NO334093B1 - Forbedrede chelatdannerkonjugater, radioaktive metallkomplekser, radiofarmasøytika, sett for fremstilling av radiofarmasøytika, samt bifunksjonelle chelatdannere og fremgangsmåter for fremstilling av slike - Google Patents

Forbedrede chelatdannerkonjugater, radioaktive metallkomplekser, radiofarmasøytika, sett for fremstilling av radiofarmasøytika, samt bifunksjonelle chelatdannere og fremgangsmåter for fremstilling av slike Download PDF

Info

Publication number
NO334093B1
NO334093B1 NO20035597A NO20035597A NO334093B1 NO 334093 B1 NO334093 B1 NO 334093B1 NO 20035597 A NO20035597 A NO 20035597A NO 20035597 A NO20035597 A NO 20035597A NO 334093 B1 NO334093 B1 NO 334093B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
group
compound
chelating agent
formula
independently
Prior art date
Application number
NO20035597A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20035597L (no
NO20035597D0 (no
Inventor
Torgrim Engell
Harry John Wadsworth
Colin Mill Archer
Original Assignee
Ge Healthcare Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ge Healthcare Ltd filed Critical Ge Healthcare Ltd
Publication of NO20035597D0 publication Critical patent/NO20035597D0/no
Publication of NO20035597L publication Critical patent/NO20035597L/no
Publication of NO334093B1 publication Critical patent/NO334093B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C251/00—Compounds containing nitrogen atoms doubly-bound to a carbon skeleton
    • C07C251/32—Oximes
    • C07C251/34—Oximes with oxygen atoms of oxyimino groups bound to hydrogen atoms or to carbon atoms of unsubstituted hydrocarbon radicals
    • C07C251/36—Oximes with oxygen atoms of oxyimino groups bound to hydrogen atoms or to carbon atoms of unsubstituted hydrocarbon radicals with the carbon atoms of the oxyimino groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6425—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the peptide or protein in the drug conjugate being a receptor, e.g. CD4, a cell surface antigen, i.e. not a peptide ligand targeting the antigen, or a cell surface determinant, i.e. a part of the surface of a cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0002—General or multifunctional contrast agents, e.g. chelated agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/088—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins conjugates with carriers being peptides, polyamino acids or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Forbedrede chelatdannerkonjugater, radioaktive metallkomplekser, radiofarmasøytika, sett for fremstilling av radiofarmsøytika, samt bifunksjonelle chelatdannere og fremgangsmåter for fremstilling av slike.
Oppfinnelsens gyldighetsområde.
Foreliggende oppfinnelse dreier seg om forbedrede konjugater mellom chelatdannere og biologisk målsøkende molekyler, som egner seg for å danne metallkomplekser med radioaktive metaller. De radioaktive metallkompleksene er nyttige som radiofarmasøytika, i særdeleshet med<99m>Tc. Foreliggende oppfinnelse dreier seg videre om sett for fremstilling av radiofarmasøytika, samt bifunksjonelle chelatdannere og fremgangsmåter for fremstilling av slike.
Bakgrunnen for oppfinnelsen.
Diamindioksimer er en kjent klasse av chelatdannere, og det er påvist at de danner komplekser med det radioaktive metallet99mTc.
Q = -(CH2)3- d.v.s. propylenaminoksim eller PnAO
Q = -(CH2)4- d.v.s. butylenaminoksim eller BnAO
Q = -(CH2)5- d.v.s. pentylenaminoksim eller PentAO
Liganden PentAO ble først publisert av S. Jurisson et al [Inorg. Chem., 26, 3576-82 (1987], som viste at metallkomplekset mellom denne PentAO og det radioaktive metallet<99>Tc, som har en lang halveringstid, var nøytralt, med en Tc(V)-dioksokjerne (d.v.s. Tc02<+>). J-M Lo et al [Appl. Rad. Inst, 44,1139-46 (1993)] har beskrevet fremstilling av PentAO og kompleksering av PentAO med<99m>Tc.
US 5688487 beskriver chelatkonjugater av diamindioksimer med en C2-5-alkylenbro og biologisk målsøkende molekyler basert på nitroimidazol for hypoksi-avbildning. Binding av nitroimidazol i Cl-posisjonen (oksimmetyl) beskrives.
WO 95/04552 beskriver nitroimidazolkonjugater av BnAO og PentAO. Eksempelet viser binding i Cl-posisjonen (oksimmetyl).
WO 95/19187 beskriver konjugater av lineære eller sykliske 3- til 50-mere syntetiske peptider med flertannete chelatdannere festet i karboksylenden av peptidet, til bruk som radiofarmasøytika. Diamindioksimere som PnAO, BnAO og PentAO beskrives som egnede chelatdannere.
WO 99/60018 beskriver diamindioksim chelatkonjugater mellom diamindioksimligander og peptider for trombeavbilding. En foretrukket slik chelatdanner sies å være et diamindioksim hvor Q = -(CH2)2NR(CH2)2-.
Foreliggende oppfinnelse.
Chelatdannerkonjugatene av diamindioksim og peptidet fra WO 99/60018 med formel I:
hvor T = N og Y = -CH2CH2NH-[peptid],
har imidlertid vesentlige ulemper. Ved chelatering med<99m>Tc danner dette azadiamindioksim flere forskjellige technetiumforbindelser, som kan separeres og detekteres med kromatografi. Ved romtemperatur omdannes de første radioaktivt merkede formene (mellomprodukter) over tid (2-3 timer) til et stabilt produkt. Denne mellomproduktomdanningen kan stimuleres ved å bruke høyere pH (> pH 8) og oppvarming. Disse betingelsene er ikke ideelle i et radiofarmasøytisk laboratorium på et sykehus, og derfor er det ønskelig med en chelatdanner som har færre mellomprodukter og/eller raskere mellomprodukt til sluttprodukt omdanning. Det er åpenbart at behovet for oppvarming og eventuelt forholdsvis høy pH for å oppnå adekvat radiokjemisk renhet (RCP) for<99m>Tc-forbindelsene ikke er ønskelig, siden slik oppvarming kan nedbryte det biologisk målsøkende molekylet eller peptidet som er bundet til chelatdanneren. Et annet problem med azadiamindioksim chelatdannere av formel I er at det tertiære aminnitrogenet i brohodeposisjonen er forholdsvis basisk. Dette betyr at ved dannelse av det tilsvarende<99m>Tc-komplekset i en vandig løsning, er det tertiære aminet iallfall delvis protonert, med det resultat at konjugatet blir elektrisk ladet. Denne ladningen kan begrense bruken av den merkede biologisk målsøkende gruppen, siden ladningen kan gjøre det vanskeligere for det radioaktivt merkede konjugatet å trenge gjennom cellemembranene.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer et alternativt chelatdannersystem (formel I hvor T = C) som løser disse problemene angitt i kjent teknikk, og tilveiebringer konjugater for radioaktiv merking med god RCP ved romtemperatur under vandige betingelser ved nær nøytral pH. De radioaktive metallkompleksene har god stabilitet. Kjente N2S2- og N3S-tiolholdige bifunksjonelle chelatdannere har den ulempen at tiolene er følsomme for luft og raskt oksiderer i luft til de tilsvarende disulfidene under nøytrale til basiske betingelser. Derfor må de oppbevares i en inert atmosfære eller i en beskyttende matriks før bruk. Alternativt kan de brukes som beskyttede forbindelser, som for eksempel tioacetat eller tetrahydropyranylhemitioketal, men nødvendiggjør fjerning av beskyttelses grupper før bruk med syre eller base og oppvarming. Alle disse egenskapene gjør disse chelatdannerne mindre praktiske enn chelatdannerne i henhold til foreliggende oppfinnelse. Derfor er de foreliggende chelatdannerne nyttige for binding og radioaktiv merking av en lang rekke biologisk målsøkende molekyler.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen.
Et første aspekt av foreliggende oppfinnelse tilveiebringer et chelatdannerkonjugat mellom en diamindioksimligand og en biologisk målsøkende gruppe. Uttrykket «chelatdannerkonjugat» betegner en forbindelse hvor et middel som kan danne metallchelater er kovalent bundet ('konjugert') til en biologisk målsøkende gruppe. Chelatdannerkonjugatet har formel II:
hvor:
hver R<1>, R<2>og R<3>, uavhengig av hverandre, er en R-gruppe, Yer^AVX-Z
hvor: X er -NR4-, -C02-, -N(C=S)-, -N(C=0)-, -S- eller -O-,
Z er en biologisk målsøkende gruppe, som omfatter et 3-lOOmer peptid eller peptidanalog som kan være et lineært peptid eller cycklopeptid eller kombinasjon derav; et monoklonalt antistoff eller fragment derav en syntetisk reseptorbindende forbindelse; et oligonukleotid eller et oligo-DNA eller oligo-RNA fragment;
R<4>, uavhengig av hverandre, er en R-gruppe, -(A)n- er et bindeledd hvor hver A, uavhengig av hverandre, er -CR2-, -CR=CR-, -C^C-, -NRCO-, -CONR-, -S02NR-, -NRS02-, -CR2OCR2-, -CR2SCR2-, -CR2NRCR2-, en C4-8-sykloheteroalkylengruppe, en C4-8-sykloalkylengruppe, en Cs-i2-arylengruppe, en C3-i2-heteroarylengruppe eller en polyalkylenglykol-, polymelkesyre- eller polyglykolsyregruppe,
n er et heltall fra 0 til 10,
hver R-gruppe, uavhengig av hverandre, er H eller Ci-io-alkyl, C3-10-alkylaryl, C2.io-alkoksyalkyl, Ci-10-hydroksyalkyl, Ci-10-fluoralkyl eller 2 eller flere R-grupper som sammen med atomene de er bundet til danner en karbosyklisk, heterosyklisk, mettet eller umettet ring, inneholdende 3 til 6 atomer i ringen.
Den biologisk målsøkende gruppen kan være av syntetisk eller naturlig opprinnelse, men er fortrinnsvis syntetisk. Foretrukne biologisk målsøkende grupper er 3- til 20-mer peptider, som kan være av syntetisk eller naturlig opprinnelse, men er fortrinnsvis syntetiske. Uttrykket «syklisk peptid» betegner en sekvens på 5 til 15 aminosyrer hvori de to terminale aminosyrene er bundet sammen med en kovalent binding som kan være en peptid- eller disulfidbinding eller en syntetisk ikke-peptidisk binding, for eksempel en tioeter-, fosfodiester-, disiloksan- eller uretanbinding.
Uttrykket «aminosyre» betegner en L- eller Z)-aminosyre, aminosyreanalog eller aminosyreimitasjon som kan være av naturlig eller rent syntetisk opprinnelse, og som kan være optisk ren, d.v.s. som har en eneste enantiomer og dermed er chiral, eller være en blanding av enantiomerer. Det foretrekkes at aminosyrene i henhold til foreliggende oppfinnelse er optisk rene. «Aminosyreimitasjon» betegner syntetiske analoger av naturlig forekommende aminosyrer som er isostere, d.v.s. er utformet for å etterape den steriske strukturen og elektronstrukturen til den naturlige forbindelsen. Slike isosterer er velkjente for fagmannen på området og innbefatter, men er ikke begrenset til, depsipeptider, retro-inversopeptider, tioamider, sykloalkaner eller 1,5-disubstituerte tetrazoler [se M. Goodman, Biopolymers, 24, 137, (1985)].
Egnede peptider til bruk i foreliggende oppfinnelse er blant annet:
- somatostatin, oktreotid og analoger av disse,
peptider som binder til ST-reseptoren, hvor ST refererer til det varmestabile
toksinet som produseres av E. coli og andre mikroorganismer,
- lamininfragmenter, f.eks. YIGSR, PDSGR, IKVAV, LRE og
KCQAGTFALRGDPQG,
- N-formylpeptider for målsøkingsseter av leukocyttakkumulering,
- blodplatefaktor 4 (PF4) og fragmenter derav,
- RGD-holdige peptider,
peptidfragmenter av a2-antiplasmin, fibronektin eller beta-kasein, fibrinogen eller trombospondin. Aminosyresekvensene til a2-antiplasmin, fibronektin, beta-kasein, fibrinogen og trombospondin finnes i de følgende referansene: <X2-antiplasminforløper [M.Tone et al., J.Biochem, 102. 1033, (1987)], beta-kasein [L.Hansson et al, Gene, 139, 193, (1994)], fibronektin [A.Gutman et al, FEBS Lett., 207, 145, (1996)], trombospondin-1-forløper [V.Dixit et al, Proe. Nati. Acad. Sei., USA, 83, 5449, (1986)], R.F.Doolittle, Ann. Rev. Biochem., 53, 195, (1984).
Det foretrekkes at peptidene i henhold til foreliggende oppfinnelse inneholder en aminosyresekvens fra N-terminalen av:
(i) ci2-antiplasmin,
d.v.s. NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-OH
eller varianter av dette hvori en eller flere aminosyrer er byttet ut, lagt til eller fjernet, for eksempel: NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-OH, NH2-Asn-Gln-Glu-Ala-Val-Ser-Pro-Leu-Thr-Leu-Thr-Leu-Leu-Lys-Gly-OH, NH2-Asn-Gln-Glu-Gln-Val-Gly-OH, eller
(ii) kasein
d.v.s. Ac-Leu-Gly-Pro-Gly-Gln-Ser-Lys-Val-Ile-Gly.
Syntetiske peptider i henhold til foreliggende oppfinnelse kan også fås ved konvensjonell fastfasesyntese, som beskrevet hos P. Lloyd-Williams, F. Albericio og E. Girald, Chemical Approaches to the Synthesis ofPeptides and Proteins, CRC Press, 1997.
Egnede monoklonale antistoffer eller fragmenter av disse til bruk i henhold til foreliggende oppfinnelse er blant annet: antistoffer mot CD-20-antigenet som uttrykkes på overflaten av B-celler, anti-leukocytt- eller anti-granulocytt-antistoffer, anti-myosin-antistoffer eller antistoffer mot karsinoembryoniske antigener (CEA).
Egnede enzymsubstrater eller enzymhemmere er blant annet glukose og glukoseanaloger som fluordeoksyglukose, fettsyrer og elastasehemmere.
Egnede syntetiske reseptorbindende forbindelser er blant annet østradiol, østrogen, progestin, progesteron og andre steroidhormoner, ligander for dopamin D-l-reseptoren eller dopamin D-2-reseptoren eller dopamintransportører som for eksempel tropaner, samt ligander for serotoninreseptoren.
Med uttrykket «fluoralkyl» menes en alkylgruppe som er substituert med minst ett fluoratom, det vil si at uttrykket innbefatter grupper fra monofluoralkyl (f.eks. -CH2F) til perfluoralkyl (f.eks. CF3).
I diamindioksimchelatdannerne i henhold til foreliggende oppfinnelse er R fortrinnsvis H. Det er også foretrukket at minst en R<2->gruppe er H, mer foretrukket at at alle R<2->gruppene er H. Hver R<1>er foretrukket Ci-3-alkyl, C2-4-alkoksyalkyl, Ci-3-hydroksyalkyl eller Ci-3-fluoralkyl, og mest foretrukket er at R<1>er Ci-3-alkyl eller Ci-3-fluoralkyl. Aller mest foretrukket er at alle R<1->gruppene er CH3.
Foretrukne chelatdannerkonjugater av formel II hvori to eller flere R-grupper som sammen med atomene de er bundet til danner en karbosyklisk, heterosyklisk, mettet eller umettet ring, innbefatter slike ringer med 3 til 6 atomer i ringen, hvor 5 eller 6 atomer er spesielt foretrukket. Mest foretrukket av slike ringer er mettede karbosykliske ringer. Foretrukne karbosykliske ringer er slike hvori to R<1->grupper som er bundet enten til det samme karbonatomet eller til nabokarboner kombineres til å danne ringer på 3 til 6 atomer, hvor mettede ringer av 5 eller 6 atomer er spesielt foretrukket.
Bindeleddet - (A)ner tiltenkt rollen å distansere det relativt omfangsrike radiometallkomplekset, som dannes ved metall koordinasjon, fra det aktive setet på den biologisk målsøkende gruppen slik at f.eks. reseptorbinding ikke blir svekket. Dette kan oppnås ved en kombinasjon av fleksibilitet (f.eks. enkle alkylkjeder), slik at den omfangsrike gruppen har frihet til å posisjonere seg bort fra det aktive setet, og/eller stivhet slik som en sykloalkyl- eller arylgruppe som orienterer metallkomplekset bort fra det aktive setet. Egenskapene til bindeleddet kan også brukes til å modifisere biodistribusjonen av det radioaktive metallkomplekset som inngår i konjugatet. Følgelig vil for eksempel innføringen av etergrupper i bindeleddet hjelpe til med å minimere plasmaproteinbinding. Foretrukne bindeledd - (A)tt har en ryggradskjede av sammenbundne atomer som utgjør -(A)I1-gruppen og inneholder 2 til 10 atomer, fortrinnsvis 2 til 5 atomer, hvor 2 eller 3 atomer er spesielt foretrukket. En minste ryggradskjede for et bindeledd på 2 atomer gir den fordelen at chelatdanneren er godt atskilt fra den biologisk målsøkende gruppen slik at enhver interaksjon er minimert. En annen fordel er at den potensielle chelatringstørrelsen til X- og Z-gruppene er så stor (minst 8 for en 2-atomig ryggradskjede) at disse gruppene neppe konkurrerer effektivt med koordinasjonen av chelatdanneren til et radioaktivt metall. På denne måten opprettholdes både de målsøkende egenskapene til den biologisk målsøkende gruppen og metallkomplekseringsevnen til diamindioksimchelatdanneren i konjugater av denne typen.
Ikke-peptidiske bindeleddgrupper, slik som alkylengrupper eller arylengrupper har den fordelen at det ikke er noen vesentlige hydrogenbindingsinteraksjoner med den konjugerte biologisk målsøkende gruppen og slik at bindeleddet ikke folder seg rundt den biologisk målsøkende gruppen. Foretrukne alkylenbindeledd er -(CH2)n-, hvor n er 2 til 5.
Foretrukne arylenbindeledd er av formel:
hvor a og b, uavhengig av hverandre, er 0, 1 eller 2.
En foretrukket Y-gruppe er dermed - CH2CH2-X-Z, fortrinnsvis - CH2CH2-NR<4->Z, med Y = - CH2CH2-NH-Z som mest foretrukket. Denne grupperingen har den ekstra fordelen at den stammer fra mellomproduktet R QCFkCFkNH^, fortrinnsvis mellomproduktet HC(CH2CH2NH2)3, som fordi det er symmetrisk er mye lettere å fremstille, siden triaminer med ulike kjedelengder ville kreve bruk av syntetiske strategier for å kjemisk skille de forskjellige aminene fra hverandre (f.eks. via beskyttende grupper).
Gruppen X er en funksjonell gruppe som tillater enkel konjugering av chelatdanneren til den biologisk målsøkende gruppen Z. Siden de fleste peptider og proteiner har tilgjengelige karboksyl- eller aminoposisjoner for funksjonalisering, er foretrukne X-grupper - NR<4->og - CO2- når Z er et peptid eller protein, siden disse tillater enkel konjugering via amidbindinger. Cysteinholdige peptider og proteiner kan ha frie tiolgrupper, og foretrukne X-grupper når Z er et cysteinholdig peptid eller protein er tiolfile grupper slik som maleimid og akrylamid, siden disse tillater enkel konjugering via tioeterbindinger.
Foretrukne diamindioksim chelatdannere i henhold til foreliggende oppfinnelse er symmetriske, det vil si at de to -CR<2>2R<2>2NHCR<I>2C(=N-OH)R<I->substituentene på - CY(R<3>)-gruppen er valgt til å være like. Dette har den fordelen at chelatdanneren ikke inneholder et chiralt senter, siden slike sentre kan generere diastereomere radiometallkomplekser som muligens krever rensing av bestemte isomerer.
Chelatdannerkonjugatene av formel II kan eventuelt brukes i syresaltform, d.v.s. hvor et eller flere aminer enten diamindioksimdonorsettet eller Y-gruppen er protonert med en
biokompatibel syre. Slike salter kan oppnås direkte, f.eks. ved HPLC-rensing ved bruk av slike syrer i den mobile fasen (f.eks. eddiksyre eller trifluoreddiksyre), eller ved tilsetning av den biokompatible syren til en løsning av chelatdannerkonjugatet. Saltformen kan være nyttig som hjelp til rensingen (f.eks. ved felling eller omkrystallisering), eller den kan
forenkle oppløsningen i vandige media (etter hvilken pH lett kan justeres hvis nødvendig).
Chelatdannerkonjugatene i henhold til foreliggende oppfinnelse kan fremstilles ved å reagere et bifunksjonelt chelat av formel III med den biologisk målsøkende gruppen:
hvor:
hver R<1>, R<2>og R<3>, uavhengig av hverandre, er en R-gruppe, E er -(A)n-J
hvor:
J er en funksjonell gruppe som egner seg for binding til Z, hvor Z er en biologisk målsøkende gruppe, som omfatter et 3-100 mer peptid eller peptidanalog som kan være et lineært peptid eller cyklopeptid eller kombinasjon derav; et monoklonalt antistoff eller fragment derav; en syntetisk reseptorbindende forbindelse; et oligonukleotid eller et oligo-DNA eller oligo-RNA fragment; -(A)n- er et bindeledd hvor hver A, uavhengig av hverandre, er -CR2-, -CR=CR-, -C^C-, -NRCO-, -CONR-, -S02NR-, -NRSO2-, -CR2OCR2-, -CR2SCR2-, -CR2NRCR2-, en C4-8-sykloheteroalkylengruppe, en C4-8-sykloalkylengruppe, en C5.12-arylengruppe, en C3-i2-heteroarylengruppe eller en polyalkylenglykol-, polymelkesyre- eller polyglykolsyregruppe,
n er et heltall fra 0 til 10,
hver R-gruppe, uavhengig av hverandre, er H eller Ci-10-alkyl, C3-10-alkylaryl, C2-io-alkoksyalkyl, Ci-10-hydroksyalkyl, Ci-10-fluoralkyl eller 2 eller flere R-grupper som sammen med atomene de er bundet til danner en karbosyklisk, heterosyklisk, mettet eller umettet ring, inneholdende 3 til 6 atomer i ringen.
Uttrykket «funksjonell gruppe som egner seg for binding» betegner en funksjonell gruppe som vil reagere med en tilsvarende funksjonell gruppe på Z (vanligvis en amin-, karboksyl- eller tiolgruppe) og danne en kjemisk binding mellom diamindioksimchelatdanneren og Z. Foretrukne slike funksjonelle grupper som egner seg for binding er: -NR<5>R<6>, -C02M, -NCS, -NCO, -SM1,-OM<1>, maleimid eller akrylamid, hvor R<5>og R<6>, uavhengig av hverandre, er en R-gruppe eller P<G>, M er H, et kation, P<G>eller en aktiv ester, M<1>er H eller P<G>, og P<G>er en beskyttende gruppe. Kationet kan gjerne være et positivt ladet motion, slik som et metallion, ammonium (NFL;<*>) eller kvartært ammonium eller fosfoniumion. Fortrinnsvis er kationet et biokompatibelt kation. Betegnelsene «biokompatibelt kation», «aktiv ester» og «beskyttende gruppe» er definert nedenfor. Når den funksjonelle gruppen er - NR<5>R<6>, er minst en og fortrinnsvis begge R<5>og R6 lik H.
Uttrykket «beskyttende gruppe» betegner en gruppe som hemmer eller undertrykker uønskede kjemiske reaksjoner, men som er utformet for å være tilstrekkelig reaktiv til at den kan spaltes av fra den aktuelle funksjonelle gruppen under milde nok betingelser til at resten av molekylet ikke blir modifisert. Etter avbeskyttelsen kan den aktuelle gruppen brukes til å binde det bifunksjonelle chelatet av formel III til den biologisk målsøkende gruppen. Beskyttende grupper er vel kjente for fagmannen på området og kan når J er - NR<5>R<6>hensiktsmessig velges fra: Boe (hvor Boe er terf-butyloksykarbonyl), Fmoc (hvor Fmoc er fluorenylmetoksykarbonyl), trifluoracetyl, allyloksykarbonyl, Dde [d.v.s. 1 -(4,4-dimetyl-2,6-dioksosykloheksyliden)etyl] eller Npys (d.v.s. 3-nitro-2-pyridinsulfenyl), og når J er -CChP<0>: metylester, terf-butylester, benzylester når J er -OP<G>, er egnede beskyttende grupper: acetyl, benzoyl, trityl (Trt) eller tetrabutyldimetylsilyl. Når J er - SP<G>, er egnede beskyttende grupper: trityl og 4-metoksybenzyl. Bruk av andre beskyttende grupper er beskrevet i 'Protective-groups in Organic Synthesis', Theorodora W. Greene og Peter G. M. Wuts, (John Wiley & Sons, 1991).
Uttrykket «biokompatibelt kation» betegner et positivt ladet motion som danner et salt med en ionisert, negativt ladet gruppe, hvor det nevnte positivt ladde motionet også er ugiftig og derfor egner seg for innføring i en pattedyrkropp, særlig menneskekroppen. Eksempler på egnede biokompatible kationer innkluderer: alkalimetallene (f.eks. natrium eller kalium), jordalkalimetallene (f.eks. kalsium eller magnesium) og ammoniumionet. Et foretrukket biokompatibelt kation er natriumionet (Na<+>).
Uttrykket «aktiv ester» betegner et esterderivat av karboksylsyren som er utformet for å være bedre egnet til å byttes ut og tillater derfor enklere reaksjon med nukleofile grupper, som for eksempel aminer, på den biologisk målsøkende gruppen. Eksempler på egnede aktive estere er: N-hydroksyravsyreimid (NHS), pentafluorfenol, pentafluortiofenol,/»arø-nitrofenol og hydroksybenzotriazol.
Aminfunksjonaliserte chelatdannere av formel III (d.v.s. J = -NR<5>R<6>) kan dermed bindes til karboksylgruppen(e) av en biologisk målsøkende gruppe via amidbindinger. Denne bindingen kan utføres direkte (f.eks. ved bruk av fastfasepeptidsyntese), eller i nærvær av et passende aktiveringsmiddel, slik som BOP [d.v.s. benzotriazol-l-yloksy-frø(dimetylamino)-fosfonium] eller N,N'-disykloheksylkarbodiimid (DCCI). Bindingen kan også utføres via av passende mellomstadier som er kjent på fagområdet, slik som aktiverte estere av karboksylgruppen av den biologisk målsøkende gruppen. Alternativt kan aminogruppen på den bifunksjonelle chelatdanneren først omdannes til isotiocyanat (-NCS) eller isocyanat (-NCO), som tillater binding til aminholdige biologisk målsøkende grupper via dannelsen av henholdsvis tiourea- og ureabindinger. Alternativt kan aminogruppen på den bifunksjonelle chelatdanneren reageres med en disyre for å innføre en terminal karboksylgruppe via et bindeledd. En bifunksjonell chelatdanner som bærer en karboksylfunksjon (d.v.s. J = -CO2M) kan på liknende måte brukes til å binde direkte til aminholdige biologisk målsøkende grupper via en amidbinding. Det bifunksjonelle chelatet kan også ha en gruppe som er utformet for å reagere med en tiolgruppe på den biologisk målsøkende gruppen og danne stabile tioeterbindinger. Eksempler på slike grupper er maleimider (som kan fremstilles ved reaksjon av maleimidanhydrid med det tilsvarende aminet etterfulgt av oppvarming med eddiksyreanhydrid), og akrylamider (som kan fremstilles ved reaksjon mellom akrylylklorid og aminet).
