NO334523B1 - Fremgangsmåte for fremstilling av en steril høy molekylærvekts hyaluronsyreformulering - Google Patents

Abstract

En fremgangsmåte for å fremstille en steril bruksklar vandig farmasøytisk formulering som omfatter et høymolekylvekts hyaluronsyresalt (HA) ved en spesifisert konsentrasjon, omfatter trinnene: å fremskaffe en vandig formulering omfattende høymolekylvekts-HA ved en konsentrasjon som er mindre enn den spesifiserte sluttkonsentrasjon; passere nevnte vandige formulering gjennom et filter som har en porestørrelse som er mindre enn 45 pm; konsentrere nevnte vandige formulering ved å tilføre et vakuum og koke av vann inntil nevnte spesifiserte konsentrasjon blir nådd.

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for fremstilling av et sterilt høymolekylvekts hyaluronsyresalt som en sluttformulering for farmasøytisk anvendelse, hvor fremgangsmåten omfatter de trinn og trekk som går frem av krav 1.

Hyaluronsyre kan i sin saltform for eksempel innbefatte natriumhyaluronat, kalium-hyaluronat, magnesiumhyaluronat, kalsiumhyaluronat eller andre.

Hyaluronsyre er et mukoid polysakkarid av biologisk opprinnelse som er bredt for-delt i naturen. For eksempel er det kjent at hyaluronsyre er tilstede i forskjellige dyrevev så som navlestreng, synovialvæske, vitreøs humoralvæske, hanekam og forskjellige bindevev så som hud og brusk.

Kjemisk er hyaluronsyre et medlem av glukosaminoglukaner og den består av al-ternerende og repeterende enheter av D-glukuronsyre og N-acetyl-D-glukosamin for å danne en lineær kjede som har en molekylvekt på opp til 13 x IO6 Dalton.

I betydningen av foreliggende oppfinnelse er høymolekylvekts hyaluronsyre hyaluronsyre som har en gjennomsnittlig molekylvekt på ikke mindre enn 0,5 x IO<6>Dalton.

Farmasøytisk anvendelse av hyaluronsyre eller et salt derav er godt beskrevet i litteraturen.

Siden hyaluronsyre er en ikke-immunogen substans og har viskoelastiske og hydro-file egenskaper, blir den siden flere år tilbake brukt som en vitreøs øye- eller ledd-væskeerstatning eller som et støttende medium i oftalmiske kirurgi, som beskrevet for eksempel i US A 4.141.973 tilhørende Balazs.

I leddvæsker virker den viskøse hyaluronsyreoppløsning som et smøremiddel for å danne et beskyttende miljø for cellene, og av denne grunn blir den brukt ved be-handling av betente kneledd.

EP-A-0 781 547 beskriver en natriumhyaluronat-basert oftalmisk formulering for anvendelse i øyekirurgi.

EP-A-0 719 559 beskriver viskøse natriumhyaluronat-oppløsninger for anvendelse som maskeringsvæske ved terapeutisk fotokeratektomi ved hjelp av excimer-laser. EP-A-0 875 248 beskriver anvendelsen av hyaluronsyre eller en av dens farmasøy-tisk akseptable salter for fremstilling av en vandig oppløsning som kan brukes som intra-artikulær skyllevæske.

EP-A-0 698 388 tilhørende Chemedica S. A. beskriver et oftalmisk preparat for anvendelse som kunstige tårer inneholdende hyaluronat som en viskositets-fortykningsmiddel.

Den farmasøytiske anvendelse av hyaluronsyre eller av et salt derav krever et meget rent og strilt produkt.

Hyaluronsyre kan bli ekstrahert og renset fra animalske eller mikrobielle kilder så som navlestrenger, hanekammer eller fra gruppe A og C Streptokokker som for eksempel beskrevet i US-A-4.141.973 tilhørende Balazs, US-A-5.559.104 tilhørende Romeo et. al. og WO 00/4925.

Industrielle ekstraksjons- og opprenskningsprosesser av hyaluronsyre danner typisk hyaluronsyresalter så som natriumhyaluronat, i form av et tørket pulver. Det rensede, tørkede pulver av farmasøytisk grad kan bli brukt for fremstilling av for eksempel vandige farmasøytiske formuleringer for forskjellige farmasøytiske an-vendelser så som intraartikulær injeksjon, øyedråper eller vitreøs humor-erstatning.

En vanlig industriell prosess for fremstilling av farmasøytiske formuleringer som er klare for bruk, omfatter å blande en definert vektmengde av natriumhyaluronat med et nøyaktig volum av vann, og avhengig av situasjonen, et salt så som natriumklorid og buffere så som fosfater og andre eksipienter. Ettersom konsentrasjonen sammensetningen av formuleringen for farmasøytisk anvendelse bør for-bli innenfor et smalt definert område, blir de forskjellige komponenter av formuleringen nøye utmålt. Formuleringen blir så fylt på mottakerinnretninger så som sprøyter og kapsler av definert dosestørrelse som er klare for bruk. Etter fylling av mottakerinnretningene blir formuleringen sterilisert med autoklavering typisk ved omkring 121°C i femten minutter eller mer.

Et av problemene med anvendelsen av varme for å sterilisere hyaluronsyre, er den kjente effekt med nedbrytning av molekylkjedene som utgjør HA for således å redusere den gjennomsnittlige molekylvekt av HA.

Den høye molekylvekt av hyaluronsyre er en viktig farmakologisk egenskap.

I mange farmasøytiske applikasjoner er det uønsket å ha lavmolekylvekts hyaluronsyre i formuleringen, for eksempel i betraktning av de inflammatoriske effekter av lavmolekylveksts HA som angitt i US 4.141.973 samt tapet av gunstige reologis-ke egenskaper av høymolekylvekts HA. For å kompensere for nedbrytningen av HA i en formulering av gitt konsentrasjon, har i de ovennevnte steriliseringsmetoder hyaluronsyren eller saltene derav initialt brukt ved fremstilling av formuleringen, en gjennomsnittlig molekylvekt som er høyere enn den av den ønskede minste gjennomsnittlige molekylvekt av sluttformuleringen. Dette er imidlertid uøkonomisk siden utbyttet av hyaluronsyre fra utgangsmaterialet minsker ettersom den gjennomsnittlige molekylvekt som er nødvendig, øker.

En annen kjent metode for å sterilisere hyaluronsyre er ved filtrering. Denne tek-nikken blir brukt i konvensjonelle industrielle prosesser for fremstilling av rensede hyaluronsyresalter i konsentrert form, vanligvis i form av tørket pulver, hvorved en lavkonsentrasjons vandig oppløsning passeres gjennom filteret og etterfølgende tørkes.

Slike steriliseringstrinn er for eksempel beskrevet i europeisk patentsøknad EP 867453 og i PCT-søknad WO 00/44925. I disse søknader er et filter med en pore-størrelse så liten som 0,22 |am også beskrevet for sterilisering. Filtere som har en porestørrelse på 0,22 nm, har en bakteriebelastning på 1 over IO<7>bakterier basert på den minste kjente bakterium Pseudomonas diminuta, mens filtre som har en porestørrelse på 0,45 nm haren bakteriebelastning på 1 over IO<4>bakterier (alltid basert på Pseudomonas diminuta). Av denne grunn er filtre som har en porestør-relse på mindre enn 0,45 nm ansett for å være steriliserende.

I konvensjonelle industrielle prosesser er steriliseringsmetoden med filtrering ikke kjent for å bli brukt for fremstilling av farmasøytiske høyviskositetsformuleringer som er klare for bruk, siden den nødvendige konsentrasjon av HA i farmasøytiske høyviskositetsformuleringer typisk ligger i området 1 til 2% w/v, hvor ikke alt av hyaluronsyren passerer gjennom filteret ved 0,22 nm. Siden dette resulterer i en endring i konsentrasjonen og/eller tap av hyaluronsyre, er sterilisering ved filtrering for fremstilling av farmasøytiske høyviskositetsformuleringer som er klare for bruk, problematisk.

I US 5.093.487 er fremstilingen av en vandig farmasøytisk formulering omfattende høymolekylvekts natriumhyaluronat som er klar for bruk og sterilisert gjennom et filter på 0,22 |am, beskrevet. Steriliseringsmetoden som er beskrevet i dette pa-tent, krever imidlertid et antall passasjer av vandig hyaluronsyreformulering gjennom 0,22 nm filteret for irreversibelt å redusere viskositeten av hyaluronsyren. Steriliseringen av en vandig farmasøytisk formulering omfattende HA ved en konsentrasjon på 1% eller mer er, i henhold til denne publikasjon, mulig i betraktning av reduksjonen av viskositet av hyaluronsyren som stammer fra de mange passasjer gjennom filteret. Det blir videre argumentert i denne søknad at viskositeten blir redusert uten å redusere molekylvekten av HA. Uten å ønske å ta noen posi-sjon angående validiteten av funnene rapportert i den tidligere nevnte publikasjon, er for mange farmasøytiske applikasjoner så som intra-artikulære applikasjoner, senkningen av viskositeten av HA uønsket.

Et mål for fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse er å oppnå en vandig, steril, farmasøytisk formulering omfattende et hyaluronsyresalt som er steril og økonomisk å fremstille, spesielt under industrielle betingelser. Det er fordelaktig å fremskaffe en slik formulering med en smal toleranse i konsentrasjonen av ingredi-ensene av formuleringen.

Mål for forreliggende oppfinnelse har blitt oppnådd ved en fremgangsmåte for fremstilling av en steril høymolekylvekts hyaluronsyreformulering for farmasøytisk bruk i henhold til krav 1.

Beskrevet heri er en fremgangsmåte for fremstilling av en steril vandig farmasøy-tisk formulering som er klar for bruk, omfattende et høymolekylvekts hyaluronsyresalt (HA) på ikke mindre enn 0,5-10<6>Dalton ved en spesifisert konsentrasjon, omfattende trinnene å: fremskaffe en vandig formulering omfattende høymolekylvekts HA ved

en konsentrasjon som er mindre enn den spesifiserte sluttkonsentrasjon;

passere nevnte vandige formulering gjennom et filter som har en pore-størrelse som er mindre enn 0,45 nm og større enn 0,1 um;

konsentrere nevnte vandige formulering ved å tilføre et vakuum som er mindre enn 200 millibar og koke av vann inntil nevnte spesifiserte sluttkonsentrasjon blir nådd, som målt i sanntid, og

stoppe vakuum kokeprosessen når nevnte spesifiserte konsentrasjon av HA er nådd.

Fordelaktig reduserer den reduserte konsentrasjon av den vandige formulering før filtrering viskositeten som en funksjon av molekylvekten, viskositeten og tillater alt HA å passere gjennom filteret og bli sterilisert, hvor den etterfølgende avkoking med vakuum sikrer at i hovedsak ingen varmeavhengig nedbrytning av HA inntref-fer. Fremgangsmåten er godt tilpasset et industrielt miljø og er spesielt økonomisk, noe som tillater doser av farmasøytisk formulering som er klare til bruk og omfattende HA, å bli fylt i sterile mottakerinnretninger uten ytterligere sterilisering.

En ytterligere fordel er at formuleringen er mikrobiologisk stabil og kan bli oppbe-vart over uker før den blir brukt som et farmasøytisk preparat.

Viskositet av HA i vandig oppløsning er en egenskap som avhenger av flere para-metere så som molekylvekt, konsentrasjon, temperatur, konsentrasjon og kvalitet av salter, pH og skjærgrad påført oppløsningen. Høyere molekylvekt og konsentrasjon øker viskositeten, mens høyere skjærgrad og salter minsker viskositeten. Angående temperaturen har HA en hysterese-oppførsel som angitt av M. Cardones et al. " Hysteresis Behaviour ofSodium Hyaluronate Solutions during Heating and Coo-ling", Clear Solutions Biotech, Inc., Technical Rep. 01. Viskositet øker og minsker på en uregelmessig måte ved å øke og senke temperaturen. Mellom 60°C og 70°C er det mulig å oppnå den miste viskositet for oppløsningen. Følgelig kan denne hystereseegenskap bli brukt for å minske eller øke viskositeten av oppløsningen, men det må bli tatt i betraktning av HA-kjedenes nedbrytning er proporsjonal med temperaturen og varigheten hvorved denne temperatur blir opprettholdt.

Under konsentrasjonstrinnet etter filtrering kan konsentrasjonen av HA bli overvåket i sanntid for å stoppe vakuumkokingen når den spesifiserte konsentrasjon av den farmasøytiske formulering som er klar for bruk, blir nådd. Overvåknings- eller måleprosessen kan fordelaktig bli utført med et spektrofotometer med avfølings-strålen plassert i formuleringen, hvor absorpsjonene av stråling i det ultrafiolette område (UV) er proporsjonal med HA-konsentrasjonen. Et spesielt fordelaktig trekk ved foreliggende oppfinnelse er at den fjerner behovet for å blande nøyaktige mengder av vann og hyaluronsyre for å oppnå den spesifikke konsentrasjon og å sikre at en slik konsentrasjon blir opprettholdt gjennom prosessen. I stedet har den initiale HA- og vannblanding en passende konsentrasjon som er lavere enn sluttformuleringen, for således å forenkle prosessen.

Vakuumet som påføres under konsentrasjonsprosessen er fortrinnsvis mindre enn 200 millibar absolutt trykk, spesielt i området 30 til 60 millibar, for eksempel 40 millibar, hvorved koketemperaturen ligger omkring 26 til 28°C. Industrielt utstyr er økonomisk å drive pålitelig ved slike trykk, og den lave temperatur unngår noen vesentlig eller målbar reduksjon av molekylvekten av hyaluronsyren.

Filterporestørrelsen er fordelaktig omkring 0,22 nm for å sikre fremstillingen av en høyt steril formulering. Filtersterilisert høyviskositets farmasøytisk formulering som er klar for bruk med en HA-konsentrasjon i området 1 til 3% kan således fordelaktig bli fremstilt på en steril og økonomisk måte i henhold til foreliggende oppfinnelse.

Ytterligere fordelaktige aspekter av foreliggende oppfinnelse vil bli åpenbart fra kravene og den følgende detaljerte beskrivelse av et eksempel på en fremgangsmåte samt medfølgende tegning hvor: Fig. 1 representerer et flytkart som illustrerer trinn i en utførelsesform av fremgangsmåte i henhold til oppfinnelsen; Figur 2 og 3 er kurver som representerer prosentdelen av med henholdsvis molekylvekt 1,1 millioner og 2,2 millioner Dalton, ved passasje gjennom et filter på 0,22 nm som en funksjon av % w/v konsentrasjonen i en vandig oppløsning ved 20°C og nøytral pH; Fig. 4 viser en kurve som representerer den optiske tetthet (OD) ved 230 nm av formuleringen som en funksjon av tiden under konsentrasjonsprosessen som målt med et spektrofotometer.

Under henvisning til Fig. 1 er det vist en fremgangsmåte for fremstilling av en vandig farmasøytisk formulering som er klar til bruk omfattende et høymolekylvekts hyaluronsyresalt med en spesiell konsentrasjon. Før fremstilling av formuleringen blir prosessfabrikksutstyret rengjort med renset vann (trinn 1), sterilisert med ren damp (trinn 2) og vasket med sterilt destillert vann for injeksjon (WFI) (trinn 3).

Et preparat av en vandig HA-formulering, for eksempel en fortynnet natrium-hyaluronatoppløsning ved en konsentrasjon som er mindre enn konsentrasjonen spesifisert for den sluttlige farmasøytiske formulering, blir innført i en blandingsre-aktor for fremstilling av den prefiltrerte formulering (trinn 4).

Den vandige HA-oppløsning kan enten bli fremstilt fra et tørket HA-salt eller fra oppløsningen fremstilt i henhold til PCT-søknad WO 00/44925, før tørkeprosessen.

Tilsetningen av en konsentrert saltoppløsning (25x), dosert med en peristaltisk pumpe, utføres for å tilsette den korrekte mengde av salter koblet med mengden av tilsatt HA (trinn 5). Saltoppløsningen inneholder normalt NaCI, buffere og andre eksipienter spesifisert for den sluttlige farmasøytiske formulering, og de blir tilsatt for å bringe pH ti en fysiologisk pH så som 7,4, og for å gi sluttformuleringen en fysiologisk osmolaritet så som 300 mOsm/l.

Saltoppløsningen, buffere og andre eksipienter kan også bli tilsatt aseptisk etter filtreringstrinnet trinn 7 direkte inn i reaksjonskammeret. Dette er spesielt fordelaktig for HA med svært høy molekylvekt i betraktning av det faktum at salter minsker filtrerbarheten av HA og ville således kreve større fortynning av den prefiltrerte oppløsning. Mengden av eksipienter som tilsettes, kan bli overvåket i sanntid med en elektrisk konduktivitetssensor (sonde) i reaksjonskammeret. Konduktiviteten av HA-formuleringen står i forhold til mengden av eksipient i formuleringen og kan bli bestemt empirisk, således ved å måle konduktiviteten av HA-formuleringen ettersom eksipient blir tilsatt i reaksjonskammeret inntil den ønskede konsentrasjon blir nådd, kan den nødvendige mengde eksipient i formuleringen bli tilsatt på en enkel, pålitelig og nøyaktig måte. Det etterfølgende unngår spesielt behovet for å regne ut og måle dosene på forhånd, og fjerner spesielt pro-blemet med å måtte ta i betraktning og å kompensere for den gitte mengde HA, selv om den er liten, som holdes tilbake av filteret under filtreringstrinnet 7.

Som eksempel kan formuleringen bli fremstilt fra 45 gram tørket natriumhyaluronat med en gjennomsnittlig molekylvekt på 2,2 millioner Dalton blandet med 15 liter WFI. I dette tilfelle blir, grunnet den høye molekylvekten av HA, saltene og buffer-oppløsningen tilsatt etter filtrering for å unngå en større fortynning av den prefiltrerte oppløsning enn nødvendig, som nevnt ovenfor.

En røremaskin i reaktoren blander den prefiltrerte oppløsningen (trinn 6), forek-sempel i omkring 120 minutter, inntil den er homogen. I dette spesielle eksempel

har den prefiltrerte oppløsning en HA-konsentrasjon på 0,3% w/v. Ved denne konsentrasjon har hyaluronsyre med en molekylvekt på 2,2 millioner Dalton, ved romtemperatur og fysiologisk pH, en lav viskositet som tillater den p passere fullstendig gjennom et filter med en porestørrelse på 0,22 nm. Den maksimale viskositet hvorved alt av HA-formuleringen passerer gjennom et filter som har en porestørrel-

se på 0,22 [ im, er funnet å være omtrent 5 Pa s som målt ved 0,1 s"<1>skjærgrad ved 20°C. Den maksimale viskositet vil imidlertid avhenge av filterporestørrelsen: en mindre porestørrelse så som 0,1 nm, ville senke denne maksimale viskositet hvorved alt HA ville passere gjennom filteret.

Som diskutert ovenfor, vil den maksimale konsentrasjon av HA i en vandig oppløs-ning hvorved i hovedsak alt av HA vil passere gjennom et steriliseringsfilter, for eksempel et filter på 0,22 nm, avhenge av molekylvekten av hyaluronsyren. Dette kan bli vist med henvisning til kurvene vist i Figurene 2 og 3, hvorved Fig. 2 viser prosentdelen av natriumhyaluronat med en gjennomsnittlig molekylvekt på omkring 1,1 Dalton som passerer gjennom et filter på 0,22 nm porestørrelse ved i hovedsak romtemperatur (omkring 20°C) og i hovedsak nøytral pH (omkring 7) som en funksjon av konsentrasjonen (gram natriumhyaluronat per desiliter vann = % w/v).

Fig. 3 viser en liknende kurve under de sammen betingelser bortsett fra at natriumhyaluronatet haren gjennomsnittlig molekylvekt på omkring 2,2 millioner Dalton. Det kan bli observert fra kurven i Fig. 2 at alt av natriumhyaluronatet ved en molekylvekt på 1,1 millioner Dalton passerer gjennom filteret opp til en konsentrasjon på omkring 0,92% w/v (eller g/dl), mens for natriumhyaluronat med en molekylvekt på 2,2 millioner Dalton er den maksimale konsentrasjon omtrent 0,32% w/v. Følgelig ettersom molekylvekten av hyaluronatsyresaltet øker fra 1,1 til 2,2 millioner Dalton, vil maksimumskonsentrasjonen av HA i en vandig oppløs-ning til å passere 100% gjennom 0,22 nm filteret, minske fra omkring 0,94% til omkring 0,32% w/v.

I en industriell prosess, og tatt i betraktning at etter filtrering blir oppløsningen konsentrert, er det foretrukket å ha en konsentrasjon som er noe lavere enn den øvre grense for å sikre at filtreringsprosessen er fullstendig og pålitelig med en viss margin for feil eller variasjoner fra batch til batch i molekylvekten av natriumhyaluronatet, temperaturen og blandingskonsentrasjonene.

Oppløsningen kan bli tvunget gjennom steriliseringsfilteret (trinn 7) ved å introdu-sere en gass under trykk, så som nitrogen, for eksempel ved omkring 3 bar trykk i blandingsreaktoren, eller ved hjelp av en pumpe. Steriliseringsfilteret har fortrinnsvis en porestørrelse på 0,22 nm, men filtere som har andre porestørrelser som er mindre enn 0,45 nm og større enn større enn omkring 0,1 nm, kan også bli brukt i den utstrekning at slike filtre er eller blir kommersielt tilgjengelige.

Når all oppløsning har passert gjennom filteret til en destillator, blir destillatoren forseglet fra filteret og blandingsreaktoren med en ventil, og en vakuumpumpe blir aktivert og regulerer trykket i destillatoren ved hjelp av en reguleringsventil (trinn 8, 9, 10). Trykket er mindre enn 200 millibar for å bringe koketemperaturen under 60°C, men fortrinnsvis er trykket i området 30 ti 60 millibar, for eksempel ved 40 millibar, hvorved koketemperaturen av vann er i området 26 til 28°C, nær romtemperatur.

I stedet for destillatoren kan en tynnsjiktsevaporator eller enhver annen under-vakuums-konsentrator være anvendelig for en batch, matet batch eller kontinuerlig konsentrasjon av HA-formuleringen.

En varmekappe omkring destillatoren tilfører varmeenergi under kokeprosessen. Fordelaktig sikrer koketemperaturen på mindre enn 30°C at det er i hovedsak ingen nedbrytning av hyaluronsyren slik at molekylvekten av hyaluronsyren ikke blir redusert.

En HA-konsentrasjonssensor, fortrinnsvis i form av et spektrofotometer med en optisk fiber neddykket i formuleringen, kan bli anbrakt for å måle i sanntid konsentrasjonen av hyaluronsyre (trinn 11) og som automatisk stopper kokeprosessen når den oppgitte konsentrasjon blir nådd. Spektrofotometeret kan for eksempel være basert på absorpsjonen av en stråle av ultrafiolett lys (for eksempel bølgelengde 230 nm) plassert inne i oppløsningen i destillatoren. Fig. 4 viser den optiske tetthet ved 230 nm målt over tid i løpet av hele konsentrasjonsprosessen (for eksempel opp til 2% w/v). Sanntids-HA-konsentrasjonsmålingen overflødiggjør behovet for å blande meget presise mengder i løpet av fremstillingen av den fortynnede prefiltrerte oppløsning for således å forenkle prosessen.

Vakuumkokingen har også en viktig fordel med avgassing av formuleringen som, i betraktning av blandeprosessen og tilføringen av nitrogen ved høyt trykk under filtreringsprosessen, omfatter bobler, mikrobobler og oppløst gass, noe som ikke er akseptabelt i den sluttlige farmasøytiske formulering.

Når HA-konsentrasjonssensoren i destillatoren signaliserer at den angitte konsentrasjon er nådd, blir trykket i destillatoren raskt øket ved å innføre gass, for eksempel nitrogen, deri (trinn 13) og kappen som varmer omkring destillatoren blir avkjølt til romtemperatur eller under for således umiddelbart å stoppe konsentrasjonsprosessen av formuleringen (trinn 12).

Det kan bli notert at med en prosess ifølge foreliggende oppfinnelse kan konsentrasjonen av hyaluronsyre i formuleringen være i området opp til 3%, avhengig av den angitte farmasøytiske anvendelse.

Formuleringen kan så bli pumpet eller presset med en gass (for eksempel nitrogen) under trykk til sterile tanker (trinn 28, 30)for fylling ved en annen beliggenhet og/eller i et etterfølgende trinn direkte i sterile mottakerinnretninger så som sprøy-ter (trinn 16), klare for bruk. Den farmasøytiske formulering kan også bli fylt direkte inn i sterile mottakerinnretninger for farmasøytisk anvendelse uten mellom-liggende lagring i en steril tank.

Claims (6)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av en steril, bruksklar vandig farmasøytisk formulering omfattende et høymolekylvekts hyaluronsyresalt (HA) på ikke mindre enn 0,5'IO<6>Dalton ved en spesifisert konsentrasjon, omfattende trinnene a: fremskaffe en vandig formulering omfattende høymolekylvekts-HA ved en konsentrasjon som er mindre enn den spesifiserte konsentrasjon; passere nevnte vandige formulering gjennom et filter som har en pore- størrelse som er mindre enn 0,45 nm og større enn 0,1 um; konsentrere nevnte vandige formulering ved å tilføre et vakuum ved et absolutt trykk som er mindre enn 200 millibar og koke bort vann mens konsentrasjonen av HA måles i sanntid; stoppe vakuum kokeprosessen når nevnte spesifiserte konsentrasjon av HA blir nådd.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor, etter konsentrasjonstrinnet, den farma-søytiske formulering blir fylt i sterile mottakerinnretninger klare for bruk, eller tømt i sterile tanker og derpå fylt i sterile mottakerinnretninger klare for bruk.

3. Fremgangsmåte ifølge ethvert av de foregående krav, hvor den gjennomsnittlige molekylvekt av HA er i området 800.000 til 5.000.000 Dalton.

4. Fremgangsmåte ifølge ethvert av de foregående krav, hvor filteret har en porestørrelse på 0,22 nm eller mindre.

5. Fremgangsmåte ifølge ethvert av de foregående krav, hvor HA-konsentrasjonen blir målt med et spektrofotometer som avføler bølgestrålingsab-sorpsjon i formuleringen.

6. Fremgangsmåte ifølge ethvert av de foregående krav, hvor eksipienter blir tilsatt til formuleringen etter filtreringstrinnet, og hvor konduktiviteten av HA-formuleringen blir målt i sanntid inntil mengden av eksipienter når den ønskede verdi.