NO332176B1 - Preparat og farmasøytisk preparat omfatter en biomasse oppnådd fre en mikrobiell kultur omfattende Methylococcus capsulatus samt anvendelse derav - Google Patents
Preparat og farmasøytisk preparat omfatter en biomasse oppnådd fre en mikrobiell kultur omfattende Methylococcus capsulatus samt anvendelse derav Download PDFInfo
- Publication number
- NO332176B1 NO332176B1 NO20043741A NO20043741A NO332176B1 NO 332176 B1 NO332176 B1 NO 332176B1 NO 20043741 A NO20043741 A NO 20043741A NO 20043741 A NO20043741 A NO 20043741A NO 332176 B1 NO332176 B1 NO 332176B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- biomass
- preparation
- strain ncimb
- human
- fish
- Prior art date
Links
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 title claims abstract description 93
- 241000589346 Methylococcus capsulatus Species 0.000 title claims abstract description 13
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title abstract description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims abstract description 6
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 31
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 17
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 239000003345 natural gas Substances 0.000 claims description 15
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 12
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 9
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 9
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 6
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 32
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 abstract description 18
- 241000994220 methanotrophic bacterium Species 0.000 abstract description 5
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 abstract description 4
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 38
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 35
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 31
- 239000000047 product Substances 0.000 description 28
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 27
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 18
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 16
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 15
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 12
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 11
- 241000710921 Infectious pancreatic necrosis virus Species 0.000 description 11
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 11
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 11
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 11
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 11
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 11
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 11
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 241000607525 Aeromonas salmonicida Species 0.000 description 9
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 9
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 9
- 241000277263 Salmo Species 0.000 description 8
- 241001148129 Yersinia ruckeri Species 0.000 description 8
- 230000001450 methanotrophic effect Effects 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N Propane Chemical compound CCC ATUOYWHBWRKTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000036541 health Effects 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 4
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010017553 Furuncle Diseases 0.000 description 4
- 241000863391 Methylophilus Species 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 208000003512 furunculosis Diseases 0.000 description 4
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 4
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 4
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 4
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 3
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 3
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001294 propane Substances 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 241000099082 Aneurinibacillus sp. Species 0.000 description 2
- 241000498637 Brevibacillus agri Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000529919 Ralstonia sp. Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010048249 Yersinia infections Diseases 0.000 description 2
- 208000025079 Yersinia infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- -1 consists of methane Chemical compound 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 2
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 230000007279 water homeostasis Effects 0.000 description 2
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000555286 Aneurinibacillus Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000193747 Bacillus firmus Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000555281 Brevibacillus Species 0.000 description 1
- 241000193764 Brevibacillus brevis Species 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000000989 Complement System Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010069112 Complement System Proteins Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-OEXCPVAWSA-N D-tagatose Chemical compound OCC1(O)OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-OEXCPVAWSA-N 0.000 description 1
- 239000004470 DL Methionine Substances 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000147019 Enterobacter sp. Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000276438 Gadus morhua Species 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000018583 New-onset refractory status epilepticus Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 241000269980 Pleuronectidae Species 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 241000334216 Proteus sp. Species 0.000 description 1
- 241000232299 Ralstonia Species 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241000277289 Salmo salar Species 0.000 description 1
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000607149 Salmonella sp. Species 0.000 description 1
- 241000277331 Salmonidae Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- WLDHEUZGFKACJH-UHFFFAOYSA-K amaranth Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].C12=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(O)=C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C2=CC=CC=C12 WLDHEUZGFKACJH-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000006053 animal diet Substances 0.000 description 1
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940005348 bacillus firmus Drugs 0.000 description 1
- 235000015173 baked goods and baking mixes Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229940077731 carbohydrate nutrients Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004020 intracellular membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007108 local immune response Effects 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N methionine Chemical compound CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 230000016379 mucosal immune response Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002943 palmitic acids Chemical class 0.000 description 1
- SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N palmitoleic acid Chemical class CCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O SECPZKHBENQXJG-FPLPWBNLSA-N 0.000 description 1
- 210000004923 pancreatic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000029219 regulation of pH Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000003340 retarding agent Substances 0.000 description 1
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241001097986 type I methanotrophic bacterium Species 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/30—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for swines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
- A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Birds (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Physiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse angår generelt forsterkning av immunresponsen i menneske og ikke-humane dyr, f.eks. immunstimulering. Nærmere bestemt angår oppfinnelsen anvendelsen av en biomasse utledet fra en metanotrof bakterieinneholdende kultur som et immunstimulerende middel, f.eks. for å øke motstanden mot infeksjon i et menneske eller et ikke-humant dyr.
Funksjonen til immunsystemet i ethvert dyr er viktig for å bekjempe infeksjon, f.eks. i kontrollen av sykdommer forårsaket av eksterne midler slik som virus, bakterier og andre patogener.
Det er for tiden stor interesse for anvendelsen av midler som er i stand til å frembringe immunstimulerende virkninger i både mennesker og ikke-humane dyr og som følgelig er i stand til å opprettholde og/eller forsterke responsen til immunsystemet. På denne måten økes dyrets evne til å bekjempe infeksjon og resulterer i en total forsterket helse og vitalitet.
Det er kjent at visse bakterier, og ekstrakter derav, når de gis oralt til dyr kan forsterke immunresponsen mot visse antigener. Forsterket immunrespons forårsaket av visse bakterielle peptidoglykaner har f.eks. blitt rapportert. Ulike gjærtyper slik som de som tilhører slekten Saccaromyces cerevisiae og deres ekstrakter, f.eks. deres uløselige glukaner har også blitt funnet å ha ikke-spesifikke immunstimulerende egenskaper. Imidlertid er det et fortsatt behov for alternative materialer som kan stimulere (f.eks. forsterke) immunresponsen, spesielt materialer som også har gode næringsegenskaper.
US 5,314,820 beskriver en metanolutnyttende bakterie valg fra gruppen bestående av a Methylophilus KISRI 5 (NCIB 12135), Methylophilus KISRI 6.1 (NCIB 12136), Methylophilus KISRI 512 (NCIB 12137), and Methylophilus KISRI 5112 (NCIB 12138).
U.I. Dahlgren et al., 1991, Immunology, 73:4, 394-397 rapporterer at bakterier som koloniserer den intestinale mukosa fremkaller en kraftig mukosal immunrespons.
Den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer et immunstimulerende middel som er utledet fra en mikrobiell kultur inneholdende en metanotrof bakterie, fortrinnsvis fra en mikrobiell kultur inneholdende bakterien Metylococcus capsulatus, i tillegg til Ralstonia sp., Brevibacillus agri og Aneurinibacillus sp.
Ifølge ett aspekt tilveiebringer følgelig den foreliggende oppfinnelse et preparat omfattende hvori nevnte preparat omfatter en biomasse oppnådd fra en mikrobiell kultur omfattende Methylococcus capsulatus (Bath) (stamme NCIMB 11132), DB3 (stamme NCIMB 13287) og DB5 (stamme NCIMB 13289), eventuelt i kombinasjon med DB4 (stamme NCIMB 13288), for anvendelse som et medikament, for eksempel som et immunstimulerende middel, f.eks. for anvendelse som medikament for å opprettholde og/eller forsterke immunsystemet til et menneske eller et ikke-humant dyr.
I følge et annet aspekt tilveiebringes et preparat ifølge oppfinnelsen, hvori nevnte mikrobielle kultur fremstilles ved fermentering på hydrokarbonfraksjoner eller på naturgass, fortrinnsvis fra fermentering på naturgass.
Ifølge et ytterligere aspekt tilveiebringer oppfinnelsen anvendelsen av et preparat som beskrevet heri til fremstillingen av et medikament for anvendelse som et immunstimulerende middel, f.eks. for anvendelse som et medikament for å opprettholde og/eller forsterke immunsystemet til et menneske eller et ikke-humant dyr.
Preparatet for anvendelse som et medikament omfattende en biomasse i følge oppfinnelsen er anvendelig for å opprettholde og/eller forsterke immunsystemet i et menneske eller et ikke-humant dyr, ved å administrere en terapeutisk effektiv mengde av en biomasse som beskrevet heri til nevnte menneske eller.
I følge enda et aspekt tilveiebringer oppfinnelsen anvendelse av et preparat som beskrevet heri til fremstilling av et medikament for anvendelse i forebyggingen av enhver sykdom eller tilstand assosiert med, forårsaket av eller som på annen måte har bidratt til ethvert eksogent fremmed materiale, f.eks. en patogen mikroorganisme, så som der nevnte sykdom er av viral eller bakteriell oppfinnelse. v~"
Det tilveiebringes i følge enda et aspekt av oppfinnelsen et farmasøytisk preparat omfattende en biomasse oppnådd fra en mikrobiell kultur omfattende Methylococcus capsulatus (Bath) (stamme NCIMB 11132), DB3 (stamme NCIMB 13287) og DB5 (stamme NCIMB 13289), eventuelt i kombinasjon med DB4
(stamme NCIMB 13288), sammen med i det minste én fysiologisk akseptabel bærer.
I følge et aspekt er nevnte farmasøytiske preparat for anvendelse i forebyggingen av enhver sykdom eller tilstand assosiert med, forårsaket av eller som på annen måte har bidratt til ethvert eksogent fremmed materiale, f.eks. en patogen mikroorganisme.
I følge enda et aspekt omfatter preparatet i følge oppfinnelsen eller det
farmasøytiske preparatet i følge oppfinnelsen i det minste én vaksine.
Endelig tilveiebringes et produkt i følge oppfinnelsen inneholdende en biomasse i følge oppfinnelsen, og separat en vaksine for simultan, separat eller påfølgende anvendelse for å opprettholde og/eller forsterke immunsystemet til et menneske eller et ikke-humant dyr.
Som anvendt heri henviser uttrykket "immunstimulerende" til forsterket funksjon av celler involvert i normale immunresponser. Forsterkede cellulære og/eller humorale responser frembrakt gjennom lymfocytter i dyret er observert. Forsterkede responser kan være gjenspeilet av økt komplimentaktivitet, lysozymaktivitet, cellulære immunresponser eller immunglobulinnivåer som beskrevet i det følgende. Irrimunglobulinnivåer, f.eks. IgG-nivåer, undersøkes passende i en egnet prøve og sammenlignes mot slike nivåer i en tilsvarende prøve fra et normalt menneske eller et ikke-humant dyr, dvs. et menneske eller et ikke-humant dyr hvortil det immunstimulerende midlet ifølge oppfinnelsen ikke har blitt administrert. Immunglobulinnivåer for en spesifikk immunglobulintype (f.eks. IgG eller IgA) eller spesifikke mot én eller flere spesifikke antigener kan undersøkes. En forsterket funksjon gjenspeiles gjennom en statistisk signifikant økning (f.eks. større enn omtrent 5 %, fortrinnsvis 10 %) av immunresponsnivået til én eller flere av de ovenfor nevnte eller andre egnede indikatorer.
Biomassen omfattet i preparatet ifølge oppfinnelsen er utledet fra en mikrobiell kultur som omfatter en metanotrof bakterie, eventuelt i kombinasjon med én eller flere arter av heterotrofe bakterier, spesielt foretrukket en kombinasjon av metanotrofe og heterotrofe bakterier. Som anvendt heri omfatter uttrykket "metanotrof enhver bakterie som utnytter metan, metanol eller formaldehyd for vekst. Uttrykket "heterotrof' anvendes for bakterier som utnytter organiske substrater andre enn metan, metanol eller formaldehyd for vekst.
Den bakterielle biomassen for anvendelse som beskrevet heri kan dannes gjennom vekst av bakterien på et egnet medium eller substrat. Den eksakte naturen til vekstmediet som anvendes for å fremstille biomassen er ikke kritisk og flere egnede substrater kan anvendes.
Biomassen omfattet i preparatet i følge oppfinnelsen kan passende fremstilles gjennom en fermenteringsprosess hvori oksygen og et egnet substrat slik som en væske eller gassholdig hydrokarbon, en alkohol eller karbohydrat, f.eks. metan, metanol eller naturgass, sammen med en mineralnæringsstoffløsning fores til en rørreaktor inneholdende mikroorganismene. Et antall slike fremgangsmåter er velkjente og beskrevet i teknikkens stand, f.eks. i WO 01/60974, DK-B-170824, EP-A-418187og EP-A-306466.
Biomassematerialet for anvendelse som beskrevet heri vil fortrinnsvis være utledet fra fermentering på hydrokarbonfraksjoner eller på naturgass. Spesielt foretrukket er biomassematerialer utledet fra fermentering på naturgass. I slike prosesser vil vanligvis en del av reaktorinnholdet eller buljongen trekkes ut og mikroorganismene kan separeres ved hjelp av velkjente teknikker f.eks. sentrifugering og/eller ultrafiltrering ettersom konsentrasjonen av mikroorganismer øker i fermentoren.
I en slik fermenteringsprosess vil passende buljongen kontinuerlig trekkes ut fra fermentoren og vil ha en cellekonsentrasjon på mellom 1 og 5 vekt%, f.eks. omtrent 3 vekt%.
En foretrukket bakterie for anvendelse i følge oppfinnelsen inkluderer Methylococcus capsulatus (Bath), en termofil bakterie opprinnelig isolert fra de varme kildene i Bath, England og deponert som NCIMB 11132 ved The National Collections of Industrial and Marine Bacteria, Aberdeen, Skotland. M. capsulatus (Bath) har optimal vekst ved omtrent 45°C, selv om vekst kan skje mellom 37°C og 52°C. Det er en gram-negativ, ikke-motorisk sfærisk celle som vanligvis opptrer i par. De intracellulære membranene er arrangert som bunter av vesikulære plater karakteristisk for type I metanotrofe bakterier. M. capsulatus (Bath) er genetisk en svært stabil organisme uten kjente plasmider. Den kan utnytte metan eller metanol for vekst og ammoniakk, nitrat eller molekylært nitrogen som en nitrogenkilde for proteinsyntese.
Andre egnede bakterier for anvendelse i følge oppfinnelsen inkluderer den heterotrofe bakterien DB3, stamme NCIMB 13287 ( Ralstonia sp. tidligere kjent som Alcaligenes acidovorans DB3), DB5, stamme NCIMB 13289 ( Brevibacillus agri tidligere kjent som Bacillus firmus DB5) og DB4, stamme NCIMB 13288 ( Aneurinibacillus sp. tidligere kjent som Bacillus brevis DB4) som hver har optimal vekst ved en temperatur på omtrent 45°C.
DB3 er en gram-negativ, aerob, motorisk stavbakterie tilhørende slekten Ralstonia som kan anvende etanol, acetat, propionat og butyrat for vekst. DB4 er en gram-positiv, endosporedannende, aerob stavbakterie tilhørende slekten Aneurinibacillus som kan utnytte acetat, D-fruktose, D-mannose, ribose og D-tagatose. DB5 er en gram-positiv, endosporedannende, motorisk, aerob stavbakterie av slekten Brevibacillus som kan utnytte acetat, N-acetylglukosamin, citrat, glukonat, D-glukose, glyserol og mannitol.
Ett eksempel på en fermenteringsprosess som anvender naturgass som den eneste karbon- og energikilden er den som beskrevet i EP-A-306466 (Dansk Bioprotein). Denne fremgangsmåten er basert på den kontinuerlige fermenteringen av den metanotrofe bakterien M. capsulatus dyrket på metan. Luft eller rent oksygen anvendes for oksygenering og ammoniakk anvendes som nitrogenkilden. I tillegg til disse substratene krever bakterien vanligvis vann, fosfat (f.eks. som fosforsyre) og flere mineraler som kan inkludere magnesium, kalsium, kalium, jern, kopper, sink, mangan, nikkel, kobolt og molybden, vanligvis anvendt som sulfater, klorider eller nitrater.
Naturgass består hovedsakelig av metan selv om dets sammensetning vil variere for forskjellige gassfelt. Vanligvis kan det forventes at naturgass inneholder omtrent 90 % metan, omtrent 5 % etan, omtrent 2 % propan og noe høyere hydrokarboner. Gjennom fermenteringen av naturgass oksideres metan ved hjelp av metanotrofe bakterier til biomasse og karbondioksid. Metanol, formaldehyd og maursyre er metabolske mellomprodukter. Formaldehyd og i noen grad karbondioksid assimileres til biomasse. Metanotrofe bakterier er imidlertid ikke i stand til å anvende substrater omfattende karbon-karbonbindinger for vekst og de gjenværende komponentene i naturgass, dvs. etan, propan og i noen grad høyere hydrokarboner oksideres av metanotrofe bakterier og produserer de korresponderende karboksylsyrer (f.eks. etan oksideres til eddiksyre). Slike produkter kan være inhibitoriske for metanotrofe bakterier og det er derfor viktig at deres konsentrasjon forblir lav, fortrinnsvis under 50 mg/l, i løpet av biomasseproduksjonen. Dette problemet kan løses ved den kombinerte anvendelsen av én eller flere heterotrofe bakterier som kan utnytte metabolittene fremstilt av de metanotrofe bakteriene. Slike bakterier er også i stand til å utnytte organiske materialer frigjort i fermenteringsbuljongen gjennom cellelysis. Dette er viktig for å unngå skumdannelse og minimaliserer også risikoen for at kulturen kontamineres med uønskede bakterier. En kombinasjon av metanotrofe og heterotrofe bakterier resulterer i en stabil kultur med høyt utbytte og er spesielt foretrukket for anvendelse ifølge oppfinnelsen.
I løpet av biomasseproduksjonen reguleres vanligvis pH'en til fermenterings-blandingen til mellom omtrent 6 og 7, f.eks. til 6,5 + 0,3. Egnede syrer/baser for pH-regulering kan lett velges av fagmannen. Spesielt egnet for anvendelse i denne sammenheng er natriumhydroksid og svovelsyre. I løpet av fermenteringen bør temperaturen i fermentoren fortrinnsvis opprettholdes innenfor området fra 40°C til 50°C, mest foretrukket 45°C + 2°C.
Spesielt foretrukket for anvendelse i henhold til oppfinnelsen er en mikrobiell kultur omfattende en kombinasjon av den metanotrofe bakterien Methylococcus capsulatus (Bath) (stamme NCIMB 11132), og den heterotrofe bakterien DB3 (stamme NCIMB 13287) og DB5 (stamme NCIMB 13289), eventuelt i kombinasjon med DB4
(stamme NCIMB 13288). DB3 sin rolle er å utnytte acetat og propionat fremstilt av M. capsulatus (Bath) fra etan og propan i naturgassen. DB3 kan stå for opptil 10 %, f.eks. omtrent 6-8 % av det totale celletallet av den resulterende biomassen. DB4 og DB5 sin rolle er å utnytte lyseprodukter og metabolitter i mediet. Vanligvis vil DB4 og DB5 hver stå for mindre enn 1 % av celletallet gjennom kontinuerlig fermentering.
Egnede fermentorer for anvendelse i fremstillingen av biomassen er de av løkketypen, slik som de beskrevet i DK 1404/92, EP-A-418187 og EP-A-306466 til Dansk Bioprotein eller luft-heis-reaktorer ("air-lift rectors"). En løkketype fermentor med statiske blandere resulterer i en høy utnyttelse av gassen (f.eks. opptil 95 %) som følge av plugg-gjennomstrømningsegenskapene til fermentoren. Gass introduseres ved flere posisjoner langs løkken og forblir i kontakt med væsken inntil de separeres inn i hoderommet ved løkkeenden. Kontinuerlig fermentering kan oppnås ved anvendelse av 2-3 % biomasse (på basis av tørrvekt) og en fortynningshastighet på 0,02-0,50 h"<1>, f.eks. 0,05-0,25 h"<1>.
Andre fermentorer kan anvendes i fremstillingen av biomassen og disse inkluderer rørformede fermentorer og omrørte tankfermentorer.
Typisk kan biomassen fremstilt fra fermentering av naturgass omfatte fra 60-80 vekt% ubearbeidet protein; fra 5-20 vekt% ubearbeidet fett; fra 3-10 vekt% aske; fra 3-15 vekt% nukleinsyrer (RNA og DNA); fra 10-30 g/kg fosfor; opptil 350 mg/kg jern; og opptil 120 mg/kg kopper.
Biomassen vil spesielt foretrukket omfatte fra 68-73 vekt%, f.eks. omtrent 70 vekt% ubearbeidet protein; fra 9-11 vekt%, f.eks. omtrent 10 vekt% ubearbeidet fett; fra 5-10 vekt%, f.eks. omtrent 7 vekt% aske; fra 8-12 vekt%, f.eks. omtrent 10 vekt% nukleinsyrer (RNA og DNA); fra 10-25 g/kg fosfor; opptil 310 mg/kg jern; og opptil 110 mg/kg kopper. Aminosyreprofilen til proteininnholdet kan forventes å være næringsmessig fordelaktig med en høy andel av de viktigere aminosyrene cystein, metionin, treonin, lysin, tryptofan og arginin. Vanligvis kan disse være tilstede i en mengde på henholdsvis omtrent 0,7 %, 3,1 %, 5,2 %, 7,2 %, 2,5 % og 6,9 % (uttrykt som en prosent av den totale mengden aminosyrer). Vanligvis vil fettsyrene omfatte hovedsakelig mettet palmitinsyre (omtrent 50 %) og monoumettet palmitoleinsyre (omtrent 36 %). Mineralinnholdet i produktet vil vanligvis omfatte høyere mengder fosfor (omtrent 1,5 vekt%), kalium (omtrent 0,8 vekt%) og magnesium (omtrent 0,2 vekt%).
Vanligvis vil den resulterende biomassen produseres i form av en flytende vandig pasta eller slurry. Vanligvis vil denne i det vesentlige bestå av helt cellemateriale, selv om en del istykkerrevet cellemateriale også vil være tilstede.
Produktet fra fermentoren kan anvendes direkte (dvs. uten ytterligere prosessering) som, eller som en komponent eller forløper til et preparat for anvendelse som beskrevet heri. Imidlertid vil dette vanligvis utsettes for en kombinasjon av sentrifugerings- og/eller filtreringsprosesser (f.eks. ultrafiltrering) for å redusere vanninnholdet forut for anvendelse. I løpet av sentrifugeringen økes tørrstoffinnholdet i biomassen vanligvis fra omtrent 2 til omtrent 15 vekt%, f.eks. til omtrent 12 vekt%. Ultrafiltrering som kan utføres ved en temperatur på mellom 40 og 50°C, f.eks. mellom 42 og 46°C, konsentrerer ytterligere biomassen til et produkt inneholdende fra 10-30 vekt%, fortrinnsvis fra 15-25 vekt%, f.eks. fra 15-22 vekt% biomasse. Størrelseseksklusjon anvendt gjennom ultrafiltreringen vil vanligvis være i området på omtrent 100000 Daltons. Etter ultrafiltrering kan biomassen avkjøles, fortrinnsvis til en temperatur fra 10-30°C, f.eks. til omtrent 15°C, f.eks. ved å føre den konsentrerte proteinslurryen fra ultrafiltreringsenheten over en varmeveksler hvoretter den kan oppbevares i en buffertank ved konstant temperatur, f.eks. i et tidsrom på fra 1-24 timer, fortrinnsvis 5-15 timer, f.eks. 5-12 timer, ved en temperatur på fra 10-20°C, mer foretrukket fra 5rl5°C ved en pH i området fra 5,5-6,5.
Etter sentrifugering og/eller ultrafiltrering vil biomassematerialet være en relativt viskøs proteinslurry eller -pasta. Selv om den kan anvendes direkte eller som en komponent eller forløper til et produkt for anvendelse som beskrevet heri vil biomassematerialet vanligvis bearbeides ytterligere for å fjerne overskudd av vann fra produktet. Valget av ethvert eller flere ytterligere tørketrinn vil avhenge av vanninnholdet i materialet og det ønskede fuktighetsinnhold i det endelige produktet.
Vanligvis vil produktet ytterligere bearbeides i henhold til velkjente sprøytetørketeknikker. Enhver konvensjonell sprøytetørker med eller uten pulversengenheter kan anvendes, f.eks. type 3-SPD sprøytetørker tilgjengelig fra APV Anhydro, Danmark. Innløpstemperaturen for luften i sprøytetørkeren kan fortrinnsvis være omtrent 300°C og utløpstemperaturen kan være omtrent 90°C. Fortrinnsvis har det resulterende produktet et vanninnhold på fra omtrent 2-10 vekt%, fortrinnsvis fra 6-8 vekt%, f.eks. omtrent 5 vekt%. Det resulterende produktet vil vanligvis være et frittflytende granulat med en partikkelstørrelse på fra 0,1-0,5 mm, fortrinnsvis fra 0,15-0,2 mm.
Den immunstimulerende virkningen av biomassematerialet gjør dette egnet for anvendelse i forsterkning av helsen og den totale vitaliteten til dyr (dvs. mennesker og ikke-humane dyr). Dette kan anvendes f.eks. i forebygging av sykdommer eller tilstander i ethvert dyr som er assosiert med, forårsaket av eller på annen måte er bidratt til av ethvert eksogent fremmed materiale, f.eks. en patogen mikroorganisme. Eksempler på slike sykdommer og tilstander inkluderer enhver sykdom eller infeksjon av viral eller bakteriell opprinnelse, f.eks. gastrointestinale sykdommer slik som salmonellosis, dysenteri og vanlig diaré (f.eks. som et resultat av mikroorganismeinfeksjon, slik som av E. coli, Enterobacter sp., Salmonella Sp. og Proteus sp.).
Ett område hvor materialet er spesielt anvendelig er som, i eller som et additiv til et dyrefor, spesielt for som skal inntas av "mat"-dyr, dvs. dyr vanligvis avlet for humant forbruk. Eksempler på "mat"-dyr som kan avles og/eller behandles i henhold til fremgangsmåtene beskrevet heri inkluderer gris, fjærkre (f.eks. kyllinger) og fisk (f.eks. laks, ørret, torsk, kveite osv.). Materialet beskrevet heri kan administreres til friske dyr for å forsterke forutnyttelsen eller forbedre den generelle helsen og vitaliteten til dyret. Dette kan f.eks. redusere dyrets avhengighet av vaksiner og antibiotika.
Når biomassen anvendes i oppdrett av "mat"-dyr kan det inkorporeres i konvensjonelle dyrefor (f.eks. mel, pelletter, ekstruderte pelletter, kjøttbaserte produkter, serialer, soyabaserte produkter osv.) gjennom fremstilling eller produksjon på enhver egnet måte. Alternativt kan det tilveiebringes i form av et foradditiv som skal blandes med eller påføres et konvensjonelt dyrefor umiddelbart forut for fortæring av dyret i en mengde tilstrekkelig for å tilveiebringe den ønskede immunstimulerende virkningen.
Materialet beskrevet heri kan også. anvendes for å opprettholde og/eller forsterke helsen og vitaliteten til kjæledyr. Følgelig kan materialet også anvendes i fremstillingen av et kjæledyrfor eller som et kjæledyrforadditiv.
Uttrykket "kjæledyrfor" som anvendt heri henviser generelt til ethvert for som primært er ment å skulle fortæres av kjæledyr. Dette inkluderer nærmere bestemt næringsmessige balanserte forpreparater som er ment å tilveiebringe vesentlig hele dietten til dyret. Næringsmessig balanserte for vil inneholde protein, karbohydrater, fett, vitaminer og mineraler i mengder tilstrekkelig for adekvat vekst og opprettholdelse (dvs. helse) for dyret. Som anvendt heri er uttrykket "kjæledyr" primært ment å omfatte katter og hunder, spesielt hunder. Imidlertid kan produktet beskrevet heri også anvendes som, i eller som et additiv til for ment for fortæring av ethvert essensielt husdyr eller tamt dyr eller fugl, slik som kaniner, marsvin, tropisk fisk, fugler, osv. Uttrykket "kjæledyr" er ikke ment å omfatte besetninger slik som griser, kyllinger, kuer, osv., eller ethvert dyr som primært avles for humant forbruk, f.eks. fisk slik som laks.
Uttrykket "kjæledyrforadditiv" som anvendt heri henviser generelt til ethvert produkt som er ment å skulle tilføres til (f.eks. inkorporeres i og/eller påføres) et kjæledyrfor, f.eks. gjennom fremstillingsprosessen eller umiddelbart forut for fortæring av foret. F.eks. kan biomassematerialet beskrevet heri dispergeres inne i et kjæledyrfor eller inne i enhver komponent i et kjæledyrfor (f.eks. en sky eller saus), eller belagt (enten fullstendig eller delvis) på den ytre overflaten til fåret. Alternativt kan biomassematerialet tilveiebringes i form av et kjæledyrforadditiv som skal blandes med eller påføres et konvensjonelt kjæledyrfor umiddelbart forut for fortæring av dyret. F.eks. kan dette raust vetes eller sprayes på overflaten til foret i en mengde tilstrekkelig for å tilveiebringe de krevde immunstimulerende virkningene.
Typiske kjæledyrforpreparater som biomassemateriale kan tilsettes til og/eller påføres på inkluderer fjærkre eller kjøtt-bi-produkter, og soyabaserte preparater. Foretrukne preparater er de som kommersielt selges og som er næringsmessig balansert.
Det immunstimulerende preparatet beskrevet heri vil kunne anvendes i dyrefår (både kjæledyrfor og for ment for forbruk av "mat"-dyr) i en mengde som effektivt vil tilveiebringe en immunstimulerende virkning. Passende inkorporeringsnivåer for materialet vil avhenge av flere faktorer, slik som dyreartene, alderen og størrelsen til dyret som det er ment for osv. Egnede nivåer kan lett bestemmes av fagmannen på området. Når det tilsettes til konvensjonelle dyrefor eller kjæledyrfor vil nivåene for inkorporering som anvendes for å tilveiebringe immunstimulerende virkninger typisk være i området fra 1-40 vekt%, f.eks. fra 2-20 vekt%.
Materialet beskrevet heri kan også anvendes for å forsterke immunsystemet til mennesker. F.eks. kan det inkorporeres i den normale dietten som et kosttilskudd eller det kan tilsettes til visse matvarer ment for humant forbruk for å tilveiebringe . de ønskede immunstimulerende virkningene. Eksempler på forprodukter som kan inneholde en passende mengde av produktet inkluderer f.eks. bakeprodukter, kjøttprodukter osv. Produktet kan også anvendes som en kjøtterstatning i vegetarmat.
Produktet kan når det er tilveiebrakt i form av et kosttilskudd være en væske. Vanligvis vil det imidlertid typisk være i form av et pulver som kan lagres for lengre tidsrom uten degradering og som kan tilføres til en matvare i den passende mengden eller som kan rekondisjoneres til en væskeform (f.eks. ved tilsetting av vann) umiddelbart forut for forbruk. Alternativt kan det formuleres som et preparat for enteral (f.eks. oral) administrering. Egnede preparater kan tilveiebringes i enhver oralt administrerbar form, f.eks. som kapsler eller tabletter. Når det er tilveiebrakt i form av en væske, vil produktet vanligvis være tilstede i ampuller hvori produktet er suspendert i et egnet væskemedium, f.eks. sterilt vann.
Selv om det primært er beskrevet for anvendelse som et oralt preparat kan det heri beskrevne immunstimulerende midlet også administreres gjennom enhver annen egnet fremgangsmåte kjent for fagmannen, inkludert f.eks. parenteral (f.eks. intramuskulær, subkutan, intraperetoneal eller intravenøs), rektal eller topisk administrering.
Ethvert preparat omfattende produktet kan administreres til et individ (f.eks. menneske eller ikke-humant dyr) enten alene eller i kombinasjon med i det minste en fysiologisk akseptabel bærer. Som anvendt heri er uttrykket "fysiologisk akseptabel bærer" ment å omfatte enhver forbindelse som kan administreres sammen med produktet og som tillater at dette utøver sin tilsiktede funksjon. Anvendelsen av slike medier er velkjent for fagmannen. Eksempler på slike bærere inkluderer løsninger, løsningsmidler, dispergeringsmedier, forsinkelsesmidler, emulsjoner og lignende.
Egnede doser som kan tilveiebringe en immunstimulerende virkning i mennesker kan lett bestemmes av fagmannen på området. Passende doser vil avhengig av et antall faktorer, inkludert alderen og vekten til pasienten og administreringsruten. Vanlige daglige doser for oral administrering kan være i området fra 0,1-0,25 g, f.eks. 0,12-0,2 g/kg kroppsvekt.
Produktene og preparatene beskrevet heri kan også anvendes i kombinasjon med andre midler for infeksjonsbekjempning, f.eks. med vaksiner for å øke deres aktivitet. De immunstimulerende midlene beskrevet heri kan forenes, enten alene eller i blanding, med andre farmasøytiske produkter, f.eks. vaksiner slik som vaksiner mot yersiniosis eller furunkulosis.
Sett fra enda et ytterligere aspekt ved oppfinnelsen tilveiebringes følgelig et preparat omfattende et biomassemateriale som beskrevet heri sammen med i det minste én vaksine.
I enda et ytterligere aspekt ved oppfinnelsen tilveiebringes et produkt inneholdende et biomassemateriale som beskrevet heri og separat en vaksine for samtidig, separat eller etterfølgende anvendelse i en fremgangsmåte for å opprettholde og/eller forsterke immunsystemet til et menneskelig eller ikke-humant dyr.
Oppfinnelsen vil nå bli beskrevet i nærmere detalj i de følgende ikke-begrensende eksempler, med henvisning til de vedlagte figurer hvori: Fig. la viser akkumulert dødelighet som en prosent av det totale antallet fisk ved begynnelsen av studien beskrevet i eksempel 2; Fig. lb viser akkumulert dødelighet gitt som en prosent av overlevd fisk ved uke 10 i løpet av de siste 8 ukene for studien beskrevet i eksempel 2; Fig. 2 viser hemolytisk komplementaktivitet i serum fra grupper av atlantisk laks foret med et for inneholdende ulike doser av en biomasse som beskrevet heri; Fig. 3 viser lysozymaktivitet i serum fra grupper av atlantisk laks foret med et for inneholdende ulike doser av en biomasse som beskrevet heri; Fig. 4 viser totalt antall serum immunoglobulin i grupper av atlantisk laks foret med et for inneholdende ulike doser av den biomasse som beskrevet heri. Resultatene er gitt som forholdet mellom den optiske tetthet (OD) til prøven og den optiske tetthet (OD) til et normalt serum; Fig. 5 viser antistoffresponser mot Y. ruckeri, etter vaksinering, i serum fra grupper av atlantisk laks foret med et for inneholdende ulike doser av en biomasse som beskrevet heri. Resultatene er gitt som forholdet mellom den optiske tetthet (OD) til prøven og til et positivt referanseserum; Fig. 6 viser antistoffresponser mot A. salmonicida, etter vaksinering, i serum fra grupper av atlantisk laks foret med et for inneholdende ulike doser av en biomasse som beskrevet heri. Resultatene er gitt som forholdet mellom den optiske tettheten (OD) til prøven og til et positivt referanseserum; og Fig. 7 viser in vitro lymfocyttresponser mot to lipopolysakkaridmitogener (LPS) fra E. coli og fytohaemaglutinin (PHA) og mot to antigene preparater av Y. ruckeri og A. salmonicida i grupper av atlantisk laks foret med et for inneholdende ulike doser
av en biomasse som beskrevet heri. Prøver er testet ved uke 8 (fig. 7a) og uke 18 (fig. 7b) etter studiestarten.
Fig. 8 viser gjennomsnittelig titerverdier (2<y>) til biomassespesifikke antistoffer i blodet fra rotter i ulike diettgrupper. For FO er n = 8 i hver gruppe overfor Fl er n = 5. Standardavvik er angitt for de individuelle gruppene.
Eksempel 1 - Fremstilling av biomasse
En mikrobiell kultur omfattende Methylococcus capsulatus (Bath) (tstamme NCIMB 11132), DB3 (stamme NCIMB 13287), DB5 (stamme NCIMB 13289), og DB4 (stamme NCIMB 13288) er produsert i en løkketype fermentor ved kontinuerlig aerob fermentering av naturgass i et ammoniakk/mineralsaltmedium (AMS) ved 45°C, pH 6,5. AMS-mediet inneholder det følgende pr. liter: 10 mg NH3, 75 mg H3P04-2H20, 380 mg MgS04-7H20, 100 mg CaCl2-2H20, 200 mg K2S04, 75 mg FeS04-7H20, 1,0 mg CuS04-5H20, 0,96 mg ZnS04-7H20, 120 fig CoCl2-6H20, 48 jag MnCl2-4H20, 36 ug H3B03, 24 ug NiCl2-6H20 og 1,20 ug NaMo04-2H20.
Fermentoren ble fylt med vann som var blitt varmesterilisert ved 125°C i 10 sek. Tilsetting av de ulike næringsstoffene reguleres i henhold til forbruket. Med gradvis oppbygging over tid kjøres fermentoren med 1-3 % biomasse (på basis av tørrvekt).
Biomassen ble utsatt for sentrifugering i en industrisentrifuge hvor tørrstoffinnholdet økte fra omtrent 2-15 vekt%. Biomassen ble ytterligere konsentrert til et produkt inneholdende fra 15-22 vekt% biomasse ved anvendelse av en ultrafiltreringsenhet med en eksklusjonsstørrelse på 100000 Daltons. Temperaturen gjennom ultrafiltreringen ble opprettholdt mellom 40 og 50°C. Etter ultrafiltrering ble biomassen avkjølt, f.eks. til en temperatur på fra 10-30°C ved å passere den konsentrerte proteinslurryen fra ultrafiltreringsenheten over en varmeveksler. Det resulterende produktet er en stabil kultur fri fra kontaminering av uønskede bakterier.
Etter ultrafiltrering ble den relativt viskøse proteinslurryen sprøytetørket. Sprøytetørking ved en innløpslufttemperatur på omtrent 300°C og en utløpstemperatur på omtrent 90°C ga et endelig produkt med et vanninnhold på omtrent 5 vekt%.
Den resulterende biomassen har de følgende karakteristika:
Eksempel 2 - Studie
Formålet med studien var å undersøke virkningen av biomassen fremstilt i eksempel 1 på immunsystemet. Uspesifikke og spesifikke humorale immunresponser, cellulære immunresponser og eksperimentell infeksjon ble undersøkt i atlantisk laks. I studien, som varte i 18 uker, ble grupper av fisk gitt et for der standardproteinet var erstattet med 20 %, 40 % og 60 % biomasse. Kontrollgruppen mottok standardfor.
Uspesifikke humorale immunresponser ble målt ved hjelp av lysozymaktivitet, komplementaktivitet og total immunoglobulinmengde i serum.
Utvikling av spesifikke humorale immunresponser ble undersøkt ved å måle antistoffnivåer mot Yersina ruckeri og Aeromonas salmonicida etter vaksinering.
Cellulære immunresponser ble undersøkt ved hjelp av lymfocyttstimuleringstest i ikke-vaksinerte fisk.
MATERIALER OG METODER
Fisk
Fisken ble oppbevart ved forskningsstasjonen til Felleskjøpet, Norsk Bioakva A/S i Dirdal. Et totalt antall på 4080 ikke-vaksinerte fisk av ett år gamle smolt av atlantisk laks { Salmo salar L.) ved en gjennomsnittelig vekt på 50 g ved studiestart ble fordelt i fire grupper. Hver gruppe ble fordelt i tre parallelle tanker på 4 m2 hver og med et totalt antall på 340 fisk i hver tank. Fisken hadde nylig smoltifisert under naturlige lysbetingelser. Eksperimentet varte i 18 uker.
Vann
Tankene ble supplert med sjøvann tatt fra 90 m dyp med en saltholdighet på 30-33 % og en gjennomsnittelig temperatur på 9,0°C (område 7,8-11,3°C). Som følge av problemer med osmoregulering ble vannets saltholdighet justert til 20-23 % etter. 8 uker.
For
De fire gruppene med fisk mottok fire ulike for (tabell 1 og 2). Basert på et kontrollfor hvor fiskemel (Norse LT94, Nordsildmel, Bergen) er hovedproteinkilden ble tre testfor fremstilt hvor 20, 40 og 60 % av det ubearbeidede proteinet bestod av biomasse i henhold til eksempel 1. All proteinbestemmelser ble utført ved hjelp av Kjeldahl-N<*>6,25-metoden og ble ikke korrigert for nærværet av nukleinsyrer i biomassen. Mengden karbohydrat fra biomassen ble balansert med ikke-varmebehandlet hvete. For med høye nivåer av biomasse ble supplementert med DL-metionin. Testforene ble fremstilt ved hjelp av en lab-pellettdanner uten tilsetting av damp ved Norsk Bioakva AS, Sandnes, Norge. Mengden fett (lipid) ble analysert ved hjelp av Soxleths metode (tabell 2). Mengden karbohydrat inkludert fiberfraksjonen ble bestemt som forskjellen mellom 100 % og de gjenværende komponenter som ble målt (tabell 2).
Fisk ble foret med automatiske forere. Tankene ble gruppert i blokker og hvert for ble distribuert tilfeldig innen hver blokk. Den daglige mengden for ble beregnet i henhold til veksttabeller basert på temperatur og fiskestørrelse. Foring ble justert hver fjerde uke basert på aktuell fiskevekt.
Immunisering
Etter 8 uker på testfor ble 100 fisk fra hver foringsgruppe fra én av de tre parallelle tankene merket og ved intraperetoneal injeksjon immunisert med en kommersiell vaksine mot yersiniosis (Ermvaks, Leo vet., Løvens Kemiske fabrikk, Danmark). Fra de samme tankene ble ytterligere 100 fisk fra hver gruppe merket og immunisert mot furunculosis (Furogen, Aqua Health, Canada).
Prøvetakning
Blod fra fisken ble tatt ved vaksineringstidspunktet og 4, 8 og 10 uker etter vaksinering. Blod ble samlet fra caudalvenen og serum ble separert, transportert på tørris og lagret ved -70°C inntil ytterligere analyser. Vev fra bakre nyre ble innsamlet ved vaksineringstidspunktet og 10 uker etter vaksinering. Vevet ble oppbevart i vevskulturmediet på is i 4-6 timer inntil ytterligere analyse.
Dødelighet
I løpet av studien forekom dødelighet i løpet av to separate tidsrom. Fisken ble undersøkt av den lokale veterinær. I løpet av den andre dødelighetsperioden ble det tatt prøver av død fisk og testet for nærværet av infeksiøs bukspyttkjertel nekrosevirus ("infectious pancreatic necrosis virus, IPNV). Hele fisken ble oppbevart frossent inntil analyse. Vev fra bukspyttkjertel ble kuttet når den fortsatt var frossen og ble deretter fiksert i fosfatbufret formalin i 24 timer og deretter nedlagt i parafin. Vevet ble inkubert med et polyklonalt kanin anti-IPNV-Sp-antiserum. Reaksjonen ble utviklet med et alkalisk fosfatasekonjugat og "Fast red" som kromogen.
Immunparametere
Analysene av de ulike immunparameterne ble alle utført ved Veterinærinstituttet, Oslo.
Komplementaktivitet
Komplementaktivitet ble analysert som spontan hemolytisk aktivitet (SH) til røde blodceller fra sau (SRBC). 1 % agarose inneholdende 0,25 % pakket SRBC i 0,094 M sukrose-verinalbuffer ble blandet ved 56°C og!-helt over på plater dekket med agarose. Prøvebrønner ble fylt med 10 ul serumprøver. Platene ble inkubert ved 22°C i 20 timer, fiksert med formalin og tørket. Diameteren til lyserte soner ble målt. To-gangers fortynninger av en lakseserumprøve tjente som en standard. Den hemolytiske aktiviteten ble kvantifisert som prosenten av hemolytisk aktivitet i standarden.
Lvsozvmaktivitet
Serum lysozymaktivitet ble bestemt ved anvendelse av Micrococccus lysoplate-analysen. 1 % agarose inneholdende Micrococcus lysodeicticus i 0,06 M natriumfosfat, pH 6,6 ble blandet ved 56°C og helt over på plater dekket med agarose. Prøvebrønner ble fylt med 10 ul serumprøver fortynnet 1:10. Platene ble inkubert ved 22°C i 20 timer, vasket med destillert vann og tørket. Platene ble farget med 1,25 % metylfiolett, deretter med lugol og igjen farget med etanol inntil klare soner var tydelige. Diameteren til de lyserte sonene ble målt. To gangers fortynninger av et normalt lakseserum tjente som en standard og lysozymaktiviteten ble kvantifisert som prosent av lysozymaktivitet sammenlignet med dette referanseserumet.
Totalt immunglobulin
Mengden totalt immunglobulin i serumet til ikke-vaksinerte fisk fra de ulike foringsgruppene ble bestemt ved anvendelse av en enzymlinket immunsorbentanalyse (ELISA). Polystyren mikrotiterplater ble dekket med et polyklonalt kaninanti-lakse Ig-anti serum ved en fortynning 1:1000 i dekkbuffer ("coating buffer"). Fiskesera ved de passende fortynningene ble tilsatt og inkubert ved 4°C over natt. Reaksjonen ble ytterligere utviklet med et monoklonalt anti-lakse-Ig-antistoff og etterfulgt av et enzymmerket sau anti-mus-Ig-konjugat. Resultatene er uttrykt som forholdet mellom den optiske tettheten (OD) til testprøvene og et referanseserum.
Spesifikke antistoffresponser
De spesifikke antistoffresponsene til Yersinia ruckeri og Aeromonas salmonicida før og etter vaksinering ble bestemt ved anvendelse av en ELISA hvori platene ble belagt med et sonikat av enten Y. ruckeri eller A. salmonicida. Analysene ble utført som beskrevet ovenfor. Resultatene er uttrykt som forholdet mellom OD-avlesningen av testprøven og et positivt referanseserum.
Cellulær immunrespons
Lymfocyttstimuleringstesten ble utført i ikke-vaksinerte fisk 2 måneder (ved vaksineringstidspunktet) og 4 måneder etter start på testfor og ble utført som beskrevet i rapporten fra det første studieåret. De følgende stimulanter ble anvendt:
1. Lipopolysakkarid (LPS) fra£. coli
2. Fytohemagglutinin (PHA)
3. Hele, formalin-avlivede Y. ruckeri
4. Hele, formalin-avlivede A. salmonicida
Statistiske metoder
Den statistiske signifikante til forskjellene i totalt immunglobulin, spesifikke antistoffresponser og lymfocyttstimuleringer mellom ulike forgrupper og mellom ulike tidspunkt ble analysert ved anvendelse av den toendede Wilcoxons graderingssumtest. De statistiske signifikante forskjellene i lysozym og komplementaktiviteter mellom ulike foringsgrupper og tidspunkter ble analysert ved hjelp av t-testen. Signifikansnivåene for alle testene ble satt til p=0,05.
RESULTATER
Dødelighet
Høy dødelighet ble observert i løpet av to separate perioder i eksperimentet (fig. la). I den første perioden, som varte fra uke 5 til uke 11 ble alvorlig skjelltap, dehydrering og hudlesjoner observert. Dødeligheten ble derfor diagnostisert som en årsak av osmoreguleringsfeil. For å unngå ytterligere dødelighet ble vannets saltholdighet redusert. En reduksjon i dødeligheten ble umiddelbart observert. Fra uke 14 økte imidlertid dødeligheten igjen (fig. lb) og fisken viste kliniske tegn på IPNV-infeksjon. Etter 18 uker var kun omtrent 50 % av den totale fiskemengden igjen.
Som det kan ses fra tabell 3 nedenfor var det positive reaksjoner mot IPNV-antigener i fisk fra 10 ut av 12 ulike tanker. I seks av tankene ble en positiv reaksjon registrert i alle prøvetatte fisk. Imidlertid var det også en tendens til en økning i antallet negative fisk med økende mengde biomasse i foret.
Det ble konkludert at IPNV-infeksjon var den mest fremtredende årsaken til den observerte dødeligheten i løpet av den andre perioden med dødelighet i løpet av studien.
Immunparametere
Komplementaktivitet
Den hemolytiske aktiviteten økte signifikant med økende tid på testfor mens vaksinering ikke påvirket aktiviteten (fig. 2). Økningen i mengden biomasse i foret ga en signifikant grense for økning i aktivitet.
L<y>sozymaktivitet
Mengden lysozym økte signifikant både med økte mengder biomasse i foret og med økt tid på testfor (fig. 3). Vaksinering påvirket ikke lysozymmengden.
Totalt immunglobulin
Konsentrasjonen av total serumimmunoglobulin økte signifikant med økt tid, men ble ikke påvirket av mengden biomasse i foret (fig. 4). Variasjonene mellom individuelle fisk innen hver gruppe var høy.
Spesifikke antistoffresponser
De spesifikke antistoffresponsene Y. ruckeri og A. salmonicida er vist i henholdsvis fig. 5 og 6. Responsene i 40 %- og 60 %-biomasseforgruppene var signifikant lavere enn kontrollgruppene ved ett eller flere tidspunkt. Variasjonene mellom individuelle fisk var høy og antistoffresponsen, spesielt mot A. salmonicida, var mye lavere enn i det positive referanseserumet.
Cellulære immunresponser
In vitro-lymfocyttstimuleringer er gitt som totale tellinger pr. minutt (cpm) som vist i fig. 7. Alle gruppene svarte godt 8 uker etter testforstart, mens responsen var noe lavere etter 18 uker på testfor. Det var imidlertid ingen signifikante forskjeller mellom gruppene på kontrollfor og de ulike testforgruppene bortsett fra for Y. ruckeri stimulerte kulturer, hvor det var signifikant høyere stimulering i 40 %- og 60 %-biomassegruppene sammenlignet med kontrollfor.
DISKUSJON
Dødelighet
Dødeligheten i løpet av uke 5-11 synes å være forårsaket av dehydrering som følge av hudskader. Hudskader og tap av skall forekommer ofte i smolt på dette tidspunktet, og slike fisk er ganske sårbare for håndtering.
Det andre utbruddet av dødelighet ble først diganostisert å skyldes IPNV-infeksjon av veterinæren. For å bekrefte diagnosen ble døde fisk testet for nærværet av IPNV-antigener og spesifikke antigener ble funnet i de fleste fisk. Imidlertid var det en tendens til en økning i antallet fisk som var negative for IPNV ved økende mengde biomasse i foret. I løpet av dette utbruddet var det også en tendens til redusert dødelighet med økt biomasse i dietten.
Immunparametere
Resultatene viser en økning i de ulike uspesifikke humorale og de cellulære immunparameterne målt enten ved økt tid på testfor eller ved økt mengde biomasse i dietten eller begge deler. Det kan være at økningen delvis skyldes den pågående infeksjonen i løpet av deler av testperioden. Det er kjent at lysozymaktivitet øker i løpet av infeksjoner slik som furunkulose, slik at det ikke er usannsynlig at en infeksjon med IPNV gir den samme type virkning. Lysozymaktivitetsnivået som ble funnet var høyere enn det som vanligvis observeres og i tillegg ble det funnet større variasjoner mellom individuelle aktiviteter, hvilket kan indikere at ehinfeksjon var tilstede. Økningen i uspesifikke immunresponser i fisk som mottok biomassen i henhold til eksempel 1 er antatt å bidra til den høyere motstanden mot infeksjon vist i disse gruppene i løpet av IPNV-utbruddet.
Større individuelle variasjoner ble også observert i resultatene av totalt serum immunglobulin og i de spesifikke antistoffresponsene mot Y. ruckeri og A. salmonicida. I kontrast til tidligere resultater var det en tendens til lavere responser i fisk som mottok 40 %- og 60 %-biomasse. Nivået av anti-Æ salmonicida-antistoffrespons var spesielt mye lavere enn det som vanligvis ses i smolt vaksinert mot furunkulose i alle foringsgruppene. Dehydrering og IPNV-infeksjon kan begge ha bidratt til disse resultatene.
Eksempel 3 - Studie
Formålet med studien var å analysere rotteserum for antistoffer spesifikke for biomassematerialet fremstilt i henhold til eksempel 1 (heri referert til som "biomasse").
MATERIALER OG METODER
Nivåer av biomassespesifikke antistoffer ble målt i serum fra åtte rotter i hver av åtte grupper i FO: hann- og hunnrotter foret med 0 %, 5,5 vekt%, 11 vekt% og 22 vekt% biomasse i dietten. I tillegg ble nivåer i dyr fra Fl-generasjonen målt 12 uker etter avvenning: fem hannrotter i hver av fire grupper (tabell 4)
Prøvene til Fl-generasjonen ble valgt slik at ett dyr fra hvert kull ble testet.
Målingene ble utført ved anvendelse av enzymbundet immunsorbent analyse (Elisa) i henhold til protokoll P-01-011. Formel for Elisa-bufferne var som følger:
Karbonatbuffer, pH 9,6
14 mM Na2C03, 35 mM av NaHC03
Lagringskvaliteter: 1 måned ved 4°C
Inkuberingsbuffer, pH 7,4
17mMNa2HP04
3,0 mM NaH2P04
145 mM NaCl
1 %tritonX-100
Lagringskvaliteter: 2 månder ved 4°C
Vaskebuffer
Inkuberingsbuffer fortynnet x 10
TMP-standardløsning
1,0 g TMB
20 ml CH3COCH3
180 ml CH3OH
Lagringskvaliteter: 1 år ved -20°C
Peroksid standardløsning (III)
I: 1,47MCH3C02H
II: 1,4 M CH3C02Na justert til pH 5,0 med I
III: 4,3 g NaB02H202+ 250 ml II
Lagringskvaliteter: 6 måneder i mørke ved 4°C
Peroksidbuffer
14,3 ml peroksid standardløsning tilsatt destillert vann opptil 0,5 1 Lagringskvaliteter: 1 uke i mørke ved 4°C
TMB/peroksidløsning
340 ul TMB standardløsning opptil 12 ml tilsatt peroksidbuffer.
Lagringskvaliteter: Ingen
Filtrert ekstrakt av biomassen ble fortynnet 1/68 i karbonatbuffer, pH 9,6. Maxi-sorp Elisa-mikrofilterplater (Nunc 442404A, batch 052550) ble belagt med 100 ul ekstrakt pr. brønn og inkubert over natt ved 4°C.
Platen ble vasket fire ganger med vaskebuffer. Dobbel bestemmelse av serumprøver og to standardblandinger av serum fra ti dyr med et forventet høyt og et forventet lavt antistoffnivå spesifikke for biomassen ble satt på platen (100 ul pr. brønn) i
trM
fortynnede serier fra 2 til 2 . Platen ble inkubert på et ristebord (100 rpm) ved omgivelsestemperatur i 1 time hvoretter platen ble vasket fire ganger med vaskebuffer. Platen ble deretter inkubert med 100 (il peroksidasekonjugert antistoff pr. brønn (kanin-anti-rotte-antistoffer, Sigma A5795, fortynnet 1:5000 med inkuberingsbuffer) i 1 time ved omgivelsestemperatur på et vibrerende bord (100 rpm). Etter fire vask med vaskebuffer og én vask med destillert vann ble 100 ul TMB/peroksidløsning tilsatt pr. brønn og platen ble inkubert ved omgivelsestemperatur i 20 min. 100 ul 2 M H3PO4ble tilsatt til hver brønn, hvoretter absorbansen ble målt ved 450 nm på en mikroplateleser (Bio-Tek Instruments, Inc. Elx808).
Rådata ble bearbeidet ved anvendelse av KC4-programmet (Bio-Tek Instruments, Inc.). Rådata ble korrigert ved hjelp av en blank kontroll og titerverdier for ulike spesifikke absorbansverdier ble interpolert. Titerverdiene for den valgte absorpsjonen i alle analyser ble korrigert ved hjelp av absorpsjonen i standardblandingen. I de få tilfellene hvor titerverdiene var utenfor den valgte absorpsjonen ble resultatet ekstrapolert ved hjelp av titerkurven til standardblandingene.
RESULTATER
Titerverdiene til de valgte gruppene er presentert i vedlagte fig. 8.
I både hannene så vel som i hunnene til FO-generasjonen var det en signifikant forskjell mellom titerverdiene ved 0 % og 22 %, mens de andre gruppene ikke avvek signifikant fra kontrollgruppen (a = 0,05). Det er ingen signifikant forskjell mellom de fire gruppene av Fl-generasjonen.
DISKUSJON
Resultatene viser at et nivå på 22 vekt% biomasse i dyrediettene resulterer i økt nivå av biomassespesifikke antistoffer. I den neste generasjonen ses ikke en lignende forskjell, uavhengig av hvorvidt morgenerasjonen mottok biomasse i dietten eller ikke.
Eksempel 4 - Studie
Den immunologiske responsen til biomassematerialet i eksempel 1 (heretter henvist til som "biomasse") i mus ble bestemt ved hjelp av to metoder. Den første er en ELISA-analyse for å måle biomassespesifikk total lg og IgA i blod og biomassespesifikk IgA i spytt. Den andre metoden er en celleprolifereringsanalyse for å undersøke biomassens evne til å stimulere miltcelleproliferering in vitro.
I eksperimentene hvor biomassen ble administrert ved ulike konsentrasjoner krevde en lavere dose mer tid for å indusere en respons enn en høyere dose. I eksperimenter hvor mus ble foret med biomassen i en periode på 14 dager og deretter på normalt for ble det funnet at nivået av biomassespesifikk IgA i blod falt mens et konstant nivå av biomassespesifikk IgA i spytt ble opprettholdt. Den lokale immunresponsen ble opprettholdt i opptil 42 dager etter opphør av biomasseforing selv om ingen systemisk respons var tilstede.
Claims (10)
1. Preparat for anvendelse som et medikament, hvori nevnte preparat omfatter en biomasse oppnådd fra en mikrobiell kultur omfattende Methylococcus capsulatus (Bath) (stamme NCIMB 11132), DB3 (stamme NCIMB 13287) og DB5 (stamme NCIMB 13289), eventuelt i kombinasjon med DB4 (stamme NCIMB 13288).
2. Preparat ifølge hvilke som helst av kravene 1, hvori nevnte mikrobielle kultur fremstilles ved fermentering på hydrokarbonfraksjoner eller på naturgass, fortrinnsvis fra fermentering på naturgass.
3. Preparat ifølge krav 1 eller 2, for anvendelse som et immunstimulerende middel, f.eks. for anvendelse i en fremgangsmåte for å opprettholde og/eller forsterke immunsystemet til et menneske eller et ikke-humant dyr.
4. Preparat ifølge krav 1 eller 2, for anvendelse i forebyggingen av enhver sykdom eller tilstand assosiert med, forårsaket av eller som på annen måte har bidratt til ethvert eksogent fremmed materiale, f.eks. en patogen mikroorganisme.
5. Preparat ifølge krav 4, hvori nevnte sykdom eller tilstand er av viral eller bakteriell opprinnelse.
6. Anvendelse av et preparat som definert i krav 1 eller 2, til fremstillingen av et medikament for anvendelse som et immunstimulerende middel, f.eks. for anvendelse i en fremgangsmåte for å opprettholde og/eller forsterke immunsystemet til et menneske eller et ikke-humant dyr.
7. Farmasøytisk preparat omfattende en biomasse oppnådd fra en mikrobiell kultur omfattende Methylococcus capsulatus (Bath) (stamme NCIMB 11132), DB3 (stamme NCIMB 13287) og DB5 (stamme NCIMB 13289), eventuelt i kombinasjon med DB4 (stamme NCIMB 13288), sammen med i det minste én fysiologisk akseptabel bærer.
8. Farmasøytisk preparat i følge krav 7, for anvendelse i forebyggingen av enhver sykdom eller tilstand assosiert med, forårsaket av eller som på annen måte har bidratt til ethvert eksogent fremmed materiale, f.eks. en patogen mikroorganisme.
9. Farmasøytisk preparat for anvendelse som et medikament i følge krav 1 eller 2, hvori nevnte preparat videre omfatter i det minste én vaksine.
10. Produkt inneholdende en biomasse som definert i krav 1 eller 2, og separat en vaksine for simultan, separat eller påfølgende anvendelse for å opprettholde og/eller forsterke immunsystemet til et menneske eller et ikke-humant dyr.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB0204722.3A GB0204722D0 (en) | 2002-02-28 | 2002-02-28 | Method |
| PCT/GB2002/002555 WO2003072133A2 (en) | 2002-02-28 | 2002-05-31 | Immunostimulatory agent comprising a biomass of methanotrophic bacterium |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20043741L NO20043741L (no) | 2004-09-07 |
| NO332176B1 true NO332176B1 (no) | 2012-07-16 |
Family
ID=9931987
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20043741A NO332176B1 (no) | 2002-02-28 | 2004-09-07 | Preparat og farmasøytisk preparat omfatter en biomasse oppnådd fre en mikrobiell kultur omfattende Methylococcus capsulatus samt anvendelse derav |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20050163802A1 (no) |
| EP (1) | EP1478376B1 (no) |
| CN (1) | CN1622815B (no) |
| AT (1) | ATE480247T1 (no) |
| AU (1) | AU2002257966A1 (no) |
| CA (1) | CA2477371C (no) |
| DE (1) | DE60237645D1 (no) |
| GB (1) | GB0204722D0 (no) |
| NO (1) | NO332176B1 (no) |
| WO (1) | WO2003072133A2 (no) |
Families Citing this family (26)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7731947B2 (en) | 2003-11-17 | 2010-06-08 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Composition and dosage form comprising an interferon particle formulation and suspending vehicle |
| CA2520610A1 (en) | 2003-03-31 | 2004-10-21 | Alza Corporation | Osmotic pump with means for dissipating internal pressure |
| GB0315783D0 (en) * | 2003-07-04 | 2003-08-13 | Norferm Da | Use |
| NO323529B1 (no) * | 2004-05-13 | 2007-06-04 | Trouw Internat Bv | Framgangsmate for reduksjon av innholdet av uonskede naeringsstoffer i avlopsvann fra fiskeoppdrettsanlegg. |
| US11246913B2 (en) | 2005-02-03 | 2022-02-15 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Suspension formulation comprising an insulinotropic peptide |
| WO2006083761A2 (en) | 2005-02-03 | 2006-08-10 | Alza Corporation | Solvent/polymer solutions as suspension vehicles |
| ES2351527T3 (es) | 2006-05-30 | 2011-02-07 | Intarcia Therapeutics, Inc | Modulador de flujo en dos piezas con conducto interno para un sistema osmótico de administración. |
| PL2359808T3 (pl) | 2006-08-09 | 2013-10-31 | Intarcia Therapeutics Inc | Osmotyczne systemy dostawcze i zespoły tłokowe |
| AU2008244523B2 (en) | 2007-04-23 | 2012-02-16 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Suspension formulations of insulinotropic peptides and uses thereof |
| JP5452501B2 (ja) * | 2007-12-21 | 2014-03-26 | ヒルズ・ペット・ニュートリシャン・インコーポレーテッド | ペット用飼料組成物 |
| WO2009102467A2 (en) | 2008-02-13 | 2009-08-20 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Devices, formulations, and methods for delivery of multiple beneficial agents |
| NO333891B1 (no) * | 2009-01-28 | 2013-10-14 | Trouw Internat Bv | Fiskefôr med forhøyet innhold av arginin og framgangsmåte for å forhindre redusert tilvekst for anadrom fisk ved utsett til sjø ved å anvende et slikt fôr |
| ES2468829T3 (es) * | 2009-05-08 | 2014-06-17 | Bioprotein As | Composición de pienso para el tratamiento o la prevención de enteritis en peces |
| KR102093612B1 (ko) | 2009-09-28 | 2020-03-26 | 인타르시아 세라퓨틱스 인코포레이티드 | 실질 항정상태 약물 전달의 신속 확립 및/또는 종결 |
| US20120208755A1 (en) | 2011-02-16 | 2012-08-16 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Compositions, Devices and Methods of Use Thereof for the Treatment of Cancers |
| US9371549B2 (en) | 2012-07-13 | 2016-06-21 | Calysta, Inc. | Biorefinery system, methods and compositions thereof |
| RU2015109898A (ru) | 2012-11-09 | 2017-01-10 | Калиста, Инк. | Композиции и способы биологического получения производных жирных кислот |
| US9889085B1 (en) | 2014-09-30 | 2018-02-13 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Therapeutic methods for the treatment of diabetes and related conditions for patients with high baseline HbA1c |
| KR20240042548A (ko) | 2015-06-03 | 2024-04-02 | 인타르시아 세라퓨틱스 인코포레이티드 | 임플란트 배치 및 제거 시스템들 |
| TWI814219B (zh) | 2016-05-16 | 2023-09-01 | 美商因塔希亞治療公司 | 升糖素受體選擇性多肽和彼之使用方法 |
| USD860451S1 (en) | 2016-06-02 | 2019-09-17 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Implant removal tool |
| USD840030S1 (en) | 2016-06-02 | 2019-02-05 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Implant placement guide |
| IL267736B2 (en) | 2017-01-03 | 2024-03-01 | Intarcia Therapeutics Inc | Methods involving continuous administration of a GLP-1 receptor agonist and co-administration of a drug |
| EP3619315A4 (en) * | 2017-05-05 | 2021-01-27 | White Dog Labs, Inc. | SINGLE CELL PROTEIN PRODUCTS AND INTEGRATED PROCESS FOR THE MANUFACTURING OF ETHANOL AND SINGLE CELL PROTEIN |
| US10883123B2 (en) | 2017-06-09 | 2021-01-05 | White Dog Labs, Inc. | Integrated wet-mill method for the production of ethanol and single cell protein |
| GB201712459D0 (en) | 2017-08-02 | 2017-09-13 | Norges Miljø-Og Biovitenskapelige Univ | Treatment or prevention of gastrointestinal dysbiosis |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5314820A (en) * | 1987-11-13 | 1994-05-24 | Kuwait Institute For Scientific Research | Process and microorganisms for producing single cell protein |
| WO2001060974A2 (en) * | 2000-02-16 | 2001-08-23 | Norferm Da | Method for an extraction of proteins from a single cell |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0640348A1 (en) * | 1993-07-26 | 1995-03-01 | Akzo Nobel N.V. | Oil-based and water-based adjuvant mixture |
| GB0120047D0 (en) * | 2001-08-16 | 2001-10-10 | Norferm Da | Product |
-
2002
- 2002-02-28 GB GBGB0204722.3A patent/GB0204722D0/en not_active Ceased
- 2002-05-31 AU AU2002257966A patent/AU2002257966A1/en not_active Abandoned
- 2002-05-31 WO PCT/GB2002/002555 patent/WO2003072133A2/en not_active Application Discontinuation
- 2002-05-31 AT AT02727769T patent/ATE480247T1/de not_active IP Right Cessation
- 2002-05-31 US US10/505,524 patent/US20050163802A1/en not_active Abandoned
- 2002-05-31 CN CN028283899A patent/CN1622815B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-05-31 EP EP02727769A patent/EP1478376B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-31 DE DE60237645T patent/DE60237645D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-05-31 CA CA2477371A patent/CA2477371C/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-09-07 NO NO20043741A patent/NO332176B1/no not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5314820A (en) * | 1987-11-13 | 1994-05-24 | Kuwait Institute For Scientific Research | Process and microorganisms for producing single cell protein |
| WO2001060974A2 (en) * | 2000-02-16 | 2001-08-23 | Norferm Da | Method for an extraction of proteins from a single cell |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| DAHLGREN U I H, ET AL.: "EXPRESSION OF A DIETARY PROTEIN IN E. COLI RENDERS IT STRONGLY ANTIGENIC TO GUT LYMPHOID TISSUE", IMMUNOLOGY, WILEY-BLACKWELL PUBLISHING LTD., GB, vol. 73, no. 04, 1 August 1991 (1991-08-01), GB, pages 394 - 397, XP008017321, ISSN: 0019-2805 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2003072133A3 (en) | 2003-11-20 |
| NO20043741L (no) | 2004-09-07 |
| AU2002257966A8 (en) | 2003-09-09 |
| EP1478376B1 (en) | 2010-09-08 |
| DE60237645D1 (de) | 2010-10-21 |
| CN1622815B (zh) | 2012-08-22 |
| CA2477371C (en) | 2012-07-10 |
| GB0204722D0 (en) | 2002-04-17 |
| WO2003072133A2 (en) | 2003-09-04 |
| US20050163802A1 (en) | 2005-07-28 |
| CA2477371A1 (en) | 2003-09-04 |
| EP1478376A2 (en) | 2004-11-24 |
| CN1622815A (zh) | 2005-06-01 |
| AU2002257966A1 (en) | 2003-09-09 |
| ATE480247T1 (de) | 2010-09-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO332176B1 (no) | Preparat og farmasøytisk preparat omfatter en biomasse oppnådd fre en mikrobiell kultur omfattende Methylococcus capsulatus samt anvendelse derav | |
| KR102631247B1 (ko) | 동물 기능 파라미터를 개선하는 바실러스 서브틸리스 균주 | |
| JP6106211B2 (ja) | 動物の健康を向上するためにバチルス・ズブチリス株を使用する方法 | |
| US9861665B2 (en) | Use of UVE bacteria for growth promotion in animals | |
| Lara-Flores et al. | The use of lactic acid bacteria isolated from intestinal tract of Nile tilapia (Oreochromis niloticus), as growth promoters in fish fed low protein diets | |
| Ghosh et al. | Assessment of yeast cell wall as replacements for antibiotic growth promoters in broiler diets: effects on performance, intestinal histo‐morphology and humoral immune responses | |
| JP2020508696A (ja) | 微生物細胞、それを生成する方法、およびその使用 | |
| RU2670882C2 (ru) | Непатогенный штамм f18 е. coli и его применение | |
| Mahmood et al. | Non-antibiotic strategies for the control of necrotic enteritis in poultry | |
| US20220184159A1 (en) | Method of boosting innate immunity | |
| JP2023510910A (ja) | 望ましくない微生物を制御し動物の健康状態を改善するための組成物及び方法 | |
| Matusevičius et al. | Effect of probiotic bioplus 2B® on performance of growing rabbit | |
| Ciurescu et al. | Use of brewer’s yeast () in broiler feeds to replace corn gluten meal with or without probiotic additives | |
| Gil-Turnes et al. | Bacillus cereus var. toyoi improves feed efficiency and health in animals | |
| JP2799273B2 (ja) | 動物の成長促進方法及びクロストリジウム属菌死菌体粉末製剤 | |
| CA3231363A1 (en) | Antimicrobial peptides | |
| Lara-Flores et al. | Uso de bacterias ácido lácticas aisladas del tracto intestinal de tilapia nilótica (Oreochromis niloticus) como promotores de crecimiento en peces alimentados con dietas bajas en proteína | |
| Islam | ERFORMANCE, CARCASS CHARACTERISTICS AND BLOOD PARAMETERS OF BROILER USING PROBIOTICS | |
| JPH10327767A (ja) | 動物の成長促進方法及びクロストリジウム属菌死菌体粉末製剤 | |
| PATTISON | droppings. Their appearance varies considerably but, typically an individual drop | |
| PATTISON | droppings. Their appearance varies considerably but, typically an individual drop-ping appears as a rounded brown mass with a characteristic white cap of uric acid | |
| Nyachoti | Nonruminant Nutrition: Bioactive Compounds and Prebiotics in Swine Nutrition |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| CHAD | Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften) |
Owner name: STATOIL ASA, NO |
|
| CHAD | Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften) |
Owner name: BIOPROTEIN AS, NO |
|
| CHAD | Change of the owner's name or address (par. 44 patent law, par. patentforskriften) |
Owner name: CALYSTA AS, NO |
|
| MK1K | Patent expired |