I et andre aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse radioaktive metallkomplekser av det ovennevnte chelatdannerkonjugatet. Egnede radioaktive metaller kan enten være positronemittere som<«>"Cu,<48>V,<52>Fe,<55>Co,<94m>Tc eller<68>Ga, eller y-emittere som<99m>Tc,<In>ln,<n3m>In eller<67>Ga. Særlig foretrukne radioaktive metaller for diagnostisk avbildning er y-emittere, spesielt<99m>Tc. Metallkomplekser av visse radionuklider kan være nyttige som radiofarmasøytika for strålebehandling av forskjellige sykdommer slik som kreft eller behandling av trombose eller restenose. Nyttige radioisotoper for slik radioterapeutiskbruk inkluderer: 90Y,89Sr, 67Cu,<103>Pd,<1>86Re, 188Re,<169>Er, 153Sm og<198>Au. Det er sterkt foretrukket at den biologisk målsøkende gruppen Z er bundet til chelatdanneren på en slik måte at bindingen ikke lett metaboliseres i blodet, noe som ville føre til at metallkomplekset spaltes fra før den merkede biologisk målsøkende gruppen når frem til det ønskede in vivo målet. Den biologisk målsøkende gruppen blir derfor fortrinnsvis bundet kovalent til metallkompleksene i henhold til foreliggende oppfinnelse via bindinger som ikke lett metaboliseres (slik som f.eks. esterbindinger).
Foretrukne radiometallkomplekser i henhold til foreliggende oppfinnelse er symmetriske, det vil si at de to -CR<2>2R<2>2NHCR<I>2C(=N-OH)R<I->substituentene på -CY(R<3>)-gruppen er valgt til å være like. Dette har den fordelen at radiometallkomplekset ikke inneholder et chiralt senter, siden slike sentere kan danne diastereomere radiometallkomplekser og kanskje nødvendig gjøre rensing av bestemte isomerer. Det foretrekkes også at radiometallkomplekset av chelatdannerkonjugatet er elektrisk nøytralt.
Det antas at<99m>Tc-kompleksene av chelatdannerne i henhold til foreliggende oppfinnelse
er nøytrale Tc(V)-dioksokomplekser som vist ovenfor.
199<m>Tc-diamindioksimkompleksene i henhold til foreliggende oppfinnelse er R<3>fortrinnsvis H. Det er også foretrukket at minst en R<2->gruppe er H, og mer foretrukket er at alle R<2->gruppene er H. Hver R<1>er foretrukket Ci-3-alkyl, C2-4-alkoksyalkyl, C1.3-hydroksyalkyl, eller Ci-3-fluoralkyl, og mest foretrukket Ci-3-alkyl eller Ci-3-fluoralkyl. Det er særlig foretrukket at alle R<1->gruppene er CH3. Foretrukne Y-grupper for99mTc komplekset er som beskrevet ovenfor for chelatdannerkonjugatet.
Foretrukne radiometallkomplekser i henhold til foreliggende oppfinnelse hvori to eller flere R-grupper, som sammen med atomene de er bundet til, danner en karbosyklisk, heterosyklisk, mettet eller umettet ring, innbefatter slike ringer med 3 til 6 atomer i ringen, særlig 5 eller 6 atomer. Mest foretrukket av slike ringer er mettede karbosykliske ringer. Foretrukne karbosykliske ringer er de hvori to R<1->grupper som er bundet enten til det samme karbonatomet eller til nabokarboner kombineres til å danne ringer på 3 til 6 atomer, særlig mettede ringer av 5 eller 6 atomer.
Radiometallkompleksene i henhold til foreliggende oppfinnelse kan fremstilles ved å reagere en løsning av det radioaktive metallet i passende oksidasjonstilstand med chelatkonjugatet ved passende pH. Løsningen kan fortrinnsvis inneholde en ligand som komplekserer svakt med metallet (slik som glukonat eller citrat), det vil si at radiometallkomplekset fremstilles ved ligandutveksling eller transcheleatering. Slike betingelser er nyttige for å undertrykke uønskede sidereaksjoner slik som for eksempel hydrolyse av metallionet. Når det radioaktive metallionet er<99m>Tc, er det vanlige utgangsmaterialet natriumpertechnetat fra en<99>Mo-generator. Technetium foreligger i<99m>Tc-pertechnetatet i oksidasjonstilstand Tc(VII), som er forholdsvis lite reaktivt. Fremstilling av technetiumkomplekser av lavere oksidasjonstilstand, Tc(I) til Tc(V), vil derfor vanligvis kreve tilsetning av et passende farmasøytisk aksepterbart reduksjonsmiddel som natriumditionitt, natriumbisulfitt, askorbinsyre, formamidinsulfinsyre, tinn ion, Fe(II) eller Cu(I), for å lette komplekseringen. Det farmasøytisk aksepterbare reduksjonsmidlet er fortrinnsvis et tinn-salt, mest foretrukket er tinnklorid, tinnfluorid eller tinntartrat.
I et tredje aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse radiofarmasøytika som innbefatter de ovennevnte radioaktive metallkompleksene av chelatdannerkonjugatene i en steril form som egner seg for administrering i mennesker. Slike radiofarmasøytika leveres hensiktsmessig enten i en beholder som er forsynt med en forsegling som egner seg for en gangs eller fler gangs punksjon med en hypodermisk nål (f.eks. en påkrympet membran forsegling) og samtidig opprettholder steril integritet. Slike beholdere kan inneholde en eller flere pasientdoser. Foretrukne flerdosebeholdere innbefatter et enkele glass (f.eks. av volum 10 til 30 cm ) som inneholder flere pasientdoser, slik at enkelt pasientdoser kan trekkes ut i sprøyter av klinisk kvalitet ved forskjellige tidspunkter under levetiden for preparatet i samsvar med den kliniske situasjonen. Forhåndsfylte sprøyter er utformet for å inneholde en enkelt human dose og er derfor fortrinnsvis en engangssprøyte eller en annen sprøyte som egner seg for klinisk bruk. Den forhåndsfylte sprøyten kan eventuelt forsynes med sprøyteskjerming for å beskytte operatøren mot radioaktivstråling. Egnede slike radiofarmasøytiske sprøyteskjerminger er kjent på fagområdet, og inneholder fortrinnsvis enten bly eller wolfram.
Et<99m>Tc-radioaktivitet innhold egnet til et radiofarmasøytika for diagnostisk avbildning ligger i området 180 og 1500 MBq, avhengig av hvilken del av kroppen som skal avbildes in vivo , opptak og mål til bakgrunn-forholdet. For hjerteavbildning med et<99m>Tc-radiofarmasøytikum kan ca. 1110 MBq (30 mCi) brukes i en stressundersøkelse og ca. 350 MBq (10 mCi) i en hvileundersøkelse.
I et fjerde aspekt tileveiebringer foreliggende oppfinnelse ikke-radioaktive sett til fremstilling av den<99m>Tc radiofarmasøytiske sammensetningen. Slike sett er utformet for å gi sterile radiofarmasøytiske produkter som egner seg for administrering i mennesker, f.eks. via direkte innsprøytning i blodstrømmen. For<99m>Tc er settet fortrinnsvis frysetørket og utformet for å rekonstitueres med sterilt<99m>Tc-pertechnetat (Tc(V) fra en<99m>Tc radioisotopgenerator for å gi en løsning som egner seg for administrering i mennesker uten videre håndtering. Egnede sett innbefatter en beholder (f.eks. et membranforseglet glass) som inneholder chelatdannerkonjugatet av formel II enten i fri baseform eller syresaltform, sammen med et farmasøytisk aksepterbart reduksjonsmiddel slik som natriumditionitt, natriumbisulfitt, askorbinsyre, formamidinsulfinsyre, tinn ion, Fe(II) eller Cu(I). Det farmasøytisk aksepterbare reduksjonsmidlet er fortrinnsvis et tinnsalt slik som tinnklorid eller tinntartrat. Alternativt kan settet eventuelt inneholde et metallkompleks som ved tilsetning av det radioaktive metallet gjennomgår transmetallering (d.v.s. bytter metall) til det ønskede produktet ved.
De ikke-radioaktive settene kan eventuelt videre inneholde andre tilleggs komponenter slik som en transchelator, radioprotektant, et antimikrobielt konserveringsmiddel, pH-justeringsmiddel eller fyllstoff. «Transchelatoren» er en forbindelse som reagerer raskt til dannelse av et svakt kompleks med technetium og deretter erstattes med diamindioksimet. Dette minimerer risikoen for dannelse av redusert hydrolysert technetium (RHT) på grunn av rask reduksjon av pertechnetat som konkurrerer med technetiumkomplekseringen. Egnede slike transchelatorer er salter av en svak organisk syre, d.v.s. en organisk syre med pKa i området mellom 3 og 7, med et biokompatibelt kation. Egnede slike svake organiske syrer er eddiksyre, sitronsyre, vinsyre, glukonsyre, glukoheptonsyre, benzosyre, fenoler eller fosfonsyrer. Egnede salter er dermed acetater, citrater, tartrater, glukonater, glukoheptonater, benzoater, fenolater eller fosfonater. Foretrukne slike salter er tartrater, glukonater, glukoheptonater, benzoater eller fosfonater, mest foretrukket er fosfonater, særlig er difosfonater mest foretrukket. En foretrukket slik transchelator er et salt av MDP, d.v.s. metylendifosfonsyre, med et biokompatibelt kation.
Uttrykket «radioprotektant» betegner en forbindelse som hemmer nedbrytningsreaksjoner, slik som redoksreaksjoner, ved å fange opp sterkt reaktive frie radikaler, slik som oksygenholdige frie radikaler som stammer fra radiolyse av vann. Radioprotektantene benyttet i henhold til foreliggende oppfinnelse kan gjerne velges blant: askorbinsyre,/>arø-aminobenzosyre (d.v.s. 4-aminobenzosyre), gentisinsyre (d.v.s. 2,5-dihydroksybenzosyre) og salter derav med et biokompatibelt kation som beskrevet ovenfor.
Med uttrykket «antimikrobielt konserveringsmiddel» menes et middel som hemmer veksten av potensielt skadelige mikroorganismer som bakterier, gjær- og muggsopper. Det antimikrobielle konserveringsmidlet kan også vise bakteriedrepende egenskaper, avhengig av dosen. Hovedrollen til det antimikrobielle konserveringsmidlet/de antimikrobielle konserveringsmidlene i henhold til foreliggende oppfinnelse er å hemme veksten enhver slik mikroorganisme i den radiofarmasøytiske sammensetningen etter rekonstitusjon, d.v.s. i det radioaktive diagnostiske produktet selv. Det antimikrobielle konserveringsmidlet kan imidlertid også eventuelt bli brukt til å hemme veksten av potensielt skadelige mikroorganismer i en eller flere komponenter av det ikke-radioaktive settet i henhold til foreliggende oppfinnelse, før rekonstitusjon. Egnede antimikrobielle konserveringsmidler inkluderer: parabenenr, d.v.s. metyl-, etyl-, propyl- eller butylparaben eller blandinger derav, benzylalkohol, fenol, kresol, cetrimid og tiomersal. Foretrukne antimikrobielle konserveringsmidler er parabenene.
Uttrykket «pH-justeringsmiddel» betegner en forbindelse eller en blanding av forbindelser som er nyttig for å sikre at pH i det rekonstituerte settet er innenfor akseptable grenser (omtrent pH 4,0 til 10,5) for administrering i mennesker eller andre pattedyr. Egnede slike pH-justeringsmidler inkluderer farmasøytisk aksepterbare buffere som tricin, fosfat eller TRIS [d.v.s.frø(hydroksymeytl)aminometan] og farmasøytisk aksepterbare baser slik som natriumkarbonat, natriumbikarbonat eller blandinger derav. Når konjugatet av formel II brukes i syresaltform kan pH-justeringsmidlet eventuelt tilveiebringes i et separat glass eller beholder, slik at brukeren av settet kan justere pH som del av en flertrinnsprosedyre.
Uttrykket «fyllstoff» betegner et farmasøytisk aksepterbart fyllmiddel som kan gjøre det lettere å håndtere produktet under produksjon og frysetørking. Egnede fyllstoffer inkluderer uorganiske salter som natriumklorid og vannløselige sukkerarter som sukrose, maltose eller trehalose.
I et femte aspekt av foreliggende oppfinnelse tilveiebringes bifunksjonelle diamindioksim chelatdannere av formel III som er nyttige for å lage konjugater av chelatdannere og biologisk målsøkende grupper:
hvor:
hver R<1>, R<2>og R<3>, uavhengig av hverandre, er en R-gruppe, E er -(A),!-J
hvor:
J er en funksjonell gruppe som egner seg for binding til Z, hvor Z er en biologisk målsøkende gruppe, som omfatter et 3-100 mer peptid eller peptidanalog som kan være et lineært peptid eller cyklopeptid eller kombinasjon derav; et monoklonalt antistoff eller fragment derav; en syntetisk reseptorbindende forbindelse; et oligonukleotid eller et oligo-DNA eller oligo-RNA fragment; -(A)n- er et bindeledd hvor hver A, uavhengig av hverandre, er -CR2-, -CR=CR-, -C^C-, -NRCO-, -CONR-, -S02NR-, -NRS02-, -CR2OCR2-, -CR2SCR2-, -CR2NRCR2-, en C4-8-sykloheteroalkylengruppe, en C4-8-sykloalkylengruppe, en Cs-i2-arylengruppe, en C3-i2-heteroarylengruppe eller en polyalkylenglykol-, polymelkesyre- eller polyglykolsyregruppe,
n er et heltall fra 0 til 10,
hver R-gruppe, uavhengig av hverandre, er H eller Ci-10-alkyl, C3-10-alkylaryl, C2.io-alkoksyalkyl, Ci-10-hydroksyalkyl, Ci-10-fluoralkyl eller 2 eller flere R-grupper som sammen med atomene de er bundet til danner en karbosyklisk, heterosyklisk, mettet eller umettet ring, inneholdende 3 til 6 atomer i ringen.
Uttrykket "funksjonell gruppe som egner seg for binding" betegner en funksjonell gruppe som vil reagere med en tilsvarende funksjonell gruppe på Z (vanligvis en amin-, karboksyl- eller tiolgruppe) for å kjemisk binde diamindioksim chelatdanneren til Z. Foretrukne slike funksjonelle grupper som egner seg for binding er: -NR<5>R<6>, -C02M, - NCS, -NCO, -SM<1>, -OM<1>, maleimid eller akrylamid, hvor R<5>og R<6>, uavhengig av hverandre, er en R-gruppe eller P<G>, M er H, et kation, P<G>eller en aktiv ester, M<1>er H eller P<G>, og P<G>er en beskyttende gruppe. Kationet kan gjerne være et positivt ladet motion, slik som et metallion, ammonium (NH/) eller kvartært ammonium eller fosfonium. Fortrinnsvis er kationet et biokompatibelt kation. Uttrykkene 'biokompatibelt kation', 'aktiv ester' og 'beskyttende gruppe' er som definert ovenfor. Når den funksjonelle gruppen er -NR<5>R<6>, er minst den ene og fortrinnsvis begge av R<5>og R6 lik
H.
I de bifunksjonelle chelatdannerne av formel III i henhold til foreliggende oppfinnelse er R 3 fortrinnsvis H. Det foretrekkes også at minst en R 2-gruppe er H, og mer foretrukket er at alle R<2->gruppene er H. Hver R1 er foretrukket Ci-3-alkyl, C2-4-alkoksyalkyl, C1.3-hydroksyalkyl eller Ci-3-fluoralkyl, og mer foretrukket er Ci-3-alkyl eller Ci-3-fluoralkyl. Det er spesielt foretrukket at alle R<1->gruppene er CH3.
Foretrukne bifunksjonelle chelatdannere hvor to eller flere R-grupper som sammen med atomene de er bundet til danner en karbosyklisk, heterosyklisk, mettet eller umettet ring, innbefatter slike ringer med 3 til 6 atomer i ringen, særlig er 5 eller 6 atomer foretrukket. Mest foretrukket er at disse ringene er mettede karbosykliske ringer. Foretrukne karbosykliske ringer er de hvori to R<1->grupper som er bundet enten til det samme karbonatomet eller til nabokarboner går sammen til mettede ringer på 3 til 6 atomer, hvor 5 eller 6 atomer foretrekkes spesielt.
Chelatdannerkonjugatene av formel III kan eventuelt brukes i syresaltform, d.v.s. hvor ett eller flere aminer enten i diamindioksimdonorsettet eller Y-gruppen er protonert med en biokompatibel syre. Slike salter kan oppnås direkte, f.eks. ved HPLC-rensing hvor det brukes slike syrer i den mobile fasen (f.eks. eddiksyre eller trifluoreddiksyre) eller ved tilsetning av den biokompatible syren til en løsning av chelatdannerkonjugatet. Saltformen kan være nyttig som hjelp ved rensingen (f.eks. ved felling eller omkrystallisering), eller den kan lette oppløsningen av konjugatet i vandig medium (etter hvilken pH lett kan justeres om nødvendig).
Foretrukne bindeledd -(A)nav den bifunksjonelle chelatdanneren har en ryggrad av sammenbundne atomer som utgjør -(A)I1-gruppen og inneholder 2 til 10 atomer, fortrinnsvis 2 til 5 atomer, hvor 2 eller 3 atomer er spesielt forutrekket. En minste bindeledd ryggrad på 2 atomer har den fordelen etter bindingen at chelatdanneren er godt atskilt fra den biologisk målsøkende gruppen slik at enhver interaksjon er minimert. En videre fordel er at den potensielle chelatring størrelsen til X- og Z-gruppene er så stor (minst 8 for en 2-atomig ryggrad) at disse gruppene neppe konkurrerer effektivt med koordinasjon av chelatdanneren til et radioaktivt metall.
Ikke-peptidiske bindeledd slik som alkylengrupper eller arylengrupper har den fordelen at det ikke er noen vesentlige hydrogenbindingsinteraksjoner med den konjugerte biologisk målsøkende gruppen slik at bindeleddet ikke folder seg rundt den biologisk målsøkende gruppen. Foretrukne alkylenbindeledd er -(CtkV, hvor n er 2 til 5. Foretrukne arylenbindeledd er av formel:
hvor: a og b, uavhengig av hverandre, er 0,1 eller 2.
En foretrukket E-gruppe er altså -CH2CH2-J, mest foretrukket er -CH2CH2-NHR<5>eller - CH2CH2-CO2H eller aktive estere derav, med E = -CH2CH2-NH2som særlig foretrukket. Syren kan også omdannes til et blandet anhydrid f.eks. ved å reagere den med isobutylklorformiat og base. Det blandede anhydridet reagerer også med nukleofile grupper som for eksempel aminer. Grupperingen E = -CH2CH2-NH2har den ytterligere fordelen at den stammer fra mellomproduktet R C(CH2CH2NH2)3, fortrinnsvis mellomproduktet HC(CH2CH2NH2)3, som fordi de er symmetriske er mye enklere å fremstille, ettersom triaminer med forskjellig kjedelengde ville kreve syntetiske strategier for å kjemisk skille de forskjellige aminene fra hverandre (f.eks. via beskyttende grupper).
Foretrukne bifunksjonelle diamindioksim chelatdannere av formel III i henhold til foreliggende oppfinnelse er symmetriske, det vil si at de to -C(R<2>)2(R<2>)2NHCR<1>2C(=N-OITjR^substituentene på -CY(R<3>)-gruppen er valgt til å være like. Dette har den fordelen at chelatdanneren ikke inneholder et chiralt senter, siden slike sentere kan danne diastereomere radiometallkomplekser og kanskje gjøre det nødvendig å rense bestemte isomerer. En spesielt foretrukket bifunksjonell diamindioksim chelatdanner har formelen:
Syresalter av denne forbindelsen ligger også innenfor gyldighetsområdet for foreliggende oppfinnelse.
De bifunksjonelle diamindioksim chelatdannerne i henhold til foreliggende oppfinnelse kan gjerne fremstilles ved alkylering av en forbindelse av formel IV:
hvor A, J, R , R og n er som definert for formel III ovenfor,
med enten:
(i) det passende klornitrosoderivatet C1-C(R] )2-CH(NO)RI,
(ii) et alfa-kloroksim av formel Cl-CCR1 )2-C(=NOH)RI,
(iii) et alfa-bromketon av formel Br-C(R] )2-C(=0)RI, og etterfulgt av omdannelse av diamindiketonproduktet til diamindioksim med
hydroksylamin.
Metode (i) er beskrevet av S. Jurisson et al [Inorg. Chem., 26, 3576-82 (1987)]. Klornitrosoforbindelser kan oppnås ved behandling av det passende alkenet med nitrosylklorid (NOC1) som beskrevet i eksempel 3. Videre syntesedetaljer for klornitrosoforbindelser finnes hos: Ramalingam, K. et al Synth. Commun. (1995) 25(5) 743-52, Glaser et al J. Org. Chem. (1996), 61(3), 1047-48, Clapp, Leallyn B. et al J. Org Chem. (1971), 36(8) 1169-70, Saito, Giulichi et al Shizen Kagaku (1995), 47, 41-9 og Schulz, Manfred Z. Chem (1981), 21(11), 404-5. Metode (iii) er beskrevet i grove trekk av Nowotnik et al [Tetrahedron, 50(29), s. 8617-8632 (1994)]. Alfa-kloroksimer kan oppnås ved oksimering av det tilsvarende alfa-klorketonet eller -aldehydet som er kommersielt tilgjengelig. Alfa-bromketoner er kommersielt tilgjengelige.
Hvis J er -NH2, kan man eventuelt først monobeskytte triaminet av formel IV slik at J-gruppens primære amin er beskyttet. Diamindioksimet fremstilles så ifølge metode (i), (ii) eller (iii) ovenfor, og deretter fjernes den beskyttende gruppen. Egnede beskyttende grupper er kjent på området, og innbefatter BOC (d.v.s. terf-butoksykarbonyl) eller Fmoc som beskrivet ovenfor.
Forbindelser av formel IV kan passende fremstilles fra HC(CH2CH20Ac)3ved hydrolyse av et eller flere av acetatesterne til primær(e) alkohol(er) og omdannelse til en avspaltbar gruppe, slik som en metansulfonatester med metansulfonylklorid og pyridin. Denne avspaltbare gruppen kan så erstattes med en passende nukleofil gruppe som kan omdannes til den ønskede funksjonaliteten. For å danne en karboksylsyre (d.v.s. J = -CO2H) vil et cyanidanion bli brukt. Syrehydrolyse av cyanidet vil danne den ønskede karboksylsyren. For å danne et amin vil en azidnukleofil bli brukt for å danne et alkylazid. Hydrogenering av alkylazidet ville danne et amin. For å danne en tiol (d.v.s. J = -SH), ville erstatningen av den avspaltede gruppen med tioeddiksyreanion gi et tioacetat som ved syrehydrolyse ville gi thiolen.
Et annet aspekt av foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en forbindelse av formel V:
hvor R 7 og R R , uavhengig av hverandre, er H eller P f"1 , eller R 7 og R R til sammen danner P<G>,
eller et salt derav.
P<G>er en beskyttende gruppe som definert ovenfor. Forbindelsene av formel V er nyttige forløpere for en rekke bifunksjonelle chelatdannere i henhold til foreliggende oppfinnelse. En foretrukket forbindelse av formel V er
HC(CH2CH2NH2)2(CH2CH2NR<7>R<8>), d.v.s. et monobeskyttet triamin som beskrevet ovenfor. Det er mest foretrukket at alle R<7>og R<8->gruppene er H, det vil si forbindelsen HC(CH2CH2NH2)3, eller et syresalt derav, er en foretrukket forbindelse i henhold til foreliggende oppfinnelse.
Figur 1 viser den kjemiske strukturen av forbindelsene 1 til 6. Figur 2 viser den kjemiske strukturen av forbindelse 5 i sin helhet. Figur 3 viser reaksjonsskjemaet for azidsyntesen av l,l,l-?m(2-aminoetyl)amin fra eksempel 1. Figur 4 viser reaksjonsskjemaet for den alternative syntesen av l,l,l-frø(2-aminoetyl)amin fra eksempel 2.
Oppfinnelsen illustreres i mer detalj ved de ikke-begrensende eksemplene nedenfor. Eksempel 1 beskriver fremstilling av den nye forbindelsen l,l,l-frø(2-aminoetyl)metan. Eksempel 2 fremlegger en alternativ syntese av l,l,l-7rå(2-aminoetyl)metan, som unngår bruken av potensielt farlige azidmellomprodukter. Eksempel 3 beskriver fremstilling av forskjellige klornitrosoalkanforløpere. Eksempel 4 beskriver fremstilling av en foretrukket aminsubstituert bifunksjonell diamindioksim i henhold til foreliggende oppfinnelse (forbindelse 1). Eksempel 5 beskriver fremstilling av et benzamidkonjugat (forbindelse 2) av forbindelse 1. Eksempel 6 viser hvordan et bindeledd kan føres inn som effektivt omdanner den terminale aminfunksjonen av den bifunksjonelle chelatdanneren til en terminal karboksylfunksjon. Eksempel 7 beskriver fastfasesyntese av et trombesøkende peptid. Eksempel 8 tilveiebringer en syntese av forbindelse 5, d.v.s. et konjugat av forbindelse 1 med et målsøkende peptid. Eksempel 9 beskriver fremstilling av forbindelse 7 og 8, som er diamindioksimanaloger omfattende ringstrukturer.
I eksempel 10 sammenliknes<99m>Tc-merkingen av forbindelse 2 med den samme merkingen av den tidligere kjente analoge aza-chelatdanneren (forbindelse 3), og det påvises at chelatdannerne i henhold til foreliggende oppfinnelse gir mye mer effektiv og rask merking under mildere forhold, nærmere bestemt romtemperatur og mindre alkalisk pH. Den kjente chelatdanneren krever pH 10 og minst 120 minutter ved romtemperatur for å gi RCP på over 80 %, mens forbindelse 3 gir merking med over 95 % RCP innen 15 minutter. Eksempel 11 viser at forbindelse 5 gir merking med<99m>Tc til et preparat med høy radiokjemisk renhet. Eksempel 12 viser at<99m>Tc-merket forbindelse 5 viser et opptak i koagulert blod in vitro som kan sammenliknes med opptaket av den kjente forbindelsen<99m>Tc-forbindelse 6, og at de biologisk målsøkende egenskapene til peptidet altså opprettholdes når det bindes til de diamindioksim chelatdannerne i henhold til foreliggende oppfinnelse. Eksempel 13 viser radioaktiv merking med<99m>Tc under milde forhold med forbindelse 9, som er et konjugat av forbindelse 1 og et syklisk peptid som har forholdsvis sensitive disulfidbindinger.
Eksempel 1: Fremstilling av 1, 1, 1 - fm( 2- aminoetyl) metan.
Trinn Ka) : 3-( metoksvkarbonvlmetvlen) glutarsvredimetylester. Karbometoksymetylentrifenylfosforan (167 g, 0,5 mol) i toluen (600 ml) ble behandlet med dimetyl-3-oksoglutarat (87 g, 0,5 mol) og reaksjonsblandingen varmet til 100°C på et oljebad ved 120 °C under nitrogenatmosfære i 36h. Reaksjonsblandingen ble så konsentrert in vacuo og det oljeaktige residiet ble triturert med 40/60 petroleter/dietyleter 1:1, 600 ml. Trifenylfosfinoksid ble felt ut og supernatantvæsken ble dekanter/filtrert fra. Residiet på inndampning in vacuo ble Kugelrohr-destillert under høyvakum kokepunkt (ovnstemperatur 180-200 °C ved 0,2 torr) og gav
3-(metoksykarbonylmetylen)glutarsyredimetylester utbytte(89,08 g, 53 %). NMR 'HCCDCU): 5 3,31 (2H, s, CH2), 3,7 (9H, s, 3xOCH3), 3,87 (2H, s, CH2), 5,79 (1H, s, =CH,) ppm.
NMR<I3>C(CDC13), 8 36,56,CH3, 48,7, 2xCH3, 52,09 og 52,5 (2xCH2), 122,3 og 146,16 C=CH, 165,9, 170,0 og 170,5 3xCOOppm.
Trinn Kb) : Hydrogenering av 3-( metoksykarbonylmetyleii) glutarsyredimetylester. 3-(metoksykarbonylmetylen)glutarsyredimetylester (89 g, 267 mmol) i metanol (200 ml) ble ristet med (10 % palladium på trekull: 50 % vann) (9 g) under en atmosfære av hydrogengass (3,5 bar) i (30 timer). Løsningen ble filtrert gjennom kiselgur og konsentrert i våkum til 3-(metoksykarbonylmetyl)glutarsyredimetylester som en olje, utbytte (84,9 g, 94 %).
NMR ^(CDCU), 8 2,48 (6H, d, J=8Hz, 3xCH2), 2,78 (1H, sekstett, J=8Hz CH,) 3,7 (9H, s, 3xCH3).
NMR<I3>C(CDC13), 8 28,6, CH, 37,50, 3xCH3, 51,6, 3xCH2, 172,28, 3xCOO.
Trinn Kc) : Reduksjon og forestring av trimetylester til triacetat.
Under en atmosfære av nitrogen ble litiumaluminiumhydrid (20 g, 588 mmol) i tetrahydrofuran (400 ml) behandlet forsiktig medfrø(metyloksykarbonylmetyl)metan (40 g, 212 mmol) i tetrahydrofuran (200 ml) i en 3-halset 2 liters rundbunnet kolbe i 1 time. En sterkt eksoterm reaksjon inntraff som brakte løsningsmidlet i sterk refluks. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 90 °C på oljebad ved refluks i 3 dager. Reaksjonen ble avbrutt ved forsiktig dråpevis tilsetning av eddiksyre (100 ml) inntil utviklingen av hydrogengass stoppet. Den omrørte reaksjonsblandingen ble forsiktig behandlet med en løsning av eddiksyreanhydrid (500 ml) med en slik hastighetsgrad at det ga en mild refluks. Kolben ble utstyrt for destillasjon og omrørt og temperaturen ble hevet til 90 °C (oljebadtemperaturen) for å destillere ut tetrahydrofuranet. En ny porsjon eddiksyreanhydrid (300 ml)ble tilsatt, reaksjonsblandingen ble tilbakeført til reflukskonfigurasjon og omrørt og satt på oljebad ved 140 °C i 5 timer. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt og filtrert. Aluminiumoksid bunnfallet ble vasket med etylacetat og de sammenslåtte filtratene konsentrert på en rotasjonsevaporator ved en vannbadtemperatur på 50 °C i vakuum (5 mmHg) til en olje. Oljen ble tatt opp i etylacetat (500 ml) og vasket med mettet vandig kaliumkarbonatløsning. Etylacetatløsningen ble separert, tørket over natriumsulfat og konsentrert i vakuum til en olje. Oljen ble Kugelrohr-destillert i høyvakuum tilfrå(2-acetoksyetyl)metan (45,3 g, 95,9 %) som en olje. Kokepunkt 220 °C ved 0,1 mmHg.
NMR ^(CDCls), 8 1,66(7H, m, 3xCH2;CH), 2,08(1H, s, 3xCH3), 4,1(6H, t, 3xCH20).
NMR<13>C(CDC13), 8 20,9, CH3, 29,34, CH, 32,17, CH2, 62,15, CH20, 171, CO.
Trinn l( d) : Fjerning av acetatgrupper fra triacetatet.
7rø(2-acetoksyetyl)metan (45,3 g, 165 mM) i metanol (200 ml) og 880-ammoniakk (100 ml) ble varmet på et oljebad ved 80 °C i 2 dager. Reaksjonsblandingen ble behandlet med en ny porsjon 880-ammoniakk (50 ml) og varmet på oljebad ved 80 °C i 24 timer. Det ble tilsatt en ny porsjon 880-ammoniakk (50 ml) og reaksjonsblandingen ble varmet på
oljebad ved 80 °C i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert i vakuum, for å fjerne alle løsningsmidlene, til en olje. Denne ble tatt opp i 880-ammoniakk (150 ml) og varmet ved 80 °C i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble så konsentrert i vakuum, for å fjerne alle løsningsmidlene, til en olje. Kugelrohr-destillasjon ga acetamid, kokepunkt 170-180 0,2 mm. Blærene som inneholdt acetamidet ble vasket rene og destillasjonen fortsatte. 7m(2-hydroksyetyl)metan (22,53 g, 92 %) destillerte ved kokepunkt 220 °C 0,2 mm.
NMR ^(CDCls), 8 1,45(6H, q, 3xCH2), 2,2(1H, kvintett, CH), 3,7(6H, t 3xCH2OH), 5,5(3H, brs, 3xOH).
NMR<I3>C(CDC13), 8 22,13, CH, 33,95, 3xCH2, 57,8, 3xCH2OH.
Trinn l( e) : Omdanning av triol tilfrøfmetansulfonat).
Til en omrørt isavkjølt løsning av7m(2-hydroksyetyl)metan (10 g, 0,0676 mol) i diklormetan (50 ml) ble det langsomt dryppet en løsning av metansulfonylklorid (40 g, 0,349 mol) i diklormetan (50 ml) under nitrogen med en slik hastighetsgrad at temperaturen ikke steg over 15 °C. Pyridin (21,4 g, 0,27 mol, 4 ekv.) løst i diklormetan (50 ml) ble så tilsatt dråpevis med en slik hastighetgrad at temperaturen ikke steg over 15°C, eksoterm reaksjon. Reaksjonsblandingen ble satt til omrøring ved romtemperatur i 24 timer og deretter behandlet med 5N saltsyreløsning (80 ml) og lagene ble separert. Vannskiktet ble ekstrahert med mer diklormetan (50 ml) og de organiske ekstraktene slått sammen, tørket over natriumsulfat, filtrert og konsentrert i vakuum til tris[ 2-(metylsulfonyloksy)etyl]metan forurenset med overskudd av metansulfonylklorid. Det teoretiske utbyttet var 25,8 g.
NMR 'HCCDCU), 5 4,3 (6H, t, 2xCH2), 3,0 (9H, s, 3xCH3), 2 (1H, sekstett, CH), 1,85 (6H, q, 3xCH2).
Trinn l( f) : Fremstilling av l, l, l- fm( 2- azidoetyr) metan.
En omrørt løsning avfrø[2-(metylsulfonyloksy)etyl]metan [fra trinn l(e), forurenset med overskudd av metylsulfonylklorid] (25,8 g, 67 mmol, teoretisk) i tørr DMF (250ml) under nitrogen ble behandlet porsjonsvis med natriumazid (30,7 g, 0,47 mol) i 15 minutter. En eksoterm reaksjon ble observert og reaksjonsblandingen ble avkjølt på isbad. Etter 30 minutter ble reaksjonsblandingen varmt på et oljebad ved 50 °C i 24 timer. Reaksjonsblandingen fikk en brun farge. Reaksjonsblandingen ble avkjølt, behandlet med fortynnet kaliumkarbonatløsning (200 ml) og ekstrahert tre ganger med 40/60 petroleter/dietyleter 10:1 (3x150 ml). De organiske ekstraktene ble vasket med vann (2x150 ml), tørket over natriumsulfat og filtrert. Etanol (200 ml) ble tilsatt til petroleter/eterløsningen for å holde triazidet i løsning og volumet ble redusert i vakuum til ikke mindre enn 200 ml. Etanol (200 ml) ble tilsatt og rekonsentrert i vakuum for å fjerne de siste restene av petroleter med ikke mindre enn 200 ml etanolløsning som resultat. Etanolløsningen av triazidet ble brukt direkte i trinn l(g).
FORSIKTIG: IKKE FJERN ALT LØSNINGSMIDLET SIDEN AZIDET ER POTENSIELT EKSPLOSIVT OG MÅ HOLDES I FORTYNNET LØSNING TIL ENHVER TID.
Mindre enn 0,2 ml av løsningen ble inndampet i vakuum for å fjerne etanolen og en NMR ble kjørt på denne lille prøven: NMR ^(CDCU), 5 3,35 (6H, t, 3xCH2), 1,8 (1H, septett, CH,), 1,6 (6H, q, 3xCH2).
Trinn l( g) : Fremstilling av 1J J- fr* s( 2- aminoetyl) metan.
rm(2-azidoetyl)metan (15,06 g, 0,0676 mol), (går ut fra 100 % utbytte fra den foregående reaksjonen) i etanol (200 ml) ble behandlet med 10 % palladium på trekull (2 g, 50 % vann) og hydrogenert i 12 timer. Reaksjonskaret ble evakuert annenhver time for å fjerne nitrogen som ble utviklet under reaksjonen og etterfylle med hydrogen. Det ble tatt en prøve til NMR-analyse for å bekrefte fullstendig omdanning av triazid til triamin. Advarsel: uredusert azid kan eksplodere ved destillasjon. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom en celittpute for å fjerne katalysatoren og konsentrert i vakuum til tris( 2-aminoetyl)metan som en olje. Denne ble renset videre ved Kugelrohr-destillasjon, kokepunkt 180-200 ved 0,4 mmHg til en fargeløs olje (8,1 g, 82,7 % totalt utbytte av triolen).
NMR ^(CDCla), 2,72 (6H, t, 3xCH2N), 1,41 (H, septett, CH), 1,39 (6H, q, 3xCH2). NMR<I3>C(CDC13), 5 39,8 (CH2NH2), 38,2 (CH2.), 31,0 (CH).
Eksempel 2: Alternativ Fremstilling av l, l, l- frå( 2- aminoetyl) metan.
Trinn 2( a) : Amidering av trimetylester med p- metoksybenzylamin. rrø(metyloksykarbonylmetyl)metan[2 g, 8,4 mmol, fremstilt som i trinn l(b) ovenfor] ble løst i/>-metoksybenzylamin (25 g, 178,6 mmol). Apparaturen ble satt opp for destillasjon og varmt til 120 °C i 24 timer under nitrogenstrøm. Fremgangen av reaksjonen ble overvåket ved å registrere den oppsamlede metanolmengden. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og 30 ml etylacetat ble tilsatt før det utfelte triamidproduktet ble omrørt i 30 minutter. Triamidet ble isolert ved filtrering og filterkaken ble vasket flere ganger med tilstrekkelige mengder etylacetat til å fjerne overskudd av/>-metoksybenzylamin. Etter tørking ble 4,6 g, 100 %, av et hvitt pulver oppnådd. Det meget tungt løselige produktet ble brukt direkte i det neste trinnet uten videre rensing eller karakterisering.
Trinn 2( b) : Fremstilling av 1J J- fm[ 2- ot- metoksybenzylamino) etyllmetan.
Til en 1000 ml 3-halset rundbunnet kolbe kjølt på et isvann bad tilsettes triamidet fra trinn 2(a) (10 g, 17,89 mmol) forsiktig til 250 ml IM boranløsning (3,5 g, 244,3 mmol). Etter fullstendig tilsetning fjernes isvannbadet og reaksjonsblandingen oppvarmes langsomt til 60 °C. Reaksjonsblandingen omrøres ved 60 °C i 20 timer. En prøve av reaksjonsblandingen (1 ml) ble tatt ut og blandet med 0,5 ml 5N HC1 og satt til side i 30 min. Til prøven ble 0,5 ml 50 NaOH tilsatt, etterfulgt av 2 ml vann og løsningen ble omrørt til alt det hvite bunnfallet løstes. Løsningen ble ekstrahert med eter (5 ml) og inndampet. Residiet ble løst i acetonitril ved en konsentrasjon på 1 mg/ml og analysert med MS. Hvis mono- og diamid (M+H/z = 520 og 534) blir observert i MS-spekteret er reaksjonen ikke fullstendig. For å fullføre reaksjonen tilsettes ytterligere 100 ml IM boran THF løsning og reaksjonsblandingen omrøres i 6 timer til ved 60 °C og en ny prøve tas etter samme fremgangsmåte som ovenfor. Videre tilsetning av IM boran THF løsningen fortsettes som nødvendig til det er en fullstendig omdanning til triaminet.
Reaksjonsblandingen avkjøles til romtemperatur og 5N HC1 tilsettes langsomt [FORSIKTIG: voldsom skumdannelse oppstår!]. HC1 tilsettes inntil det ikke blir observert mer gassutvikling. Blandingen omrøres i 30 minutter og blir deretter inndampet. Kaken suspenderes i vandig NaOH-løsning (20-40 %, 1:2 vekt/volum) og omrøres i 30 minutter. Blandingen blir så fortynnet med vann (3 ganger volumet). Blandingen ble så ekstrahert med dietyleter (2 x 150 ml) [FORSIKTIG: ikke bruk halogenerte løsningsmidler]. De sammenslåtte organiske fasene ble så vasket med vann (lx 200 ml), fysiologisk saltvann (150 ml) og tørket over magnesiumsulfat. Utbytte etter inndamping: 7,6 g, 84 % som olje.
NMR ^(CDCU), 6: 1,45, (6H, m, 3xCH2,1,54, (1H, septett, CH), 2,60 (6H, t, 3xCH2N), 3,68 (6H, s, ArCH2), 3,78 (9H, s, 3xCH30), 6,94(6H, d, 6xAr). 7,20(6H, d, 6xAr).
NMR I3C(CDC13), 8: 32,17,CH, 34,44, CH2, 47,00, CH2, 53,56, ArCH2, 55,25, CH30, 113,78, Ar, 129,29, Ar, 132,61, Ar, 158,60, Ar,
Trinn 2( c) : Fremstilling av l, l, l- frts( 2- aminoetyl) metan.
l,l,l-7rå[2-(/?-metoksybenzylamino)etyl]metan (20,0 gram, 0,036 mol) ble løst i metanol (100 ml) og Pd(OH)2(5,0 gram) ble tilsatt. Blandingen ble hydrogenert (3 bar, 100 °C, i en autoklav) og omrørt i 5 timer. Pd(OH)2ble tilsatt i to porsjoner til (2 x 5gram) etter henholdsvis 10 og 15 timer.
Reaksjonsblandingen ble filtrert og filtratet ble vasket med metanol. Den sammenslåtte organiske fasen ble inndampet og residiet ble destillert under vakuum (1 x 10 "<2>, 110 °C) til 2,60 gram (50 %) l,l,l-frw(2-aminoetyl)metan identisk med produktet i eksempel 1 ovenfor.
Eksempel 3: Fremstilling av 3- klor- 3- metyl- 2- nitrosobutan.
En blanding av 2-metylbut-2-en (147 ml, 1,4 mol) og isoamylnitritt (156 ml, 1,16 mol) ble nedkjølt til -30 °C i et bad av Cardice-tørris og metanol og kraftig omrørt med en luftrører montert over blandingen og behandlet dråpevis med konsentrert saltsyre (140 ml, 1,68 mol) med en slik hastighetsgrad at temperaturen ble holdt under -20 °C. Dette tar omtrent 1 time, siden reaksjonen er merkbart eksoterm og man må være forsiktig for å hindre overoppheting. Etanol (100 ml) ble tilsatt for å redusere viskositeten av slammet som hadde dannet seg mot slutten av tilsetningen og reaksjonsblandingen ble omrørt ved -20 til -10 °C i ytterligere 2 timer for å gjøre reaksjonen fullstendig. Bunnfallet ble samlet ved filtrering under vakuum og vasket med 4x30 ml kald (-20 °C) etanol og 100 ml iskaldt vann og tørket i vakuum til 3-klor-3-metyl-2-nitrosobutan som et hvitt fast produkt. Etanolfiltratet og skyllevæsken ble slått sammen og fortynnet med vann (200 ml), avkjølt og satt til side i 1 time ved -10°C da en ny mengde av 3-klor-3-metyl-2-nitrosobutan ble utkrystallisert. Bunnfallet ble samlet ved filtrering og vasket med et minimum av vann og tørket i vakuum til et totalt utbytte av 3-klor-3-metyl-2-nitrosobutan (115 g, 0,85 mol,
73 %), >98 % rent ved NMR.
NMR ^(CDCU), som isomerblanding (isomer 1,90%) 1,5 d, (2H, CH3), 1,65 d, (4H,
2 xCH3), 5,85,q, og 5,95,q, til sammen 1H. (isomer 2, 10 %), 1,76 s, (6H, 2x CH3), 2,07(3H, CH3). l-klor-l-(l-nitrosoetyl)syklopentan ble fremstilt på tilsvarende måte av etylidensyklopentan (utbytte 55 %) [J.Org.Chem., 36(8) s.l 169-70]. l-klor-l-(l-nitrosoetyl)sykloheksan ble fremstilt på tilsvarende måte av etylidensykloheksan (utbytte 63 %) [J.Org.Chem., 36(8) s.l 169-70]. 5H (CDC13, 270 MHz), 1,52 (3H, d JHH7 Hz, CH3), 1,48-2,20 (10H, m, CH2x 5), 5,96 (1H, q, JHH7 Hz, CH). l-klor-l-metyl-2-nitrososykloheksan ble fremstilt på tilsvarende måte av 1-metyl-1-sykloheksen (utbytte 57 %) [Ind J. Chem Sect B (1978) 16B(10) 917-20, Z. Chem.
(1981), 21(11) 404-5, J. Pract. Chem. (1978) 320(3) 433-51].
5H(CDC13, 270 MHz), 1,41-2,28 (11H, m, CH3, CH2x 4), 5,72-5,79 (1H, m, CH).
Eksempel 4: Fremstilling av Åfs[ N-( l, l- dimetyl- 2- N- hydroksyiminopropyl)- 2-aminoetyll-( 2- aminoetyl) metan ( forbindelse 1).
Til en løsning avfrø(2-aminoetyl)metan (4,047 g, 27,9 mmol) i tørr etanol (30 ml) ble vannfritt kaliumkarbonat (7,7 g, 55,8 mmol, 2 ekv.) tilsatt ved romtemperatur under kraftig omrøring under nitrogenatmosfære. En løsning av 3-klor-3-metyl-2-nitrosobutan (7,56g, 55,8 mol, 2 ekv.) ble løst i tørr etanol (100 ml) og 75 ml av denne løsningen ble dryppet langsomt ned i reaksjonsblandingen. Reaksjonen ble etterfulgt av TLC på silika [plater kjørt i diklormetan, metanol, konsentrert ammoniakk (sp.v. 0,88), 100/30/5 og TLC-platen ble fremkalt ved spraying med ninhydrin og vanning]. De mono-, di- og trialkylerte produktene ble observert med økende RF i denne rekkefølgen. Det ble kjørt analytisk HPLC med RPR-kolonne i omvendt fase med gradient på 7,5-75 % acetonitril i 3 % vandig ammoniakk. Reaksjonsblandingen ble konsentrert i vakuum for å fjerne etanolen og resuspendert i vann (110 ml). Det vandige slammet ble ekstrahert med eter (100 ml) for å fjerne noe av den trialkylerte forbindelsen og lipofile forurensninger og etterlater det monoalkylerte og det ønskede dialkylerte produktet i vannskiktet. Den vandige løsningen ble bufret med ammoniumacetat (2 ekv., 4,3 g, 55,8 mmol) for å sikre god kromatografi. Den vandige løsningen ble lagret ved 4 °C over natten før den ble renset ved automatisk preparativ HPLC.
Utbytte (2,2g, 6,4 mmol, 23 %).
Massespektrometri, positiv ion, 10 V kjeglespenning. Funnet: 344, beregnet M+H= 344. NMR 'HCCDCla), 8 1,24(6H, s, 2xCH3), 1,3(6H, s, 2xCH3), 1,25-1,75(7H, m, 3xCH2CH), (3H, s, 2xCH2), 2,58 (4H, m, CH2N), 2,88(2H, t CH2N2), 5,0 (6H, s, NH2, 2xNH, 2xOH).
NMR<]>H ((CD3)2SO) 51,1 4xCH, 1,29, 3xCH2, 2,1 (4H, t, 2xCH2),
NMR<I3>C((CD3)2SO), 8 9,0 (4xCH3), 25,8 (2xCH3), 31,0 2xCH2, 34,6 CH2,56,8 2xCH2N, 160,3, C=N.
HPLC-forhold: væskehastighet 8 ml/min med 25 mm PRP-kolonne
A=3 % ammoniakkløsning (sp.vekt = 0,88) /vann.
B=acetonitril
Injeksjon 3 ml vandig løsning pr. kjøring, uttak i et tidsvindu på 12,5-13,5 min.
Eksempel 5: Fremstilling av forbindelse 2 - benzamidkoniugatet av forbindelse 1. Forbindelse 1 (0,5 g, 1,45 mmol) i tørr acetonitril (50 ml) og trietylamin (150 mg, 1,45 mmol) ble nedkjølt på isbad til 0 °C under nitrogenatmosføre. Benzosyreanhydrid (330 mg, 1,45 mmol) ble tilsatt den omrørte reaksjonsblandingen og varmet til romtemperatur og satt til omrøring over natten. Acetonitrilen ble fjernet i vakuum og residiet ble løst i (50 ml) diklormetan, vasket med vandig kaliumkarbonat (2 x 50 ml), separert og tørket over natriumsulfat. Den vandige kaliumkarbonatløsningen ble ekstrahert med diklormetan (2 x 50 ml), tørket over natriumsulfat, og de sammen slåtte diklormetanekstraktene konsentrert i vakuum til en gummiaktig masse. Analytisk HPLC tydet på at produktet ikke var tilstrekkelig rent og materialet ble derfor renset ved automatisert preparativ HPLC, med forbindelse 2 som resultat. Produktet kom ut som et enkelt bånd både med TLC og analytisk HPLC.
HPLC-betingelser: væskehastighet på 8 ml/min med 150 mm x 25 mm PRP-kolonne. Prøve injisert i 2 ml 30 % etanolvann pr. kjøring.
A= 3 % ammoniakkløsning (sp.vekt = 0,88) /vann.
B= acetonitril
Det ønskede produktet eluerte ved 15,25-16,5 minutter. Produktløsningen ble inndampet i vakuum til (304 mg, 0,68 mmol, 47 %) av et fargeløst, glassaktig skum, smeltepunkt 55 °C.
NMR ^(CDCla) 1,26 (12H, s, 4xCH3), 1,43 (2H, m, CH2), 1,57 (4H, m, CH2), 1,75 (1H, m, CH), 1,823 (6H, s, 2xCH3), 2,58 (4H, m, 2xCH2N), 3,56 (2H, m, CH2NHCO), 6,95 (1H, m, NHCO), 7,42 (3H, m, 3xArH) 7,79 (2H, d, ArH).
NMR<I3>C(CDC13) 10,09, 25,7, 26,1, 28,5, 32,8, 33,3, 37,93, 57,57, 127,0, 128,4, 131,4, 158,98, 168,15.
M/S C24H4iN503M+H = 448. Funnet 448.
RF 0,8 i 100:30:5 / CH2Cl2:MeOH: 880-ammoniakk, visualisert med ninhydrin.
Eksempel 6: Fremstilling av Å* s[( 14- dimetyl- 2- N- hydroksyiminpropyl) 2- aminoetyll-( 2-( glutarylamid) etyl) metan [ forbindelse 4, glutarylamidderivatet av forbindelse 11. Forbindelse 1 (0,5 g, 1,45 mmol) i tørr acetonitril (50 ml) og trietylamin (150 mg, 1,45 mmol) ble avkjølt på isbad til 0 °C under nitrogenatmosfære. Glutarsyreanhydrid (165 mg, 1,45 mmol) ble tilsatt den omrørte reaksjonsblandingen og varmet til romtemperatur og satt til omrøring over natten. Bunnfallet som dannet seg over natten ble samlet ved filtrering og tørket i vakuum til en uren prøve av tittelforbindelsen (267 mg, 0,583 mmol, 40 %). Filtratet ble konsentrert i vakuum til et fargeløst glass som sammen med bunnfallet som var samlet ble løst i 5% ammoniakk (sp.v. 0,880), vann (50 ml) og renset ved automatisert preparativ HPLC.
HPLC-betingelser: væskehastighet 8 ml/min, med 150 mm x 25 mm PRP-kolonne. Prøven injisert i 2 ml løsning pr. kjøring.
A = 3% ammoniakkløsning (sp.vekt = 0,88) /vann.
B = acetonitril.
Det ønskede produktet eluerte ved 15,25-16,5 minutter. Produktløsningen ble inndampet i vakuum til (304 mg, 0,68 mmol, 47 %) av et fargeløst, glassaktig skum, smeltepunkt 54,8 °C. Produktet kom ut som et enkelt bånd både i TLC og analytisk HPLC. NMR ]H(DMSO), 0,7(12H, s, 4xCH3), 0,85(4H, m, 2xCH2), 1,0(1H, m, CH), 1,3(6H, s, 2xCH3), 1,3(4H, m, 2xCH2), 1,6(2H, m, CH2), 1,75(6, m, 3xCH2), 2,6(2, m,, 2xOH) 3,2(2H, t, NH) 7,3(1H, t, NH).
NMR<I3>C(CD3SO) 8,97, 20,51,20,91,25,09, 25,60, 31,06, 33,41, 33,86, 56,89, 66,99, 160,07, 1712,34,174,35, 174,56 M/S C22H43N505M+H = 457. Funnet 457,6.
Eksempel 7: Fremstilling av det beskyttede peptidet Ac- NOEOVSP( 3- DYTLLKG. Det beskyttede peptidet Ac-Asn(Trt)-Gln(Trt)-Glu(OtBu)-Gln(Trt)-Val-Ser(tBu)-Pro-Tyr(3I)-Thr(tBu)-Leu-Leu-Lys(Boc)-Gly-OH ble satt sammen på et 2-klortrityl fastfaseresin ved å forankre Fmoc-Gly- til resinet og deretter påfølgende avbeskyttelses/koplings sykler med de passende beskyttede aminosyrene og bindingsreagensene DCCI og HOBt. Det terminale asparaginet acetyleres, spaltes fra resinet med 0,5 % TFA og peptidet ble brukt uten videre rensing.
Eksempel 8: Fremstilling av forbindelse 5 - et peptidkonjugat av forbindelse 1. Det beskyttede Ac-NQEQVSPY(3I)TLLKG-peptidet fra eksempel 7 ble spaltet fra fastfaseresinet og deretter bundet til forbindelse 1 i løsning ved hjelp av benzotriazol-1-yl-oksytris-pyrrolidinofosfoniumheksafluorofosfat og 1-hydroksybenzotriazol som sammenbindingsmidler. Forbindelse 5 ble oppnådd ved avbeskyttelse i reagens K (reagens K er 82,5 % TFA, 5 % fenol, 5 % behandlet vann, 5 % tioanisol, 2,5 % etanditiol). Råpeptidet ble først renset ved RP-HPLC med TFA etterfulgt av en andre rensing og saltutveksling med eddiksyre, frysetørking, filtrering med 0,22 \ i filter og til slutt nok en frysetørking som ga forbindelse 5 som produkt.
Det kjente azadiamindioksimchelatkonjugatet (forbindelse 6 - se figur 1) av det samme peptidet, altså Ac-NQEQVSPY(3I)TLLKG, ble fremstilt på samme måte for sammenlikningens skyld.
Eksempel 9: Fremstilling av l-(l-{3-(2-aminoetyl)-5-|l-(l-hydroksyliminoetyl) sykloheksylaminolpentylamino} sykloheksyl) etanondioksim [ forbindelse 71.
Til en løsning av l,l,l-frø(2-aminoetyl)metan (0,96 g, 6,6 mmol) i tørr etanol (7,5 ml) ble det tilsatt kaliumkarbonat (vannfritt) (1,8 g, 13 mmol) og trietylamin (1,33 g, 13 mmol) ved romtemperatur med kraftig omrøring under nitrogenatmosfære. En løsning av l-klor-l-(l-nitrosoetyl)sykloheksan (2,3 g, 13 mmol) i diklormetan (30 ml) ble tilsatt dråpevis i løpet av 1 time. Blandingen ble deretter satt til omrøring i romtemperatur i 18 timer. Løsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk. Vann (30 ml) og eter (25 ml) ble tilsatt til reaksjons residiet. Vannfasen og den organiske fasen ble så separert.
HPLC:
ISOKRATISK: 90 % B (MeOH) 10 % (NH33 %). Eterekstrakt: HPLC viste to betydelige bånd-første bånd: dioksim, andre bånd: trioksim. Dioksim: (0,55 g, 20 %), FAB m/z 424 (M+H), HRMS: Funnet: 424,3642, beregnet: 424,3652 (C23H45N5O2). NMR: 8H (CDC13, 270 MHz), 1,34-1,72 (33H, m, CH, CH2x 13, CH3x 2), 2,18-2,33 (4H, m, NCH2x 2), 2,56-2,69 (2H, m, NCH2). Forbindelsen 1 -(1 - {3 -(2-aminoetyl)-5 - [ 1 -(1 - hydroksyiminoetyl)sykloheksylamino]pentylamino}sykloheksyl)etanondioksim [forbindelse 8] ble fremstilt på en analog måte:
FAB m/z 396 (M+H), HRMS: Funnet: 396,3322, beregnet: 396,3339 (C21H42N5O3).
Eksempel 10: Komparativ radioaktiv merking av forbindelse 2 med<99m>Tc sammenliknet med den tilsvarende aza- analogen ( forbindelse 3, kjent).
En frysetørket formulering inneholdende:
23 ug forbindelse 2 (benzamidderivatet av forbindelse 1 - se eksempel 3),
36 jag tinnklorid-dihydrat,
90 ug trinatriummedronat,
4,0 mg natriumacetat,
forseglet under nitrogengass (USP/NF) i et 10 ml glass ble fremstilt.
Denne ble rekonstituert med9<9m>Tc-pertechnetat i fysiologisk saltvann fra en<99m>Tc-generator ved romtemperatur og RCP ble undersøkt ved HPLC og ITLC (instant thin layer chromatography). Resultatene ble sammenliknet med resultatene for forbindelse 3 og er vist i tabell 1 og 2:
Eksempel 11: """ Tc merking av forbindelse 5, et peptidkonjugat av forbindelse 1. En frysetørket formulering inneholdende:
50 jag PABA (parø-aminobenzosyre),
30ug SnCl2,
90 ug MDP (metylendifosfonsyre),
l,32mgNaHC03,
98ngNa2C03,
4 mg NaOAc,
ble forseglet under nitrogengass i et 10 ml glass. Glasset ble tatt ut av fryselageret og hensatt i romtemperatur i 15 minutter, og ble så rekonstituert med 100 \ il av en løsning inneholdende forbindelse 5, d.v.s. peptid-/chelatdannerkonjugatet
(2 mg i 2 ml vann) og X ml<99m>Tc-pertechnetat i fysiologisk saltvann, med en radioaktiv konsentrasjon på 0,5 GBq/ml, fra en Amertec II<99m>Tc-generator ved romtemperatur. Aktiviteten ble målt ved hjelp av et ionekammer. RCP ble målt med ITLC og HPLC. Resultatene er vist i tabell 3 for forskjellige verdier av X:
Eksempel 12: Opptak av 99mTc- merket forbindelse 5 i koagulert blod in vitro sammenliknet med 99mTc- merket forbindelse 6 ( kjent forbindelse).
Den<99m>Tc radioaktive merkingen ble utført som i eksempel 10.
Plasma (5 ml pr. testartikkel) og trombin (100 enheter ml"<1>) ble tatt ut av lagring (-20 °C) og tint i romtemperatur. Plasmaet ble observert før bruk for å sikre at det ikke var tegn til koagulering eller nedbryting av prøven.
10 jj.1<99mT>c-forbindelse 5 eller99mTc-forbindelse 6 ble tilsatt til et 5 ml glass med plasma (rotte, kanin, hund og menneske). 10 \ il99mTc-DTPA ble tilsatt et andre glass
inneholdende 5 ml plasma i parallell som en negativ kontroll. Det ble laget koagulerende inkuberingsblandinger av 800 \ il kalsium-tris-buffer og 40 \ i\ bovin trombinløsning i fire glass (kalsium/trombinrik koaguleringsbuffer). Ikke-koagulerende inkubater, blandingene for bakgrunnsbindingstesten, ble laget ved å tilsette 800 \ xl tris-bufret saltløsning til 40 \ xl AnalaR-vann (kalsium/trombinfattig ikke-koagulerende buffer).
400^1 humant plasma tilsatt testartikkel (<99m>Tc-forbindelse 5 eller99mTc-forbindelse 6), eller radioaktivt merket negativ kontroll (<99m>Tc-DTPA) ble tilsatt i fire testrunder hver til både den kalsium/trombinrike og den kalsium/trombinfattige inkubasjonsblandingen. En
enkelt defibrineringsstav ble satt ned i hvert glass for å stimulere koaguleringen av plasmaet. Prøveglassene ble inkubert ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonen ble avbrutt ved tilsetning av 1 ml 0,4 M EDTA løsning til hvert P7-glass.
Den totale radioaktiviteten ble bestemt (i fire runder) ved å overføre 400^1-prøver av plasma som tidligere var tilsatt testartikkel og negative kontroller til individuelle scintillasjonsglass. Radioaktiviteten som ble forbundet med disse standardene ble bestemt ved natriumjodidscintigrafi. Innholdet av hvert P7-glass ble dekantert over i individuelle BSA-blokkerte nitrocellulosefiltre over en vakuummanifold. Hvert P7-glass ble skylt med 2 ml TBST-løsning. Deretter ble hvert filter skylt med fire 5 ml porsjoner TBST-løsning. Det koagulerte plasmaet ble tørket i 1 time over vakuummanifolden. Filterpapirene ble så overført til individuelle scintillasjonsglass og radioaktiviteten bestemt.
Ikke-spesifikk binding av testartikkelen til nitrocellulosefilteret ble eliminert ved å trekke den totale målte radioaktiviteten i den koagulerende blandingen fra den totale målte radioaktiviteten i den ikke-koagulerende blandingen. Opptaket i det koagulerte plasmaet alene (spesifikt og ikke-spesifikt) ble uttrykt som prosentvist opptak av testartikkelen i plasmaet ved å dele den målte radioaktiviteten i det koagulerte plasmaet alene med den gjennomsnittlige målte radioaktiviteten i plasmastandardene og gange med 100:
Prosentvis spesifikk binding ble bestemt som det radioaktive opptaket som bare skyldtes faktor XHIa-dannede kovalente isopeptidbindinger mellom fibrin og testartikkelen. Den spesifikke bindingen ble beregnet ved å trekke det prosentvise opptaket av den radioaktivt merkede negative kontrollen (<99m>Tc-DTPA) korrigert for bakgrunn (nitrocellulosefilter), som ikke hadde noen affinitet for FXIIIa, fra det prosentvise opptaket av den radioaktivt merkede testartikkelen korrigert for bakgrunn (nitrocellulosefilter):
Virkninger på effektiviteten in vitro.
Dataene ga en sammenlikning av opptaket av<99m>Tc-forbindelse 5 med opptaket av<99m>Tc-forbindelse 6 til koagulerende plasma in vitro. Det var ingen signifikant forskjell (p>0,05) i effektiviteten av disse to molekylene (30,66±5,01 sammenliknet med 29,69±6,33) i denne koaguleringsmodellen.
Eksempel 13: 99mTc- merking av forbindelse 9.
Forbindelse 9 er konjugatet av forbindelse 1 og det sykliske peptidet på illustrasjonen, altså
Forbindelse 9 ble fremstilt på tilsvarende måte som i eksempel 7 og 8 og merket med<99m>Tc i løsning (preparat 1) eller via et frysetørket sett som i eksempel 10 (preparat 2).
For preparat 1 ble 100 jig forbindelse 9 løst i 1 ml pH 8,5 boratbuffer. Dette ble overført til et P6-glass og forseglet. Det ble tilsatt 1 ml<99m>Tc-pertechnetat i fysiologisk saltvann (1,0 GBq/ml, fra en Amertec II-generator) ved romtemperatur sammen med 0,1 ml SnCb-løsning (10 mg SnCh i 100 ml N2-renset saltvann). Aktiviteten ble målt ved hjelp av ionekammer. RCP ble målt med ITLC og HPLC.
Preparat 1 hadde RCP på 96 % ifølge ITLC, mens preparat 2 hadde RCP på 82 % ifølge
HPLC.

Claims (30)

1. Et chelatdannerkonjugat av formel II:
karakterisert vedat hver R , R og R , uavhengig av hverandre, er en R-gruppe, Yer-CAVX-Z hvor: X er -NR<4->, -C02-, -N(C=S)-, -N(C=0)-, -S- eller -O-, Z er en biologisk målsøkende gruppe, som omfatter et 3-lOOmer peptid eller peptidanalog som kan være et lineært peptid eller cycklopeptid eller kombinasjon derav; et monoklonalt antistoff eller fragment derav en syntetisk reseptorbindende forbindelse; et oligonukleotid eller et oligo-DNA eller oligo-RNA fragment; R<4>, uavhengig av hverandre, er en R-gruppe, -(A)n- er et bindeledd hvor hver A, uavhengig av hverandre, er -CR2-, -CR=CR-, -C^C-, -NRCO-, -CONR-, -S02NR-, -NRSC-2-, -CR2OCR2-, -CR2SCR2-, -CR2NRCR2-, en C4-8-sykloheteroalkylengruppe, en C4-8-sykloalkylengruppe, en C5.12-arylengruppe, en C3-i2-heteroarylengruppe eller en polyalkylenglykol-, polymelkesyre- eller polyglykolsyregruppe, n er et heltall fra 0 til 10, hver R-gruppe, uavhengig av hverandre, er H eller Ci-10-alkyl, C3-10-alkylaryl, C2-io-alkoksyalkyl, Ci-10-hydroksyalkyl, Ci-10-fluoralkyl eller 2 eller flere R-grupper som sammen med atomene de er bundet til danner en karbosyklisk, heterosyklisk, mettet eller umettet ring, inneholdende 3 til 6 atomer i ringen.
2. Chelatdannerkonjugatet i henhold til krav 1,karakterisertv e d at R<3>erH.
3. Chelatdannerkonjugatet i henhold til krav log2,karakterisertv e d at hver R erH.
4. Chelatdannerkonjugatet i henhold til krav 1 til 3,karakterisertv e d at Xer-NR<4->eller-C02-.
5. Chelatdannerkonjugatet i henhold til krav 1 til 4,karakterisertv e d at -(A)n- innbefatter en ryggrad på 2 til 10 atomer.
6. Chelatdannerkonjugatet i henhold til krav 1 til 5,karakterisertv e d at Yer-CH2CH2-X-Z.
7. Chelatdannerkonjugatet i henhold til krav 1 til 6,karakterisertved at R<1>er Ci-3-alkyl, C2-4alkoksyalkyl, Ci-3-hydroksyalkyl eller Ci.3-fluoralkyL
8. Chelatdannerkonjugatet i henhold til krav 1 til 7, av formel:
karakterisert vedat hver R<1>, uavhengig av hverandre, er Ci-3-alkyl eller Ci-3-fluoralkyL
9. Chelatdannerkonjugatet i henhold til krav 8,karakterisertv e d at alle R<1->gruppene er CH3.
10. Chelatdannerkonjugatet i henhold til krav 1 til 9,karakterisertved at Z er et 3- til 20-mer peptid .
11. Et radioaktivt metallkompleks av chelatdannerkonjugatet i henhold til krav 1 til 10.
12. Det radioaktive metallkomplekset i henhold til krav 11,karakterisert vedat det radioaktive metallkomplekset er elektrisk nøytralt.
13. Det radioaktive metallkomplekset i henhold til krav 11 og 12,karakterisert vedat det radioaktive metallet er<99m>Tc.
14. Et radiofarmasøytikum,karakterisert vedat det innbefatter det radioaktive metallkomplekset i henhold til krav 11 til 13, i en form som egner seg for administrering i mennesker.
15. Radiofarmasøytikumet i henhold til krav 14,karakterisertv e d at det radioaktive metallet er<99m>Tc.
16. Et sett for fremstilling av<99m>Tc- radiofarmasøytikumet i henhold til krav 15,karakterisert vedat det innbefatter: (i) chelatdannerkonjugatet i henhold til krav 1 til 10, (ii) et biokompatibelt reduksjonsmiddel.
17. Settet i henhold til krav 16,karakterisert vedat det biokompatible reduksjonsmidlet er tinn.
18. En forbindelse av formel III:
karakterisert vedat hver R<1>, R<2>og R<3>, uavhengig av hverandre, er en R-gruppe, E er -(A),!-J hvor: J er en funksjonell gruppe som egner seg for binding til Z, hvor Z er en biologisk målsøkende gruppe, som omfatter et 3-100 mer peptid eller peptidanalog som kan være et lineært peptid eller cyklopeptid eller kombinasjon derav; et monoklonalt antistoff eller fragment derav; en syntetisk reseptorbindende forbindelse; et oligonukleotid eller et oligo-DNA eller oligo-RNA fragment; -(A)n- er et bindeledd hvor hver A, uavhengig av hverandre, er -CR2-, -CR=CR-, -C^C-, -NRCO-, -CONR-, -S02NR-, -NRSO2-, -CR2OCR2-, -CR2SCR2-, -CR2NRCR2-, en C4-8-sykloheteroalkylengruppe, en C4-8-sykloalkylengruppe, en C5.12-arylengruppe, en C3-i2-heteroarylengruppe eller en polyalkylenglykol-, polymelkesyre- eller polyglykolsyregruppe, n er et heltall fra 0 til 10, hver R-gruppe, uavhengig av hverandre, er H eller Ci-10-alkyl, C3-10-alkylaryl, C2-io-alkoksyalkyl, Ci-10-hydroksyalkyl, Ci-10-fluoralkyl eller 2 eller flere R-grupper som sammen med atomene de er bundet til danner en karbosyklisk, heterosyklisk, mettet eller umettet ring, inneholdende 3 til 6 atomer i ringen.
19. Forbindelsen i henhold til krav 18,karakterisert vedat J er -NR<5>R<6>, -C02M, -NCS, -NCO, -SM<1>, -OM<1>, maleinsyreimid eller akrylamid, hvor R<5>og R<6>, uavhengig av hverandre, er en R-gruppe eller P<G>, M er H, et kation, P<G>eller en aktiv ester, M<1>er H eller P<G>, og P<G>er en beskyttende gruppe.
20. Forbindelsen i henhold til krav 18 eller 19,karakterisertv e d at R<3>erH.
21. Forbindelsen i henhold til krav 18 til 20,karakterisertv e d at hver R2 er H.
22. Forbindelsen i henhold til krav 18 til 21,karakterisertved at R<1>er Ci-3-alkyl, C2-4-alkoksyalkyl, Ci-3-hydroksyalkyl eller Ci-3-fluoralkyl.
23. Forbindelsen i henhold til krav 18 til 22,karakterisertv e d at -(A)n- har en ryggrad på 2 til 10 atomer.
24. Forbindelsen i henhold til krav 18 til 23,karakterisertv e d at Eer-CH2CH2-J.
25. Forbindelsen i henhold til krav 24,karakterisert vedat J er -NHR<5>og R<5>er H eller Ci-3-alkyl.
26. Forbindelse i henhold til krav 18:
27. En forbindelse av formel: HC(CH2CH2NR<7>R8)3, karakterisert vedat R<7>og R<8>, uavhengig av hverandre, er H eller P<G>, eller R<7>og R8 til sammen danner P<G>, hvori P<G>er en beskyttende gruppe, eller et salt derav.
28. Forbindelse i henhold krav 27, som er HC(CH2CH2NH2)3.
29. En prosess for fremstilling av forbindelsen i henhold til krav 18,karakterisert vedat den innbefatter å alkylere en forbindelse av formel
med enten: (i) en klornitrosoforbindelse av formel Cl-C(R<I>)2-CH(NO)R<I>, eller (ii) et alfa-kloroksim av formel Cl-C(R<1>)2-C(=NOH)R<1>, eller (iii) et alfa-bromketon av formel Br-C(R<1>)2-C(=0)R<1>, etterfulgt av omdannelse av diaminediketonproduktet til diamindioksimet med hydroksylamin, 12 3 hvor A, J, R , R , R og n er som definert i krav 18.
30. En prosess for fremstilling av forbindelsen i henhold til krav 26,karakterisert vedat den innbefatter å alkylere HC(CH2CH2NH2)3med enten: (i) et klornitrosoderivat av formel Cl-C(CH3)2-CH(NO)CH3, eller (ii) et alfa-kloroksim av formel Cl-C(CH3)2-C(=NOH)CH3, eller (iii) et alfa-bromketon av formel Br-C(CH3)2-C(=0)CH3etterfulgt av omdannelse av diaminediketoneproduktet til diamindioksimet med hydroksylamin.
NO20035597A 2001-07-10 2003-12-16 Forbedrede chelatdannerkonjugater, radioaktive metallkomplekser, radiofarmasøytika, sett for fremstilling av radiofarmasøytika, samt bifunksjonelle chelatdannere og fremgangsmåter for fremstilling av slike NO334093B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0116815.2A GB0116815D0 (en) 2001-07-10 2001-07-10 Improved chelator conjugates
PCT/GB2002/003168 WO2003006070A2 (en) 2001-07-10 2002-07-10 Improved chelator conjugates

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20035597D0 NO20035597D0 (no) 2003-12-16
NO20035597L NO20035597L (no) 2004-03-03
NO334093B1 true NO334093B1 (no) 2013-12-09

Family

ID=9918227

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20035597A NO334093B1 (no) 2001-07-10 2003-12-16 Forbedrede chelatdannerkonjugater, radioaktive metallkomplekser, radiofarmasøytika, sett for fremstilling av radiofarmasøytika, samt bifunksjonelle chelatdannere og fremgangsmåter for fremstilling av slike

Country Status (21)

Country Link
US (2) US7597875B2 (no)
EP (1) EP1404377B1 (no)
JP (1) JP5015409B2 (no)
KR (1) KR100892009B1 (no)
CN (4) CN101537190A (no)
AT (1) ATE304866T1 (no)
AU (1) AU2002317317B2 (no)
BR (1) BR0210965A (no)
CA (1) CA2450690C (no)
DE (1) DE60206272T2 (no)
DK (1) DK1404377T3 (no)
ES (1) ES2250671T3 (no)
GB (1) GB0116815D0 (no)
HK (1) HK1064585A1 (no)
HU (1) HU228850B1 (no)
IL (1) IL159388A0 (no)
MX (1) MXPA04000210A (no)
NO (1) NO334093B1 (no)
RU (1) RU2298012C2 (no)
WO (1) WO2003006070A2 (no)
ZA (1) ZA200400143B (no)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2433657A1 (en) 2001-01-05 2002-07-11 Duke University Contrast enhancement agent for magnetic resonance imaging
IL159310A0 (en) * 2001-07-10 2004-06-01 Amersham Health As Peptide-based compounds
NO20030115D0 (no) * 2003-01-09 2003-01-09 Amersham Health As Kontrastmiddel
GB0416062D0 (en) * 2004-07-19 2004-08-18 Amersham Plc Improved N4 chelator conjugates
EP1699495A2 (en) 2003-11-06 2006-09-13 Amersham Health AS Conjugates of angiotensin ii and an imaging moiety
EP1699494A2 (en) 2003-11-24 2006-09-13 GE Healthcare AS Contrast agent imaging angiotensin ii receptors
EP1729823B1 (en) * 2004-03-04 2009-11-04 GE Healthcare AS Conjugates of angiotensin peptidic analogues and chelating agents for diagnosis and therapy
ATE494913T1 (de) 2004-11-22 2011-01-15 Ge Healthcare As Kontrastmittel für eine extrazelluläre matrix
US20080226555A1 (en) * 2005-06-08 2008-09-18 Bengt Langstrom Method for the Use of [11C] Carbon Monoxide in Labeling Synthesis of 11C-Labelled Esters and Acids by Sensitized Photo-Induced Free Radical
GB0515974D0 (en) * 2005-08-03 2005-09-07 Ge Healthcare Ltd Compounds and imaging methods
EP1989179B1 (en) 2006-02-15 2011-01-26 Ge Healthcare As Contrast agents
US7943117B2 (en) * 2006-06-08 2011-05-17 Atomic Energy Council—Institute of Nuclear Research Method for testing radiochemical purity of Tc-99m-TRODAT-1
CN102321154A (zh) * 2006-12-11 2012-01-18 通用电气医疗集团股份有限公司 基于放射性标记的肽的化合物及其用途
AU2009322081C1 (en) 2008-12-02 2016-09-01 Clarity Pharmaceuticals Ltd Nitrogen-containing macrocyclic conjugates as radiopharmaceuticals
GB0922014D0 (en) 2009-12-17 2010-02-03 Ge Healthcare Ltd Novel integrin binders
CN103108659A (zh) * 2010-07-27 2013-05-15 通用电气健康护理有限公司 放射性药物组合物
GB201103696D0 (en) * 2011-03-04 2011-04-20 Ge Healthcare Ltd Technetium labelled peptides
GB201110767D0 (en) 2011-06-24 2011-08-10 Ge Healthcare Ltd Infection imaging
US20130195756A1 (en) 2012-01-31 2013-08-01 General Electric Company 99mTc IMAGING AGENTS AND METHODS OF USE
WO2014126902A1 (en) * 2013-02-15 2014-08-21 Thomas Jefferson University Kit for tumor imaging
GB201314936D0 (en) 2013-08-21 2013-10-02 Ge Healthcare Ltd Radiolabelling method
GB201322456D0 (en) 2013-12-18 2014-02-05 Ge Healthcare Ltd Radiotracer compositions and methods
WO2015140212A1 (en) 2014-03-19 2015-09-24 Universität Zürich Multidentate bifunctional chelating agents for radionuclide complexation in diagnostics and therapy
JP7495126B2 (ja) * 2018-05-08 2024-06-04 ユニヴァーシティー オブ マイアミ 組織への治療用核酸の送達のための材料および方法
WO2019222454A1 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Emory University Styrylbenzothiazole derivatives and uses in imaging
CN111548275A (zh) * 2020-05-27 2020-08-18 龙曦宁（上海）医药科技有限公司 一种2-（氨基甲基）-n1,n1-二甲基丙烷-1,3-二胺三盐酸盐的合成方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1588978A (en) * 1977-07-19 1981-05-07 Ici Ltd Coating processes
DE3930674A1 (de) * 1989-09-11 1991-03-21 Diagnostikforschung Inst Bifunktionelle chelatbildner zur komplexierung von tc- und re-isotopen, verfahren zu ihrer herstellung und darstellung von konjugaten daraus sowie deren verwendung in diagnostik und therapie
US5808091A (en) * 1991-10-29 1998-09-15 Bracco International B.V. Rhenium and technetium complexes containing a hypoxia localizing moiety
JP3083157B2 (ja) * 1993-08-04 2000-09-04 アマーシャム・インターナショナル・ピーエルシー 酸素欠乏性組織に局在する放射性金属錯体
DE69501981T2 (de) * 1994-01-12 1998-12-10 Bracco International B.V., Amsterdam Liganden und deren metallkomplexe
EP0738158B1 (en) * 1994-01-12 2002-04-03 Amersham plc Biological targeting agents
IL139385A (en) 1998-05-15 2005-09-25 Amersham Plc Labelled glutamine and lysine analogues, metal complexes thereof, and uses thereof for diagnosis
US6783711B2 (en) * 2000-05-23 2004-08-31 Ge Osmonics, Inc. Process for preparing a sulfonamide polymer matrix
US6988794B2 (en) * 2001-03-08 2006-01-24 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Inkjet recording ink, method for producing said ink, and ink cartridge and recording device having said ink

Also Published As

Publication number Publication date
BR0210965A (pt) 2004-06-08
HU228850B1 (en) 2013-06-28
GB0116815D0 (en) 2001-08-29
KR20040017287A (ko) 2004-02-26
CN100509061C (zh) 2009-07-08
AU2002317317B2 (en) 2005-11-17
CN1527727A (zh) 2004-09-08
EP1404377A2 (en) 2004-04-07
KR100892009B1 (ko) 2009-04-07
US20040258619A1 (en) 2004-12-23
HK1064585A1 (en) 2005-02-04
HUP0401265A2 (hu) 2004-09-28
RU2003137592A (ru) 2005-05-20
MXPA04000210A (es) 2004-07-23
NO20035597L (no) 2004-03-03
NO20035597D0 (no) 2003-12-16
IL159388A0 (en) 2004-06-01
US8852550B2 (en) 2014-10-07
JP5015409B2 (ja) 2012-08-29
JP2005500325A (ja) 2005-01-06
ES2250671T3 (es) 2006-04-16
US7597875B2 (en) 2009-10-06
US20100040542A1 (en) 2010-02-18
CN101537190A (zh) 2009-09-23
CN101538313A (zh) 2009-09-23
ZA200400143B (en) 2004-12-29
ATE304866T1 (de) 2005-10-15
DK1404377T3 (da) 2006-01-30
WO2003006070A2 (en) 2003-01-23
CN101607913B (zh) 2012-07-04
CN101607913A (zh) 2009-12-23
DE60206272D1 (de) 2005-10-27
WO2003006070A3 (en) 2003-08-21
EP1404377B1 (en) 2005-09-21
CA2450690C (en) 2009-03-24
CA2450690A1 (en) 2003-01-23
DE60206272T2 (de) 2006-07-13
RU2298012C2 (ru) 2007-04-27
HUP0401265A3 (en) 2005-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO334093B1 (no) Forbedrede chelatdannerkonjugater, radioaktive metallkomplekser, radiofarmasøytika, sett for fremstilling av radiofarmasøytika, samt bifunksjonelle chelatdannere og fremgangsmåter for fremstilling av slike
AU2002317317A1 (en) Improved chelator conjugates
US9259496B2 (en) Technetium labelled peptides
CN101128219B (zh) 改进的n4螯合剂缀合物
US7481993B2 (en) Chelators for radioactively labeled conjugates comprising a stabilizing sidechain
CA2810573A1 (en) Apoptosis imaging agents based on lantibiotic peptides
EP1700608A1 (en) Chelators for radioactively labeled conjugates comprising a stabilizing sidechain

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees