NO333178B1 - Substituerte pyrrolo-pyrazolderivater, farmasoytiske preparater omfattende slike, slike forbindelser for anvendelse som medikament samt anvendelse av slike ved fremstilling av medikament med antitumor aktivitet - Google Patents

Substituerte pyrrolo-pyrazolderivater, farmasoytiske preparater omfattende slike, slike forbindelser for anvendelse som medikament samt anvendelse av slike ved fremstilling av medikament med antitumor aktivitet Download PDF

Info

Publication number
NO333178B1
NO333178B1 NO20052805A NO20052805A NO333178B1 NO 333178 B1 NO333178 B1 NO 333178B1 NO 20052805 A NO20052805 A NO 20052805A NO 20052805 A NO20052805 A NO 20052805A NO 333178 B1 NO333178 B1 NO 333178B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
dimethyl
pyrazol
tetrahydropyrrolo
carbonyl
pyrrolo
Prior art date
Application number
NO20052805A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20052805L (no
Inventor
Fabrizio Orzi
Marcella Nesi
Paolo Pevarello
Maria Gabriella Brasca
Anna Vulpetti
Daniele Fancelli
Raffaella Amici
Paolo Orsini
Patrick Roussel
Original Assignee
Nerviano Medical Sciences Srl
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nerviano Medical Sciences Srl filed Critical Nerviano Medical Sciences Srl
Publication of NO20052805L publication Critical patent/NO20052805L/no
Publication of NO333178B1 publication Critical patent/NO333178B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A61K31/4162—1,2-Diazoles condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61N—ELECTROTHERAPY; MAGNETOTHERAPY; RADIATION THERAPY; ULTRASOUND THERAPY
    • A61N5/00—Radiation therapy
    • A61N5/10—X-ray therapy; Gamma-ray therapy; Particle-irradiation therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

Forbindelser representert ved formlene (la) eller (Ib) og hvori R og R, er som definert i beskrivelsen,. og farmasøytisk akseptable salter derav, er fremlagt; de nevnte forbindelsene er nyttige i behandlingen av cellesyklus proliferative forstyrrelser, f.eks. kreft, forbundet med en endret cellesyklusavhengig kinaseaktivitet.

Description

Foreliggende oppfinnelse omhandler substituerte pyrrolo-pyrazolderivater, farmasøytiske preparater omfattende slike, slike forbindelser for anvendelse som medikament samt anvendelse av slike ved fremstilling av medikament med antitumor aktivitet.
Diskusjon av bakgrunnen
Mange cytotoksiske legemidler slik som f.eks. fluoruracil (5-FU), doksorubi-cin og camptoteciner, skader DNA eller påvirker cellulære metabolske veier og forårsaker derfor, i mange tilfeller en indirekte blokkering av cellesyklusen. Derfor, ved å produsere en irreversibel skade til både normale og tumorceller, resulterer disse midlene i en signifikant toksisitet og bivirkninger.
I denne sammenhengen, er det ønskelig med forbindelser som er i stand til å virke som svært spesifikke antitumormidler ved å selektivt føre til tumorcelle-bremsing og apoptose, med sammenlignbar virksomhet men redusert toksisitet enn de nåværende tilgjengelige legemidler.
Det er velkjent at progresjon gjennom cellesyklusen styres av en rekke kon-trollpunkkontroller, som ellers refereres til som restriksjonspunkter, som reguleres av en enzymfamilie kjent som de cyklinavhengige kinaser (Cdk). I sin tur blir Cdk-ene selv regulert ved mange nivåer slik som for eksempel, binding til cykliner.
Den koordinerte aktivering og inaktivering av forskjellige Cdk/cyklin komp-lekser er nødvendig for normal progresjon gjennom cellesyklusen. Både de kritiske G1-S og G2-M overgangene blir kontrollert ved aktiveringen av forskjellige Cdk/ cyklin aktiviteter. I G1, er både Cdk4/Cyklin D og Cdk2/Cyklin E tenkt å mediere inntredenen av S-fase. Progresjon gjennom S-fase krever aktiviteten av Cdk2/ cyklin A mens aktiveringen av Cdc2/cyklin A (Cdk1) og Cdc2/cyklin B er krevet for inntredenen av mitose. Foren generell referanse til cykliner og cyklinavhengige kinaser se, for eksempel, Kevin R. Webster et al, i Exp. Opin. Invest. Drugs, 1998, Vol. 7(6), 865-887.
Kontrollpunktkontroller er ufullkomne i tumorceller delvis på grunn av, disre-gulering av cdk-aktivitet. For eksempel, har endret ekspresjon av cyklin E og cdk-er blitt observert i tumorceller, og fjerning av cdk inhibitor p27 KIP genet i mus har blitt vist å resultere i en høyere forekomst av kreft.
Økende bevis støtter ideen om at cdk-ene er hastighetsbegrensende enzy-mer i cellesyklusprogresjonen og, som sådan, representerer molekylære mål for
terapeutisk inngripen. Spesielt skulle den direkte inhibisjonen av cdk/cyklin kinase aktivitet være nyttig i begrensning av den uregulerte proliferasjon av en tumorcelle.
OPPSUMMERING AV OPPFINNELSEN
Det er et formål med oppfinnelsen å tilveiebringe forbindelser som er anvendbare ved fremstilling av medikamenter med antitumor aktivitet.
Foreliggende oppfinnere har nå funnet at visse pyrazolforbindelser er utstyrt med cdk/cyklin kinase inhibitorisk aktivitet og derfor er anvendbare ved fremstilling av medikamenter i terapi som antitumormidler og mangler, uttrykt både i toksisitet og bivirkninger, de ovennevnte ulemper forbundet med nåværende tilgjengelige antitumorlegemidler.
Mer spesifikt, er pyrazolderivatene ifølge oppfinnelsen anvendbare ved fremstilling av medikamenter ved behandlingen av en rekke krefttyper som inkluderer: karsinomer slik som blære, bryst, tykktarm, nyre, lever, lunge, inkludert småcellet lungekreft, spiserør, galleblære, eggstokk, bukspyttkjertel, mage, livmorhals, skjoldbruskkjertel, prostata, og hud, inkludert spinalcellekarsinom; hematopoetiske tumorer av lymfoid opphav inkludert levkemi, akutt lymfatisk levkemi, akutt lymfoblastisk levkemi, B-celle lymfom. T-celle lymfom, Hodgkins lymfom, non-Hodgkins lymfom, hårcelle lymfom og Burketts lymfom; hematopoetiske tumorer av myeloid opphav, inkludert akutte og kroniske myelogene levkemier, myelodysplastisk syndrom og promyelocytisk levkemi; tumorer av mesenkymalt opphav, inkludert fibrosarkomer og rabdomyosarkomer; tumorer i det sentral og perifere nervesystemet, inkludert astrocytoma neuroblastoma, glioma og schwannomer; andre tumorer, inkludert melanomer, seminomer, teratokarsinomer, osteosarkomer, xeroderma pigmentosum, keratoxantomer, skjoldbruskkjertel follikulær kreft og Kaposis sarkom.
På grunn av nøkkelrollen av cdk-er i reguleringen av cellulær proliferasjon, er disse pyrazolderivatene også anvendbare ved fremstilling av medikamenter ved behandlingen av en rekke celle proliferative forstyrrelser slik som, for eksempel, godartet prostata hyperplasi, familiær adenomatose polypose, nevrofibromatose, psoriasis, vaskulær glatt celle proliferasjon forbundet med aterosklerose, pulmonal fibrose, artritt, glomerulonefritt og stenose og restenose etter operasjon.
Forbindelsene over kan være anvendbare ved fremstilling av medikamenter ved behandlingen av Alzheimers sykdom, som foreslått av det faktum at cdk5 er involvert i fosforyleringen av tau protein (J. Biochem. 117, 741-749, 1995).
Forbindelsene over, som modulatorer av apoptose, kan også være anvendbare ved fremstilling av medikamenter ved behandlingen av kreft, virusinfeksjoner, forhindring av AIDS-utvikling hos HIV-infiserte individer, autoimmune sykdommer og nevrodegenerative forstyrrelser.
Forbindelsene over kan være anvendbare ved fremstilling av medikamenter ved inhibering av tumor angiogenese og metastase, så vel som i behandlingen av organtransplantatawisning og "host-versus-graft" sykdom.
Forbindelsene over kan også virke som inhibitor av andre proteinkinaser, f.eks. proteinkinase C i forskjellige isoformer, Met, PAK-4, PAK-5, ZC-1, STLK-2, DDR-2, Aurora 1, Aurora 2, Bub-1, PLK, Chk1, Chk2, HER2, rafl, MEK1, MAPK, EG F-R, PDGF-R, FGF-R, IGF-R, PI3K, "weel" kinase, Src, Abl, Akt, MAPK, ILK, MK-2, IKK-2, Cdc7, Nek, og derfor være effektive i behandlingen av sykdommer forbundet med andre protein kinaser.
Forbindelsen over er også nyttige i behandlingen og forhindringen av radioterapiindusert eller kjemoterapiindusert alopesi.
Følgelig tilveiebringer foreliggende oppfinnelse anvendelse av en effektiv mengde av et pyrazolderivat representert ved formel (la) eller (Ib) for fremstilling av et medikament for å behandle celleproliferative forstyrrelser forårsaket av og/eller forbundet med en endret cellesyklusavhengig kinaseaktivitet.
hvori
R er en gruppe -CORa eller -C0NHR<3>hvori Ra er, fenyl eller naftyl, eventuelt substituert med ett eller flere halogenatomer eller en trifluormetylgruppe eller Ra er valgt fra benzyl, tienyl, pyridyl, furyl, C3-C6cykloalkyl, lineær eller forgrenet C1-C6alkyl hvor alkylgruppen eventuelt er substituert med en dimetylaminogruppe eller Ra er 4-piperidinyl eventuelt substituert med 1-metyl; og
Ri er
- en rettkjedet eller forgrenet C3-C4alkyl,
- en 4-piperidinylgruppe som i 1-stilling eventuelt er substituert med en lineær eller forgrenet C1-C6alkyl, C3-C6cykloalkyl eller acetyl,
- en morfolinylgruppe
eller
- en piperazinylgruppe som i 1-stilling eventuelt er substituert med en lineær eller forgrenet CrC6alkyl, fenyl eller acetyl;
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
Oppfinnelsen angår ogsåfFarmasøytisk preparat omfattende en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse med formel (la) eller (Ib), som definert i over og minst en farmasøytisk akseptabel eksesient, bærer og/eller fortynningsmiddel.
Oppfinnelsen angå også forbindelse med formel (la) eller (Ib), som definert i over, for anvendelse som et medikament.
Oppfinnelsen angår også anvendelse av en forbindelse med formel (la) eller (Ib), som definert over, ved fremstilling av et medikament med antitumor aktivitet.
Spesifikke typer kreft som kan behandles inkluderer hematopoetiske tumorer med lymfoide opphav, hematopoetiske tumorer med myeloid opphav, tumorer av mesenkymalt opphav, tumorer i det sentrale og perifere nervesystem, melanomer, seminomer, teratokarsinomer, osteosarkomer, xeroderma pigmentosum, keratoxantoma, skjoldbruskkjertel follikulær kreft og Kaposis sarkom.
En mer fullstendig innsikt i oppfinnelsen og mange av de ledsagende for-deler derav vil enkelt oppnås ettersom de samme blir bedre forstått ved referanse til den følgende detaljerte beskrivelsen.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Mange heterocykliske forbindelser er kjent innen faget som proteinkinaseinhibitorer. Som et eksempel derav har 2-karboksamido-pyrazoler og 2-ureido-pyrazoler, og derivater derav blitt vist som proteinkinaseinhibitorer i de internasjo-nale patentsøknadene WO 01/12189, WO 01/12188, WO 02/48114 og WO 02/70515, alle i navnet til søkeren selv.
Kondenserte bicykliske forbindelser som omfatter pyrazolgrupper og som innehar kinaseinhibitorisk aktivitet har også blitt vist i WO 00/69846 og WO 02/12242 så vel som i WO 03/028720 (PCT/EP02/10534 med prioritet fra US pa-tentsøknad nr. 09/962162 fra 26. september, 2001) og samtidig søkte PCT/EP03/04862 (med prioritet fra US patentsøknad 60/381092 fra 17. mai 2002), alle i navnet til søkeren selv. Forbindelsene som er formål med foreliggende oppfinnelse faller innen omfanget av den generelle formel i tidligere nevnte WO 02/12242, men er ikke spesifikt eksemplifisert deri.
Så fremt ikke annet er spesifisert, når det refereres til forbindelsene med formel (I) i seg selv, så vel som til enhver farmasøytisk sammensetning derav eller til enhver terapeutisk behandling som omfatter dem, inkluderer foreliggende oppfinnelse alle saltene av forbindelsene ifølge denne oppfinnelsen.
Typisk, etter administrasjon av en forbindelse med formel (I), kan dette samme derivatet omsettes til en rekke forbindelser, for eksempel, inkludert mer løselige derivater slik som hydroksylerte derivater, som er enkle å skille ut. Følgelig, avhengig av den metabolske veien som forekommer slik, kan ethvert av disse hydroksylerte derivatene anses som en metabolitt av forbindelsene med formel (I).
Hvis et chiralt senter eller en annen form av et isomerisk chiralt senter er til stede i en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse, er det tenkt at alle former av slik isomer eller isomerer, inkludert enantiomerer og diastereomerer, skal være dekket heri. Forbindelser som inneholder et chiralt senter kan anvendes som en racemisk blanding, en enantiomerisk anriket blanding eller den racemiske blandingen kan separeres ved anvendelse av velkjente teknikker og en individuell enantiomer kan anvendes alene. I tilfeller i hvilke forbindelser har umettede kar-bon-karbon dobbeltbindinger, er både cis (Z) og trans (E) isomerene innen omfanget av denne oppfinnelsen. I tilfeller hvor forbindelser kan eksistere i tautomere former, slik som keto-enol tautomerer, er hver tautomere form betraktet som å være inkludert innen denne oppfinnelsen enten den eksisterer i likevekt eller ho-vedsakelig i én form.
Følgende definisjoner gjelder om ikke på annen måte definert i kravene.
I foreliggende oppfinnelse, med mindre noe annet er spesifisert, med uttrykket lineær eller forgrenet C1-C6alkyl, som følgelig omfatter C1-C4alkyl, tenker vi enhver av gruppene slik som for eksempel, metyl, etyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, sec-butyl, n-pentyl og n-heksyl.
Med uttrykket C3-C6cykloalkyl tenker vi, med mindre noe annet er tilveiebrakt, en cykloalifatisk ring slik som cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl og cyklo-heksyl.
Uttrykket aryl inkluderer karbocykliske eller heterocykliske hydrokarboner med fra 1 til 2 ringgrupper, enten kondensert eller bundet til hverandre ved enkelt-bindinger, hvori minst én av ringene er aromatisk; hvis til stede, omfatter ethvert aromatisk heterocyklisk hydrokarbon også referert til som heteroarylgruppe, en 5-til 6-leddet ring med fra 1 til 3 heteroatomer eller heteroatomiske grupper valgt blant N, NH, O eller S.
Eksempler på arylgrupper ifølge foreliggende oppfinnelse er, for eksempel, fenyl, bifenyl, a- eller p-naftyl, dihydronaftyl, tienyl, benzotienyl, furyl, benzofuranyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, tiazolyl, isotiazolyl, oksazolyl, isoksazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, indolyl, isoindolyl, purinyl, kinolyl, isokinolyl, di-hydrokinolyl, kinoksalinyl, benzodioksolyl, indanyl, indenyl og triazolyl.
Med mindre noe annet er spesifisert, inkluderer uttrykket heterocyklus eller heterocyklyl 5- til 6-leddede mettede, delvis umettede eller fullstendig umettede heterocykler med fra 1 til 3 heteroatomer eller heteroatomiske grupper valgt blant N, NH,0 ellerS.
Bortsett fra de fullstendig umettede heterocyklene, tidligere referert til som aromatiske heterocykler og omfattet av uttrykket aryl, er eksempler på mettede eller delvis umettede heterocykler ifølge oppfinnelsen, for eksempel, pyran, pyrro-lidin, pyrrolin, imidazolin, imidazolidin, pyrazolidin, pyrazolin, tiazolin, tiazolidin, dihydrofuran, tetrahydrofuran, 1,3-dioksolan, piperidin, piperazin og morfolin.
Med uttrykket alkenyl eller alkynyl tenker vi enhver av de tidligere nevnte lineære eller forgrenede C2-C6alkylgrupper som videre bærer en dobbel- eller trip-pelbinding. Eksempler på alkenyl- eller alkynylgrupper ifølge oppfinnelsen er, for eksempel, vinyl, allyl, 1-propenyl, isopropenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 2-pentenyl, 1-heksenyl, etynyl, 2-propynyl og 4-pentynyl.
Med uttrykket polyfluorert alkyl eller alkoksy tenker vi enhver av de ovennevnte lineære eller forgrenede C1-C6alkyl- eller alkoksygrupper som er substituert med mer enn ett fluoratom slik som, for eksempel, trifluormetyl, trifluoretyl, 1,1,1,3,3,3-heksafluorpropyl og trifluormetoksy.
Med uttrykket alkoksy, aryloksy, heterocyklyloksy og derivater derav tenker vi enhver av de ovennevnte alkyl-, aryl- eller heterocyklylgrupper bundet til resten av molekylet gjennom et oksygenatom (-0-).
Fra alt over, er det klart for fagmannen at enhver gruppe hvis navn er et sammensatt navn slik som, for eksempel, cykloalkylalkyl, arylalkyl, heterocyklyl-alkyl, alkoksy, alkyltio, aryloksy, arylalkyloksy, alkylkarbonyloksy, arylalkyl, hetero-cyklylalkyl og lignende, må tenkes som konvensjonelt betraktet av delene som de avledes fra. Som et eksempel, en gruppe slik som heterocyklylalkyloksy er en al-koksygruppe, f.eks. alkyloksy, hvori alkylgruppen er ytterligere substituert av en heterocyklylgruppe, og hvori alkyl og heterocyklyl er som definert over.
Farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene med formel (I) inkluderer syreaddisjonssaltene med uorganiske eller organiske syrer, f.eks. salpeter-, salt-, hydrogenbromid-, svovel-, perklor-, fosfor-, eddik-, trifluoreddik-, propion-, glykol-, melke-, oksal-, malon-, eple-, malein-, vin-, sitron-, benzo-, kanel-, mandel-, me-tansulfon-, isetion ("isethionic")- og salisylsyre. Foretrukket blir syreaddisjonssaltet av forbindelsene ifølge oppfinnelsen valgt mellom hydroklorid- eller mesylatsaltet.
Farmasøytisk akseptable salter av forbindelsene med formel (I) inkluderer også saltene med uorganiske eller organiske baser, for eksempel, alkali- eller jordalkalimetaller, spesielt natrium-, kalium-, kalsium- eller magnesiumhydroksider, karbonater eller bikarbonater, acykliske eller cykliske aminer, foretrukket metyl-amin, etylamin, dietylamin, trietylamin og piperidin.
En første klasse av foretrukne forbindelser med formel (la) eller (Ib) er representert ved derivatene hvori R er en gruppe -CORa, Ra er som definert over og Ri er tert-butyl.
En annen klasse av foretrukne forbindelser med formel (la) eller (Ib) er representert ved derivatene hvori R er en gruppe -C0NHR<3>, Ra er som definert over og Ri er tert-butyl.
Spesielt foretrukket, innen klassene over, er forbindelsene med formel (la) hvori R er en gruppe -CORa med Ra som 4-fluorfenyl eller cyklobutyl, og Ri er som definert i den generelle formel.
Også spesielt foretrukket er forbindelsene med formel (la) hvori R er som definert i den generelle formel, og Ri er en gruppe valgt fra tert-butyl, 1-metyl-piperidinyl-4-yl, 1-metyl-piperazinyl-4-yl, 2-(R,S)-tetrahydrofuranyl-2-yl, 2-(R)-tetra-hydrofuranyl-2-yl eller 2-(S)-tetrahydrofuranyl-2-yl.
For en generell referanse til enhver spesifikk forbindelse med formel (I) ifølge oppfinnelsen, eventuelt i form av et farmasøytisk akseptabelt salt, se den eksperimentelle delen.
Forbindelsene med formel (I) og de farmasøytisk akseptable saltene oppnås ved en fremgangsmåte som omfatter å:
a) reagere en forbindelse med formel (Illa) eller (lllb)
med akrylnitril for å oppnå det tilsvarende derivat med formel (IVa) eller (IVb) b) beskytte aminogruppen i forbindelsen med formel (IVa) eller (IVb) for å oppnå det tilsvarende derivat med formel (Va) eller (Vb) hvori Q er en egnet aminobeskyttende gruppe; c) reagere forbindelsen med formel (Va) eller (Vb) med et egnet alkyle-ringsmiddel for å oppnå det tilsvarende esterderivat med formel (Via) eller (Vlb) hvori Alk står for en egnet C1-C4alkylgruppe; d) reagere forbindelsen med formel (Via) eller (Vlb) med natriumhydrid (NaH) for å oppnå det tilsvarende derivat med formel (Vila) eller (Vllb) e) reagere forbindelsen med formel (Vila) eller (Vllb) med hydrazinhydrat for å oppnå forbindelsen med formel (Villa) eller (Vlllb)
f) reagere forbindelsen med formel (Villa) eller (Vlllb) med etylklorformiat for å oppnå derivatet med formel (IXa) eller (IXb), hver og en i enhver av de to
regioisomere formene
og reagere forbindelsene med formel (IXa) eller (IXb) ifølge ethvert av de alternative trinnene (g.1), (g.2) eller (g.3)
g.1) med en forbindelse med formel (X)
hvori Ra er som definert over og Z er et halogenatom, for å oppnå forbindelsen med formel (Xla) eller (Xlb) hvori R er en gruppe -CORa; g.2) med en forbindelse med formel (XII) hvori Ra er som definert over for å oppnå forbindelsen med formel (Xla) eller (Xlb) hvori R er en gruppe -C0NHR<3>; eller g.3) med et egnet amin med formel (XIII) i nærvær av trifosgen eller av et egnet klorformiat
hvori Ra og R<b>er som definert over, for å oppnå forbindelsen med formel (Xla) eller (Xlb) hvori R er en gruppe -CONR<a>R<b>;
h) avbeskytte aminogruppen i forbindelsen med formel (Xla) eller (Xlb) fremstilt ifølge ethvert av trinnene fra (g.1) til (g.3), for å oppnå det tilsvarende
derivat med formlene (XlVa) eller (XlVb)
hvori R har betydningene rapportert over; og reagere forbindelsen med formel (XlVa) eller (XlVb) ifølge ethvert av de alternative trinnene (i.1), (i.2), (i.3) eller (i.4)
i.1) med et acylhalogenidderivat med formel (XV)
RrCOZ (XV)
hvori Ri er som vist i formel (la) eller (Ib) under gruppene (a), (b), (c), (Ila) med X som et karbonatom og (Mb), og Z er et halogenatom, for å oppnå en forbindelse med formel (XVIa) eller (XVIb)
hvori R og Ri er som definert over; i.2) med en 5 til 7-leddet heterocyklisk forbindelse med formel (XVII) eller et egnet amin med formel (XVIII) i nærvær av trifosgen hvori X er NH og Y, R<c>, n, Rd og R'd har betydningene rapportert over, for å oppnå de tilsvarende forbindelsene med formel (XVIa) eller (XVIb) hvori R er som definert over og Ri er enten en gruppe med formel (Ila) med X som et nitrogenatom og R, Y, R<c>og n som definert over, eller med formel (Mc) hvori Rd og R'd er som definert over; i.3) med en karboksylsyre med formel (XIX) i nærvær av et egnet kondenseringsmiddel
for å oppnå en forbindelse med formel (XVIa) eller (XVIb) hvori Ri er som vist i formel (la) eller (Ib) under gruppene (a), (b), (c) eller det er en gruppe med formel (Ila) med X som et karbonatom eller med formel (Mb), og R, Y, R<c>og n er som definert over;
i.4) med en forbindelse med formel (XX)
hvori Ri er en gruppe med formel (Ild) og Z er et klor- eller bromatom, for å oppnå forbindelsen med formel (XVIa) eller (XVIb) hvori R er som definert over og Ri er en gruppe med formel (Ild); og
j) reagere forbindelsen med formel (XVIa) eller (XVIb) fremstilt ifølge ethvert av trinnene fra (i.1) til (i.4) under basiske betingelser, for å oppnå det tilsvarende derivatet med formel (la) eller (Ib) hvori R og Ri er som definert over; og, eventuelt,
k) omsette dem til andre forbindelser med henholdsvis formel (la) eller (Ib), og/eller til farmasøytisk akseptable salter derav.
Fremgangsmåten over er en analogifremgangsmåte som kan utføres ifølge metoder som er velkjent innen faget.
Fra alt over, er det klart for fagmannen at hvis en forbindelse med formel (la) eller (Ib), fremstilt ifølge fremgangsmåten over, oppnås som en blanding av isomerer, er separasjonen av dem til enkeltisomerene med formel (la) eller (Ib), som utføres ifølge konvensjonelle teknikker, fremdeles innen omfanget av foreliggende oppfinnelse.
På lignende måte, omsetningen til den frie forbindelsen (la) eller (Ib) av et tilsvarende salt derav, ifølge velkjente metoder, er fremdeles innen omfanget av foreliggende oppfinnelse.
Ifølge trinn (a) av fremgangsmåten, blir en forbindelse med formel (Illa) eller (lllb) reagert med akrylnitril i nærvær av en egnet base, for eksempel, natriumhydroksid. Reaksjonen blir foretrukket utført i vann ved en temperatur som spenner fra omkring -10°C til romtemperatur.
Ifølge trinn (b) av prosessen, blir aminogruppen av forbindelsen med formel (IVa) eller (IVb) beskyttet ifølge konvensjonelle metoder, for eksempel, med tert-butoksykarbonyl syreanhydrid (B0C2O) og i nærvær av et egnet løsemiddel slik som acetonitril eller diklormetan, for å få det tilsvarende derivat med formel (Va) eller (Vb) hvori den aminobeskyttende gruppen Q bare representerer tert-butoksy-karbonyl (boe).
Ifølge trinn (c) av prosessen, blir karboksygruppen av forbindelsen med formel (Va) eller (Vb) omsatt til det tilsvarende alkylesterderivat, for eksempel ved å operere i nærvær av et egnet alkylhalogenid, for eksempel, metyljodid.
Reaksjonen utføres i nærvær av et egnet løsemiddel slik som dimetylformamid og under basiske betingelser, for eksempel, ved anvendelse av natrium- eller kaliumhydrogenkarbonat.
Ifølge trinn (d) av prosessen, blir forbindelsen med formel (Via) eller (Vlb) omsatt til det tilsvarende cykliske derivat med formel (Vila) eller (Vllb) gjennom reaksjon med natriumhydrid. Reaksjonen utføres i nærvær av et egnet løsemiddel slik som dioksan eller tetrahydrofuran ved tilbakestrømstemperatur.
Ifølge trinn (e) av fremgangsmåten, blir forbindelsen med formel (Vila) eller (Vllb) reagert med hydrazinhydrat, foretrukket med et overskudd av hydrazin mo-nohydratisert, for eksempel, opp til 10 ekvivalenter, i nærvær av et egnet løsemid-del slik som halogenerte hydrokarboner, lavere alkoholer eller blandinger derav. Reaksjonen blir foretrukket utført i nærvær av etanol, ved tilsetning av hydrazin til en løsning av forbindelsen med formel (Vila) eller (Vllb) og under røring i en passende tid, for eksempel, omkring 48 timer, ved temperaturen som spenner fra omkring 20°C til omkring 70°C. Foretrukket blir reaksjonen over utført også i nærvær av iseddik.
Ifølge trinn (f) av prosessen, blir forbindelsen med formel (Villa) eller (Vlllb) reagert med etylklorformiat for å få det tilsvarende derivat med formel (IXa) eller (IXb). Reaksjonen utføres ifølge velkjente driftsbetingelser, i nærvær av en egnet base, for eksempel, diisopropyletylamin, og et egnet løsemiddel slik som tetrahydrofuran.
Det er klart at etoksykarbonylgruppen kan være bundet til ethvert av pyrazol nitrogenatomene av begge forbindelsene med formel (Villa) og (Vlllb) for å gi opphav til de følgende regioisomerer med formel (IXa) eller (IXb).
I denne sammenhengen kan hvert par av regioisomerer med formel (IXa) eller (IXb) bekvemmelig separeres ifølge velkjente metoder, for eksempel, under kromatografiske betingelser, og hver regioisomer isolert slik påfølgende utarbei-des. Alternativt kan blandingen av regioisomerer behandles som sådan i de påføl-gende trinnene av prosessen uten å tilveiebringe noen separasjon.
Faktisk, siden etoksykarbonylgruppen som fører til to distinkte regioisomerer blir endelig fjernet på slutten av prosessen, er det klart for fagmannen at begge veiene over kan utføres for å fremstille forbindelsene med formel (la) eller (Ib) ifølge oppfinnelsen.
Foretrukket blir imidlertid fremgangsmåten utført ved først å separere og isolere regioisomerene med formel (IXa) eller (IXb) fra deres blanding, som rapportert i arbeidseksemplene, og ved å reagere dem påfølgende til de ønskede forbindelsene.
Ifølge trinn (g.1) ifølge fremgangsmåten, blir forbindelsen med formel (IXa) eller (IXb) reagert med et egnet derivat med formel (X) hvori Z representerer et halogenatom, foretrukket klor eller brom.
Typisk blir forbindelsen med formel (IXa) eller (IXb) oppløst i et egnet løse-middel slik som diklormetan, dimetylformamid, tetrahydrofuran, dioksan eller lignende og en egnet base slik som trietylamin, diisopropyletylamin, natriumkarbonat eller lignende blir tilsatt. Forbindelsen med formel (X) blir deretter tilsatt og blandingen rørt i en tid på omkring 2 til omkring 15 timer, ved en temperatur som spenner fra omkring 20°C til omkring 80°C.
En egnet katalysator slik som dimetylamino-pyridin kan eventuelt anvendes
Ifølge trinn (g.2) av fremgangsmåten, reageres forbindelsen med formel (IXa) eller (IXb) med et isocyanatderivat med formel (XII), ved å operere vesentlig som vist i trinn (g.1) av prosessen, unntatt at basen ikke nødvendigvis er påkrevet.
Ifølge trinn (g.3) av fremgangsmåten, blir forbindelsen med formel (IXa) eller (IXb) reagert med et amin med formel (XIII) i nærvær av trifosgen eller av et egnet klorformiat, for eksempel, 4-nitrofenyl klorformiat, for å få det tilsvarende ureidoderivatet. Reaksjonen utføres i tetrahydrofuran (THF) eller i et egnet halo-genert hydrokarbon, foretrukket diklormetan (DCM), og i nærvær av et egnet amin slik som diisopropyletylamin eller trietylamin ved en temperatur som spenner fra omkring -70°C til romtemperatur.
Ifølge trinn (h) av prosessen, blir den beskyttede aminogruppen i formel (Xla) eller (Xlb) avbeskyttet under velkjente driftsbetingelser, for eksempel, under sure betingelser i nærvær av trifluoreddik- eller saltsyre.
Forbindelsen med formel (Xla) eller (Xlb) blir derfor suspendert i et egnet løsemiddel slik som diklormetan eller dioksan, og behandlet med en konsentrert løsning av den valgte syren.
Alternativt, kan kommersielt tilgjengelige løsninger av gassformig hydro-gen klorid oppløst i dioksan (4M HCI) fordelaktig anvendes. Blandingen blir deretter rørt i en tid på omkring 2 timer til omkring 15 timer ved en temperatur som spenner fra omkring 20°C til omkring 40°C.
Ifølge ethvert av trinnene (i.1), (i.2), (i.3) eller (i.4) av prosessen blir forbindelsen med formel (XlVa) eller (XlVb) ytterligere reagert med et egnet derivat for å oppnå det tilsvarende karboksamido-, ureido- eller karbamatderivatet med formel (XVIa) eller (XVIb).
Trinn (i.1) utføres med et acylhalogenid, foretrukket klorid med formel (XV) i et egnet løsemiddel slik som diklormetan og under basiske betingelser, for eksempel, i nærvær av et egnet amin slik som diisopropyletylamin.
Reaksjonen tillater å oppnå karboksamidoderivater med formel (XVIa) eller (XVIb) hvori Ri er som definert i formel (I) under grupper fra (a) til (c), (Ila) med X som et karbonatom og (Mb); fra det ovenstående er det klart for fagmannen at atomet i Ri gruppen som er direkte bundet til karbonylgruppen med formel (XVIa) eller (XVIb) er et karbonatom.
Trinn (i.2) utføres med et heterocyklisk derivat med formel (XVII) eller av et amin med formel (XVIII), i nærvær av trifosgen, vesentlig som beskrevet under trinn (g.3) ifølge prosessen.
I denne sammenhengen, tillater trinn (i.2) å oppnå ureidoderivater med formel (XVIa) eller (XVIb) hvori Ri er en gruppe med formel (Ila) med X som et nitrogenatom eller med formel (Mc) og hvori Y, R<c>, n, Rd og R'd er som definert over.
På lignende måte blir kondensasjonen i trinn (i.3) utført med et karboksyl-syrederivat med formel (XIX), i nærvær av et egnet kondenseringsmiddel slik som, foreksempel, dicykloheksylkarbodiimid (DCC), 1-etyl-3-(3'-dimetylaminopropyl)-karbodiimid (EDC) eller O-benzotriazolyl tetrametylisouronium tetrafluorborat (TBTU), og ved å operere ifølge velkjente metoder for fremstilling av karboksamidoderivater.
Ifølge trinn (i.4) av prosessen, blir forbindelsen med formel (XlVa) eller (XlVb) reagert med et egnet derivat med formel (XX) hvori Ri er en gruppe med formel (Ild) og Re er som vist i formel (la) eller (Ib), for å oppnå de tilsvarende kar-bamatderivatene med formel (XVIa) eller (XVIb).
I denne sammenhengen blir forbindelsen med formel (XlVa) eller (XlVb) oppløst i et egnet løsemiddel slik som diklormetan, dimetylformamid, tetrahydrofuran, dioksan eller lignende og en egnet base slik som trietylamin, diisopropyletylamin, natriumkarbonat eller lignende blir tilsatt deri. Forbindelsen med generell formel (XX) blir deretter tilsatt og blandingen rørt i en tid på omkring 2 timer til omkring 15 timer, ved en temperatur som spenner fra omkring 20°C til omkring 80°C. Ifølge en foretrukken utførelse, kan en egnet katalysator slik som dimetylaminopy-ridin eventuelt anvendes.
Ifølge trinn (j) av prosessen, blir forbindelsen med formel (XVIa) eller (XVIb) som oppnås i ethvert av trinnene fra (i.1) til (i.4) reagert med en egnet base, for eksempel, trietylamin, og i nærvær av et egnet løsemiddel slik som metanol eller etanol for å oppnå den ønskede forbindelsen med formel (la) eller (Ib).
Til slutt, ifølge trinn (k) av prosessen, kan disse sistnevnte forbindelsene (la) eller (Ib) eventuelt omsettes til farmasøytisk akseptable salter som tidligere rapportert og ved bearbeidelse ifølge konvensjonelle metoder eller, kan alternativt omsettes til ytterligere forbindelser med formel (la) eller (Ib).
Forbindelser med formel (la) eller (Ib) som bærer en karboksyesterfunksjon kan omsettes til en rekke derivater ifølge fremgangsmåter velkjent innen faget for å omsette karboksyestergrupper til karboksamider, N-substituerte karboksamider, N,N-disubstituerte karboksamider, karboksylsyrer, og lignende.
Driftsbetingelsene er de som er vidt kjent innen faget og kan omfatte, for eksempel i omsetningen av en karboksyestergruppe til en karboksamidgruppe, reaksjonen med ammoniakk eller ammoniumhydroksid i nærvær av et egnet løse-middel slik som en lavere alkohol, dimetylformamid eller blandinger derav; foretrukket blir reaksjonen utført med ammoniumhydroksid i en metanol/d i metylform-amid blanding, ved en temperatur som spenner fra omkring 50°C til omkring 100°C.
Analoge driftsbetingelser gjelder i fremstillingen av N-substituerte eller N,N-disubstituerte karboksamider hvori et egnet primært eller sekundært amin anvendes istedenfor ammoniakk eller amminiumhydroksid.
På lignende måte kan karboksyestergrupper omsettes til karboksylsyrederi-vater gjennom basiske eller sure hydrolysebetingelser, som er vidt kjent innen faget.
Som et ytterligere eksempel, kan forbindelser med formel (la) eller (Ib) som bærer en aminfunksjon enkelt omsettes til de tilsvarende karboksamid- eller urei-doderivatene.
Ifølge enhver variant av fremgangsmåten for fremstilling av forbindelser med formel (I), er utgangsmaterialet og enhver annen reaktant kjent og enkelt fremstilt ifølge kjente metoder.
I tillegg, er det klart fra det over at en gitt forbindelse med formel (la) eller (Ib) kan fremstilles enten ved å starte fra blandingen av regioisomerene med formel (IXa) eller (IXb) eller alternativt fra hver ene av selve de to regioisomerene.
Ved fremstilling av forbindelsene med formel (I) ifølge enhver av de tidligere nevnte prosessvariantene, trenger eventuelle funksjonelle grupper innen ut-gangsmaterialene eller mellomproduktene derav og som kunne gi opphav til uønskede bireaksjoner, å bli riktig beskyttes ifølge konvensjonelle teknikker. På lignende måte kan omsetningen av disse sistnevnte til de frie avbeskyttede forbindelsene utføres ifølge kjente prosedyrer.
I tillegg kan forbindelsene med formel (I) ifølge oppfinnelsen også fremstilles i henhold til kombinatoriske kjemiteknikker som er vidt kjent innen faget, ved å utføre de tidligere nevnte reaksjonene mellom de mange mellomproduktene på en serieordnet måte og ved å arbeide under fastfase-syntese (SPS) betingelser.
Som et eksempel kan forbindelsene med formel (Xla) eller (Xlb) som fremstilles ifølge ethvert av trinnene (g.1), (g.2) eller (g.3) være båret på et egnet poly-mert resin. Mer spesielt kan etoksykarbonylgruppen i formel (Xla) eller (Xlb) fjer-nes under basiske betingelser, for eksempel i nærvær av trietylamin eller diisopro-pylamin, og den resulterende forbindelsen forankres til det bærende resinet over, gjennom selve pyrazolnitrogenatomet.
Det bårede mellomproduktet oppnådd slik kan deretter reageres ifølge trinn (h) og ethvert av trinnene (i.1), (i.2), (i.3) eller (i.4) ifølge prosessen, for å oppnå den tilsvarende forbindelsen med formel (la) eller (Ib) ifølge oppfinnelsen som fremdeles er båret på det polymere resinet. Påfølgende resinspalting, for eksempel under basiske eller sure betingelser ifølge kjente metoder, tillater å oppnå de ønskede forbindelser med formel (la) eller (Ib).
Det er klart, ved å utføre prosessreaksjonene over på en serieordnet måte, det vil si ved å følge en kombinatorisk tilnærmelse for eksempel som vist over, kan mange forbindelser med formel (la) og (Ib) fremstilles slik og samles opp.
Derfor er et ytterligere formål med foreliggende oppfinnelse et bibliotek av to eller flere forbindelser med formel (la)
hvori
R er en gruppe -CORa eller -C0NHR<3>hvori Ra er, fenyl eller naftyl, eventuelt substituert med ett eller flere halogenatomer eller en trifluormetylgruppe eller Ra er valgt fra benzyl, tienyl, pyridyl, furyl, C3-C6cykloalkyl, lineær eller forgrenet C1-C6alkyl hvor alkylgruppen eventuelt er substituert med en dimetylaminogruppe eller Ra er 4-piperidinyl eventuelt substituert med 1-metyl; og
Ri er
- en rettkjedet eller forgrenet C3-C4alkyl,
- en 4-piperidinylgruppe som i 1-stilling eventuelt er substituert med en lineær eller forgrenet C1-C6alkyl, C3-C6cykloalkyl eller acetyl,
- en morfolinylgruppe
eller
- en piperazinylgruppe som i 1-stilling eventuelt er substituert med en lineær eller forgrenet C1-C6alkyl, fenyl eller acetyl;
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
På lignende måte er et ytterligere formål med foreliggende oppfinnelse et bibliotek av to eller flere forbindelser med formel (Ib)
hvori
R er en gruppe -CORa eller -C0NHR<3>hvori Ra er, fenyl eller naftyl, eventuelt substituert med ett eller flere halogenatomer eller en trifluormetylgruppe eller Ra er valgt fra benzyl, tienyl, pyridyl, furyl, C3-C6cykloalkyl, lineær eller forgrenet C1-C6alkyl hvor alkylgruppen eventuelt er substituert med en dimetylaminogruppe eller Ra er 4-piperidinyl eventuelt substituert med 1-metyl; og
Ri er
- en rettkjedet eller forgrenet C3-C4alkyl,
- en 4-piperidinylgruppe som i 1-stilling eventuelt er substituert med en lineær eller forgrenet C1-C6alkyl, C3-C6cykloalkyl eller acetyl,
- en morfolinylgruppe
eller
- en piperazinylgruppe som i 1-stilling eventuelt er substituert med en lineær eller forgrenet C1-C6alkyl, fenyl eller acetyl;
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
For en generell referanse til de ovennevnte biblioteker av forbindelser med formel (I) se forsøksdelen.
Fra alt det ovenstående, er det klart for fagmannen at med en gang biblioteket av pyrrolo-pyrazolderivatene blir fremstilt slik, for eksempel, bestående av noen få hundre eller til og med noen få tusen forbindelser med formel (la) eller (Ib), kan det nevnte biblioteket svært fordelaktig anvendes for screening mot gitte kinaser, som tidligere rapportert.
For en generell referanse til biblioteker av forbindelser og anvendelser derav som verktøy for screening av biologiske aktiviteter, se J. Med. Chem. 1999, 42, 2373-2382; og Bioorg. Med. Chem. Lett. 10 (2000), 223-226.
FARMAKOLOGI
Forbindelsene med formel (I) er aktive som proteinkinase inhibitorer og er derfor nyttige, for eksempel, for å begrense den uregulerte proliferasjonen av tumorceller.
I terapi, kan de anvendes i behandlingen av forskjellige tumorer, slik som de rapportert tidligere, så vel som i behandlingen av andre celleproliferative forstyrrelser slik som psoriasis, vaskulær glatt celle proliferasjon forbundet med aterosklerose og stenose og restenose etter operasjon og i behandlingen av Alzheimers sykdom.
Den inhiberende aktiviteten av antatte Cdk/cyklin inhibitorer og styrken av valgte forbindelser ble bestemt gjennom en analysemetode basert på anvendelsen av SPA-teknologien (Amersham Pharmacia Biotech).
Analysen består av overføringen av radioaktivitetsmerket fosfatgruppe ved kinasen til et biotinylert substrat. Det resulterende 33P-merkede biotinylerte produktet tillates å binde til streptavidinbelagte SPA-perler (biotinkapasitet 130 pmol/mg) og emittert lys ble målt i en scintillasjonsteller.
Inhibisionsanalvse av Cdk2/ cvklin A aktivitet
Kinasereaksjon: 4 \ jlM egen-biotinylert histon H1 (Sigma #H-5505) substrat, 10 nM ATP (0,1 mikroCi P<33>y-ATP), 4,2 ng Cdk2/cyklin A kompleks, inhibitor i et sluttvolum på 30^l buffer (TRIS HC110 mM pH 7,5, MgCI210 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml BSA) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunn. Etter 30 min inkubering ved r.t., ble reaksjonen stoppet med 100^l PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500 \ iM ATP som inneholder 1 mg SPA perler. Deretter blir et volum på 110fal overført til Optiplate. Etter 20 min inkubering for substratoppsamling, ble 100fal 5M CsCI tilsatt for å tillate lagdannelse av perler til toppen av platen og latt stå i 4 timer før radioaktivitetstelling i Top-Count instrumentet.
IC50 bestemmelse: inhibitorer ble testet ved forskjellige konsentrasjoner som spenner fra 0,0015 til 10\M. Eksperimentelle data ble analysert av datapro-grammet GraphPad Prizm ved anvendelse av fire-parameter logistikklikningen:
y = bunn + (topp - bunn)/(1 +10<A>((log IC50 - x)<*>stigning)
hvor x er logaritmen av inhibitorkonsentrasjonen, y er responsen; y begynner ved bunnen og går til toppen med en sigmoid form.
Ki beregning:
Forsøksmetode: Reaksjon ble utført i buffer (10 mM Tris, pH 7,5, 10 mM MgCb, 0,2 mg/ml BSA, 7,5 mM DTT) som inneholder 3,7 nM enzym, histon og ATP (konstant forhold kald/merket ATP 1/3000). Reaksjon ble stoppet med EDTA og substratet samlet opp på fosfomembran (Multiscreen 96 brønn plater fra Milli-pore). Etter utstrakt vasking, blir multiscreenplatene avlest på en toppteller. Kont-roll (tid null) for alle ATP og histonkonsentrasjoner ble målt.
Forsøksdesign: Reaksjonshastigheter måles ved fire forskjellige ATP, substrat (histon) og inhibitorkonsentrasjoner. En 80-punkts konsentrasjonsmatriks ble designet rundt de respektive ATP og substrat Km verdiene, og inhibitor IC50 verdiene (0,3,1,3,9 ganger Km eller IC50 verdiene). Et innledende tidsforløps-forsøk uten inhibitor og ved de forskjellige ATP og substratkonsentrasjonene tillater valget av en enkelt sluttpunkttid (10 min) i det lineære området av reaksjonen for Ki bestemmelsesforsøket.
Kinetiske parameterestimater: Kinetiske parametere ble estimert ved samtidig ikke-lineær minste kvadraters regresjon ved anvendelse av [lign. 1] (kon-kurrerende inhibitor med hensyn til ATP, tilfeldig mekanisme) ved anvendelse av det fullstendige datasettet (80 punkter):
hvor A = [ATP], B = [substrat], I = [inhibitor], Vm = maksimal hastighet, Ka, Kb, Ki er dissosiasjonskonstantene av henholdsvis ATP, substrat og inhibitor, a, p er henholdsvis kooperativitetsfaktoren mellom substrat og ATP binding og substrat og inhibitorbinding.
I tillegg har de valgte forbindelsene blittkarakterisertpå et panel av ser/treo kinaser som er strengt relatert til cellecyklus (Cdk2/cyklin E, Cdk1/cyklin B1, Cdk5/p25, Cdk4/cyklin D1), og også for spesifisitet på MAPK, PKA, EGFR, IGF1-R, Aurora-2 og Akt.
Inhibisionsanalyse av Cdk2/ cyklin E aktivitet
Kinasereaksjon: 10 \ iM egen-biotinylert histon H1 (Sigma #H-5505) substrat, 30^M ATP (0,3 mikroCi P<33>y-ATP), 4 ng GST-Cdk2/cyklin E kompleks, inhibitor i et sluttvolum på 30^l buffer (TRIS HC110 mM pH 7,5, MgCI210 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml BSA) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunn. Etter 60 min inkubering ved r.t., ble reaksjonen stoppet med 100 fal PBS + 32 mM EDTA +
0,1% Triton X-100 + 500^M ATP som inneholder 1 mg SPA perler. Deretter blir et volum på 110fal overført til Optiplate. Etter 20 min inkubering for substratoppsamling, ble 100 \ i\ 5M CsCI tilsatt for å tillate lagdannelse av perler til toppen av platen og latt stå i 4 timer før radioaktivitetstelling i Top-Count instrumentet.
IC50 bestemmelse: Se over
Inhibisionsanal<y>se av Cdk1/ cyklin B1 aktivitet
Kinasereaksjon: 4 \ jlM egen-biotinylert histon H1 (Sigma #H-5505) substrat, 20 ATP (0,2 mikroCi P<33>y-ATP), 3 ng Cdk1/cyklin B kompleks, inhibitor i et sluttvolum på 30^l buffer (TRIS HC110 mM pH 7,5, MgCI210 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml BSA) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunn. Etter 20 min inkubering ved r.t., ble reaksjonen stoppet med 100^l PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500 faM ATP som inneholder 1 mg SPA perler. Deretter blir et volum på 110fal overført til Optiplate. Etter 20 min inkubering for substratoppsamling, ble 100fal 5M CsCI tilsatt for å tillate lagdannelse av perler til toppen av Optiplaten og latt stå i 4 timer før radioaktivitetstelling i Top-Count instrumentet.
IC50 bestemmelse: Se over
Inhibisionsanalyse av Cdk5/ p25 aktivitet
Inhibisjonsanalysen av Cdk5/p25 aktivitet ble utført i følge den følgende protokollen.
Kinasereaksjon: 10 faM biotinylert histon H1 (Sigma #H-5505) substrat, 30^M ATP (0,3 mikroCi P<33>y-ATP), 15 ng CDK5/p25 kompleks, inhibitor i et sluttvolum på 30 ul buffer (TRIS HCI 10 mM pH 7,5, MgCI210 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml BSA) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunn. Etter 30 min inkubering ved r.t., ble reaksjonen stoppet med 100^l PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500 jaM ATP, som inneholder 1 mg SPA perler. Deretter blir et volum på 110 fal overført til Optiplate.
Etter 20 min inkubering for substratoppsamling, ble 100fal 5M CsCI tilsatt for å tillate lagdannelse av perler til toppen av platen og latt stå i 4 timer før radioaktivitetstelling i Top-Count instrumentet.
IC50 bestemmelse: Se over
Inhibisionsanal<y>se av Cdk4/ cyklin D1 aktivitet
Kinasereaksjon: 0,4 uM^M muse GST-Rb (769-921) (#sc-4112 fra Santa Cruz) substrat, 10^M ATP (0,5^Ci P<33>y-ATP), 100 ng bakulovirusuttrykt GST
Cdk4/cyklin D1, egnede konsentrasjoner av inhibitor i et sluttvolum på 50fal buffer (TRIS HCI 10 mM pH 7,5, MgCI210 mM, 7,5 mM DTT + 0,2 mg/ml BSA) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunn brønnplate. Etter 40 min inkubering ved +37°C, ble reaksjonen stoppet med 20fal EDTA 120 mM.
Oppsamling: 60fal ble overført fra hver brønn til MultiScreen plate, for å tillate substratbinding til fosfocellulosef ilter. Plater ble deretter vasket 3 ganger med 150 fal/brønn PBS Ca<++>/Mg<++>fri og filtrert ved MultiScreen filtreringssystem.
Deteksjon: filtre ble tillatt å tørke ved 37°C, deretter ble 100 fal/brønn scin-tillant tilsatt og<33>P merket Rb fragment ble detektert ved radioaktivitetstelling i Top-Count instrumentet.
IC50 bestemmelse: Se over
Inhibisionsanalyse av MAPK aktivitet
Kinasereaksjon: 10 jaM egen-biotinylert MBP (Sigma #M-1891) substrat, 15^M ATP (0,15 mikroCi P<33>y-ATP), 30 ng GST-MAPK (Upstate Biotechnology #14-173), inhibitor i et sluttvolum på 30^l buffer (TRIS HC110 mM pH 7,5, MgCI210 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml BSA) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunn. Etter 30 min ved inkubering r.t., ble reaksjonen stoppet med 100 fal PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500^M ATP, som inneholder 1 mg SPA perler. Deretter blir et volum på 110 fal overført til Optiplate.
Etter 20 min inkubering for substratoppsamling, ble 100fal 5M CsCI tilsatt for å tillate lagdannelse av perler til toppen av Optiplaten og latt stå i 4 timer før radioaktivitetstelling i Top-Count instrumentet.
IC50 bestemmelse: Se over
Inhibisionsanalyse av PKA aktivitet
Kinasereaksjon: 10faM egen-biotinylert histon H1 (Sigma #H-5505) substrat, 10^M ATP (0,2 mikroM P<33>y-ATP), 0,45 U PKA (Sigma # 2645), inhibitor i et sluttvolum på 30^l buffer (TRIS HC110 mM pH 7,5, MgCI210 mM, DTT 7,5 mM + 0,2 mg/ml BSA) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunn. Etter 90 min inkubering ved r.t., ble reaksjonen stoppet med 100^l PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500 jaM ATP, som inneholder 1 mg SPA perler. Deretter blir et volum på 110 fal overført til Optiplate.
Etter 20 min inkubering for substratoppsamling, ble 100fal 5M CsCI tilsatt for å tillate lagdannelse av perler til toppen av Optiplaten og latt stå i 4 timer før radioaktivitetstelling i Top-Count instrumentet.
IC50 bestemmelse: Se over
Inhibisionsanalyse av EGFR aktivitet
Kinasereaksjon: 10 jaM egen-biotinylert MBP (Sigma #M-1891) substrat, 2 ATP (0,04 mikroCi P<33>y-ATP), 36 ng insektcelleuttrykt GST-EGFR, inhibitor i et sluttvolum på 30^l buffer (Hepes 50 mM pH 7,5, MgCI23 mM, MnCI23 mM, DTT 1 mM, NaV03 3^M + 0,2 mg/ml BSA) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunn. Etter 20 min inkubering ved r.t., ble reaksjonen stoppet med 100 fal PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500^M ATP, som inneholder 1 mg SPA perler. Deretter blir et volum på 110 fal overført til Optiplate.
Etter 20 min inkubering for substratoppsamling, ble 100fal 5M CsCI tilsatt for å tillate lagdannelse av perler til toppen av Optiplaten og latt stå i 4 timer før radioaktivitetstelling i Top-Count instrumentet.
IC50 bestemmelse: Se over
Inhibisionsanal<y>se av IGF1- R aktivitet
Inhibisjonsanalysen av IGF1-R aktivitet ble utført ifølge den følgende protokollen.
Kinasereaksjon: 10 \ iM biotinylert MBP (Sigma #M-1891) substrat, 0-20 nM inhibitor, 6^M ATP, 1 mikroCi<33>P-ATP), og 22,5 ng GST-IGF1-R (pre-inkubert i 30 min ved romtemperatur med kald 60 jaM kald ATP) i et sluttvolum på 30fal buffer (50 mM HEPES pH 7,9, 3 mM MnCI2, 1 mM DTT, 3^M NaV03) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunn brønnplate. Etter inkubering i 35 min ved romtemperatur, ble reaksjonen stoppet ved tilsetning av 100fal PBS buffer som inneholder 32 mM EDTA, 500^M kald ATP, 0,1% Triton X100 og 10 mg/ml streptavidinbelagte SPA perler. Etter 20 min inkubering, ble 110fal suspensjon trukket av og overført til 96-brønn OPTIPLATEr som inneholder 100^l 5M CsCI. Etter i 4 timer ble platene avlest i 2 min i en Packard TOP-Count radioaktivitetsavleser.
Inhibisionsanalyse av Au rora- 2 aktivitet
Kinasereaksjon: 8 jaM biotinylert peptid (4 repetisjoner av LRRWSLG), 10 nM ATP (0,5 uCi P<33>y-ATP), 15 ng Aurora2, inhibitor i et sluttvolum på 30^l buffer (HEPES 50 mM pH 7,0, MgCI210 mM, 1 mM DTT, 0,2 mg/ml BSA, 3^M ortova-nadat) ble tilsatt til hver brønn av en 96 U bunn brønnplate. Etter 30 minutter inkubering ved romtemperatur, ble reaksjonen stoppet og biotinylert peptid samlet opp ved tilsetning av 100 fal perlesuspensjon.
Lagdeling: 100fal CsCb 5M ble tilsatt til hver brønn og latt stå i 4 timer før radioaktivitet ble talt i Top-Count instrumentet.
IC50 bestemmelse: Se over
Inhibisionsanalyse av Cdc7/ dbf4 aktivitet
Inhibisjonsanalysen av Cdc7/dbf4 aktivitet ble utført i følge den følgende protokollen: Biotin-MCM2 substratet blir trans-fosforylert ved Cdc7/Dbf4 komplekset i nærvær av ATP sporet med y<33->ATP. Det fosforylerte Biotin-MCM2 substratet blir deretter samlet opp ved streptavidinbelagte SPA perler og utstrekningen av fosfo-rylering evaluert ved p-telling.
Inhibisjonsanalysen av Cdc7/dbf4 aktivitet ble utført i 96 brønn plate ifølge den følgende protokollen.
Til hver brønn på platen ble det tilsatt:
10 fal substrat (biotinylert MCM2, 6 jaM sluttkonsentrasjon)
10 fal enzym (Cdc7/Dbf4, 12,5 nM sluttkonsentrasjon)
10fal testforbindelse (12 økende konsentrasjoner i nM tilfaM området for å generere en dose-respons kurve) 10fal av en blanding av kald ATP (10faM sluttkonsentrasjon) og radioaktiv ATP (1/2500 molart forhold med kald ATP) ble deretter anvendt for å starte reaksjonen som ble tillatt å finne sted ved 37°C.
Substrat, enzym og ATP ble fortynnet i 50 mM HEPES pH 7,9 som inneholder 15 mM MgCI2, 2 mM DTT, 3^M NaV03, 2 mM glyserofosfat og 0,2 mg/ml BSA. Løsemidlet for testforbindelsene inneholdt også 10% DMSO.
Etter inkubering i 20 minutter, ble reaksjonen stoppet ved tilsetning til hver brønn av 100^l PBS pH 7,4 som inneholder 50 mM EDTA, 1 mM kald ATP, 0,1% Triton X100 og 10 mg/ml streptavidinbelagte SPA perler.
Etter 15 minutter inkubering ved romtemperatur for å tillate at vekselvirk-ningen biotinylert MCM2-streptavidin SPA perler inntreffer, ble perler samlet opp i en 96-brønn filterplate (Unifilter<R>GF/B™) ved anvendelse av en Packard celle-høster (Filtermate), vasket med destillert vann og deretter talt ved anvendelse av en TOP Count (Packard).
Tellinger ble blank-subtrahert og deretter ble de eksperimentelle data (hvert punkt i triplett) analysert for IC50 bestemmelse ved anvendelse av en ikke-lineær regresjonsanalyse (Sigma Plot).
Gitt inhibisjonsanalysene over, resulterte forbindelsene med formel (I) ifølge oppfinnelsen i å inneha en merkbar cdk-inhibitorisk aktivitet. Se, som et eksempel, de følgende eksperimentelle data (IC50) for to representative forbindelser ifølge oppfinnelsen med formel (la) og (Ib) som testes mot Cdk2/cyklin A: Forbindelse 1: N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-fluorbenzamid (IC500,030^M); og
Forbindelse 2: N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluorbenzamid (IC500,025^M).
Den nevnte inhibitoriske aktiviteten resulterte overraskende i å være mar-kert overlegen den av en svært nær forbindelse ifølge tidligere teknikk WO 02/12242, som herved er referert til som Referanseforbindelse (se forbindelse 1143, nederst på side 76; og eksempel 19, forbindelsen som forbinder sidene 242-3 i WO 02/12242) anvendt for sammenligningsformål og testet mot Cdk2/cyklin A som tidligere rapportert.
Referanseforbindelse: N-[5-acetyl-6,6-dimetyl-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]-pyrazol-3-yl]-(3-brom)benzamid (IC501,7^M).
Så langt er de nye forbindelsene ifølge oppfinnelsen uventet utrustet med en cdk-inhibitorisk aktivitet som er signifikant høyere enn den til de strukturelt nærmeste tidligere teknikks forbindelser ifølge WO 02/12242 og er derfor spesielt fordelaktig, i terapi, mot proliferative forstyrrelser forbundet med en endret cellesyklus avhengig kinaseaktivitet.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan administreres enten som enkeltmidler eller, alternativt i kombinasjon med kjente antikreftbehandlinger slik som strålingsterapi eller kjemoterapiregime i kombinasjoner med cytostatiske eller cytotoksiske midler, antibiotikatype midler, alkyleringsmidler, antimetabolittmidler, hormonelle midler, immunologiske midler, interferontype midler, cyklooksygenase inhibitorer (f.eks. COX-2 inhibitorer), matriksmetalloprotease inhibitorer, telome-rase inhibitorer, tyrosinkinase inhibitorer, anti-vekstfaktor reseptormidler, anti-HER midler, anti-EGFR midler, anti-angiogenese midler (f.eks. angiogeneseinhibitorer), farnesyl transferase inhibitorer, ras-raf signaltransduksjonsveiinhibitorer, cellesyk-lusinhibitorer, andre cdks inhibitorer, tubulinbindende midler, topoisomerase I inhibitorer, topoisomerase II inhibitorer, og lignende.
Hvis formulert som en fast dose, anvender slike kombinasjonsprodukter forbindelsene ifølge denne oppfinnelsen innen doseringsområdet som er beskrevet under og det andre farmasøytisk aktive midlet innen det anerkjente doseringsområdet.
Forbindelser med formel (I) kan anvendes sekvensielt med kjente antikreft-midler når en kombinasjonsformulering ikke er hensiktsmessig.
Forbindelsene med formel (I) ifølge foreliggende oppfinnelse, som er egnet for administrasjon til et pattedyr, f.eks. til mennesker kan administreres ved de vanlige rutene og doseringsnivået avhenger av alderen, vekten, tilstanden for pa-sienten og administrasjonsmåte.
For eksempel kan en egnet dosering tatt i bruk for oral administrasjon av en forbindelse med formel (I) spenne fra omkring 10 til omkring 500 mg per dose, fra 1 til 5 ganger daglig. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan administreres i en rekke doseringsformer, f.eks. oralt, i form av tabletter, kapsler, sukker- eller film-belagte tabletter, flytende løsninger eller suspensjoner; rektalt i form av stikkpiller; parenteralt, f.eks. intramuskulært, eller gjennom intravenøs og/eller intratekal og/eller intraspinal injeksjon eller infusjon.
Foreliggende oppfinnelse inkluderer også farmasøytiske sammensetninger som omfatter en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav i forbindelse med en farmasøytisk akseptabel eksipient, som kan være en bærer eller et fortynningsmiddel.
De farmasøytiske sammensetningene som inneholder forbindelsene ifølge oppfinnelsen blir vanligvis fremstilt ved å følge konvensjonelle metoder og administreres i en egnet farmasøytisk form. For eksempel kan de faste orale formene inneholde, sammen med den aktive forbindelsen, fortynningsmidler, f.eks. laktose, dekstrose sakkarose, sukrose, cellulose, maisstivelse eller potetstivelse; smøre-midler, f.eks. silika, talkum, stearinsyre, magnesium- eller kalsiumstearat og/eller polyetylenglykoler; bindemidler, f.eks. stivelser, gummi arabicum, gelatin metylcellulose, karboksymetylcellulose eller polyvinylpyrrolidon; disintegreringsmidler, f.eks. stivelse, algininsyre, alginater eller natriumstivelse glykolat; boblende blandinger; fargestoffer; søtningsmidler; fuktende midler slik som lecitin, polysorbater, laurylsulfater; og generelt, ikke-giftige og farmakologisk inaktive substanser anvendt i farmasøytiske formuleringer. Disse farmasøytiske preparatene kan fremstilles på kjent måte, for eksempel, ved hjelp av blandings-, granulerings-, tablette-rings-, sukkerbeleggings-, eller filmbeleggingsprosesser.
De flytende dispersjonene for oral administrasjon kan være f.eks. siruper, emulsjoner og suspensjoner. Som et eksempel, kan sirupene inneholde, som bærer, sakkarose eller sakkarose med glyserin og/eller mannitol og sorbitol.
Suspensjonene og emulsjonene kan inneholde, som eksempler på bærere, naturlig gummi, agar, natriumalginat, pektin, metylcellulose, karboksymetylcellulose, eller polyvinylalkohol. Suspensjonen eller løsningene for intramuskulære injeksjoner kan inneholde, sammen med den aktive forbindelsen, en farmasøytisk akseptabel bærer, f.eks. sterilt vann, olivenolje, etyloleat, glykoler, f.eks. propylenglykol og, hvis ønsket, en egnet mengde av lidokain hydroklorid.
Løsningene for intravenøse injeksjoner eller infusjoner kan inneholde, som en bærer, sterilt vann, eller foretrukket kan de være i form av sterile, vandige, iso-toniske saltløsninger eller de kan inneholde propylenglykol som en bærer.
Stikkpillene kan inneholde, sammen med den aktive forbindelsen, en far-masøytisk akseptabel bærer, f.eks. kakaosmør, polyetylenglokol, en polyoksyety-len sorbitanfettsyreester surfaktant eller lecitin.
Med den hensikt av å illustrere foreliggende oppfinnelse bedre blir de følgende eksempler nå gitt.
Generelle metoder
Før en tar i betraktning den syntetiske fremstilling av de spesifikke forbindelsene med formel (I) ifølge oppfinnelsen, for eksempel, som rapportert i de føl-gende eksemplene, skulle oppmerksomhet gis til det faktum at noen forbindelser her er listet og indikert ifølge deres kjemiske navn mens andre, de fleste av dem, har blitt passende og utvetydig identifisert gjennom et kodesystem, sammen med deres<1>H-NMR data (se de følgende tabeller III, IV og V) og HPLC/massedata (se den følgende tabell VI).
Hver kode, spesielt, identifiserer en enkelt spesifikk forbindelse med formel (la) eller (Ib) og består av tre enheter A-M-B.
A representerer enhver substituent R [se formel (la) eller (Ib)] og er bundet til resten av molekylet gjennom -NH-gruppen; hver spesifikke A gruppe er representert og fortløpende nummerert i den følgende tabell I.
På lignende måte representerer B enhver substituent Ri [se formel (la) eller (Ib)] og er bundet til resten av molekylet gjennom karbonyl (CO) gruppen; hver spesifikke B gruppe er representert og fortløpende nummerert i den følgende tabell II.
M referer til den sentrale kjernen av den divalente gruppen som er substituert av gruppene A og B; spesielt, M kan variere fra M1 eller M2 ifølge formlene under, som hver identifiserer den sentrale kjernen av en forbindelse med henholdsvis formel (la) eller (Ib):
For enkel referanse har alle A- og B-gruppene ifølge tabellene I og II blitt identifisert med den riktige kjemiske formel som også indikerer forbindingspunktet med resten av molekylet M.
Derfor, bare som et eksempel, representerer forbindelsen A06-M1-B01 i tabell III forbindelsen med formel (la) med den sentrale M1 -kjernen, som er substituert med gruppen A06 og med gruppen B01, i posisjonene indikert ved pilene; på lignende måte representerer forbindelsen A04-M2-B08 i tabell V forbindelsen med formel (Ib) som har den sentrale M2-kjernen, som er substituert med gruppen A04 og med gruppen B08, i posisjonene indikert ved pilene:
Eksempel 1
N-(2-cyanoetyl)-2-metylalanin
50 g (0,48 mol) 2-metylalanin ble tilsatt til en avkjølt løsning (vann/is) av NaOH (19,6 g) i vann (100 ml). Med en gang løsningen hadde blitt klar, ble 34 ml (0,50 mol) akrylnitril dryppet til med kjøling. Blandingen ble latt stå over natten. Etter 18 timer ble 28 ml eddiksyre tilsatt med kjøling (vann/is); et hvitt faststoff ble utfelt; 200 ml 95% etanol ble dryppet inn i flasken, røring ble fortsatt i 1 time, deretter ble blandingen latt stå i et kjøleskap i 2-3 timer. Etter filtrering ble faststoffet samlet og tørket i en ovn ved 80°C. Filtratene ble dampet inn og tatt opp med etanol (160 ml).
Ved kjøling ble en ytterligere produktmengde oppnådd, som ble filtrert og tørket. 72 g av tittelforbindelsen ble oppnådd fra den første filtreringen. Totalt utbytte: 95%.
ESI MS: m/z 157 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 7,47 (s, 1H), 2,70 (t, 2H), 2,48 (t, 2H), 1,18 (s, 6H).
Ved å arbeide på en analog måte ble den følgende forbindelsen fremstilt:
1-[(2-cyanoetyl)amino]cyklopropankarboksylsyre
ESI MS: m/z 154 (M), 136 (M-H20), 114 (M-CH2CN), 68 (100% cyklopr=C=0);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 7,47 (s, 1H), 2,86 (t, 2H, J = 6,6 Hz), 2,48 (t, 2H, J = 6,6 Hz), 1,09 (dd, 2H, J = 6,9 Hz, J = 4,1 Hz), 0,86 (dd, 2H, J = 6,9 Hz, J =4,1 Hz).
Eksempel 2
N-(tert-butoksykarbonyl)-N-(2-cyanoetyl)-2-metylalanin
44,5 g (0,285 mol) N-(2-cyanoetyl)-2-metylalanin og 51,7 g tetrametyl-ammoniumhydroksid pentahydrat ble oppløst i acetonitril (2 I) ved 40°C og når en klar løsning ble oppnådd, ble 112 g Boc20 tilsatt. Blandingen ble latt stå i 24 timer ved 40°C. Dagen etter ble ytterligere 20 g Boc20 tilsatt mens en opprettholder temperaturen ved 40°C. Hver 8.-12. time ble 20 g Boc20 tilsatt opp til totalt 192 g. Etter 4 dager ble løsemidlet dampet inn, residuet tatt opp med vann (1000 ml) og vasket to ganger med etyleter (500 ml). Den vandige fraksjonen ble brakt til pH 3-4 med sitronsyre og ekstrahert med etylacetat, vasket med vann (200 ml) og konsentrert. 52 g av tittelforbindelsen ble oppnådd (utbytte: 72%)
ESI MS: m/z 274 (M+NH4);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 3,52 (t, 2H, J = 6,8 Hz), 2,68 (t, 2H, J = 6,8 Hz), 1,18-1,38 (m, 15H).
Ved å arbeide på en analog måte ble den følgende forbindelsen fremstilt: 1-[(tert-butoksykarbonyl)(2-cyanoetyl)amino]cyklopropankarboksylsyre
ESI MS: m/z 272 (M+NH4), 255 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,55 (bs, 1H), 3,33 (m, 2H), 2,71 (m, 2H), 0,97-1,63 (m, 13H).
Eksempel 3
Metyl N-(tert-butoksykarbonyl)-N-(2-cyanoetyl)-2-metylalaninat
62 g (0,23 mol) N-(tert-butoksykarbonyl)-N-(2-cyanoetyl)-2-metylalanin ble oppløst i 350 ml DM F og 50 g KHC03ble tilsatt. Noen få minutter etter, ble 30 ml metyljodid (Mel) dryppet til og blandingen ble rørt ved romtemperatur i 6 timer. Deretter ble ytterligere 15 ml Mel tilsatt. Blandingen ble latt stå ved romtemperatur over natten. Etter fortynning med 1,5 I vann, ble løsningen ekstrahert med etylacetat (3 ganger). De organiske fasene ble vasket med en liten mengde vann, tør-ket over natriumsulfat, dampet inn og tørket ved den mekaniske pumpen. 60,5 g (97%) metyl N-(tert-butoksykarbonyl)-N-(2-cyanoetyl)-2-metylalaninat ble oppnådd slik.
ESI MS: m/z 288 (M+NH4);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 3,55 (m, 5H), 2,70 (t, 2H, J = 6,7 Hz), 1,40 (s, 6H), 1,36 (s, 9H).
Ved å arbeide på en analog måte ble den følgende forbindelsen fremstilt: Metyl 1 -[(tert-butoksykarbonyl)(2-cyanoetyl)amino]cyklopropan-karboksylat
ESI MS: m/z 286 (M+NH4);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 3,61 (s, 3H), 3,42 (t, 2H, J = 6,7 Hz), 2,71 (m, 2H), 1,07-1,62 (m, 13H).
Eksempel 4
tert-butyl 4-cyano-3-hydroksy-2,2-dimetyl-2,5-dihydro-1 H-pyrrol-1 - karboksylat
45 g metyl N-(tert-butoksykarbonyl)-N-(2-cyanoetyl)-2-metylalaninat ble oppløst i dioksan (240 ml) under nitrogen og 7,9 g natriumhydrid ble tilsatt. Blanding ble tilbakeløpskokt i 6 timer (120°C indre temperatur), og deretter latt stå over natten ved romtemperatur (TLC: CH2Cl2/EtOH 90/10). Løsemidlet ble dampet inn, vann ble tilsatt (1000 ml) og blandingen ble brakt til pH 3-4 med sitronsyre. Det vandige laget ble ekstrahert 4 ganger med etylacetat, ekstraktene ble vasket med en begrenset mengde vann og dampet inn. Deretter ble residuet tatt opp med heksan, dampet inn og krystallisert fra heksan. 33,1 g tert-butyl 4-cyano-3-hydroksy-2,2-dimetyl-2,5-dihydro-1 H-pyrrol-1-karboksylat ble oppnådd slik (utbytte: 85%)
ESI MS: m/z 237 (M-H-);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 4,06-4,10 (2s, 2H, konformerer), 1,48 (s, 6H), 1,47 (s, 9H).
Ved å arbeide på en analog måte ble den følgende forbindelsen fremstilt: tert-butyl 6-cyano-7-okso-4-azaspiro[2,4]-heptan-4-karboksylat ESI MS: m/z 235 (M-H-);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 4,63 (t, 1H, J = 9,8 Hz), 4,24 (t, 1H, J = 10,2 Hz), 3,74 (t, 1H, J = 10,2 Hz), 1,67-2,16 (m, 2H), 1,34-1,41 (s, 9H), 0,93-1,20 (m, 2H).
Eksempel 5
tert-Butyl 3-amino-6,6-dimetyl-2,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-5(4H)-karboksylat 32 g tert-Butyl 4-cyano-3-hydroksy-2,2-dimetyl-2,5-dihydro-1 H-pyrrol-1-karboksylat (0,134 mol) ble tilsatt til 430 ml absolutt etanol. Til denne løsningen ble 9 ml (0,18 mol) hydrazinhydrat tilsatt, fulgt av 12 ml iseddik (1,5 ekv.); Blandingen ble rørt ved 60°C i 48 timer, etanolen ble fjernet, residuet ble tatt opp med 400 ml natriumhydrogenkarbonatløsning, og ekstrahert flere ganger med etylacetat opp til total ekstraksjon av det ønskede produktet. De organiske fasene ble tørket og dampet inn. Etter rensing ved flashkromatografi (eluent: CHCl3/EtOH 97/3) og tritu-rering med en blanding av heksan/etylacetat 9/1, ble 25 g tittelforbindelse oppnådd.
Totalt utbytte 30,5 g (utbytte 88%).
ESI MS: m/z 253 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 4,06-4,10 (2s, 2H, konformerer), 1,48 (2s, 6H, konformerer), 1,47 (s, 9H, konformerer).
Ved å arbeide på en analog måte ble den følgende forbindelsen fremstilt: tert-Butyl-3-amino-2,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopro-pan-5(4H)-karboksylat
ESI MS: m/z 251 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,12 (bs, 1H), 5,13 (bs, 2H), 4,16-4,33 (m, 2H), 1,57-1,91 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 0,65-0,83 (m, 2H).
Eksempel 6
5-tert-Butyl 2-etyl 3-amino-6,6-dimetylpyrrolo[3,4-c]pyrazol-2,5(4H,6H)-dikarboksylat og 5-tert-butyl 1-etyl 3-amino-6,6-dimetyl-4,6-dihydropyrrolo-[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat 15 g tert-Butyl 3-amino-6,6-dimetyl-2,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-5(4H)-karboksylat (59,4 mmol) ble oppløst i vannfri THF (150 ml) og behandlet, ved 0°C under Ar atmosfære, først med N,N-diisopropyletylamin (50 ml) og deretter med CIC02Et (4,65 ml, 1 ekv.) dråpevis. 90 minutter senere, ble løsemidlet fortynnet med EtOAc (1 I), vasket med vann og deretter med saltløsning, tørket over natriumsulfat og dampet inn. Det ubearbeidede produktet ble renset ved flashkromatografi (heksan/EtOAc 2/8) for å gi 7,3 g 5-tert-butyl 2-etyl 3-amino-6,6-dimetylpyr-rolo[3,4-c]pyrazol-2,5(4H,6H)-dikarboksylat som hovedforbindelsen i 38% utbytte, sammen med 5,7 g 5-tert-butyl 1-etyl 3-amino-6,6-dimetyl-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat i 30% utbytte.
5-tert-Butyl 2-etyl 3-amino-6,6-dimetylpyrrolo[3,4-c]pyrazol-2,5(4H,6H)-dikarboksylat
ESI MS: m/z 325 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 4,35 (q, 2H), 4,10 (2s, 2H, konformerer), 1,50-1,51 (m, 6H), 1,41-1,43 (2s, 9H, konformerer), 1,29 (t, 3H).
5-tert-Butyl 1-etyl 3-amino-6,6-dimetyl-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat
ESI MS: m/z 325 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 4,28 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 4,09-4,14 (2s, 2H, konformerer), 1,66-1,67 (m, 6H), 1,41-1,44 (2s, 9H, konformerer), 1,27 (t, 3H, J = 7,1 Hz).
Ved å arbeide på en analog måte ble de følgende forbindelser fremstilt: 5-tert-Butyl 2-etyl 3-amino-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-2,5(4H,6H)-dikarboksylat
ESI MS: m/z 323 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 4,30 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 4,27 (bs, 2H), 1,65-2,01 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,27 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 0,82-0,96 (m, 2H).
5-tert-Butyl 1 -etyl 3-amino-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spiro-cyklopropan-1,5-dikarboksylat
ESI MS: m/z 323 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 4,26 (bs, 2H), 4,21 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 1,36-1,97 (m, 13H), 1,23 (t, 3H, J = 7,0 Hz).
Eksempel 7
5-tert-Butyl 1-etyl 3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-6,6-dimetyl-4,6-dihydro pyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat
5-tert-Butyl 1-etyl 3-amino-6,6-dimetyl-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat (2,0 g, 6,16 mmol) ble oppløst i THF (40 ml), behandlet først med N,N-diisopropyletylamin (5,4 ml, 30,80 mmol) og deretter, ved 0°C, med 4-fluor-benzoylklorid (800 fal, 6,77 mmol) oppløst i THF (8 ml) dråpevis. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 5 timer, konsentrert og løst opp i DCM, vasket med mettet natriumhydrogenkarbonat vandig løsning og med saltløsning. Den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat, dampet inn og renset ved flashkromatografi (eluent: heksan/EtOAc 80/20) for å gi 2,5 g av tittelforbindelsen i 90% utbytte.
ESI MS: m/z 447 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,47 (s, 1H), 8,04-8,17 (m, 2H), 7,25-7,37 (m, 2H), 4,44-4,47 (2s, 2H, konformerer), 4,43 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 1,73-1,75 (2s, 6H, konformerer), 1,43-1,46 (2s, 9H, konformerer), 1,33 (t, 3H, J = 7,1 Hz).
Ved å arbeide på en analog måte ble de følgende forbindelser fremstilt: 5-tert-Butyl 2-etyl 3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-6,6-dimetylpyrrolo[3,4-c]pyrazol-2,5(4H,6H)-dikarboksylat
ESI MS: m/z 447 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,78 (s, 1H), 7,95-7,99 (m, 2H), 7,40-7,47 (m, 2H), 4,51-4,49 (2s, 2H, konformerer), 4,43 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 1,59-1,60 (2s, 6H), 1,43-1,46 (2s, 9H, konformerer), 1,34 (t, 3H, J = 7,1 Hz).
5-tert-Butyl 2-etyl 3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-2,5(4H,6H)-dikarboksylat
ESI MS: m/z 445 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,81 (s, 1H), 7,95-8,06 (m, 2H), 7,39-7,49 (m, 2H), 4,67 (bs, 2H), 4,41 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 1,80-2,10 (m, 2H), 1,41 (s, 9H), 1,32 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 0,93-1,06 (m, 2H).
Eksempel 8
5-tert-Butyl 1 -etyl 3-({[(3-fluofrenyl)amino]karbonyl}amino)-6,6-dimetyl-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat
5-tert-Butyl 1-etyl 3-amino-6,6-dimetyl-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikar-boksylat (3,0 g, 9,24 mmol) ble oppløst i vannfri THF (50 ml), behandlet ved romtemperatur med 3-fluorfenyl-isocyanat (1,4 g, 10,21 mmol, 1,1 ekv.) og rørt over natten. Den følgende dagen ble reaksjonsblandingen dampet inn, tatt opp med DCM og vasket med saltløsning. Den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat og dampet inn til tørrhet. Rensing ved flashkromatografi (C^C^/MeOH 90/10) ga 3,05 g (utbytte 71%) av tittelforbindelsen.
ESI MS: m/z 462 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 9,74 (s, 1H), 9,05 (s, 1H), 7,44 (m, 1H), 7,33 (m, 1H), 7,16 (m, 1H), 6,84 (m, 1H), 4,43 (m, 4H), 1,76 (2s, 6H), 1,48 (2s, 9H, konformerer), 1,36 (t, 3H, J = 7,1 Hz).
Eksempel 9
5-tert-Butyl 1 -etyl-3-[(piperidin-1 -karbonyl)-amino]-6,6-dimetyl-4,6-di-hydro pyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat
Til en løsning av trifosgen (550 mg, 1,85 mmol, 0,4 ekv.) i tetrahydrofuran (50 ml) ble det tilsatt, ved -40°C, en løsning av 5-tert-butyl 1-etyl 3-amino-6,6-di-metyl-4,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat (1,5 g, 4,62 mmol) i tetrahydrofuran (50 ml) og N,N-diisopropyletylamin (1,8 ml, 2,2 ekv.). Etter 3 timer, ble en løsning av piperidin (690 ul, 1,5 ekv.) og N,N-diisopropyletylamin (1,2 ml, 1,5 ekv) i tetrahydrofuran (25 ml) tilsatt. Reaksjonen ble tillatt å nå romtemperatur i løpet av 2 timer (TLC: EtOAc/heksan 90/10). Etter inndamping av løsemidlet, ble faststoffet løst opp i DCM og løsningen ble vasket med saltløsning, den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat, og konsentrert. Faststoffet ble renset ved flashkromatografi (eluent: EtOAc/heksan 50/50). Faststoffet ble behandlet med diisopropyleter og filtrert for å gi 1,45 g av tittelforbindelsen i 72% utbytte.
ESI MS: m/z 436 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 9,36 (s, 1H), 4,46 (m, 4H), 3,40 (m, 4H), 1,76 (2s, 6H), 1,54 (m, 6H), 1,44 (2s, 9H, konformerer), 1,36 (t, 3H, J = 7,1 Hz).
Eksempel 10
Etyl 3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-6,6-dimetyl-5,6-dihydropyrrolo[3,4-cJpyrazol-1 (4H)-karboksylat hydroklorid
5-tert-Butyl 1 -etyl 3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-6,6-dimetyl-4,6-dihydropyrrolo-[3,4-c]pyrazol-1,5-dikarboksylat (2,5 g, 5,59 mmol) ble oppløst i dioksan (50 ml) og behandlet med HCI 4M i dioksan (28 ml, 20 ekv.). Etter 2 timer ved 40°C (TLC: CH2Cl2/MeOH 90/10) ble reaksjonsblandingen konsentrert og residuet ble behandlet med dietyleter, filtrert for å gi tittelforbindelsen (2,09 g) som et faststoff i 98% utbytte.
ESI MS: m/z 347 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,28 (s, 1H), 8,06-8,11 (m, 2H), 7,28-7,34 (m, 2H), 4,40 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 3,92 (s, 2H), 1,42 (s, 6H), 1,33 (t, 3H, J = 7,1 Hz).
Ved å arbeide på en analog måte ble de følgende forbindelser fremstilt: Etyl 3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-6,6-dimetyl-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-2(4H)-karboksylat hydroklorid
ESI MS: m/z 347 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,92 (s, 1H), 9,89 (s, 1H), 8,02 (m, 2H), 7,49 (m, 2H), 4,61 (s, 2H), 4,51 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 1,69 (s, 6H), 1,39 (t, 3H, J = 7,1 Hz).
Etyl 3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spi-rocyklopropan-2(4H)-karboksylat hydroklorid
ESI MS: m/z 345 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,87 (bs, 1H), 10,00 (bs, 2H), 7,93-8,04 (m, 2H), 7,39-7,53 (m, 2H), 4,69 (bs, 2H), 4,41 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 1,68 (dd, 2H, J = 8,6 Hz, J = 6,1 Hz) 1,41 (dd, 2H, J = 8,6 Hz, J = 6,1 Hz), 1,33 (t, 3H, J = 7,1 Hz).
Eksempel 11
Etyl 5-(2,2-dimetylpropanoyl)-3[(4-fluorbenzoyl)amino]-6,6-dimetyl-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylat
Etyl 3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-6,6-dimetyl-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H)-karboksylat hydroklorid (2,0 g, 5,77 mmol) i diklormetan (70 ml) ble be handlet, ved 0°C med N,N-diisopropyletylamin (1,6 ml, 9,2 mmol, 1,6 ekv.) og med pivaloylklorid (780^l, 6,3 mmol, 1,1 ekv.). Gradvis ble reaksjonen brakt til romtemperatur og rørt over natten (TLC: ChkCb/EtOAc 90/10). Løsningen ble vasket med mettet natriumhydrogenkarbonat vandig løsning og saltløsning. Den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat, dampet inn og renset ved flashkromatografi (eluent: CH2CI2/EtOAc 90/10) for å gi 2,03 g av tittelforbindelsen i 82% utbytte.
ESI MS: m/z 431 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,51 (s, 1H), 8,05-8,14 (m, 2H), 7,23-7,37 (m, 2H), 4,90 (s, 2H), 4,42 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 1,80 (s, 6H), 1,33 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 1,22 (s, 9H).
Ved å arbeide på en analog måte ble den følgende forbindelsen fremstilt: Etyl 5-(2,2-dimetylpropanoyl)-3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-5,6-dihydro pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-2(4H)-karboksylat
ESI MS: m/z 429 (MH+)
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 10,81 (bs, 1H), 7,96-8,04 (m, 2H), 7,38-7,48 (m, 2H), 5,10 (bs, 2H), 4,42 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 2,33 (dd, 2H, J = 6,8 Hz, J = 4.2 Hz), 1,32 (t, 3H, J = 7,1 Hz), 1,22 (s, 9H), 0,90 (dd, 2H, J = 6,8 Hz, J = 4,2 Hz).
Eksempel 12
N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-fluorbenzamid
Etyl 5-(2,2-dimetylpropanoyl)-3[(4-fluorbenzoyl)amino]-6,6-dimetyl-5,6-di-hydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1(4H)-karboksylat (2,0 g, 4,64 mmol) ble oppløst i metanol (60 ml), behandlet med TEA (6,45 ml, 46,4 mmol, 10 ekv.) og rørt over natten ved romtemperatur. (TLC: CH2Cl2/MeOH 95/5). Etter inndamping, ble faststoffet behandlet med dietyleter/heksan og filtrert for å gi 1,43 g av tittelforbindelsen i 86% utbytte.
ESI MS: m/z 359 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,41 (bs, 1H), 10,91 (bs, 1H), 7,98-8,11 (m, 2H), 7,20-7,44 (m, 2H), 4,66-4,92 (bs, 2H), 1,64 (2, 6H), 1,21 (s, 9H).
Ved å arbeide på en analog måte ble de følgende forbindelser fremstilt: N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-2,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluorbenzamid
ESI MS: m/z 357 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 11,59-12,47 (bs, 1H), 10,94 (bs, 1H), 8,02-8,11 (m, 2H), 7,27-7,37 (m, 2H), 4,99 (s, 2H), 2,25 (dd, 2H, J = 6,5 Hz, J = 4,4 Hz), 1,20 (s, 9H), 0,79 (dd, 2H, J = 6,5 Hz, J = 4,4 Hz).
N-{6,6-dimetyl-5-[(2R)-tetrahydrofuran-2-ylkarbonyl]-1,4,5,6-tetra-hydropyrollo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-fluorbenzamid
ESI MS: m/z 373 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,49 (bs, 1H), 10,96 (bs, 1H), 8,09 (m, 2H), 7,34 (m, 2H), 4,86 (s, 2H), 4,56 (t, 1H), 3,83 (m,2H), 2,02 (m, 2H), 1,86 (m, 2H), 1,68 (s, 6H), (xD+27,7 (c = 0,50, MeOH).
N-{6,6-dimetyl-5-[(2S)-tetrahydrofuran-2-ylkarbonyl]-1,4,5,6-tetra-hydropyrollo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-fluorbenzamid
ESI MS: m/z 373 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,49 (bs, 1H), 10,96 (bs, 1H), 8,09 (m, 2H), 7,34 (m, 2H), 4,86 (m, 2H), 4,56 (t, 1H), 3,83 (m,2H), 2,02 (m, 2H), 1,86 (m, 2H), 1,68 (s, 6H), (xD-25,9 (c = 0,76, MeOH).
Eksempel 13
4-(1 -Metyl-piperidin-4-yloksy)-benzosyre metylester
Til en løsning av 1-metyl-piperidin-4-ol (6,8 g, 59 mmol), PPh3(trifenylfosfin, 15,5 g, 59 mmol) og 4-hydroksy benzosyre metylester (6 g, 39 mmol) i THF (150 ml) ved 0°C, ble dietyl azodikarboksylat (9,5 ml, 59 mmol) i THF (30 ml) sakte tilsatt. Reaksjonsblandingen ble tillatt å varme til romtemperatur over en periode på 24 timer. Den ble deretter dampet inn og residuet re-oppløst i 5% vandig sitronsyre (700 ml). Løsningen ble vasket med etylacetat (3 x 250 ml), gjort alkalisk med konsentrert NH4OH (pH~8) og deretter ekstrahert med diklormetan (3 x 250 ml). De kombinerte diklormetanekstraktene ble vasket med saltløsning, tørket og dampet inn for å gi en olje som ble renset ved flashkromatografi på silikagel ved anvendelse av diklormetan-MeOH (90:10) som eluent, for å gi tittelforbindelsen som en gul olje (7,4 g, 75%).
ESI MS: m/z 250 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1,7 (m, 2H), 2,0 (m, 2H), 2,2 (m, 5H), 2,7 (m, 2H), 3,8 (s, 3H), 4,5 (m, 1H), 7,1 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,9 (d, J = 9,0 Hz, 2H).
Eksempel 14
4-(1 -Metyl-piperidin-4-yloksy)-benzosyre, hydroklorid
4-(1-Metyl-piperidin-4-yloksy)-benzosyre metylester (7,3 g, 29 mmol) ble oppløst i 6N vandig HCI (220 ml). Etter oppvarming ved 85°C i 6 timer, ble løse-midlet fjernet in vakuum. Residuet ble tatt opp med vann og dampet inn to ganger og deretter tatt opp med aceton ytterligere to ganger. Det oppnådde faststoffet ble til slutt triturert i aceton for å gi hydrokloridsaltet som et hvitt pulver (6,4 g, 80% utbytte).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 2,0 (m, 4H), 2,8 (m, 3H), 3,3 (m, 4H), 4.7 (m, 1H), 7,1 (m, 2H), 7,9 (m, 2H), 9,9 (d, J = 20,4 Hz, 1H), 12,6 (s, 1H).
Eksempel 15
4-(4-Hydroksy-piperidin-1 -yl)-benzosyre etylester
En blanding av 4-fluor benzosyre etylester (1,68 g, 10 mmol), piperidin-4-ol (1,12 g, 11 mmol), og vannfri kaliumkarbonat (1,38 g, 10 mmol) i DMSO (10 ml) ble varmet ved 120°C i 6 timer. Etter kjøling ble blandingen tømt i vann og is (500 ml) og ekstrahert med etylacetat. Det organiske laget ble vasket med vann og saltløsning, tørket og dampet inn. Residuet ble renset ved flashkromatografi på silikagel ved anvendelse av heksan/EtOAc (10/30) som eluent, for å gi tittelforbindelsen som et hvitt faststoff (1,6 g, 64%).
ESI MS: m/z 250 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1,3 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,4 (m, 2H), 1.8 (m, 2H), 3,0 (m, 2H), 3,7 (m, 2H), 4,2 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,7 (d, J = 4,3 Hz, 1H), 6,9 (m, 2H), 7,7 (m, 2H).
Eksempel 16
4-(4-Fluor-piperidin-1 -yl)-benzosyre etylester
Til en løsning av4-(4-hydroksy-piperidin-1-yl)benzosyre etylester (1,25 g, 5 mmol) i tørr diklormetan (30 ml) ved romtemperatur under en inert atmosfære, ble det sakte tilsatt DAST (0,97 g, 6 mmol) i diklormetan (5 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 1 time og deretter stoppet med vandig NaHCC«3. Det organiske laget ble vasket med saltløsning, tørket og dampet inn. Residuet ble renset ved flashkromatografi på silikagel ved anvendelse av heksan/EtOAc (70/30) som eluent for å gi tittelforbindelsen som et hvitt faststoff (0,7 g, 56%).
ESI MS: m/z 252 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1,3 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,8 (m, 2H), 2,0 (m, 2H), 3,3 (m, 2H), 3,6 (m, 2H), 4,2 (s, 2H), 4,8 (s, 1H), 7,0 (s, 2H), 7,8 (s, 2H).
Eksempel 17
4-(4-Fluor-piperidin-1-yl)-benzosyre
En blanding av 4-(4-fluor-piperidin-1-yl)benzosyre etylester (0,7 g, 2,7 mmol) i etanol (50 ml) og en løsning av 2N natriumhydroksid (20 ml) ble rørt ved romtemperatur i 24 timer. Etanolen ble så dampet inn, løsningen fortynnet med vann (20 ml) og nøytralisert med 2N HCI. Syren separerte som et hvitt faststoff som ble vasket med vann og tørket under vakuum (0,52 g, 842%),
ESI MS: m/z 224 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1,8 (m, 2H), 2,0 (m, 2H), 3,3 (m, 2H), 3,5 (m, 2H), 5,0 (s, 1H), 7,0 (s, 2H), 7,8 (s, 2H), 12,2 (s, 1H).
Ved å arbeide som i beskrevet ethvert tidligere eksempel, det vil si ved å anvende ethvert riktig utgangsmateriale og enhver egnet reaktant ifølge fremgangsmåten som er vist tidligere, ble ytterligere forbindelser med formel (la) og (Ib) også fremstilt, som rapportert i den følgende tabell III. For forklarende be-merkninger angående den kodende systemet som identifiserer hver spesifikk forbindelse med formel (la) og (Ib) se "Generelle metoder" ved begynnelsen avfor-søksdelen.
Eksempel 18
N-{6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-2,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-fluorbenzamid
Etyl 3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-6,6-dimetyl-5,6-dihydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-1 (4H) karboksylat hydroklorid (0,5 g, 1,3 mmol), i diklormetan (25 ml), ble behandlet med N,N-diisopropyletylamin (1,13 ml, 6,5 mmol, 5 ekv.) og TBTU (0,542 g, 1,69 mmol, 1,3 ekv.) ved romtemperatur i 1 time og deretter ble 1 -metyl-piperidin-4-karboksylsyre hydroklorid (0,29 g, 1,61 mmol, 1,2 ekv.) tilsatt. Reaksjonen ble rørt over natten (TLC: CH2CI2/MeOH 90/10). Løsningen ble vasket med mettet natriumhydrogenkarbonat vandig løsning og saltløsning, den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat og konsentrert. Residuet ble oppløst i metanol (16 ml), behandlet med TEA (2 ml, 14,3 mmol, 11 ekv.) og rørt over natten ved romtemperatur (TLC: CH2CI2/MeOH/NH4OH 90/10/1). Etter inndamping ble faststoffet renset ved flashkromatografi (eluent: CH2CI2/MeOH/NH4OH 90/10/2). Faststoffet ble behandlet med diisopropyleter og filtret for å gi 0,36 g av tittelforbindelsen i 69% utbytte.
ESI MS: m/z 400 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,48 (bs, 1H), 10,97 (bs, 1H), 8,09 (m, 2H), 7,35 (m, 2H), 4,75 (bs, 2H), 2,87 (m, 2H), 2,40 (m, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,05 (m, 2H), 1,67 (m, 10H).
Ved å arbeide på en analog måte ble den følgende forbindelsen fremstilt: N-[5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-2,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluorbenzamid
ESI MS: m/z 398 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,20 (bs, 1H), 11,00 (s, 1H), 8,10 (m, 2H), 7,36 (m, 2H), 4,91 (s, 2H), 2,84 (m, 2H), 2,40 (m, 1H), 2,23 (m, 5H), 2,0 (m, 2H), 1,65 (m,4H), 0,89 (m, 2H).
Ved å arbeide på analog måte og ved å anvende det riktige utgangsmateriale og enhver egnet reaktant, ifølge den tidligere fremgangsmåten, ble ytterligere forbindelser med formel (la) og (Ib) også fremstilt, som rapportert i den følgende tabell IV.
Eksempel 19
N-{6,6-dimetyl-5-[(4-metylpiperazin-1-yl)karbonyl]-2,4,5,6-tetrahydro pyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-fluorbenzamid
Til en løsning av trifosgen (195 mg, 0,65 mmol, 0,56 ekv.) i DCM (15 ml) ble det tilsatt en løsning av etyl 3-[(4-fluorbenzoyl)amino]-6,6-dimetyl-5,6-dihydropyr-rolo[3,4-c]pyrazol-2(4H) karboksylat hydroklorid (442 mg, 1,15 mmol), i DCM (30 ml), fulgt av N,N-diisopropyletylamin (760 ul, 4,31 mmol, 3,75 ekv.). Etter 3 timer ble en løsning av N-metylpiperazin (195 ul, 1,72 mmol, 1,5 ekv.) og diisopropyletylamin (300 ul, 1,72 mmol, 1,5 ekv.) i DCM (8 ml) tilsatt. Reaksjonen ble rørt over natten ved romtemperatur (TLC: ChfeCb/MeOH 90/10). Løsningen ble vasket med saltløsning, den organiske fasen ble tørket over natriumsulfat og konsentrert. Residuet ble oppløst i metanol (16 ml), behandlet med TEA (1,6 ml, 11,5 mmol, 10 ekv.) og rørt over natten ved romtemperatur. (TLC: ChkCb/MeOH 90/10). Etter inndamping, ble faststoffet renset ved flashkromatografi (eluent: ChtøCb/MeOH 90/10). Faststoffet ble behandlet med diisopropyleter og filtret for å gi 0,294 g av tittelforbindelsen i 64% utbytte.
ESI MS: m/z 401 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,39 (bs, 1H), 10,39 (s, 1H), 8,04 (m, 2H, Ar), 7,31 (m, 2H), 4,53 (bs, 2H), 3,04 (m, 4H), 2,40 (m, 4H), 2,22 (bs, 3H), 1,50 (bs, 6H).
Ved å arbeide på en analog måte ble de følgende forbindelser fremstilt: N-[5-[(4-metylpiperazin-1-yl)karbonyl]-2,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluorbenzamid
ESI MS: m/z 399 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,19 (bs, 1H), 10,95 (s, 1H), 8,09 (m, 2H), 7,35 (m, 2H), 4,70 (bs, 2H), 3,18 (m, 4H), 2,34 (m, 7H), 1,92 (m, 2H), 0,97 (m, 2H).
Eksempel 20
4-Klor-N-[6,6-dimetyl-5-(4-pyrrolidin-1-ylmetyl-piperidin-1-karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-benzamid, hydroklorid
En blanding av N-[5-(4-aminometyl-piperidin-1- karbonyl)-6,6-dimetyl-2,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-klor-benzamid (310 mg, 0, 7 mmol), 1,4-dibrombutan (92^l, 0,7 mmol) og NaHC03(600 mg, 7 mmol) i absolutt etanol
(15 ml) ble varmet ved 150°C i 15 minutter i en mikrobølgeovn. Etter avkjøling, ble løsningen dampet inn. Residuet ble tatt opp med diklormetan/MeOH (90:10) og vann, den oppnådde suspensjonen filtrert og det organiske laget ble dampet inn til tørrhet. Residuet ble renset ved flashkromatografi med diklormetan//MeOH/30% NH4OHaq (95/5/0,5). Produktet ble oppnådd i 20% utbytte (71 mg).
Forbindelsen ble oppløst i metanol (3 ml), en løsning av 4 N HCI i dioksan (40 ul, 0,16 mmol) ble tilsatt og deretter ble løsningen dampet inn. Det oppnådde faststoffet ble triturert i eter for å gi tittel-hydrokloridsaltet som et hvitt pulver.
ESI MS: m/z 485 (MH+);
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6) 5 ppm 1,24 (m, 2H), 1,63 (s, 6H), 1,92 (m, 7H), 2,67 (t, J = 11,83 Hz, 2H), 3,01 (m, 2H), 3,09 (t, J = 6,46 Hz, 2H), 3,47 (m, 4H), 4,56 (s, 2H), 7,59 (d, J = 8,54 Hz, 2H), 8,01 (d, J = 8,66 Hz, 2H), 9,49 (s, 1H), 11,02 (s, 1H), 12,50 (s, 1H).
Ved å arbeide på analog måte og ved anvendelse av det riktige utgangsmaterialet og enhver egnet reaktant, ifølge den tidligere fremgangsmåten, ble ytterligere forbindelser med formel (la) og (Ib) også fremstilt, som rapportert i den følgende tabell V.
Eksempel 21
Mange forbindelser ifølge oppfinnelsen med formel (la) og (Ib), som blir fremstilt som tidligere rapportert, ble ogsåkarakterisert vedhjelp av HPLC/Masseteknikker, følgelig gjennom retensjonstid (r.t.) og masse [M+H]<+>.
Driftsbetingelsene er rapportert under:
HPLC/MS metode 1
HPLC utstyret bestod av et Waters 2790 HPLC system utstyrt med en 996 Waters PDA detektor og Micromass mod. ZQ enkelt kvadrapolt massespektrometer, utstyrt med en elektrospray (ESI) ionekilde. Instrumentkontroll, dataervervelse og databearbeidelse ble tilveiebrakt ved Millennium 4.0 og MassLynx 3,5 programvare.
HPLC ble utført ved 25°C ved en strømningshastighet på 1 ml/min ved anvendelse av en RP18 Waters X Terra (4,6 x 50 mm, 3,5^m) kolonne. Mobilfase A var ammoniumacetat 5 mM buffer (pH 5,5 med eddiksyre/acetonitril 95:5), og Mobilfase B var H20/acetonitril (5:95); gradienten var fra 10 til 90% B i løpet av 8 minutter så hold 90% B i 2 minutter. Injeksjonsvolumet var 10
Massespektrometeret ble operert i positiv og i negativ ionemodus, kapillær-spenningen ble satt opp ved 2,5 KV; kildetemperaturen var 120°C; konus var 10 V; fullt scan, masseområde fra 100 til 800 amu ble satt opp.
HPLC/MS metode 2
HPLC utstyret bestod av et Waters 2790 HPLC system utstyrt med en 996 Waters PDA detektor og Micromass mod. ZQ enkelt kvadrapolt massespektrometer, utstyrt med en elektrospray (ESI) ionekilde. Instrumentkontroll, dataervervelse og databearbeidelse ble tilveiebrakt ved Millennium 4.0 og MassLynx 3,5 programvare.
HPLC ble utført ved 25°C ved en strømningshastighet på 1 ml/min ved anvendelse av en RP18 Waters X Terra (4,6 x 50 mm, 3,5^m) kolonne. Mobilfase A var ammoniumacetat 5 mM buffer (pH 5,5 med eddiksyre/acetonitril 95:5), og Mobilfase B var H20/acetonitril (5:95); gradienten var fra 10 til 90% B i løpet av 4 minutter så hold 90% B i 1 minutt. Injeksjonsvolumet var 10
Massespektrometeret ble operert i positiv og i negativ ionemodus, kapillær-spenningen ble satt opp ved 2,5 KV; kildetemperaturen var 120°C; konus var 10 V; fullt scan masseområde fra 100 til 800 amu ble satt opp.
HPLC/MS metode 3
Massespektra ble registrert på et Finnigan LCQ ionefelle massespektrometer ved anvendelse av elektrospray (ESI) ioniseringsteknikken med positiv og i negativ ionedeteksjon. Massespektrometeret var direkte forbundet til et SSP4000 HPLC system (Thermo Separation), utstyrt med en LcPal autosampler (CTC Ana-lytics) og en UV 6000LP PDA detektor (Thermo Separation). Instrumentkontroll, dataervervelse og bearbeidelse ble utført ved anvendelse av Xcalibur 1.2 programvare. HPLC analyse ble utført ved romtemperatur ved en strømningshastig-het på 1 ml/min ved anvendelse av en RP C18 Waters X-Terra kolonne (4,6 x 50 mm, 3,5^m). Mobilfase A var ammoniumacetat 5 mM buffer (pH 5,5 med eddiksyre/acetonitril 90:10, og Mobilfase B var ammoniumacetat 5 mM buffer (pH 5,5 med eddiksyre):acetonitril 10:90, gradienten var fra 0 til 100% B i løpet av 7 minutter så hold 100% B i 2 minutter før re-likevektsinnstilling. Total LC tid er 12 minutter. Injeksjonsvolumet var 10 UV deteksjon ble utført mellom 215 og 400 nm.
loner ble generert under de følgende betingelser: ESI sprayapparatspen-ning 4,0 kV, oppvarmet kapillærtemperatur 255°C, "sheath" gass nitrogen med trykk på 5,0 bar. En fullstendig scan deteksjonsmodus (fra 50 til 1000 amu) ble anvendt med en MS/MS analyse av det mest intense ionet (normalisert kollisjonsenergi: 35%).
UV-deteksjon: 215-400 nm.
HPLC/MS Metode 4
Det anvendte HPLC systemet (Alliance 2790, med termostatstyrt autosampler og avledningsventil LabPro, UV detektor 2487 og "sateng" grensesnitt, ZQ massespektrometer med ESI grensesnitt) er et produkt fra Waters Inc. Milford, Massachusetts. Kjemiluminescent nitrogen detektoren (CLND) mod. 8060 er et produkt fra ANTEK Instruments Inc. Houston, Texas. Væskebehandleren Miniprep 75 er et produkt fra Tecan Group Ltd. Maennedorf, Sveits.
De anvendte kromatografibetingelsene var som følger: Strømningshastig-heten ble satt til 1 ml/min. To mobile faser (mobilfase A: 0,1% maursyre, mobilfase B: 0,1 % maursyre i metanol) ble anvendt for å drives i løpet av 10 min ved en lineær gradient fra 5% B til 95% B, som ble opprettholdt i 2 min, og fulgt av re-likevektsinnstilling ved 5% B i de neste 3 minuttene. Forsøkstiden var 15 min. Injek-sjonsvolum 10 autosamplertemperatur 25°C, deteksjonsbølgelengde 220 nm.
Som rapportert i den følgende tabell VI, ble noen andre forbindelser med formel (la) og (Ib) fremstilt, hver identifisert gjennom det tidligere nevnte A-M-B kodende systemet, og viderekarakterisertgjennom HPLC/Masse, ifølge forsøks-betingelsene som er rapportert over.

Claims (9)

1. Forbindelse representert ved formel (la) eller (Ib)
hvor R er en gruppe -CORa eller -CONHR<3>hvori Ra er, fenyl eller naftyl, eventuelt substituert med ett eller flere halogenatomer eller en trifluormetylgruppe eller Ra er valgt fra benzyl, tienyl, pyridyl, furyl, C3-C6cykloalkyl, lineær eller forgrenet C1-C6alkyl hvor alkylgruppen eventuelt er substituert med en dimetylaminogruppe eller Ra er 4-piperidinyl eventuelt substituert med 1-metyl; og Ri er - en rettkjedet eller forgrenet C3-C4alkyl, - en 4-piperidinylgruppe som i 1-stilling eventuelt er substituert med en lineær eller forgrenet C1-C6alkyl, C3-C6cykloalkyl eller acetyl, - en morfolinylgruppe eller - en piperazinylgruppe som i 1-stilling eventuelt er substituert med en lineær eller forgrenet C1-C6alkyl, fenyl eller acetyl; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
2. Forbindelse med formel (la) ifølge krav 1, hvori R er en gruppe -CORa hvor Ra er 4-fluorfenyl eller cyklobutyl.
3. Forbindelse ifølge krav 1 valgt blant: N-{6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-2,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}cyklobutankarboksamid; N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-fluorbenzamid; N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-2,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluorbenzamid; N-[5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-2,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluorbenzamid; og N-[5-[(4-metylpiperazin-1-yl)karbonyl]-2,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluorbenzamid; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
4. Forbindelse med formel (la) eller (Ib), ifølge krav 1, eventuelt i form av et farmasøytisk akseptabelt salt, valgt blant: N-[5-(piperidin-1-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluor-benzamid; N-[6,6-dimetyl-5-(piperidin-1 -karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4c]pyrazol-3-yl]-4-fluor-benzamid; N-[5-(4-metyl-piperidin-1-karbonyl)-1,4,5>6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluor-benzamid; N-[6,6-dimetyl-5-(4-metyl-piperidin-1-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4c]pyrazol-3-yl]-4-fluor-benzamid; N-[5-(morfolin-4-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3>4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluor-benzamid; N-[6,6-dimetyl-5-(morfolin-4-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4c]pyrazol-3-yl]-4-fluor-benzamid; N-[5-(4-metyl-piperazin-1-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluor-benzamid; N-[6,6-dimetyl-5-(4-metyl-piperazin-1-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-fluor-benzamid; N-[5-(4-metyl-piperazin-1-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-2,4-difluor-benzamid; N-[6,6-dimetyl-5-(4-metyl-piperazin-1-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-2,4-difluor-benzamid; 4-klor-N-[5-(4-metyl-piperazin-1-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-benzamid; 4-klor-N-[6, 6-dimetyl-5-(4-metyl-piperazin-1 -karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-benzamid; N-[5-(4-metyl-piperazin-1-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-trifluormetyl-benzamid; N-[6,6-dimetyl-5-(4-metyl-piperazin-1-karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-trifluormetyl-benzamid; cyklopropankarboksylsyre [5-(4-metyl-piperazin-1 -karbonyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-amid; cyklopropankarboksylsyre [6,6-dimetyl-5-(4-metyl-piperazin-1-karbonyl)-lAS^-tetrahydro-pyrroloIS^-clpyrazol-S-yQ-amid; N-(5-butyryl-6,6-dimetyl-1,4,5, 6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl)-4-fluorbenzamid; N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-fluorbenzamid; N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4c]pyrazol-3-yl]-4-fluor-benzamid; N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-3-fluor-benzamid; N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-2T4-difluor-benzamid; N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4c]pyrazol-3-yl]-3-fluor-benzamid; N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4c]pyrazol-3-yl]-2,4-difluor-benzamid; N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-3T5-difluor-benzamid; N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4c]pyrazol-3-yl]-3,5-difluor-benzamid; 4-klor-N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-benzamid; 4-klor-N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c] pyrazol-3-yl]-benzam id; N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-4-trifluormetyl-benzamid; N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4c]pyrazol-3-yl]-4-trifluormetyl-benzamid; tiofen-2-karboksylsyre [5-(2,2-dimetyl-propionyl)-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-amid; tiofen-2-karboksylsyre [5-(2,2-dimetyl-propionyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-amid; cyklopropankarboksylsyre [5-(2,2-dimetyl-propionyl)-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-amid; cyklopropankarboksylsyre [5-(2,2-dimetyl-propionyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-amid; N-[5-(2,2-dimetyl-propionyl)-1,4,5,6-tetrahydro-pyrrolo[3,4-c]pyrazol-6-spirocyklopropan-3-yl]-2,2-dimetyl-propionamid; N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-fluorbenzamid; N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c] pyrazol-3-yl]-3,5-d if luorbenzam id; N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]pyridin-3-karboksamid; N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]pyridin-4-karboksamid; N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c[pyrazol-3-yl]piperidin-4-karboksamid; N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-1-metylpiperidin-4-karboksamid; N-[5-(2,2-dimetylpropanoyl)-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-N2,N<2->dimetylglycinamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c[pyrazol-3-yl}-4-fluorbenzamid; N-[6,6-dimetyl-5-(piperidin-4-ylkarbonyl)-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl]-4-fluorbenzamid; N- {5-[(1-etylpiperidin-4-yl)karbonyl]-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4fluorbenzamid; N- {5-[(1-cyklopropylpiperidin-4-yl)karbonyl]-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-fluorbenzamid; N- {5-[(1-acetylpiperidin-4-yl)karbonyl]-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-fluorbenzamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c[pyrazol-3-yl}benzamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-3-fluorbenzamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrroloIS^-clpyrazol-S-ylJ-S^-difluorbenzamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrroloIS^-clpyrazol-S-ylJ-S^-difluorbenzamid; 4-klor-N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3yl}benzamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-(trifluormetyl)benzamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3yl}naftalen-2-karboksamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)carhonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}naftalen-1-karboksamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}pyridin-4-karboksamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c[pyrazol-3-yl}tiofen-2-karboksamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}tiofen-3-karboksamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}furan- 2-karboksamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c[pyrazol-3-yl}cyklopropankarboksamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c[pyrazol-3yl}cyklobutankarboksamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(1-metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-3-metylbutanamid; N-{5-[(1-etylpiperidin-4-yl)karbonyl]-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl)-3metylbutanamid; N- {5-[(1-cyklopropylpiperidin-4-yl)karbonyl]-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl)-3-metylbutanamid; N- {6,6-dimetyl-5-[(4-metylpiperazin-1-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl}-4-fluorbenzamid; N-{5-[(4-acetylpiperazin-1-yl)karbonyl]-6,6-dimetyl-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl)-4-fluorbenzarnid; N- {6,6-dimetyl-5-[(4-fenylpiperazin-1-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl)-4-fluorbenzamid;
1 -{6,6-dimetyl-5-[(1 -metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl)-3-(3-fluorfenyl)urinstoff;
1 -benzyl-3- {6,6-dimetyl-5-[(1 -metylpiperidin-4yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrolo[3,4-c]pyrazol-3yl}urinstoff; og 1 -{6,6-dimetyl-5-[(1 -metylpiperidin-4-yl)karbonyl]-1,4,5,6-tetrahydropyrrolo[3,4-c]pyrazol-3-yl)-3-propylurea.
5. Forbindelse med formel (la), ifølge krav 1 hvori R er en gruppe -CORa hvori Ra er cyklobutyl og Ri er 1-metyl-piperidyl-4-yl, enten som sådan eller i form av hydroklorid eller mesylatsalt.
6. Farmasøytisk preparat omfattende en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse med formel (la) eller (Ib), som definert i krav 1 og minst en farmasøytisk akseptabel eksesient, bærer og/eller fortynningsmiddel.
7. Forbindelse med formel (la) eller (Ib), som definert i krav 1, for anvendelse som et medikament.
8. Anvendelse av en forbindelse med formel (la) eller (Ib), som definert i krav 1, ved fremstilling av et medikament med antitumor aktivitet.
9. Anvendelse av en forbindelse med formel (la) eller (Ib), som definert i krav 1, ved fremstilling av medikamentet ifølge krav 6, hvor antitumoraktiviteten er for en tumor er valgt fra gruppen bestående av hematopoetiske tumorer med lymfoide opphav, hematopoetiske tumorer med myeloid opphav, tumorer av mesenkymalt opphav, tumorer i det sentrale og perifere nervesystem, melanomer, seminomer, teratokarsinomer, osteosarkomer, xeroderma pigmentosum, keratoxantoma, skjoldbruskkjertel follikulær kreft og Kaposis sarkom.
NO20052805A 2002-12-19 2005-06-09 Substituerte pyrrolo-pyrazolderivater, farmasoytiske preparater omfattende slike, slike forbindelser for anvendelse som medikament samt anvendelse av slike ved fremstilling av medikament med antitumor aktivitet NO333178B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US43495202P 2002-12-19 2002-12-19
PCT/EP2003/050942 WO2004056827A2 (en) 2002-12-19 2003-12-04 Substituted pyrrolo-pyrazole derivatives as kinase inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20052805L NO20052805L (no) 2005-07-14
NO333178B1 true NO333178B1 (no) 2013-03-25

Family

ID=32682128

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20052805A NO333178B1 (no) 2002-12-19 2005-06-09 Substituerte pyrrolo-pyrazolderivater, farmasoytiske preparater omfattende slike, slike forbindelser for anvendelse som medikament samt anvendelse av slike ved fremstilling av medikament med antitumor aktivitet

Country Status (34)

Country Link
US (5) US7407971B2 (no)
EP (2) EP2266987B1 (no)
JP (2) JP4739761B2 (no)
KR (2) KR20120038465A (no)
CN (1) CN1726217B (no)
AP (1) AP2005003343A0 (no)
AR (1) AR042525A1 (no)
AU (1) AU2003300255B9 (no)
BR (1) BR0317455A (no)
CA (1) CA2508069C (no)
CR (2) CR7880A (no)
CU (1) CU23550B7 (no)
EA (1) EA010596B1 (no)
EC (1) ECSP055864A (no)
ES (2) ES2605848T3 (no)
GE (1) GEP20084435B (no)
HK (1) HK1086256A1 (no)
HR (1) HRP20050562A2 (no)
IL (2) IL169019A (no)
IS (1) IS7857A (no)
MA (1) MA27569A1 (no)
ME (1) MEP52408A (no)
MX (1) MXPA05006791A (no)
MY (1) MY141196A (no)
NO (1) NO333178B1 (no)
NZ (1) NZ540644A (no)
OA (1) OA13015A (no)
PL (1) PL377285A1 (no)
RS (1) RS20050462A (no)
TN (1) TNSN05163A1 (no)
TW (1) TWI327470B (no)
UA (1) UA81790C2 (no)
WO (1) WO2004056827A2 (no)
ZA (1) ZA200504298B (no)

Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA03001169A (es) * 2000-08-10 2003-06-30 Pharmacia Italia Spa Biciclo-pirazoles activos como inhibidores de quinasa, proceso para su preparacion y composiciones farmaceuticas que comprenden los mismos.
UA81790C2 (uk) 2002-12-19 2008-02-11 Фармация Италия С.П.А. Заміщені піролопіразольні похідні як інгібітори кінази
AU2004215644B2 (en) 2003-02-27 2010-09-02 Palau Pharma, S.A. Pyrazolopyridine derivates
US20070037790A1 (en) * 2003-03-11 2007-02-15 Francesca Abrate Bicyclo-pyrazole derivatives active as kinase inhibitors, process for their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
EP1668013B1 (en) 2003-09-23 2012-02-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazolopyrrole derivatives as protein kinase inhibitors
EP1744751A4 (en) * 2004-03-18 2010-03-10 Brigham & Womens Hospital TREATMENT OF SYNUCLEINOPATHIES
WO2005089515A2 (en) * 2004-03-18 2005-09-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods for the treatment of synucleinopathies
US20050288298A1 (en) * 2004-03-18 2005-12-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods for the treatment of synucleinopathies
WO2005089504A2 (en) * 2004-03-18 2005-09-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods for the treatment of synucleinopathies
US20070293539A1 (en) * 2004-03-18 2007-12-20 Lansbury Peter T Methods for the treatment of synucleinopathies
US7713973B2 (en) 2004-10-15 2010-05-11 Takeda Pharmaceutical Company Limited Kinase inhibitors
CA2589274A1 (en) 2004-12-07 2006-06-15 Locus Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of protein kinases
CA2589271A1 (en) 2004-12-07 2006-06-15 Locus Pharmaceuticals, Inc. Urea inhibitors of map kinases
NZ556273A (en) 2005-01-10 2010-01-29 Pfizer Pyrrolopyrazoles, potent kinase inhibitors
US8119655B2 (en) 2005-10-07 2012-02-21 Takeda Pharmaceutical Company Limited Kinase inhibitors
SI1979356T1 (sl) * 2005-12-21 2013-11-29 Pfizer Products Inc. Karbonilamino pirolopirazoli, močni inhibitorji kinaze
MY151455A (en) * 2005-12-21 2014-05-30 Pfizer Prod Inc Carbonylamino pyrrolopyrazoles, potent kinase inhibitors
JP5250432B2 (ja) 2006-03-03 2013-07-31 ネルビアーノ・メデイカル・サイエンシーズ・エツセ・エルレ・エルレ キナーゼ阻害剤として活性なビシクロピラゾール
MX2009003793A (es) 2006-10-09 2009-12-14 Takeda Pharmaceutical Inhibidores de cinasa.
ATE514699T1 (de) * 2006-10-11 2011-07-15 Nerviano Medical Sciences Srl Substituierte pyrrolopyrazolderivate als kinaseinhibitoren
AP2009004958A0 (en) * 2007-02-07 2009-08-31 Pfizer 3-amino-pyrrolo [3,4-C] pyrazole - 5 (1H, 4H, 6H) carbaldehyde derivatives as PKC inhibitors
UA96618C2 (en) * 2007-02-07 2011-11-25 Пфайзер Инк. 3-amino-pyrrolo[3,4-c] pyrazole- 5 (1h, 4h, 6h) carbaldehyde derivatives as pkc inhibitors
CN101675052A (zh) * 2007-04-12 2010-03-17 辉瑞大药厂 作为蛋白酶c抑制剂的3-酰氨基-吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1h,4h,6h)甲醛衍生物
US8232402B2 (en) * 2008-03-12 2012-07-31 Link Medicine Corporation Quinolinone farnesyl transferase inhibitors for the treatment of synucleinopathies and other indications
US20110060005A1 (en) * 2008-11-13 2011-03-10 Link Medicine Corporation Treatment of mitochondrial disorders using a farnesyl transferase inhibitor
US20100331363A1 (en) * 2008-11-13 2010-12-30 Link Medicine Corporation Treatment of mitochondrial disorders using a farnesyl transferase inhibitor
MX2011005096A (es) * 2008-11-13 2011-11-18 Link Medicine Corp Derivados de azaquinolinona y usos de los mismos.
EP2519517B1 (en) 2009-12-29 2015-03-25 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Type ii raf kinase inhibitors
US9382239B2 (en) 2011-11-17 2016-07-05 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of c-Jun-N-terminal kinase (JNK)
EP2909194A1 (en) 2012-10-18 2015-08-26 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
US10000483B2 (en) 2012-10-19 2018-06-19 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Bone marrow on X chromosome kinase (BMX) inhibitors and uses thereof
US9758522B2 (en) 2012-10-19 2017-09-12 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hydrophobically tagged small molecules as inducers of protein degradation
EP3057956B1 (en) 2013-10-18 2021-05-05 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Polycyclic inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
AU2014337122B2 (en) 2013-10-18 2019-01-03 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Heteroaromatic compounds useful for the treatment of proliferative diseases
US9862688B2 (en) 2014-04-23 2018-01-09 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Hydrophobically tagged janus kinase inhibitors and uses thereof
US10017477B2 (en) 2014-04-23 2018-07-10 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Janus kinase inhibitors and uses thereof
AU2015263884B2 (en) * 2014-05-23 2019-11-14 Mingsight Pharmaceuticals, Inc. Treatment of autoimmune disease
KR102575327B1 (ko) * 2014-10-31 2023-09-07 유비이 가부시키가이샤 치환 디히드로피롤로피라졸 화합물
CA2972239A1 (en) * 2014-12-23 2016-06-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 (cdk7)
JP6861166B2 (ja) 2015-03-27 2021-04-21 ダナ−ファーバー キャンサー インスティテュート， インコーポレイテッド サイクリン依存性キナーゼの阻害剤
AU2016276963C1 (en) 2015-06-12 2021-08-05 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Combination therapy of transcription inhibitors and kinase inhibitors
MX2017016030A (es) 2015-06-15 2018-08-01 Ube Industries Derivado de dihidropirrolopirazol sustituido.
KR101845931B1 (ko) * 2015-06-18 2018-04-05 한국화학연구원 헤테로아릴 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 pi3 키나아제 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2017044858A2 (en) 2015-09-09 2017-03-16 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinases
AU2016355303B2 (en) * 2015-11-20 2021-10-07 Mingsight Pharmaceuticals, Inc. Treatment of autoimmune disease
JP2019112306A (ja) * 2016-04-28 2019-07-11 宇部興産株式会社 慢性閉塞性肺疾患の治療または予防のための医薬組成物
JP2019112305A (ja) * 2016-04-28 2019-07-11 宇部興産株式会社 アトピー性皮膚炎の治療または予防のための医薬組成物
JP2019112307A (ja) * 2016-04-28 2019-07-11 宇部興産株式会社 置換ジヒドロピロロピラゾール化合物および他の乾癬治療薬が組み合わせて投与される医薬組成物
CN107337674B (zh) * 2016-04-29 2019-09-20 江苏吉贝尔药业股份有限公司 用于dpp-iv抑制剂的四氢吡喃胺衍生物、其药物组合物和制剂以及用途
US20220002303A1 (en) 2018-11-14 2022-01-06 Ube Industries, Ltd. Dihydropyrrolopyrazole derivative
US20230242534A9 (en) * 2019-07-23 2023-08-03 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Inhibitors of cyclin-dependent kinase 7 and uses thereof
CN115073471B (zh) * 2021-03-11 2023-03-21 沈阳药科大学 吡唑并四氢吡咯类衍生物、其制备方法和在医药上的应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3526633A (en) * 1968-03-06 1970-09-01 American Cyanamid Co Substituted 2,4,5,6-tetrahydropyrrolo(3,4-c)pyrazoles
GB9911053D0 (en) 1999-05-12 1999-07-14 Pharmacia & Upjohn Spa 4,5,6,7-tetrahydroindazole derivatives process for their preparation and their use as antitumour agents
US6387900B1 (en) 1999-08-12 2002-05-14 Pharmacia & Upjohn S.P.A. 3(5)-ureido-pyrazole derivatives process for their preparation and their use as antitumor agents
EE200200065A (et) 1999-08-12 2003-04-15 Pharmacia Italia S.P.A. 3-aminopürasooli derivaadid, nende valmistamine ja kasutamine vähivastaste toimeainetena ning neid sisaldav farmatseutiline kompositsioon
MXPA03001169A (es) * 2000-08-10 2003-06-30 Pharmacia Italia Spa Biciclo-pirazoles activos como inhibidores de quinasa, proceso para su preparacion y composiciones farmaceuticas que comprenden los mismos.
US20040019046A1 (en) 2000-11-27 2004-01-29 Paolo Pevarello Phenylacetamido-pyrazole derivatives and their use as antitumor agents
CA2434066A1 (en) 2001-01-26 2002-09-12 Pharmacia Italia S.P.A. Chromane derivatives, process for their preparation and their use as antitumor agents
EP1820503B1 (en) 2001-09-26 2012-02-22 Pfizer Italia S.r.l. Aminoindazole derivatives active as kinase inhibitors, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
UA81790C2 (uk) * 2002-12-19 2008-02-11 Фармация Италия С.П.А. Заміщені піролопіразольні похідні як інгібітори кінази

Also Published As

Publication number Publication date
CR10370A (es) 2008-10-31
JP4739761B2 (ja) 2011-08-03
ES2605848T3 (es) 2017-03-16
MXPA05006791A (es) 2005-09-08
ES2635191T3 (es) 2017-10-02
AU2003300255B9 (en) 2010-03-04
EP1575954A2 (en) 2005-09-21
CA2508069C (en) 2012-05-22
KR20050085796A (ko) 2005-08-29
JP2006514026A (ja) 2006-04-27
AU2003300255B2 (en) 2009-10-29
KR101223826B1 (ko) 2013-01-17
JP2011144180A (ja) 2011-07-28
HK1086256A1 (en) 2006-09-15
CU23550B7 (es) 2010-07-20
EP2266987B1 (en) 2017-05-17
US20090082346A1 (en) 2009-03-26
KR20120038465A (ko) 2012-04-23
CR7880A (es) 2005-07-08
AR042525A1 (es) 2005-06-22
UA81790C2 (uk) 2008-02-11
BR0317455A (pt) 2005-11-16
ECSP055864A (es) 2005-09-20
EP2266987A1 (en) 2010-12-29
HRP20050562A2 (en) 2005-12-31
US8557845B2 (en) 2013-10-15
EA010596B1 (ru) 2008-10-30
WO2004056827A2 (en) 2004-07-08
OA13015A (en) 2006-11-10
NZ540644A (en) 2008-09-26
IS7857A (is) 2005-08-18
ZA200504298B (en) 2006-02-22
EA200501009A1 (ru) 2005-12-29
MA27569A1 (fr) 2005-10-03
CN1726217A (zh) 2006-01-25
TWI327470B (en) 2010-07-21
US8785448B2 (en) 2014-07-22
US7407971B2 (en) 2008-08-05
IL169019A (en) 2011-11-30
WO2004056827A3 (en) 2004-10-28
IL215617A0 (en) 2011-11-30
GEP20084435B (en) 2008-07-25
NO20052805L (no) 2005-07-14
RS20050462A (en) 2007-08-03
AU2003300255A1 (en) 2004-07-14
US20130017170A1 (en) 2013-01-17
TW200418461A (en) 2004-10-01
US20130344031A1 (en) 2013-12-26
MEP52408A (en) 2011-02-10
CA2508069A1 (en) 2004-07-08
US8481585B2 (en) 2013-07-09
PL377285A1 (pl) 2006-01-23
EP1575954B1 (en) 2016-08-03
TNSN05163A1 (fr) 2007-05-14
CN1726217B (zh) 2010-05-26
US20070004705A1 (en) 2007-01-04
MY141196A (en) 2010-03-31
US20130012507A1 (en) 2013-01-10
AP2005003343A0 (en) 2005-06-30
US8557857B2 (en) 2013-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO333178B1 (no) Substituerte pyrrolo-pyrazolderivater, farmasoytiske preparater omfattende slike, slike forbindelser for anvendelse som medikament samt anvendelse av slike ved fremstilling av medikament med antitumor aktivitet
EP1309590B1 (en) Azaindole derivatives, process for their preparation, and their use as antitumor agents
EP1202734B1 (en) 3(5)-ureido-pyrazole derivatives, process for their preparation and their use as antitumor agents
JP5415271B2 (ja) キナーゼ阻害剤としての置換ピロロ−ピラゾール誘導体
KR101084871B1 (ko) 피라졸로-퀴나졸린 유도체, 그의 제조 방법 및 상기유도체의 키나제 저해제로서의 용도
AU2009264431B2 (en) Pyrazolo-quinazolines
AU2001266079A1 (en) Azaindole derivatives, process for their preparation, and their use as antitumor agents

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees