NO303801B1 - Reagens til bestemmelse av faktor VIII aktivitet - Google Patents
Reagens til bestemmelse av faktor VIII aktivitet Download PDFInfo
- Publication number
- NO303801B1 NO303801B1 NO920330A NO920330A NO303801B1 NO 303801 B1 NO303801 B1 NO 303801B1 NO 920330 A NO920330 A NO 920330A NO 920330 A NO920330 A NO 920330A NO 303801 B1 NO303801 B1 NO 303801B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- factor
- reagent
- factor viii
- factors
- thrombin
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 55
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 title claims description 32
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 title claims description 32
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 title claims description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 11
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 claims description 17
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims description 12
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 12
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims description 12
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 claims description 10
- 108010048049 Factor IXa Proteins 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 5
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 claims description 4
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 claims description 4
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 claims description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 102000029301 Protein S Human genes 0.000 claims description 2
- 108010066124 Protein S Proteins 0.000 claims description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940124135 Factor VIII inhibitor Drugs 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 2
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 2
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001146702 Candidatus Entotheonella factor Species 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 108010061932 Factor VIIIa Proteins 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N diazepam Chemical compound N=1CC(=O)N(C)C2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1 AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/745—Assays involving non-enzymic blood coagulation factors
- G01N2333/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C [AHF], factor VIII Ag [VWF]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96444—Factor X (3.4.21.6)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/9645—Factor IX (3.4.21.22)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/974—Thrombin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2405/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving lipids
- G01N2405/04—Phospholipids, i.e. phosphoglycerides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en reagens til bestemmelse av faktor VIII-aktivitet som angitt i krav l's ingress, samt anvendelse av denne ved bestemmelse av faktor VTII-aktivitet i en prøve.
En bestemmelse av faktor Vlll-aktivitet ble beskrevet av R.J. Wagenvoord et al. for klinisk bruk (Haemostasis 19., 196-204 (1989)). Ifølge denne metode tilsettes til faktor VIII-holdige prøver som reagens 1 en blanding av faktor IXa, trombin, kalsiumioner og fosfolipider, idet faktoren VIII som skal bestemmes, først aktiveres. Den aktiverte faktor VIII danner i det følgende med faktor IXa, fosfolipidene og kalsiumionene et kompleks som er i stand til å aktivere faktor X som i det følgende skal tilsettes som ytterligere reagens (reagens 2). Med den aktiverte faktor X spaltes på kjent måte kromogent substrat, hvorved faktor Vlll-aktiviteten av prøven som skal undersøkes kan tilbake-regnes fra mengden av den dannede fotometrisk bestembare substans. Faktor IXa og trombin som inngår i den kompleksdannende reagens, samt faktor X som anvendes for å danne aktivert faktor Xa, er av bovin opprinnelse.
Helt analogt med nevnte fremgangsmåte gjennomføres en kommersielt tilgjengelig test ("Dade R faktor VIII Chromogen"; produsent: firma Baxter); også her må faktor X tilsettes til prøven i et eget pipetteringstrinn. En ulempe ved denne bestemmelsesmetode består i at den på grunn av flere pipetteringstrinn er relativt kostbar å gjennomføre. Denne ulempe er spesielt merkbar ved serieundersøkelser, fordi det er liten tid for arbeidsprosessene (inkubasjonstid: ca. 90 sekunder; måletid: ca. 60 sekunder).
Tilsetningen av faktor X i et eget pipetteringstrinn er således nødvendig, fordi faktor IXa aktiverer faktor X raskere i nærvær av kalsiumioner enn uten kalsiumioner (J. Biol. Chem. 256, 3433-3442 (1981)), noe som naturligvis er uønsket. Ved de nevnte bestemmelsesmetoder er det således prinsipielt ikke mulig å blande samtlige komponenter først til en reagens og først derefter å tilsette dem til prøven.
Ifølge en annen test ("COATEST<R>: Faktor VIIIc"; produsent: Kabi Vitrum) tilsettes til prøven først en blanding av de bovine faktorer IXa og X med fosfolipider, hvilken blanding må tilberedes ferskt før bestemmelsen. Denne blanding inneholder riktignok faktor X ved siden av faktor IXa, men må således ikke inneholde noen kalsiumioner for ikke å utløse den uønskede raske akt ivering av faktor X. I dette tilfelle må således kalsiumet tilsettes til prøven i et eget pipetteringstrinn, nemlig efter en inkubasjon av prøven som er blandet med blandingen; først ved tilsetning av kalsium startes reaksjonen. Efter en ytterligere inkubasjon på 5 til 20 min. tilsettes det kromogene substrat. Også ved denne test må således en manglende kompo-nent tilsettes for å starte reaksjonen i et eget trinn; kompleksdannelse og aktivering skjer i to trinn.
Oppfinnelsens oppgave består i å tilveiebringe en reagens som muliggjør en bestemmelsesfremgangsmåte av den innled-ningsvis angitte art som kan gjennomføres med færrest mulige pipetteringstrinn. Reagensen ifølge oppfinnelsen skal kunne anvendes såvel ved undersøkelser av kroppsvæsker på deres faktor VIII-aktivitet, som også ved automatisert undersøkelse av høyrenset faktor Vlll-preparater.
Reagensen ifølge oppfinnelsen er særpreget ved det som fremgår av krav l's karakteriserende del. Ytterligere trekk fremgår av kravene 2-5.
Oppfinnelsen er basert på den erkjennelse at faktor IXaS (i vandig oppløsning), selv i nærvær av kalsiumioner, ikke er i stand til å aktivere faktor X i løpet av noen timer. Således blir det mulig å forene samtlige for kompleksdannelsen og aktiveringen nødvendige bestanddeler i en eneste reagens og å blande disse med prøven i et eneste pipet teringstrinn. Reagensen ifølge oppfinnelsen er stabil i timesvis, og kan således tilberedes uten tidspress før gjennomføringen av serieundersøkelser. Nærværet av de ytterligere koaguleringsfaktorer Xla og Xlla virker stabi-liserende på det dannede kompleks.
Faktor IXaS kan utvinnes på kjent måte fra humanplasma ved behandling med Celite<R>(produsent: Johns-Manvilie Corp.).
Til reagensen tilsettes hensiktsmessig en substans (f.eks. et tetrapeptid) for å unngå en koagulering under prøveti-den. Dessuten er det hensiktsmessig å tilsette til reagensen en heparinneutralisator (f.eks. polybren) for å gjøre bestemmelsen av faktor VIII uavhengig av heparininnholdet i prøven som skal undersøkes.
Oppfinnelsen vedrører også et sett bestående av to reagenskomponenter A og B, ved fremstilling av reagensen ifølge oppfinnelsen, hvorved reagenskomponenten A inneholder faktorene IXaS og X, trombin, kalsiumioner og eventuelt faktorene Xla og Xlla og reagenskomponenten B inneholder fosfolipider.
Oppfinnelsen vedrører dessuten et sett bestående av to reagenskomponenter C og D, ved fremstilling av reagensen ifølge oppfinnelsen, hvorved reagenskomponent C inneholder faktorene IXaS og X, kalsiumioner og eventuelt faktorene Xla og Xlla, og reagenskomponent D inneholder trombin og fosfolipider.
En foretrukken utførelsesform av reagensen ifølge oppfinnelsen består i at trombinet foreligger i et konsentrasjonsområde på 0,01 og 2,0 E/ml, fosfolipidene i et område på 0,01 og 100 nmol/ml, kalsiumionene i et område på 1 til 50/xmol/ml, faktor IXaS i et område på 0,05 til 5 E/ml, faktor X i et område på 0,01 og 10 E/ml og eventuelt faktorene Xla og Xlla hver i et område på 0,01 og 2,0 E/ml. Det er hensiktsmessig at faktorene og trombinet som foreligger i reagensen ifølge oppfinnelsen, er av human og ikke bovin opprinnelse, når man med reagensen ifølge oppfinnelsen skal bestemme en human faktor VTII-aktivitet. Det er et prinsipp av biokjemisk analytikk, om mulig, å undersøke likt med likt for å utelukke feilkilder som erfaringsmessig oppstår ved anvendelse av genetisk forskjellige reaksjons-partnere. Denne ulempe er en spesiell belastning, når prøven som skal undersøkes, har en høy faktor VIII-aktivitet, noe som er av spesiell betydning f.eks. ved industri-ell kvalitetskontroll av høyrensede faktor Vlll-preparater.
Anvendelsen av bovine koaguleringsfaktorer medfører også en fare for at proteinene ikke er frie for epidemier, hvorved en nøyaktig og kostbar dokumentasjon av faktorenes opprinnelse er nødvendig (bevis på epidemifritt storfe, samt infeksjonsfritt storfeplasma som utvinnes fra storfeblod).
De i reagensen ifølge oppfinnelsen foreliggende proteiner, skal eventuelt underkastes en behandling for å inaktivere eventuelt foreliggende infeksjonsfremkallende agenser. Slike inaktiveringsfremgangsmåter er kjent fra f.eks. EP-A 0 159 311 samt EP-A 0 050 061 og EP-A 0 131 740. De sikrer 1 stor utstrekning at konsentratene er fri for infeksjonsfremkallende agenser.
Oppfinnelsen vedrører også en fremgangsmåte til bestemmelse av faktor Vlll-aktivitet i en prøve ved omsetning med reagensen ifølge oppfinnelsen, idet det dannes først aktivert faktor X (faktor Xa) avhengig av faktor VIII-innholdet, for derefter å bestemme kvantitativt faktor Xa. Denne bestemmelsen kan f.eks. gjennomføres slik at faktor Xa først omsettes med et kromogent substrat for å frisette en substans som bestemmes spektrofotometrisk.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen har en inkubasjonstid på ca. fem minutter, hvorved det muliggjøres på en bekvem måte å arbeide såvel manuelt som på analyseautomater som er karakteristisk for serieundersøkelser.
Dessuten har det vist seg at fotometriske målinger kan skje selv i løpet av inntil fire minutter, da farveutviklingen i dette tidsrom skjer lineært (frisettelse av p-nitroanilin fra det kromogene substrat); reagensen ifølge oppfinnelsen har således den fordelaktige egenskap å frisette den spektrofotometrisk bestembare substans i løpet av over fire minutter med konstant hastighet. Dette tidsrom er uvanlig langt sammenlignet med de idag kjente reagenser (ved testen "Dade<R>Faktor VIII Chromogen" (produsent: firma Baxter) utgjør den bare ca. ett minutt). Oppfinnelsen skal beskri-ves nærmere ved hjelp av de efterfølgende eksempler.
Fremstilling av reagensen
(1) Faktor IXaiS-oppløsning: 1 1 citratplasma blandes med 25 ml lmolar CaCl2-oppløsning ved fremstilling av humanserum, og henstår natten over ved romtemperatur; den dannede størknede masse presses ut og kastes. Serumet filtreres og nedfryses.
Til adsorpsjon av faktor IXaS fra humanserum, tines dette ved 37°C, tilsettes 0,5 mg/ml Sephadex<R>A 50 (produsent: Pharmacia), røres og derefter filtreres. Gelen elueres derefter i buffer (2,5 % serumvolum; 30 g/l NaCl, 4 g/l Na3citrat.2H20, pH 7,0). Eluatet tjener som faktor IXaS-oppløsning. (2) Faktor X-oppløsning: En konsentrert oppløsning av protrombinkompleksfaktorene II, IX, X påføres på dekstran-sulfatsefarose og elueres med en ioneforsterkergradient (0,1 - 1 I) . Fraksjonene testes på deres faktor X-innhold. De fraksjoner som inneholder faktor X, slåes sammen, kon-sentreres ved hjelp av ultrafiltrasjon og fryses. Konsentrasjon: ca. 30 E faktor X/ml. (3) Celite-eluat: Citratplasma blandes med 2 vekt% celitt og inkuberes under rystning ved 37°C. Derefter sentrifuge-res i 5 til 10 minutter ved 3000 rpm (romtemperatur) . Resten kastes. Celite-sedimentet vaskes tre ganger med fysiologisk ■ NaCl-oppløsning og elueres derefter med 10%NaCl-oppløsning (1/4 volum av utgangsplasma) og sentrifuge-res. Resten fylles i dialyseslanger og dialyseres mot minst 2 0 ganger volumet av en fysiologisk NaCl-oppløsning natten over ved 4°C, og fryses derefter.
Ved fremstilling av reagenskomponent A blandes følgende komponenter.
Denne blanding dialyseres ved 4°C natten over mot en buffer (1,36 g/l imidazol, 2,34 g/l NaCl, 1,47 g/l natriumcitrat,13 ml 1 mol/l CaCl2) og filtreres derefter. Koagulasjonsak-tivt fosfolipidkonsentrat fortynnes med 1:200 dialysebuffer og 1 del av denne oppløsning (reagenskomponent B) blandes med 3 deler av den filtrerte blanding. Efter tilsetning av 0,19 % Tween 20 (polyoksyetylensorbitanmonolaureat) og 5 mg tetrapeptid AcOH-Gly-Pro-Arg-Pro-OH, fylles reagensen til 2 0 ml hver.
Bestemmelse av faktor VIII i en prøve:
Først blandes 1 del av en faktor Xa-substratoppløsning (CH3OCO-D-CHA-Gly-Arg-pNA.AcOH, 4 mmol/1) med 2 deler av en reaksjonsbuffer (6,06 g/l Tris; 3,03 g/l EDTA; 25 g/l NaCl; 4 ATU/ml Hirudin; pH 8,2) (substratbufferblanding).
Pipetterskj erna:
50 fil av en faktor Vlll-holdig prøve og 250 fil reagens inkuberes i 5 min. ved 37°C og blandes med 300 fil substrat-buf ferblanding .
Den spektrofotometriske bestemmelse av faktor VIII skjer på i og for seg kjent måte, idet målingene gjennomføres efter at oppløsningen var holdt i 3 minutter (37°C) ved 405 nm. Oppsetningen av referansekurven foretas likeledes på kjent måte, idet man går ut fra en lyofilisert normalplasmamengde som efter oppløsning med destillert vann skal inneholde 1 I.E. faktor VIII/ml.
Det har vist seg at bestemmelsesmetoden ifølge oppfinnelsen viser en lineær sammenheng mellom ekstinksjonsøkningen pr. tidsenhet og faktor VIII-innholdet i konsentrasjonsområdet mellom 2 I.E./ml og 0,002 I.E./ml.
Bestemmelsesmetoden ifølge oppfinnelsen har en høy sen-sitivitet og egner seg av denne grunn også til indirekte bestemmelse av proteiner som reagerer (aktivert eller ikke aktivert) med faktor VIII. Således kan f.eks. aktivert protein C-innholdet og dets kofaktor (protein S) eller faktor Vlll-inhibitor bestemmes indirekte ved at prøven av en bestemt mengde faktor VIII (aktivert eller ikke aktivert) tilsettes, hvorefter andelen av faktor VIII som ikke er inhibert fra det aktiverte protein C og dets kofaktor hhv. faktor Vlll-inhibitor bestemmes.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen kan således likeledes anvendes til indirekte bestemmelse av den faktor VIII-inhiberende aktivitet.
Bestemmelse av aktivert protein C ( aPC)
Reagenskomponentene A og B anvendes slik som allerede beskrevet ved fremstillingen av reagensen. 75/il faktor VII I-oppløsning (5 E/ml) aktiveres ved tilsetning av 3 5 fil trombin-oppløsning (0,5 E/ml) og 5 min. inkubasjon ved 37°C. 50 fil av prøveoppløsningen med forskjellig innhold av aPC (0,03; 0,10; 0,30; 1,00 E/ml) blandes med 100 fil inkubasjonsblanding i nærvær av 200 fil bufferblanding (5 ml Tris-buffer, pH 7,4; 100 fil Hirudin og 25 fil fosfolipid-reagenskomponent B) og inkuberes i 2 min. ved 37°C. Efter tilsetning av 200 fil av reagenskomponent A til 100 fil av den inkuberte prøveoppløsning og påfølgende inkubasjon (5 min. ved 37°C) bestemmes fotometrisk den andel av faktor VIII som ikke er inhibert av aPC. Prøven blandes med den allerede beskrevne substratbufferblanding. Ekstinksjonen ved 405 nm måles i 3 min. ved 37°C. Det foreligger en lineær sammenheng mellom ekstinksjonens økning med tiden (dE/min.) og konsentrasjon av aPC i prøve-oppløsningen .
Claims (8)
1. Reagens til bestemmelse av faktor VTII-aktivitet,karakterisert vedat den inneholder faktor IXa/?, faktor X, kalsiumioner, trombin, fosfolipider og eventuelt faktor Xla og faktor Xlla eller et sett av disse, der trombin foreligger i et konsentrasjonsområde på 0,01til 2,0 E/ml, fosfolipider i et område på 0,01 til 100 nmol/ml, kalsiumioner i et område på 1 til 50/xmol/ml, faktor IXa/? i et område på 0,05 til 5 E/ml, faktor X i et område på 0,01 til 10 E/ml og eventuelt faktorene Xla og Xlla hver i et område på 0,01 til 2,0 E/ml.
2. Reagenskomponent ved fremstilling av en reagens ifølge krav 1,
karakterisert vedat den inneholder faktor IXa/?, faktor X og kalsiumioner.
3. Sett bestående av to reagenskomponenter A og B, for fremstilling av en reagens ifølge krav 1,karakterisert vedat reagenskomponent A inneholder faktorene IXa/? og X, trombin, kalsiumioner og eventuelt faktorene Xla og Xlla, og at reagenskomponent B innholder fosfolipider.
4. Sett bestående av to reagenskomponenter C og D, for fremstilling av en reagens ifølge krav 1,karakterisert vedat reagenskomponent C inneholder faktorene IXa/? og X, kalsiumioner og eventuelt faktorene Xla og Xlla, og at reagenskomponent D inneholder trombin og fosfolipider.
5. Reagens som angitt i krav 1, eller reagenskomponent som angitt i krav 2, eller sett som angitt i ett av kravene 3 eller 4,
karakterisert vedat de foreliggende faktorer og trombinet er av human opprinnelse og underkastes en behandling for inaktivering av eventuelt foreliggende infeksjonsfremkallende agenser.
6. Anvendelse av reagens ifølge krav 1-5 ved bestemmelse av faktor VIII-aktivitet i en prøve, hvor det først dannes aktivert faktor X (faktor Xa) avhengig av faktor VIII-innholdet, og deretter bestemmes kvantitativt faktoren Xa.
7. Anvendelse av reagens ifølge krav 1-5 ved bestemmelse av proteiner som reagerer med faktor VIII, spesielt protein C og dets kofaktor protein S, av faktor Vlll-antistoffer hhv. av faktor VIII-inhiberende proteiner, hvor, etter tilsetning av en bestemt overskytende mengde av faktor VIII til prøven, den resterende mengde av faktor VIII omsettes med en reagens, og faktor X som er aktivert ved hjelp av ikke inhibert faktor VIII, bestemmes.
8. Anvendelse som angitt i krav 7, hvor reagensen inneholder en ytterligere bestemt mengde faktor VIII.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0016491A AT395597B (de) | 1991-01-25 | 1991-01-25 | Reagens zur bestimmung von faktor viii-aktivitaet |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO920330D0 NO920330D0 (no) | 1992-01-24 |
| NO920330L NO920330L (no) | 1992-07-27 |
| NO303801B1 true NO303801B1 (no) | 1998-08-31 |
Family
ID=3483265
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO920330A NO303801B1 (no) | 1991-01-25 | 1992-01-24 | Reagens til bestemmelse av faktor VIII aktivitet |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5506112A (no) |
| EP (1) | EP0496723B1 (no) |
| JP (1) | JPH0879B2 (no) |
| AT (2) | AT395597B (no) |
| CA (1) | CA2059605A1 (no) |
| DE (1) | DE59203705D1 (no) |
| DK (1) | DK0496723T3 (no) |
| ES (1) | ES2080477T3 (no) |
| FI (1) | FI920343A (no) |
| NO (1) | NO303801B1 (no) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6100050A (en) * | 1989-08-17 | 2000-08-08 | Dade Behring Ag | Factor VIII:Ca chromogenic assay |
| NZ261190A (en) * | 1993-01-29 | 1997-12-19 | Bjorn Dahlback | Assaying for functional activity of a blood coagulation component involved in the protein c anticoagulant system (protein c, activated protein c, protein s or anticoagulant factor v) |
| DE59410041D1 (de) * | 1993-12-03 | 2002-03-21 | Baxter Ag | Test zur Bestimmung der Empfindlichkeit gegenüber aktiviertem Protein C |
| DE19616540A1 (de) * | 1995-11-10 | 1997-05-15 | Immuno Ag | Verwendung von von Willebrand-Faktor und pharmazeutische Zubereitung |
| US6379975B1 (en) | 1996-11-27 | 2002-04-30 | T.A.C. Thrombosis And Coagulation Aktiebolag | Methods and reagents for determining protein S |
| ATE268477T1 (de) | 1999-09-03 | 2004-06-15 | Roche Diagnostics Corp | Verfahren, reagenz und messkartusche zur bestimmung der gerinnungszeit |
| US6448024B1 (en) | 2000-10-03 | 2002-09-10 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent, cartridge, and device for determining fibrinogen |
| US6855509B2 (en) | 2000-12-19 | 2005-02-15 | Instrumentation Laboratory Company | Protein S functional assay and kit therefor |
| US7977460B2 (en) * | 2003-05-19 | 2011-07-12 | National Institute For Biological Standards And Control | Compositions comprising coagulation factors IXA and VIII for the treatment of haemophilia A or B |
| AU2012254169B2 (en) | 2011-02-25 | 2016-02-25 | Wellstat Diagnostics, Llc | Assays for detecting enzymatic activity |
| EP2877202A4 (en) | 2012-07-25 | 2016-06-01 | Biogen Ma Inc | BLOOD FACTOR MONITORING TEST AND USES THEREOF |
| US10114017B2 (en) | 2013-11-15 | 2018-10-30 | President And Fellows Of Harvard College | Methods and assays for factor VIII activity |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE448945B (sv) * | 1979-12-20 | 1987-03-30 | Blombaeck E G B | Forfarande for rening och /eller koncentrering av faktor viii-komplexet |
| AT368883B (de) * | 1980-07-22 | 1982-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer neuen blutgerinnungsfoerdernden praeparation auf basis von humanproteinen |
| DE3173208D1 (en) * | 1980-10-06 | 1986-01-23 | Edward Shanbrom | Method of reducing undesirable activities of biological and pharmaceutical products |
| US4657894A (en) * | 1983-03-31 | 1987-04-14 | Scripps Clinic & Research Foundation | New factor VIII coagulant polypeptides |
| US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| DE3407280A1 (de) * | 1984-02-28 | 1985-09-19 | Gödecke AG, 1000 Berlin | Testsatz zur bestimmung der aktivierten partiellen thromboplastinzeit (ptt) mit erhoehter heparinempfindlichkeit |
| AT389815B (de) * | 1984-03-09 | 1990-02-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
| US4965199A (en) * | 1984-04-20 | 1990-10-23 | Genentech, Inc. | Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection |
| DE3516579A1 (de) * | 1984-11-19 | 1986-05-22 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Gerinnungstest auf teststreifen |
| US4786726A (en) * | 1986-01-06 | 1988-11-22 | Blood Systems, Inc. | Factor IX therapeutic blood product, means and methods of preparing same |
| DE3625090A1 (de) * | 1986-07-24 | 1988-01-28 | Behringwerke Ag | Mittel zur therapie faktor viii-resistenter haemophilie a und verfahren zu seiner herstellung |
| DE3914869C1 (no) * | 1989-05-05 | 1990-08-09 | Biotest Pharma Gmbh, 6072 Dreieich, De |
-
1991
- 1991-01-25 AT AT0016491A patent/AT395597B/de not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-01-10 US US07/819,456 patent/US5506112A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-01-17 AT AT92890015T patent/ATE128240T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-01-17 ES ES92890015T patent/ES2080477T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-01-17 DK DK92890015.8T patent/DK0496723T3/da not_active Application Discontinuation
- 1992-01-17 DE DE59203705T patent/DE59203705D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-01-17 CA CA002059605A patent/CA2059605A1/en not_active Abandoned
- 1992-01-17 EP EP92890015A patent/EP0496723B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-01-24 FI FI920343A patent/FI920343A/fi unknown
- 1992-01-24 JP JP4010794A patent/JPH0879B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-01-24 NO NO920330A patent/NO303801B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0496723T3 (da) | 1996-01-02 |
| JPH04293500A (ja) | 1992-10-19 |
| FI920343A (fi) | 1992-07-26 |
| US5506112A (en) | 1996-04-09 |
| JPH0879B2 (ja) | 1996-01-10 |
| DE59203705D1 (de) | 1995-10-26 |
| ATA16491A (de) | 1992-06-15 |
| EP0496723A2 (de) | 1992-07-29 |
| ES2080477T3 (es) | 1996-02-01 |
| NO920330L (no) | 1992-07-27 |
| AT395597B (de) | 1993-01-25 |
| FI920343A0 (fi) | 1992-01-24 |
| EP0496723A3 (en) | 1992-11-25 |
| ATE128240T1 (de) | 1995-10-15 |
| CA2059605A1 (en) | 1992-07-26 |
| EP0496723B1 (de) | 1995-09-20 |
| NO920330D0 (no) | 1992-01-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Lundblad et al. | The activation of antihemophilic factor (factor VIII) by activated Christmas factor (activated factor IX) | |
| EP1015890B1 (en) | Recombinant rabbit tissue factor based prothrombin time reagent | |
| JP3047120B2 (ja) | 活性化因子ｖｉｉに関する定量的凝血検定 | |
| Borsey et al. | Platelet and coagulation factors in proliferative diabetic retinopathy. | |
| CA2333890A1 (en) | Corn trysin inhibitor stabilizes blood-derived plasma and improves sensitivity of plasma clotting assays | |
| NO303801B1 (no) | Reagens til bestemmelse av faktor VIII aktivitet | |
| Cantinieaux et al. | Impaired neutrophil defense against Yersinia enterocolitica in patients with iron overload who are undergoing dialysis | |
| WO1992022818A1 (en) | Rapid determination of glycated hemoglobin | |
| DK149475B (da) | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af den biologiske aktivitet af herapin i plasma | |
| JP3533012B2 (ja) | プロテインｃ／プロテインｓ系の障害を検出する方法 | |
| US8334108B2 (en) | Kit for protein S functional assay | |
| NL8201987A (nl) | Werkwijze voor het bepalen van de activiteit van plasminogeenactivator van het weefseltype, alsmede voor gebruik bij deze werkwijze geschikte combinatie van het "kit"-type. | |
| CA2100567C (en) | Protein s chromogenic assay | |
| NO161079B (no) | Reagens for optisk bestemmelse av blodkoaguleringsforholdet. | |
| CA2432118C (en) | Protein s functional assay | |
| Soslau et al. | Desmopressin-induced improvement in bleeding times in chronic renal failure patients correlates with platelet serotonin uptake and ATP release | |
| NO310126B1 (no) | Initiator for bestemmelse av koaguleringstid, reagens for bestemmelse av aPTT, fremgangsmåte ved fremstilling av reagensetog anvendelse derav | |
| JP3041457B2 (ja) | 因子ｉｘ発色アッセイ | |
| AU2002246838A1 (en) | Protein S functional assay | |
| JP3461871B2 (ja) | ル−プス抗凝血物質抗体の測定法及び測定試薬 | |
| Hickton et al. | A functional assay of protein C in human plasma | |
| JP4532731B2 (ja) | 長期に安定で即時使用可能なリストセチン補因子試験試薬 | |
| Sridhara et al. | The direct binding of human factor VII in plasma to recombinant human tissue factor | |
| NO860167L (no) | Fremgangsmaate til bestemmelse av aktiviteten av blodets komplementsystem. | |
| RU2039983C1 (ru) | Способ определения активности лейкоцитарной эластазы в плазме крови |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |