4-tiadiazoliner kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i det japanske patent nr. 72 07371- 2-Tiokso-5-alkoksy-1,3,4-tiadiazbliner og 2-tiokso-5-alkyltio-l,3,4-tiadiazoliner kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som beskrives av K. Riif enacht," Heiv. Chim. Acta" 55, II78 (1972). ;2-Tiokso-5-alkylsulfony1-1,3,4-tiadiazoliner kan fremstilles ved at fosforpentasulfid omsettes med et 2-okso-5-alkylsulfonyl-l,3,4-tiadiazolin. Man arbeider vanligvis under nitrogenatmosfære i et oppløsningsmiddel, slik som xylen, ved reaksjonsblandingens tilbakeløpstemperatur. ;2-Okso-5-alkylsulfonyl-l,3,4-tiadiazoliner kan fremstilles ved oksydasjon av 2-okso-5-alkyltio-l,3,4-tiadiazoliner. Reaksjonen gjennomføres vanligvis i nærvær av hydrogenperoksyd i eddiksyre ved en temperatur nær 20°C. 2-Okso-5-alkyltio-l,3,4-tiadiazoliner kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet av K. Riif enacht, "Heiv. Chim. Acta", 55, II84 (1972). ;5-Amino-2-tiokso-l,3»4-tiadiazolin kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet av J. Sandstrom, "Acta Chem. Scand", 15, 1295 (I96D. ;5-Acetylamino-2-t'iokso-l,3»4-tiadiazolin kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i amerikansk patent nr. 2.937.182. ;5-Tiokso-l,2,3,4-tetrazolin kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som beskrives av M. Freund et al, "Chem. Ber. 34, 3110 (1901). ;5-Tiokso-l-alkyl-l,2',3,4-tetrazoliner, 5-tiokso-l-fenyl-l,2,3,4-tetrazolin og 5-tiokso-l-hydroksyfenyl-l,2,3,4-tetrazoliner kan fremstilles ifølge de fremgangsmåter som er beskrevet av R. Stolle et al, "J. Prakt. Chem.", 124, 26l (1930) ;og av R.E. Orth, "J. Pharm. Sei.", 52 (9), 909 (I963). ;5-Tiokso-l-hydroksyalkyl-l,2,3,4-tetrazoliner kan fremstilles ved at natriumnitrid tilsettes til et 2-(isotiocyan-atoalkoksy)tetrahydropyran. Vanligvis arbeider man i et organisk oppløsningsmiddel slik. som etanol, ved reaksjonsblandingens til-bakeløpstemperatur. ;2-(Isotiocyanatoalkoksy)tetrahydropyraner kan fremstilles ved at karbondisulfid omsettes med et 2-(aminoalkoksy)-tetrahydropyran i alkalisk medium. Reaksjonen gjennomføres vanligvis i nærvær av natriumhydroksyd ved reaksjonsblandingens ;tilbakeløpstemperatur. ;2- (Aminoalkoksy)tetrahydropyraner kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet av V.H. Maddox, r,J. Med. Chem.» 8, 230 (196.5) . ;5~Tiokso-2-alkyl-l,2,3,.4-'te'trazoliner°g 5-tiokso-2-hydroksyalkyl-l,2,3,4-tetrazoliner kan fremstilles ved at aluminiumbromid omsettes med et 5-bensyltio-2-alkyltetrazol eller med et 5-bensyltio-2-hydroksyalkyltetrazol• Man arbeider vanligvis i et organisk oppløsningsmiddel, slik som klorbensen ved en temperatur nær 0°C. ;5-Bensyltio-2-alkyltetrazoler og 5-bensyltio-2-hydroksyalkyltetrazoler kan fremstilles ved alkylering av 5~bensyltiotetrazol. Alkyleringen skjer vanligvis ved hjelp av et alkylhalogenid eller et halogenhydrin i vannholdig medium ' eller i et organisk oppløsningsmiddel, slik som acetonitril, ved reaksjonsblandingens tilbakeløpstemperatur, eller når alkyl-gruppen er en metylgruppe, ved hjelp av diazometan i et oppløs-ningsmiddel, slik som etyleter, ved en temperatur mellom 0 og 10°C. ;3- Tiokso-l,2,4-triazolin kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i "Org. Syn" 40>99• ;4- Metyl-2-tiokso-l,3-tiazolin kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet av T.G. Levi, "Gazz. Chim. Ital.", 6l, 719 (I93D. ;3-Metyl-5-tiokso-l,2,4-tiadiazolin kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i belgisk patent nr. 772.417. ;(1,2,3-tiadiazol-4-yl)tiokarboksylsyre kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet i fransk patent nr. 2.181.762. ;De forbindelser med formelen I der R-^har den ovenfor angitte betydning, bortsett fra et hydrogenatom og en acetoksygruppe, og R^betegner en karboksygruppe,. eller der R-^betegner en<p>yridinogruppe og Rg betegner et karboksylation, kan ifølge oppfinnelsen også fremstilles ved at natriumnitrid, et 2-tiokso-l,3,4-tiadiazolin, eventuelt substituert med en alkyl-, alkoksy-, alkyltio-, alkylsulfonyl-, amino- eller acetylaminogruppe, et 5-tiokso-l,2,3,4-tetrazolin, eventuelt substituert i 1-stilling med en alkyl-, hydroksyalkyl-, fenyl-eller hydroksyfenylgruppe, eller i 2-stilling med en alkyl-eller hydroksyalkylgruppe, 3-ti°kso-l,2,4-triazolin, 4-metyl-2-tiokso-l, 3-tiazolin, 3-metyl-5-"ti°kso-l, 2 ,4-t iadiazolin, (1,2,3-tiadiazol-4-yl)tiokarboksylsyre eller pyridin (alkylgruppene og alkyldelene utgjøres av rette eller forgrenede kjeder, inneholdende 1-4 karbonatomer) omsettes med en forbindelse med den. generelle formel I, der R-^betegner en acetoksygruppe og Rg betegner en karboksygruppe. ;Reaksjonen gjennomføres vanligvis under de be-tingelser som er angitt ovenfor for fremstilling av forbindelser med formelen V, der R-^og Rg har den ovenfor angitte betydning, ved å gå ut fra'en forbindelse med formelen V, der R-^betegner en acetoksygruppe og Rg betegner en karboksygruppe. ;De forbindelser med den generelle formel I, der R^har den ovenfor angitte betydning og Rg betegner en gruppe med. formelen II, der R^og R^har den ovenfor angitte betydning, kan ifølge oppfinnelsen også fremstilles ved forestring av en forbindelse med den generelle formel I, der R-^har den ovenfor angitte betydning og Rg betegner en karboksygruppe, hvorved man kan tillempe en hvilken som helst kjent fremgangsmåte for.fremstilling av en ester ved å gå ut fra en syre uten at resten åv molekylet påvirkes. ;Vanligvis omsetter man et alkalimétallsalt eller et salt med et tertiært amin av en forbindelse med formelen I ifølge ovenforstående definisjon med et halogenid med den generelle formel VI, der R^, R^og Y har den ovenfor angitte betydning. Man arbeider fortrinnsvis i et inert op<p>løsningsmid-del, slik som dimetylformamid, ved en temperatur mellom 0-og 30°C. ;De nye cefalosporinderivater med formelen I kan eventuelt renses ved tillempning av fysikalske metoder, slik som kromatografi eller krystallisasjon. ;De forbindelser med formel I der R^betegner en karboksygruppe, kan omdannes til metallsalter eller til addisjonssalter med nitrogenholdige baser ifølge kjente metoder. Disse salter kan fremstilles ved at en base av et alkalimetall eller et jordalkalimetall, ammoniakk eller et amin omsettes med en forbindelse med formelen I i et egnet oppløsningsmiddel, slik som en alkohol, en eter, en keton eller vann, eller ved en utbytningsreaksjon med et salt av en organisk syre. Det dannede salt faller ut, eventuelt etter konsentrering av oppløs-ningen, og det separeres ved filtrering, dekantering eller lyofilisering. ;De nye cefalosporinderivatene med formelen I oppviser meget interessante antibakterielle egenskaper. De har vist seg meget virksomme in vitro og in vivo mot såvel gram-positive som gram-negative bakterier. ;In vitro har de nye forbindelser vist seg virksomme i konsentrasjoner på mellom 0,001 og 20 ^ug/cm^ mot Staphylococcus-stammer som er følsomme for penicillin G (Staphylococcus aureus 2O9P, Staphylococcus aureus Smith) og mot Staphylococcus-stammer som er resistente mot penicillin G (Staphylococcus aureus MB 9), i konsentrasjoner på mellom 0,1 og 60 ug/cm^ mot Escherichia coli, stammen Monod, og i konsentra-sjo/er på mellom 0,5 og 150 ug/cm^ mot Klebsiella pneumoniae.. ;In vivo har de^nye forbindelser ved eksperiment-elt fremkalte infeksjoner hos mus vist seg å være virksomme mot Staphylococcus aureus Smith (følsom for penicillin G) i doser på mellom 0,01 og 10 mg/kg pr. døgn ved oral eller subkutan inngivelse, mot Staphylococcus aureus MB 9 (resistent mot penicillin G) i doser på mellom 5 og 100 mg/kg pr. døgn ved subkutan inngivelse, mot Escherichia coli i doser på mellom 0,5 °g 50 mg/kg pr. døgn ved subkutan inngivelse og i doser på mellom 1 og 25O mg/kg pr. døgn ved oral inngivelse, og mot Klebsiella pneumoniae i doser på mellom 100 og 500 mg/kg pr. døgn ved subkutan inngivelse. ;Av spesiell interesse er de forbindelser med formelen I der R-^betegner et hydrogenatom, en acetoksygruppe, en azidogruppe eller en heterocyklyltio- eller heterocyklylkarbonyltiorest valgt blant gruppene (l,3,4-'tiadiazol-2-yl)tio, eventuelt substituert med en alkylgruppe inneholdende 1 eller 2 karbonatomer, en metoksy-, metyltio-, metylsulfonyl-, amino-eller acetylaminogruppe, (1,2 , 3,4-'tetrazol-5-yl) tioeventuelt substituert i 1-stilling med en alkylgruppe inneholdende 1-4 karbonatomer, en hydroksyalkylgruppe hvis alkyldel inneholder 1 eller 2 karbonatomer eller' en fenylgruppe eller i 2-stilling med en metylgruppe, (1,2,4-triazol-3-yDtio, (4-metyl-l,3-tiazol-2-yl)tio, (3-metyl-l,2,4-tiadiazol-5-yl)tio og (1,2,3-tiadiazol-4-yl)karbonyltio, og Rg betegner en karboksygruppe eller en pivalo-yloksymetoksykarbonylgruppe , eller der R-^ bet egner, en pyridiniogruppe og Rg betegner et karboksylation. ;Nedenfor angitte forbindelser er spesielt aktive: 3-/Tl-metyl-l,2 , 3,4-tetrazol-5-yl)tiomety:y7-2-karboksy-7-/"U,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-l-azabicyklo/~4,2, Q7-2-okten; 3-j/"l-(2-hydroksyetyl)-1,2,3,4-tetrazol-5-yl7tiometylj-2-karboksy-7-/~(1,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten; 3-/~(5-amino-l,3,4-tiådiazol-2-yl)-tiometyl7-2-karboksy-7-/~(1,3»-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-l-azabicyklo/"4,2,07-2-okten; 3-/~'( 1-metyl-l, 2 ,3,4-tetrazol-5-yl)tiometyl7-2-pivaloyloksymetoksykarbonyl-7-/ (1,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-l-azabicyklo-/~4,2, Oj-2- okten; 3- /".(5-metyl-l,3,4-tiadiazol-2-yl)tiometyl7-2-karboksy-7-/"(1,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-l-a zabicyklo/~4,2, Oj-2-okt en; 3- (1-pyridiniometyl) -2-karboksylato-7-/~'( 1,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten. ;Oppfinnelsen skal illustreres ved følgende, ikke begrensende eksempler. ;Eksempel 1. Til en oppløsning av 7,04 g (1>3-ditiol-2-on-4-yl)-eddiksyre i 120 cm^ dimetylformamid setter man 13,12 g 3-acetoksy-7-amino-2-tert.butoksykarbonyl-8-okso-5~tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten og 8,96 g dicykloheksylkarbodiimid. Man omrører reaksjonsblandingen i 2 timer ved en temperatur nær 20°C,. hvorefter man separerer det dannede faste stoff ved filtrering. Man opptar filtratet i 400 cm^ etylacetat, vasker 2 ganger med 600 cm<J>destillert vann, og derefter med-250 cmJ av en mettet natriumbikarbonatoppløsning, derefter med 500 cmJ 0,5 ;N saltsyre og til slutt med 500 cm-^ destillert vann. Man tørker den organiske fase over natriumsulfat, behandler med avfargningskull og konsentrerer til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 18,6 g 3-acetoksymetyl-2-tert.butoksy-karbonyl-7-/~(1,3~ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten i amorf form. ;1U ;Man oppløser l8,5 g 3_acetoksymetyl-2-tert.but-oksykarbonyl-7-/<->(1,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-1- azabicyklo/~4,2 ,07-2-okten i 150 cm^ trif luoreddiksyre.■ Man lar det hele reagere i 15 minutter ved en temperatur nær 20°C, hvorefter man konsentrerer til tørr tilstand under et redusert trykk på'1 mm Hg. Til resten setter man 150 cm^ etylacetat. Til den derved oppnådde suspensjon setter man en mettet natrium-bikarbonatoppløsning inntil pH 8. Man dekanterer vannfasen og vasker denne med 100 cm^ etylacetat. Vannoppløsningen gjøres sur til pH 2 med 4N saltsyre i nærvær av 700 cm^ etylacetat. Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, behandles med avfargningskull og filtreres. Man konsentrerer til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 10,7 g av en rest som omkrystalliseres i 200 cm^ kokende metanol. Man oppnår herved 7>6 g 3-acetoksymetyl-2-karboksy-7-/~ (1,3-ditiol-2- on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-l-azabicyklo-/~4,2,07-2-okten. ;Z§7d°<=>+66,9° + 1,5° (c = 1, dimetylformamid), Analyse: ; 3-acetoksymetyl-7-amino-2-tert.butoksykarbonyl-8-okso-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-oktenen kan fremstilles ;ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet av R.J. Stedman, "J. Med. Chem.<1»>9, 444 (<1>966). ;(1,3,-Ditiol-2-on-4-yl)eddiksyren kan fremstilles på følgende måte. Til l6l g etyl-4-etoksytiokarbonyltio-3-okso-butyrat setter man under avkjøling i et isbad 500 cm^ svovelsyre (80 volum-$). Temperaturen stiger til 4'5°C Man oppvarmer derefter blandingen ved 80°C i 30 min. Den således oppnådde mørke-brune oppløsning avkjøles og helles i 2,5 1 destillert vann. ;Reaksjonsblandingen oppvarmes derefter under tilbakeløp i 1 time. Man avkjøler, ekstraherer 4 ganger med 500 cm<J>etylacetat, vasker de organiske ekstraktene med 500 crn-^ destillert vann og ekstraherer 3 ganger med 500 cirH av en mettet natriumbikarbonat-oppløsning. Man forener de basiske fraksjoner, vasker dem med 500 crrr etylacetat og surgjør vannfasen til pH 1 med 4 N saltsyre. Man ekstraherer 3 ganger med 500 cm^ etylacetat, vasker den organiske fase med 500 cm^ destillert vann,'tørker over magnesiumsulfat, behandler med avfargningskull og konsentrerer filt ratet til tørr tilstand under, et redusert trykk .på 20 mm Hg.-Man oppnår 96 g av et okerfarget fast stoff som man omkrystalliserer i 150 cm^ av en blanding av like volumdeler etylacetat og cykloheksan. Man oppnår herved 68,7 g (1,3_ditiol-2-on-4-yl)-eddiksyre i form av hvite krystaller med et smeltepunkt på 99°C. ;Etyl-4-etoksytiokarbonyltio-3~oksobutyratet kan fremstilles på følgende måte. En suspensjon av l60 g kalium-etylxantat i 2 1 etanol avkjøles i et isbad. Man tilsetter i løpet av 1 time en oppløsning av 209 g etyl-Y-bromacetoacetat i 500 crn-^ etanol. Man lar det hele reagere i 16 timer ved en temperatur nær 20°C, hvorefter man filtrerer den oppnådde suspensjon. Fellingen vaskes 2 ganger med 100 cm^ etanol, og derefter konsentrerer man filtratet til tørr tilstand under et redusert, trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 260 g av en brun olje, som kromatograferes på 2000 g silikagel. Man eluerer med 6 1 av en blanding av etylacetat og cykloheksan i et volumforhold på 5:95 og derefter med 10 1 av en blanding av etylacetat og cykloheksan i et volumforhold på 10:90. Disse eluater konsentreres under redusert trykk. Man oppnår herved l6l,2 g etyl-4-etoksytiokarbonyltio-3-oksobutyrat i form av en orangefarget olje. ;Etyl-^-bromacetoacetatet kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet av A.. Burger og G.E. Ullyot,"J. Org. Chem.", 12, 346 (1947). ;(1,3-ditiol-2-on-4-yl)eddiksyre kan også fremstilles på følgende måte. I en trehalskolbe med et volum på 4 1 oppløser man 620 g natriumisopropylxantat-dihydrat i 1500 cmJ q destillert vann. Til den oppnåodde oppløsning setter man 45O g nietyl-^-kloracetoacetat på en slik måte at temperaturen ikke overstiger 40°C Man omrører reaksjonsblandingen i 1 time, tilsetter 1500 cm^ etylacetat og omrører i 5 min. Den organiske ;■fase separeres, og vannfasen ekstraheres påny med ^ >00 crn-^ etylacetat. De organiske fraksjoner forenes, vaskes med 300 cm^ av en mettet vannoppløsning av natriumklorid, tørkes over l^O g magnesiumsulfat og konsentreres under et redusert trykk på 15 mm Hg. ;Resten, 765 g, tilsettes til 1500 cm^ 80 volum-$ svovelsyre på en slik måte at oppløsningens temperatur ikke overstiger ^ 0°C. Blandingen omrøres i 1 time, hvorefter den fortynnes ved tilsetning av 9300 cm^ destillert vann. Man oppvarmer deretter under tilbakeløp i 2,5 time. Reaksjonsblandingen avkjøles og ekstraheres 3 ganger med 1000 crn-^ etylacetat. De organiske fraksjoner forenes, vaskes med 200 cm<J>vann og ekstraheres 6 ganger med 700 cm^ av en mettet natriumbikarbonat-oppløsning. Vannfasene forenes og vaskes méd 500 cm^ etylacetat, hvorefter pH-verdien innstilles til 1 ved tilsetning av 4N saltsyre i nærvær av 2500 cm-^ etylacetat. Den organiske fasen separeres, og vannfasen ekstraheres påny med 500 cm^ etylacetat. De forenede organiske fraksjoner vaskes med 200 cm<J>av en mettet natriumkloridoppløsning, tørkes over 500 g magnesiumsulfat, filtreres i nærvær av 50 g avfargningskarbon og konsentreres under et redusert trykk på 15 mm Hg. Resten på 386 g omkrystalliseres i l800 cm^ av en blanding av etylacetat og cykloheksan i et volumforhold på 4:5-, Ef ter tørking oppnår man 28l g (1,3-ditiol-2-on-4-yl)eddiksyre i form av fløtefargede krystaller med et smeltepunkt på 100°C. ;Eksempel 2. Til en suspensjon av 35»2 g (1,3-ditiol-2-on-4-yl)-eddiksyre i 400 cm^ vannfri etyleter setter man en dråpe dimetylformamid. Man avkjøler i et isbad og tilsetter deretter dråpe for dråpe 34 cm^ oksalylklorid. Det inn-trer en heftig gassutvikling og blandingen blir klar. Man lar reaksjonsblandingen reagere i 1,5 timer, renser med nitrogen-gass og konsentrerer til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg ved en temperatur nær 20°C. Man oppløser den gule, partielt krystalliserte rest i 300 cm^ aceton og setter den oppnådde oppløsning i løpet av en tid på 1 time til en oppløs-ning som holdes ved 2°C, av 54>4g 7-aminocefalosporansyre og 37 g natriumbikarbonat i 800 cm^ destillert vann og 600 cm^ aceton. Man lar det hele reagere i l8 timer .ved en temperatur mellom 0 og 10°C, hvorefter man driver av acetonen under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man. vasker vannoppløsningen med- 500 cm-^ etylacetat, hvorefter man gjør det hele surt til pH 2 i nærvær av 500 cm^ etylacetat, ved tilsetning av 4^ saltsyre. Man filtrerer det hele gjennom "supercel", separerer den organiske fase, ekstraherer vannfasen 2 ganger med 250 cm^ etylacetat, forener de organiske fraksjoner og vasker disse to ganger med 250 cm-' destillert vann. Man tørker over magnesiumsulfat og damper derefter det hele inn til tørr tilstand under redusert trykk på 20 mm Hg. Resten omkrystalliseres i l80 cm-^ metanol. Man oppnår 32,7 g 3-acetoksymetyl-2-karboksy-7-/~(1,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-l-azabicyklo/~4)2,07-2-okten. ;/_ct_7D° = +69,8° + 1,3° (c = 1, dimetylformamid) ;Eksempel 3- Til en oppløsning av 23 g 7-amino-3-metyl-8-okso-2-(2,2,2-trikloretoksykarbonyl)-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten og 9>5cm-^ trietylamin i 300 cm^ kloroform, hvilken oppløsning holdes ved -10°C, setter man i løpet av 1' time en oppløsning av 13,2 g (1,3-ditiol-2-on-4-yl)acetylklorid i 110 cm^ kloroform. Man lar det hele reagere i 24 timer ved en temperatur mellom 0 og 10°C, og derefter driver man av kloro-formen under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man tar opp resten i 1 liter etylacetat, og man vasker først med 250 cm<J>0,1N saltsyre, derefter med 250 cm-^ av en mettet vannoppløsning av natriumbikarbonat og til slutt 2 ganger med 250 cm<y>vann. Den.organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, behandles med avfargningskull og filtreres. Filtratet konsentreres under et redusert trykk på 20 mm Hg til et volum på 100 cm^, hvorefter man tilsetter 1 liter isopropyleter. Det produkt som faller ut separeres ved filtrering. Man oppnår herved 27 g 3_metyl-8-okso-7-/"(l,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-2-(2,2,2-trikloret-oksykarbonyl)-5-tia-l-azabicyklo/~4 > 2,07-2-okten. ;Man oppløser 17 g 3-metyl-8-okso-7-/~(1,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-2- (2 ,2 ,2-trikloretoksykarbonyl)-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten i 120 cm^ dimetylformamid og 35 cm^ eddiksyre. Man avkjøler i et isbad,.tilsetter 20,8 g zinkpulver og omrører reaksjonsblandingen i 3>5timer. Derefter.filtreres reaks jonsblandingen. Til filtratet setter man 400 cm-^ etylacetat, og man vasker 2 ganger med tilsammen 400 cm^ vann. Den organiske fase ekstraheres 3 ganger med 200 cm<J>av en mettet natriumbikarbonatoppløsning. Den alkaliske oppløsning gjøres sur til pH 2,5 ved tilsetning av 4N saltsyre i nærvær av 400 cm^ etylacetat. Efter dekantering av den organiske fasen, ekstraherer man vannfasen 2 ganger med tilsammen 200 cm^ etylacetat. De organiske ekstrakter forenes og vaskes 2 ganger med tilsammen 200 cm-^ vann, tørkes over magnesiumsulfat, behandles med avfargningskarbon og filtreres. Filtratet konsentreres til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Den oppnådde resten omkrystalliseres i 100 crrr av en blanding av aceton og ;petroleter. Man oppnår 3>5g 2-karboksy-3-metyl-8-okso-7-/7(1, ;3-ditiol-2-on-4-yl)acetaarido7-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten. ;/~a_/<7>D°=+13l<0>±2° (c = 1, dimetylformamid) ;Analyse: ; ; (l,3-Ditiol-2-on-4-yl)acetylkloriden kan fremstilles på følgende måte. Til en oppløsning.av 35»2 g (l,3,ditiol-2-on-4-yl) eddiksyre i 500 cm-^ vannf ri. etylet er setter man 36 g oksalylklorid. Herved skjer det en svak frigjøring av hydrogen-klorid. Man tilsetter derefter 3 dråper dimetylformamid. ■ Gass-utviklingen blir meget hurtig og. skjer i løpet av 30 minutter. Man setter påny til 3 dråper dimetylformamid og rører i 30 minutter. En gul olje samles på reaksjonskolbens bunn. Man dekanterer og konsentrerer eterfasen til tørr tilstand under et redusert trykk (først 300 mm Hg og derefter 15 mm Hg). Den krystalliserte rest vaskes 3 ganger med 3Q0 cm-^ petroleter ved et kokepunkt på 40-65°C, og krystallene tørkes under et redusert trykk på 15 mm Hg. Man oppnår 34 g av et grått fast stoff, som man ;omkrystalliserer i /\. 60 cm^ av en .blanding av cykloheksan og tolueni et volumforhold på 40:6. Man oppnår herved 29 g (1,3_ ditiol-2-on-4-yl)acetylklorid i form av hvite krystaller med et smeltepunkt på 65°C. ;7-Amino-3-metyl-8-okso-2-(2,2,2-trikloretoksy-karbonyl)-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-oktenen kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet av R.R. Chauvette et al, "J. Org. Chem.", 36, 1259 (I97I). ;Eksempel 4- Til en oppløsning av 3 g 3-acetoksy-metyl-2-karboksy-8-okso-7-/~ (1,3_ditiol-2-on-4-yl) acetamido7'-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten og 0,588 g natriumbikarbonat i 60 cm^ vann setter man 0,871 g natriumnitrid, hvorefter man oppvarmer reaksjonsblandingen i 16 timer ved 50°C. Man avkjøler derefter reaksjonsblandingen og tilsetter 0,4 g natriumbikarbonat. Man ekstraherer 2 ganger med 40 cm-^ etylacetat. Man behandler vannfasen med avfargningskull og innstiller pH-verdien til 2 ved tilsetning av 6N saltsyre. Herved faller det ut et produkt som man ekstraherer med 240 crrr etylacetat.. De organiske ekstrakter tørkes over natriumsulfat og konsentreres derefter til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. ;Man oppnår 1,9 g av en rest som man omkrystalliserer i' 18 cm^ acetonitril. Man oppnår herved 1,29 g 3-azidometyl-2-karboksy-8-okso-7-/~(l,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,0/-2-okten som smelter ved l60°C efter en fornyet omkrystallisering 1 acetonitril. ;/"a_7^°<+>71,4° ±1,3° (c = 1, dimetylformamid) ;Eksempel 5. Man oppløser 7 g 3-acetoksymetyl-2-. karboksy-8-okso-7-/~ (1,3~ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-'tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten og 1,46 g natriumbikarbonat i 100 cm^ destillert vann. Man tilsetter en oppløsning av 1,92 g 2-tiokso-1,3,4-tiadiazolin:og 1,46 g natriumbikarbonat i 60 cm^ destillert vann, hvorefter man oppvarmer den oppnådde oppløsning til 60°C i 6 timer. Efter avkjøling surgjør man til pH 5,5 ved tilsetning av 4N saltsyre, og derefter ekstraherer man 2 ganger med 100 crrH etylacetat. De organiske ekstraktene fjernes. Man fortsetter surgjøringen helt til pH 2 i nærvær av 250 cm<v>etylacetat. Efter dekantering av den organiske' fase ekstraherer man vannfasen 2 ganger med tilsammen 200 cm^ etylacetat. Man vasker de forenede organiske ekstrakter 2 ganger med 200 cm-^ vann, tørker over magnesiumsulfat, behandler med avfargningskull og konsentrerer derefter til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår herved 4,5 g 2-karboksy-8-.okso-7-/~(l,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-3-/~(1,3,4-tiadiazol-2- yl)tiometyl7-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten solvatisert med ca. 10$ etylacetat. ;Man oppnår natriumsaltet av 2-karboksy-8-okso-7-/~(1, 3- ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-3-/~(1,3,4-tiadiazol-2-yl)tiometyl7 5-tia-l-azabipyklo/~4,2,07-2-okten ved å-oppløse tilsvarende syre i en 0,1N vannoppløsning av natriumbikarbonat og med efter-følgende lyofilisering. ;/"a_7p° = +26° +1° (c = 1, dimetylformamid) Analyse: ; ; Eksempel 6.. Man oppløser 8,8 g 3-acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/~ (1, 3_ditiol-2-on-4-yl) acetamido7-5-"tia-l-azabicyklo/~4,2,07-2-okten og 1,72 g natriumbikarbonat i 100 cm^ destillert vann. Man tilsetter en oppløsning av 2,7 g 2-metyl-5-tiokso-l,3,4-tiadiazolin og 1,72 g natriumbikarbonat i 100 cm^ destillert vann, hvorefter man oppvarmer den oppnådde reaksjons-oppløsning ved 60°C i 6 timer.' Efter avkjøling surgjør man til pH 5,5 ved tilsetning av 4-N saltsyre, hvorefter man ekstraherer 2 ganger med 100 cm^ etylacetat. De organiske ekstrakter fjernes. Man fortsetter surgjøringen helt til pH 2 i nærvær av 200 cm^ etylacetat. Efter dekantering av den organiske fase ekstraherer man vannfasen 2 ganger med tilsammen 200 cm^ etylacetat. Man vasker de organiske ekstrakter 2 ganger med 200'cm-^ vann, tørker over magnesiumsulfat, behandler med avfargningskarbon, filtrerer og konsentrerer derefter under et redusert trykk på 20 mm Hg inntil et sluttvolum på 25 cmJ. Det dannede faste stoff fjernes ved filtrering og vaskes derefter to ganger med ;25 cm^ isopropyleter. Efter tørking under et redusert trykk på 0,5 mm Hg oppnår man 5»5g 2-kårboksy-3-7~ (5-metyl-l,3,4-"tiadia-zol-2-yl)tiometyl7-8-okso-7-/~(l,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/~4,2 ,07-2-okten ;/~<a>_7D°<=>-<8>9»9° ± 1»5° (c=1, dimetylformamid) Analyse: ; ; Eksempel 7. Man oppløser 7 g 3-acetoksymetyl-2-karb-oksy-8-okso-7-/~(1,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/~4,2,072-okten og 1,46 g natriumbikarbonat i 100 cm^ destillert vann. Man tilsetter en oppløsning av 2,63 g 5~etyl-2-tiokso-1,3,4-tiadiazolin og 1,46 g natriumbikarbonat i 60 cmJo destillert vann, hvorefter man oppvarmer den oppnådde oppløsning til 60°C i 6 timer. Efter avkjøling surgjør man til pH 5,5 ved tilsetning av 4^ saltsyre, hvorefter man ekstraherer 2 ganger med 100 crn-^ etylacetat. De organiske ekstraktene fjernes. Man fortsetter surgjøringen helt til pH 2 i nærvær av 300 cm-^ etylacetat. Efter dekantering av den organiske fase ekstraherer man vannfasen 2 ganger med tilsammen 200 cm-^ etylacetat. - Man vasker de forenede organiske ekstrakter 2 ganger med 200 cm-^ vann, tørker over magnesiumsulfat, behandler med avfargningskarbon, filtrerer og konsentrerer derefter til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Den oppnådde rest omkrystalliseres i 100 cm^ metanol. Man oppnår herved 2 g 2-karboksy-3-/~ (5-etyl-l, 3,4-tiadiazol-2-yl)tiometyl7-8-okso-7-/".(l, 3-di-tiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-a zabicyklo/~4,2,07-2-okten med et smeltepunkt på 155°C« ;/"a_7p° =. -89<0><+>1,5° (c = 1, dimetylformamid) Analyse:'; ; Eksempel 8. Til 12,2 g natriumsalt av 3-acetoksy-metyl-2-karboksy-8-okso-7-/~(1,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten i 100 cm^ puffer (pH 6,5) setter man 4,43 g 5-metoksy-2-tiokso-l,3,4-tiadiazolin og 2,27 g natriumbikarbonat i 20 cm3-^ vann. - Man varmer opp under nitrogenatmosfære i 5 timer ved ^ 0°G. Man avkjøler derefter reaksjonsblandingen og behandler med avfargningskarbon. Man tilsetter 100 cm^ etylacetat, hvorefter.man under omrøring innstiller pH-verdien til 2,5 ved tilsetning av 5N saltsyre. Man separerer den organiske fase og ekstraherer vannfasen påny med l60 cm-^ etylacetat. Man tørker de forenede organiske ekstrakter over natriumsulfat, behandler med avfargningskarbon og konsentrerer til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 11,5 g av en rest som man river med 8 crn-^ acetonitril og 8 cm^ isopropyleter. Ved filtrering separeres 2,4 g av et fast stoff som omkrystalliseres i 375 cm-^ acetonitril og 400 cm^ isopropyleter. Man oppnår herved 1,52 g 2-karboksy-3-/~(5-metoksy-1,3,4-tiadiazol-2-yl)tiometyl7-8-okso-7-/~(l,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten med et smeltepunkt på 208°C. ;CaJ^ ° = -95° ±1.5° (c = 1, dimetylformamid) ;Eksempel 9. Til- 6,1 g natriumsalt av 3_acetoksymet-yl-2-karboksy-8-okso-7-/~ (1, 3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7"5-'tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten i 50 cm^ puffer (pH 6,5) setter man 2,21 g 5-metyltio-2-tiokso-l,3,4-tiadiazolin og 1,13 g natriumbikarbonat i 10 cm-3' vann. Man oppvarmer under en nitrogenatmosfære i 16 timer ved 50°C Man lar derefter reaksjonsblandingen kjølne, fortynner med 50 crn-^ vann og ekstraherer derefter med 200 crn^ etylacetat. De organiske ekstrakter kasseres. Man behandler vannfasen med avfargningskarbon, og man innstiller pH-verdien til 2 ved tilsetning av 6N saltsyre i nærvær av 80 cm^ etylacetat. Man separerer den organiske fase og ekstraherer påny vannfasen med 250 cm^ etylacetat. Man tørker de forenede organiske ekstrakter over natriumsulfat, behandler med avfarg ningskarbon og konsentrerer til tørr tilstand under et redus_ert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 3>7g av .en rest som man river i 15 cm^ acetonitril. Ved filtrering separeres et fast stoff som' man vasker med 6 cm^ acetonitril og 20 cm^ isopropyleter. Man oppnår 2,15 g av et produkt med et smeltepunkt på 156-159°C'Dette produkt omkrystalliseres i l60 cm^ acetonitril og 240 cm^ isopropyleter. Man oppnår herved 1,2 g 2-karboksy-3-/T5-metyl_ tio-1,3,4-tiadiazol-2-yl)tiometyl7-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten med et smeltepunkt på 160°C. ;C^ Jjy = ~ 112° ~ 2° (c = 1>dimetylformamid) ;Eksempel 10. Til en oppløsning av 1,01 g natriumbikarbonat i 10 crn-^ vann setter man 1,31 g 5-mesyl-2-tiokso-l,3,4-tiadiazolin, derefter 2,36 g 3-acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditioT-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten og til slutt 10,7 g kaliumtiocyanat. Man oppvarmer reaksjonsblandingen i 8 timer ved 60°C'. Man lar derefter reaksjonsblandingen kjølne, tilsetter 50 cm-3' vann og innstiller pH-verdien til 7 ved tilsetning av natriumbikarbonat. Man ekstraherer med 50 crn-^ etylacetat og fjerner det organiske ekstraktet. Man behandler vannfasen med avfargningskarbon, tilsetter 40 cmy 3 etylacetat og surgjør helt til pH 2 ved tilsetning av 4^ saltsyre. Man separerer den organiske fase og ekstraherer vannfasen med 120 cm-<3>' etylacetat. Man vasker de forenede organiske ekstrakter med 120 cm^ vann, tørker over natriumsulfat og'konsentrerer til tørr tilstand under et.redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 1,9 g av en rest som man river med 25 cm 3etyleter.. Ved filtrering separerer man et fast stoff som man vasker med 40 cm^ etyleter. Man oppnår herved 1,78 g av et pulverformig produkt.' ;Man oppløser 1,3^ g av dette produkt i 6 cm^ vann inneholdende 0,2 g natriumbikarbonat. Man tilsetter 40 cm3J etanol og oppvarmer til /\. 0°C. Ved avkjøling til 4°C krystalliserer det ut et produkt som man separerer ved filtrering. Man oppnår herved 0,58 g natriumsalt av 2-karboksy-3-/T5_mesyl-l,3, 4-tiadiazol-2-yl)tiometyl7-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)-acetamido7-5-'tia-l-azabicyklo/~4,2 ,07-2-okten. ;NMR-spektrum (D20: 6,85 (singlett, 1H) -H. i ditiol-ringen; 5,65 og 5,1 (dubletter, 1H) -H i (3-laktam; 4,4 (AB, 2H) ;-CHgS-; 3>70 (massiv, 4^) -CHgCO- og metylenprotoner i dihydro- ;tiazinringen; 3,55 (singlett, 3^) -CH^. ;5-Mesyl-2-tiokso-l,3,4-tiadiazolin kan fremstilles på følgende måte. Til 3,6 g 5-mesyl-2-okso-l,3,4-tiadiazolih i 150 cm^ xylen setter man 12 g fosforpentasulfid, hvorefter man oppvarmer under tilbakeløp i 26 timer under nitrogenatmosfære. Man lar derefter reaksjonsblandingen kjølne og dekanterer den organiske fase. Man ekstraherer den organiske fase med 500 cmv3 av en mettet vannoppløsning av natriumbikarbonat. Man vasker de forenede vannekstrakter med 80 cm-^ etyleter og surgjør til pH 2 ved tilsetning av konsentrert svovelsyre. Herved saltes det ut en olje som man ekstraherer med 500 crn-^ etylacetat. Man vasker de forenede organiske ekstrakter med 100 cmJ 3 vann, tørker over natriumsulfat og konsentrerer til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 2,2 g av en rest som'omkrystalliseres i en blanding av 3 cm o etyleter og 3 cm-3^ isopropyleter. Man oppnår herved 0,62 g 5_mesyl^2-tiokso-l,3,4-tiadia- . zolin med et smeltepunkt på 148°C. ;5-Mesyl-2-okso-l,3,4_tiadiazolin kan fremstilles på følgende måte. Til en oppløsning av 17,7 g 5_metyltio-2-okso-1,3,4-tiadiazolin i l80 cm^ eddiksyre setter man 27,6 cm^ hydrogenperoksyd i en slik konsentrasjon at ,1 volumdel tilsvarer 110 volumdeler oksygen. Man lar det hele reagere i 1 natt ved romtemperatur. Under et redusert trykk på 20 mm Hg konsentrerer man derefter reaksjonsblandingen til ca. 1/4 av det opprinne-lige volum. Herved krystalliserer det ut et produkt som separeres ved filtrering. Man oppnår 14,3 g av et produkt med et smeltepunkt på 159°C Dette produkt omkrystalliseres i 32 cm-^ etanol. Herved oppnår man 11,6 g 5_mesyl-2-okso-l,3,4-tiadiazolin med et smeltepunkt på l62°C. ;Eksempel 11. Til en oppløsning av 5,52 g natriumbikarbonat i 50 cm^ vann setter man 4,8 g 5~amino-2-tiokso-1,3,4-tiadiazolin, derefter 12,9 g 3_acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten og til slutt 58 g kaliumtiocyanat. Man oppvarmer reaksjonsblandingen i 7 timer til 60°C. Efterat reaksjonsblandingen er avkjølt fortynnes.den med 60 cm^. vann, og den oppnådde blanding vaskes med l80 cm^ etylacetat. Man tilsetter 100 cm^ etylacetat, og under omrøring innstilles pH-verdien til 3 ved tilsetning av 4N saltsyre. Herved faller det ut .et produkt som separeres ved filtrering. Det oppnådde faste stoff som har-en vekt.på 12,8 g, ekstraheres 6 ganger med 100 cm^ metanol. Ved konsentrering av metanolfiltratet til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg oppnår man 4>2 g av en rest som man regenererer ved omkrystallisering i en blanding av 85 cm^ etanol og 15 crn-^ vann. Man oppnår herved 2 g 3_/T5-amino-l , 3 > 4-tiadia-zol-2-yl)tiometyl7-2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)-acetamidoZ-S-tis-l-a zabicyklo/4,2,07-2-okten. ;/<_>cc_7d° = _103'5° ± 1»5(c = 1, dimetylformamid) Analyse: ; ; Eksempel 12. Man oppvarmer ved 60°C i 10 timer en blanding av 12,9 g ■3-ace't'Oksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Tl, 3~ ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-"ti3-l-3zatiicyklo/4,2,07-2-okten i..50 cm^ vann, 5>52 g natriumbikarbonat, 6,3 g 5-acetylamino-2-tiokso-l,3,4-tiadiazolin og 58 g kaliumtiocyanat. Man lar derefter reaksjonsblandingen kjølne og fortynner med 1 liter vann. Man filtrerer gjennom "supercel" og separerer derved et lett uoppløselig stoff som man vasker med 250 cm^ etylacetat som fjernes. Man innstiller pH-verdien til 2 ved tilsetning av 4N saltsyre i nærvær av 250 cm^ etylacetat. Ved filtrering separeres 6,3 g av et fast stoff, som tas opp i 200 crn^ kokende metanol. Man separerer et uoppløselig fast stoff ved filtrering, og man konsentrerer filtratet til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man vasker den oppnådde faste rest med 5 cm<oJ>metanol. Herved oppnår man 2,9 g 3_/T5-acetylamino-l,3,4-tiadiazol-2-yl)tiometyl7-2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-"tia-l-azabicyklo/4,2 ,0/-2-okten. ;/"cc_7q° = -108,5° + 2° (c = 1, dimetylformamid) ;Analyse: ; ; Eksempel I3. Til en oppløsning av 1,87 g natriumbikarbonat i 32 cm-^ vann setter man 2,24 g 5-t iokso-1,2 ,3, ^-- tetrazolin, 8,4 g natriumsalt av 3-acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/11,3.-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten og 36 g kaliumtiocyanat. Man oppvarmer reaksjonsblandingen i 4 timer og 30 minutter til 60°C. Derefter lar man reak sjonsblandingen kjølne, fortynner den til et volum på 300 - cm3 ved tilsetning av vann og innstiller pH-verdien til 2 ved tilsetning av 4-N saltsyre. Herved faller det ut et produkt som separeres ved filtrering og vaskes med 150 cm^ vann. Man oppnår herved en første sats på 5»7g fast stoff. Man ekstraherer filtratet med 400 cm^ etylacetat, vasker det organiske ekstrakt med, 100 cm^ vann, tørker over natriumsulfat og konsentrerer til tørr tilstand under et redusert trykk på 20. mm Hg. Man opp-løser resten i 50 cm^ tetrahydrofuran og setter den oppnådde oppløsning dråpevis til 1 liter isopropyleter. Herved faller det ut et produkt, som man separerer ved filtrering. Man oppnår således en andre sats på 2 g fast stoff. ;Man forener de to satsene av fast stoff og oppløser alt i 100 cm^ aceton. Til den oppnådde oppløsning setter man 15 g silisiumdioksyd, hvorefter aceton drives av under et redusert trykk på 20 mm Hg. Det oppnådde pulver satses på en kolonne inneholdende 30 g silisiumdioksyd. Man eluerer med 1,3 liter etylacetat og konsentrerer eluatet til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Den oppnådde rest på 6,2 g opp-løses i 50 cm^ tetrahydrofuran, og den oppnådde oppløsning settes dråpevis til 750 crn-^ isopropyleter. Herved faller det ut et produkt som separeres ved filtrering. Man oppnår 4>5g 2-karboksy-8-okso-7-/U,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-3-/I1,2, 3,4-te.trazol-5-yl)"tiometyl7-5-t ia-l-a zabicyklo/4,2 ,07-2-okt en.. ;/<->(X_7d<0>="46° ± x° (c = 1, dimetylformamid) Analyse: ; ; Eksempel 14. Man oppvarmer ved 50°C i 5 timer en blanding av 78 g natriumsalt av 3-acetoksymetyl-2-karboksy-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-8-okso-l-azabicyklo/4, 2,0/-2-okten oppløst i 250 cm^ vann, 24,1 g l-metyl-5-tiokso-1,2,3,4-tetrazolin, 17,5 g natriumbikarbonat og 336 g natrium-tiocyanat. Man lar reaksjonsblandingen avkjøles, fortynner den med 1 liter vann og innstiller pH-\rerdien til 2 ved tilsetning av 4N saltsyre. Herved faller det ut et produkt som separeres ved filtrering og omrøres med 1 liter vann. Man filtrerer på ;nytt og vasker med 1 liter vann. Man oppnår 39» 9 g av et pulverformig fast stoff. Man ekstraherer de forenede filtrater 3 ;ganger med 500 cm<J>etylacetat, vasker den organiske fase med 1 liter vann og ekstraherer den med 400 cm^ av en mettet vannopp-løsning av natriumbikarbonat. Man driver av.det i vannfasen oppløste etylacetat ved 40°C under et.vakuum på 20 mm Hg, og man innstiller pH-verdien på 2 ved tilsetning av 4N saltsyre. Herved faller det ut et produkt som separeres ved filtrering og omrøres med 1 liter vann. Man filtrerer påny og vasker med 500 cm^ vann. Man oppnår herved en andre sats på 11,5 g pulverformig fast stoff. ;Man forener de to satsene fast stoff og oppløser dem i 400 cm<v>aceton. Man tilsetter 100 g silisiumdioksyd og driver av aceton under redusert trykk på 20 mm Hg. Man satser det oppnådde pulver på en kolonne inneholdende 154 g silisiumdioksyd, og man eluerer med 8 liter etylacetat. Man konsentrerer eluatet til tørr tilstand under et redusert trykk, og man oppnår 45>6 g av en fast rest, som man oppløser i en oppløsning av 8,13 g natriumbikarbonat i 137 cm^ vann. Ved tilsetning av 3l8cm^ etanol krystalliserer det ut et produkt som separeres ved -filtrering. Man oppnår herved 22,1 g natriumsalt av 3-/Tl-metyl-l,2,3,4-tetrazol-5-yl)tiometyl7-2-karboksy-7-/Tl,3 -ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-8-okso-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten. ;</>~<a>7D°<=>+37,2° ±1° (c = 1, vann) ;Ana lyse: ; ; Eksempel 15. Man oppløser 12,2 g natriumsalt av 3_.acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3~ditiol-2-on-4-yl)acet-amido7-5-'tia-l-azadicyklo-/4,2,07-2-okten i 350 cm^ av en puf-ferløsning (pH 6,2) bestående av 47»1 g monokaliumfosfat, ;80,9 cm^ N natriumhydroksydoppløsning og vann. Til den op.pnåd-de oppløsning setter man 2,6 g natriumbikarbonat og derefter 4 g l-etyl-5-tiokso-l,2,3,4-tetrazolin, hvorefter man oppvarmer ;reaksjonsblandingen under omrøring til 60°C i 6 timer. Efter avkjøling . vaskes reaks jonsblandingen 2 ganger med 150 cm-^ etylacetat. Man surgjør til pH 2 ved tilsetning av 4N saltsyre i nærvær av 350 cm^ etylacetat. Efter dekantering av den organiske fase ekstraherer man vannfasen 2 ganger med tilsammen 150 ;cm^ etylacetat. De organiske ekstraktene forenes, vaskes to ganger med tilsammen J00 cm<J>vann, tørkes over natriumsulfat, behandles med avfargningskarbon, filtreres og konsentreres derefter til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. ;Man oppnår 11 g av en rest som oppløses i 200 cm^ etylacetat. Til den oppnådde oppløsning setter man 30 cm^ av 'en 0,6N butanol-oppløsning av natrium-2-etylheksanoat. Herved faller det ut et produkt. Man rører om i 1 time og separerer det faste stoff ved filtrering. Det faste stoff vaskes med 100 crn-^ etylacetat og derefter med 100 cm-' isopropyleter, hvorefter det tørkes under et redusert'trykk på 0,1 mm Hg. Man oppnår herved 5>2 g natriumsalt av 2-karboksy-3-/Tl-etyl-l,2,3,4-tetrazol-5-yl)tio-metyl7-8-okso-7-/H,3~ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten. ;/X7d<0>= +34,7° ± 1° (c = 1, vann) ;Analyse: ; Eksempel 16. Man oppløser 12 g' natriumsalt av 3-acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acet-amido7-5-tia-l-azat)icyklo/4,2,07-2-okten i 22 cm^ vann. Til den oppnådde oppløsning setter man 29 g kaliumtiocyanat, 2,45 g natriumbikarbonat, 4»6 g l-tert-butyl-5-tiokso-l,2,3,4-tetrazolin, hvorefter man oppvarmer reaksjonsblandingen til 60°C i 6 timer. Efter avkjøling fortynnes reaksjonsblandingen med 150 cm^ vann og vaskes med 200 cm^ etylacetat efter først å være blitt surgjort til pH 5,5 ved tilsetning av 4N saltsyre. Man surgjør til pH 1,5 ved tilsetning av 4^ saltsyre i nærvær av 350 cra^ etylacetat. Efter dekantering av den organiske fase ekstraherer man vannfasen 2 ganger med tilsammen 150 cmJ etylacetat. De organiske ekstraktene forenes, vaskes.2 ganger med tilsammen 300 cm^ vann, tørkes over natriumsulfat, behandles med avfargningskarbon, filtreres og konsentreres derefter til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppløs-er den.oppnådde rest i 60 cm^ tetrahydrofuran, hvorefter den oppnådde oppløsning helles i 600 cm<J>isopropyleter. Herved faller det ut et produkt som man isolerer ved filtrering og tørker under et redusert trykk på 0,1 mm Hg. Man oppnår herved 4,5 g 2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-3- /Tl-tert-butyl-1,2,3,4~tetrazol-5-yDtiometyl/-5-tia-l-azabicyklo/4,2 ,07-2-okten. ;/"a_7<20>= -64,2°'+ 1,2° (c = 1, dimetylformamid) Analyse: ; ; Eksempel 17. Man oppvarmer til 60°C i 4 timer og 30 minutter en blanding av 14,2 g natriumsalt av 3-acetoksymetyl-2- karboksy-8-okso-7-/H, 3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,0/-2-okten oppløst i 55 cm^ vann, 5,5 g l-(2-hydroksyetyl)-5-tiokso-l,2,3,4-tetrazolin, 3,1°" g natriumbikarbonat og 6l g kaliumtiocyanat. Man lar reaks jonsblandingen ;3 ;kjølne, fortynner med 250 cmv vann og gjør det hele surt til pH 2 ved tilsetning av 4N saltsyre. Man ekstraherer med 2 liter etylacetat. De organiske ekstrakter vaskes med 200 cm^ vann,, tørkes over natriumsulfat og konsentreres til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man løser resten i 100 cm^ tetrahydrofuran, hvorefter man dråpe for dråpe tilsetter den oppnådde oppløsning til 2 liter isopropyleter. Herved faller det ut et produkt som man separerer ved filtrering. Det oppnådde pulverformige faste stoff (12 g) oppløses i 100 cm^ aceton. ;Til den oppnådde oppløsning setter man 10 g silisiumdioksyd, hvorefter man driver av acetonet under et redusert trykk på 20 ;mm Hg. Man satser det oppnådde pulver på en kolonne av 15 g silisiumdioksyd. Man eluerer med 500 crn^ etylacetat og konsentrerer eluatet til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 4,1 g av.en rest som oppløses i 50 cm^ tetra- \ hydrofuran. Den oppnådde oppløsning settes dråpe for dråpe til 750 cm^ isopropyleter. Herved faller det ut et produkt som separeres ved filtrering. Man oppnår herved 3,4 g 2-karboksy-3- j/I-(2-hydroksyetyl)-1,2,3,4-tetrazol-5-yl7tiometylj-8-okso-7-/Tl,3^ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten. ;/"a_7<20>= -72° + 1° (c 1, dimetylformamid) ;Analyse: ; ; 1- (2-Hydroksyetyl)-5-tiokso-l,2 ,3 ,4-"tetrazolin kan fremstilles på følgende måte. Til en suspensjon av 28,6 g nat- ;riumnitrid i /\. 00 cm<J>tilbakeløpskokende etanol setter man i _ løpet av 30 minutter 55 g 2-(2-isotiocyanatoetoksy)tetrahydro-pyran mens en strøm av karbondioksyd ledes gjennom reaksjons-mediet. Man lar reaksjonsblandingen reagere under tilbakeløp i 6 timer, hvorefter man lar blandingen stå natten over ved ca. 25°C. Det suspenderte faste stoff separeres ved filtrering, ;og filtratet konsentreres til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Resten tas opp i 200 crri^ etyleter. Herved faller det ut et produkt som separeres ved filtrering. Man oppnår 33>5 g av et fast stoff som man oppløser i 800 cm^ metanol. Man surgjør den oppnådde oppløsning ved å lede en strøm av hydro-genkloridgass gjennom oppløsningen under omrøring i 1 time. Man separerer'et fast stoff ved filtrering og konsentrerer filtratet til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 22,4 g av en rest som omkrystalliseres i l80 cm^ av en blanding av like volumdeler acetonitril og 1,2-dikloretan. Man oppnår herved 9,7 g 1-(2-hydroksyetyl)-5-tiokso-l,2,3,4-tetrazolin med et smeltepunkt på 139°C ;2-(2--Isotiocyanatoetoksy)tetrahydropyran kan fremstilles på følgende måte. Til 52,5 g karbondisulfid setter man en oppløsning av 27,6 g natriumhydroksyd i 100 cm^ vann mens temperaturen holdes under 10°C. I løpet av 15 minutter tilsetter man derefter dråpevis 99,7 g 2-(2-åminoetoksy)tetrahydro-pyran. Man oppvarmer under tilbakeløp i 4 timer. Man lar deretter reaks jonsblandingen kjølne til /\. 0°C. Man holder reaks jonsblandingen ved denne temperatur og tilsetter 74,5 g etylklor-formiat dråpevis, hvorefter man lar det hele reagere over natten. Man ekstraherer 2 ganger med 200 cm^ metylenklorid, forener met-ylenkloridekstraktene og vasker dem med 200 crrr vann. Man tør-ker over natriumsulfat, behandler med avfargningskarbon og konsentrerer til tørr tilstand under et. redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 123,7 g av en oljeaktig rest som man destillerer under redusert trykk. Herved oppnår man 55,7 g 2-(2-isotiocya-natoetoksy ) tetrahydropyran med et kokepunkt på 83-93°C ved 0,3 mm Hg. ;Eksempel l8. Man oppløser 10 g natriumsalt av 3-acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3_ditlol-2-on-4-yl)acet-amido7-5-'tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten i 51 cm^ vann. Til den oppnådde oppløsning setter man 60 g kaliumtiocyanat, 2,24 g nat riumbikarbonat, 4,75 g 1-f enyl-5'-tiokso-l, 2 ,3,4-tetrazolin,_ hvoreftér man oppvarmer reaksjonsblandingen til 60°C i 8 timer. Efter avkjøling fortynnes reaks jonsblandingen med 250 cm-^ vann og vaskes med 200 cm h^ etylacetat efter at man først har surgjort til pH 5,5 ved tilsetning av 4N saltsyre. Man surgjør til pH 1,5 ved tilsetning av 4^ saltsyre i nærvær av 100 cm-^ etylacetat. Efter dekantering av den organiske fase ekstraherer man vannfasen 4 ganger med tilsammen 400 crn-^ etylacetat. De organiske ekstrakter forenes, vaskes 3 ganger med tilsammen 300 cm<J>0,1N saltsyre og derefter 2 ganger med tilsammen 300 cm-^ vann, tørkes over natriumsulfat, behandles med avfargningskarbon, filtreres og konsentreres til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man- oppløser den oppnådde rest i 50 cm^ tetrahydrofuran,hvorefter man setter den oppnådde oppløs-ning til 1 liter isopropyleter. Herved faller det ut et produkt som man isolerer ved filtrering og tørker under et redusert trykk på 0,1 mm Hg.. Man oppnår 5,4 g 2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-3-/Tl-fenyl-l,2,3,4-tetra-zol-5-yl)tiometyl/-5-tia-l-azabicyklo/4,2,0/-2-okten. ;/"a_7<20>= -17,4° + 0,7° (c = 1, dimetylformamid) Analyse: ; ; E_ ksempe_ l 19» Man oppløser 6,1 g natriumsalt av 3~acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/H,3-ditiol-2-on-4-yl)acet-amido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,Q7-2-okten i. 20 cm^ vann. Til den oppnådde oppløsning setter man 26,6 g kaliumtiocyanat, 1,38 g natriumbikarbonat, 1,9 g 2-metyl-5-ti-okso-l, 2 ,3,4-tetrazolin, hvorefter man oppvarmer reaksjonsblandingen til 60°C i 5 timer. Efter avkjøling fortynnes reaksjonsblandingen med 100 cmv vann, hvorefter man surgjør til pH 5,8 ved tilsetning av 4N saltsyre og vasker med 50 cirH etylacetat. Vannfasen surgjøres til' pH ;1,6 ved tilsetning av 4N saltsyre i nærvær av 200 cm^ etylacetat. Efter dekantering av den organiske fase ekstraherer man vannfasen 2 ganger med tilsammen 200 cm-' etylacetat. De organiske ekstrakter forenes, vaskes 2 ganger med tilsammen 140 crrH 0,1N saltsyre og derefter 2 ganger med tilsammen 200 cm^ vann, tørkes over natriumsulfat, behandles med avfargningskarbon, filtreres og konsentreres til tørr tilstand under et ;redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppløser den oppnådde rest i 25 crn-^ tetrahydrofuran, hvorefter man setter den oppnådde opp-løsning dråpevis til ^ 00 cm<y>isopropyleter. • Herved faller det ut et produkt som man isolerer ved filtrering og tørker under et redusert trykk på 0,1 mm Hg. Man oppnår 5,1 g 2-karboksy-3-/T2-metyl-l,2,3,4-tetrazol-5-<y>l)tiometyl7-8-okso-7-/Tl,3-di-tiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azat)icyklo/4,2 ,07-2-okten. ;/~<a>_/D°<=>-63,4° ± 1,2° (c = 1, dimetylformamid) Analyse: ; ; 2-Metyl-5-tiokso-l,2,3,4-tetrazolin kan fremstilles på følgende måte. Man oppløser 6 g 5-bensyltio-2-metyltetrazol i 10 cm^ klorbensen, hvorefter man setter den oppnådde oppløsning til en oppløsning på 11,3 g aluminiumbromid i 25 crn-^ klorbensen ved 0°C. Man omrører i 1 time ved 0°C og derefter i 24 timer ved ca.'25°C. Man avkjøler derefter i et is-3 '3 bad, tilsetter 20 cm^ vann og ekstraherer 2 ganger med 100 c.m-^ eter. De organiske ekstraktene forenes og behandles 2 ganger med tilsammen 100 cm^ av en mettet natriumbikarbonatoppløsning. Eterfasen fjernes. Vannfasen gjøres sur og ekstraheres 2 ganger med 100 cm-^ eter. Ekstraktene forenes, tørkes over natrium-sulf at, behandles med karbon og filtreres. Filtratet konsentreres til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 2,5 g 2-metyl-5-tiokso-l,2,3,4-tet^azolin i form av en olje som stivner. ;NMR-spektrum (CDCl^): 4,12 (s, 1H) -SH; 4,42 (s, 3H) ;5-Bensyltio-2-metyltetrazol kan fremstilles på følg-ende måte. Man suspenderer 10 g 5-bensyltiotetrazol i 80 cm^ eter. Under omrøring og ved en temperatur under 10°C tilsetter man en eteroppløsning av diazometan. Det suspenderte materiale oppløses herved. Man fortsetter tilsetningen helt til fullstendig oppløsning og til man oppnår en bestandig lett gulfarg-ing. Derefter omrører man i ytterligere 1 time. Man vasker eterfasen med i tur og orden 100 cm^ vann, 20 cm^ av en mettet natriumbikarbonatoppløsning, 100 cm-' vann, 20 cm-' /\ N saltsyre og 100 cm^ vann. Man tørker over natriumsulfat og damper av oppløsningsmidlet under et redusert trykk på 0,1 mm Hg. Man ;oppnår 9>8 g av en rest som kromatograferes på 150 g silisiumdioksyd. Man eluerer med i tur og orden 800 cm-^ cykloheksan, 400 cm-^ av en blanding av etylacetat og cykloheksan i et volumforhold på 1:19 og 1400 cm^ av en blanding av etylacetat og cykloheksan i et volumforhold på 1:9* Ved å konsentrere det oppnådde eluat under et redusert trykk på 20 mm Hg oppnår man 6,3 g 5-bensyltio-2-metyltetrazol i form av en fargeløs olje. Man fortsetter derefter elueringen med 400 cm-^ av en blanding av like volumdeler etylacetat og cykloheksan. Efter fordamping av oppløsningsmidlet i det oppnådde eluat under et redusert trykk på 20 mm Hg oppnås 2,9 g 5-bensyltio-l-metyltetrazol i form av en fargeløs olje.

NMR-spektrum (CDCl^): (s, 2H) -CHg-; 7,42 (m, 5H) -CgH^.

5-Bensyltiotetrazol kan fremstilles ifølge den fremgangsmåte som er beskrevet av E. Lieber, "J. Org. Chem.", 26, 4472 (1961)-'.

Eksempel 20. Til 12,9 g 3_acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia_l-a zabicyklo/4,2,07-2-okten i 250cm^ puffer (pH 6,4) setter man 5,55 g natriumbikarbonat og 3,63 g 3-ti°kso-l,2,4-triazolin.. Man oppvarmer til 60°C i 7 timer. Efterat reaksjonsblandingen er av-kjølt tilsetter man 1 g natriumbikarbonat og vasker med 250 cm-^ etylacetat, som kasseres. Man behandler vannoppløsningen med avfargningskarbon og gjør det hele surt til. pH 2 ved tilsetning av 4N saltsyre i nærvær av 200 cm-^ etylacetat. Man separerer den organiske fase og ekstraherer vannfasen med.750 cm<J>etylacetat. Man tørker de forenede organiske ekstrakter over nat-riumsulf at, behandler med avfargningska.rbon og konsentrerer til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 5,5 g av en rest som man river med 25 cm<J>acetonitril. Man separerer det faste stoff ved filtrering og vasker det med 25 cm^ acetonitril og 20 cm-^ isopropyleter. Man oppnår herved 2,9 g 2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-3-/Tl,2,4-triazol-3-yl)tiometyl7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten som smelter ved 227°C under spalting.

/~<a>_7r)<0><=>"74'9°~1'4° (°= 1»dimetylformamid) Analyse:

Eksempel 21. Man oppløser'7>7g 3-acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/T'l, 3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-t:i-a-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten i 100 cm^ destillert vann inneholdende 1,64 g natriumbikarbonat. Man tilsetter en oppløsning av 2,76 g 4-metyl-2-tiokso-l,3-tiazolin i 75 cm^ destillert vann inneholdende 1,64 g natriumbikarbonat, hvorefter man oppvarmer den oppnådde oppløsning til 60°C i 6 timer. Efter av-kjøling surgjør man til pH 5,5 ve<^ tilsetning av 4^ saltsyre, hvorefter man ekstraherer med 100 cm^ 3 etylacetat som kasseres. Man fortsetter surgjøringen til pH 2 i nærvær av 300 crrH 3 etylacetat. Efter dekantering av den organiske fase ekstraherer man vannfasen 2 ganger med tilsammen 200 cm3^ etylacetat. Man vasker de organiske ekstrakter 2 ganger med 200 cm^ 3 vann, tør-ker over magnesiumsulfat, behandler med avfargningskull, filtrerer og konsentrerer derefter til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppløser den oppnådde rest i■30 cm^ metanol, hvorefter man setter den oppnådde oppløsning til 200 cm^ isopropyleter. Herved faller det ut et produkt som man isolerer ved filtrering. Man oppnår 2 g 2-karboksy-3-/T4-metyl-l,3-tiazol-2-yl)tiometyl7-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido/-5-tia-l-a zabicyklo/4,2,0/-2-okten.

CaJY} ° = -?2° ±-4° (c = 1, dimetylformamid) Analyse:

Eksempel 22. Til en oppløsning av 3,65 g 3-metyl-5-tiokso-l,2,4-tiadiazolin og 2,33 g kaliumbikarbonat i 30 cm3v vann setter man 10 g natriumsalt av 3-acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Il,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido/-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten og 40 g kaliumtiocyanat. Den oppnådde blanding oppvarmes til 60°C. Efter 2 timer begynner det å dannes en utfelling og denne utfelling blir mer og mer rikelig. Reaksjonsblandingen avkjøles til 0°C efter 5 timers oppvarming og filtreres derefter. Den oppnådde hvite utfelling suspenderes i 50 cm^ destillert vann og 100 cm^ etvlacetat. Man surgjør derefter til pH 1 ved tilsetning av 4N saltsyre. Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres og dampes inn. Resten på 5,5 g suspenderes i 50 cm^ destillert vann, hvorefter man tilsetter 0,95 g natriumbikarbonat. Den- oppnådde oppløs- ning konsentreres til tørr tilstand under et redusert trykk på 15 mm Hg, og den oppnådde rest omrøres efter oppmaling med 25 cm^ destillert vann ved 80°C. Suspensjonen avkjøles til 0°C og filtreres, og det oppnådde hvite faste stoff tørkes. Man oppnår herved 2,1 g natriumsalt av 2-karboksy-3-/T3-metyl-l,2,4-tiadiazol-5-yl)tiometyl/-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acet-amido/-5-'tia-l-azabicyklo/4,2,0/-2-okten i form av et hvitt pulver.

a_720 = -25° +1° (c = 1, dimetylsulfoksyd) Analyse:

Eksempel 23. Man tilsetter 4,9 g (1,2,3-tiadiazol-4-yl)tiokarboksylsyre til en oppløsning av 2,85 g natriumbikarbonat i 50 craJ destillert- vann. Til den oppnådde gule opp.-løsning setter man 12,6 g natriumsalt av 3-acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido/-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten og 54 g kaliumtiocyanat, hvorefter man oppvarmer reaksjonsblandingen under nitrogen til 60°C i 4.5 timer. Efter avkjøling fortynnes oppløsningen til 250 cm^ og surgjøres til pH 2 ved tilsetning av 4N saltsyre. Den dannede beigefargede utfelling- separeres ved. filtrering, vaskes 2 ganger med 100 cm^ vann og suspenderes i 100 cm^ vann. Man ekstraherer derefter med 200 cm J etylacetat. De to fasene filtreres gjennom "supercel". Den organiske fase separeres, tørkes over natriumsulfat og konsentreres under et redusert trykk på 20 mm Hg. Resten rives opp i 100 crri^ etyleter, hvoretter man filtrerer. Man oppnår 10 g av et fast stoff som kromatograferes på 60 g silikagel. Man eluerer med etylacetat og samler opp fraksjoner på 50 crn-^.

Efter l6 timer gir fraksjonene 2 og 3 en krystallinsk utfelling som separeres ved filtrering og tørkes. Man oppnår herved 3,1 g 2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acet-amido7-3-/H,2,3-tiadiazol-4-yl)karbonyltiometvl7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten.

/~ cc_ 7q° = -61,5° + 1,5° (c = 1, dimetylformamid)

Analyse:

Eksempel 24. Til 22 g 3-acetoksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Tl, 3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-'tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten, 4,35 g natriumbikarbonat og 99,5 g kaliumtiocyanat setter man 50 cm^ vann og 8,3 cm^ pyridin. Efter om-røring oppnår man et homogent sirupslignende medium, hvis pH-verdi innstilles til 6,5 ved tilsetning av konsentrert fosfor-syre. Man oppvarmer til 60°C i 5 timer. Efter avkjøling fortynner man reaksjonsblandingen med 350 cmJ 3 destillert vann og vasker 3 ganger med tilsammen 300 cm. J kloroform. De siste sporene av kloroform i vannfasen fjernes under et redusert trykk på 20 mm Hg, hvorefter man behandler med avfargningskarbon, filtrerer gjennom "supercel" og avkjøler i et isbad. Man'surgjør til pH 2 ved tilsetning av 4N saltsyre mens temperaturen holdes under 5°C Efter utfelling omrører man i 1 time under fortsatt avkjøling i isbadet. Derefter vasker man to ganger ved dekantering med 1 liter isvann. Man isolerer fellingen ved filtrering og vasker den 3 ganger med tilsammen 300 cmJ<3>isvann. Det oppnådde fuktige faste stoff suspenderes i 100 cm^ vann, hvorefter man tilsetter 100 cm^ av en 25%-ig oppløsning av "Amerlite LA 2" i metylisobutylketon.. Man om-rører helt til fullstendig oppløsning av det faste stoff, hvorefter man dekanterer den organiske fase som kasseres. Man ekstraherer vannfasen 2 ganger med tilsammen 150 cm-^ av en 25^-ig oppløsning av "Amberlite LA 2" i metylisobutylketon,

derefter med 100 cm^ etylacetat og til slutt 3 ganger med tilsammen 300 cm^ dietyleter. Man damper av vannet under et redusert tykk på 20 mm Hg ved 40°C. Man oppnår en olje som efter rivning i 150 cm<J>aceton gir et hvitt fast stoff, som separeres ved filtrering. Den oppnådde forbindelse vaskes 3 ganger med tilsammen 150 cm^ aceton og tørkes derefter under et redusert trykk på 0,5 mm Hg. Man oppnår 11,7 g 2-karboksylato-8-okso-7-/H,3-ditlol-2-on-4-yl)acetamido7-3-(1-pyridiniometyl)-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten.

Man krystalliserer den oppnådde forbindelse ved å arbeide.på følgende måte. Man oppløser 9 g av forbindelsen i 10 cm-^ vann og tilsetter derefter 10 cm<J>metanol dråpe for dråpe. Man oppnår en oppløsning som først blir grumset og^derefter avsetter en utfelling. De dannede krystaller separeres ved filtrering, vaskes 2 ganger med tilsammen 10 cm-3' metanol og derefter med 50 cm<J>isopropyleter. Efter tørking under et redusert trykk på 0,5 mm Hg oppnår man 5 g 2-karboksylato-8-. okso-7-/H,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-3_(1-pyridiniometyl)-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten, som smelter ved 220°C under spaltning.

r<a>jl°=+52,6°<+>3,5° (c =1, vann).

Eksempel 25. Til en suspensjon av 9,9 g kaliumsalt av 3_aceto ksymetyl-2-karboksy-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)-acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten i 200 cm^ dimetylformamid avkjølt til 0°C setter man 5,62 g jodmetylpivalat.

Man omrører det hele i 15 minutter ved 5°C»hvorefter man heller den lett grumsete blanding i en skilletrakt inneholdende 400 cm^ etylacetat og 800 cm^ destillert vann. Vannfasen vaskes med 200 o, v\ J 3 etylacetat, de organiske fraksjoner forenes

3 3

og vaskes med 500 cm-' vann og derefter med ■ 300 cm-' av en mettet natriumbikarbonatoppløsning. Den organiske fase tørkes over natriumsulfat, behandles med avfargningskarbon, filtreres og konsentreres til tørr tilstand under et redusert trykk på 20

mm Hg.

Resten vaskes med 50 cm^ isopropyleter og filtreres. Man oppnår 8,7 g hvite krystaller, som man omkrystalliserer i 200 cm^ etanol. Herved oppnås 6,1 g 3-acetoksymetyl-8-okso-7-/Tl,3~ditiol-2-on-4-yl)acetamido72-pivaloyloksymetoksykarbonyl-5-tia-l-azabicyklo-/4,2,07-2-okten i form av hvite krystaller med et smeltepunkt på 135°C•

/"a_7<20>= +62° +1° (c = 1, kloroform).

Eksempel 26. Til en suspensjon av 5,18 g kaliumsalt av 2-karboksy-3-/T2-metyl-l,3,4-tiadiazol-5-yl)tiometyl7-8-okso-7-/Tl,3_ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten i 100 cra^ dimetylformamid avkjølt til 0°C setter man 2,66 g jodmetylpivalat. Man omrører i 10 minutter ved 5 C, hvorefter reaksjonsblandingen blir klar. Man heller reaksjonsblandingen i en skilletrakt inneholdende 100 cm-<3>' etylacetat og

3 3

200 cm-' vann. Den organiske fase vaskes med 100 cm<v>av en mettet natriumbikarbonatoppløsning og derefter med 100 cm3^ av en mettet natriumkloridoppløsning. Den organiske fase tørkes

over natriumsulfat, behandles med avfargningskarbon, filtreres og konsentreres til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Resten på 5 g kromatograferes på 80 g silisiumdioksyd. Med en blanding av etylacetat og cykloheksan i et volumforhold på 70;30 eluerer man 4>5g av et produkt som krystal-liseres i 60 cm^ av en blanding av like volumdeler etylacetat og cykloheksan. Man oppnår herved 3 g 3-/T2-metyl-l,3,4-tia-diazol-5-yl)tiometyl7-8-okso-7-/Il,3-ditiol-2-on-4-yl)acetam-ido7-2-pivaloyloksymetoksykarbonyl-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten i form av hvite krystaller med et smeltepunkt på 110°C.

/~<a>_7D°<=>_85°<±>1,5° (c = 1, kloroform).

Eksempel 27. Til en oppløsning av 18,2 g .natriumsalt av 2-karboksy-3-/Tl-metyl-l,2,3,4-tetrazol-5-yl)tiometyl7-8-okso-7-/Tl, 3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5-'tia-l-azabicyklo/4,2 ,Q7-2-okten i 115 cm^ dimetylformamid setter man i løpet av 15 minutter og ved en temperatur på 5°C en oppløsning av 8,65 g jodmetylpivalat i'70 crn-^ dimetylformamid. Man lar det. hele reagere i 1 time ved 5°C, og derefter konsentrerer man til tørr tilstand under et redusert trykk på 0,5 mm Hg. Man opptar resten i 500 cm^ etylacetat. Man vasker, med i tur og orden 600 cm^ vann, 500 cm^ av en mettet vannoppløsning av natriumbikarbonat og ^ 00 cm<v>vann. Man tørker over natriumsulfat og konsentrerer til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man kromatograferer den oppnådde rest på 450 g silisiumdioksyd, og man eluerer med 1 liter av en blanding av cykloheksan og etylacetat i et volumforhold på 6:4 og derefter med 4 liter av en blanding av cykloheksan og etylacetat i et volumforhold på 4;8. Man konsentrerer eluatene til tørr tilstand under et redusert trykk på 20 mm Hg. Man oppnår 12,7 g av en marenglignende rest som man krystalliserer

i 120 cm-^ av en blanding av like volumdeler etylacetat og eter. Man oppnår 7>4g av et hvitt, krystallinsk produkt, som efter tørking ved 30° C under 0,5 nim Hg gjenholder ca. jfo etylacetat. Man'omrører produktet 1 natt med 250 cm^ vann, hvorefter krystallene separeres ved filtrering og tørkes ved 35°C og 0,5 mm Hg. Man oppnår herved 6,6 g 3-/Tl-metyl-l,2 ,3,4-te"krazol-5-yl)-tiometyl7-8-okso-7-/Il,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-2-pivalo-yloksymetoksykarbonyl-5-tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten med et smeltepunkt på 100°C.

/ ajf<i0>=-21,6 + 0,8° (c = 1, dimetylformamid)

Eksempel 2_8. Ved en temperatur på 5°C oppløser man 5,08 g natriumsalt av 2-karboksy-3-/Tl-metyl-l,2,3,4_tetraz°l-5-yl)tiometyl7-8-okso-7-/Tl,3-ditiol-2-on-4-yl)acetamido7-5~tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten i 100 cm^ vannfri dimetylformamid. Til den oppnådde oppløsning setter man en oppløsning av 2 g jodmetylacetat i 10 cm-' dimetylformamid, hvorefter man omrører 10 minutter ved 5°C Reaksjonsblandingen helles derefter i ^ 00 cm-' vann og ekstraheres 2 ganger med 200 cm-' etylacetat. De forenede organiske faser vaskes med 100 cm-' vann, med 100 cm-' av en mettet natriumbikarbonatoppløsning, med 100 cm^ av en 5$-ig natriumbisulfitoppløsning- og med 100 cm^ av en mettet natriumkloridoppløsning. Den organiske fase tørkes over magnesiumsulfat, filtreres i nærvær av avfargingskarbon og konsentreres til tørr tilstand under et redusert trykk på 15 mm Hg. Man oppnår herved 5 g av et hvitt produkt, som man omkrystalliserer i 50 cm^ acetonitril.. Herved oppnår man 3 g 2-acetoksymetoksykarbonyl-3-/~(1-metyl-l,2,3,4-tetrazol-5-yl)-tiometyl7-8-okso-7-/Tl, 3_ditiol-2-on-4-yl) acetamido/-5-'tia-l-azabicyklo/4,2,07-2-okten i form av hvite krystaller med et smeltepunkt på 154°C

CaJv° -27.5° ± (c = 0,5, dimetylformamid).

Claims

Fremgangsmåte for fremstilling av nye cefalosporinderivater med den generelle formel

der symbolet R-^betegner et hydrogenatom, en acetoksygruppe, en azidogruppe eller en heterocyklyltio- eller heterocyklylkarbonyltiorest valgt blant følgende grupper: (1,3,4-tiadia- - zol-2-yl)tio, eventuelt substituert med en alkyl-, alkoksy-, alkyltio-, alkylsulfonyl-, amino- eller acetylaminogruppe, (l,2,3,4-tetrazol-5-yl)tio, eventuelt substituert i 1-stilling med en alkyl-, hydroksyalkyl-, fenyl- eller hydroksyfenylgrup pe eller i 2-stilling med en alkyl- eller hydroksyalkylgruppe, (1,2,4-triazol-3-yl)tio, (4-metyl-l,3-tiazol-2-yl)tio, (3-metyl-1,2,4-tiadiazol-5-yl)tio og (1,2,3-tiadiazol-4-yl)karbo-nyltio, hvorved alkylgruppene og alkyIdelene utgjøres av rette eller forgrenede kjeder inneholdende 1-4-karbonatomer; og symbolet Rp betegner en karboksygruppe eller en gruppe med den generelle formel der R^betegner et hydrogenatom eller en rett eller forgrenet . alkylgruppe inneholdende 1-4 karbonatomer, og R^betegner en rett eller forgrenet alkylgruppe inneholdende 1-4 karbonatomer eller,en cykloheksylgruppe, hvorved gruppen er en gruppe som er lett å fjerne på enzymatisk måte; eller der R-^betegner en pyridiniogruppe og Rg betegner et karboksylation, samt metallsalter derav og addisjonssalter derav med ■ nitrogenholdige baser,karakterisert vedat (a) (l,3-ditiol-2-on-4-yl)eddiksyre med formelen eller et derivat av denne syre, slik som et halogenid, anhyd- .rid eller et blandet anhydrid, omsettes med et cefalosporin med den generelle formel der R-^og R 2 har den ovenfor angitte betydning; eller at (b) når R-^ har den ovenfor angitte betydning bortsett fra-et hydrogenatom og en acetoksygruppe og Rg betegner en karboksygruppe, eller R, betegner en pyridiniogruppe og Rg betegner et karboksylation; natriumnitrid, et 2-tiokso-l,3,4-tiadiazolin, eventuelt substituert med en alkyl-, alkoksy-, alkyltio-, alkylsulfonyl-, amino- eller acetylaminogruppe, en 5-tiokso-l,2,3,4~tetrazolin, eventuelt substituert i 1-stilling med en alkyl-, hydroksyalkyl-, fenyl- eller hydroksyfenylgruppe, eller i 2-stilling med alkyl- eller en hydroksyalkylgruppe, 3-ti°kso-l, 2 ,4-triazolin, 4-me'tyl-2-tiokso-l, 3-tia zolin, 3-metyl-5-'ti0kso-1,2 ,4-tiadiazolin, (1,2 ,3-tiad,iazol-4-yl)tiokarboksylsyre eller pyridin (alkylgruppene og alkyldelene utgjøres av rette eller forgrenede kjeder inneholdende 1-4 karbonatomer), omsettes med en forbindelse med formelen I, der R-^ betegner en acetoksygruppe og R^ betegner en karboksygruppe; eller at (c) når R-^har ovenfor angitte betydning og R^betegner en gruppe med den generelle formel der R^og R^har den ovenfor angitte betydning, en forbindelse med den. generelle formel I, der R-^har den ovenfor angitte betydning og R£betegner en karboksygruppe, forestres ved til- . lempning av en hvilken som helst kjent fremgangsmåte for frerrw stilling av en ester ved å gå ut fra en syre uten at.resten av molekylet påvirkes; hvorefter eventuelt når symbolet Rg betegner en karboksygruppe, den oppnådde forbindelse omdannes til et metallsalt eller til et addisjonssalt med en nitrogenholdig base.