NO321454B1 - Defektiv, rekombinant adenovirus inneholdende en heterolog DNA-sekvens hvis ekspresjon i en malcelle tillater i det minste partielt a inhibere celledeling, anvendelser og farmasoytisk preparat derav. - Google Patents

Defektiv, rekombinant adenovirus inneholdende en heterolog DNA-sekvens hvis ekspresjon i en malcelle tillater i det minste partielt a inhibere celledeling, anvendelser og farmasoytisk preparat derav. Download PDF

Info

Publication number
NO321454B1
NO321454B1 NO19954132A NO954132A NO321454B1 NO 321454 B1 NO321454 B1 NO 321454B1 NO 19954132 A NO19954132 A NO 19954132A NO 954132 A NO954132 A NO 954132A NO 321454 B1 NO321454 B1 NO 321454B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
defective
sequence
gene
pharmaceutical preparation
adenovirus
Prior art date
Application number
NO19954132A
Other languages
English (en)
Other versions
NO954132L (no
NO954132D0 (no
Inventor
Hedi Haddada
Michel Perricaudet
Evelyne May
Original Assignee
Aventis Pharma Sa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aventis Pharma Sa filed Critical Aventis Pharma Sa
Publication of NO954132L publication Critical patent/NO954132L/no
Publication of NO954132D0 publication Critical patent/NO954132D0/no
Publication of NO321454B1 publication Critical patent/NO321454B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/82—Translation products from oncogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/761—Adenovirus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A61K38/1758—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals p53
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10211—Aviadenovirus, e.g. fowl adenovirus A
    • C12N2710/10241—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10243—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10332—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår rekombinante vektorer av viral opprinnelse og deres anvendelse. Mer spesielt angår oppfinnelsen rekombinante adénoviruser som bærer en heterolog DNA-sekvens hvis ekspresjon i en celle, da den deler seg anormalt, tillater i det minste delvis å inhibere deling av cellen. Oppfinnelsen angår også preparater inneholdende disse.
Celleveksten reguleres på ekstremt subtil måte av to signaltyper. Visse favoriserer en multiplikasjon av cellen mens andre tvert imot gjør at de går inn i en hviletilstand eller differensieres, i henhold til organismens krav.
Cancere karakteriseres alle ved en deregulering av mekanismene som kontrollerer celledelingen og fører til en anormal proliferering. Som oftest implikerer utviklingen av en cancer således en aktivering av genene som favoriserer multiplisering av cellene (gener kalt proto-onco-gener som aktiveres til onco-gener) og til en forsvinnende eller inaktivering av genene som inhiberer den cellulære proliferering. Foreliggende oppfinnelse tilbyr muligheten til å behandle cancere ved genterapi ved, til de tumorale celler, å administrere ett eller flere av disse gener hvis ekspresjon tillater i det minste partielt å inhibere den cellulære proliferering.
Genterapi består i å korrigere en defekt eller en anormalitet (mutasjon, abnorm ekspresjon og så videre) ved å innføre en genetisk informasjon i cellen eller det påvirkede organ. Denne genetiske informasjon kan innføres enten in vitro i en celle som er trukket ut fra organet og der den modifiserte celle så gjeninnføres i organismen, eller direkte in vivo i det tilsiktede vev. I det andre tilfellet foreligger det forskjellige teknikker blant hvilke skal nevnes forskjellige teknikker for transfeksjon som implikerer komplekser av DNA og DEAE-dekstran (Pagano et al., "J.Virol." 1 (1967) 891), DNA og nukleære proteiner (Kaneda et al., "Science" 243 (1989) 375), DNA og lipider (Felgner et al., "PNAS" 84 (1987) 7413), anvendelsen av liposomer (Fraley et al., "LBiol.Chem." 255 (1980) 10431), og så videre. I den senere tid har anvendelsen av vimser som vektorer for overføring av gener dukket opp som et lovende alternativ ved disse fysiske transfeksjonsteknikker. I denne forbindelse er forskjellige vimser prøvet med henblikk på evnen til å infektere visse cellulære populasjoner. Særlig skal nevnes retrovirusene (RSV, HMS, MMS, og så videre), HSV-viruset, de adenoassosierte vimser og adenovimsene.
Muligheten for å benytte genterapi for behandling av cancere er allerede belyst i den internasjonale søknad WO91/15580. Denne søknad beskriver konstruksjonen av retroviruser inneholdende et gen som koder for et ribozym hvis ekspresjon i cellekultur kan tillate å ødelegge et mRNA av et onco-gen.
Foreliggende oppfinnelse er basert på oppdagelsen at adenovirusene utgjør spesielt effektive vektorer for overføring og ekspresjon av terapeutiske gener i tumorer. Særlig oppviser adenovirusene fordel av ikke å integrere i genomet til cellene de infekterer, å holde seg der meget stabilt, noe som tillater å oppnå en varig terapeutisk effekt, og å ha et meget stort vertsspektrum, noe som tillater en applikasjon ved behandling av cancere som påvirker alle typer celler. Videre er oppfinnelsen også basert på oppdagelsen at virusene av adenovirus-typen er i stand til å overføre og å uttrykke gener som er i stand til i det minste partielt å inhibere celledelingen direkte på tumomivå.
En første gjenstand for oppfinnelsen ligger således i en defektiv, rekombinant adenovirus som inneholder en heterolog DNA-sekvens hvis ekspresjon tillater i det minste partielt å inhibere celledeling. Mer spesifikt omfatter foreliggende oppfinnelse en defektiv, rekombinant adenovirus inneholdende en heterolog DNA-sekvens hvis ekpresjon i en målcelle tillater i det minste partielt å inhibere celledeling, kjennetegnet ved at sekvensen omfatter:
minst en gen som koder for p53-protein; og
en promotersekvens som tillater ekspresjon, i den infiserte celle, av nevnte gen, idet promotersekvensen har en opprinnelse som er forskjellig fra den til genet.
Foreliggende oppfinnelse omfatter også anvendelse av en adenovirus ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 9 for fremstilling av et farmasøytisk preparat ment for terapi og/eller prevensjon av cancer ved innføring direkte i vevet som skal behandles.
Videre omfatter foreliggende oppfinnelse anvendelse av en adenovirus ifølge et at kravene 1 til 9 for fremstilling av et farmasøytisk preparat ment for fremstilling av et farmasøytisk preparat ment for terapi eller prevensjon av cancere ved administrering direkte til tumoren som skal behandles.
Videre omfatter foreliggende oppfinnelse anvendelse av en adenovirus ifølge krav 2 for preparering av et farmasøytisk preparat ment for behandling og/eller prevensjon av cancere forbundet med nærvær av en mutert form av p53.
Oppfinnelsen har likeledes til gjenstand en slik defektiv, rekombinant adenovirus for fremstilling av et farmasøytisk preparat ment for behandling eller prevensjon av cancere.
Følgelig omfatter oppfinnelsen også et farmasøytisk preparat, kjennetegnet ved at det inneholder en eller flere defektive, rekombinante adénoviruser ifølge et av kravene 1 til 9.
Innenfor oppfinnelsens ramme angir uttrykket "defektiv adenovirus" en adenovirus som ikke er i stand til replikering på autonom måte i målcellen. Generelt er således genomet av den defektive adenovirus som benyttes innenfor rammen av oppfinnelsen berøvet for i det minste de sekvenser som er nødvendige for replikering av cellen i den infekterte celle. Disse områder kan enten elimineres (helt eller delvis), gjøres ikke-funksjonelle, eller erstattes med andre sekvenser og særlig av det innskutte gen. Fortrinnsvis bevarer imidlertid den defektive virus ikke desto mindre sekvensene av sitt genom som er nødvendig for innkapsling av de virale partikler.
Det foreligger forskjellige adenovirus-serotyper hvis struktur og egenskaper varierer noe. Ikke desto mindre er disse vimser ikke patogene for mennesker og særlig ikke immunodeprimerte personer. Blant disse serotyper foretrekker man innenfor rammen av oppfinnelsen å benytte adenovirusene av type 2 eller 5 (Ad 2 eller Ad 5), Når det gjelder adenovirusene Ad 5, er de sekvenser som er nødvendig for replikeringen, områdene ElAogElB.
Blant tumor-supressor-gener kan man spesielt nevne de følgende gener:
- Genp53:
Genet p53 koder for et nukleærprotein på 53 kDa. Den muterte form ved delesjon og/eller mutasjon av dette gen er implikert i utviklingen av de fleste humane cancere (Baker et coil., "Science" 244 (1989) 217). Dets muterte former er likeledes i stand til å samarbeide med ras-oncogenet for å transformere murine fibroblaster. Villtype-genet som koder for nati v p53 inhiberer på sin side dannelse av transformasjonsseter i fibroblaster fra gnagere som er transfektert med forskjellige kombinasjoner av oncogener. Senere funn understreker at proteinet p53 i seg selv kan være en transkripsjonsfaktor og stimulere ekspresjonen av andre tumorsupressor-gener.
- Gen Rb:
Genet Rb bestemmer syntesen av et nukleærfosfoprotein på ca. 927 aminosyrer (Friend et coil., "Nature" 323 (1986) 643) hvis funksjon er å holde tilbake celledelingen og å bringe den til å gå inn i en hvilefase. De inaktive former av genet Rb er påvist i forskjellige tumorer og særlig i retinoblastomene eller i de mesenchymatiske cancere som osteosarcomer. Gjeninnføringen av dette gen i de tumorale celler der de har vært inaktivert, gir en tilbakevending til normaltilstand og et tap av tumorgenisiteten (Huang et coil., "Science" 242 (1988) 1563). I den senere tid er det vist at det normale proteinet Rb, men ikke i sine muterte former, holder tilbake ekspresjonen av proto-oncogenet c-fos, genet som er uunnværlig for celleproliferering.
Genet rap IA:
Genet rap IA (også kalt k-revl) koder for et protein på 21 kDa, forbundet med den indre flate av det cytoplasmiske membran. Dette protein er, på høyere nivåer, i stand til å revertere transformerte celler under ekspresjon av de muterte ras-oncogener (Kitayama et coil., "Cell" 56 (1989) 77).
- Genet DCC:
Genet DCC koder for et protein som er homologt med de cellulære adhesjonsproteiner av familien N-CAM. Dette gen er hyppig deletert i colon-carcinomer (Fearon et coil., "Science" 247 (1990)49).
Genene k-rev2 og k-rev3:
Genet k-rev2 koder for et sekretert protein på 60 aminosyrer og genet k-rev3 koder for en avskåret versjon av et protein i den ekstracellulære matrise. Disse to gener er i stand til å revertere NIH 3T3-celler som er transformert av Ki-ras-oncogenet.
Andre gener kan også tenkes benyttet for den anti-tumorale effekt, særlig andre tumor-supressor-gener som er beskrevet i litteraturen, eller et hvilket som helst annet gen hvis ekspresjonsprodukt kan indusere cellulær apoptose.
Som antydet ovenfor kan den heterologe DNA-sekvens bære det native tumor-supressor-gen eller et aktiv derivat av dette gen. Et slik derivat kan oppnås ved mutasjon, delesjon, substitusjon og/eller addisjon av et eller flere basepar i gensekvensen i henhold til klassiske molekylærbiologiske teknikker. Aktiviteten for det således oppnådde derivat kan deretter bekreftes in vitro på prøver som er kjent for fagmannen, for eksempel som de som er beskrevet i eksemplene.
Heterolog DNA-sekvens kan likeledes omfatte et anti-retningsgen hvis ekspresjon i målcellen tillater å kontrollere ekspresjonen av genet eller transkripsjon av cellulær mRNA som koder for proteinene som favoriserer den cellulære proliferering. Slike gener kan for eksempel i målcellene transkriberes til RNA som er komplementære til de cellulære mRNA og således blokkere deres traduksjon til protein.
Blant de anti-retningsgener som kan benyttes, kan mer spesielt nevnes en hvilken som helst anti-retningssekvens som tillater å redusere produksjonsnivået for onco-genene ras, mye, fos, c-erb B og så videre.
Generelt omfatter den heterologe DNA-sekvens også promotersekvenser som tillater ekspresjon av genet eller genene som er i stand til i det minte partielt å inhibere celledeling i målcellen. Det kan dreie seg om promotersekvenser som naturlig er ansvarlig for ekspresjonen av genet når disse sekvenser er i stand til å virke i den infekterte celle. Det kan likeledes dreie seg om promotersekvenser av en annen opprinnelse (ansvarlig for ekspresjonen av andre proteiner, eller også syntetiske). Særlig kan det dreie seg om promotersekvenser av eukaryote eller virale gener. For eksempel kan det dreie seg om promotersekvenser som stammer fra genomet til den celle man ønsker å infektere. På samme måte kan det dreie seg om promotersekvenser som stammer fra genomet av en virus, derunder det benyttede adenovirus. I denne forbindelse kan man for eksempel nevne promoterene av genene EIA, MLP, CM V, RSV, og så videre. Videre kan disse promotersekvenser modifiseres ved addisjon av aktiverings- eller reguleringssekvenser og så videre. Når videre den heterologe DNA-sekvens ikke omfatter ekspresjonssekvenser kan disse skytes inn i det defektive virus-genom nedstrøms en slik sekvens. Det er likeledes mulig å benytte induktible promotere.
Det kan også tenkes en heterlog DNA-sekvens i tillegg til tumor-supressorgenet eller anti-retningsgenet, et gen som koder for et anti-gen som er spesifikt for tumoren og/eller et gen som koder for et lymfokin. Kombinasjonen av disse gener tillater således (i) å stanse celledelingen i en tumor og derfor å føre til regress av denne tumor, og (ii) å øke immunresponsen hos organismen mot denne tumor.
Anti-genene som er spesifikke for tumoren er anti-gendeler som opptrer på overflaten av de tumorale celler men som ikke eksisterer på overflaten av ikke-tumorale slike celler. Slike anti-gener benyttes generelt for cancer-diagnose. I den senere tid er de beskrevet for fremstilling av anti-tumorvaksiner (EP 259 212). Imidlertid har de aldri vært kombinert med andre terapeutiske gener.
Blant de gener som koder for lymfokinene, kan man mer spesielt nevne gener som koder for interleukinene (IL-2 til IL-13), interferonene, tumor-nekrose-faktorene, de kolonistimulerende faktorer (G-CSF, M-CSF, GM-CSF, og så videre), TGFB og så videre. Videre omfatter generelt genet som koder for lymfokin, oppstrøms den kodende sekvens, en ekspresjonssekvens og en signalsekvens som styrer det syntetiserte polypeptid inn i målcellens sekresjonsveier. Denne signalsekvens kan være den naturlige signalsekvens for lymfokinet men det kan også dreie seg om en hvilken som helst annen funksjonell signalsekvens, eller en kunstig signalsekvens. Slike konstruksjoner tillater særlig å øke mengden av lymfokin på meget lokalisert måte og også, i nærvær av et anti-gen som er spesifikt for tumoren, å forsterke immunresponsen mot en spesiell type tumor, noe som gir en spesielt fordelaktig effekt. Slike rekombinante adénoviruser er spesielt egnet for fremstilling av anti-tumor-vaksiner.
De defektive, rekombinante adénoviruser ifølge oppfinnelsen kan fremstilles ved en hvilken som helst for fagmannen kjent teknikk (Levrero et al., "Gene" 101 (1991) 195, EP 185 573; Graham, "EMBO J." 3 (1984) 2917). Særlig kan de fremstilles ved homolog rekombinering mellom et adenovirus og et plasmid som blant annet bærer den heterologe DNA-sekvens. Den homologe rekombinering skjer etter ko-transfeksjon av adenoviruset og plasmidet i en egnet cellelinje. Den benyttede cellelinje må fortrinnsvis (i) være transformerbar med disse elementer, og (ii) bære sekvenser som er i stand til å komplementere delen av genomet av det defektive adenovirus, fortrinnsvis i integrert form for å unngå rekombineirngsrisiki. Som eksempel på en linje kan nevnes den humane embryonyre linje 293 (Graham et al.,"J.Gen.Virol." 36 (1977) 59) som særlig, integrert i sitt genom, inneholder den venstre del av genomet av et Ad5 adenovirus (12 <%>)<.>
Deretter blir adenovirusene som har multiplisert seg, gjenvunnet og renset i henhold til klassiske molekylær-biologi-teknikker som vist i eksemplene.
Foreliggende oppfinnelse angår likeledes et farmasøytisk preparat som omfatter en eller flere defektive, rekombinante adénoviruser som beskrevet ovenfor. Fortrinnsvis inneholder de farmasøytiske preparater ifølge oppfinnelsen en farmasøytisk akseptabel bærer for en formulering som er direkte injiserbar i tumoren som skal behandles. Det kan særlig dreie seg om sterile, isotoniske oppløsninger eller tørre preparater, særlig lyofiliserte, som ved tilsetning alt etter som av sterilisert vann eller et fysiologisk serum, tillater konstituering av injiserbare oppløste stoffer. Den direkte injeksjon i en tumor som skal behandles er fordelaktig fordi den tillater å konsentrere den terapeutiske virkning om det påvirkede vev.
Dosene av de defektive, rekombinante adénoviruser som benyttes for injeksjon kan tilpasses som en funksjon av forskjellige parametere og særlig som funksjon av den benyttede administreringsmåte, den angjeldende patologi, genet som skal uttrykkes eller også den ønskede varighet av behandlingen. Rent generelt formuleres og administreres de rekombinante adénoviruser ifølge oppfinnelsen i form av doser på mellom IO<4> og IO<14> pfu/ml og fortrinnsvis 1()6 til lO1^ pfu/ml. Uttrykket pfu, "plaque forming unit", tilsvarer infeksjonskraften for en virusoppløsning og bestemmes ved infeksjon av en egnet cellekultur og måles, generelt etter 48 timer, med henblikk på antall kolonier av infekterte celler. Teknikkene for bestemmelse av pfu-verdien for en viral oppløsning er godt dokumentert i litteraturen.
Foreliggende oppfinnelse muliggjør således et meget effektivt middel for behandling eller prevensjon av cancere. Videre kan behandlingen gjennomføres både på mennesker og dyr som sau og geit, fe, husdyr som hunder, katter og så videre, hester, fisk og så videre.
Oppfinnelsen skal beskrives nærmere under henvisning til de følgende, illustrerende eksempler.
Fi<g>urforklaring:
Figur 1: Illustrasjon av vektoren mp53wtI-.CMV
Figur 2: Illustrasjon av vektoren mp53pIX.CMV.
Generelle molekvlærbiologi- teknikker.
De klassiske metoder som benyttes i molekylærbiologien, for eksempel preparativ ekstrahering av plasmidisk DNA, sentrifugering av plasmidisk DNA i cesiumkloridgradient, elektroforese på agarose- eller akrylamidgel, rensing av fragmenter av DNA ved elektroeluering, ekstrahering av proteiner med fenol eller fenolkloroform, presipitering av DNA i saltmedium med etanol eller isopropanol, transformering i Escherichia coli, og så videre, er godt kjent av fagmannen og rikelig beskrevet i litteraturen [Maniatisk T. et al., "Molecular Cloning, a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1982; Ausubel F.M. et al., (eds.), "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, New York, 1987]. Plasmidene av typen pBR322, pUC og fagene fra serie M13 er av kommersiell opprinnelse (Bethesda Research Laboratories).
For ligeringene kan DNA-fragmentene separeres i henhold til størrelse ved elektroforese på agarose- eller akrylamid-gel, ekstrahering med fenokkloroform, presipitering i etanol og inkubering i nærvær av DNA-ligase av fagen T4 (Biolabs) i henhold til leverandørens anbefalinger.
Oppfyllingen av de fremstikkende 5'ender kan gjennomføres med Klenow-fragmentet av DNA-polymerase I av E.coli (Biolabs) i henhold til leverandørens spesifikasjoner.
Destrueringen av de fremstikkende 3' ender gjennomføres i nærvær av DNA-polymerase av fag T4 (Biolabs) som benyttes i henhold til fabrikkantens anbefalinger. Destrueringen av de fremstikkende 5' ender gjennomføres ved en behandling med nukleasen Sl.
Den styrte mutagenese in vitro med syntetiske oligo-deoksynukleotider kan gjennomføres i henhold til den metode som er utviklet av Taylor et al., ["Nucleic Acids Res." 13. (1985) 8749-8764] under anvendelse av det kit som kan oppnås fra Amersham.
Den enzymatiske forsterkning av DNA-fragmentene av den såkalte PCR-teknikk ["Polymérase-catalyzed Chain Reaction", Saiki R.K. et al., "Science" 230 (1985) 1350-1354; Mullis K.B. et Faloona F.A., "Meth.Enzym." 155 (1987) 335-350] kan gjennomføres ved å anvende en "DNA thermal cycler" (Perkin Eimer Cetus) i henhold til fabrikantens spesifikasjoner.
Verifiseringen av nukleotid-sekvensene kan gjennomføres ved den metode som er utviklet av Sanger et al., ["ProcNatl. Acad.Sci." USA, 74 (1977) 5463-5467] under anvendelse av det kit som er tilgjengelig fra Amersham.
Eksempler
El. Konstruksjon av vektoren mp53wtI-CMV som bærer genet p53 under kontroll av cytomegalovirus-promoteren (figur 1).
Den eukaryote ekspresjonsvektor mp53wtI-CMV er konstruert fra plamid pUC19 ved innskyting: av et promoterområde av viral opprinnelse som tilsvarer den tidlige cytomegalovirus (CMV)-promoter. Dette området omgis i vektoren av unike restriksjonsseter EcoRI-SphI i forbindelsen CMV/pUC og BamHI ved forbindelsen CMV/p53. Nærværet av unike seter som flankerer promoterområdet tillater å erstatte CMV-området med en hvilken som helst annen promoter. En andre serie vektorer oppnås så der genet p53 anbringes under kontroll av en induktiv promoter:
promoteren av metallotionin, indukterbar av tungmetaller (kadmium og sink);
av en sekvens på 1173 pb tilsvarende cDNA som koder for proteinet p53 fra mus i sin ville form (Zakut-Houri et al., "Nature" 36 (1983) 594). I denne konstruksjon er supressor-genet i form av cDNA, det vil si berøvet for introner. Dette tilsvarer særlig å redusere vektorens størrelse. Videre er det verifisert at de oppnådde
ekspresjonsnivåer er sammenlignbare i nærvær av eller i fravær av introner;
av et polyadenyleringssignal for de sene virus-SV-40-gener som tilsvarer et meget effektivt polyadenyleringssignal. To unike restriksjonsseter Sali og Hindlll befinner seg nedstrøms polyadenyleringssignalet. Disse seter har tillatt innskylling av plX-områder av adenovirus (jfr. E3).
E2. Aktivitet in vitro av vektoren mp53wtI-CMV.
Funksjonaliteten for vektoren mp53wtI-CMV er bekreftet in vitro ved transitorisk ekspresjon i HeLa-celler. For dette formål er vektoren innført i cellene ved transfeksjon og, 40 timer senere, er protein p53 dosert ved immunofluorescens og immunopresipitering. De oppnådde resultater viser at mer enn 50 % av de transfekterte celler induserer vesentlige mengder protein p53.
E3. Konstruksjon av vektoren mp53pIX.CMV.
Plasmidene som benyttes for ved homolog rekombinering å danne de rekombinante adénoviruser som uttrykker gen p53 er konstruert som følger: Den eukaryote ekspresjonsvektor mp53pIX.CMV konstrueres ved innskyting av sekvensen pDC fra genomet av adenovirusene mello setene Sali og EcoRI av mpl3wtl-.CMV. Sekvensen pIX isoleres fra det rekombinante plasmid pLTR-figal pIX (Stratford-Perricaudet et al., "J.Clin.Invest." 90 (1992) 626) ved fermentering ved hjelp av enzymene EcoRV og Hindlll.
Ekspresjonsvektoren mp53pIX.CMV som oppnås på denne måte (figur 2) har et unikt Hindlll-sete nedstrøms innskuddet pIX som tillater en linearisering av konstruksjonen
Ofr. E4).
E4. Konstruksjon av en defektiv, rekombinant adenovirus som bærer genet p53 under kontroll av promoteren CMV.
Vektoren mp53pIX.CMV lineariseres og ko-transfekteres med en defekt adenoviralvektor i hjelperceller (linje 293) som i trans bærer funksjonene som kodes av områdene El (El A og El IB) av adenovirusen.
Man oppnår adenovirus Ad.p53 ved homolog rekombinering in vivo mellom det mutante adenovirus Ad-dl324 (Thimmappaya et al., "Cell" 31 (1982) 543) og vektoren mp53pIX.CMV, i henhold til følgende protokoll: etter linearisering med enzymet Hindlll blir plasmidet mp53pDC.CMV og adenovirusen dl 324 ko-transfektert i linje 293 i nærvær av kalsiumfosfat for derved å tillate homolog rekombinering. De således dannede rekombinante adénoviruser selekteres ved rensing på plater. Etter isolering blir det rekombinante adenovirus DNA forsterket i cellelinjen 293, noe som fører til en kultur-supernatant inneholdende ikke-renset, rekombinant, defektivt adenovirus med en titer på ca. IO10 pfu/ml.
De virale partikler renses deretter ved sentrifugering over cesiumkloridgradient i henhold til kjente teknikker (se særlig Graham et al., "Virology" 52 (1973) 456). Adenoviruset Adp53 kan bevares ved -80°C i 20 % glycerol.
Evnen hos adenovirus Adp53 til å infektere celler i kultur og i kulturmediet å uttrykke en biologisk aktiv form av vill-p53 er påvist ved infeksjon av celler av human-lmjen 293. Nærværet av p53 i kultur-supernatanten påvises deretter ved hjelp av et monoklonalt antistoff som er spesifikt for p53.
Disse studier tillater å vise at adenoviruset godt uttrykker en biologisk aktiv form av GAD67 i cellekultur.

Claims (16)

1. Defektiv, rekombinant adenovirus inneholdende en heterolog DNA-sekvens hvis ekpresjon i en målcelle tillater i det minste partielt å inhibere celledeling, karakterisert ved at sekvensen omfatter: minst en gen som koder for p53-protein; og en promotersekvens som tillater ekspresjon, i den infiserte celle, av nevnte gen, idet promotersekvensen har en opprinnelse som er forskjellig fra den til genet.
2. Defektiv, rekombinant adenovirus ifølge krav 1, karakterisert ved at den inneholder en sekvens som koder for villtype-proteinet p53 under kontroll av en heterolog promoter.
3. Defektiv, rekombinant adenovirus ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at promotersekvensen er en promotersekvens som stammer fra genomet av den infiserte celle.
4. Defektiv, rekombinant adenovirus ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at promotersekvensen er en syntetisk sekvens.
5. Defektiv, rekombinant adenovirus ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at promotersekvensen er en sekvens av viral opprinnelse, valgt blant promotersekvensen av genene CMV eller RSV.
6. Defektiv, rekombinant adenovirus ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at den inneholder en sekvens som koder for villtype-proteinet p53 under kontroll av en tidlig promoter av cytomegalovirus.
7. Adenovirus ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 6, karakterisert ved at den er berøvet for regionene av sitt genom som er nødvendige for replikering i målcellen.
8. Adenovirus ifølge krav 7, karakterisert ved at den er en adenovirus av typen Ad5.
9. Adenovirus ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 8, karakterisert ved at den heterologe DNA-sekvens videre omfatter et gen som koder for et anti-gen som er spesifikt for tumoren og/eller et gen som koder for et lymfokin.
10. Anvendelse av en adenovirus ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 9 for fremstilling av et farmasøytisk preparat ment for terapi og/eller prevensjon av cancer ved innføring direkte i vevet som skal behandles.
11. Anvendelse av en adenovirus ifølge et at kravene 1 til 9 for fremstilling av et farmasøytisk preparat ment for fremstilling av et farmasøytisk preparat ment for terapi eller prevensjon av cancere ved administrering direkte til tumoren som skal behandles.
12. Anvendelse av en adenovirus ifølge krav 2 for preparering av et farmasøytisk preparat ment for behandling og/eller prevensjon av cancere forbundet med nærvær av en mutert form av p53.
13. Anvendelse ifølge kravene 10 eller 11 for fremstilling av en anti-tumoral vaksine.
14. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det inneholder en eller flere defektive, rekombinante adénoviruser ifølge et av kravene 1 til 9.
15. Farmasøytisk preparat ifølge krav 14, karakterisert v e d at det foreligger i injiserbar form.
16. Farmasøytisk preparat ifølge krav 14, karakterisert v e d at det omfatter mellom IO<4> og IO<*4> pfu/ml og fortrinnsvis mellom 10^ til 10<*0> pfu/ml defektive, rekombinante adénoviruser.
NO19954132A 1993-04-22 1995-10-17 Defektiv, rekombinant adenovirus inneholdende en heterolog DNA-sekvens hvis ekspresjon i en malcelle tillater i det minste partielt a inhibere celledeling, anvendelser og farmasoytisk preparat derav. NO321454B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9304745A FR2704234B1 (fr) 1993-04-22 1993-04-22 Virus recombinants, preparation et utilisation en therapie genique.
PCT/FR1994/000421 WO1994024297A1 (fr) 1993-04-22 1994-04-15 Adenovirus recombinants defectifs pour la therapie genique des tumeurs

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO954132L NO954132L (no) 1995-10-17
NO954132D0 NO954132D0 (no) 1995-10-17
NO321454B1 true NO321454B1 (no) 2006-05-15

Family

ID=9446321

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19954132A NO321454B1 (no) 1993-04-22 1995-10-17 Defektiv, rekombinant adenovirus inneholdende en heterolog DNA-sekvens hvis ekspresjon i en malcelle tillater i det minste partielt a inhibere celledeling, anvendelser og farmasoytisk preparat derav.

Country Status (15)

Country Link
EP (2) EP1652931A3 (no)
JP (1) JPH08508879A (no)
AT (1) ATE332386T1 (no)
AU (1) AU696245B2 (no)
DE (1) DE69434781T2 (no)
DK (1) DK0695360T3 (no)
ES (1) ES2264123T3 (no)
FI (1) FI118011B (no)
FR (1) FR2704234B1 (no)
HU (1) HU220346B (no)
NO (1) NO321454B1 (no)
NZ (1) NZ265306A (no)
PT (1) PT695360E (no)
WO (1) WO1994024297A1 (no)
ZA (1) ZA942778B (no)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0575518A1 (en) 1991-03-06 1993-12-29 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for the selective inhibition of gene expression
US5747469A (en) 1991-03-06 1998-05-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions comprising DNA damaging agents and p53
US6410010B1 (en) 1992-10-13 2002-06-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant P53 adenovirus compositions
FR2717496B1 (fr) * 1994-03-18 1996-04-12 Rhone Poulenc Rorer Sa Virus recombinants, préparation et utilisation en thérapie génique.
FR2705686B1 (fr) * 1993-05-28 1995-08-18 Transgene Sa Nouveaux adénovirus défectifs et lignées de complémentation correspondantes.
US6682728B1 (en) * 1993-10-13 2004-01-27 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Efficient and selective adenoviral-mediated gene transfer into vascular neointima
US6210939B1 (en) * 1993-10-25 2001-04-03 Canji, Inc. Recombinant adenoviral vector and methods of use
TW442569B (en) * 1993-10-25 2001-06-23 Canji Inc Recombinant adenoviral vector
PT797676E (pt) * 1993-10-25 2006-05-31 Canji Inc Vector adenoviral recombinante e metodos de utilizacao
FR2717497B1 (fr) * 1994-03-18 1996-04-12 Rhone Poulenc Rorer Sa Virus recombinants, préparation et utilisation en thérapie génique.
FR2717495B1 (fr) * 1994-03-18 1996-04-12 Rhone Poulenc Rorer Sa Virus recombinants, préparation et utilisation en thérapie génique.
US7252989B1 (en) 1994-04-04 2007-08-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Adenovirus supervector system
JP3816518B2 (ja) 1994-06-10 2006-08-30 ジェンベク、インコーポレイティッド 相補的なアデノウイルスベクター系と細胞系
FR2725213B1 (fr) * 1994-10-04 1996-11-08 Rhone Poulenc Rorer Sa Vecteurs viraux et utilisation en therapie genique
FR2726285B1 (fr) * 1994-10-28 1996-11-29 Centre Nat Rech Scient Adenovirus depourvus de particules contaminantes viables, preparation et utilisation
US7097972B1 (en) 1995-02-13 2006-08-29 Regents Of The University Of Michigan Method and composition for regulating apoptosis
US6015665A (en) * 1995-02-13 2000-01-18 The Regents Of The University Of Michigan Method and composition for regulating apoptosis
US6060238A (en) * 1995-02-13 2000-05-09 The Regents Of The University Of Michigan Method and composition for regulating apoptosis
US5637456A (en) * 1995-02-17 1997-06-10 The University Of Texas, Board Of Regents Rapid test for determining the amount of functionally inactive gene in a gene therapy vector preparation
FR2730637B1 (fr) 1995-02-17 1997-03-28 Rhone Poulenc Rorer Sa Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations
AU5297496A (en) * 1995-02-17 1996-09-04 Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The Methods of preparation and use of recombinant adenoviral vectors
US5707618A (en) * 1995-03-24 1998-01-13 Genzyme Corporation Adenovirus vectors for gene therapy
US6747138B1 (en) 1995-04-03 2004-06-08 Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for regulating Fas-associated apoptosis
US7807783B1 (en) 1995-04-03 2010-10-05 The Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for regulating FAS-associated apoptosis
US6783980B2 (en) 1995-06-15 2004-08-31 Crucell Holland B.V. Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy
DK0833934T4 (da) 1995-06-15 2012-11-19 Crucell Holland Bv Pakningssystemer til human rekombinant adenovirus til anvendelse ved genterapi
US6482803B1 (en) 1995-09-01 2002-11-19 Board Of Regents, The University Of Texas System Modification of mutated P53 gene in tumors by retroviral delivery of ribozyme A
US7087582B1 (en) 1995-09-26 2006-08-08 Regents Of The University Of Michigan Combination for site-specifically transforming cells in vivo comprising a double-balloon catheter and nucleic acid comprising a gene encoding P21
US6054467A (en) * 1996-07-05 2000-04-25 Sidney Kimmel Cancer Center Down-regulation of DNA repair to enhance sensitivity to P53-mediated apoptosis
US5958892A (en) 1996-07-30 1999-09-28 Board Of Regents, The University Of Texas System 2-methoxyestradiol-induced apoptosis in cancer cells
US6696423B1 (en) 1997-08-29 2004-02-24 Biogen, Inc. Methods and compositions for therapies using genes encoding secreted proteins such as interferon-beta
US6113913A (en) 1998-06-26 2000-09-05 Genvec, Inc. Recombinant adenovirus
FR2790484B1 (fr) 1999-03-01 2003-01-03 Michel Marcel Andre Loiselet Petrins malaxeurs fermenteurs, dotes de dispositifs novateurs en la matiere, pour le petrissage des pates visco-elastiques et la production de levain pateux
FR2829136B1 (fr) 2001-08-29 2006-11-17 Aventis Pharma Sa Derives lipidiques d'aminoglycosides
US20030158112A1 (en) 2002-02-15 2003-08-21 Johns Hopkins University School Of Medicine Selective induction of apoptosis to treat ocular disease
US8790664B2 (en) 2008-09-05 2014-07-29 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Multimodular assembly useful for intracellular delivery

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69233013T2 (de) * 1991-08-20 2004-03-04 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of National Institute Of Health, Office Of Technology Transfer Adenovirus vermittelter gentransfer in den gastrointestinaltrakt
FR2688514A1 (fr) * 1992-03-16 1993-09-17 Centre Nat Rech Scient Adenovirus recombinants defectifs exprimant des cytokines et medicaments antitumoraux les contenant.
GB9223084D0 (en) * 1992-11-04 1992-12-16 Imp Cancer Res Tech Compounds to target cells

Also Published As

Publication number Publication date
EP0695360A1 (fr) 1996-02-07
FR2704234B1 (fr) 1995-07-21
JPH08508879A (ja) 1996-09-24
PT695360E (pt) 2006-09-29
HUT73464A (en) 1996-08-28
NZ265306A (en) 1997-10-24
DE69434781T2 (de) 2007-06-14
EP0695360B1 (fr) 2006-07-05
FI118011B (fi) 2007-05-31
NO954132L (no) 1995-10-17
EP1652931A3 (fr) 2006-05-17
WO1994024297A1 (fr) 1994-10-27
AU6572194A (en) 1994-11-08
FR2704234A1 (fr) 1994-10-28
DK0695360T3 (da) 2006-11-13
HU220346B (hu) 2001-12-28
ZA942778B (en) 1995-01-09
FI954966A (fi) 1995-10-18
FI954966A0 (fi) 1995-10-18
EP1652931A2 (fr) 2006-05-03
ES2264123T3 (es) 2006-12-16
AU696245B2 (en) 1998-09-03
NO954132D0 (no) 1995-10-17
DE69434781D1 (de) 2006-08-17
ATE332386T1 (de) 2006-07-15
HU9503035D0 (en) 1995-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO321454B1 (no) Defektiv, rekombinant adenovirus inneholdende en heterolog DNA-sekvens hvis ekspresjon i en malcelle tillater i det minste partielt a inhibere celledeling, anvendelser og farmasoytisk preparat derav.
JP6375273B2 (ja) 腫瘍選択的ｅ１ａおよびｅ１ｂ変異体
CA2836987C (en) Chimeric adenoviruses for use in cancer treatment
US20080292592A1 (en) Oncolytic Adenovirus Armed with Therapeutic Genes
JPH08510122A (ja) 動物起源のアデノウイルスベクターおよび遺伝子治療におけるそれらの使用
JP6566214B2 (ja) Ｒｅｉｃ遺伝子を発現する制限増殖型アデノウイルス
JP2012139220A (ja) 複製欠損アデノウイルスｔｎｆベクター
AU699867B2 (en) Recombinant adenoviruses for gene therapy in cancers
FI119176B (fi) Lääkeyhdistelmä, joka on käyttökelpoinen eksogeenien transfektioon ja ilmentämiseen in vivo
US20220235332A1 (en) Fast and Accurate Three-Plasmid Oncolytic Adenovirus Recombinant Packaging System AD5MIXPLUS and Application Thereof
WO2006125381A1 (fr) Virus du gene de ciblage tumoral zd55-il-24, son procede de construction et son application
JP2002335965A (ja) 細胞特異的発現複製ベクター
WO2008074189A1 (fr) Adénovirus recombinant comprenant un gène khp50 recombinant et son procédé de préparation et ses utilisations
NO319893B1 (no) Defektiv, rekombinert adenovirus og farmasoytisk preparat omfattende denne.
MXPA97002078A (en) Adenovirus that comprise two therapeutic genes: suicide and immunoestimula
WO2007086631A1 (en) Recombinant adenoviruses capable of regulating angiogenesis
US11951141B2 (en) Replication-enhanced oncolytic adenoviruses
JP2009513133A (ja) 癌のウイルス療法のための条件複製ウイルス及び方法
JP2005530495A (ja) オールターナティブスプライシングされる核酸分子

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired