NO341339B1 - Substituerte gamma laktamer, sammensetninger omfattende slike samt anvendelse av slike i medisinsk behandling - Google Patents

Substituerte gamma laktamer, sammensetninger omfattende slike samt anvendelse av slike i medisinsk behandling Download PDF

Info

Publication number
NO341339B1
NO341339B1 NO20074295A NO20074295A NO341339B1 NO 341339 B1 NO341339 B1 NO 341339B1 NO 20074295 A NO20074295 A NO 20074295A NO 20074295 A NO20074295 A NO 20074295A NO 341339 B1 NO341339 B1 NO 341339B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
mmol
added
vacuo
concentrated
ester
Prior art date
Application number
NO20074295A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
NO20074295L (no
Inventor
David W Old
Danny T Dinh
Original Assignee
Allergan Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Allergan Inc filed Critical Allergan Inc
Publication of NO20074295L publication Critical patent/NO20074295L/no
Publication of NO341339B1 publication Critical patent/NO341339B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/26—2-Pyrrolidones
    • C07D207/263—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms
    • C07D207/267—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/26—2-Pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4015—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. piracetam, ethosuximide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/402—1-aryl substituted, e.g. piretanide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pyrrole Compounds (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)

Description

BESKRIVELSE AV RELATERT TEKNIKK
Okulære hypotensive midler er anvendelige ved behandling av flere forskjellige okulære hypertensive tilstander, så som post-kirurgisk og post-laser trabekulektomi okulære hypertensive episoder, glaukom og som prekirurgiske hjelpemidler.
Glaukom er en sykdom i øyetkarakterisert vedøket intraokulært trykk.
På basis av dens etiologi, er glaukom klassifisert som primær eller sekundær. For eksempel kan primært glaukom hos voksne (medfødt glaukom) være enten åpen-vinklet eller akutt eller kronisk trang-vinklet. Sekundært glaukom er set resultat av pre-eksisterende okulære sykdommer så som uveitt, intraokulær tumor eller en forstørret katarakt.
De underliggende årsaker til primært glaukom er ikke enda kjent. Den
økte intraokulære spenningen skyldes obstruksjon av den vandige væskens utstrømning. Ved kronisk åpen-vinkel glaukom, fremstår det fremre kammeret og dens anatomiske strukturer som normale, men drenering av den vandige væsken er nedsatt. Ved akutt eller kronisk trang-vinkel glaukom, er det fremre kammeret grunt, filtrasjonsvinkelen er avsmalnet og iris kan obstruere trabekelverket ved inngangen av Schlemms kanal. Dilatasjon av pupillen kan presse roten av iris forover mot vinkelen og kan produsere en pupillær blokkade og således frembringe et akutt angrep. Øyne med smale fremre kammer-vinkler er predisponert for angrep av akutt trang-vinkel glaukom av forskjellige alvorlighetsgrader.
Sekundært glaukom er forårsaket av en hvilken som helst interferens med strømmen av den vandige væsken fra det bakre kammer inn i det fremre kammer og deretter, inn i Schlemms kanal. Inflammatorisk sykdom i det fremre segment kan forhindre vandig drenasje ved å forårsake fullstendige bakre synechier i iris (bombe) og kan plugge drenasjekanalen med eksudater. Andre vanlige årsaker er intraokulære tumorer, forstørrede katarakter, sentralvene-okklusjon, traumer mot øyet, operative prosedyrer og intraokulær blødning.
Sett alle typunder ett, forekommer glaukom hos ca. 2% av alle personer over 40 års alder og kan være asymptomatisk i mange år før progresjon til raskt tap av syn. I tilfeller hvor kirurgi ikke er indisert, har topiske P-adrenoreseptorantagonister tradisjonelt vært det medikamentelle førstevalg for behandling av glaukom.
Visse eikosanoider og deres derivater er for tiden kommersielt tilgjengelig for anvendelse i glaukombehandling. Eikosanoider og derivater omfatter en rekke biologisk viktige forbindelser så som prostaglandiner og deres derivater. Prostaglandiner kan beskrives som derivater av prostansyre som har den følgende strukturelle formel:
Forskjellige typer av prostaglandiner er kjent, avhengig av strukturen og substituenter båret på den alicykliske ringen av prostansyreskjelettet. Ytterligere klassifisering er basert på antallet umettede bindinger i sidekjeden angitt ved de nummeriske angivelsene etter den generiske typen av prostaglandin [f. eks. prostaglandin Ei (PGEi), prostaglandin E2(PGE2)] og på konfigurasjonen av substituentene på den alicykliske ringen angitt ved a eller P [f. eks. prostaglandin F2cc(PGF2<p>)].
Prostaglandin EP2selektive agonister er antatt å ha mange medisinske anvendelser. For eksempel beskriver U.S. Patent nr. 6,437,146 anvendelse av prostaglandin EP2selektive agonister "for behandling eller forhindring av inflammasjon og smerte i ledd og muskel (f.eks. revmatoid artritt, revmatoid spondylitt, osteoartritt, giktisk artritt, juvenil artritt, etc), inflammatoriske hud tilstander (f.eks. solbrenthet, brannsår, eksem, dermatitt, etc), inflammatoriske øye tilstander (f.eks. konjunktivitt, etc), lungelidelse hvor inflammasjon er involvert (f.eks. astma, bronkitt, "pigeon fancier's" sykdom, farmers lung, etc), tilstander i mave-tarm-kanalen forbundet med inflammasjon (f.eks. aftøs ulcer, Chrohn's sykdom, atrofisk gastritt, varialoform gastritt, ulcerøs kolitt, cøliaki, regional ileitt, irritabel tarm syndrom, etc), gingivitt, inflammasjon, smerte og opphovning etter operasjon eller skade, feber, smerte og andre lidelser forbundet med inflammasjon, allergisk sykdom, systemisk lupus erythematosus, sklerodermi, polymyositt, tendinitt, bursitt, periarteritis nodosa, revmatisk feber, Sjøgrens syndrom, Behcets sykdom, thyreoiditt, type I diabetes, diabetiske komplikasjoner (diabetisk mikroangiopati diabetisk retinopati, diabetisk nefropati, etc), nefrotisk syndrom, aplastisk anemi, myasthenia gravis, uveitt, kontakt-dermatitt, psoriasis, Kawasaki sykdom, sarkoidose, Hodgkins sykdom, Alzheimers sykdom, nyre dysfunksjon (nefritt, nepfrotisk syndrom, etc), lever dysfunksjon (hepatitt, cirrhose, etc), gastrointestinal dysfunksjon (diaré, inflammatorisk tarmsykdom, etc.) sjokk, bensykdomkarakterisert vedunormal ben metabolisme så som osteoporose (spesielt, postmenopausal osteoporose), hyperkalsemi, hyperparathyroidisme, Pagets bensykdommer, osteolyse, hyperkalsemi ved ondartet sykdom med eller uten benmetastaser, revmatoid artritt, periodonritt, osteoartritt, ostealgia, osteopeni, kacheksi ved kreft, calculose, litiasis (spesielt, urolitiasis), solid karsinom, mesangio proliferativ glomerulonefritt, ødem (f.eks. hjerteødem, hjerneødem, etc), hypertensjon så som ondartet hypertensjon eller lignende, premenstruell tensjon, nyresten, oliguri så som den forårsaket av akutt eller kronisk svikt, hyperfosfaturi eller lignende."
US-patent No 6,710,072 beskriver anvendelse av EP2 agonister for behandling eller forebygging av "osteoporose, forstoppelse, nyre- lidelser, seksuell dysfunksjon, skallethet, diabetes, kreft og ved lidelser av immun-regulering... forskjellige patofysiologisk sykdommer omfattende akutt myokardialt infarkt, vaskulær trombose, hypertensjon, pulmonal hypertensjon, ischemisk hjertesykdom, kongestiv hjertesvikt og angina pectoris."
KORT BESKRIVELSE AV FIGURENE
Figurene 1-16 viser eksempler på metoder som kan anvendes for å fremstille forbindelsene beskrevet her.
BESKRIVELSE IFØLGE OPPFINNELSEN
En forbindelse er beskrevet her omfattende
eller et farmasøytisk akseptabelt salt, prodroge eller en metabolitt derav,
hvor Y er en organisk syre funksjonell gruppe eller et amid eller ester derav omfattende opptil 12 karbonatomer; eller Y er hydroksymetyl eller en eter derav omfattende opptil 12 karbonatomer; eller Y er en tetrazolylfunksjonell gruppe; hvor X<1>og X<2>er uavhengig CH, O eller S; og
R<7>er lineær alkyl omfattende fra 3 til 7 karbonatomer.
Andre forbindelser omfatter
eller et farmasøytisk akseptabelt salt, derav.
Andre forbindelser omfatter
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav,
hvor X<1>og X<2>er uavhengig CH, O eller S.
Andre forbindelser omfatter forbindelsen i krav 2.
Bestemmelsen av hvorvidt en forbindelse er aktiv ved en prostaglandin reseptor er velkjent for en fagmann på området. Bestemmelsen av hvorvidt en forbindelse er aktiv ved en prostaglandin EP2reseptor er også velkjent for en fagmann på området. En metode for å utføre slike bestemmelser er gitt i eksemplene.
Bestemmelsen av hvorvidt en forbindelse er effektiv for reduksjon av det intraokulære trykket til et pattedyr er velkjent for en fagmann på området. Metoder for bestemmelse av hvorvidt en forbindelse er effektiv for reduksjon av det intraokulære trykket er gitt her for noen få eksempler på pattedyr.
Forbindelsene som beskrevet her er anvendelige for forebygging eller behandling av glaukom eller okulær hypertensjon hos pattedyr eller for fremstilling av et medikament for behandling av glaukom eller okulær hypertensjon. De er også anvendelige for behandling av de sykdommer beskrevet på området som mottagelige for behandling med prostaglandin EP2agonist, så som de som er listet opp tidligere.
Et "farmasøytisk akseptabelt salt" er hvilket som helst salt som beholder aktiviteten til stamforbindelsen og som ikke gir hvilke som helst ytterligere skadelige eller uheldige effekter på individet som det blir administrert til og i sammenhengen hvor det blir administrert sammenlignet med stamforbindelsen. Et farmasøytisk akseptabelt salt angir også hvilket som helst salt som kan dannes in vivo som et resultat av administrering av en syre, et annet salt eller en prodroge som blir omdannet til en syre eller salt.
Farmasøytisk akseptable salter av sure funksjonelle grupper kan avledes fra organiske eller uorganiske baser. Saltet kan omfatte et mono eller polyvalent ion. Av spesiell interesse er de uorganiske ioner, litium, natrium, kalium, kalsium og magnesium. Organiske salter kan fremstilles med aminer, spesielt ammoniumsalter så som mono-, di- og trialkylaminer eller etanol aminer. Salter kan også dannes med koffein, tromethamin og lignende molekyler. Saltsyre eller en hvilken som helst farmasøytisk akseptabel syre kan danne et salt med en forbindelse som omfatter en basisk gruppe, så som et amin eller en pyridinring.
En "prodroge" er en forbindelse som blir omdannet til en terapeutisk aktiv forbindelse etter administrering og betegnelsen bør bli tolket her så bredt som generelt kjent på området. Omdannelse kan forekomme ved hydrolyse av en estergruppe eller en annen biologisk labil gruppe. Generelt, men ikke nødvendigvis, er en prodroge inaktiv eller mindre aktiv enn den terapeutiske aktive forbindelsen som den blir omdannet til. Ester prodroger av forbindelsene beskrevet her er spesifikt betraktet. En ester kan avledes fra en karboksylsyre av Cl (dvs. terminal karboksylsyre av et naturlig prostaglandin) eller en ester kan avledes fra en karboksylsyre funksjonell gruppe på et annen del av molekylet, så som på et fenylring. En ester kan være en alkylester, en arylester eller en heteroarylester. Betegnelsen alkyl har generelt betydningen forstått av fagfolk på området og angir lineære, forgrenete eller cykliske alkylgrupper. Ci-6alkylestere er spesielt anvendelige, hvor alkyldel av esteren har fra 1 til 6 karbonatomer og omfatter metyl, etyl, propyl, isopropyl, w-butyl, sec-butyl, iso-butyl, f-butyl, pentyl isomerer, heksyl isomerer, cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cykloheksyl og kombinasjoner derav som har fra 1-6 karbonatomer, etc.
En metabolitt er bredt definert som en forbindelse som blir dannet in vivo fra den beskrevne forbindelsen.
Fagfolk på området vil lett forstå at for administrering eller fremstilling av medikamenter kan forbindelsene beskrevet her blandes med farmasøytisk akseptable tilsetningsmidler som per se er velkjent på området. Spesifikt, et medikament som skal administreres systemisk, kan bli formet som et pulver, pille, tablett eller som en løsning, emulsjon, suspensjon, aerosol, sirup eller eliksir egnet for oral eller parenteral administrering eller inhalering.
For faste doseformer eller medikamenter, omfatter ikke-toksiske faste bærere farmasøytiske kvaliteter av mannitol, laktose, stivelse, magnesiumstearat, natrium sakkarin, polyalkylenglykoler, talk, cellulose, glukose, sukrose og magnesiumkarbonat. De faste doseformene kan være ubelagte eller de kan belegges ved kjente teknikker for å forsinke desintegrering og absorpsjon i mave-tarm-kanalen og derved gi en forlenget virkning over en lenger periode. For eksempel kan et tidsforsinkende materiale så som glyceryl-monostearat eller glyceryldistcarat anvendes. De kan også belegges ved teknikken beskrevet i U.S. Pat. Nrs. 4,256,108; 4,166,452; og 4,265,874 for å danne osmotiske terapeutiske tabletter for kontrollering av frigjøringen. Flytende farmasøytisk administrerbare doseformer kan for eksempel omfatte en løsning eller suspensjon av én eller flere av foreliggende anvendelige forbindelser og valgfrie farmasøytiske adjutanter i en bærer, så som for eksempel vann, saltløsning, vandig dekstrose, glycerol, etanol, for derved å danne en løsning eller suspensjon. Om ønsket, kan det farmasøytiske preparatet som skal administreres også inneholde mindre mengder av ikke toksiske hjelpe-substanser så som fukt eller emulgeringsmidler, pH buffermidler og lignende. Typiske eksempler på slike hjelpe- midler er natriumacetat, sorbitan-monolaurat, trietanolamin, natriumacetat, trietanolamin oleat, etc. Aktuelle metoder for fremstilling av slike doseformer er kjente eller vil være innlysende for fagfolk innenfor dette området; se for eksempel Remington's Pharmaceutical sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 16th Utgave, 1980. Preparatet av formulering som skal administreres, i et hvert tilfelle, inneholder en mengde av én eller flere av foreliggende anvendelige forbindelser i en mengde som er effektiv til å gi den ønskede terapeutiske effekten.
Parenteral administrering er genereltkarakterisert vedinjeksjon, enten subkutant, intramuskulært eller intravenøst. Injiserbare blandinger kan fremstilles i konvensjonelle former, enten som flytende løsninger eller suspensjoner, fast stoff former egnet for løsning eller suspensjon i væske før injeksjon eller som emulsjoner. Egnede tilsetningsmidler er for eksempel vann, saltløsning, dekstrose, glycerol, etanol. I tillegg, om ønsket, kan de injiserbare farmasøytiske preparatene som skal administreres også inneholde mindre mengder av ikke-toksiske hjelpe- substanser så som fukte- eller emulgeringsmidler, pH buffermidler.
Mengden av foreliggende anvendelige forbindelse eller forbindelser administrert er, selvfølgelig, avhengig av den terapeutiske effekten eller effekter ønsket, på det spesifikke pattedyret som behandles, av alvorlighetsgraden og naturen til pattedyrets tilstand, av administreringsmetoden, av styrken og farmakodynamikken til den spesielle forbindelsen eller forbindelser anvendt og på bedømmelsen av foreskrivende lege. Den terapeutiske effektive dosen av foreliggende anvendelige forbindelse eller forbindelser er fortrinnsvis i området ca. 0,5 eller ca. 1 til ca. 100 mg/kg/dag.
En væske som er oftalmisk akseptabel blir formulert slik at den kan administreres topisk til øyet. Komforten bør bli maksimalisert så meget som mulig, selv om noen ganger kan formuleringsbetraktninger (f.eks. medikament stabilitet) nødvendiggjøre mindre enn optimal komfort. I det tilfellet hvor komfort ikke kan bli maksimalisert bør væsken formuleres slik at væsken er tolererbar for pasienten for topisk oftalmisk anvendelse. I tillegg bør en oftalmisk akseptabel væske enten bli pakket for enkel anvendelse eller inneholder et konserveringsmiddel for å forhindre forurensning over flere anvendelser.
For oftalmisk applikasjon blir løsninger eller medikamenter ofte fremstilt ved anvendelse av en fysiologisk saltløsning som en hovedkonstituent. Oftalmiske løsninger bør fortrinnsvis bli holdt ved en komfortabel pH med et passende buffersystem. Formuleringene kan også inneholde konvensjonelle, farmasøytisk akseptable konserveringsmidler, stabiliseringsmidler og overflateaktive midler.
Konserveringsmidler som kan anvendes i de farmasøytiske preparatene ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter benzalkoniumklorid, klorbutanol, timerosal, fenylkvikksølv(II) acetat og fenylkvikksølv(II) nitrat. Et anvendelig overflateaktivt middel er for eksempel Tween 80. Likeledes, kan forskjellige anvendelige konstituenter anvendes i oftalmiske prepareringer ifølge foreliggende oppfinnelse. Disse konstituenter omfatter polyvinylalkohol, povidon, hydroksypropyl metylcellulose, poloksamers, karboksymetylcellulose, hydroksyetylcellulose og renset vann.
Tonisitet justeringsmidler kan tilsettes etter behov eller hensiktsmessighet. De omfatter salter, spesielt natriumklorid, kaliumklorid, mannitol og glycerin eller hvilket som helst annet egnet oftalmisk akseptabelt tonisitet j usteringsmiddel.
Forskjellige buffere og metoder for regulering av pH kan anvendes så lenge det resulterende preparatet er oftalmisk akseptabelt. Følgelig, omfatter buffere acetat buffere, citrat buffere, fosfatbuffere og borat buffere. Syrer eller baser kan anvendes for å regulere pH til disse formuleringer etter behov.
På en lignende måte omfatter en oftalmisk akseptabel antioksidant for anvendelse ved foreliggende oppfinnelse , natrium metabisulfitt, natriumtiosulfat, acetylcystein, butylert hydroksyanisol og butylert hydroksytoluen.
Andre tilsetningsmiddelkomponenter som kan omfattes i oftalmiske prepareringer er chelaterende midler. Et anvendelig chelaterende middel er edetatdinatrium, selv om andre chelaterende midler også kan anvendes i stedenfor eller sammen med det.
Bestanddelene blir vanligvis anvendt i de følgende mengder:
For topisk anvendelse, blir kremer, salver, geler, løsninger eller suspensjoner, etc., inneholdende forbindelsen beskrevet her anvendt. Topiske formuleringer kan generelt være omfattet av en farmasøytisk bærer, medløsningsmiddel, emulgeringsmiddel, penetreringsfremmende middel, konserveringsmiddelsystem og mykner.
Den aktuelle dosen av de aktive forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse avhenger av den spesifikke forbindelsen og på lidelsen som skal behandles; seleksjonen av den passende dosen er velkjent kunnskap for fagfolk.
Forbindelsene beskrevet her er også anvendelige i kombinasjon med andre medikamenter anvendelige for behandling av glaukom eller andre tilstander.
For behandling av glaukom blir kombinasjonsbehandling med de følgende klasser av medikamenter betraktet: B- Blokkere ( eller B- adrenerg antagonister) omfattende carteolol, levobunolol, metiparanolol, timolol hemihydrat, timolol maleat, pi-selektiv antagonister så som betaxolol og lignende eller farmasøytisk akseptabel salter eller prodroge derav;
Adrenerge Agonister omfattende
ikke- selektive adrenerge agonister så som epinefrinborat, epinefrinhydroklorid og dipivefrin og lignende eller farmasøytisk akseptable salter eller prodroge derav; og
a2- selektiv adrenerg agonister så som apraclonidin, brimonidin og lignende eller farmasøytisk akseptable salter eller prodroge derav;
Karbonsyre Anhydrase Inhibitorer omfattende acetazolamid, dichlorfenamid, methazolamid, brinzolamid, dorzolamid og lignende eller farmasøytisk akseptable salter eller prodroge derav;
Cholinerge Agonister omfattende
direkte virkende cholinerge agonister så som karbachol, pilocarpinhydroklorid, pilokarbinnitrat, pilocarpin og lignende eller farmasøytisk akseptable salter eller prodroge derav;
chlolinesterase inhibitorer så som demecarium, echotiophat, physostigmin og lignende eller farmasøytisk akseptable salter eller prodroge derav;
Glutamat Antagonister og andre nevrobeskvttende midler så som Ca<2+>kanal blokkere så som memantin, amantadin, rimantadin, nitroglycerin, dextrophan, detromethorphan, CGS-19755, dihydropyridiner, verapamil, emopamil, benzotiazepiner, bepridil, difenylbutylpiperidiner, difenylpiperaziner, HOE 166 og relaterte tilikamenter, fluspirilen, eliprodil, ifenprodil, CP-101,606, tibalosin, 2309BT og 840S, flunarizin, nicardipin, nifedimpin, nimodipin, barnidipin, verapamil, lidoflazin, prenylamin laktat, amilorid og lignende eller farmasøytisk akseptable salter eller prodroge derav;
Prostamider så som bimatoprost eller farmasøytisk akseptable salter eller prodroge derav; og
Prostaglandiner omfattende travoprost UFO-21, chloprostenol, fluprostenol, 13,14-dihydro-chloprostenol, isopropyl unoproston, latanoprost og lignende. Kannabinoider omfattende CB1 agonister så som WIN-55212-2 og CP-55940 og lignende eller farmasøytisk akseptable salter eller prodroge derav.
For behandling av sykdommer som påvirker øyet omfattende glaukom, kan disse forbindelser administreres topisk, periokulært, intraokulært eller ved hvilken som helst annen effektiv måte kjent på området.
Behandling av inflammatorisk tarmsykdom kan oppnås ved administrering av forbindelsene beskrevet her til det lidende pattedyret. Inflammatorisk tarmsykdom beskriver en rekke sykdommerkarakterisert vedinflammasjon av tarmene omfattende, men ikke begrenset til, ulcerativ kolitt og Crohn's sykdom. Behandling kan oppnås ved oral administrering, ved suppositorium eller parenteral administrering eller noen annen egnet metode.
Levering av forbindelsene beskrevet her til tarmen via orale doseformer kan oppnås ved hvilken som helst av flere metoder kjent på området. For eksempel beskriver oversikter av Ctimeasia og Jain i J Pharm Pharmaceut Sei 6 (1): 33-66, 2003 og Shareef et. al (AAPS PharmSci 2003; 5 (2) Artikkel 17) flere anvendelige metoder. Disse metoder omfatter 1) administrering av en prodroge, omfattende et azo eller en karbohydrat basert prodroge; 2) belegging av medikamentet med eller innkapsle eller impregnere medikamentet i en polymer utformet for levering til tarmen, 3) tids-frigj ørende levering av medikamentet, 4) anvendelse av et bioadhesivt system.
Det er antatt at intestinal mikroflora kan reduktivt spalte en azobinding og etterlate de to nitrogenatomer som amin funksjonelle grupper. Azo prodroge tilnærmingen har vært anvendt for å levere 5-aminosalicylsyre til tarmen av mennesker i kliniske forsøk for behandling av inflammatorisk tarmsykdom. Det er også antatt at bakterier med lavere GI også har enzymer som kan fordøye glykosider, glucuronider, cyklodekstriner, dekstraner og andre karbohydrater og ester prodroger dannet fra disse karbohydrater er vist å levere opphavs- aktive medikamenter selektivt til tarmen. For eksempel foreslår in vivo og in vitro undersøkelser på rotter og marsvin med prodroger av dexamethason, prednisolon, hydrokortison og fludrokortison, at glykosidkonjugater kan være anvendelige for leveringen av steroider til den humane tarmen. Andre in vivo undersøkelser har foreslått at glucouronid, cyklodekstrin og dekstran prodroger av steroider eller ikke-steroide anti-inflammatorisk medikamenter er anvendelige for levering av disse medikamenter til den lavere GI kanalen. Et amid av salicylsyre og glutaminsyre er vist å være anvendelig for leveringen av salicylsyre til tarmen av kanin og hund.
Karbohydratpolymerer så som amylase, arabinogalactan, chitosan, chondroiton sulfat, dekstran, guar gummi, pektin, xylin eller azo-gruppe inneholdende polymerer kan anvendes for å belegge en medikamentforbindelse eller et medikament kan bli impregnert eller innkapslet i polymeren . Det er antatt at etter oral administrering, forblir polymerene stabile i den øvre GI kanalen, men blir fordøyet av mikrofloraen til den lavere GI for således å frigjøre medikamentet for behandling.
Polymerer som er sensitive for pH kan også anvendes siden tarmen har en høyere pH enn den øvre GI kanalen. Slike polymerer er kommersielt tilgjengelige. For eksempel Rohm Pharmaceuticals, Darmstadt, Tyskland, markets pH avhengige metakrylat baserte polymerer og kopolymerer som har varierende solubiliteter over forskjellige pH områder basert på antallet frie karboksylatgrupper i polymeren under handelsnavnet Eudragit®. Mange Eudragit® doseformer blir for tiden anvendt for å levere salsalazin for behandling av ulcerativ kolitt og Crohn's sykdom. Tidsfrigjøringsystemer, bioadhesive systemer og andre leveringssystemer har også vært studert.
En utførelsesform er anvendelse av en forbindelse som definert over ved fremstilling av et medikament for behandling av inflammatorisk tarmsykdom.
Utførelsesformer betraktet for hver forbindelse beskrevet her er anvendelse av forbindelsen ved fremstilling av et medikament for behandling av glaukom eller okulær hypertensjon.
Utførelsesformer betraktet for hver forbindelse beskrevet her er anvendelse av forbindelsen ved fremstilling av et medikament for behandling av inflammatorisk tarmsykdom.
Utførelsesformer betraktet for hver forbindelse beskrevet her er metoder omfattende administrering av en effektiv mengde av forbindelsen til et pattedyr for behandling av glaukom eller okulær hypertensjon.
Utførelsesformer betraktet for hver forbindelse beskrevet her er metoder omfattende administrering av en effektiv mengde av forbindelsen til et pattedyr for behandling av inflammatorisk tarmsykdom.
Utførelsesformer betraktet for hver forbindelse beskrevet her er preparater omfattende forbindelsen, hvor nevnte preparater er oftalmisk akseptable væsker.
Eksempel 1 (Referanse)
5 - [(R)-1 -(4- tert- buty 1-f eny 1)- 5 -okso-pyrrolidin-2-ylmetoksy] -pentansyre (4) Trinn 1. Arylering av 1, hvilket gir 2
En løsning av amid 1 (3,30 g, 14,4 mmol) i 1,4-dioksan (25 ml) ble satt til en blanding av 4,5-bis(trifenylfosfino)-9,9-dimetylxanten (xantphos, 600 mg, 1,04 mmol), Pd2(dba)s (317 mg, 0,35 mmol) og CS2CO3(6,46 g, 19,8 mmol). 1-brom-4-fe/*f-butylbenzen (2,40 ml, 13,8 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble spylt med nitrogen. Blandingen ble oppvarmet ved tilbakeløp i 19 timer, deretter avkjølt til romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter filtrert gjennom celite, vasking med CH2CI2 og filtratet ble konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (10% -> 20% EtOAc/Heksan, gradient) ga 3,53 g (71%) av det ønskede produkt 2. ;Trinn 2. Avbeskyttelse av 2, hvilket gir 3 ;HF-pyridin (5 ml) ble satt til en løsning av silyleter 2 (3,53 g, 9,76 mmol) i MeCN (20 ml) i en plastflaske. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 5 timer, ble deretter behandlet med mettet vandig NaHCCb(250 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (150 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 2,14 g (89%) av det ønskede produkt 3. ;Trinn 3. Alkylering av 3, hvilket gir esteren av 4 ;Natriumhydrid (11 mg, 0,46 mmol) ble satt til en løsning av alkohol 3 (100 mg, 0,40 mmol) i THF (3 ml) ved 0 °C under nitrogen. Etter 1 time ved 0 °C, ble metyl 5-bromvalerat (67 uL, 0,47 mmol) tilsatt og reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter 3 timer, viste tic analysen at det meste av utgangsalkoholen var gjenværende og en annen porsjon av bromid (67 uL, 0,47 mmol) ble tilsatt. Etter 22 timer total reaksjonstid, ble reaksjonen stanset med 1 N HC1 og ekstrahert med EtOAc (3 x 25 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (40% EtOAc/Heksan -» EtOAc, gradient) ga 19 mg (13%) av den ønskede ester. ;Trinn 4. Forsåpning, hvilket gir 4 ;Vandig litiumhydroksid (1 N, 0,5 ml) ble satt til en løsning av ester fra trinn 3 ovenfor (12,3 mg, 0,034 mmol) i THF (0,7 ml). Etter 2,5 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen surgjort med 0,25 M HC1 (5 ml) deretter ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 10,2 mg (86%) av tittelforbindelsen (4). ;Eksempel 2 (Referanse) ;3-[(R)-l-(4-tert-butyl-fenyl)-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl]-benzosyre ;(5) ;Trinn 1. Alkylering av 3, hvilket gir esteren av 5 ;Kaliumhydrid (23,4 mg, 0,58 mmol) og 18-krone-6 (167 mg, 0,63 mmol) ble tilsatt sekvensielt til en løsning av alkohol 3 (130 mg, 0,53 mmol) i THF (3 ml) ved 0 °C. Etter 1 time ved 0 °C, ble en løsning av metyl 3-(klormetyl)benzoat (fremstilt fra det tilsvarende syreklorid, pyridin og metanol: se J. Org. Chem. 1988, 53, 2548-2552; 116 mg, 0,63 mmol) i THF (1,5 ml) tilsatt via kanyle og reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter 22,5 timer, ble reaksjonen stanset med 0,1 N HC1 (10 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x15 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med mettet vandig NaHC03(15 ml) og saltvann (15 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (30% —> 50% EtOAc/Heksan, gradient) ga 66 mg (32%) av den ønskede ester. ;Trinn 2. Forsåpning, hvilket gir 5 ;Vandig litiumhydroksid (IN, 0,4 ml) ble satt til en løsning av ester fra trinn 1 ovenfor (33,5 mg, 0,085 mmol) i THF (0,75 ml). Etter 3,5 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen surgjort med 0,25 M HC1 (5 ml) deretter ekstrahert med CH2CI2(3x10 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (2% MeOH/CEbCh), fulgt av preparativ tynnskiktskromatografi (10% MeOH/CTfeCk) ga 6,6 mg (20%) av tittelforbindelsen (5). ;Eksempel 3 (Referanse) ;5- [(R)-1 -(4-tert-butyl-fenyl)-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl]-furan-2-karboksylsyre (6) ;Trinn 1. Alkylering av 3, hvilket gir esteren av 6 ;Kaliumhydrid (27 mg, 0,67 mmol) og 18-krone-6 (193 mg, 0,73 mmol) ble tilsatt sekvensielt til en løsning av alkohol 3 (150 mg, 0,61 mmol) i THF (4 ml) ved 0 °C. Etter 1 time ved 0 °C, ble en løsning av etyl 5-klormetylfuran-2-karboksylat (kommersielt tilgjengelig fra Aldrich Chemical Company, 138 mg, 0,73 mmol) i THF (1 ml) tilsatt via kanyle og reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter 18,5 timer, ble reaksjonen stanset med 0,25 N HC1 (10 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x15 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (20 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (20% —> 50% EtOAc/Heksan, gradient) ga 78 mg (32%) av den ønskede ester. ;Trinn 2. Forsåpning, hvilket gir 6 ;Vandig litiumhydroksid (1 N, 0,5 ml) ble satt til en løsning av ester fra trinn 1 ovenfor (66,7 mg, 0,17 mmol) i THF (0,5 ml). Etter 3 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen surgjort med 1 N HC1 (2 ml) deretter ekstrahert med CH2CI2(3 x 10 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 54,4 mg (88%) av tittelforbindelsen (6). ;Eksempel 4 (Referanse) ;5- [(R)-1 -(4-tert-butyl-fenyl)-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl]-tiofen-2-karboksylsyre (7) ;Trinn 1. Alkylering av 3, hvilket gir esteren av 7 ;Kaliumhydrid (25,2 mg, 0,63 mmol) og 18-krone-6 (181 mg, 0,68 mmol) ble ;tilsatt sekvensielt til en løsning av alkohol 3 (140 mg, 0,57 mmol) i THF (4 ml) ved 0 °C. Etter 1,5 timer ved 0 °C, ble en løsning av metyl 5-klormetyltiofen-2-karboksylat (fremstilt i henhold til metodene beskrevet i WO2004/037808; 130 mg, 0,68 mmol) i THF (1,5 ml) tilsatt via kanyle og reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter 20 timer, ble reaksjonen stanset med 0,25 N HC1 (15 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 20 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (30 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (20% —> 50% EtOAc/Heksan, gradient) ga 40,7 mg (18%) av den ønskede ester. ;Trinn 2. Forsåpning, hvilket gir 7 ;Vandig litiumhydroksid (IN, 0,4 ml) ble satt til en løsning av ester fra trinn 1 ovenfor (37 mg, 0,092 mmol) i THF (0,75 ml). Etter 18 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen surgjort med 1 N HC1 (7 ml) deretter ekstrahert med CH2CI2(3x10 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 22,3 mg (62%) av tittelforbindelsen (7). ;Eksempel 5 (Referanse) ;7-[(S)-l-(4-tert-butyl-fenyl)-5-okso-pyrrolidin-2-yl]-heptansyre (10) ;Trinn 1. Oksidasjon av 3, hvilket gir aldehyd 8 ;Molekylsikter (4Å, 300 mg), 4-metylmorfolin iV-oksid (427 mg, 3,64 mmol) og tetrapropylammoniumperruthenat (250 mg, 0,71 mmol) ble tilsatt sekvensielt til en løsning av alkohol 3 (600 mg, 2,43 mmol) i CH2CI2(15 ml) ved romtemperatur. Etter 23 timer, ble reaksjonsblandingen filtrert gjennom celite, vasking med CH2CI2(10 ml). Filtratet ble konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (CH2CI2—> 10% EtOAc/CH2Cl2, gradient) ga 92 mg (15%) av den ønskede aldehyd 8. ;Trinn 2. Wittig omsetning av 8, hvilket gir 9 ;Kalium bis(trimetylsilyl)amid (0,5 M i PhMe, 1,92 ml, 0,96 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 8 (86 mg, 0,35 mmol) i THF (2 ml) ved romtemperatur. Etter 15 min ved romtemperatur, ble reaksjonsblandingen avkjølt til - 55 °C i 10 min før en løsning av 5-karboksypentyltrifenylfosfoniumbromid (207 mg, 0,45 mmol) ble tilsatt via kanyle. Etter 10 min ved - 55 °C, fikk reaksjonen oppvarmes til romtemperatur. Etter 18 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI (15 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x15 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (20 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CEbCh) ga 10,5 mg (9%) av ønsket alken 9. ;Trinn 3. Hydrogenering av 9, hvilket gir 10 ;Palladium på karbon (10 vekt. %, 2 mg) ble satt til en løsning av alken 9 (5,8 mg, 0,017 mmol) i MeOH (1 ml). En hydrogenatmosfære ble etablert ved evakuering og refylling med hydrogen (3x) og reaksjonsblandingen ble omrørt under en ballong av hydrogen i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom celite, vasking med MeOH og filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 4,1 mg (70%) av tittelforbindelsen (10). ;Eksempel 6 (Referanse) ;5-{(R)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl}-furan-2-karboksylsyre (17) ;Trinn 1. Arylering av 1, hvilket gir 12 ;En løsning av amid 1 (2,89 g, 12,60 mmol) i 1,4-dioksan (20 ml) fulgt av en løsning av l-(4-metoksybenzyloksymetyl)-4-brombenzen (11: for syntese, se Allergan docket #17693; 3,88 g, 12,63 mmol) ble tilsatt sekvensielt til en blanding av xantphos (877 mg, 1,52 mmol), Pd2(dba)3(463 mg, 0,51 mmol) og CS2CO3(3,2 g, 9,82 mmol) via kanyle. Reaksjonsblandingen ble spylt med nitrogen og deretter oppvarmet ved tilbakeløp i 22 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til romtemperatur deretter filtrert gjennom celite, vasking med CH2CI2og filtratet ble konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (5% -> 25% EtOAc/Heksan, gradient) ga 1,70 g (30%) av ønsket produkt 12. ;Trinn 2. Avbeskyttelse av 12, hvilket gir 13 ;HF-pyridin (5 ml) ble satt til en løsning av silyleter 12 (1,38 g, 3,03 mmol) i MeCN (15 ml) i en plastflaske ved 0 °C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0 °C i 3 timer, ble deretter behandlet med mettet vandig NaHC03(250 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (100 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (1% ;-> 3% MeOH/CH2Cl2, gradient) ga 464 mg (45%) av ønsket alkohol 13. ;Trinn 3. Alkylering av alkohol 13, hvilket gir 14 ;Kaliumhydrid (44 mg, 1,10 mmol) og 18-krone-6 (365 mg, 1,38 mmol) ble tilsatt sekvensielt til en løsning av alkohol 13 (315 mg, 0,92 mmol) i THF (4 ml) ved 0 °C. Etter 1 time ved 0 °C, ble etyl 5-klormetylfuran-2-karboksylat (0,28 ml, 1,82 mmol) tilsatt og reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter 22 timer, ble reaksjonen stanset med 0,5 N HC1 (20 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 25 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (50 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (20% EtOAc/Heksan —> EtOAc, gradient) ga 148 mg (32%) av ønsket produkt 14. ;Trinn 4. Oksidativ avbeskyttelse av 14, hvilket gir 15 og 16 2,3-diklor-5,6-dicyano-l,4-benzokinon (DDQ, 82 mg, 0,36 mmol) ble satt til en blanding av 14 (143 mg, 0,29 mmol) i CH2CI2(4 ml) og vann (0,2 ml). Etter 3 timer, viste tic at utgangsmateriale forble og en annen porsjon av DDQ (82 mg, 0,36 mmol) ble tilsatt. Etter ytterligere 1,25 timer, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHCCh(20 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 20 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (20 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (CH2CI2—» 3% MeOH/CEbCk, gradient) ga 38 mg (35%) av ønskede alkohol 15 og 61 mg uren aldehyd 16. Aldehyd 16 ble ytterligere renset ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CEbCk), hvilket gir 48,7 mg (45%) av aldehyd 16. ;Trinn 5. Oksidasjon av 15, hvilket gir 16 ;Molekylsikter (4Å, 3 mg), 4-metylmorfolin iV-oksid (12,6 mg, 0,11 mmol) og tetrapropylammoniumperruthenat (2,5 mg, 0,007 mmol) ble tilsatt sekvensielt til en løsning av alkohol 15 (26,8 mg, 0,072 mmol) i CH2CI2(1,5 ml) ved romtemperatur. Etter 20 min, ble reaksjonsblandingen filtrert gjennom celite, vasket med CH2CI2(5 ml). Filtratet ble konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CEfoCk) ga 9,6 mg (36%) av den ønskede aldehyd 16. ;Trinn 6. Grignard omsetning med 16, hvilket gir esteren av 17 Pentylmagnesiumbromid (2,0 M i Et20, 32 uL, 0,064 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 16 (21,7 mg, 0,058 mmol) i THF (0,4 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 25 min, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CEbCh) ga 10,6 mg (41%) av den ønskede ester. ;Trinn 7. Forsåpning, hvilket gir 17 ;Vandig litiumhydroksid (1 N, 0,1 ml) ble satt til en løsning av ester fra trinn 6 ovenfor (8,8 mg, 0,02 mmol) i THF (0,2 ml). Etter 1 time ved romtemperatur, ble reaksjonen surgjort med 0,5 N HC1 (1 ml) deretter ekstrahert med CH2CI2(3 x 7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 8,2 mg (99%) av tittelforbindelsen (17). ;Eksempel 7 (Referanse) ;5-{(R)-1-[4-(l-hydroksy-2-metyl-propyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl} -furan-2-karboksylsyre (18) ;Trinn 1. Grignard omsetning med 16, hvilket gir esteren av 18 Isopropylmagnesiumklorid (2,0 M i THF, 31 uL, 0,062 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 16 (20,5 mg, 0,055 mmol) i THF (0,4 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 35 min, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CEbCh) ga 5 mg (22%) av den ønskede ester. ;Trinn 2. Forsåpning, hvilket gir 18 ;Vandig litiumhydroksid (1 N, 0,05 ml) ble satt til en løsning av esteren fra trinn 1 ovenfor (3,1 mg, 0,007 mmol) i THF (0,15 ml). Etter 1 time ved romtemperatur, ble reaksjonen surgjort med 0,2 N HC1 (1 ml) deretter ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 2,5 mg (86%) av tittelforbindelsen (18). ;Eksempel 8 (Referanse) ;5-{(R)-l-[4-(l-hydroksy-2-fenyl-etyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl} -furan-2-karboksylsyre (19) ;Trinn 1. Grignard omsetning med 16, hvilket gir esteren av 19 Benzylmagnesiumklorid (2,0 M i THF, 14 uL, 0,028 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 16 (9,6 mg, 0,026 mmol) i THF (0,3 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 45 min, ble reaksjonsblandingen oppvarmet til 0 °C. Etter 25 min ved 0 °C, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (7% MeOH/CK-Ck) ga 3,3 mg (28%) av den ønskede ester. ;Trinn 2. Forsåpning, hvilket gir 19 ;Vandig litiumhydroksid (1 N, 0,05 ml) ble satt til en løsning av esteren fra trinn 1 ovenfor (2,4 mg, 0,005 mmol) i THF (0,15 ml). Etter 2,5 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen surgjort med 0,2 N HC1 (1 ml) deretter ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 2,2 mg (98%) av tittelforbindelsen (19) ;Eksempel 9 (Referanse) ;5-{(R)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl}-tiofen-2-karboksylsyre (23) ;Trinn 1. Alkylering av 13, hvilket gir 20 ;Kaliumhydrid (55,5 mg, 1,38 mmol) og 18-krone-6 (456 mg, 1,73 mmol) ble tilsatt sekvensielt til en løsning av alkohol 13 (394 mg, 1,15 mmol) i THF (5 ml) ved 0 °C. Etter 1 time ved 0 °C, ble en løsning av metyl 5-klormetyltiofen-2-karboksylat (439 mg, 2,30 mmol) i THF (2 ml) tilsatt via kanyle og reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter 19 timer viste tic analyse at utgangsmaterialet var igjen. En annen porsjon av KH (20 mg, 0,50 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved 50 °C. Etter 2 timer ved 50 °C, ble reaksjonsblandingen avkjølt og behandlet med 0,5 N HC1 (20 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 25 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (50 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (15% EtOAc/Heksan EtOAc, gradient) ga 108 mg (19%) av ønsket produkt 20. ;Trinn 2. Oksidativ avbeskyttelse av 20, hvilket gir 21 og 22 ;DDQ (91 mg, 0,40 mmol) ble satt til en blanding av 20 (98 mg, 0,20 mmol) i CH2CI2(3 ml) og vann (0,15 ml). Etter 4,5 timer, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03(15 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 25 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (40 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CK-Ck) ga 14,4 mg (19%) av alkohol 21 og 16,2 mg (22%) av aldehyd 22. ;Trinn 3. Grignard omsetning med 22, hvilket gir esteren av 23 ;Pentylmagnesiumbromid (2,0 M i Et20, 22 uL, 0,044 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 22 (11 mg, 0,029 mmol) i THF (0,2 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 1,5 timer, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI og ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CEbCk) ga 4,8 mg (37%) av den ønskede ester. ;Trinn 4. Forsåpning, hvilket gir 23 ;Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 1 mg) ble satt til en løsning av esteren fra trinn 3 ovenfor (3,6 mg, 0,008 mmol) i MeCN (0,1 ml) og pH 7,2 buffer (2,5 ml). Etter 16,5 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (7 ml) og konsentrert i vakuum. Residuet ble suspendert i CH2CI2og filtrert gjennom en bomullsplugg. Filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 2,0 mg (57%) av tittelforbindelsen (23). ;Eksempel 10 (Referanse) ;5-{(R)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl}-tiofen-2-karboksylsyre isopropylester (28) ;Trinn 1. Arylering av 1, hvilket gir 24 ;En løsning av amid 1 (3,37 g, 14,7 mmol) i 1,4-dioksan (30 ml) ble satt til en blanding av Pd2(dba)3(540 mg, 0,59 mmol), xantphos (1,02 g, 1,76 mmol) og CS2CO3(5,74 g, 17,6 mmol). En løsning av l-(l-(4-metoksybenzyloksyheksyl)-4-brombenzen (preparering 1, 4,99 g, 13,22 mmol) i 1,4-dioksan (30 ml) ble tilsatt via kanyle, fulgt av ytterligere 40 ml 1,4-dioksan. Reaksjonsblandingen ble spylt med nitrogen og deretter oppvarmet ved tilbakeløp natten over. Etter 20 timer, ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og filtrert gjennom celite, vasket med CH2CI2. Filtratet ble konsentrert i vakuum og residuet ble renset ved flash kolonnekromatografi på silikagel (5% —» 30% EtOAc/Heksan, gradient), hvilket gir 5,79 g (83%) av det ønskede produkt 24. ;Trinn 2. Avbeskyttelse av 24, hvilket gir 25 ;HF-pyridin (7 ml) ble satt til en løsning av silyleter 24 (4,05 g, 7,72 mmol) i MeCN (40 ml) i en plastflaske ved 0 °C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0 °C i 1 timeog ble deretter behandlet med mettet vandig NaHC03(300 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 150 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (200 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (CH2CI2;-> 3% MeOH/CH2Cl2, gradient) ga 2,3 g (72%) av ønskede alkohol 25. ;Trinn 3. Alkylering av 25, hvilket gir 26 ;Kaliumhydrid (155 mg, 3,86 mmol) ble satt til en løsning av alkohol 25 (1,22 g, 2,97 mmol) i THF (7 ml) ved 0 °C. Etter 15 min ved 0 °C, ble 18-krone-6 (1,02 g, 3,86 mmol) tilsatt. Etter 45 min lenger ved 0 °C, ble en løsning av isopropyl 5-klormetyltiofen-2-karboksylat (preparation 2, 650 mg, 2,97 mmol) i THF (5 ml) tilsatt via kanyle. Kaliumjodid (50 mg, 0,30 mmol) ble tilsatt og reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter 20 timer, ble reaksjonen stanset med 0,5 N HC1 (70 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (100 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (20% EtOAc/Heksan EtOAc, gradient) ga 296 mg (17%) av ønsket produkt 26 sammen med 747 mg (61%) av gjenvunnet utgangsalkohol 25. ;Trinn 4. Oksidativ avbeskyttelse av 26, hvilket gir 27 og 28 ;DDQ (93 mg, 0,41 mmol) ble satt til en løsning av 26 (220 mg, 0,37 mmol) i CH2CI2(4 ml) og vann (0,2 ml) ved 0 °C under nitrogen. Etter 35 min, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03(30 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 30 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (50 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (20% —» 70% EtOAc/Heksan, gradient) ga 13 mg (7%) av keton 27 og 108 mg (62%) av tittelforbindelsen (28). ;Eksempel 11 (Referanse) ;3-{(R)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl}-benzosyre (31) ;Trinn 1. Alkylering av 13, hvilket gir 29 ;Kaliumhydrid (16 mg, 0,39 mmol) ble satt til en løsning av alkohol 13 (112 mg, 0,33 mmol) i THF (1,0 ml) ved 0 °C. Etter 1 time ved 0 °C, ble 18-krone-6 ;(114 mg, 0,43 mmol), kaliumjodid (5 mg, 0,03 mmol) og en løsning av metyl 3-klormetylbenzoat (121 mg, 0,66 mmol) i THF (0,5 ml) ble tilsatt sekvensielt. Reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter 19 timer, ble reaksjonen stanset med 0,1 N HC1 (10 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x10 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (15 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (20% EtOAc/Heksan —> EtOAc, gradient) ga 23 mg (14%) av ønsket produkt 29. ;Trinn 2. Oksidativ avbeskyttelse av 29, hvilket gir 30 ;DDQ (23 mg, 0,10 mmol) ble satt til en blanding av 29 (23 mg, 0,047 mmol) i CH2CI2og vann (20:1, 0,25 ml). Etter 3,75 timer, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03(10 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (10 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (80% EtOAc/Heks) ga 13 mg (58%) av aldehyd 30. Trinn 3. Grignard omsetning med 30, hvilket gir esteren av 31 Pentylmagnesiumbromid (2,0 M i Et20, 50 uL, 0,10 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 30 (12,4 mg, 0,034 mmol) i THF (0,1 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 1 time, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI (7 ml) og ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CEbCh) ga 8,6 mg (58%) av den ønskede ester. ;Trinn 4. Forsåpning, hvilket gir 31 ;Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 1 mg) ble satt til en løsning av esteren fra trinn 3 ovenfor (7,4 mg, 0,017 mmol) i MeCN (0,1 ml) og pH 7,2 buffer (2,5 ml). Etter 18 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (7 ml) og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CK-Ck) ga 1,5 mg (21%) av tittelforbindelsen (31). ;Eksempel 12 (Referanse) ;5- {(R)-1 -[4-(l -hydroksy-pentyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl} - tiofen-2-karboksylsyre (32) ;Trinn 1. Grignard omsetning med 22, hvilket gir esteren av 32 H-butylmagnesiumklorid (2,0 M i THF, 41 uL, 0,082 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 22 (20,2 mg, 0,054 mmol) i THF (0,1 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 1 time, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI (10 ml) og ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket ;(Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CEbCh) ga 12,3 mg (53%) av den ønskede ester. ;Trinn 2. Forsåpning, hvilket gir 32 ;Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 1 mg) ble satt til en løsning av esteren fra trinn 1 ovenfor (11,2 mg, 0,026 mmol) i MeCN (0,1 ml) og pH 7,2 buffer (3,0 ml). Etter 19 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (10 ml) og konsentrert i vakuum. Residuet ble suspendert i 5% MeOH/CføCk og filtrert gjennom en bomullsplugg. Filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 10,7 mg (99%) av tittelforbindelsen (32). ;Eksempel 13 (referanse) ;5- {(R)-1 -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl} - tiofen-2-karboksylsyre (33) ;Trinn 1. Grignard omsetning med 22, hvilket gir esteren av 33 H-heksylmagnesiumbromid (2,0 M i Et20, 100 uL, 0,20 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 22 (24,6 mg, 0,054 mmol) i THF (0,12 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 1,5 timer, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI (10 ml) og ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CføCh) ga 16,3 mg (54%) av den ønskede esteren. ;Trinn 2. Forsåpning, hvilket gir 33 ;Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 1 mg) ble satt til en løsning av esteren fra trinn 1 ovenfor (13 mg, 0,028 mmol) i MeCN (0,1 ml) og pH 7,2 buffer (3,0 ml). Etter 18 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (10 ml) og konsentrert i vakuum. Residuet ble suspendert i 5% MeOH/CEhCh og filtrert gjennom en bomullsplugg. Filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 11 mg (87%) av tittelforbindelsen (33). ;Eksempel 14 Referanse) ;5-{(R)-1-[4-(l-hydroksy-butyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl}-tiofen-2-karboksylsyre (34) ;Trinn 1. Grignard omsetning med 22, hvilket gir esteren av 34 H-Propylmagnesiumklorid (2,0 M i Et20, 92 uL, 0,18 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 22 (22,9 mg, 0,061 mmol) i THF (0,12 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 1,75 timer, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI (10 ml) og ekstrahert med CH2CI2(3x7 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CføCh) ga 13 mg (51%) av den ønskede ester. ;Trinn 2. Forsåpning, hvilket gir 34 ;Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 1 mg) ble satt til en løsning av esteren fra trinn 1 ovenfor (10,8 mg, 0,026 mmol) i MeCN (0,1 ml) og pH 7,2 buffer (3,0 ml). Etter 17 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (10 ml) og konsentrert i vakuum. Residuet ble suspendert i 5% MeOH/CføCh og filtrert gjennom en bomullsplugg. Filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 10,4 mg (99%) av tittelforbindelsen (34). ;Eksempel 15 (Referanse) ;5-{(R)-l-[4-(l-hydroksy-propyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl}-tiofen-2-karboksylsyre (35) ;Trinn 1. Grignard omsetning med 22, hvilket gir esteren av 35 Etylmagnesiumklorid (2,0 M i Et20, 24 uL, 0,048 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 22 (5,8 mg, 0,016 mmol) i THF (0,1 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 1,25 timer, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI (5 ml) og ekstrahert med CH2CI2(3x5 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (5% MeOH/CEbCh) ga 2,5 mg (40%) av den ønskede ester. ;Trinn 2. Forsåpning, hvilket gir 35 ;Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 1 mg) ble satt til en løsning av esteren fra trinn 1 ovenfor (2,8 mg, 0,007 mmol) i MeCN (0,1 ml) og pH 7,2 buffer (2,5 ml). Etter 17 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (10 ml) og konsentrert i vakuum. Residuet ble suspendert i 5% MeOH/CEhCh og filtrert gjennom en bomullsplugg. Filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 2,7 mg (99%) av tittelforbindelsen (35). ;Eksempel 16 (Referanse) ;5-((E og Z)-3- {(R)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl}-allyl)-tiofen-2-karboksylsyre (41) ;Trinn 1. Oksidasjon av 25, hvilket gir aldehyd 36 ;Dess-Martin periodinan (1,63 g, 3,83 mmol) ble satt til en løsning av alkohol 25 (1,43 g, 3,48 mmol) i CH2CI2(12 ml) ved romtemperatur under nitrogen. Etter 1 time ved romtemperatur ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03og mettet vandig NaHS03(1:1,100 ml). Blandingen ble ekstrahert med CH2CI2(3 x 150 ml). De samlede ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (2% MeOH/CH2Cl2) ga 915 mg (64%) av den ønskede aldehyd 36. ;Trinn 2. Metylenering av 36, hvilket gir alken 37 ;Tebbe reagens (0,5 M i THF, 4,86 ml, 2,43 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 36 (677 mg, 1,65 mmol) i THF (11 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 1 time ved - 40 °C ble reaksjonen stanset ved tilsetning av vandig 2 N NaOH (1,65 ml) og omrørt kraftig natten over med tilsetning av THF (15 ml). Blandingen ble filtrert gjennom celite, vasket med overskudd av EtOAc. Filtratet ble konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (30% 50% EtOAc/Heks) ga 254 mg (38%) av de ønskede alken 37. ;Trinn 3. Metathesis omsetning av 37, hvilket gir alken 38 Benzyliden[l,3-bis(2,4,6-trimetylfenyl)-2-imidazolidinyliden] diklor(tricykloheksylfosfin) -ruthenium (Grubbs' katalysator, andre dannelse, 48 mg, 0,057 mmol) ble satt til en løsning av alken 37 (230 mg, 0,56 mmol) og metyl 5-allyltiofen-2-karboksylat (preparering 3, 206 mg, 1,13 mmol) i CH2CI2(3,0 ml). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved tilbakeløp i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og mer katalysator (48 mg, 0,057 mmol) og metyl 5-allyltiofen-2-karboksylat (100 mg, 0,55 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet i 18 timer lenger ved tilbakeløp og deretter avkjølt og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (5% —> 50% EtO Ac/Heks, gradient) ga 100 mg (32%) av det ønskede alken 38 sammen med 130 mg (57%) av utgangsalken 37. ;Trinn 4. Oksidativ avbeskyttelse av 38, hvilket gir 39 og 40 ;DDQ (58 mg, 0,26 mmol) ble satt til en blanding av 38 (130 mg, 0,23 mmol) i CH2CI2(3,1 ml) og vann (0,16 ml) ved 0 °C under nitrogen. Etter 45 min, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03(40 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 30 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (25 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (50% —» 75% EtO Ac/Heks, gradient) ga 28 mg en ikke-separerbar blanding av utgangsmaterialet 38 og keton 39 og 63 mg (62%) av ønskede alkohol 40. ;Trinn 5. Forsåpning av 40, hvilket gir 41 ;Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 1 mg) ble satt til en løsning av ester 40 (3,7 mg, 0,008 mmol) i MeCN (0,2 ml) og pH 7,2 buffer (2,5 ml). Etter 15,5 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (8 ml) og konsentrert i vakuum. Residuet ble suspendert i 10% MeOH/CEhCk og filtrert gjennom en bomullsplugg. Filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 3,0 mg (84%) av tittelforbindelsen (41). ;Eksempel 17 (Referanse) ;5-(3-{(S)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl}-propyl)-tiofen-2-karboksylsyre (43) ;Trinn 1. Hydrogenering av 40, hvilket gir ester 42 ;Palladium på karbon (10 vekt. %, 15 mg) ble satt til en løsning av alken 40 (63 mg, 0,14 mmol) i metanol (3,0 ml). En hydrogenatmosfære ble etablert ved evakuering og refylling med hydrogen (3x) og reaksjonsblandingen ble omrørt under en ballong av hydrogen. Etter 3 timer ved romtemperatur, ble reaksjonsblandingen filtrert gjennom celite, vasket med MeOH og filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 63 mg råprodukt.<*>H NMR analyse viste gjenværende utgangsmateriale slik at det rå materialet ble igjen underkastet tilstandene ovenfor. Etter 20 timer ved romtemperatur, ble reaksjonsblandingen filtrert gjennom celite, vasket med MeOH og filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 60 mg (95%) av den ønskede ester 42.
Trinn 2. Forsåpning av 42, hvilket gir 43.
Vandig 1 N litiumhydroksid (0,19 ml, 0,19 mmol) ble satt til en løsning av ester 42 (17 mg, 0,038 mmol) i THF (0,38 ml). Etter 20 timer ved romtemperatur, ble H2O (1,0 ml) tilsatt og blandingen ble surgjort med 1 N vandig HC1 (1,0 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x10 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (10 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (EtOAc —> 25% MeOH/EtOAc, gradient) ga 14,4 mg (87%) av tittelforbindelsen (43).
Eksempel 18 (Referanse)
5-(3-{(S)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl}-propyl)-tiofen-2-karboksylsyreisopropylester (44)
DBU (5,2 uL, 0,035 mmol) ble satt til en løsning av syre 43 (7,5 mg, 0,017 mmol) i aceton (0,1 ml) ved romtemperatur under nitrogen. Etter 10 min, ble 2-jodpropan (35 uL, 0,35 mmol) tilsatt. Etter 21 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen stanset med 0,01 N HC1 (3 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x4 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (5 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (CH2CI2-> 1% MeOH/ CH2CI2) ga 4,6 mg (53%) av tittelforbindelsen (44).
Eksempel 19
5-{3-[(S)-l-(4-heksanoyl-fenyl)-5-okso-pyrrolidin-2-yl]-propyl}-tiofen-2-karboksylsyre (46)
Trinn 1. Oksidasjon av 38/39 ga 39
DDQ (5,5 mg, 0,024 mmol) ble satt til blandingen av eter 38 og keton 39 fra Eksempel 16, trinn 4 (6,8 mg, 0,012 mmol) i CH2CI2og vann (20:1, 0,25 ml) ved romtemperatur under nitrogen. Etter 1,5 timer, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03(5 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3x5 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (5 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (60% EtO Ac/Heks) ga 1,5 mg (28%) av ønsket keton 39.
Trinn 2. Hydrogenering av 39, hvilket gir ester 45
Palladium på karbon (10 vekt. %, 1 mg) ble satt til en løsning av alken 39 (1,5 mg, 0,0034 mmol) i metanol (0,5 ml). En hydrogenatmosfære ble etablert ved evakuering og refylling med hydrogen (3x) og reaksjonsblandingen ble omrørt under en ballong av hydrogen. Etter 2 timer ved romtemperatur, ble reaksjonsblandingen filtrert gjennom celite, vasket med MeOH og filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 1,3 mg (86%) av ønsket ester 45.
Trinn 3. Forsåpning av 45, hvilket gir 46
Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 1 mg) ble satt til en løsning av ester 45 (1,3 mg, 0,0029 mmol) i MeCN (0,1 ml) og pH 7,2 buffer (2,5 ml). Etter 23 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (10 ml) og konsentrert i vakuum. Residuet ble suspendert i 10% MeOH/CføCh og filtrert gjennom en bomullsplugg. Filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 1,2 mg (95%) av tittelforbindelsen (46).
Eksempel 20 (Referanse)
5- [(R)-1 -(4-heksanoyl-fenyl)-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl]-tiofen-2-karboksylsyre (47)
Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 1 mg) ble satt til en løsning av ester 27 (Eksempel 10, trinn 4, 6,6 mg, 0,014 mmol) i MeCN (0,1 ml) og pH 7,2 buffer (2,5 ml). Etter 17 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (8 ml) og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (4% MeOH/CK-Ck) ga 1 mg (17%) av tittelforbindelsen (47).
Eksempler 21 og 22
5-{(R)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl}-tiofen-2-karboksylsyre isopropylester (raskere eluerende diastereomer 48) og 5-{ (R)-1 - [4-( 1 -hy droksy-heksyl)-feny 1] - 5 -okso-py rrolidin-2-y lmetoksymety 1} - tiofen-2-karboksylsyreisopropylester (langsomere eluerende diastereomer 49) De to diastereomerene av eksempel 10 (28, -100 mg) ble separert på et Waters 600 HPLC instrument ved anvendelse av en Waters 2996 PDA detektor og en Whatman Partisil® 10 M20/50 kolonne, 22 mm x 500 mm (Katt. nr. 4232-220, Q.A. nr. 3TA02D80). Ved anvendelse av 60% EtOAc/Heks som elueringsmidlet og en strømningshastighet på 15 ml/min, de første diastereomer (48, 32,8 mg total isolert) eluert ved 55-60 min og den andre diastereomer (49, 52,6 mg total isolert) eluert ved 61-70 min.
Eksempel 23
5-{(R)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl}-tiofen-2-karboksylsyre (50)
Vandig 1 N litiumhydroksid (0,05 ml, 0,05 mmol) ble satt til en løsning av raskere eluerende ester diastereomer 48 (2,7 mg, 0,0057 mmol) i THF (0,1 ml) og blandingen ble oppvarmet ved tilbakeløp natten over. Etter 17 timer, ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, surgjort med 0,05 N vandig HC1 (5 ml) og ekstrahert med CH2CI2(3x5 ml). De samlede ekstrakter ble tørket
(Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 2,5 mg (100%) av tittelforbindelsen (50).
Eksempel 24
5-{(R)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl}-tiofen-2-karboksylsyre (51)
Vandig 1 N litiumhydroksid (0,05 ml, 0,05 mmol) ble satt til en løsning av langsomere eluerende ester diastereomer 49 (2,8 mg, 0,0059 mmol) i THF (0,1 ml) og blandingen ble oppvarmet ved tilbakeløp natten over. Etter 23 timer, ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, surgjort med 0,05 N vandig HC1 (5 ml) og ekstrahert med CH2CI2(3x5 ml). De samlede ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 1,7 mg (67%) av tittelforbindelsen (51).
Eksempler 25 og 26
5-(3-{(S)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl}-propyl)-tiofen-2-karboksylsyre-metylester (raskere eluerende diastereomer 52) og 5-(3-{(S)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl}-propyl)-tiofen-2-karboksylsyre-metylester (langsomere eluerende diastereomer 53)
De to diastereomerene fra eksempel 17, trinn 1 (42,~43 mg) ble separert på et Waters 600 HPLC instrument ved anvendelse av en Waters 2996 PDA detektor og en Whatman Partisil® 10 M20/50 kolonne, 22 mm x 500 mm (Kat. nr. 4232-220, Q.A. nr. 3TA02D80). Ved anvendelse av 55% EtOAc/Heks som elueringsmidlet og en strømningshastighet på 15 ml/min, den første diastereomer (52, 16 mg) ble eluert ved 69-75 min og den andre diastereomer (53, 19 mg) ble eluert ved 80-88 min.
Eksempel 27
5-(3-{(S)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl}-propyl)-tiofen-2-karboksylsyre (54)
Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 2 mg) ble satt til en løsning av raskere eluerende ester diastereomer 52 (16 mg, 0,036 mmol) i MeCN (0,2 ml) og pH 7,2 buffer (3,0 ml). Etter 18 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (10 ml) og konsentrert i vakuum. Residuet ble fortynnet med CH2CI2(5 ml), filtrert gjennom en plugg av glassull og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (EtOAc -> 25% MeOH/EtOAc, gradient) ga 12 mg (77%) av tittelforbindelsen (54).
Eksempel 28
5-(3-{(S)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl}-propyl)-tiofen-2-karboksylsyre (55)
Kanin lever esterase (134 enheter/mg, 2 mg) ble satt til en løsning av langsomere eluerende ester diastereomer 53 (19 mg, 0,043 mmol) i MeCN (0,2 ml) og pH 7,2 buffer (3,0 ml). Etter 18 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen fortynnet med MeCN (10 ml) og konsentrert i vakuum. Residuet ble fortynnet med CH2CI2(5 ml), filtrert gjennom en plugg av glassull og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (EtOAc -> 25% MeOH/EtOAc, gradient) ga 10,5 mg (57%) av tittelforbindelsen (55).
Eksempel 29
5-(3-{(S)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl}-propyl)-tiofen-2-karboksylsyreisopropylester (56, fra 54 og 52)
DBU (4,2 uL, 0,028 mmol) og 2-jodpropan (19 uL, 0,19 mmol) ble satt til en løsning av syre 54 (8 mg, 0,019 mmol) i aceton (0,15 ml) ved romtemperatur under nitrogen. Etter 18 timer ved romtemperatur, ble løsningsmidlet fjernet under en strøm av nitrogen. Residuet ble fortynnet med EtOAc (10 ml) og vasket med 0,1 N HC1 (2x5 ml) og saltvann (5 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (CTL-Ch-» 25% MeOH/ CH2CI2) ga 1,9 mg (22%) av tittelforbindelsen (56) og 4 mg (50%) gjenvunnet 54.
Eksempel 30
5-(3-{(S)-l-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl}-propyl)-tiofen-2-karboksylsyre isopropylester (57, fra 55 og 53)
DBU (4,7 uL, 0,031 mmol) og 2-jodpropan (21 uL, 0,21 mmol) ble satt til en løsning av syre 55 (9 mg, 0,021 mmol) i aceton (0,2 ml) ved romtemperatur under nitrogen. Etter 18 timer ved romtemperatur, ble løsningmidlet fjernet under en strøm av nitrogen. Residuet ble fortynnet med EtOAc (10 ml) og vasket med 0,1 N HC1 (2x5 ml) og saltvann (5 ml), deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (CK-Ck-» 25% MeOH/ CH2CI2) ga 2,0 mg (20%) av tittelforbindelsen (57) og 6 mg (67%) gjenvunnet 55.
Eksempel 31
5- {(R)-1 -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl} - tiofen-2-karboksylsyre isopropylester (61)
Trinn 1. Arylering av 1, hvilket gir 58
Pd2(dba)s (550 mg, 0,60 mmol), xantphos (1,04 g, 180 mmol) og CS2CO3(5,87 g, 18,0 mmol) ble tilsatt sekvensielt til en løsning av amid 1 (3,45 g, 15,0 mmol) i 1,4-dioksan (100 ml). En løsning av l-(l-(4-metoksybenzyloksyheptyl)-4-brombenzen (preparering 4, 5,30 g, 13,54 mmol) i 1,4-dioksan (50 ml) ble tilsatt via kanyle. Reaksjonsblandingen ble spylt med nitrogen og deretter oppvarmet ved tilbakeløp natten over. Etter 17 timer, ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur og filtrert gjennom celite, vasket med CH2CI2. Filtratet ble konsentrert i vakuum og residuet ble renset ved flash kolonnekromatografi på silikagel (5% -> 35% EtOAc/Heksan, gradient), hvilket gir 5,26 g (72%) av det ønskede produkt 58.
Trinn 2. Avbeskyttelse av 58, hvilket gir 59
HF-pyridin (8,8 ml) ble satt til en løsning av silyleter 58 (5,26 g, 9,74 mmol) i MeCN (50 ml) i en plastflaske ved 0 °C. Etter 45 min ved 0 °C, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03(400 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 200 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (200 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (CH2CI2-> 5% MeOH/CTfeCh, gradient) ga 3,9 g (94%) av ønskede alkohol 59 som et blekgult, fast stoff.
Trinn 3. Alkylering av 59, hvilket gir 60
En rundbunnet kolbe ble fylt med kaliumhydrid (30 vekt% i olje, 138 mg, 1,03 mmol). Materialet ble vasket med heksaner (3x1 ml), deretter suspendert i THF (1 ml). Blandingen ble avkjølt til 0 °C og en løsning av alkohol 59 (339 mg, 0,80 mmol) i THF (1,5 ml) ble tilsatt via kanyle. Etter 1 time ved 0 °C, ble en løsning av isopropyl 5-klormetyltiofen-2-karboksylat (preparering 2, 174 mg, 0,80 mmol) i THF (1,5 ml) tilsatt via kanyle. Kaliumjodid (14 mg, 0,08 mmol) ble tilsatt og reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter 18 timer, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NH4CI (15 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 25 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (15 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (20% —> 75% EtOAc/Heksan, gradient), fulgt av preparativ tynnskiktskromatografi (65% EtOAc/Heksan) ga 65 mg (14%) av ønsket produkt 60.
Trinn 4. Oksidativ avbeskyttelse av 60, hvilket gir 61
DDQ (26 mg, 0,12 mmol) ble satt til en løsning av 60 (65 mg, 0,11 mmol) i CH2CI2(1,4 ml) og vann (0,07 ml) ved 0 °C under nitrogen. Etter 40 min, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03(20 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 20 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (15 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (50% —» 75% EtOAc/Heksan, gradient), fulgt av preparativ tynnskiktskromatografi (60% EtOAc/Heksan) ga 36 mg (69%) av tittelforbindelsen (61).
Eksempler 32 og 33
5- {(R)-1 -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl} - tiofen-2-karboksylsyreisopropylester (raskere eluerende diastereomer 62) og 5-{(R)-l-[4-(l-hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl}-tiofen-2-karboksylsyre isopropylester (langsomere eluerende diastereomer 63)
De to diastereomerene i eksempel 31 (61,~36 mg) ble separert på et Waters 600 HPLC instrument ved anvendelse av en Waters 2996 PDA detektor og en Whatman Partisil® 10 M20/50 kolonne, 22 mm x 500 mm (Kat. nr. 4232-220, Q.A. nr. 3TA02D80). Ved anvendelse av 60% EtOAc/Heks som elueringsmidlet og en strømningshastighet av 15 ml/min, ble den første diastereomer (62, 14,8 mg) eluert ved 50-56,5 min og den andre diastereomer (63, 16,4 mg ) eluert ved 56,5-70 min.
Eksempel 34
5- {(R)-1 -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl} - tiofen-2-karboksylsyre (64)
Vandig 1 N litiumhydroksid (0,05 ml, 0,05 mmol) ble satt til en løsning av raskere eluerende ester diastereomer 62 (3,5 mg, 0,0072 mmol) i THF (0,1 ml) og blandingen ble oppvarmet ved tilbakeløp natten over. Etter 18 timer, ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, fortynnet med vann (2 ml), surgjort med 1,0 N vandig HC1 (1 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x5 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (5 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 3,0 mg (94%) av tittelforbindelsen (64).
Eksempel 35
5- {(R)-1 -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksymetyl} - tiofen-2-karboksylsyre (65)
Vandig 1 N litiumhydroksid (0,05 ml, 0,05 mmol) ble satt til en løsning av langsomere eluerende ester diastereomer 63 (3,5 mg, 0,0072 mmol) i THF (0,1 ml) og blandingen ble oppvarmet ved tilbakeløp natten over. Etter 18 timer, ble reaksjonsblandingen avkjølt til romtemperatur, fortynnet med vann (2 ml), surgjort med 1,0 N vandig HC1 (1 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x5 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (5 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 3,2 mg (99%) av tittelforbindelsen (65).
Eksempel 36
5-(3- {(S)-l -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl} -propyl)-tiofen-2-karboksylsyre (71)
Trinn 1. Oksidasjon av 59, hvilket gir aldehyd 66 l-(3-(dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydroklorid (EDCI, 1,43 g, 7,45 mmol) og DMSO (0,70 ml, 9,86 mmol) ble tilsatt sekvensielt til en løsning av alkohol 59 (1,06 g, 2,48 mmol) i benzen (25 ml) ved romtemperatur under nitrogen. Etter 10 min ved romtemperatur, ble pyridiniumtrifluoracetat (527 mg, 2,73 mmol) tilsatt. Etter 3 timer ved romtemperatur, ble løsningen dekantert fra det oljeaktige residuet og residuet ble vasket med benzen (3x15 ml). De samlede benzenfaser ble konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (CH2CI2-> 3% MeOH/CEbCh, gradient) ga 1,0 g (95%) av den ønskede aldehyd 66.
Trinn 2. Metylenering av 66, hvilket gir alken 67
Tebbe reagens (0,5 M i THF, 7,0 ml, 3,5 mmol) ble satt til en løsning av aldehyd 66 (1,0 g, 2,36 mmol) i THF (16 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Etter 1 time ved - 40 °C ble reaksjonen stanset ved tilsetning av vandig 2 N NaOH (5,25 ml) og kraftig omrørt natten over med tilsetning av THF (20 ml). Blandingen ble filtrert gjennom celite, vasket med overskudd av EtOAc. Filtratet ble konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (40% EtO Ac/Heks) ga 195 mg (20%) av ønskede alken 67.
Trinn 3. Metathesis omsetning av 67, hvilket gir alken 68
Grubbs' andre generasjon katalysator (38 mg, 0,045 mmol) ble satt til en løsning av alken 67 (190 mg, 0,45 mmol) og metyl 5-allyltiofen-2-karboksylat (preparering 3, 173 mg, 0,95 mmol) i CH2CI2(2,4 ml). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet ved tilbakeløp i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og mer katalysator (9 mg, 0,011 mmol) og metyl 5-allyltiofen-2-karboksylat (165 mg, 0,91 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet i ytterligere 22 timer ved tilbakeløp, deretter avkjølt og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (2 ganger, først ved anvendelse av 5% -> 50% EtO Ac/Heks, gradient deretter ved anvendelse av CH2CI2-> 3% MeOH/CK-Ch, gradient) ga 180 mg (69%) av ønskede alken 68.
Trinn 4. Oksidativ avbeskyttelse av 68, hvilket gir 69
DDQ (78 mg, 0,34 mmol) ble satt til en blanding av 68 (180 mg, 0,31 mmol) i CH2CI2(4,1 ml) og vann (0,21 ml) ved 0 °C under nitrogen. Etter 45 min ved 0 °C, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHCCte (50 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 50 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (50 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (50% —» 66% EtO Ac/Heks, gradient) ga 50 mg (35%) av ønskede alkohol 69.
Trinn 5. Hydrogenering av 69, hvilket gir ester 70
Palladium på karbon (10 vekt. %, 12 mg) ble satt til en løsning av alken 69 (50 mg, 0,11 mmol) i metanol (2,3 ml). En hydrogenatmosfære ble etablert ved evakuering og refyIling med hydrogen (3x) og reaksjonsblandingen ble omrørt under en ballong av hydrogen. Etter 20 timer ved romtemperatur, ble reaksjonsblandingen filtrert gjennom celite, vasket med MeOH og filtratet ble konsentrert i vakuum, hvilket gir 50 mg (99%) av den ønskede ester 70.
Trinn 6. Forsåpning av 70, hvilket gir 71
Vandig 1 N litiumhydroksid (0,19 ml, 0,19 mmol) ble satt til en løsning av ester 70 (17 mg, 0,038 mmol) i THF (0,4 ml). Etter 18 timer ved romtemperatur, ble H2O (1,0 ml) tilsatt og blandingen ble surgjort med 1 N vandig HC1 (1,0 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x10 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (10 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved preparativ tynnskiktskromatografi (15% MeOH/CH2Cl2) ga 5,6 mg (34%) av tittelforbindelsen (71).
Eksempler 37 og 38
5-(3- {(S)-l -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl} -propyl)-tiofen-2-karboksylsyre-metylester (raskere eluerende diastereomer 72) og 5-(3-{(S)-l -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl} -propyl)-tiofen-2-karboksylsyre-metylester (langsomere eluerende diastereomer 73)
De to diastereomerene fra eksempel 36, trinn 5 (70,~34 mg) ble separert på et Waters 600 HPLC instrument ved anvendelse av en Waters 2996 PDA detektor og en Whatman Partisil® 10 M20/50 kolonne, 22 mm x 500 mm (Kat. nr. 4232-220, Q.A. nr. 3TA02D80). Ved anvendelse av 55% EtOAc/Heks som elueringsmidlet og en strømningshastighet på 15 ml/min, den første diastereomer (72, 10,7 mg) eluert ved 78-87,5 min og den andre diastereomer (73, 7,0 mg) eluert ved 91-101 min.
Eksempel 39
5-(3- {(S)-l -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl} -propyl)-tiofen-2-karboksylsyre (74)
Vandig 1 N litiumhydroksid (0,12 ml, 0,12 mmol) ble satt til en løsning av raskere eluerende ester diastereomer 72 (10,7 mg, 0,023 mmol) i THF (0,3 ml). Etter 66 timer ved romtemperatur, ble H2O (1,0 ml) tilsatt og blandingen ble surgjort med 1 N vandig HC1 (1,0 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x10 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (5 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 10 mg (96%) av tittelforbindelsen (74) .
Eksempel 40
5-(3- {(S)-l -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl} -propyl)-tiofen-2-karboksylsyre (75)
Vandig 1 N litiumhydroksid (0,08 ml, 0,08 mmol) ble satt til en løsning av langsomere eluerende ester diastereomer 73 (7,0 mg, 0,015 mmol) i THF (0,2 ml). Etter 66 timer ved romtemperatur, ble H2O (1,0 ml) tilsatt og blandingen ble surgjort med 1 N vandig HC1 (1,0 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x8 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (5 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 6,5 mg (96%) av tittelforbindelsen (75) .
Eksempel 41
5-(3- {(S)-l -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl} -propyl)-tiofen-2-karboksylsyreisopropylester (76, fra 74 og 72)
DBU (4,0 uL, 0,027 mmol) og 2-jodpropan (36 uL, 0,36 mmol) ble satt til en løsning av syre 74 (8 mg, 0,018 mmol) i aceton (0,2 ml) ved romtemperatur under nitrogen. Etter 72 timer ved romtemperatur, ble løsningmidlet fjernet under en strøm av nitrogen. Residuet ble fortynnet med EtOAc (10 ml) og vasket med 0,5 N HC1 (2x5 ml) og saltvann (5 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (EtOAc 20% MeOH/EtOAc) ga 7,3 mg (83%) av tittelforbindelsen (76).
Eksempel 42
5-(3- {(S)-l -[4-(l -hydroksy-heptyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-yl} -propyl)-tiofen-2-karboksylsyre isopropylester (77, fra 75 og 73)
DBU (2,5 uL, 0,017 mmol) og 2-jodpropan (22,5 uL, 0,225 mmol) ble satt til en løsning av syre 75 (5 mg, 0,011 mmol) i aceton (0,11 ml) ved romtemperatur under nitrogen. Etter 72 timer ved romtemperatur, ble løsningmidlet fjernet under en strøm av nitrogen. Residuet ble fortynnet med EtOAc (10 ml) og vasket med 0,5 N HC1 (2x5 ml) og saltvann (5 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (EtOAc 20% MeOH/EtOAc) ga 3,2 mg (58%) av tittelforbindelsen (77).
Eksempel 43
4-{(R)-1-[4-(l-hydroksy-heksyl)-fenyl]-5-okso-pyrrolidin-2-ylmetoksy}-benzosyre (80)
Trinn 1. Mitsunobu omsetning av 25 og metyl 4-hydroksybenzoat, hvilket gir 78
Diisopropyl-azodikarboksylat (DIAD, 194 uL, 1,0 mmol) ble satt til en løsning av alkohol 25 (200 mg, 0,49 mmol), trifenylfosfin (191 mg, 0,73 mmol) og metyl 4-hydroksybenzoat (87 mg, 0,57 mmol) i CH2CI2(2,5 ml). Etter
omrøring i 18 timer ved romtemperatur, ble løsningmidlet fjernet under en strøm av nitrogen og residuet ble suspendert i EtOAc (75 ml). Blandingen ble vasket med mettet vandig NaHC03(3 x 25 ml) og saltvann (25 ml), deretter ble den organiske fasen tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (50% EtOAc/heksan -> EtOAc, gradient) ga 81 mg (31%) av ønskede eter 78.
Trinn 2. Oksidativ avbeskyttelse av 78, hvilket gir 79
DDQ (37 mg, 0,16 mmol) ble satt til en blanding av 78 (81 mg, 0,15 mmol) i CH2CI2(2,0 ml) og vann (0,1 ml) ved 0 °C under nitrogen. Etter 45 min ved 0 °C, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03(25 ml). Blandingen ble ekstrahert med EtOAc (3 x 25 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (25 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (85% EtO Ac/Heks EtOAc, gradient) ga 31 mg (49%) av ønskede alkohol 79.
Trinn 3. Forsåpning av 79, hvilket gir 80
Vandig 1 N litiumhydroksid (0,35 ml, 0,35 mmol) ble satt til en løsning av ester 79 (30 mg, 0,071 mmol) i THF (0,7 ml). Etter 20 timer ved romtemperatur, ble vann (2,0 ml) tilsatt og blandingen ble surgjort med 1 N vandig HC1 (1,5 ml) og ekstrahert med EtOAc (3x10 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (10 ml) deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (EtOAc —> 10% MeOH/EtOAc, gradient) ga 11,5 mg (38%) av utgangsester 79 og 8,5 mg (29%) av tittelforbindelsen (80).
Preparering 1 (Referanse)
1 -(1 -(4-metoksybenzyloksy-heksyl)-4-brombenzen
Trinn 1. Pentyl grignard tilsetning til 4-brombenzaldehyd
n-Pentyl magnesiumbromid (2,0 M i THF, 27 ml, 54 mmol) ble satt til en løsning av 4-brombenzaldehyd (5,0 g, 27 mmol) i THF (20 ml) ved 0 °C under nitrogen. Etter 1 time, ble reaksjonen stanset med 3 N HC1 og ekstrahert med Et20 (3 x 120 ml). Kombinerte ekstrakter ble vasket med saltvann (100 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved
flash kolonnekromatografi på silikagel (5% EtO Ac/Heks) ga 5,1 g (74%) av 1-(4-bromfenyl)-heksan-l -ol.
Trinn 2. Beskyttelse av alkoholen som dens MPM eter Natriumhydrid (60% vekt. i olje, 0,95 g, 23,8 mmol) ble satt til en løsning av alkoholen fra trinn 1 (5,11 g, 19,9 mmol) i THF og DMF (2:1, 20 ml) ved 0 °C under nitrogen. Etter 1 time ved 0 °C, 4-metoksybenzylklorid (3,23 ml, 23,8 mmol) og reaksjonen fikk oppvarmes til romtemperatur. Reaksjonen ble deretter oppvarmet ved 80 °C. Etter 17 timer, fikk reaksjonsblandingen avkjøles til romtemperatur, behandlet med mettet vandig NH4CI (100 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (100 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (2% EtO Ac/Heks) ga 7,02 g (94%) av tittelforbindelsen.
Preparering 2 (Referanse)
Isopropyl 5-klormetyltiofen-2-karboksylat
Trinn 1. Fremstilling av bis-isopropylester
DBU (31,3 ml, 209 mmol) og 2-jodpropan (20,9 ml, 209 mmol) ble satt til en løsning av tiofen-2,5-dikarboksylsyre (6,0 g, 34,9 mmol) i aceton (60 ml) ved romtemperatur under nitrogen. Etter 21 timer ved romtemperatur, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03(300 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 150 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (200 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 7,59 g (85%) av diesteren.
Trinn 2. Reduksjon til hydroksymetylesteren
Natrium-borhydrid (3,36 g, 88,8 mmol) ble satt til en løsning av diesteren (7,59 g, 29,6 mmol) i CTfeCk/MeOH (1:1, 100 ml) ved 0 °C under nitrogen. Isbadet ble fjernet og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Etter 20,5 time ved romtemperatur ble reaksjonen konsentrert i vakuum og deretter ble vandig 0,5 N HC1 (100 ml) tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med CH2CI2(3 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (5% 60% EtO Ac/Heks, gradient) ga 738 mg (12%) av alkoholen.
Trinn 3. Omdannelse av alkoholen til kloridet
Metansulfonylklorid (0,67 ml, 8,1 mmol) og trietylamin (1,7 ml, 12,2 mmol) ble tilsatt sekvensielt og dråpevis til en løsning av alkoholen (696 mg, 3,48 mmol) i CH2CI2(4,0 ml) ved 0 °C under nitrogen. Isbadet ble fjernet og reaksjonsblandingen ble omrørt natten over ved romtemperatur. Etter 17 timer, ble reaksjonen stanset med mettet vandig NaHC03(30 ml) og ekstrahert med CH2CI2(3 x 50 ml). De samlede ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silika (5% EtO Ac/Heks) ga 664 mg (87%) av tittelforbindelsen.
Preparering 3 (Referanse)
Metyl 5-allyltiofen-2-karboksylat
Trinn 1. Fremstilling av metylesteren
Acetylklorid (6,9 ml, 96,6 mmol) ble satt til en løsning av 5-brom-2-tiofenkarboksylsyre (4,0 g, 19,3 mmol) i metanol (30 ml) ved romtemperatur. Etter 17 timer ved romtemperatur, ble reaksjonsblandingen oppvarmet ved tilbakeløp i 1,5 timer for å drive den fullstendig. Reaksjonen ble deretter avkjølt til romtemperatur og konsentrert i vakuum for å fjerne metanol. Mettet vandig NH4CI (120 ml) ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med CH2CI2(3 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum, hvilket gir 3,57 g (84%) av ønskede metylester som et gråhvitt, fast stoff.
Trinn 2. Allylering av bromtiofen
Isopropylmagnesiumklorid (2,0 M i Et20, 8,9 ml, 17,8 mmol) ble satt til en løsning av bromidet fra trinn 1 (3,56 g, 16,1 mmol) i THF (10 ml) ved - 40 °C under nitrogen. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved - 40 °C i 1 time, deretter ble kobber (I) cyanid (144 mg, 1,61 mmol) og allylbromid (3,0 ml, 35,4 mmol) tilsatt sekvensielt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved - 40 °C i 1 time , deretter behandlet med mettet vandig NH4CI (100 ml) og ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med saltvann (100 ml), tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (5% EtOAc/Heks) ga 2,45 g (83%) av tittelforbindelsen som en blekgul olje som stivnet ved henstand.
Preparering 4 (Referanse)
1 -(1 -(4-metoksybenzyloksy-heptyl)-4-brombenzen
Trinn 1. Heksyl grignard tilsetning til 4-brombenzaldehyd n-heksylmagnesiumbromid (2,0 M i Et20, 27 ml, 54 mmol) ble satt til en løsning av 4-brombenzaldehyd (5,0 g, 27 mmol) i THF (20 ml) ved 0 °C under nitrogen. Etter 1,5 timer ved 0 °C, ble reaksjonen stanset langsomt med 3 N HC1 (20 ml) og konsentrert i vakuum. Residuet ble fortynnet med vann (30 ml) og ekstrahert med Et20 (3 x 150 ml). Kombinerte ekstrakter ble tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (5% —» 10% EtO Ac/Heks) ga 5,6 g (76%) av 1 -(4-bromfenyl)-heptan-1 -ol.
Trinn 2. Beskyttelse av alkoholen som dens MPM eter Natriumhydrid (60% vekt. i olje, 0,991 g, 24,8 mmol) ble satt til en løsning av alkoholen fra trinn 1 (5,6 g, 20,6 mmol) i THF og DMF (2:1, 30 ml) ved 0 °C under nitrogen. Etter 5 min ved 0 °C, fikk reaksjonen oppvarmes til romtemperatur og 4-metoksybenzylklorid (3,4 ml, 25,0 mmol) ble tilsatt.. Reaksjonen ble deretter oppvarmet ved 80 °C. Etter 18 timer ved 80 °C fikk reaksjonsblandingen avkjøles til romtemperatur, behandlet med mettet vandig NH4CI (50 ml) og konsentrert i vakuum. Resten ble ekstrahert med EtOAc (3 x 100 ml). De samlede ekstrakter ble vasket med vann (2 x 100 ml) og saltvann (75 ml), deretter tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Rensning av residuet ved flash kolonnekromatografi på silikagel (2% EtO Ac/Heks) ga 7,5 g (93%) av tittelforbindelsen.
Biologiskeforsøksmetoder
Bindingsdata
Ki
Konkurransebindingsforsøk ble utført i et medium inneholdende Hank's balanserte saltløsning, Hepes 20 mM, pH 7,3, membraner (~60 ug protein) eller 2xl0<5>celler fra HEK 293 celler som stabilt uttrykker humane EP2 reseptorer, [<3>H]PGE2 (10 nM) og forskjellige konsentrasjoner av testforbindelser i et totalt volum på 300 ul. Reaksjons blandinger ble inkubert ved 23 °C i 60 min og ble filtrert over Whatman GF/B filtere under vakuum. Filtere ble vasket tre ganger med 5 ml iskald buffer inneholdende 50 mM Tris/HCl (pH 7,3). Uspesifikk binding ble beregnet i nærvær av overskudd av umerket PGE2 (10 uM). Bindingsdata tilpasset til bindingsmodellen for en enkel klasse av bindingsseter, ved anvendelse av ikke-lineær regresjonsanalyse. ICso verdier således oppnådd ble omdannet til Ki ved anvendelse av ligningen Ki=(IC5o/(l+[L]/KD) hvor [L] representerer PGE2 konsentrasjon (10 nM) og Kddissosiasjonskonstanten for [<3>H]PGE2 ved humane EP2 reseptorer (40 nM).
Radioligand-binding
Celler Som stabilt uttrykker EPi, EP2, EP4og FP Reseptorer
HEK-293 celler som stabilt uttrykker den humane eller felin FP reseptor eller EPi, EP2eller EP4reseptorer ble vasket med TME buffer, skrapet fra bunnen av kolbene og homogenisert i 30 sek ved anvendelse av en Brinkman PT 10/35 polytron. TME buffer ble tilsatt for å oppnå et endelig 40 ml volum i sentrifugerøret (sammensetningen av TME er 100 mM TRIS base, 20 mM MgCk, 2M EDTA; 10N HC1 blir tilsatt for å oppnå en pH på 7,4).
Cellehomogenatet ble sentrifugert ved 19000 r.p.m. i 20 min ved 4° C ved anvendelse av en Beckman Ti-60 rotor. Den resulterende pellet ble resuspendert i TME buffer, hvilket gir en endelig 1 mg/ml proteinkonsentrasjon, som bestemt ved Bioradforsøket. Radioligand-bindingskonkurranseforsøk vs. [3H-] 17 -fenyl PGF2a(5 nM) ble utført i et lOOul volum i 60 min. Bindingsreaksjoner ble startet ved tilsetning av plasmamembranfraksjon. Reaksjonen ble avsluttet ved tilsetning av 4 ml iskald TRIS-HCl buffer og rask filtrering gjennom glassfiber GF/B filtere ved anvendelse av en Brandel cellehøster. Filtrene ble vasket 3 ganger med iskald buffer og ovnstørket i én time.
[<3>H-] PGE2(spesifikk aktivitet 180 Ci mmol) ble anvendt som radioliganden for EP reseptorer. [<3>H] 17-fenyl PGF2able anvendt for FP reseptor bindingsundersøkelser. Bindingsundersøkelser ved anvendelse av EPi, EP2, EP4og FP reseptorer ble utført i duplikat i
minst tre separate forsøk. Et 200ul forsøksvolum ble anvendt. Inkuberinger var i 60 min ved 25°C og ble avsluttet ved tilsetning av 4 ml iskald 50 mM TRIS-HC1, fulgt av rask filtrering gjennom Whatman GF/B filtere og tre ytterligere 4 ml vaskinger i en cellehøster (Brandel). Konkurranseundersøkelser ble utført ved anvendelse av en endelig konsentrasjon på 5 nM [<3>H]-PGE2eller 5 nM [<3>H] 17-fenyl PGF2aog uspesifikk binding bestemt med 10"<5>M av umerket PGE2eller 17-fenyl PGF2a, i henhold til reseptorundertype studert.
METODER FOR FLIPR™ UNDERSØKELSER
(a) CELLEKULTUR
HEK-293(EBNA) celler, som stabilt uttrykker én type eller undertype av rekombinante humane prostaglandinreseptorer (prostaglandin reseptorer uttrykt: hDP/Gqs5; hEPi; hEP2/Gqs5; hEP3A/Gqi5; hEP4/Gqs5; hFP; MP; hTP), ble dyrket i 100 mm kulturskålene i høy-glukose DMEM medium inneholdende 10% føtalt bovint serum, 2 mM 1-glutamin, 250 ug/ml geneticin (G418) og 200 ug/ml hygromycin B som seleksjonsmarkører og 100 enheter/ml penicillin G, 100Hg/ml streptomycin og 0,25 ug/ml amphotericin B. (b) KALSIUMSIGNAL UNDERSØKELSER PÅ FLIPR™
Celler ble podet med en densitet på 5x10<4>celler pr. brønn i Biocoat® Poly-D-lysin-belagte sort-vegg, klar-bunnete 96-brønn plater (Becton-dickinson) og latt bli koblet natten over i en inkubator ved 37 °C. Celler ble deretter vasket to ganger med HBSS-HEPES buffer (Hanks Balanserte saltløsning uten bikarbonat og fenol rød, 20 mM HEPES, pH 7,4) ved anvendelse av en Denley Cellwash plate vasker (Labsystems). Etter 45 minutter med farge-belastning i mørket, ved anvendelse av kalsium-sensitiv fargestoff Fluo-4 AM i en endelig konsentrasjon på 2 uM, ble plater vasket fire ganger med HBSS-HEPES buffer for å fjerne overskudd av fargestoff ved å etterlate 100 ul i hver brønn. Plater ble re-ekvilibrert til 37 °C i noen få minutter.
Celler ble eksitert med en Argon laser ved 488 nm og emisjonen ble målt gjennom et 510-570 nm båndvidde emisjonsfilter (FLIPR™, Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Medikamentløsning ble tilsatt i et 50 ul volum til hver brønn, hvilket gir den ønskede endelige konsentrasjonen. Toppøkning i fluorescens intensitet ble registrert for hver brønn. På hver plate, virket fire brønner hver som negative (HBSS-HEPES buffer) og positive kontroller (standard agonister: BW245C (hDP); PGE2(hEPi; hEP2/Gqs5; hEP3A/Gqi5; hEP4/Gqs5); PGF2a(hFP); karbacyclin (hIP); U-46619 (hTP), avhengig av reseptor). Topp fluorescensforandring i hver medikament-inneholdende brønn ble deretter uttrykt i forhold til kontrollene.
Forbindelser ble testet i en "høy-throughput" (HTS) eller konsentrasjons-respons (CoRe) format. I HTS format, ble førtifire forbindelser pr. plate ble undersøkt i duplikater i en konsentrasjon på IO"<5>M. For å danne konsentrasjons-respons kurver, fire forbindelser pr. plate ble testet i duplikater i et konsentrasjonsområde på mellom IO"<5>og IO"<11>M. Duplikatverdier ble tatt et gjennomsnitt av. I enten, HTS eller CoRe format ble hver forbindelse testet på minst 3 separate plater ved anvendelse av celler fra forskjellige passasjer, hvilket gir en n > 3.
IntraokulærtTrykk ( IOP)
Intraokulære trykkundersøkelser i hunder involverer pneumatonometry utført på bevisste Beagle hunder av begge kjønn (10-15 kg). Dyrene forblir bevisste gjennom hele undersøkelsen og blir forsiktig holdt med hånd. Medikamenter blir administrert topisk til ét øye som en 25 uL volum dråpe, det andre øyet mottar 25 uL konstituent (0,1% polysorbat 80:10 mM TRIS) som en kontroll. Proparacain (0,1%) blir anvendt for korneal anestesi under tonometri. Intraokulært trykk blir bestemt like før medikament administrering og 2, 4 og 6 timer deretter på hver dag av en 5 dagers studie. Medikament blir administrert umiddelbart etter første IOP lesing.
Resultatene av bindingen og aktivitetsundersøkelser, presentert i Tabell 1 nedenfor, demonstrerer at de beskrevne forbindelsene er selektive prostaglandin EP2agonister og er således anvendelige for behandling av glaukom, okulær hypertensjon, inflammatorisk tarmsykdom og andre sykdommer eller lidelser beskrevet her.
Foregående beskrivelse beskriver spesifikke metoder og preparater som kan anvendes for å utføre foreliggende oppfinnelse og representerer den beste betraktede metoden. Det er imidlertid innlysende for en fagmann på området at ytterligere forbindelser med de ønskede farmakologiske egenskaper kan fremstilles på analog måte og at beskrevne forbindelser også kan oppnås fra forskjellige utgangsforbindelser via forskjellige kjemiske reaksjoner. Tilsvarende, kan forskjellige farmasøytiske preparater fremstilles og anvendes med hovedsakelig samme result. Således,uansett hvor detaljert det foregående kan fremkomme i teksten, skal den ikke bli konstruert som begrensende av det totale omfanget derav, men omfanget av foreliggende oppfinnelse skal bare bli styrt av de lovlige konstruksjoner av vedlagte krav.
NO20074295A 2005-03-10 2007-08-22 Substituerte gamma laktamer, sammensetninger omfattende slike samt anvendelse av slike i medisinsk behandling NO341339B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US66074805P 2005-03-10 2005-03-10
PCT/US2006/007797 WO2006098918A2 (en) 2005-03-10 2006-03-06 Substituted gamma lactams as therapeutic agents

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20074295L NO20074295L (no) 2007-12-07
NO341339B1 true NO341339B1 (no) 2017-10-16

Family

ID=36579663

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20074295A NO341339B1 (no) 2005-03-10 2007-08-22 Substituerte gamma laktamer, sammensetninger omfattende slike samt anvendelse av slike i medisinsk behandling

Country Status (21)

Country Link
US (4) US7476747B2 (no)
EP (1) EP1856042B1 (no)
JP (2) JP5197354B2 (no)
KR (1) KR101276449B1 (no)
CN (2) CN101137622A (no)
AR (1) AR053162A1 (no)
AU (1) AU2006223514A1 (no)
BR (1) BRPI0609021A2 (no)
CA (1) CA2599425C (no)
DK (1) DK1856042T3 (no)
ES (1) ES2388929T3 (no)
HK (2) HK1116168A1 (no)
IL (1) IL185363A (no)
MX (1) MX2007010818A (no)
NO (1) NO341339B1 (no)
NZ (1) NZ560691A (no)
PL (2) PL384090A1 (no)
RU (1) RU2412933C2 (no)
TW (1) TWI386391B (no)
WO (1) WO2006098918A2 (no)
ZA (1) ZA200706852B (no)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8722097B2 (en) 2004-04-30 2014-05-13 Allergan, Inc. Oil-in-water method for making polymeric implants containing a hypotensive lipid
US7993634B2 (en) 2004-04-30 2011-08-09 Allergan, Inc. Oil-in-oil emulsified polymeric implants containing a hypotensive lipid and related methods
US8673341B2 (en) 2004-04-30 2014-03-18 Allergan, Inc. Intraocular pressure reduction with intracameral bimatoprost implants
US9498457B2 (en) 2004-04-30 2016-11-22 Allergan, Inc. Hypotensive prostamide-containing biodegradable intraocular implants and related implants
US7799336B2 (en) 2004-04-30 2010-09-21 Allergan, Inc. Hypotensive lipid-containing biodegradable intraocular implants and related methods
US7091231B2 (en) * 2004-12-10 2006-08-15 Allergan, Inc. 12-Aryl prostaglandin analogs
AU2006223514A1 (en) * 2005-03-10 2006-09-21 Allergan, Inc. Substituted gamma lactams as therapeutic agents
US7592364B2 (en) * 2006-02-28 2009-09-22 Allergan, Inc. Substituted gamma lactams as therapeutic agents
EP1996546B1 (en) 2006-03-20 2014-11-26 Allergan, Inc. Substituted gamma lactams as prostaglandin ep2 agonists
US7553860B2 (en) * 2006-06-14 2009-06-30 Allergan, Inc. Substituted gamma lactams as therapeutic agents
NZ597866A (en) * 2006-08-11 2013-08-30 Allergan Inc Therapeutic lactams
US7659295B2 (en) 2006-08-23 2010-02-09 Allergan, Inc. Therapeutic substituted thiazolidinones, oxazolidinones, and related compounds
US8377984B2 (en) * 2008-01-29 2013-02-19 Allergan, Inc. Substituted gamma lactams as therapeutic agents
CN101595106B (zh) 2007-01-31 2014-05-07 阿勒根公司 作为治疗药物的取代的γ内酰胺
JP5566696B2 (ja) * 2007-02-15 2014-08-06 アラーガン インコーポレイテッド 緑内障または上昇眼内圧の治療用ガンマ‐ラクタム類
US7589213B2 (en) 2007-04-27 2009-09-15 Old David W Therapeutic substituted lactams
PL2155733T3 (pl) 2007-05-23 2013-02-28 Allergan Inc Cykliczne laktamy do leczenia jaskry lub podwyższonego ciśnienia śródgałkowego
US7781465B2 (en) * 2007-08-21 2010-08-24 Allergan, Inc. Therapeutic oxazolidinones and thiazolidinones
US20090062361A1 (en) * 2007-08-30 2009-03-05 Allergan, Inc. Therapeutic hydantoins
US8440819B2 (en) 2008-02-22 2013-05-14 Allergan, Inc. Therapeutic substituted beta-lactams
US7956055B2 (en) * 2008-03-25 2011-06-07 Allergan, Inc. Substituted gamma lactams as therapeutic agents
CA2721749A1 (en) * 2008-04-16 2009-10-22 Allergan, Inc. Combination therapy for glaucoma
MX2010011636A (es) 2008-04-24 2010-11-25 Allergan Inc Gamma lactamas sustituidas como agentes terapeuticos.
CA2722454A1 (en) * 2008-04-24 2009-10-29 Allergan, Inc. Substituted gamma lactams as therapeutic agents
US8093282B2 (en) 2008-05-09 2012-01-10 Allergan, Inc. Therapeutic N-aryl or N-heteroaryl pyrazolidine and pyrazolidinone derivatives
US7985765B2 (en) 2008-08-20 2011-07-26 Allergan, Inc. Therapeutic substituted pyrroles
US20100247606A1 (en) * 2009-03-25 2010-09-30 Allergan, Inc. Intraocular sustained release drug delivery systems and methods for treating ocular conditions
US8952051B2 (en) * 2009-11-05 2015-02-10 Allergan, Inc. Ophthalmic formulations containing substituted gamma lactams and methods for use thereof
US20110136872A1 (en) * 2009-12-09 2011-06-09 Burk Robert M Stable aqueous compositions of prostglandin agonist prodrugs and methods for use thereof
SG187861A1 (en) * 2010-08-17 2013-03-28 Allergan Inc Ep2 or ep4 agonists for treating corneal haze
US8697057B2 (en) 2010-08-19 2014-04-15 Allergan, Inc. Compositions and soft tissue replacement methods
US8741281B2 (en) * 2010-08-19 2014-06-03 Allergan, Inc. Compositions and soft tissue replacement methods
EP2605762A1 (en) * 2010-08-19 2013-06-26 Allergan, Inc. Compositions comprising adipose tissue and a pge2 analogue and their use in the treatment of a soft tissue condition
US20130345149A1 (en) * 2011-03-03 2013-12-26 Allergan, Inc. Silicone-based ophthalmic formulations
CA2829040A1 (en) * 2011-03-03 2012-09-07 Allergan, Inc. Non-aqueous silicone-based ophthalmic formulations
CA2882138C (en) * 2012-08-21 2020-10-27 Allergan, Inc. Process for the synthesis of substituted gamma lactams
AU2013344878A1 (en) * 2012-11-16 2015-05-21 Allergan, Inc. Skin wound healing and scar reduction with prostaglandin EP4 agonist combinations
RU2650614C2 (ru) 2013-10-31 2018-04-16 Аллерган, Инк. Внутриглазные имплантаты, содержащие простамид, и способы их применения
CN107074832B (zh) * 2014-10-02 2020-08-14 阿勒根公司 γ-内酰胺的酯前药及其用途
RU2568603C1 (ru) * 2015-01-15 2015-11-20 Федеральное агентство научных организаций (ФАНО России) Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Производные простагландина, обладающие противовоспалительной и анальгезирующей активностью

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003103604A2 (en) * 2002-06-01 2003-12-18 Applied Research Systems Ars Holding N.V Gamma lactams as prostaglandin agonists and use thereof
WO2004037813A1 (en) * 2002-10-25 2004-05-06 Merck Frosst Canada & Co. Pyrrolidin-2-on derivatives as ep4 receptor agonists

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5462968A (en) * 1994-01-19 1995-10-31 Allergan, Inc. EP2 -receptor agonists as agents for lowering intraocular pressure
US6437146B1 (en) * 1998-09-25 2002-08-20 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Oxazole compounds as prostaglandin e2 agonists or antagonists
KR20040015364A (ko) * 2001-07-16 2004-02-18 에프. 호프만-라 로슈 아게 Ｅｐ4 수용체 작용물질로서의 프로스타글란딘 유사체
NZ532519A (en) * 2001-11-05 2006-11-30 Allergan Inc Omega-cycloalkyl 17-heteroaryl prostaglandin E2 analogs as EP2-receptor agonists
WO2003074483A1 (fr) * 2002-03-05 2003-09-12 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Composes derives de 8 azaprostaglandine et medicaments contenant ceux-ci comme principe actif
US6573294B1 (en) 2002-05-14 2003-06-03 Allergan, Inc. 8-azaprostaglandin analogs as agents for lowering intraocular pressure
AU2006223514A1 (en) * 2005-03-10 2006-09-21 Allergan, Inc. Substituted gamma lactams as therapeutic agents
US7592364B2 (en) * 2006-02-28 2009-09-22 Allergan, Inc. Substituted gamma lactams as therapeutic agents

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003103604A2 (en) * 2002-06-01 2003-12-18 Applied Research Systems Ars Holding N.V Gamma lactams as prostaglandin agonists and use thereof
WO2004037813A1 (en) * 2002-10-25 2004-05-06 Merck Frosst Canada & Co. Pyrrolidin-2-on derivatives as ep4 receptor agonists

Also Published As

Publication number Publication date
WO2006098918B1 (en) 2006-12-28
ZA200706852B (en) 2008-09-25
IL185363A (en) 2012-03-29
HK1223851A1 (zh) 2017-08-11
US7973071B2 (en) 2011-07-05
CA2599425A1 (en) 2006-09-21
WO2006098918A3 (en) 2006-11-23
EP1856042B1 (en) 2012-06-27
JP5762379B2 (ja) 2015-08-12
AU2006223514A1 (en) 2006-09-21
CN105520941B (zh) 2020-05-01
US20110275692A1 (en) 2011-11-10
KR101276449B1 (ko) 2013-06-20
ES2388929T3 (es) 2012-10-19
RU2007133581A (ru) 2009-04-20
US7476747B2 (en) 2009-01-13
CN101137622A (zh) 2008-03-05
NZ560691A (en) 2011-03-31
CN105520941A (zh) 2016-04-27
EP1856042A2 (en) 2007-11-21
IL185363A0 (en) 2008-02-09
US20070265330A1 (en) 2007-11-15
US7473702B2 (en) 2009-01-06
US20090233980A1 (en) 2009-09-17
JP2013032374A (ja) 2013-02-14
CA2599425C (en) 2013-04-30
PL1856042T3 (pl) 2012-11-30
US20070287742A1 (en) 2007-12-13
NO20074295L (no) 2007-12-07
JP5197354B2 (ja) 2013-05-15
DK1856042T3 (da) 2012-09-17
WO2006098918A2 (en) 2006-09-21
KR20070110920A (ko) 2007-11-20
TW200714583A (en) 2007-04-16
RU2412933C2 (ru) 2011-02-27
TWI386391B (zh) 2013-02-21
PL384090A1 (pl) 2008-06-23
JP2008533011A (ja) 2008-08-21
BRPI0609021A2 (pt) 2010-01-12
AR053162A1 (es) 2007-04-25
MX2007010818A (es) 2007-11-12
HK1116168A1 (en) 2008-12-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO341339B1 (no) Substituerte gamma laktamer, sammensetninger omfattende slike samt anvendelse av slike i medisinsk behandling
US7592364B2 (en) Substituted gamma lactams as therapeutic agents
US7635716B2 (en) Substituted cyclopentanes or cyclopentanones as therapeutic agents
US7786154B2 (en) Substituted gamma lactams as therapeutic agents
US7439386B2 (en) Therapeutic substituted cyclopentanones
JP5410271B2 (ja) 緑内障治療用プロスタグランジン化合物
AU2012211448B2 (en) Substituted gamma lactams as therapeutic agents

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees