CN101675052A

CN101675052A - 作为蛋白酶c抑制剂的3-酰氨基-吡咯并[3,4-c]吡唑-5(1h,4h,6h)甲醛衍生物

Info

Publication number: CN101675052A
Application number: CN200880014779A
Authority: CN
Inventors: I·伯特鲁斯; 洪玉峰; 李辉; K·K-C·刘; 贯井齐治; 滕敏; E·V·汤普金斯; 尹春风
Original assignee: SmithKline Beecham Ltd
Current assignee: SmithKline Beecham Ltd; Pfizer Inc
Priority date: 2007-04-12
Filing date: 2008-04-10
Publication date: 2010-03-17
Also published as: US20120108588A1; HK1207068A1; EP2195321B1; JP2010523643A; US20100249128A1; CA2683695A1; EP2195321A2; CA2683695C; JP5404601B2; CN104370914A; MX2009010951A; CN104370914B; KR101113387B1; IL201104A0; AU2008237660A1; CN104356136A; HK1207067A1; WO2008125945A2; US8114871B2; AU2008237660B2

Abstract

本发明涉及式(I)的化合物及其药学可接受的盐，其中X，R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶，R⁷和R⁸如说明书中定义的。本发明另外涉及包括所述化合物和药学可接受的盐的药物组合物以及治疗糖尿病及其并发症(特别是包括糖尿病性视网膜病、肾病和神经病)、癌症、缺血、炎症、中枢神经系统病症、心血管疾病、阿尔茨海默氏病和皮肤病压力、病毒病、炎症性病症、或其中肝脏为目标器官的疾病的方法。

Description

作为蛋白酶C抑制剂的3-酰氨基-吡咯并[3，4-C]吡唑-5(1H，4H，6H)甲醛衍生物

本申请要求2007年4月12日提交的美国临时申请60/911,462、2008年3月11日提交的美国临时申请61/035,519、和2008年3月27日提交的美国临时申请61/040,115的权益，所述申请被全文并入本文作为参考。

发明领域

本发明涉及新的化合物、包括所述化合物的药物组合物、以及所述化合物在药物中和用于制备药物的用途，所述药物作用于人的蛋白激酶C，特别是βII同工型(pkcβII)。

发明背景

蛋白激酶C(PKC)是与多重信号转导途径有关的脂质激活的Ser/Thr激酶超家族。已经识别了十三种PKC同工型并且根据它们受细胞信号分子例如甘油二酯、磷脂、和钙的调节分类。蛋白激酶C同工酶α、β(两种拼接变体PKCβI和PKCβII)和γ的完全活化需要膜磷脂、钙和二酰基甘油佛波醇(diacylglycerolphorbol)酯。PKC的δ、ε、η、θ形式的活化模式是独立于钙的。PKC的ξ和λ形式对钙和甘油二酯都是不依赖的，并且认为其活化只需要膜磷脂。

PKC同工型的组织特异性表达和活化提示，单独的PKC同工型可能是潜在的治疗靶标。对于糖尿病来说，已经在糖尿病患动物的组织中证明了PKC-β的活化，并且涉及与高血糖状态有关的微血管异常的进展。在II型糖尿病的日本患者中，已经在PKCβ基因的5’-侧上游区域确定了遗传多态性。这种PKCβ遗传变异与发展为糖尿病性血管并发症和大血管疾病例如冠心病的敏感性显著增加有关。

在Joslin Diabetes Center进行的大的病例对照研究中，在PKCβ启动子区域确定了另外的多形性，其伴随有I型糖尿病(持续时间＜24年)和糖尿病性肾病发展的更大危险。在糖尿病动物模型中给予PKCβ抑制剂例如甲磺酸芦波妥林(LY333531，Lilly)表现出预防或改善与糖尿病性肾病、糖尿病性外周神经病、和糖尿病性视网膜病有关的血液动力学改变和血管损害。Way，K.J.等人，Diabet.Med.18：945-959(2001)；Vinik，A.，Expert Opin.Investig.Drugs 14：1547-1559(2005)。与得自甲磺酸芦波妥林用于治疗糖尿病和糖尿病性微血管并发症的II期和III期临床研究的另外的数据一起，有充实的证据支持如下的理论：PKCβ可以起糖尿病并发症的分子靶标的作用并且用于开发选择性的PKCβ抑制剂作为可能的治疗剂。

本发明的化合物是蛋白激酶CβII抑制剂，因此被认为可用于治疗与糖尿病及其并发症、癌症、缺血、炎症、中枢神经系统病症、心血管疾病和皮肤疾有关的病况。

发明内容

本发明涉及式(I)的化合物或药学可接受的盐或溶剂合物，

X是C或N；

R¹选自芳基或者

其中环A是含有Z的5至6元杂环基，其中Z是O，S或N杂原子，其与连接点毗邻，且其中R¹任选地进一步用0至3个R⁹基团取代，并且其中R⁹基团中的两个可以任选环化形成芳基或含有N或S的5-6元杂环，其稠合到其所连接的所述的芳基或杂环基上；

R²是H或任选进一步用0至3个R⁹基团取代的C₁-C₆烷基；

R³可以连接到环上的任何不饱和碳上，并且选自H，C₁-C₆烷基或卤素，或全氟烷基；

R⁴和R⁵各自独立地选自H，R^a-O-R^b，C₁-C₈烷基，C₂-C₈链烯基，C₂-C₈炔基，-(R^d)_m-(C₃-C₁₂环烷基)，-(R^d)_m-芳基，-(R^d)_m-(3-15元杂环基)，-(R^d)_m-(C₁-C₆全氟烷基)，-(R^d)_m-卤素，-(R^d)_m-CN，-(R^d)_m-C(O)R^a，-(R^d)_m-C(O)OR^a，-(R^d)_m-C(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-OR^a，-(R^d)_m-OC(O)R^a，-(R^d)_m-OC(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-O-S(O)R^a，-(R^d)_m-OS(O)₂R^a，-(R^d)_m-OS(O)₂NR^aR^b，-(R^d)_m-OS(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-NO₂，-(R^d)_m-NR^aR^b，-(R^d)_m-N(R^a)C(O)R^b，-(R^d)_m-N(R^a)C(O)OR^b，-(R^d)_m-N(R^c)C(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-N(R^a)S(O)₂R^b，-(R^d)_m-N(R^a)S(O)R^b，-(R^d)_m-SR^a，-(R^d)_m-S(O)R^a，-(R^d)_m-S(O)₂R^a，-(R^d)_m-S(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-S(O)₂NR^aR^b，-(R^d)_m-O-(R^e)_m-NR^aR^b或-(R^d)_m-NR^a-(R^e)-OR^b，或R⁴和R⁵可以一起环化形成3-至-5-元螺-环烷基；其中所述的C₃-C₁₂环烷基，芳基，杂环基，或杂芳基中的任何基团独立地任选进一步被0至3个R₉基团取代；

R⁶选自H，R^a-O-R^b，C₁-C₈烷基，C₂-C₈链烯基，C₂-C₈炔基，-(R^d)_m-(C₃-C₁₂环烷基)，-(R^d)_m-芳基，-(R^d)_m-(3-15元杂环基)，-(R^d)_m-(C₁-C₆全氟烷基)，-(R^d)_m-卤素，-(R^d)_m-CN，-(R^d)_m-C(O)R^a，-(R^d)_m-C(O)OR^a，-(R^d)_m-C(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-OR^a，-(R^d)_m-OC(O)R^a，-(R^d)_m-OC(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-O-S(O)R^a，-(R^d)_m-OS(O)₂R^a，-(R^d)_m-OS(O)₂NR^aR^b，-(R^d)_m-OS(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-NO₂，-(R^d)_m-NR^aR^b，-(R^d)_m-N(R^a)C(O)R^b，-(R^d)_m-N(R^a)C(O)OR^b，-(R^d)_m-N(R^c)C(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-N(R^a)S(O)₂R^b，-(R^d)_m-N(R^a)S(O)R^b，-(R^d)_m-SR^a，-(R^d)_m-S(O)R^a，-(R^d)_m-S(O)₂R^a，-(R^d)_m-S(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-S(O)₂NR^aR^b，-(R^d)_m-O-(R^e)_m-NR^aR^b或-(R^d)_m-NR^a-(R^e)-OR^b；或R⁶可以与R⁴一起环化形成4-至7-元杂环，其稠合到它们所连接的哌嗪或哌啶(piperadine)上；且其中所述的烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，杂环基，和杂芳基中的任何基团可以独立地进一步用0至3个R⁹基团取代；

R⁷和R⁸各自独立地是C₁-C₂烷基或可以一起环化形成环丙基或环丁基；

R⁹各自独立地选自H，R^a-O-R^b，C₁-C₈烷基，C₂-C₈链烯基，C₂-C₈炔基，-(R^d)_m-(C₃-C₁₂环烷基)，-(R^d)_m-芳基，-(R^d)_m-(3-15元杂环基)，-(R^d)_m-(C₁-C₆全氟烷基)，-(R^d)_m-卤素，-(R^d)_m-CN，-(R^d)_m-C(O)R^a，-(R^d)_m-C(O)OR^a，-(R^d)_m-C(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-OR^a，-(R^d)_m-OC(O)R^a，-(R^d)_m-OC(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-O-S(O)R^a，-(R^d)_m-OS(O)₂R^a，-(R^d)_m-OS(O)₂NR^aR^b，-(R^d)_m-OS(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-NO₂，-(R^d)_m-NR^aR^b，-(R^d)_m-N(R^a)C(O)R^b，-(R^d)_m-N(R^a)C(O)OR^b，-(R^d)_m-N(R^c)C(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-N(R^a)S(O)₂R^b，-(R^d)_m-N(R^a)S(O)R^b，-(R^d)_m-SR^a，-(R^d)_m-S(O)R^a，-(R^d)_m-S(O)₂R^a，-(R^d)_m-S(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-S(O)₂NR^aR^b，-(R^d)_m-O-(R^e)_m-NR^aR^b或-(R^d)_m-NR^a-(R^e)-OR^b；且其中所述的烷基，链烯基，炔基，R^d，R^e，C₃-C₁₂环烷基，芳基或3-15元杂环基的任何基团独立地任选进一步被1-3个基团取代，所述基团选自-卤素，C₁-C₆烷基，C₁-C₆全氟烷基，C₁-C₆烷氧基，C₁-C₆烷基氨基，CN或氧代；

R^a，R^b和R^c各自独立地选自H，C₁-C₆全氟烷基，C₁-C₈烷基，C₂-C₈链烯基，-(C₁-C₃亚烷基)_m-(C₃-C₈环烷基)，-(C₁-C₃亚烷基)_m-(C₃-C₈环链烯基)，C₂-C₈炔基，-(C₁-C₃亚烷基)_m-芳基，或-(C₁-C₃亚烷基)_m-(3-8元杂环基)，且R^a，R^b和R^c各自独立地任选进一步被0至3个基团取代，所述基团选自卤素，羟基，-CN，C₁-C₆烷基，C₁-C₆全氟烷基，C₁-C₆烷氧基和C₁-C₆烷基氨基；或者，当连接于相同的氮时，R^a和R^b可以任选形成-(3-8元杂环基)，且所述的环任选进一步被0至3个基团取代，所述基团选自卤素，羟基，-CN，C₁-C₆烷基，C₁-C₆全氟烷基，C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆烷基氨基；

R^d和R^e各自独立地是-(C₁-C₃亚烷基)-，-(C₂-C₅亚烯基)-，或者-(C₂-C₅亚炔基)-；

m各自独立地是0或1；且

条件是R²，R³，R⁴和R⁵不全是H。

在本发明的一个实施方式中，R⁷和R⁸都是甲基。

在本发明的另一个实施方式中，X是N。在本发明的可选实施方式中，X是C且连接在R³上。

在本发明的一个实施方式中，Z是N。

在本发明的又另一个实施方式中，R³是氟。在本发明的可选实施方式中，R³是H，且R²，R⁴或R⁵的至少一个是C₁-C₆烷基。

在本发明的又另一个实施方式中，R¹是芳基。在本发明的可选实施方式中，R¹是吡啶。

在本发明的一个实施方式中，R²或R⁴是甲基。

在本发明的另一个实施方式中，R⁶和R⁴环化形成4-至7-元杂环，其稠合到它们所连接的哌嗪上，且其中所述的杂环基可以独立地进一步被取代。

Xxx

在另一个实施方式中，其中R¹是6-元杂环基。在该实施方式的另一方面，R¹是吡啶或哌嗪。

在另一个实施方式中，R¹是5-元杂环基。在该实施方式的另一方面，R¹选自噁唑，异噁唑，噻唑或咪唑。

在另一个实施方式中，R²或R⁴是甲基。

在另一个实施方式中，R⁶是-(R^d)_m-(3-15元杂环基)。在该实施方式的另一方面，R⁶是-(R^d)_m四氢吡喃。在该实施方式的另一方面，R⁶是四氢-2H-吡喃-4-基甲基。

在一个可选的实施方式中，R⁶是-(R^d)_m-OR^a。

在另一个实施方式中，R²是(S)构型的-CH₃。在该实施方式的另一方面，R^d是-(C₁-C₃亚烷基)-且R^a是H或甲基。

本发明包括下面的化合物或其药学上可接受的盐：

N-(5-((2R，5S)-2，5-二甲基-1-((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)哌嗪-4-羰基)-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)吡啶酰胺；

N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-5-氟吡啶-2-甲酰胺；

N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-5-乙基异噁唑-3-甲酰胺；

N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-2，4-二甲基-1，3-噁唑-5-甲酰胺；

N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-2-甲基-1，3-噻唑-4-甲酰胺；

N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-2-乙基-4-甲基-1，3-噁唑-5-甲酰胺；

1-环丁基-N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺；

N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-1-异丙基-1H-咪唑-4-甲酰胺；

N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-2-乙基-1，3-噁唑-4-甲酰胺；

N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-5-吗啉-4-基吡啶-2-甲酰胺；以及

N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-甲酰胺。

本发明另外涉及药物组合物，其包括有效量的前述权利要求中任一项的化合物或其药学可接受的盐、和药学可接受的载体。

本发明另外包括一种方法，用于治疗糖尿病及其并发症、癌症、缺血、炎症、中枢神经系统病症、心血管疾病、阿尔茨海默氏病和皮肤病压力(dermatological disease pression)、病毒病、炎性病症、或其中肝脏为靶器官的疾病，所述方法包括对哺乳动物给予有效量的前述式I的化合物或其药学可接受的盐。在本发明的另一方面，治疗方法涉及眼睛并发症。在本发明的又另一个方面中，所述糖尿病并发症包括糖尿病性视网膜病(包括糖尿病性黄斑水肿)、肾病和神经病。

定义

如本文中使用的，术语“包括”和“包含”以其开放的非限制性含义使用。

术语″烷基″，如本文中使用的，除非另有说明，包括具有直链或支链部分的饱和的单价烃基。

术语″烯基″，如本文中使用的，除非另有说明，包括具有至少一个碳-碳双键的烷基部分，其中所述烷基如上述定义的，并且包括所述烯基部分的E和Z异构体。

术语″炔基″，如本文中使用的，除非另有说明，包括具有至少一个碳-碳三键的烷基部分，其中所述烷基如上述定义的。

术语″烷氧基″，如本文中使用的，除非另有说明，包括O-烷基，其中烷基如上述定义的。

术语“氨基”，如本文中使用的，除非另有说明，意在包括-NH₂基团，以及在N原子上的任何取代作用。

术语“卤素”和“卤代”，如本文中使用的，除非另有说明，表示氯、氟、溴或碘。

术语“三氟甲基”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示-CF₃基团。

术语“全氟烷基”，如本文中使用的，意在表示烷基基团，其中所有与碳连接的氢都被氟代替，例如CF₃、CF₂-CF₃、C(CF₂)(CF₂)等。

术语“三氟甲氧基”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示-OCF₃基团。

术语“氰基”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示-CN基团。

术语“CH₂Cl₂”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示二氯甲烷。

术语“C₃-C₁₂环烷基”或“C₅-C₈环烷基”，如本文中使用的，除非另有说明，是指本文中所述的非芳香族的、饱和或部分饱和的、单环或稠合的、螺环或未稠合的二环或三环烃，分别包含总共3-12个碳原子/或5-8个环碳原子。示例性的环烷基包括具有3-10个碳原子的环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、和金刚烷基。说明性的环烷基的实例衍生自以下结构，但不限于以下结构：

术语″芳基″，如本文中使用的，除非另有说明，包括通过从芳香族烃除去一个氢衍生的有机基，例如苯基或萘基。

术语“(3-15)-元杂环基”、″(3-8)-元杂环基″、″(6-10)-元杂环基″、或″(4-10)-元杂环基″，如本文中使用的，除非另有说明，包括包含一到四个各自选自O、S和N的杂原子的芳香族和非芳香族杂环基团，其中每个杂环基团分别在其环状系统中具有3-15、3-8、6-10、或4-10个原子，条件是所述基团的环不包含两个相邻的O或S原子。非芳香族的杂环基团包括在其环状系统中只有3个原子的基团，但是芳香族的杂环基团必需在其环状系统中具有至少5个原子。所述杂环基团包括苯并稠合的环状系统。3元杂环基团的实例为氮丙啶，4元杂环基团的实例为氮杂环丁基(衍生自氮杂环丁烷)。5元杂环基团的实例为噻唑基，7元环的实例为氮杂

基，10元杂环基团的实例为喹啉基。非芳香族杂环基团的实例为吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶子基、吗啉代、硫代吗啉代、噻噁烷基、哌嗪基、氮杂环丁基、氧杂环丁基、硫杂环丁基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基(thiepanyl)、氧氮杂环庚烷基、二氮杂基、硫氮杂

基、1，2，3，6-四氢吡啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、二氧杂环己烷基、1，3-二氧杂环戊烷基、吡唑啉基、二硫杂环己烷基、二硫杂环戊烷基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己烷基、3-氮杂双环[4.1.0]庚烷基、3H-吲哚基和喹嗪基。杂环包括单环和多环的芳族环结构，“(5-12)-元杂芳基”是指在环状系统中具有5-12个原子的杂环的杂芳基。“(5-12)-元杂芳基”的实例为吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、1，2-二氮杂萘基、吲唑基、中氮茚基、2，3-二氮杂萘基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、喋啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，5-二氮杂萘基、和呋喃并吡啶基。前述基团，例如衍生自上述列举的基团的那些，可以是C-连接的或在可能时为N-连接的。例如，衍生自吡咯的基团可以是吡咯-1-基(N-连接的)或吡咯-3-基(C-连接的)。另外，衍生自咪唑的基团可以是咪唑-1-基(N-连接的)或咪唑-3-基(C-连接的)。上述杂环基团可以任选地在每个环的任何环碳、环硫、或环氮原子上被一到两个氧代基团取代。其中2个环碳原子被氧代部分取代的杂环基团的实例为1，1-二氧代-硫代吗啉基。4-10元杂环基的其它说明性实例衍生自以下杂环，但不限于以下杂环：

术语″(12-15)-元杂环基″，如本文中使用的，除非另有说明，包括部分稠合或螺环构造的芳香族和非芳香族杂环基团，并且其包含至少一个N和任选的另外的1-5个各自选自O、S和N的杂原子，其中杂环基团在其环状系统中分别具有12-15个原子，条件是所述基团的任何环都不包含两个相邻的O或S原子。所述杂环基团包括三环稠环和螺环系统。13元三环螺环杂环基团的实例为3，4-二氢吡嗪并[1，2-a]苯并咪唑，15-元三环螺环杂环基团的实例为3，4-二氢-1’H-螺色烯(spirochromene)。

除非另有说明，术语“氧代”是指＝O。

“溶剂合物”意在表示具体化合物的药学可接受的溶剂合物形式，其保留了这种化合物的生物有效性。溶剂合物的实例包括与以下溶剂结合的本发明化合物：水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO(二甲基亚砜)、乙酸乙酯、乙酸、或乙醇胺。

短语″药学可接受的盐″，如本文中使用的，除非另有说明，包括可能存在于式I的化合物中的酸性或碱性基团的盐。性质上为碱性的式I的化合物能够与各种无机酸和有机酸形成各种各样的盐。可以用于制备式I的这种碱性化合物的药学可接受的酸加成盐的酸为形成无毒的酸加成盐的那些，所述无毒的酸加成盐即包含药理学可接受的阴离子的盐，例如乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙盐、右旋樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、柠檬酸盐、二盐酸盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托酸盐、乙磺酸盐、乙基琥珀酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰基对氨基苯基砷酸盐(glycollylarsanilate)、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、哈胺(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、碘化物、异硫代硫酸盐(isothionate)、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、棕榈酸盐、泛酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、茶氯酸盐、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物(triethiodode)、和戊酸盐。

术语″治疗(treating)″，如本文中使用的，除非另有说明，意思是逆转、减轻、抑制应用这种术语的病症或病况或这种病症或病况的一种或多种症状的进展、或预防所述病症或病况或这种病症或病况的一种或多种症状。术语″治疗(treatment)″，如本文中使用的，除非另有说明，是指进行“治疗(treating)”的行为，该治疗如上述刚刚定义的。

短语″治疗有效量″，如本文中使用的，是指引起研究人员、兽医、医生或其它人所寻求的组织、系统、动物、或人的生物学或医学应答的药物或药物制剂的量。

术语“取代的”是指所说明的基团或部分带有一个或多个取代基。术语“未被取代的”是指所说明的基团没有带有取代基。术语“任选地被取代的”是指所说明的基团为未被取代的或被一个或多个取代基取代。

根据惯例，在本文的一些结构式中，没有明确地示出碳原子和它们所结合的氢原子例如，

表示甲基基团，

表示乙基基团，

表示环戊基基团，等等。常规的

表示连接在化合物的残余部分的点，常规的

表示R取代基可以连接在给定结构上的可行的任意原子上，除非另有说明，在此作为环己基给出。在特定的实施方式中，

R³可以连接到该杂环的任意该杂原子上，如果X是C包括X。在特定的吡唑并中间体实施方式中，

该酰基可以连接到该稠合的吡唑环的两个氮原子的任一个上。

某些式I的化合物可以具有不对称中心，并且因此以不同的对映体形式存在。式I的化合物的所有旋光异构体和立体异构体、及其混合物都被认为是在本发明范围内。关于式I的化合物，本发明包括其外消旋物、一种或多种对映体形式/一种或多种非对映体形式、或其混合物的用途。所述式I的化合物还可以作为互变异构体存在。本发明涉及所有这种互变异构体及其混合物的用途。

包含在本发明的化合物内的某些官能团可以被生物等排基团代替，所述生物等排基团即具有与母体基团相似的空间或电子需要但是表现出不同或改善的物理化学或其它性能的基团。适合的实例为本领域技术人员公知的，包括但不限于在Patini等人，Chem.Rev，1996，96，3147-3176以及其中引用的参考文献中描述的部分。

本发明还包括同位素标记的化合物，其与式I中所述的化合物相同，不同之处在于一个或多个原子被具有原子质量或质量数与通常在自然界中发现的原子质量或质量数不同的原子所代替。可以被并入到本发明中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。包含上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明的化合物和所述化合物的药学可接受的盐或溶剂合物在本发明范围内。某些同位素标记的本发明化合物，例如其中并入有放射性同位素例如³H和¹⁴C的那些，可用于药物和/或底物组织分布测定。氚化的(即，³H)和碳14(即，¹⁴C)同位素由于容易制备和可检测性是特别优选的。另外，用重同位素例如氘(即，²H)取代可以提供来源于更大代谢稳定性的某些治疗利益，例如延长体内半衰期或降低剂量需要，因此在一些情况中是优选的。本发明的同位素标记的式I的化合物通常可以通过实施以下反应路线和/或实施例中公开的操作通过用容易得到的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备。

术语“mmol”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示毫摩尔。术语“equiv”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示当量。术语“mL”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示毫升。术语“U”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示单位。如本文中使用的术语“mm”，除非另有说明，意在表示毫米。术语“g”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示克。术语“kg”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示千克。术语“h”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示小时。术语“min”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示分钟。术语“μL”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示微升。术语“μM”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示微摩尔。术语“μm”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示微米。术语“M”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示摩尔。术语“N”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示正相的。术语“nm”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示纳米。术语“nM”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示纳摩尔。术语“amu”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示原子质量单位。术语“℃”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示摄氏度。术语“m/z”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示质量/电荷比。术语“wt/wt”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示重量/重量。术语“v/v”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示体积/体积。术语“mL/min”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示毫升/分钟。术语“UV”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示紫外线。术语“APCI-MS”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示大气压力化学电离质谱法。术语“HPLC”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示高效液相色谱法。色谱法在约20℃的温度下进行，除非另有说明。术语“LC”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示液相色谱法。术语“LCMS”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示液相色谱-质谱法。术语“TLC”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示薄层色谱法。术语“SFC”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示超临界流体色谱法。术语“sat”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示饱和的。术语“aq”，如本文中使用的，意在表示含水的。术语“ELSD”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示蒸发光散射检测。术语“MS”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示质谱法。术语“HRMS(ESI)”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示高分辨质谱法(电喷射离子化)。术语“Anal.”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示分析值。术语“Calcd”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示计算值。术语“N/A”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示未检测到。术语“RT”或者“rt”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示室温。术语“Mth.”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示方法。术语

，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示白色固体硅藻土过滤剂，购自位于美国加利福尼亚州洛杉矶的World Minerals。术语“Eg.”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示例如。

术语“K_i”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示酶抑制常数的值。术语“K_i app”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示表观的K_i。术语“IC₅₀”，如本文中使用的，除非另有说明，意在表示用于至少50％酶抑制作用所需的浓度。

本发明的其它方面、优点、和特征从以下发明详述来看变得显而易见。

发明详述

以下反应路线举例说明本发明化合物的制备方法。除非另有说明，在反应路线和随后的讨论中的R¹到R¹²和R^a到R^e如上述定义的。

详细描述

通式I化合物可以根据反应路线1到反应路线5中的合成路线制备。在下列方案和实施例中，术语“BOC”、“Boc”或“boc”表示N-叔丁氧基羰基；“BOP”表示苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐，“DCM”表示CH₂Cl₂；DIPEA(也称为Hunig’s碱)表示二异丙基乙基胺；“DMA”表示二甲胺；″DMF″表示二甲基甲酰胺；“DMSO″表示二甲基亚砜；“Me”表示-CH₃；“Et”表示-CH₂CH₃；″MTBE″表示甲基叔丁基醚；TEA表示三乙胺；TFA表示三氟乙酸；THF表示四氢呋喃，以及“SEM″表示2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基，“HATU”表示2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐。

反应路线1(吡咯并[3，4-C]吡唑中间体)

反应路线1举例说明用于制备式I的化合物的中间体I(A)至I(G)的合成方法。将被取代的氨基酸I(A)的氨基基团烷基化，得到化合物I(B)。这典型地可以在碱的存在下用烷化剂处理化合物I(A)来进行。通常使用的烷化剂是活化的亲电子性双键部分。用活化的亲电子性双键部分烷基化I(A)的典型的反应条件是在强碱的存在下用活化的双键部分处理I(A)。随后进行含水后处理，得到化合物I(B)。然后用boc基团保护化合物I(B)的氨基，得到化合物I(C)。这典型地可以在碱的存在下用Boc试剂处理化合物I(B)来进行。典型的条件是在溶剂MeCN中在Me₄NOH的存在下用(Boc)₂O处理化合物I(B)。然后将化合物I(C)的羧酸基团转化为化合物I(D)的甲基酯。将羧酸基团转化为甲基酯的典型的条件是在碱的存在下在DMF中用碘甲烷处理I(C)。化合物I(D)然后经过分子内的醛醇缩合，得到化合物I(E)。这典型地可以在非质子性溶剂中用强碱处理化合物I(D)来进行。典型的条件是在甲苯中用t-BuOK处理化合物I(D)。随后进行含水后处理，得到化合物I(E)。化合物I(E)然后与肼部分进行2+3环化，形成化合物I(F)。环化的典型条件是使化合物I(E)与肼和乙酸在EtOH中回流。然后将化合物I(F)的游离碱吡唑氮酰化，得到化合物I(G)。酰化作用的典型条件是在THF中用氯代甲酸乙酯(chloro ethyl carbonate)处理化合物I(F)。如上述结构I(G)所示，酰基可以连接在吡唑的任一个氮上。

用于反应路线1的中间体I(G)的更详细合成条件可以在美国专利申请公布2003/0171357和PCT公布WO 02/12242中找到，其公开内容被并入本文作为参考。

反应路线2(途径A-D)

反应路线2举例说明了可以从中间体I(G)得到式I的化合物的几条途径。取代基R¹，R⁷和R⁸如上述式I所定义。术语“Het”是如

所定义的哌嗪或哌啶杂环基团。在反应路线2的一个途径中，化合物I(G)经历与R¹亲电子试剂部分进行的亲核反应。所述亲核反应可以是由胺官能度进行的任一的酰化。典型的酰化反应条件是在溶剂例如二氯甲烷中在碱例如2当量DIPEA的存在下用酰化剂例如R¹-COCl处理化合物I(G)。将反应混合物在0℃至室温之间的温度搅拌约12小时。随后进行含水后处理，得到化合物II(A)。然后除去化合物II(A)的吡咯氮上的Boc基团，得到化合物II(B)。这典型地可以通过用强酸处理II(A)来进行。典型的反应条件是用含4N HCl的二氧杂环己烷和DCM处理化合物II(A)。随后进行含水后处理，得到化合物II(B)。然后将化合物II(B)的吡咯NH转化为氯甲酸酯II(C)。这典型地可以使用光气、三光气、或一些其它等价物来进行。典型的反应条件是在0℃在DCM中用2当量的三光气处理II(B)四小时。随后用饱和NaHCO₃进行温和碱性的后处理和纯化，得到化合物II(C)。然后用亲核试剂部分处理化合物II(C)。所述亲核试剂可以是可以与亲电子试剂II(C)反应的任意胺。典型的反应涉及在溶剂例如THF在1当量碱例如DIPEA的存在下用亲核试剂例如1.5当量的胺处理II(C)。随后在质子性溶剂例如甲醇中在碱例如TEA的存在下进行乙氧基羰基基团的脱保护，然后纯化得到式I化合物。

或者，然后化合物II(B)可以与Het亲电子试剂进行亲核反应，得到化合物II(D)。用于这种转化所进行的亲核反应可以是酰化。II(B)得到II(D)的酰化反应通过在碱的存在下用酰化试剂处理化合物II(B)来进行。典型的反应条件是将化合物II(B)与过量的碱例如DIPEA在DCM中混合然后在0℃将得到的溶液添加到酰基氯中。将反应在室温搅拌约2小时，随后进行含水后处理，得到化合物II(D)。除去化合物II(D)的吡唑氮上的乙氧基羰基保护基，得到式I的化合物。这典型地可以通过用碱处理化合物II(D)来进行。典型的反应条件是在碱例如TEA的存在下，在质子溶剂例如甲醇中处理化合物III(B)，或者在2-3当量的NaOH的存在下在室温在MeOH中处理化合物II(D)。随后的含水后处理得到式I的化合物。

在反应路线2的可选途径中，除去吡咯氮上的Boc基团，得到化合物III(A)。反应典型地可以通过用强酸处理化合物I(G)来进行。典型的反应条件是用含4N HCl的二氧杂环己烷和DCM处理化合物I(G)。随后的含水后处理得到化合物III(A)。或者，然后化合物III(A)可以与Het亲电子试剂进行亲核反应，得到化合物III(B)。由于与化合物III(A)的吡唑所连接的-NH₂基团的反应性低于III(A)的吡咯氮，所以可以在无需保护化合物III(A)的吡唑-NH₂基团的情况下进行III(A)到III(B)的转化。用于这种转化所进行的亲核反应可以是酰化。为了实现反应选择性，优选相对温和的反应条件。III(A)得到III(B)的酰化反应通过在碱的存在下用酰化试剂处理化合物III(A)来进行。典型的反应条件是将化合物III(A)与过量的碱例如DIPEA在DCM中混合并且在0℃将得到的溶液添加到酰基氯中。将反应混合物在0℃保持约二小时，随后进行含水后处理，得到化合物III(B)。

然后，化合物III(B)进行与R¹亲电子试剂部分的亲核反应。所述亲核反应可以是胺官能度进行的酰化。典型的酰化反应条件是在溶剂例如二氯甲烷中在碱例如2当量DIPEA的存在下用酰化剂例如RCOCl处理化合物III(B)。随后进行含水后处理，得到化合物III(C)。化合物III(C)的吡唑氮上的乙氧基羰基保护基典型地用碱除去，得到化合物I的游离碱。典型的反应条件是在质子性溶剂例如甲醇中将化合物III(C)与TEA混合，随后进行纯化，得到式I的化合物。

或者，除去化合物III(B)的吡唑氮上的乙氧基羰基保护基，得到化合物III(D)的游离碱。这典型地可以通过用碱处理化合物III(B)来进行。典型的反应条件是使化合物III(B)在2-3当量的LiOH的存在下在二氧杂环己烷和DCM中回流。随后的含水后处理得到化合物III(D)。然后，化合物III(D)进行与R¹亲电子试剂部分的亲核反应。所述亲核反应可以是胺官能度进行的酰化。典型的酰化反应条件是在溶剂例如二氯甲烷中在碱例如2当量DIPEA的存在下用酰化剂例如R¹-COCl处理化合物III(D)。将反应混合物搅拌四小时，随后进行含水后处理和纯化，得到式I的化合物。

在与前述途径B相似的方法中，式I化合物也可以通过下述途径3的方法来合成。

反应路线3(途径E)

反应路线4(哌嗪中间体)

中间体V(B)通过将V(A)(267g，3mol)于二噁烷(6L)中的溶液，H₂O(3L)和1M NaOH(3L)混合并且在冰-水浴中冷却来制备。在0-10℃加入Boc₂O(720g，3mol)并且在室温继续搅拌过夜。在真空中除去溶剂。将3LH₂O加入使残余物溶解。所得的溶液冷却到0-5℃且用1N HCl酸化到pH＝3。所得的溶液用乙酸乙酯(1.5L×3)提取。合并有机相在Na₂SO₄上干燥并且浓缩得到化合物V(B)(465g，82％)，作为白色固体。(R^a＝CH₃：¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ11.30(br，1H)，6.90(br，0.5H)，5.10(br，0.5H)，4.50-4.00(m，1H)，1.40(m，12H))

在下一步骤中，通过把NaH(200g，5mol)在2.5L无水THF中混悬并且冷却该混合物到-10-0℃随后制备中间体V(C)。在-10-0℃下逐滴加入V(B)(94.5g，0.5mol)在800mL无水THF的溶液。加入后，在-10-0℃搅拌混合物30分钟。然后在-10-0℃逐滴加入BnBr(478mL，4mol)。在室温搅拌反应混合物60小时。混合物小心倾倒入3L冰水中。所得的溶液用1.5L二乙基醚洗涤。水相在0-5℃用2N HCl水溶液酸化到pH＝3-4并用二乙基醚(1.5L×2)提取。合并的有机层在Na₂SO₄干燥并在真空蒸发得到化合物V(C)(115g，84％)，作为黄色的固体。(R^z＝CH₃：¹HNMR(400MHz，CDCl3)δ9.50(br，1H)，7.38(m，5H)，4.63-3.95(m，3H)，1.51(m，12H))。

在单独的反应中，中间体试剂V(E)通过将V(D)(100g，1.12mol)悬浮到1L MeOH中来制备。混合物冷却到0-5℃。在0-5℃逐滴加入50mL SOCl₂。然后将反应混合物在rt搅拌24小时。该混合物在真空蒸发得到化合物V(E)(141g，90％)，作为白色的固体。

中间体V(F)通过V(C)和V(E)制备。化合物V(C)(100g，0.358mol)和DIPEA(138g，1.07mol)溶解到900mL DMF中。混合物冷却到0-10℃。然后在0-10℃逐滴加入HATU(150g，0.394mol)到该混合物中。所得的混合物在0-10℃搅拌10分钟。在0-10℃分份地加入化合物V(E)(55g，0.394mol)。反应混合物在rt搅拌过夜。在真空除去溶剂且残余物溶解到500mL水中。所得到的混合物用乙酸乙酯(300mL×3)提取。有机相合并，在Na₂SO₄上干燥并在真空浓缩。残余物通过采用硅胶的色谱法纯化，用石油醚/乙酸乙酯(50∶1～10∶1)洗脱得到化合物V(F)(100g，76％)，作为黄色的油。

化合物V(F)(100g，0.274mol)在0-5℃下溶于2L 4N HCl(g)/二噁烷。混合物在rt搅拌过夜并在真空中浓缩得到化合物V(G)(85g，100％)，作为无色浆液。(R^z＝CH₃：¹H NMR(400MHz，D2O)δ7.41(m，5H)，4.38(m，1H)，4.14(m，2H)，3.93(m，1H)，3.69(s，3H)，1.44(d，J＝6.8Hz，3H)，1.35(d，J＝7.2Hz，3H))。

在下一步骤中，V(G)(75g，0.25mol)和Et₃N(41.7mL，0.3mol)悬浮在1500mL二甲苯中。在r t搅拌混合物30分钟。然后加入作为催化剂的DMAP并将混合物加热回流48小时。在真空除去溶剂并且残余物用硅胶色谱纯化，用petroleumether/乙酸乙酯(50∶1～10∶1)洗脱得到化合物V(H)(47g，81％)，作为褐色的油。(R^z＝CH₃：¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.71(br，1H)，7.33(m，5H)，5.16(d，J＝14.8Hz，1H)，4.13(m，2H)，3.86(m，1H)，1.59(d，J＝12.8Hz，3H)，1.38(d，J＝8.8Hz，3H))。

LiAlH₄(31g，0.82mol)悬浮于200mL无水THF。逐滴加入化合物V(H)(47g，0.203mol)于600mL无水THF的溶液。加入后，混合物加热回流过夜。反应混合物冷却到0-5℃并用300mL THF稀释。逐滴加入190mL 20％NaOH水溶液到反应混合物中。加入后，在室温搅拌混合物30分钟。向混合物中加入(Boc)₂O(66.5g，0.31mol)。混合物在rt搅拌过夜。在真空除去溶剂且残余物通过采用硅胶的色谱法纯化，用petroleumether/乙酸乙酯(100∶1)洗脱得到化合物V(J)(48g，77％)，作为淡黄色的液体。(R^z＝CH₃：¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.36(m，5H)，4.19(m，1H)，3.67(m，2H)，3.47(m，1H)，3.33(m，1H)，2.97(m，1H)，2.72(m，1H)，2.27(d，J＝25.6Hz，1H)，1.48(s，9H)，1.36(d，J＝6.4Hz，3H)，0.99(d，J＝7.2Hz，3H))。

在最后的步骤中，V(I)(48g，0.158mol)溶于1500mL 4N HCl(g)/二噁烷且在室温下搅拌所得的溶液过夜。在真空除去溶剂且残余物用500mL二乙基醚研磨。过滤形成的固体，滤饼用50mL二乙基醚洗涤，然后在真空下干燥得到V(J)(37g，100％)，作为白色的固体。(R^z＝CH₃：¹H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.42(s，5H)，4.82(d，J＝17.6Hz，1H)，4.10(d，J＝17.6Hz，1H)，3.71-2.98(m，6H)，1.56(d，J＝8.0Hz，3H)，1.20(d，J＝8.8Hz，3H)。)

螺环哌嗪衍生物例如在实施例A2中的，可以通过采用与上述反应路线相似的方法进行制备，其中R^z是C₂-C₅烷基。

反应路线5(双环哌嗪中间体)

中间体VI(C)通过将N-(叔丁氧基羰基)-D-丙氨酸VI(B)(114.23g，0.0.603mol)，甲基L-脯氨酸酯VI(A)(100g，0.603mol)，BOP(291.72g，0.66mol)，和二氯甲烷(1.5L)在2L烧瓶中混合制备。在搅拌下逐滴加入DIPEA(193g，1.5mol)并在水浴中冷却。在室温下搅拌反应混合物过夜并蒸发。加入水(1L)，乙酸乙酯(400mL)，和乙醚(400mL)。提取后，分离有机层。水层用乙醚(300mL)洗涤。合并的提取物用1M HCl(1L)，水(1L)，10％K₂CO₃(2×1L)洗涤，用无水Na₂SO₄干燥，并蒸发。获得粘性油VI(C)(110g，61％)。

将中间体VI(C)(110g，0.366mol)用于二噁烷中(～400mL)的4MHCl处理。将溶液在室温保持16h，并蒸发。油性的残余物用乙醚(2×500mL)洗涤。倾析该醚，并在真空干燥油VI(D)。

中间体VI(D)溶于无水甲醇(700mL)。加入三乙胺(105mL，0.75mol)到pH～8-9。在室温搅拌反应混合物过夜。蒸发该溶液。固体残余物在二氯甲烷/乙酸乙酯混合物(1∶1，600mL)中搅拌，并所获得的混合物用40％碳酸钾水溶液(500mL)洗涤。水层用二氯甲烷/乙酸乙酯混合物(1∶1，2×300mL)提取。用碳酸钾干燥合并的提取物并蒸发。固体残余物用乙醚(400mL)处理。所得到的混合物在室温保持2h，然后在4℃过夜。形成的结晶用冷乙醚(100mL)洗涤并真空干燥以提供VI(E)(48.1g，78.08％)。附上¹H NMR谱(参见LJMT0165-07_Additional_QC_Data folder)。

中间体VI(E)(48.1g，0.286mol)悬浮于THF(600mL)。在氩气流在使溶剂沸腾的速率的搅拌和加热下，将该悬浮液加入到LiAlH₄(27.2g，0.715mol)在THF(300mL)中的溶液。其后，将反应混合物回流15h，冷却到室温，并且用5M NaOH(200mL)处理。分离有机层，且用乙醚(3×100mL)洗涤凝乳样残余物。用无水K₂CO₃干燥合并的提取物并且蒸发。液体残余物在真空(72-75℃/10mmHg)下蒸馏。产率：75.2％(30.1g)。获得了满意的C，H，N-分析。

实施例

可以参照以下实施例将本发明进行描述。这些实施例并不视为限定本发明的范围，但是仅仅做为示例的方式。以下提供的实施例和制备方法进一步说明和举例了本发明的化合物以及这些化合物的制备方法。可以理解本发明的范围并不任意地受下述实施例和制备的范围的限制。在下述实施例中，除非另外说明，具有单一手性中心的分子作为外消旋混合物存在。除非另有说明，具有两个或者更多手性中心的那些分子作为非对映异构体的外消旋混合物存在。可以通过本领域技术人员已知的方法获得单一对映体/非对映异构体。

化合物的结构通过元素分析或者NMR确认，其中标题化合物中的指定特征质子的峰在适当的时候存在。¹H NMR位移(δ_H)在离内部参考标准的下游区域以百万分之(ppm)几份表示出来。除非另有说明，NMR数据提供在下面的表1中。

实施例A1：N-(6，6-二甲基-5-((3S，8aS)-3-甲基-八氢吡咯并 [1，2-a]吡嗪-2-羰基)-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)吡啶酰胺

中间体A1(III)：5-叔-丁基1-乙基6，6-二甲基-3-(吡啶酰氨)吡咯并[3，4-c]吡唑-1，5(4H，6H)-二羧酸酯

向5-叔-丁基1-乙基3-氨基-6，6-二甲基-4，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1，5-二羧酸酯，A1(I)，(7.32g，22.56mmol)和DIPEA(12mL)在CH₂Cl₂(60mL)的溶液中缓慢加入甲代吡啶酰基氯盐酸化物(picolinoyl chloride hydrochloride)，A1(II)，(4.82g，27.07mmol)。反应在室温搅拌2小时。反应混合物用CH₂Cl₂(50mL)稀释，用水(2X30mL)，饱和NaCl(盐水)洗涤，并在MgSO₄上干燥，过滤并且浓缩得到A1(III)(9.12g，94％产率)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃-d)δppm 1.39-1.50(m，2H)1.49-1.58(m，10H)1.72(s，3H)1.78(s，3H)4.63(q，J＝7.07Hz，2H)4.81(d，J＝19.45Hz，2H)7.46-7.58(m，1H)7.82-7.97(m，1H)8.25(dd，J＝7.71，3.41Hz，1H)8.73(dd，J＝9.60，4.55Hz，1H)。

中间体A1(IV)：6，6-二甲基-3-(吡啶酰氨)(picolinamido)-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1(4H)-羧酸乙基酯二盐酸

中间体A1(III)溶于在1，4，二噁烷(80mL)的4N HCl中。反应在室温搅拌16hr。浓缩溶剂得到A1(IV)(8.97g，99％产率)。¹H NMR(400MHz，CD₃OD)ppm1.52(t，J＝7.20Hz，3H)1.78(s，6H)4.60(q，J＝7.24Hz，2H)4.85(s，2H)7.60-7.74(m，1H)8.00-8.12(m，1H)8.23(d，J＝7.83Hz，1H)8.69-8.84(m，1H)。

中间体A1(V)：5-(氯羰基)-6，6-二甲基-3-(吡啶酰氨)-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1(4H)-羧酸乙基酯

向A1(IV)(5.0g，12.43mmol)和DIPEA(11mL)于CH₂Cl₂(50mL)中的冷却浴(0℃)中缓慢加入在CH₂Cl₂(20mL)中的三光气(9.22g，31.08mmol)。反应在室温搅拌2hr。反应混合物用CH₂Cl₂(50mL)稀释，用水(2X50mL)，饱和NaCl(盐水)洗涤，在MgSO₄上干燥并浓缩。残余物溶于最少量的丙酮并加入水沉淀。过滤该化合物用水洗涤得到A1(V)(4.48g，92％产率)。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm1.40(t，J＝7.07Hz，3H)1.69(s，6H)4.51(q，J＝7.07Hz，2H)5.03(s，2H)7.76(dd，J＝7.45，4.93Hz，1H)8.04-8.17(m，1H)8.18-8.32(m，1H)8.78(d，J＝4.80Hz，1H)12.15(s，1H)。

化合物A1：N-(6，6-二甲基-5-((3S，8aS)-3-甲基-八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2-羰基)-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)吡啶酰胺

将A1(IV)(4.48g，11.4mmol)，(3S，8aS)-3-甲基-八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪(2.40g，17.1mmol)，和DIPEA(7mL)于THF(50mL)中的溶液加热到80℃持续2hr。浓缩THF。反应混合物溶于CH₃OH(30mL)和Et₃N(30mL)，然后在室温搅拌16hr。通过HPLC(10％ACN(.1％AcOH)-30％ACN(0.1％AcOH))纯化残余物得到标题化合物A1(3.01g，62％产率)。

实施例A2：N-(5-{[(8S)-6，8-二甲基-6，9-二氮杂螺[4.5]癸-9- 基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)吡啶 -2-甲酰胺

与上述制备A1的相似的方式从A1(V)制备中间体A2(I)，除了用(8S)-6，8-二甲基-6，9-二氮杂螺[4，5]癸烷代替A1(VI)。向所得的A2(I)(668mg，1.28mmol)在30mL甲醇的混悬液中加入氢氧化钠(3mL10％溶液，于甲醇中)。在室温搅拌30分钟后，在真空除去溶剂。如在实施例A1那样纯化提供标题化合物A2，为白色固体(254mg，29％)。

实施例A3-A141

实施例A3-A141通过采用与上述实施例A1和A2相似的方法制备。

实施例A142：N-(5-((2R，5S)-1-(3-氟丙基)-2，5-二甲基哌嗪-4- 羰基)-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)吡啶酰胺

中间体A142(II)：5-((2S，5R)-2，5-二甲基哌嗪-1-羰基)-6，6-二甲基-3-(吡啶酰氨)-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1(4H)-羧酸乙基酯

向密封管加入哌嗪A142(I)(1.0g，2.4mmol，1.0当量)，四氢呋喃(50.0mL)，该A1(V)(0.627g，2.93mmol，1.2当量)和DIPEA(1.27mL，7.32mmol，3.0当量)。过夜加热该管到85℃。使反应冷却到室温然后浓缩。然后将所得的残余物再溶解于二氯甲烷(50mL)并用饱和碳酸氢钠水溶液(2x20mL)洗涤。收集的有机物在硫酸钠上干燥，过滤并浓缩得到淡橙色固体。然后将该物质(1.1g，1.9mmol，1当量)溶解于二噁烷(5mL)中并加入含4M HCl的二噁烷(4.83mL，19.3mmol，10当量)中。使所得的溶液在室温搅拌15分钟。在真空除去二噁烷，残余物再溶解于二氯甲烷(20mL)且用饱和碳酸氢钠(10mL)洗涤。收集的有机物在硫酸钠上干燥，过滤并浓缩得到期望的产品A142(II)。粗产物不需要进一步纯化进行下一个步骤(参见所有反应产率的下一步骤)。MS(ESI+)m/z465.4 ¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm 0.97(dd，J＝11.68，6.03Hz，6H)1.40(t，J＝7.06Hz，3H)1.61(s，3H)1.69(s，3H)2.25(d，J＝10.93Hz，1H)2.85(m，3H)3.01-3.14(m，1H)3.56(s，2H)4.49(q，J＝7.03Hz，2H)4.82(d，J＝4.33Hz，2H)7.71-7.79(m，1H)8.05-8.16(m，1H)8.18-8.26(m，1H)8.77(d，J＝3.96Hz，1H)12.15(s，1H)

化合物A142：N-(5-((2R，5S)-1-(3-氟丙基)-2，5-二甲基哌嗪-4-羰基)-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)吡啶酰胺

向微波瓶中加入A142(II)(0.200g，0.426mmol，1.0当量)，三乙胺(0.148mL，1.06mmol，2.5当量)，1-溴-3-氟丙烷(0.090g，0.639mmol，1.5当量)和四氢呋喃(1.5mL)。所得的反应混合物在微波中在150℃加热1小时。在真空浓缩粗反应物并溶解于甲醇和三甲基胺(6mL-6mL)并在室温搅拌16小时。然后再浓缩反应混合物且所得的残余物溶解在二氯甲烷(50mL)中并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。收集的有机物在硫酸钠上干燥，过滤并浓缩得到粗产品。粗产品通过快速色谱法纯化。用甲醇在二氯甲烷(0→1％甲醇)中进行洗脱提供所期望的产品A142，经过两步骤，23％产率，作为灰白色固体。

实施例A143-A144：

实施例A143和A144采用与上述实施例A142相似的方法来制备。

实施例A145：：N-(5-((2R，5S)-2，5-二甲基-1-(2(四氢-2H-吡喃-4-基) 乙基)哌嗪-4-羰基)-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑 -3-基)吡啶酰胺

向100mL圆底烧瓶加入A142(II)(0.100g，0.213mmol，1.0当量)，甲醇(3.0mL)，四氢吡喃基-4-乙醛(0.041g，0.319mmol，1.5当量)和乙酸(0.013mL，0.213mmol，1.0当量)。1小时后加入氰基硼氢化钠(0.022g，0.341mmol，1.6当量)且使反应在室温搅拌16小时。向反应中加入三乙胺(3mL)并在室温下再搅拌16小时。浓缩反应，用二氯甲烷(5mL)稀释且用饱和硫酸钠(2mL)和盐水(2mL)洗涤。在硫酸钠上干燥收集的有机物，过滤并浓缩。粗产物用制备性HPLC(0.1％HOAc)纯化以提供60mg所期望的产物A145，53％产率，作为白色的固体。

实施例A146-A164：

实施例A146-A164采用与上述的实施例A1，A142和A145相类似的方法制备。

实施例B1：吡啶-2-羧酸[5-(1-环丁基-4-氟-哌啶-4-羰基)-6，6- 二甲基-1，4，5，6-四氢-吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基]-酰胺

中间体B1(III)：1-环丁基-4-氟-哌啶-4-羧酸乙基酯

向250mL圆底烧瓶中加入化合物B1(I)4-氟哌啶-4-羧酸乙基酯，盐酸盐(1.25g，5.91mmol，1.0eq)，CH₂Cl₂(40mL)，环丁酮B1(II)(1.30g，7.68mmol，1.30eq)，和冰HOAc(0.338mL，5.91mmol，1.0eq)。在室温搅拌5-10min后，一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.00g，9.45mmol，1.60eq)。得到混浊的溶液。反应混合物在室温搅拌2h。向反应混合物加入100mL NaOH水溶液(1M)，并将所得混悬液在室温搅拌10min。该反应用EtOAc(150mL)提取。收集有机层，用盐水(200mL)洗涤，在Na₂SO₄上干燥，过滤，并浓缩以提供所期望的产物，B1(III)，作为无色的油。洗涤粗产物并且不需要纯化用于下一个步骤(参见下一步骤，用于总的反应产率)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ1.28(t，J＝7.20Hz，3H)，1.64-1.73(m，2H)，1.82-1.99(m，4H)，2.01-2.21(m，6H)，2.72-2.80(m，3H)，4.22(q，J＝7.2Hz，2H)；¹⁹FNMR(376Hz，CDCl₃，ppm)δ-166.83。

中间体B1(IV)：1-环丁基-4-氟-哌啶-4-羧酸盐酸盐(hydrochlorite)

将中间体B1(III)(粗，5.91mmol)溶于10mL 6M HCl水溶液。将无色的溶液温热到100℃并在N₂下回流。2h后，将反应混合物冷却到室温。除去溶剂得到黄色固体。该固体用10mL EtOAc洗涤，且在真空干燥以提供1.20g所期望的产物B1(IV)，作为白色的固体，经过两步骤后为85％产率。该产物不需要进一步纯化用于下一个步骤。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)δ1.63-1.78(m，2H)，2.10-2.16(m，4H)，2.35-2.45(m，4H)，2.82-2.88(m，2H)，3.29-3.32(m，2H)，3.66-3.70(m，1H)，11.63(br s，1H)，13.68(br s，1H)；¹⁹FNMR(376Hz，DMSO-d₆，ppm)δ-166.31。

化合物B1：吡啶-2-羧酸[5-(1-环丁基-4-氟-哌啶-4-羰基)-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢-吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基]-酰胺

粗起始原料B1(IV)(0.673mmol)溶于10mL SOCl₂。获得的淡黄色混悬液温热到80℃且在N₂回流1h。在该时刻，反应变成澄明的淡黄色溶液。将反应混合物冷却到室温。在减压下除去溶剂获得酰基氯B1(V)，作为黄色固体，定量产率。

向100mL RB中加入酰基氯B1(V)(粗，0.673mmol，1.3eq)，化合物6，6-二甲基-3-[(吡啶-2-基羰基)氨基]-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-2(4H)-羧酸乙基酯，B1(VI)，(189mg，0.518mmol，1.0eq)，和13mL CH₂Cl₂。所得到的混悬液在室温在N₂下搅拌5min。缓慢加入DIPEA(0.354ml，2.07mmol，4.0eq)，且可以看到产生大量烟。在室温搅拌1hr后，反应用盐水(50mL)淬灭，用EtOAC(50mL)提取，在Na₂SO₄上干燥，并浓缩。粗偶联产物用于下一脱保护步骤。

向粗偶联产物在10mL MeOH的溶液中室温下逐滴加入1.5mL 1.0MNaOH水溶液。获得黄色透明溶液。LC-MS显示反应在30min内完成。反应用50mL EtOAc稀释，并用盐水(50mL)洗涤。收集有机层，在Na₂SO₄上干燥，过滤，并浓缩以得到粗产物。该粗产物用制备性HPLC(0.1％HOAc)纯化以提供80mg期望的产物，B1，两步后28％产率，作为白色固体。

实施例B2：吡啶-2-羧酸{5-[4-氟-1-(四氢-吡喃-4-基)-哌啶-4- 羰基]-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢-吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基}-酰胺

中间体B2(III)：4-氟-1-(四氢-吡喃-4-基)-哌啶-4-羧酸乙基酯

向250mL RB中加入化合物B2(I)4-氟哌啶-4-羧酸乙基酯，盐酸盐(1.25g，5.91mmol，1.0eq)，CH₂Cl₂(20mL)，4-氧代四氢吡喃酮B2(II)(0.61mL，6.50mmol，1.10eq)，和冰HOAc(0.340mL，5.91mmol，1.0eq)。在室温搅拌5-10min，一次性加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.02g，9.45mmol，1.60eq)。得到混浊溶液。在室温搅拌12h，用150mLEt₂O和200mL NaOH(1M水溶液)稀释反应混合物。所得混悬液在室温搅拌1h。收集有机层，用200mL盐水洗涤，在Na₂SO₄上干燥，过滤，并浓缩以提供320mg所期望的产物，4-氟-1-(四氢-吡喃-4-基)-哌啶-4-羧酸乙基酯B2(III)，21％产率，作为无色油状物。¹H NMR(400MHz，CDCl₃，ppm)δ1.30(t，J＝7.08，3H)，1.56-1.66(m，2H)，1.74-1.78(m，2H)，1.94-2.21(m，4H)，2.46-2.55(m，3H)，2.82-2.85(m，2H)，3.38(ddd，J＝1.52，11.84，11.84，2H)，4.03(dd，J＝4.28，11.08，2H)，4.24(q，J＝7.05Hz，2H)；¹⁹F NMR(376Hz，CDCl₃，ppm)δ-166.94。

中间体B2(IV)：4-氟-1-(四氢-吡喃-4-基)-哌啶-4-羧酸盐酸盐(hydrochlorite)

向瓶中加入B2(III)(260mg，1.0mmol)和8mL HCl(6.0M)水溶液。获得无色溶液。将该溶液在室温搅拌5min并且温热到100℃。将该混合物在100℃下回流2h获得淡橙色溶液。然后将反应冷却到室温，并在减压下除去溶剂以提供黄色的固体。将该固体用2x3mL EtOAc洗涤以提供260mg所期望的产物4-氟-1-(四氢-吡喃-4-基)-哌啶-4-羧酸盐酸盐(hydrochlorite)B2(IV)，作为黄色的固体，97％产率。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆，ppm)δ1.70-1.80(m，2H)，2.02-2.05(m，2H)，2.14-2.20(m，2H)，2.41-2.59(m，2H)，2.97-3.09(m，2H)，3.29(dd，J＝11.33，11.33Hz，2H)，3.39-3.53(m，3H)，3.96(dd，J＝3.78，11.08Hz，2H)，11.19(s，1H)，13.76(s，1H)；¹⁹F NMR(376Hz，DMSO-d₆，ppm)δ-166.57。

化合物B2：吡啶-2-羧酸{5-[4-氟-1-(四氢-吡喃-4-基)-哌啶-4-羰基]-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢-吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基}-酰胺

中间体B2(IV)(240mg，0.896mmol)溶于10mL SOCl₂。将该混悬液温热到80℃。在80℃搅拌该混合物1h，该混悬液变成澄明的淡黄色溶液显示该反应完成。将该混合物冷却到室温并在减压下除去溶剂以提供257mg(100％)所期望的产物酰基氯B2(V)，作为白色的固体。

向100mL RB中加入酰基氯B2(V)(257mg，0.896mmol，1.5eq)，化合物B2(VI)6，6-二甲基-3-[(吡啶-2-基羰基)氨基]-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-2(4H)-羧酸乙基酯(219mg，0.598mmol，1.0eq)，和13mL CH₂Cl₂。所得混悬液在室温在N₂下搅拌5min。缓慢加入DIPEA(0.408ml，2.39mmol，4.0eq)以产生烟。在室温搅拌该反应1h，用盐水(20mL)淬灭该反应，用CH₂Cl₂(50mL)提取，在Na₂SO₄上干燥，并浓缩。粗产物溶于10mL MeOH。在室温，逐滴加入1.5mL 1M NaOH水溶液。LC-MS显示反应在5-10min内完成。用100mL EtOAc稀释该反应，用100mL盐水洗涤。收集有机溶剂，在Na₂SO₄上干燥，过滤，并浓缩以获得粗的终产物。通过制备性HPLC纯化粗产物以得到200mg所期望的产物，B2作为部分HOAc盐，经过两步骤后47％产率。

实施例B3：3，4-二氯-N-[5-(4-氟-1-甲基-哌啶-4-羰基)-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢-吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基]-苯甲酰胺

DIEA(0.220mL，1.66mmol)和3-(3，4-二氯-苯甲酰基氨基)-6，6-二甲基-5，6-二氢-4H-吡咯并[3，4-c]吡唑-1-羧酸乙基酯(221mg，0.51mmol)加入向4-氟-1-甲基-哌啶-4-碳酰氯(0.51mmol)在CH₂Cl₂(10mL)中的溶液。该反应在室温搅拌4h。该混合物用H₂O(30mL)淬灭，用CHCl₃(2x30mL)提取。有机层在MgSO₄上干燥并浓缩得到标题化合物，作为褐色的油，其不用进一步纯化而使用。ESI(MNa⁺)：564.10。

将上述的油溶解于MeOH(5mL)并加入NaOH(1N，3mL)。在室温搅拌混合物2h，浓缩并通过反相HPLC纯化以得到白色固体B3(15mg，6％)。

实施例B4：

实施例B4采用与上述实施例B1相似的方法来制备。

实施例C1：N-(5-{[(2S，5R)-4-乙基-2，5-二甲基哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)吡嗪-2-甲酰胺

中间体C1(II)：5-叔-丁基1-乙基3-氨基-6，6-二甲基-4，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1，5-二羧酸酯

向5-叔-丁基1-乙基3-氨基-6，6-二甲基-4，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1，5-二羧酸酯，C1(I)(16.2g，49.9mmol)于THF(100mL)中的0℃溶液分3次加入NaH(2.4g，59.9mmol)。在冰浴上搅拌反应15min，然后用10分钟加入氯甲酸乙酯(6.5g，59.9mmol)。反应温热到室温并搅拌16h，然后用NH₄Cl(饱和)淬灭，用EtOAc(2x50mL)提取。合并的提取物用盐水洗涤然后干燥(MgSO₄)过滤并浓缩得到期望的化合物C1(II)(19.8g，99％)。质谱：计算值C₁₈H₂₉N₄O₆(M+H)：397。实测值397。

中间体C1(III)：5-(氯羰基)-3-[(乙氧基羰基)氨基]-6，6-二甲基-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1(4H)-羧酸乙基酯

向C1(II)(19.8g，49.9mmol)于二噁烷(20mL)中的溶液加入HCl(60mL，4M于二噁烷中)。反应在室温搅拌3h然后浓缩并在真空干燥。将3-[(乙氧基羰基)氨基]-6，6-二甲基-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1(4H)-羧酸乙基酯的HCl盐溶解于CH₂Cl₂(60mL)。加入DIPEA(16.1g，125mmol)且在冰浴下冷却反应混合物。缓慢加入光气(30mL，20％于甲苯)然后反应温热到室温并过夜温热。反应浓缩然后溶解于EtOAc(100mL)和水(100mL)中。水相用EtOAc(2x25mL)提取然后将合并的有机提取物用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。粗物质通过用CH₂Cl₂-2％7NNH₃/MeOH在CH₂Cl₂中的硅胶柱色谱纯化，得到标题化合物C1(III)，作为白色固体(9.58g，54％)。质谱：计算值C₁₄H₂₀ClN₄O₅(M+H)：359。实测值359。

中间体C1(V)：3-[(乙氧基羰基)氨基]-6，6-二甲基-5-{[4-乙基(2S，5R)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]羰基}-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1(4H)-羧酸乙基酯

向密封管加入N-乙基(2S，5R)-2，5-二甲基哌嗪C1(IV)，DIPEA和THF，然后加入C1(III)。密封管并放置在80℃的油浴中加热16h。反应冷却到室温然后浓缩。所得的物质C1(V)不需要进一步纯化进行下一步。

中间体C1(VI)：5-{[(2S，5R)-4-乙基-2，5-二甲基哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-胺

向微波瓶中加入C1(V)，MeOH和LiOH。反应在微波中在110℃加热20min。粗反应混合物浓缩并溶解于THF。过滤掉不溶解的物质，然后浓缩滤液得到标题化合物C1(VI)。该物质不需要进一步纯化进行使用。

化合物C1：N-(5-{[(2S，5R)-4-乙基-2，5-二甲基哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)吡嗪-2-甲酰胺

C1(VI)(240mg，0.7mmol)的2mL THF混悬液加入到吡嗪-2-碳酰氯(213mg，2eq)和二异丙基乙基胺(0.5mL，3eq)于3mL THF的溶液中。在室温搅拌3小时后，在真空下除去溶剂。按照实施例A1进行纯化提供标题化合物C1，作为白色固体(16mg，5％)。

实施例C2-C8：

实施例C2-C8采用与上述实施例C1相似的方法来制备。

实施例D1：

当前并没有采用与上述方案2所示的路线D进行制备的实施方案，虽然期望本领域技术人员可以采用如上所述的路线D来制备本发明的很多化合物。

实施例E1：N-(6，6-二甲基-5-{[(3S，8aS)-3-甲基六氢吡咯并 [1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]羰基}-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3- 基)-3-乙基异噁唑-5-甲酰胺

中间体E1(II)：叔-丁基3-氨基-6，6-二甲基-4，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-5(1H)-羧酸酯

将试剂5-叔-丁基1-乙基3-氨基-6，6-二甲基-4，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1，5-二羧酸酯，E1(I)，(10.97g，33.9mmol)溶于MeOH(200mL)，之后加入NaOH(5eq，169mmol)。在室温搅拌混合物3h后，初始原料消失。除去MeOH后，加入H₂O和AcOEt，用AcOEt提取该产物并在Na₂SO₂上干燥，然后浓缩以提供E1(II)。

中间体E1(III-2)：叔-丁基3-氨基-6，6-二甲基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-4，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-5(1H)-羧酸酯

在0℃向中间体E1(II)(87g)，亚甲基氯(1.74L)和二异丙基乙基胺(87g)的混合物中逐滴加入(1小时加入)0℃的2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(63g)。在室温搅拌反应混合物过夜。反应是淡褐色溶液。然后将该混合物浓缩以得到淡黄色/褐色油，且残余物与乙酸乙酯混合且滤掉盐。该混合物用硅胶(2∶1-1∶1 EtOAc/含有0.5％TEA的己烷)纯化以提供区域异构体(regioisomer)E1(III-2)(24g，利用HPLC的纯度＞90％)和E(III-1)(10g，利用HPLC的纯度＞98％)。¹H NMR(400MHz，CD3OD)ppm-0.03(s，9H)0.88(t，J＝8.2Hz，2H)1.48和1.53(s，每一个4.5H，共计9H)。1.70(s，3H)，1.72(s，3H)，3.56-3.62(m，2H)，4.24-4.26(m，2H)，5.16(s，2H)。

中间体E1(VII)：N-(6，6-二甲基-5-{[(3S，8aS)-3-甲基六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]羰基}-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-3-乙基异噁唑-5-甲酰胺

采用无水DMF作为溶剂制备0.25M SEM-Boc保护的氨基吡咯并吡唑、E1(III-2)的溶液。采用无水DMF作为溶剂制备3-乙基异噁唑-5-羧酸的0.25M溶液。在无水DMF中制备新鲜的0.5M邻-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)的溶液。向反应管中加入制备的320μL(0.08mmol，1当量，0.25M)的3-乙基异噁唑-5-羧酸DMF溶液，制备的320μL(0.080mmol，1当量，0.25M)SEM-Boc保护的氨基吡咯并吡唑DMF溶液，和40μL(0.288mmol，3.6当量)纯净TEA，然后加入160μL(0.080mmol，1当量)的HATU DMF溶液。在60℃搅拌反应混合物16h。然后将管冷却到室温。在真空下从管中除去溶剂和挥发物。向残余物中加入1mL EtOAc和1mL 2M NaOH水溶液。在将该管用Parafilm覆盖后，剧烈摇动该覆盖的试验管直到所有的残余物已溶解或者混合物完全匀化。停止搅拌并完全分离各相。将每一测试管得上清的有机层(EtOAc层)转移到其相应的接收管中。将EtOAc(0.5mL)加入到该管中并且在搅拌混合物后提取有机层，重复该操作两次。在真空下从接收管中除去溶剂(EtOAc)和挥发物直到它们干燥。向残余物中加入0.6mL(2.4mmol，30当量)于二噁烷中的4M HCl且在室温下搅拌混合物2h。然后在真空下从该管中除去溶剂，挥发物和HCl。向残余物加入500μL无水DMA，70μL纯净DIPEA(0.400mmol，5当量)。在无水CH₂Cl₂中制备0.25M(3S，8aS)-3-甲基六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-羰基氯，E1(VI)的溶液。

中间体E1(VI)：(3S，8aS)-3-甲基六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪 -2(1H)-碳酰氯

在0℃在N₂下在圆底烧瓶中将三光气(1.1当量)溶于DCM，在0℃在N₂下将DIPEA(2当量)逐滴加入到搅拌的溶液中。在0℃在N₂下将(3S，8aS)-3-甲基八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪在CH₂Cl₂中的溶液逐滴加入到三光气反应混合物中。在0℃在N₂下搅拌1小时，将反应混合物温热到室温且在N₂下搅拌16小时。蒸发溶剂且在真空下在室温干燥。该干燥的产物E1(VI)不需纯化被用于脲形成反应。

向该管中加入385μL(0.096mmol，1.2当量)的E1(VI)，且在40℃搅拌混合物20h。在真空除去溶剂和挥发物后，将1340μL DMSO(含有0.01％BHT)加入到每一个管中以获得终浓度0.0572M，并搅拌混合物以溶解产物。为了制备分析样品，移走5μL溶液，用95∶5MeOH/H₂O稀释该等分部分到1.0mL，且提交用于LC-MS分析。

将来自盘821-107-3930的粗反应混合物溶解到MeOH∶DMSO∶H2O(95∶5∶5)溶液并利用分析度量衡(analyticalscale)CO₂ SFC(UV/MS{APCI+}/ELSD检测)来分析。分析SFC方法参数包括：柱：Zymor/Pegasus(150X4.6mm，5μm)，线形梯度：在2.5min内5-50％洗脱液A(MeOH)。以5.6ml/min(140bar出口压力)。

将相同的粗反应混合物利用制备性度量衡CO₂ SFC(UV检测{260nm})纯化。制备性SFC方法参数包括：柱：Zymor/Pegasus(150X21.2mm，5μm)，线形梯度：5到50％洗脱液A(MeOH)在5min内。以56ml/min(140bar出口压力)。

干燥产物，称量，以30mM溶解在DMSO。然后使用RP-HPLC(UV{260nm}/MS{APCI+}/ELSD检测)分析产物。HPLC方法参数包括：柱：Peeke Scientific/HI-Q(C₁₈，50X4.6mm，3μm)，线形梯度：在1.75min内以3ml/min从100％洗脱液A(H₂O+0.05％TFA)到100％洗脱液B(乙腈+0.05％TFA)。

所有的产物纯度至少为85％，利用具有NMR光谱的HPLC两次以上的检测，证实结构与分子量一致，可以获得用于筛选。

实施例E1-E14：

所有的实施例E2-E14使用与上述的实施例E1相同的分析和纯化条件。

实施例F1：N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)-2-乙基-4-甲基-1，3-噁唑-5-甲酰胺

中间体F1(ii)：5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-3-[(乙氧基羰基)氨基]-6，6-二甲基-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1(4H)-羧酸乙基酯

向密封管加入(2R，5S)-2，5-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪(piperizine)(2.1g，9.89mmol)，DIPEA(3.8mL，21.8mmol)和THF(50mL)，然后加入F1(i)(3.6g，9.89mmol)。将管密封并放置在90℃的油浴中并加热16h。该反应冷却到室温并浓缩然后分两批用MeOH研磨以获得标题化合物F1(ii)(4.89g，93％)，作为白色的固体。质谱：计算值C₂₆H₄₂N₆O₆(M+H)：535。实测值535。

中间体F1(iii)：5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-胺

向密封管加入F1(ii)(4.0g，7.54mmol)在MeOH(75mL)和LiOH(1.0g，42mmol)中的浆液。该反应在100℃加热16h。浓缩该反应然后溶解在THF(100mL)中。该混合物过滤通过硅藻土和MgSO₄然后用THF(100mL)洗涤。浓缩滤液以得到1.9g(65％)的F1(iii)，作为黄色的固体。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δppm 0.82-0.92(m，1H)，0.92-1.00(m，6H)，1.00-1.14(m，2H)，1.48(s，3H)，1.57(s，3H)，1.69(d，J＝14.32Hz，2H)，1.78-1.95(m，2H)，2.27-2.48(m，3H)，2.74-2.88(m，1H)，2.94-3.15(m，2H)，3.18-3.31(m，2H)，3.70-3.93(m，2H)，4.26(s，2H)，4.96(br.s.，2H).质谱：计算值C₂₀H₃₄N₆O₂(M+H)：391。实测值391。

中间体F1(iv)：5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1-{[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基}-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-胺

向0℃的F1(iii)(1.7g，4.35mmol)在THF(30mL)中的溶液加入DIPEA(0.95mL，5.44mmol)，然后加入[2-(氯甲氧基)乙基](三甲基)甲硅烷(0.81mL，4.57mmol)。该反应缓慢温热到室温并搅拌16h。该反应用水(50mL)淬灭并用EtOAc(2x100mL)提取。合并的提取物用盐水(50mL)洗涤然后干燥(MgSO4)，过滤并浓缩以提供标题化合物F1(iv)(1.7g，65％)，作为黄色的固体。质谱：计算值C₂₆H₄₈N₆O₃Si(M+H)：521。实测值521。

向2-乙基-4-甲基-1，3-噁唑-5-羧酸(223mg，1.44mmol)和F1(iv)(500mg，0.960mmol)在DMF(5mL)中的溶液加入DIPEA(0.52mL，2.88mmol)，然后加入HATU(548mg，1.44mmol)。在65℃搅拌该反应16h然后用NaHCO₃(饱和)(10mL)稀释并且用MTBE(2x20mL)提取。将合并的提取物用盐水(15mL)洗涤然后干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。该粗的固体溶解在CH₂Cl₂(5mL)中并加入于二噁烷中(5mL)的4N HCl。该反应在室温搅拌5h。浓缩该反应然后溶解到EtOAc(15mL)和NaHCO₃(饱和)(15mL)中，用EtOAc(2x10mL)提取。用盐水(15mL)洗涤合并的提取物然后干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。通过使用5-50％ACN/H₂O(0.1％AcOH)的制备性HPLC提供了标题化合物F1，作为白色固体(35mg，6％)。

实施例F2-F60：

实施例F2-F60采用与上述实施例F1的相似的方法来制备。

实施例G1：5-氰基-N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c] 吡唑-3-基)吡啶-2-甲酰胺

中间体G1(i)：叔-丁基1-乙基3-{[(5-溴吡啶-2-基)羰基]氨基}-6，6-二甲基-4，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1，5-二羧酸酯

向5-溴吡啶-2-羧酸(3.11g，15.4mmol)和5-叔-丁基1-乙基3-氨基-6，6-二甲基-4，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1，5-二羧酸酯(5.00g，15.4mmol)在DCM(200mL)中的溶液加入DIPEA(5.37mL，30.8mmol)，然后加入HATU(7.03g，18.5mmol)。使该反应在22℃过夜。将反应混合物用NaHCO3稀释，分离各层，干燥有机部分(MgSO4)，过滤并浓缩。该粗固体用Et2O研磨得到产物G1(i)，作为淡黄色固体(2.8g，15％)。质谱：计算值C21H27BrN5O5(M+H)：509。实测值：509。

中间体G1(ii)：5-叔-丁基1-乙基3-{[(5-氰基吡啶-2-基)羰基]氨基}-6，6-二甲基-4，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1，5-二羧酸酯。

向G1(ii)(2.80g，5.51mmol)在DMF(40mL)中的混悬液加入Pd(PPh3)2(0.636g，0.551mmol)和Zn(CN)2(0.647g，5.51mmol)。该溶液用氩气x3排气/回填充，然后加热到80℃2小时，用水和EtOAc稀释反应混合物，水层用EtOAcx2提取，有机层用水和盐水洗涤，在MgSO4上干燥并浓缩以得到亮黄色固体。该粗固体用Et2O研磨得到G1(ii)，作为淡黄色固体(1.9g，76％)。质谱：计算值C22H27N6O5(M+H)：455。实测值：455。

中间体G1(iii)：3-{[(5-氰基吡啶-2-基)羰基]氨基}-6，6-二甲基-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1(4H)-羧酸乙基酯。

向G1(ii)(1.9g，4.18mmol)在DCM(20mL)的溶液中加入20mL HCl/二噁烷溶液。将反应混合物在22℃搅拌过夜。该混悬液浓缩获得G1(iii)，为淡黄色固体(1.9g，100％)。质谱：计算值C17H19N6O3(M+H)：355。实测值：355。

中间体G1(iv)：5-(氯羰基)-3-{[(5-氰基吡啶-2-基)羰基]氨基}-6，6-二甲基-5，6-二氢吡咯并[3，4-c]吡唑-1(4H)-羧酸乙基酯。

向G1(iii)(1.90g，4.45mmol)在DCM(50mL)的溶液中加入DIPEA(2.30mL，17.8mmol)。反应混合物冷却到-78℃用加料漏斗逐滴加入三光气(0.924g，3.11mmol)在DCM(30mL)的溶液。在-70℃搅拌该反应15m然后用NaHCO3(饱和水溶液)淬灭并温热到22℃。用水稀释反应混合物，水层用DCMx2提取。有机层用水和盐水洗涤，在MgSO4上干燥并浓缩以获得G1(iv)作为亮黄色固体(1.9g，100％)。

实施例G1：5-氰基-N-(5-{[(2S，5R)-2，5-二甲基-4-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌嗪-1-基]羰基}-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基)吡啶-2-甲酰胺。

向G1(iv)(0.250g，0.600mmol)和(2R，5S)-2，5-二甲基-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)哌嗪(0.238g，1.20mmol)在THF(4mL)中的溶液加入DIPEA(0.5mL，3.00mmol)。该反应在密封的管中加热到90℃过夜。在真空除去挥发物且残余物溶于MeOH(3mL)。加入TEA(3mL)且该溶液在45℃搅拌3小时。浓缩该溶液且该粗混合物通过制备性色谱法纯化获得G1作为白色粉末(0.130g，38％)。

实施例G2-G3：

实施例G2-G3采用与上述实施例G1相似的方法来制备。

实施例H1：N-[5-({(2S，5R)-4-[(4-羟基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基]-2，5-二甲基哌嗪-1-基}羰基)-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并 [3，4-c]吡唑-3-基]吡啶-2-甲酰胺

中间体H1(i)：1，6-二氧杂螺[2.5]辛烷

4-亚甲基四氢-2H-吡喃(1.00g，10.2mmol)在CH₂Cl₂(30mL)的溶液放置在冰浴中然后分三次加入间-氯过氧苯甲酸(2.46g，14.3mmol)。反应缓慢温热到室温并且搅拌3h然后用10％NaOH(aq)(10mL)淬灭，并用CH₂Cl₂(2x15mL)提取。干燥(MgSO₄)合并的提取物，过滤并浓缩以提供中间体H1(i)作为澄明的油(607mg，52％)。¹H NMR(300MHz，氘代氯仿)δppm 1.45-1.63(m，2H)，1.76-1.99(m，2H)，2.69(s，2H)，3.71-3.95(m，4H)。

中间体H1(ii)：4-{[(2R，5S)-4-苄基-2，5-二甲基哌嗪-1-基]甲基}四氢-2H-吡喃-4-醇

向微波瓶中加入1，6-二氧杂螺[2.5]辛烷(259mg，2.3mmol)，(2S，5R)-1-苄基-2，5-二甲基哌嗪(464mg，2.3mmol)和5mL MeOH。将该瓶在微波中加热到150℃2h。粗反应浓缩以提供中间体H1(ii)(723mg，100％)¹H NMR(300MHz，氘代氯仿)δppm 0.92(d，J＝6.22Hz，3H)，1.13(d，J＝5.84Hz，3H)，1.35-1.45(m，1H)，1.46-1.68(m，4H)，1.83(dd，J＝11.30，9.80Hz，1H)，2.12(d，J＝13.94Hz，1H)，2.36-2.53(m，3H)，2.60-2.69(m，2H)，2.85(d，J＝9.04Hz，1H)，3.08(d，J＝13.38Hz，1H)，3.71-3.82(m，4H)，4.04(d，J＝13.38Hz，1H)，7.10-7.47(m，5H).质谱：计算值C₁₉H₃₀N₂O₂(M+H)：318。实测值：318。

中间体H1(iii)：4-{[(2R，5S)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]甲基}四氢-2H-吡喃-4-醇

向氮气吹扫的H1(ii)(723mg，2.3mmol)在MeOH(15mL)中的溶液加入Pd/C(72mg，0.07mmol)。反应用H₂气体排气-回填充(3x)，然后在H₂下过夜。通过硅藻土垫过滤完成的反应混合物，用CH₂Cl₂和MeOH洗涤然后浓缩以得到标题化合物(500mg，97％)作为黄色-橙色的半固体。质谱：计算值C₁₂H₂₄N₂O₂(M+H)：229。实测值：229。

化合物H1：N-[5-({(2S，5R)-4-[(4-羟基四氢-2H-吡喃-4-基)甲基]-2，5-二甲基哌嗪-1-基}羰基)-6，6-二甲基-1，4，5，6-四氢吡咯并[3，4-c]吡唑-3-基]吡啶-2-甲酰胺。

标题化合物通过使用与上述实施例A1相似的方法来制备，其中用4-{[(2R，5S)-2，5-二甲基哌嗪-1-基]甲基}四氢-2H-吡喃-4-醇代替(3S，8aS)-3-甲基八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪。

表1提供了全部列出的本发明化合物，包括相关H NMR数据和可以获得的Ki值。

上述定义的任何上述式I的化合物都可以通过标准化学操作转化为另一个类似化合物。除非另有说明，所有的起始原料、试剂、和溶剂都是市售的并且是本领域技术人员已知的。这些化学操作是本领域技术人员已知的，包括(a)通过在T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，2nd Ed.，John Wiley andSons，New York，1991中所述的方法除去保护基；(b)用伯胺或仲胺、硫醇或醇置换离去基团(卤素、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯等)，以便分别形成仲胺或叔胺、硫醚或醚；(c)用异氰酸酯、酰基氯(或其它活化的羧酸衍生物)、烷基/芳基氯甲酸酯或磺酰氯处理伯胺和仲胺，以便提供相应的脲、酰胺、氨基甲酸酯或磺酰胺；(d)使用醛对伯胺或仲胺进行还原胺化。

本发明的化合物可具有不对称碳原子。可以基于物理化学差异通过本领域技术人员已知的方法将非对映体混合物分离为个别的非对映体，例如通过色谱法或分级结晶。可以如下分离对映异构体：通过与适当的光学活性化合物(例如，醇)反应将对映异构体混合物转化为非对映体混合物，分离非对映体并且将单独的非对映体转化(例如，水解)为相应的纯的对映异构体。包括非对映体混合物和纯的对映异构体在内的所有这种异构体都被认为是本发明的一部分。

性质上为碱性的式I的化合物能够与各种无机酸和有机酸形成各种各样不同的盐。尽管这种盐对于对动物给药来说必需是药学可接受的，但是在实践中经常期望将式I的化合物最初作为药学不可接受的盐从反应混合物分离，然后通过用碱性试剂处理简单地将其转化为游离碱化合物，随后将游离碱转化为药学可接受的酸加成盐。本发明的碱化合物的酸加成盐可以容易地通过在含水溶剂介质中或在适合的有机溶剂例如甲醇或乙醇中用基本上相当量的所选无机酸或有机酸处理碱化合物来制备。在小心地蒸发溶剂之后，容易地得到所需的固体盐。还可以通过加入适当的无机酸或有机酸而使所需的酸性盐从游离碱的有机溶剂溶液中沉淀出来。

在性质上为酸性的那些式I的化合物能够与各种药理学可接受的阳离子形成碱盐。这种盐的实例包括碱金属盐或碱土金属盐，特别是钠盐和钾盐。这些盐全部都是通过常规方法制备的。作为用于制备本发明的药学可接受的碱盐的试剂的化学碱是与酸性的式I的化合物形成无毒碱盐的那些。这种无毒的碱盐包括衍生自药理学可接受的阳离子的那些，所述药理学可接受的阳离子如钠、钾、钙、和镁等。这些盐容易地通过用包含所需药理学可接受的阳离子的水溶液处理相应的酸性化合物，然后将得到的溶液蒸发(优选在减压下)到干燥来制备。或者，还可以通过将酸性化合物的低级链烷醇(alkanolic)溶液与期望的碱金属醇盐混合在一起，然后以与前述相同的方法将得到的溶液蒸发到干燥来进行制备。在任一情况中，优选使用化学计量量的试剂，以便确保反应完全以及所需最终产品的最大收率。

本发明的化合物是蛋白激酶C的抑制剂，并且优选选择性地抑制蛋白激酶C的β-1、β-2和可选的α同工酶。特别地，关于β-2同工酶，本发明的化合物具有低于200nM的Ki值。

作为蛋白激酶C的抑制剂，所述化合物可用于治疗其中蛋白激酶C在病理学中起到作用的病况。本领域中已知的病况包括：糖尿病及其并发症、癌症、缺血、炎症、中枢神经系统病症、心血管疾病、阿尔茨海默氏病和皮肤学疾病。

蛋白激酶C已经牵涉糖尿病的几个不同的方面。蛋白激酶C的过度活性已经牵涉胰岛素信号传导缺陷，因此牵涉II型糖尿病中可见的胰岛素抵抗。Karasik，A.等人，J.Biol.Chem.265：10226-10231(1990)；Chen，K.S.等人，Trans.Assoc.Am.Physicians 104：206-212(1991)；Chin，J.E.等人，J.Biol.Chem.268：6338-6347(1993)。另外，研究已经证明，在已知在暴露于高血糖情况时易感染糖尿病并发症的组织中，蛋白激酶C活性显著升高。Lee，T.S.等人，J.Clin.Invest.83：90-94(1989)；Lee，T.S.等人，Proc. Natl.Acad.Sci USA 86：5141-5145(1989)；Craven，P.A.和DeRubertis，F.R.J.Clin.Invest.83：1667-1675(1989)；Wolf，B.A.J.Clin.Invest.87：1643-1648(1991)。

蛋白激酶C活性长久以来与细胞生长、肿瘤诱发和癌症有关。Rotenberg，S.A.和Weinstein，I.B.Biochem.Mol.Aspects Sel. Cancer 1：25-73(1991)。Ahamd等人，Molecular Pharmacology：43，858-862(1993)。已知的是，蛋白激酶C抑制剂在动物中在预防瘤生长方面是有效的。Meyer，T.等人，Int.J.Cancer 43：851-856(1989)；Akinagaka，S.等人，Cancer Res.51：4888-4892(1991)。新近，蛋白激酶Cβ抑制剂恩扎啕林(Enzastauring)(LY317615.HCl)表现出通过诱导凋亡和抑制增殖的培养的肿瘤细胞，特别是对于人成胶质细胞瘤和结肠癌而具有直接的肿瘤效果。Graff等人，Cancer Res.16：7462-7469(2005)。本发明的化合物还作为多药耐药逆转(MDR)药起作用，使得它们在与其它化疗剂共同给药时是有效的。

蛋白激酶C抑制剂已经表现出阻断炎性应答，例如嗜中性粒细胞氧化猝发(oxidative burst)、T-淋巴细胞中的CD3向下调节、和佛波醇诱导的爪水肿。Towemy，B.等人，Biochem.Biophys.Res.Commun. 171：1087-1092(199))；Mulqueen，M.J.等人，Agents Actions 37：85-89(1992)。因此，作为PKC的抑制剂，本发明的化合物可用于治疗炎症。

蛋白激酶C活性在中枢神经系统的功能中起着重要作用。Huang，K.P.Trends Neurosci.12：425-432(1989)。另外，蛋白激酶C抑制剂已经表现出预防在局部和中枢的缺血性脑损伤和脑水肿中所见的损害。Hara，H.等人，J.Cereb..Blood Flow Metab.10：646-653(1990)；Shibata，S.等人，Brain Res.594：290-294(1992)。还测定到蛋白激酶C与阿尔茨海默氏病有牵连。Shimohama，S.等人，Neurology 43：1407-1413(1993)。因此，本发明的化合物可用于治疗阿尔茨海默氏病和缺血性脑损伤。

蛋白激酶C活性还在心血管疾病中起重要作用。脉管系统中的增加的蛋白激酶C活性已经表现出引起增加的血管收缩和高血压。已知的蛋白激酶C抑制剂预防这种增加。Bilder，G.E.等人，J.Pharmacol. Exp.Ter.252：526-430(1990)。因为蛋白激酶C抑制剂显示对嗜中性粒细胞氧化猝发的抑制作用，蛋白激酶C抑制剂还可以用于治疗心血管性缺血和在缺血后改善心脏功能。Muid，R.E.等人，FEBS Lett.293：169-172(1990)；Sonoki，H.等人，Kokyu-To Junkan 37：669-674(1989)。蛋白激酶C在血小板功能中的作用也得到研究，并且表明，蛋白激酶C水平升高与对激动剂的应答增加有关。Bastyr III，E.J.和Lu，J.Diabetes 42：(Suppl.1)97A(1993)。PKC已经涉及在微管渗透性的血小板活动因子调节中的生物化学通道。Kobayashi等人，Amer.Pjus.Soc.H1214-H1220(1994)。有效的蛋白激酶C抑制剂已经显示影响激动剂诱导的血小板聚集。Toullec，D.等人，J.Biol. Chem.266：15771-15781(1991)。蛋白激酶C抑制剂还阻断激动剂诱导的平滑肌细胞增殖。Matsumoto，H.和Sasaki，Y.Biochem.Biophys， Res.Commun.158：105-109(1989)。因此，本发明的化合物可用于治疗心血管疾病、动脉粥样硬化和再狭窄。

蛋白激酶C的异常活性还涉及皮肤学病症，例如银屑病。Horn，F.等人，J.Invest.Dermatol.88：220-222(1987)；Raynaud，F.和Evain-Brion，D.Br.J.Dermatol.124：542-546(1991)。银屑病的特征在于角化细胞的异常增殖。已知的蛋白激酶C抑制剂已经表现出以其类似于作为PKC抑制剂的效力平行的方式抑制角化细胞增殖。Hegemann，L.等人，Aarch.Dermatol.Res.283：456-460(1991)；Bollag，W.B.等人，J.Invest.Dermatol.100：240-246(1993)。因此，PKC抑制剂可用于治疗银屑病。

本发明的化合物还具有同工酶选择性。所述化合物择优地抑制蛋白激酶Cβ-1和β-2同工酶和可选的α同工酶，对前述同工酶的选择性优于对其余的蛋白激酶C同工酶(即，γ、δ、ε、ξ和η)的选择性。本发明的化合物在比对于最小抑制其它PKC同工酶所需浓度低得多的浓度抑制蛋白激酶C的β-1、β-2同工酶和可选的α同工酶。

本发明的化合物特别地可用于治疗其中涉及蛋白激酶C同工酶β-1、β-2、和可选的α的那些疾病状态。例如，糖尿病中所见的血糖水平升高导致脉管组织中β-2同工酶的同工酶特异性升高。Proc. Natl Acad.Sci.USA 89：11059-11065(1992)。在人血小板中的与糖尿病相关的β同工酶升高已经涉及其对激动剂的应答发生变化。Bastyr III，E.J.和Lu，J.Diabetes 42：(Suppl 1)97A(1993)。人维生素D受体已经表现出选择性被蛋白激酶Cβ磷酸化。这种磷酸化作用已经涉及受体功能的变化。Hsieh等人，Proc.Natl.Acad.Sci. USA 88：931509319(1991)；Hsieh等人，J.Biol.Chem.268：15118-15126(1993)。另外，最近的工作表明，β-2同工酶负责红白血病细胞增殖，而α同工酶涉及这些前述细胞的巨核细胞分化。Murray等人，J.Biol.Chem.268：15847-15853(1993)。

除了上述讨论的β-1和β-2同工酶之外，蛋白激酶Cα同工酶已经表现出可能用于治疗肾病：患有STZ诱导的糖尿病的PKC-α敲除小鼠表现出肾病改善。Menne等人，Diabetes 53：2101-2109(2005)。PKCα与心脏收缩力有关，Braz等人，Nature Medicine 10：248-254(2004)；并且与内皮细胞的Akt活化和eNOS磷酸化的调节有关。Partovian&Simons，Cellular Signalling 16：951-957(2004)。

测定法

蛋白激酶Cβ2(PKCβII)催化从ATP产生ADP，伴随着磷酰基转移到PKC假底物肽上(A-＞S，RFARKGSLRQKNV)。这种转移是偶合至通过丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性进行氧化的β-NADH。通过使用Molecular Devices SPECTRA max PLUS分光光度计观察的在340nm的吸光度降低(e＝6.22cm^-1mM^-1)监控β-NADH转化为NAD+。

典型的测定法在Molecular Devices分光光度计中在96孔透明微量滴定板上在0.1mL的测定缓冲液中在30℃测量20分钟来进行，所述测定缓冲液包含50mM HEPES，pH 7.4，5nM PKC、23单位的丙酮酸激酶、33单位的乳酸脱氢酶、0.15mM肽、0.1mM ATP、1mM DTT、4mM PEP、8mM MgCl₂、0.3mM NADH、60mM CaCl₂、10mg/mL PS、50ng/mL PMA、7.5％DMSO和约10,000nM至0.169nM化合物抑制剂。在添加测定缓冲液之前将3-sn-磷脂酰基-L-丝氨酸(PS)和佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA)超声处理30秒，并且通过添加100μM ATP引发试验。

通过将初始速度数据对Michaelis-Menten方程进行拟合来测定在饱和磷酸-受体肽底物浓度(0.15mM)的bi-bi激酶反应的稳态动力学参数。

v＝V_max[S]/(K_M+[S])

其中v为测量的起始速度，V_max为最大的酶速度，[S]为ATP底物浓度，和K_M为ATP的米氏常数。根据k_cat＝V_max[E]测定酶转换数值(k_cat)，其中[E]为总的酶浓度。通过基于Morrison方程将不同抑制剂浓度的初始速度对ATP竞争性抑制模型进行拟合测定酶抑制常数(表观K_i值)。Morrison，J.F.，Biochim.Biophys Acta 185：269-286(1969)。

药物组合物/制剂、剂量和给药方式

制备含有特定量活性化合物的各种药物组合物的方法是已知的，或者是本领域技术人员显而易见的。另外，本领域技术人员熟知制剂和给药技术。这种主题在例如Goodman和Gilman′s The Pharmaceutical Basis of Therapeutics，最新版本，Pergamon Press；和Remington′s Pharmaceutical Sciences，最新版本，MackPublishing，Co.，Easton，PA中讨论。这些技术可用于本文中所述的方法和组合物的适当的方面和实施方案中。提供以下实施例只是用于说明性的目的，而非意味着限制本发明。

式I的化合物可以作为适合的局部、口服和非肠道药物制剂提供，用于治疗PKCβII介导的疾病。本发明的化合物可以口服给药，作为片剂或胶囊、作为油性或水性悬浮液、锭剂、糖锭剂、粉剂、颗粒剂、乳液、糖浆或酏剂的形式。用于口服应用的组合物可以包括一种或多种调味剂、甜味剂、着色剂和防腐剂，以便生产药学上精致和适口的制备物。片剂可以包含药学可接受的赋形剂以便生产这种片剂。作为本领域中的惯例，这些片剂可以用药学可接受的肠溶衣进行包衣，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，以便延迟在胃肠道中的崩解和吸收，以提供更长的持续作用时间。

用于口服使用的制剂可以是硬胶囊的形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合。它们还可以是软胶囊的形式，其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。

水性悬浮液通常包含与适合于生产水性悬浮液的赋形剂混合的活性成分。这种赋形剂可以是助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂，其可以是天然存在的磷脂例如卵磷脂、环氧乙烷和长链脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯、环氧乙烷和长链脂族醇的缩合产物例如十七(氧化乙烯)十六烷醇(heptadecaethylenoxycetanol)、环氧乙烷和衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷和脂肪酸己糖醇酐的缩合产物例如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。

所述药物组合物可以是无菌的可注射水性悬浮液或油性悬浮液的形式。这种悬浮液可以根据已知的方法配制，使用上述那些适合的分散剂或润湿剂和助悬剂。无菌的可注射制备物还可以配制为在无毒的非肠道可接受的稀释剂或溶剂中的悬浮液，例如配制为在1，3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶剂为水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。为此可以使用任何温和的固定油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。另外，可以将脂肪酸例如油酸用于可注射的制备物中。

式I的化合物还可以以栓剂的形式给药，用于药物的直肠给药。这些组合物可以通过将药物与适合的无刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在大约25℃为固体，但是在直肠温度为液体，因此在直肠中融化以便释放药物。这种材料包括可可脂和其它甘油酯。

对于局部用制备物来说，可以使用包含本发明化合物的例如霜剂、软膏剂、胶体溶液、或悬浮液。

式I的化合物还可以作为脂质体递送系统的形式给药，例如小单层囊泡、大单层囊泡、和多层囊泡。脂质体可以由各种磷脂形成，例如胆固醇、硬脂酰胺或磷脂酰胆碱。

本发明化合物的剂量水平为约0.5mg/kg体重至约100mg/kg体重的量级。优选的剂量比例为约30mg/kg体重至约100mg/kg体重。然而，应该理解，用于任何特定患者的具体剂量水平取决于许多因素，包括要给药的特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物联合和所治疗的特定疾病的严重程度。为了增强本发明化合物的治疗活性，可以将它们与其它口服活性的抗糖尿病化合物并行给药，例如磺酰脲类(例如，甲苯磺丁脲)等。

对于向眼睛给药而言，在药学可接受的眼科媒介物中递送本发明的化合物，使得化合物保持与眼睛表面接触充分的时间段，以允许化合物渗透角膜和/或巩膜和眼睛的内部区域，包括例如前房、后房、玻璃体、眼房水、玻璃体液、角膜、虹膜/睫状体、晶状体、脉络膜/视网膜和巩膜。药学可接受的眼科媒介物可以是软膏剂、植物油、或包囊材料。还可以将本发明的化合物直接注射到玻璃体液或眼房水中。

本发明化合物以及其药学可接受的盐可以给予用于治疗眼疾病例如与年龄相关的黄斑变性(湿和干‘AMD’)，青光眼，糖尿病性视网膜病(包括糖尿病性黄斑水肿)，脉络膜新生血管膜(CNV)，葡萄膜炎，近视性变性，眼瘤，视网膜中央静脉闭塞(entral retinal veinoulusion)，潮红，眼新生血管形成，浆液性中心性视网膜病，眼表面盘症(ocular surface discus)例如干眼症，视网膜中央动脉闭塞，囊样黄斑水肿以及其它视网膜变性性疾病。

化合物可以配制为储库制备物。这种长效制剂可以通过植入(例如，皮下或肌肉内)、肌肉注射或通过上述眼球筋膜囊下或玻璃体内注射。或者，活性成分可以是粉末形式，用于在使用之前用适合的媒介物(例如无菌的无热原的水)构造。

在特别优选的本发明实施方案中，化合物可以制备为用于在盐水中局部给药(与任何通常用于眼睛制备物的防腐剂和抗微生物剂组合)，并且以滴眼剂形式给药。溶液或悬浮液可以制备为其纯的形式并且每天给药几次。或者，如上所述制备的本发明组合物还可以直接对角膜给药。

在优选实施方案中，用结合于角膜的粘膜粘合性聚合物制备组合物。因此，例如，化合物可以与适合的聚合物材料或疏水性材料(例如，作为在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂配制，或者作为微溶的衍生物(例如微溶的盐)配制。

用于疏水性化合物的药用载体为包括苄醇、非极性表面活性剂、与水可互溶的有机聚合物、和水相的共溶剂系统。所述共溶剂系统可以是VPD共溶剂系统。VPD为3％w/v苄醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨酸酯80、和65％w/v聚乙二醇300制得的定容无水乙醇溶液。VPD共溶剂系统(VPD：5W)包含用5％葡萄糖水溶液以1∶1稀释的VPD。这种共溶剂系统很好地溶解疏水性化合物，并且本身在系统给药时产生低的毒性。当然，共溶剂系统的比例可以显著变化而不破坏其溶解度和毒性特征。此外，共溶剂的组分可以变化：例如，可以使用其它低毒性的非极性表面活性剂代替聚山梨酸酯80；聚乙二醇的级分大小可以变化；可以使用其它生物相容的聚合物代替聚乙二醇，例如，聚乙烯基吡咯烷酮；以及可以使用其它糖或聚糖代替葡萄糖。

或者，可以使用用于疏水性药用化合物的其它递送系统。脂质体和乳液是已知用于疏水性药物的媒介物或载体的实例。还可以使用某些有机溶剂(例如，二甲基亚砜)，尽管通常是以更大的毒性为代价。另外，化合物可以使用持续释放系统递送，例如包含治疗剂的固体疏水性聚合物的半渗透性基体。已经确定了各种持续释放材料并且是本领域技术人员已知的。取决于化学性质，持续释放胶囊可以释放化合物达几周直到超过100天。取决于治疗剂的化学性质和生物学稳定性，可以使用用于蛋白质稳定化的另外的策略。

所述药物组合物还可以包括适合的固相或凝胶相载体或赋形剂。这种载体或赋形剂的实例包括碳酸钙、磷酸钙、糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶、和聚合物例如聚乙二醇。

一些本发明的化合物可以作为与药学相容的平衡离子形成的盐提供。药学相容的盐可以与许多酸类形成，包括盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐倾向于比相应的游离碱形式更易溶解于含水或其它质子性溶剂中。

在以下实施例中详细描述本发明的优选化合物的制备，但是技术人员会认识到，所述的化学反应可以容易地加以改造，以便制备许多其它的本发明化合物。例如，本发明的未举例说明的化合物的合成可以通过本领域技术人员显而易见的改变进行，例如，适当地保护干扰基团、更换为本领域中已知的其它适合的试剂、或进行反应条件的常规改变。或者，应该认识到，本文中公开的或本领域中已知的其它反应可用于制备本发明的其它化合物。

以下表1描述了本发明进一步实施方案的进一步的Ki app、结构、命名、和NMR数据。除非另作说明，表1中的化合物从市售的材料开始合成或者使用上述实施例的常规修饰通过已知的方法合成。尽管已经参考具体的实施方案对本发明进行了说明，但是本领域技术人员会认识到，通过常规的实验和实践本发明可以进行改变和修饰。因此，本发明意在不受前述说明书的限制而是由权利要求及其等价物来限定。给出前述的详细说明和实施例只是用于清楚的理解。

NA＝不能得到。

NT＝没有测试。

Chiral＝手性。

Claims

1.式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂合物，

其中，

X是C或N；

R¹选自芳基或者

R²是H或任选进一步用0至3个R⁹基团取代的C₁-C₆烷基，；

R⁶选自H，R^a-O-R^b，C₁-C₈烷基，C₂-C₈链烯基，C₂-C₈炔基，-(R^d)^m-(C₃-C₁₂环烷基)，-(R^d)_m-芳基，-(R^d)_m-(3-15元杂环基)，-(R^d)_m-(C₁-C₆全氟烷基)，-(R^d)_m-卤素，-(R^d)_m-CN，-(R^d)_m-C(O)R^a，-(R^d)_m-C(O)OR^a，-(R^d)_m-C(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-OR^a，-(R^d)_m-OC(O)R^a，-(R^d)_m-OC(O)NR^aR^b，-(R^d)^m-O-S(O)R^a，-(R^d)_m-OS(O)₂R^a，-(R^d)_m-OS(O)₂NR^aR^b，-(R^d)_m-OS(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-NO₂，-(R^d)_m-NR^aR^b，-(R^d)_m-N(R^a)C(O)R^b，-(R^d)_m-N(R^a)C(O)OR^b，-(R^d)_m-N(R^c)C(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-N(R^a)S(O)₂R^b，-(R^d)_m-N(R^a)S(O)R^b，-(R^d)_m-SR^a，-(R^d)_m-S(O)R^a，-(R^d)_m-S(O)₂R^a，-(R^d)_m-S(O)NR^aR^b，-(R^d)_m-S(O)₂NR^aR^b，-(R^d)_m-O-(R^e)_m-NR^aR^b或-(R^d)_m-NR^a-(R^e)-OR^b；或R⁶可以与R⁴一起环化形成4-至7-元杂环，其稠合到它们所连接的哌嗪或哌啶(piperadine)上；且其中所述的烷基，链烯基，炔基，环烷基，芳基，杂环基，和杂芳基中的任何基团可以独立地进一步用0至3个R⁹基团取代；

m各自独立地是0或1；且

条件是R²，R³，R⁴和R⁵不全是H。

2.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中R⁷和R⁸都是甲基。

3.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中X为N。

4.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中R¹是吡啶或哌嗪。

5.权利要求1的化合物或其药物可接受的盐，其中R¹是5-元杂环基。

6.权利要求5的化合物或其药物可接受的盐，其中R¹选自噁唑，异噁唑，噻唑或咪唑。

7.前述权利要求中任一项的化合物或其药物可接受的盐，其中R²或R⁴是甲基。

8.前述权利要求中任一项的化合物或其药物可接受的盐，其中R⁶是-(R^d)_m-(3-15元杂环基)。

9.权利要求中8的化合物或其药物可接受的盐，其中R⁶是-(R^d)_m四氢吡喃。

10.权利要求9的化合物或其药物可接受的盐，其中R⁶是四氢-2H-吡喃-4-基甲基。

11.前述权利要求中任一项的化合物或其药物可接受的盐，其中R²是(S)构型的-CH₃。

12.前述权利要求中任一项的化合物或其药物可接受的盐，其中R⁶是-(R^d)_m-OR^a。

13.选自下述的化合物或其药物可接受的盐，

14.药物组合物，包括有效量的前述权利要求中任一项的化合物或其药学可接受的盐，和药学可接受的载体。

15.治疗糖尿病及其并发症、癌症、缺血、炎症、中枢神经系统病症、心血管疾病、阿尔茨海默氏病和皮肤病压力、病毒病、炎性病症、或其中肝脏为靶器官的疾病的方法，所述方法包括对哺乳动物给予有效量的前述权利要求中任一项的化合物或其药学可接受的盐。