NO300844B1

NO300844B1 - Nye carboxyalkylderivater som er anvendbare som inhibitorer av enkefalinase og ACE

Info

Publication number: NO300844B1
Application number: NO923743A
Authority: NO
Inventors: Alan M Warshawsky; Gary Alan Flynn
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1991-09-27
Filing date: 1992-09-25
Publication date: 1997-08-04
Also published as: FI924312A0; JP3173673B2; EP0534492A3; JPH05213950A; HUT65174A; US5472959A; DE69216026D1; FI101304B; EP0534492A2; EP0534492B1; ATE146482T1; GR3022654T3; ZA927211B; KR930006026A; AU2524792A; IL103265A0; HU214596B; ES2097847T3; CA2078759A1; KR100273734B1

Description

Enkefalinase, eller nærmere bestemt endopeptidase-24,11, er et pattedyr-ectoenzym som er involvert i den metaboliske nedbrytning av visse sirkulerende regulerende peptider.

+2

Dette enzym, som er en Zn -metallopeptidase, utøver dets

effekt ved spaltning av de ekstracellulære peptider ved aminogruppen av hydrofobe rester, og inaktiverer således peptidene som regulerende budbringere.

Enkefalinase er involvert i den metaboliske nedbrytning av et utall av sirkulerende regulerende peptider, innbefattende endorfiner slik som 8-endorfin og enkefalinene, atria It natriuretisk peptid (ANP), og andre sirkulerende regulerende peptider.

Endorfiner er naturlig forekommende polypeptider

som binder til opiate reseptorer i forskjellige områder i hjernen, og tilveiebringer derved en analgesisk effekt ved å heve smerteterskelen. Endorfiner forekommer i forskjellige former innbefattende a-endorfin, 8-endorfin, Y-endorfin så

vel som enkefalinene. Enkefalinene, dvs. Met-enkefalin og Leu-enkefalin, er pentapeptider som forekommer i nerveendene

av hjernevevet, ryggmarg og den gastrointestinale traktus.

Som de andre endorfiner tilveiebringer enkefalinene en analgesisk effekt ved binding til de opiate reseptorer i hjernen. Ved inhibering av enkefalinase inhiberes den metaboliske nedbrytning av de naturlig forekommende endorfiner og enkefaliner, og tilveiebringer derved en kraftig endorfin- eller enkéfalin-formidlet analgesisk effekt. Inhibering av enkefalinase vil derfor være anvendbar i en pasient som lider av akutt eller kronisk smerte. Inhibering av enkefalinase vil også være anvendbar ved å tilveiebringe en antidepressiv effekt og ved å tilveiebringe en reduksjon i strengheten av avvenningssymptomer assosiert med avslutning av opiat- eller morfinadministrering.

ANP angir en familie av naturlig forekommende peptider som er involvert i den homeostatiske regulering av blodtrykk, så vel som natrium-og vann-nivåer. ANP er blitt funnet å variere i lengde fra ca. 21 til ca. 126 aminosyrer, hvor et felles strukturelt trekk er én eller flere disulfid-

slyngede sekvenser på 17 aminosyrer med forskjellige amino-

og .carboxy-terminale sekvenser bundet til cysteingruppen.

ANP er blitt funnet å binde til spesifikke bindingsseter i forskjellige vev innbefattende nyre, binyre, aorta, og vaskulære glattmusklér med affiniteter varierende fra ca. 50 pico-molar (pM) til ca. 500 nano-molar (nM) (Needleman, Hypertension 7, 469 (1985)). I tillegg er det antatt at ANP binder til spesifikke .reseptorer i hjernen og muligens tjener som en heuromodulator så vel som et konvensjonelt perifert hormon.

De biologiske egenskaper av ANP innbefatter en kraftig diuretisk/natriuretisk og vasodilaterende/hypotensiv effekt, så vel som en inhiberende effekt på renin og aldosteron-sekresjon (deBold, Science 230, 767 (1985)). Ved inhibering av enkefalinase inhiberes den metaboliske nedbrytning av naturlig forekommende ANP, og tilveiébringer derved en kraftig ANP-formidlet diuretisk, natriuretisk, hypotensiv, hypoaldosteronemisk effekt. Inhibering av enkefalinase vil derfor være anvendbar i en pasient som lider av sykdomstilstander karakterisert ved unormaliteter i væske, elektrolytt, blodtrykk, intraokulart trykk, renin eller aldosteron-homeostase, slik som hypertensjon, nyresykdommer, hyperaldosteronemia, hjertehypertrofi, glaukom og kongestiv hjertesvikt.

I tillegg er forbindelsene ifølge oppfinnelsen inhibitorer av angiotensin-omdannende enzym (ACE). ACE er en peptidyl-dipeptidase som katalyserer omdannelsen av angiotensin I til angiotensin II. Angiotensin II er en vaso-konstriktor som også stimulerer aldosteron-sekresjonen av binyrecortex. Inhibering av ACE vil derfor være anvendbar i en pasient som lider av sykdomstilstander slik som hypertensjon og kongestiv hjertesvikt (se William W. Douglas, "Polypeptides - Angiotensin, Plasma Kinins, and Others", kapittel 27, i Goodman and Gillman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 7. utgave, 1985, s. 652-653, MacMillan Publishing Co., New York, New York). I tillegg er det blitt angitt at ACE-inhibitorer er anvendbare ved behandling av erkjennelsessykdommer (tysk patentsøknad nr. 3901-291-A, publisert 3. august 1989).

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer nye forbindelser, hvilke forbindelser er kjennetegnet ved at de har formelen

hvori

A er en binding, methylen eller oxygen, svovel eller

NR4 eller NCOR5 hvori R4 er hydrogen og R5 er -CF3,

R3 er hydrogen eller -CH2OC(0)C(CH3)3;

R-l er hydrogen, C^-Qt-alkyl eller -CH2OC(0)-C(CH3)3; og

n er et helt tall fra 1 til 3.

Foreliggende oppfinnelse angår også et farmasøytisk preparat omfattende en effektinhiberende mengde av en forbindelse av formel (I) i blanding eller på annen måte i assosiasjon med én eller flere farmasøytisk akseptable bærere eller eksipienser.

Forbindelsene av formel I .hvori A er methylen, oxygen, svovel eller NH, R1 er t-butyl og er difenylmethyl, kan fremstilles ved anvendelse av prosedyrer og teknikker vel kjent innen faget. Et generelt synteseskjema for fremstilling av disse forbindelser er angitt i Reaksjonsskjema Aj hvori alle substituenter med mindre annet er angitt, er som tidligere definert.

A' = en binding, - CE^-, O, S eller NH.

Forbindelsene av formel I hvori A er en binding, methylen, oxygen, svovel eller NH, kan fremstilles ved omsetning av den egnede 3-fenyl-2-carbalkoxyalkylpropionsyre-forbindelse av struktur 2 med den egnede aminoforbindelse av struktur 1. Eksempelvis kan den egnede aminoforbindelse av struktur 1 omsettes med den egnede 3-fenyl-2-carbalkoxyalkyl-prppionsyreforbindelse av struktur 2 i nærvær av et koblings-reagens slik som EEDQ (l-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydro-kinolin), DCC (1,3-dicyklohexylcarbodiimid) eller diethyl-cyanofosfonat i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som methylenklorid, under dannelse av den egnede tricykliske forbindelse av formel I.

Alternativt kan 3-fenyl-2-carbalkoxyalkylpropion-syreforbindelsen av struktur 2 omdannes til det tilsvarende 3~fenyl-2-carbalkoxyalkylpropionsyre, syreklorid, etterfulgt av omsetning med den egnede aminoforbindelse av struktur 1, under dannelse av den egnede forbindelse av formel I.

Som angitt i tabell 1 kan R1 og R^-gruppene på forbindelsene av struktur 3 manipuleres under anvendelse av teknikker og prosedyrer vel kjent innen faget, for å gi de tilsvarende forbindelser av struktur 4-9.

Eksempelvis kan både difenylmethylesterfunksjonaliteten og t-butylesterfunksjonaliteten av den egnede forbindelse av struktur 3 fjernes under anvendelse av trifluoreddiksyren, under dannelse av den egnede dicarboxylsyreforbindelse av struktur 4.

Eksempelvis bringes den egnede tricykliske forbindelse av struktur 3, hvori R^ er t-butyl og R^ er difenylmethyl,

i kontakt i et egnet surt løsningsmiddel slik som trifluoreddiksyre. Reaktantene omrøres typisk sammen ved romtemperatur i et tidsrom varierende fra 1 til 24 timer. Carboxylsyrefor-bindelsen av struktur 4 gjenvinnes fra reaksjonssonen ved ekstraktive metoder vel kjent innen faget. Den kan renses ved silicagelkromatografi.

Begge carboxylsyrefunksjonalitetene av den egnede dicarboxylsyreforbindelse av struktur 4 kan omestres under anvendelse av teknikker og prosedyrer vel kjent innen faget. Eksempelvis kan en dipivaloylmethyletheresterforbindelse av struktur 5 fremstilles ved behandling av dicarboxylsyreforbin-delsen av struktur 4 med 2 molar—ekvivalenter klormethylpivalat i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som dimethylformamid, sammen med en ikke-nukleofil base slik som cesiumcarbonat.

Difenylmethylesterfunksjonaliteten av den egnede tricykliske forbindelse av struktur 3 hvori R^ er C^-C4

og R^ er difenylmethyl, kan selektivt fjernes ved anvendelse av katalytisk hydrogenering vel kjent innen faget, under dannelse av den egnede C^-C4-alkylester/carboxylsyreforbindelse av struktur 6. Eksempelvis kan C^-C4-alkylester/carboxylsyre-forbindelsen av struktur 6 fremstilles ved behandling av den egnede tricykliske forbindelse av struktur 3 hvori R^ er <C>1~<C>4 °9 R3 er difenylmetnYl' med en katalytisk mengde av palladium/carbon og et molart overskudd av ammoniumformiat. Reaktantene bringes typisk i kontakt i et egnet polart organisk løsningsmiddel slik som methanol* Reaktantene bringes typisk i kontakt ved romtemperatur i et tidsrom varierende

fra 3 minutter til 24 timer. C-^-C^-alkylester/carboxylsyre-forbindelsen av struktur 6 kan gjenvinnes fra reaksjonssonen ved filtrering og fordampning av løsningsmidlet.

Carboxylsyrefunksjonaliteten av den egnede C^-C^-alkylester/carboxylsyreforbindelse av struktur 6 kan omestres under dannelse av den egnede C^-C4~alkylester/ pivaloylmethyletherester av struktur 7. Eksempelvis kan en C^-C^-alkylester/pivaloyloxymethylesterforbindelse av struktur 7 fremstilles ved behandling av den egnede C^-C^-alkylester/ carboxylsyreforbindelse av struktur 6 med 1 mblar-ekvivalent klormethylpivalat i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som dimethylformamid, sammen med en ikke-nukleofil base slik som cesiumcarbonat.

C^-C4~alkylesterfunksjonaliteten av den egnede C^-C4-alkylester/pivaloylmethyletherester av struktur 7, hvori C^-C4~alkylesteren ikke er t-butyl, kan hydrolyseres under basiske betingelser slik som lithiumhydroxyd. i methanol, som kjent innen faget, under dannelse av carboxylsyre/pivaioyl-methyletheresteren av struktur 8.

Forbindelsene av formel I hvori R, er pivaloyloxymethylester: og R^ er hydrogen, kan fremstilles i en fler-trinns -prosess.

Eksempelvis kan C^-C4~alkylesterfunksjonaliteten av den egnede C^-C4~alkylester/difenylmethylester av den egnede tricykliske forbindelse av struktur 3 hvori C^-C4~alkylesteren ikke er t-butyl, hydrolyseres under basiske betingelser slik som med lithiumhydroxyd i methanol, som kjent innen faget, under dannelse av den intermediære carboxylsyre/difenylmethyl-esterforbindelse.

Carboxylsyrefunksjonaliteten av den egnede intermediære carboxylsyre/difenylmethylesterforbindelse kan deretter omestres under dannelse av den intermediære pivaloyloxymethylester/difenylmethylesterforbindelse. Eksempelvis kan en intermediær pivaloyloxymethyl/difenylmethylesterfor-bindelse fremstilles ved behandling av den egnede intermediære carboxylsyre/difenylmethylesterforbindelse med 1 molar-ekvivalent klormethylpivalat i et egnet aprotisk løsnings-middel slik som dimethylformamid, sammen med en ikke-nukleofil base slik som cesiumcarbonat.

Difenylmethylesterfunksjonaliteten av den egnede intermediære pivaloyloxymethyl/difenylmethylesterforbindelse kan fjernes ved hydrogenering som kjent innen faget, under dannelse av pivaloyloxymethyl/carboxylsyreforbindelsen av struktur 9. Eksempelvis kan pivaloyloxymethyl/carboxylsyre-forbindelsen av struktur 9 fremstilles ved behandling av den egnede intermediære pivaloyloxymethyl/difenylmethylesterfor-bindelse med en katalytisk": mengde av palladium/carbon og et molart overskudd av ammoniumformiat. Reaktantene bringes typisk i kontakt i et egnet polart organisk løsningsmiddel slik som methanol. Reaktantene bringes typisk i kontakt ved romtemperatur i et tidsrom varierende fra 3 minutter til 24 timer. Pivaloyloxymethyl/carboxylsyreforbindelsen av struktur 9 kan gjenvinnes fra reaksjonssonen ved filtrering og fordampning av løsningsmidlet.

Forbindelsene av formel I hvori A er -NR^ kan fremstilles ved teknikker og prosedyrer vel kjent innen faget. En generell synteseprosedyre for fremstilling av disse forbindelser er angitt i Reaksjonsskjema B. I Reaksjonsskjema B er alle substituenter med mindre annet er angitt, som tidligere definert.

Reaksjonsskjema B tilveiebringer en generell synteseprosedyre for fremstilling av forbindelsene av formel I hvori A er -NR4« Aminofunksjonaliteten av den egnede aminoforbindelse av struktur 10 underkastes reduktiv alkylering med det egnede aldehyd av struktur 11 under anvendelse av natrium-cyanoborhydrid, som kjent innen faget, under dannelse av den tilsvarende N-alkylaminoforbindelse av struktur 12.

R.j- og R^-gruppene på forbindelsene av formel I hvori A er -NR4, kan manipuleres som beskrevet tidligere i Reaksjonsskjema A og Tabell 1.

Forbindelsene av formel I hvori A er -NCOR,-, kan fremstilles ved teknikker og prosedyrer vel kjent .innen faget. En generell synteseprosedyre for fremstilling av disse forbindelser er angitt i_Reaksjonsskjema C. I Reaksjonsskjema C er alle substituenter med mindre annet er angitt, som tidligere definert.

Reaksjonsskjema C tilveiebringer en generell

synteseprosedyre for fremstilling av forbindelsene av formel I hvori A er -NCOR,-. Den egnede aminof orbindelse av struktur 10 acyleres under anvendelse av det egnede acylklorid av struktur 13 eller det egnede anhydrid av struktur 14 som vel kjent

innen faget, under dannelse av den tilsvarende N-acylamino-forbindelse av struktur 15.

Gruppene R^ og R^ kan manipuleres ved teknikker og prosedyrer vel kjent innen faget, og som beskrevet tidligere i Reaksjonsskjema A og vist i Tabell 1.

Utgangsmaterialer for anvendelse i Reaksjonsskjema A - C er lett tilgjengelige for fagmannen. Eksempelvis er visse tricykliske aminoforbindelser av struktur 1 hvori X er S, beskrevet i Europa-patent 0 249 223 (16. desember 1987), og visse andre tricykliske aminoforbindelser av struktur 1 hvori A er methylen, kan fremstilles som beskrevet i Europa-patentsøknad til Flynn og Beight, søknadsnummer 34533A EP (11. juni 1987).

Tricykliske aminoforbindelser av struktur 1 hvori A er 0, kan fremstilles som beskrevet i Reaksjonsskjema D. I Reaksjonsskjema D er alle substituenter med mindre annet er angitt, som tidligere definert.

Reaksjonsskjema D tilveiebringer en generell synteseprosedyre for fremstilling av aminoforbindelser av struktur 1 hvori A er 0.

I trinn a omdannes det egnede fthalimid-blokkerte (S)-fenylalaninderivat av struktur 16 til det tilsvarende syreklorid, omsettes deretter med den egnede L-serinmethylester av struktur 17 under dannelse av den tilsvarende 1-oxo-3-fenylpropyl-L-serihmethylester av struktur 18.

Eksempelvis kan det egnede fthalimid-blokkerte (S)-fenylalaninderivat av struktur 16 omsettes med oxalylklorid i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som methylenklorid. Det resulterende syreklorid kan deretter kobles med den egnede L-serinmethylester av struktur 17 under anvendelse av N-methylmorfolin i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som dimethylformamid, under dannelse av den egnede l-oxo-3-fenylpropyl-L-serinmethylester av struktur 18.

I trinn b allyleres hydroxyfunksjonaliteten av den egnede l-oxo-3-fenylpropyl-L-serinmethylester av struktur 18 med allylimidat av struktur 19 under dannelse av den tilsvarende l-oxo-3-fenylpropyl-L-serin-0-allylmethylester av struktur 20.

Eksempelvis bringes den egnede l-oxo-3-fenylpropyl-L-serinmethylester av struktur 18 i kontakt med 2 molar-ekvivalenter av allylimidatet av struktur 19 og en molar-ekvivalent av en egnet syre slik som trifluormethansulfonsyre. Reaktantene bringes typisk i kontakt i en egnet organisk løsningsmiddelblanding slik som methylenklorid/cyklohexan. Reaktantene omrøres typisk sammen ved romtemperatur under en inert atmosfære i et tidsrom varierende fra 2 til 24 timer. l-oxo-3-fenylpropyl-L-serin-0-allylmethylesteren av struktur 20 gjenvinnes fra reaksjonssonen ved ekstraktive metoder vel kjent innen faget. Den kan renses ved silicagelkromatografi eller krystallisering.

I trinn c cykliseres den egnede l-oxo-3-fenylpropyl-L-serin-O-allylmethylester av struktur 20 under dannelse av det tilsvarende (4S)-enamin av struktur 21.

Eksempelvis bringes den egnede l-oxo-3-fenylpropyl-L-serin-O-allylmethylester av struktur 20 først i kontakt med et molart overskudd av en blanding av ozon/oxygen. Reaktantene bringes typisk i kontakt i en egnet organisk løsnings-middelblanding slik som methylenklorid/methanol. Reaktantene omrøres typisk sammen i et tidsrom varierende fra 5 minutter til 30 minutter eller inntil en blå farge vedvarer, og ved et temperaturområde fra -78 til -40° C. Reaksjonen stanses med et overskudd av methylsulfid, og den intermediære aldehydforbindelse gjenvinnes fra reaksjonssonen ved ekstraktive metoder vel kjent innen faget.

Den intermediære aldehydforbindelse bringes deretter i kontakt med trifluoreddiksyre i et egnet aprotisk løsnings-middel slik som methylenklorid, under dannelse av det tilsvarende (4S)-enamin av struktur 21.

I trinn d cykliseres det egnede (4S)-enamin av struktur 21 under dannelse av den tilsvarende (4S)-tricykliske forbindelse av struktur 22 ved en syrekatalysert Friedel-Crafts-reaksjonr Eksempelvis kan det egnede (4S)-enamin av struktur 21 omdannes til den tilsvarende (4S)-tricykliske forbindelse av struktur 22 ved behandling med en blanding av trifluormethansulfonsyre og trifluoreddiksyreanhydrid i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som methylenklorid.

I trinn d kan det være nødvendig å omestre carboxy-funksjonaliteten på grunn av betingelsene ved opparbeidelsen. Eksempelvis kan behandling av det urene produkt med bromdifenylmethan i et egnet aprotisk løsningsmiddel, slik som dimethylformamid, sammen med en ikke-nukleofil base, slik som cesiumcarbonat, anvendes for å gi den tilsvarende (4S)-difenyImethylester.

I trinn e fjernes den fthalimid-beskyttånde gruppe av den egnede (4S)-tricykliske forbindelse av struktur 22 under dannelse av den tilsvarende aminoforbindelse av struktur 23 hvori X og 0. Eksempelvis kan den fthalimid-beskyttende gruppe av den egnede (4S)-tricykliske forbindelse av struktur 22 fjernes under anvendelse av hydrazinmonohydrat i et egnet protisk løsningsmiddel slik som methanol, under dannelse av den tilsvarende (4S)-tricykliske aminoforbindélse av struktur 23.

Tricykliske aminoforbindelser av struktur 1 hvori

A er NH, kan fremstilles som beskrevet i Reaksjonsskjema E.

I Reaksjonsskjema E er alle substituenter med mindre annet

er angitt, som tidligere definert.

Reaksjonsskjema E tilveiebringer en alternativ generell synteseprosedyre for fremstilling av aminoforbindelser av struktur 1 hvori A er NH.

I trinn a omdannes det egnede fthalimid-blokkerte (S)-fenylalaninderivat av struktur 16 til det tilsvarende syreklorid, og omsettes deretter med den egnede 3-trifluor-acetylamino-3-allyl-L-2-aminopropionsyre-methylester av struktur 24,:;under dannelse av den tilsvarende l-oxo-3-fenylpropyl-N-trifluoracetyl-N-allyl-L-aminosyre-mefchylester av struktur 25 som beskrevet tidligere i Reaksjonsskjema D, trinn a.

I trinn b cykliseres den egnede l-oxo-3-fenylpropyl-N-trifluoracetyl-N-allyl-L-aminosyremethylester av struktur 25 under dannelse av dét tilsvarende enamin av struktur 26 som beskrevet tidligere i Reaksjonsskjema D, trinn c.

I trinn c cykliseres det egnede (4S)-enamin av struktur 26 under dannelse av den tilsvarende (4S)-tricykliske forbindelse av struktur 27 som beskrevet tidligere i Reaksjonsskjema D> trinn d.

I trinn d fjernes den ftalimid-beskyttende gruppe av den egnede (4S)-tricykliske forbindelse av struktur 27 under dannelse av den tilsvarende (4S)-aminoforbindelse av struktur 28 hvori X er NH, som beskrevet i Reaksjonsskjema D, trinn e.

Tricykliske aminoforbindelser av struktur 1 hvori A er methylen, kan fremstilles som beskrevet i Reaksjonsskjema F. I Reaksjonsskjema F er alle substituenter med mindre annet er angitt, som tidligere definert.

Reaksjonsskjema F tilveiebringer en generell synteseprosedyre for fremstilling av de tricykliske aminoforbindelser av struktur 1 hvori A er methylen.

I trinn a kan det egnede fhtalimid-blokkerte (S)-fenylalaninderivat av struktur 16 omdannes til det tilsvarende syreklorid, omsettes deretter med den egnede aminosyremethyl-ester av struktur 29 i en koblingsreaksjon. For eksempel kan det egnede fthalimid-blokkerte (S)-fenylalaninderivat av struktur 16 omsettes med oxalylklorid i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som methylenklorid. Det resulterende syreklorid kan deretter kobles med den egnede aminosyremethyl-ester av struktur 29 under anvendelse av N-methylmorfolin i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som dimethylformamid, under dannelse av det egnede l-oxo-3-fenylpropyl-aminosyremethyl-esterderivat av struktur 30.

I trinn b kan hydroxymethylenfunksjonaliteten av det egnede l-oxo-3-fenylpropyl-aminosyremethylesterderivat av struktur 30 oxyderes til det egnede aldehyd av struktur 31 ved oxydasjonsteknikker vel kjent innen faget. Eksempelvis kan hydroxymethylenfunksjonaliteten av det egnede l-oxo-3-fenylpropyl-aminosyremethylesterderivat av struktur 30 oxyderes til det egnede aldehyd av struktur 31 ved hjelp av en Swern-oxydasjon under anvendelse av oxalylklorid og dimethylsulfoxyd i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som methylenklorid.

I trinn c kan det egnede aldehyd av struktur 31 cykliseres til det egnede enamin av struktur 32 ved syre-katalyse. Eksempelvis kan det egnede aldehyd av struktur 31 cykliseres til det egnede enamin av struktur 32 ved behandling med trifluoreddiksyre i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som methylenklorid.

I trinn d kan det egnede enamin av struktur 32 omdannes til den tilsvarende tricykliske forbindelse av struktur 33 ved en syrekatalysert Friedel-Crafts-reaksjon. Eksempelvis kan det egnede enamin av struktur 32 omdannes

til den tilsvarende tricykliske forbindelse av struktur 33 ved behandling med en blanding av trifluormethansulfonsyre og trifluoreddiksyreanhydrid i et egnet aprotisk løsnings-middel slik som methylenklorid.

I trinn d kan det være nødvendig å omestre carboxy-funksjonaliteten på grunn av betingelsene ved opparbeidelsen. Eksempelvis .kan behandling av det urene produkt med bromdifenylmethan i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som dimethylformamid, sammen med en ikke-nukleofil base slik som cesiumcarbonat, anvendes for å gi den tilsvarende difenylmethylester.

I trinn e kan den fthalimid-beskyttende gruppe av den egnede tricykliske forbindelse av struktur 33 fjernes under anvendelse av teknikker og prosedyrer vel kjent innen faget. Eksempelvis kan den ftalimid-beskyttende gruppe av den egnede tricykliske forbindelse av struktur 33 fjernes under anvendelse av hydrazinmonohydrat i et egnet protisk løsningsmiddel slik som methanol, under dannelse av den tilsvarende aminoforbindelse av struktur 34.

Forbindelsene av formel I hvori A er en binding, kan fremstilles ved anvendelse av prosedyrer og teknikker vel kjent innen faget. Et generelt synteseskjema for fremstilling av disse forbindelser er angitt i Reaksjonsskjema G, hvori alle substituenter med mindre annet er angitt, er som tidligere definert.

Reaksjonsskjema G tilveiebringer en generell synteseprosedyre for fremstilling av forbindelser av formel I hvori A er en binding.

I trinn a kan N-(fenylmethylen)glycinmethylesteren

av struktur 35 behandles med en ekvivalent av en ikke-nukleofil base slik som lithiumdiisopropylamid, i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som tetrahydrofuran, etterfulgt av til-setning av et 4-halobuten av struktur 36., under dannelse av 2-(3-butenyl)-N-(fenylmethylen)glycinmethylester av struktur 37.

I trinn b kan N-(fenylmethylen)-funksjonaliteten av 2- (3-butenyl)--N- (f enylmethy len) glycinmethy lester av struktur 37 hydrolyseres under sure betingelser, slik som med saltsyre i et egnet aprotisk løsningsmiddel slik som ethylether, under dannelse av 2-(3-butenyl):-rglycinmethy lester av struktur 38.

I trinn c kan den egnede amidforbindelse av struktur

3 8 fremstilles ved omsetning av den egnede fthalimid-beskyt-tede (S)-fenylalaninforbindelse av struktur 16 med 2-(3-butenyl)-glycinmethylester av struktur 39 under koblingsreaksjons-betingelser, slik som med EEDQ, i et egnet aprotisk løsnings-middel slik som methylenklorid.

I trinn d kan olefinfunksjonaliteten av den egnede amidforbindelse av struktur 39 omdannes til den egnede aldehydforbindelse av struktur 40 under betingelser for oxydativ spaltning, slik som behandling med ozon i en egnet løsnings-middelblanding slik som methylenklorid og methanol.

Forbindelsene av formel I hvori A er en binding, kan fremstilles fra et egnet aldehyd av struktur 40 i en frem-gangsmåte som vist tidligere i Reaksjonsskjema F, trinn c-e og Reaksjonsskjema A.

De individuelle 3(S)- og 3(R)-estere av forbindelsene av formel I hvori A er en binding, kan fremstilles fra et egnet aldehyd av struktur 40 i en fremgangmåte som er vist tidligere i Reaksjonsskjema F, trinn c, separering av 3(S)- og 3(R)-estrene av enaminforbindelsene dannet fra cykliseringsreaksjonen beskrevet i Reaksjonsskjema F, trinn c, og fullførelse av prosessen som vist i Reaksjonsskjema F, trinn d-e og Reaksjonsskjema A.

Gruppene R. og R3 kan manipuleres ved teknikker og prosedyrer vel kjent innen faget, og som beskrevet tidligere i Reaksjonsskjema A og Tabell 1.

Utgangsmaterialer for anvendelse i de generelle synteseprosedyrer vist i Reaksjonsskjemaer D og G er lett tilgjengelige for fagmannen. Eksempelvis er Na-r (benzyloxy-carbonyl)-g-(amino)-L-alanin beskrevet i J. Am.Chem.Soc, 107(24) 7105 1985, N-{fenylmethylen)glycinmethylester er beskrevet i J.Org.Chem. 41, 3491 1976 og allyltrikloracetimidat er beskrevet i J.Chem.Soc.Perkin Trans. 1(11)

2247 1985.

De etterfølgende eksempler viser typiske synteser som beskrevet i Reaksjonsskjemaer A-G. Som anvendt her har følgende uttrykk de angitte betydninger: "g" angir gram; "mmol" angir millimol; "ml" angir milliliter; "kp" angir kokepunkt; "smp" angir smeltepunkt; "°C" angir grader Celsiu.s; "mmHg" angir millimeter kvikksølv; "ul" angir mikroliter; "yg" angir mikrogram; "nM" angir nanomolar og "uM" angir mikromolar.

Eksempel- 1

Fremstilling av [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bB]]- 7-[( l- oxo- 2- carboxymethyl- 3- fenylpropyl) amino]- l, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- octahydro- 6-oxopyrido[ 2, l- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre- MDL 101, 287 Reaksjonsskjema F, trinn a; ( S)- N-[ 2-( l, 3- dihydro- l, 3- dioxo-2H- isoindol- 2- yl)- l- oxo- 3- fenylpropyl]- 6- hydroxy-( S)- norleucin- methylester

Bland 1,82 kg (12,3 mol) fthalsyreanhydrid, 1,84 kg (11,1 mol) (S)-fenylalanin og 2,26 liter vannfritt dimethylformamid. Omrør ved 115 - 12 0° C i 2 timer under en nitrogenatmosfære. Hell over i 32,6 liter hurtig omrørt vann og avkjøl over natten ved 0° C. Filtrer, vask med 2x2 liter kaldt vann og lufttørk. Oppløs i en blanding av 8,05 liter 9A ethanol og 8,05 liter vann og oppvarm til tilbakeløps-temperaturen. FraÆiltrer, avkjøl til omgivende temperatur og kjøl over natten.ved ca. 0° C. Filtrer det krystalliserte produkt, vask med 2x2 liter kald 50:50 9A ethanol/vann og lufttørk under dannelse av 2,96 kg (90,3 %) N-fthaloyl-(S)-fenylalanin; sm.p. 177 - 179° C.

Bland 50,2 g (0,17 mol) N-fthaloyl-(S)-fenylalanin, 660 ml methylenklorid og 0,5 ml dimethylformamid under en nitrogenatmosfære. Tilsett 17,7 ml (0,2 mol) oxalylklorid i løpet av 5 minutter under omrøring. Omrør ved omgivende temperatur i 3 timer og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av N-f thaloyl- (S)-fenylalanin^-syreklorid som et fast materiale (54,3 g, 101,9 %) .

Bland 33,5 g (0,1 mol) 6-hydroxy-(S)-norleucin-methylester-hydroklorid og 201 ml dimethylformamid, avkjøl til ca. 0° C og anbring under en nitrogenatmosfære. Tilsett dråpevis 51 ml (0,46 mol) N-methylmorfolin under avkjøling slik at kartemperaturen forblir ved 0 - 5° C. Omrør ved 0 - 5° C i ytterligere 10 minutter, tilsett deretter en løs-ning av 53,5 g (0,17 mol) N-fthaloyl-(S)-fenylalanin i 270 ml methylenklorid i løpet av 30 minutter under avkjøling slik at temperaturen forblir ved 0 - 5° C. Fjern kjølebadet og omrør ved romtemperatur i 18 timer.

Fordamp methylenkloridet i vakuum og fortynn det gjenværende residuum med 800 ml ethylacetat. Ekstraher den resulterende blanding med 800 ml vann, separer det organiske lag og ekstraher med 270 ml IN saltsyre, etterfulgt av 3 x 500 ml vann. Tørk det organiske lag (MgSO^), filtrer og fordamp 1 vakuum under dannelse av urent produkt (76 g, 98 %). Oppløs det urene produkt i 223,5 ml varm toluen, avkjøl til romtemperatur og avkjøl deretter over natten ved ca. 0° C. Filtrer det krystalliserte produkt, vask med kald toluen og lufttørk under dannelse av 56,6 g (76 %) av tittelforbindelsen; sm.p. 128 - 130° C.

Reaksjonsskjema F, trinn b: 2-( 1, 3- dihydro- l, 3- dioxo- 2H-isoindol- 2- yl)- l- oxo- 3- fenylpropyl- 6- oxo-( S)- florleucin-methylester

Bland 80 ml (0,92 mol) oxalylklorid og 2 liter methylenklorid og anbring under nitrogenatmosfære. Avkjøl til under -50° C og tilsett en løsning av 65,4 ml (0,92 mol) dimethylsulfoxyd i 425 ml methylenklorid. Omrør i 15 minutter og tilsett til en løsning av 200 g (0,465 mol) (S) -N-[2-(1,3-dihydro-l , 3-dioxo-2H-isoindol-2-yl) -l-oxo-3-f enylpropylj -6-hydroxy-(S) - norleucin-methylester i 800 ml methylenklorid i løpet av 45 minutter idet kartemperaturen holdes under -50° C i 30 minutter. Tilsett 420 ml (3,01 mol) triethylamin i løpet av 30 minutter. Omrør mens blandingen oppvarmes til 0° C i løpet av 1,25 timer. Overfør reaksjonsblandingen til en 12 liters kolbe. Omrør og avkjøl mens det tilsettes en løsning av 566 g oxon (kaliumperoxymonosulfat) i 6,74 liter vann i en slik hastighet at kartemperaturen forblir under 15° C. Omrør i 5 minutter, separer det organiske lag og ekstraher det vandige lag med 1 liter methylenklorid. Kombiner de organiske faser, tørk (MgS04) og filtrer under dannelse av tittelforbindelsen som en løsning.

Reaksjonsskjema F, trinn c: [ S-( R*, R*)]- N-[ 2-( 1, 3- dihydro- l, 3-dioxo- 2H- isoindol- 2- yl)- l- oxo- 3- fenylpropyl]- l, 2, 3, 4- tetra-hydro- 2- pyridincarboxylsyre- methylester

Overfør løsningen av 2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-l-oxo-3-fenylpropyl-6-oxo-(S)-norleucin-methy lester i methylenklorid (ca. 4,5 liter) til en 12-liters kolbe og anbring under en nitrogenatmosfære. Omrør og tilsett 440 ml (5,71 mol) trifluoreddiksyre i én porsjon. Omrør den resulterende blanding ved romtemperatur i 1 time og avkjøl deretter hurtig til ca. 0° C. Tilsett en løsning av 240 g (6,0 mol) natriumhydroxyd i 3,4 liter vann i en langsom strøm til den kraftig omrørte blanding med en slik hastighet at kartemperaturen forblir ved ca. 0° C. Separer den organiske fase og ekstraher den vandige fase med 1 liter methylenklorid. Kombiner de organiske faser og tørk (MgS04).

Filtrer og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av et residuum (262 g, 137 %) .

Oppløs det ovenfor angitte residuum i 1 liter diethylether og vask med 5 x 500 ml vann. Fordamp den organiske fase i vakuum under dannelse av et residuum på

229 g. Fortynn residuet med 200 ml methylenklorid og rens ved ca. gelkromatografi (methylenklorid) under dannelse av et viskøst residuum på 225 g.

Fortynn det ovenfor angitte residuum med 250 ml diethylether og la blandingen stå ved romtemperatur i 24 timer. Filtrer det faste materiale, vask med diethylether og lufttørk under dannelse av 123,2 g; sm.p. 140 - 142,5° C. Omkrystalliser (methylenklorid (125 ml)/isopropanol (615 ml)) ved avkokning av løsningsmidlet inntil kartemperaturen når 75° C, og la den resulterende prøve stå ved romtemperatur i 24 timer. Filtrer, vask med kald isopropanol og lufttørk under dannelse av 101,5 g av tittelforbindelsen; sm.p. 144 - 146° C.

Fordamp filtratet fra de 101,5.g i vakuum under dannelse av 24 g. Omkrystalliser (isopropanol) under dannelse av ytterligere 3,5 g av tittelforbindelsen.

Fordamp filtratet fra de 123,2 g i vakuum under dannelse av 62 g olje. Rsns ved silicagelkromatografi (25 % ethylacetat/-75 % hexan) , og oppsaml i 21 - 500 ml fraksjoner. Kombiner fraksjoner 9 - 20 og fordamp i vakuum under dannelse av 35 g av en viskøs olje. Omkrystalliser tre ganger (isopropanol/5 ml/g) under dannelse av ytterligere 11,9 g av tittelforbindelsen; sm.p. 142,5 - 144,5° C. Totalt utbytte av anvendbart materiale: 116,9 g (61,3 %).

Reaks jonsskjema F, ttinn:d: [ 4S-[ 4ct, 7a ( R*), 12bB ] ]- 7-[ ( 1, 3-dihydro- 1, 3- dioxo- 2H- isoindol- 2- yl)]- l, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- octahydro- 6- oxopyrido[ 2, l- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre-difenylmethylester

Bland 500 g (3,33 mol) trifluormethansulfonsyre og 74,8 ml (0,53 mol) trifluoreddiksyreanhydrid og anbring under en nitrogenatmosfære. Omrør og tilsett en ]øs>ning av 200 g (0,48 mol) [S-(R<*>,R<*>)]-N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-l,2,3,4-tetrahydro-2-pyridincarboxylsyre-methylester i 1 liter methylenklorid under avkjøling med en slik hastighet at kartemperaturen holdes under 35° C. Omrør ved omgivende temperatur i 2 dager. Hell over i 5 liter kraftig omrørt isvann og omrør i 30 minutter. Ekstraher med 3x1 liter ethylacetat, kombiner de organiske faser og vask med 3 x 500 ml vann. Fordamp i vakuum til et residuum. Oppløs residuet i 4 liter ethylacetat og ekstraher med 1 liter 1/4 mettet kaliumhydrogencarbonat og deretter 7x1 liter 1/3 mettet kaliumhydrogencarbonat.

Kombiner de vandige ekstrakter og fortynn med 2 liter ethylacetat. Omrør den resulterende blanding og avkjøl til 5 -

10° C. Juster til pH 2 under anvendelse av 750 ml konsentrert saltsyre.

Separer den organiske fase og ekstraher den vandige fase med 3x1 liter ethylacetat. Kombiner ethylacetat-ekstraktene, vask med 3x1 liter vann og deretter med 0,8 liter mettet natriumklorid og tørk (MgSO^). Filtrer og vask med 3 x 200 ml ethylacetat. Fordamp i vakuum under dannelse av (188,3 g, 101,5 %) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bB ] ]-7-[ (1,3-dihydro-1,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)]-1,2^3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre som et farveløst skum.

Oppløs 113,9 g (0,28 mol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12b3]]-7-[(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)1-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre i 1,2 liter methylenklorid og tørk over 60 g vannfritt MgS04. Filtrer og vask med 3 x 200 ml methylenklorid. Fordamp i vakuum til et residuum. Oppløs residuet i 860 ml vannfritt dimethylformamid og anbring under en nitrogenatmosfære. Tilsett 98,9:.gj (0,3 mol) cesiumcarbonat i én porsjon. Omrør

i 45 minutter ved omgivende temperatur. Tilsett 164,8 g

(0,67 mol) bromdifenylmethan. Omrør den resulterende blan-... ding ved omgivende temperatur i 18 timer. Stans reaksjonen med 2,464 liter ethylacetat og 630 ml :vann.. Separer den organiske fase og vask med 7 x 625 ml vann, 625 ml 1/4 mettet kaliumhydrogencarbonat, 625 ml vann og 625 ml mettet natriumklorid. Tørk (MgS04), filtrer og fordamp i vakuum under dannelse av 214,4 g av en olje. Ekstraher de kombinerte vandige vaskeløsninger med 3 x 500 ml ethylacetat, vask med 4 x 300 ml vann og tørk (MgS04). Filtrer og fordamp i vakuum under dannelse av ytterligere 20,2 g av en olje.

Oppløs 234,6 g av det urene produkt i 200 ml methylenklorid og pluggfiltrer gjennom 213 g silicagel og eluer med 2 liter methylenklorid. Kok av løsningsmidlet og erstatt .med 3 liter hexan, idet kartemperaturen når et maksi-mum på 65° C. Avkjøl til omgivende temperatur, dekanter fra den utfelte olje og krystalliser (9A ethanol) under dannelse av 96,6 g (60 %) av tittelforbindelsen; sm.p. 153 - 155° C.

Reaksjonsskjema F, trinn e; [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bg]]- 7-( amino)- 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- octahydro- 6- oxopyrido[ 2, l- a] [ 2 ] - benzazepin- 4- carboxylsyre- difenylmethylester

Bland 170,9 g (0,3 mol) Us-[4a, 7a(R<*>), 12'bg]]-7- [ (1, 3-dihydro-l, 3-dioxo-2H-isoindol-2-yl) ]-1,2,3,4,6,7,8, l2;b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester, 34,4 g (0,68 mol) hydrazinmonohydrat og 3,4 liter methanol under nitrogenatmosfære. Oppvarm til tilbakeløpskokning i 5 timer. Avkjøl til omgivende temperatur r og filtrer for å fjerne fthaloylhydrazid. Fordamp filtratet i vakuum til et residuum og oppslem i 600 ml kloroform. Fjern uløselig fthaloylhydrazid ved filtrering og vask med 4 x 210 ml kloroform. Vask filtratet med 4 x 429 ml vann, tørk (MgSO^) og filtrer. Fordamp filtratet til et fast residuum av tittelforbindelsen som veier 142 g (107,7 %).

Reaks jons skjema A: [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bg ] ]- 7-[ ( l- exo-^ 2-carboxymethyl- 3- fenylpropyl) amino]- l, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- octahydro- 6- oxopyrido[ 2, l- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre

Oppløs 3,5 ml (25 mmol) diisopropylamin i 30 ml tetrahydrofuran. Tilsett n-butyllithium (14 ml av en 1,6M løsning i hexan, 22,4 mmol). Omrør i 15 minutter og avkjøl til -78° C. Tilsett dråpevis 3,5 ml (20 mmol) ethyldihydro-cinnamat og omrør i 30 minutter. Tilsett 4,0 ml (25 mmol) t-butylbromacetat og oppvarm gradvis til romtemperatur over natten. Tilsett løsningen 10 ml ammoniumklorid og fordel mellom 25 ml vann og 50 ml ethylether. Separer den organiske fase, tørk (MgS04) og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi (5 % ethylacetat/hexan) under dannelse av 3-fenyl-2-t-butylcarboxymethylpropionsyre-ethyl-ester som en blek gul olje (2,68 g, 46 %).

Oppløs 2,68 g (9,17 mmol) 3-fenyl-2-t-butyl-carboxymethylpropionsyre-ethylester i 60 ml 95 % ethanol og 30 ml vann. Behandl med 2,94 g (52 mmol) kaliumhydroxyd. Omrør ved romtemperatur i 3 timer. Tilsett 75 ml vann og ekstraher med 2 x 50 ml ethylether. Ekstraher de kombinerte etheriske faser med 75 ml vann og surgjør de kombinerte vandige faser med vandig IN vinsyre (pH 2 - 3). Ekstraher med 2 x 125 ml ethylacetat, tørk (MgS04) og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Ta residuet opp i methylenklorid og filtrer under dannelse av 3-fenyl-2-t-butylcarboxymethylpropionsyre som et blekt gult, fast materiale (1,96 g, 81 %).

Oppløs 250 mg (0,567 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bg]]-7-(amino)-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyr ido [ 2 , l-a ] £ 2.}benzazepin-4-carboxylsyre-difenylester i 6 ml methylenklorid og behandl med 226 mg (0,855 mmol) 3-fenyl-2-t-butylcarboxymethyl-propionsyre og 211 mg (0,853 mmol) EEDQ. Omrør ved romtemperatur i 19 timer og fordamp løsningsmidlet i vakuum.

Ta opp residuet i 50 .ml ethylacetat og vask med 20 ml 5 % svovelsyre og deretter med 20 ml mettet natriumhydrogencarbonat. Tørk (MgS04) og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi (2,5:1 hexan/ethylacetat til 1,1 hexan/ ethylacetat) under dannelse av en 1:1 diastereomerisk blanding av [4S-[4a, 7a(R<*>), 12b£]]-7-[(l-oxo-2-(t-butylcarboxy)-methyl-3-fenylpropyl)amino]-l,2,3,4,6,7,8-12b-octahydro-6-oxopyrido[2,1-a]C2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylester som et hvitt fast materiale (266 mg, 68 %).

Oppløs 266 mg (0,387 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12b8]]-7-[(l-oxo-2-(t-butylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8-12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester i 3 ml vannfritt methylenklorid og behandl med 0,2 ml (1,8 mmol) anisol., Avkjøl på et is-methanolbad, tilsett 0,8 ml (10 mmol) trifluoreddiksyre og omriør under oppvarming til romtemperatur i løpet av 20 timer. Fordel mellom 25 ml ethylacetat og 15 ml saltvann. Separer

den organiske fase og vask med 15 ml saltvann. Tørk (MgS04), fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromatografi under dannelse av tittelforbindelsen som en diasteromerisk blanding (150 mg).

Eksempel 2

[ 4S-[ 4a/ 7a( R*), 12bB] ]- 7-[ ( l- oxo- 2- ( pivaloyloxymethylcarboxy) - methyl- 3- fenylpropyl) amino]- 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- octahydro- 6-oxopyrido[ 2, l- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre- pivaloyloxymethylester

Oppløs -30 mg (0,14 mmol) [4S-[j4a, 7a (R*), 12bB]]-7-[(l-oxo-2-carboxymethyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8, 12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre i 1 ml methylenklorid og tørk over 60 mg vannfritt MgS04« Filtrer og vask med 3 x 20 ml methylenklorid. Fordamp i vakuum til et residuum. Oppløs residuet i 10 ml vannfri dimethylformamid og anbring under en nitrogenatmosfære. Tilsett 100 mg (0,3 mmol) cesiumcarbonat i én porsjon. Omrør i 45 minutter ved omgivende temperatur. Tilsett 42 mg (0,28 mmol) klormethylpivalat. Omrør den resulterende blanding ved omgivende temperatur i 18 timer. Stans reaksjonen med 3 ml ethylacetat og 10 ml vann. Separer den organiske fase og vask med 4 x 10 ml vann, 10 ml 1/4 mettet kaliumhydrogencarbonat, 10 ml vann og 10 ml mettet natriumklorid. Tørk (MgSO^), filtrer og fordamp i vakuum under dannelse av tittelforbindelsen.

Eksempel 3

[ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bB]]- 7-[( l- oxo- 2-( methylcarboxy) methyl- 3-fenylpropyl) amino]-!, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- octahydro- 6- oxopyrido-[ 2, l- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre

Oppløs 1,5 g (10 mmol) 3-fenylpropionsyre i 5 ml dimethylformamid og tilsett 7,5 g (50 mmol) t-butyldimethyl-silylklorid og 6,8 g (0,1 mol) imidazol. Omrør i 48 timer ved romtemperatur, hell over i ethylether og vann og separer den organiske fase. Tørk (MgS04) og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av 3-fenylpropionsyre-t-butyldimethyl-silylester.

Oppløs 0,88 ml (6,28 mmol) diisopropylamin i 7,5 ml tetrahydrofuran. Avkjøl på et isbad og tilsett dråpevis n-butyllithium (3 ml av en 1,6M løsning i hexan,. 5,75 mmol). Omrør i 15 minutter, avkjøl deretter til -78° C. Tilsett en løsning av 1,33 g (5,04 mmol) 3-fenylpropionsyre-t-butyldimethylsilylester i 5 ml tetrahydrofuran. Omrør i 45 minutter og tilsett deretter 949 mg (6,2 mmol) methylbrom-acetat. Omrør i 3 timer, tilsett 6 ml mettet ammoniumklorid og oppvarm til romtemperatur. Fordel mellom 75 ml ethylether og 10 ml vann. Tørk (Na2S04), fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromatografi under dannelse av 3-fenyl-2-methylcarboxymethylpropionsyre-b-butyldimethylsilylester.

Oppløs 3,07 g (9,13 mmol) 3-fenyl-2-methylcarboxy-methylpropionsyre-t-butyldimethylsilylester i 11 ml tetrahydrofuran og anbring under en argonatmosfære. Tilsett dråpevis tetra-n-butylammoniumfluorid (11 ml av en IM løsning i tetrahydrofuran, 11 mmol). Omrør i 1 time ved romtemperatur og fordel mellom ethylether og vann. Separer den organiske fase, vask med mettet vandig natriumklorid, tørk (MgS04), filtrer og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av 3-feny1-2-methylearboxymethylpropionsyre.

Oppløs 150 mg (0,34 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bB]]-7-(amino-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,1-a]-[2lbenzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester og 98 mg

(0,50 mmol) EDC i 5 ml tetrahydrofuran. Behandl med 89,5 mg (0,462 mmol) 3-fenyl-2-methylcarboxymethylpropionsyre. Omrør ved romtemperatur i 15 timer og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Fordel residuet mellom 35 ml ethylacetat og 6 ml IN saltsyre. Vask den organiske fase med 6 ml mettet natriumhydrogencarbonat. Tørk (Na2S04) og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi under dannelse av [4S-[4ct, 7a (R*), 12b8l1-7-[(l-oxo-2-(methylcarboxy)methyl-3- fenylpropyl)amino1-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido-[2,l-a1[2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester.

Suspender 3,22 g (5 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bBl1-7-L(l-oxo-2-(methylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)-amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-pxopyrido[2,l-a][2Ibenzazepin-4- carboxylsyre-difenylmethylester i 10 ml vannfri methanol og tilsett 0,2 - 0,3 g 10 % palladium/carbon. Tilsett 23 mmol vannfritt ammoniumformiat i en enkelt porsjon under en argonatmosfære. Omrør ved romtemperatur i 3 - 40 minutter, fjern katalysatoren ved filtrering gjennom et filterhjelpestoff og vask med 10 ml tørr methanol. Fordamp løsningsmidlet i vakuum, ekstraher i ethylacetat og tørk (Na2S04). Fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromatografi under dannelse av tittelforbindelsen.

Eksempel 4

[ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bg]]- 7-[( l- oxo- 2- methylcarboxy) methyl- 3-fenylpropyl) amino]- l, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- octahydro- 6- oxopyrido-[ 2, l- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre- pivaloyloxymethylester

Oppløs 134 mg (0,28 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bØ]]-7-[(l-oxo-2-(methylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre i 3 ml methylenklorid og tørk over 60 mg MgS04. Filtrer og vask med 3 x 20 ml methylenklorid. Fordamp i vakuum

til et residuum. Oppløs residuet i 10 ml vannfritt dimethylformamid og anbring under en nitrogenatmosfære. Tilsett 100 mg (0,3 mmol) cesiumcarbonat i én porsjon., Omrør i 45 minutter ved omgivende temperatur. Tilsett 42 mg (0,28 mmol) klormethylpivalat. Omrør-den resulterende blanding ved omgivende tempe-

ratur i 18 timer. Stans reaksjonen med 3 ml ethylacetat og 10 ml vann. Separer den organiske fase og vask med 7 x 10 ml vann, 10 ml 1/4 mettet kaliumhydrogencarbonat, 10 ml vann og 10 ml mettet natriumklorid. Tørk (MgS04), filtrer og fordamp i vakuum under dannelse av tittelforbindelsen.

Eksempel 5

[ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bB]]- 7-[( l- oxo- 2- carboxymethyl- 3- fenylpropyl) amino]-!, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- octahydro- 6- oxopyrido-[ 2, l- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre- pivaloyloxymethyl

Oppløs 71 mg (0,12 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bg]]-7-[(l-oxo-2-(methylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-pxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-carboxylsyre-pivaloyloxymethylester i 3 ml methanol og 0,50 ml (0,50 mmol) IN vandig lithiumhydroxyd. Omrør i 30 minutter under en argonatmosfære ved omgivende temperatur. Reduser i volum til 1,5 ml i vakuum, og tilsett deretter dråpevis til en hurtig omrørt løsning av 2 ml 2N saltsyre. Oppsaml det resulterende bunnfall, vask med vann.og tørk i en vakuumeksikkator.'i 1 time. Tørk ved 35° C over natten under dannelse av tittelforbindelsen.

Eksempel 6

[ 4S-[ 4a# 7ct( R*), 12b8]]- 7-[( l- oxo- 2-( pivaloyloxymethyl-carboxymethyl- carboxy) methy1- 3- fenylpropyl) amino]-1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- octahydro- 6- oxopyrido[ 2, l- a][ 2] benzazepin-4- carboxylsyre

Oppløs 77,3 mg (0,12 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12b8]]-7-[(l-oxo-2-(methylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzaz epin-4-carboxylsyre-difenylmethylester i 3 ml methanol og 0,50 ml (0,50 mmol) IN lithiumhydroxyd. Omrør i 30 minutter under en argonatmosfære ved omgivende temperatur. Reduser i volum til 1,5 ml i vakuum, og tilsett deretter dråpevis til en hurtig.; omrørt løsning av 2 ml 2N saltsyre. Oppsaml det resulterende bunnfall.;., vask med vann og tørk i en vakuumeksikkator i 1 time.. Tørk ved 35° C over natten under dannelse av [4S-[4a,7a(R<*>)-12bB]]-7-[(l-oxo-2-(carboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino] - 1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester.

Oppløs 176 mg (0,28 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>)-12bB]]-7-[(l-oxo-2-(carboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester i 3 ml methylenklorid og tørk over 60 mg vannfritt MgS04. Filtrer og vask med 3 x 20

ml methylenklorid. Fordamp i vakuum til et residuum. Oppløs residuet i 10 ml vannfritt dimethylformamid og anbring under en nitrogenatmosfære. Tilsett 100 mg (0,3 mmol) cesiumcarbonat i en porsjon. Omrør i 45 minutter ved omgivende temperatur. Tilsett 42 mg (0,28 mmol) klormethylpivalat. Omrør den resulterende blanding ved omgivende temperatur i 18 timer. Stans reaksjonen med 3 ml ethylacetat og 10 ml vann. Separer den organiske fase og vask med 7 x 10 ml vann, 10 ml 1/4 mettet kaliumhydrogencarbonat, 10 ml vann og 10 ml mettet natriumklorid. Tørk tetrahydrofuran, filtrer og fordamp i vakuum under dannelse av [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bB]]-7-[(1-oxo-2-(pivaloyloxymethylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester.

Suspender 3,72 g (5 mmol) 4S-[4a, 7a (R*) , 12b8]]-7-[(l-oxo-2-(pivaloyloxymethylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)-amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,1-2][2 ] - benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester i -.10 ml vannfri methanol og tilsett 0,2 - 0,3 g 10 % palladium/carbon.

Tilsett 23 mmol vannfritt ammoniumformiat i én.:.enkelt porsjon under en argonatmosfære. Omrør ved romtemperatur i 3-40 minutter, fjern katalysatoren ved filtrering gjennom

et filterhjelpestoff og vask med 10 ml tørr methanol. Fordamp løsningsmidlet i vakuum, ekstraher i ethylacetat og tørk (Na2S04). Fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromatografi under dannelse av tittelforbindelsen.

Eksempel 7

Fremstilling av [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bB]]- 7-[( l- oxo- 2- carboxymethyl^ 3- fenylpropyl) amino]-!, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- hexahydro- 6-oxo- lH-[ 1, 4]- oxazino[ 3, 4- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre Reaksjonsskjema D, trinn a: N-[ 2-( 1, 3- dihydro- l, 3-dioxo- 2H- isoindol- 2- yl)- l- oxo- 3- f enylpropyl]- L- serin- methy lester

Oppslem 90 g (0,3 mol) N-fthaloyl-(S)-fenylalanin i 450 ml methylenklorid og tilsett dråpevis 54 ml. (0,62 mol) oxalylklorid. Anbring.under en tørr atmosfære (CaS04~rør)

og behandl med 10 ul dimethylformamid. Omrør i 5 timer, filtrer og konsentrer i vakuum under dannelse av N-fthaloyl-(S)-fenylalanin-syreklorid som et off-hvitt amorft fast materiale.

Oppløs 56 g (0,36 mol) serinmethylesterhydroklorid

i 300 ml tetrahydrofuran og avkjøl deretter ..til 0° C og tilsett 88 ml (0,8 mol) 4-methylmorfolin. Tilsett dråpevis en løsning av N-fthaloyl-(S)-fenylalanin-syreklorid i 200 ml tetrahydrofuran. Tillatt blandingen å oppvarmes til romtemperatur og omrør i 3 timer. Filtrer og konsentrer filtratet i vakuum. Oppløs residuet i ethylacetat og separer den organiske fase. Vask med vann og deretter med mettet natriumklorid og tørk (MgS04). Fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av en olje. Rens ved silicagelkromato-.. grafi (gradient: 50 % ethylacetat/hexan til ethylacetat)

under dannelse av tittelforbindelsen (80,8 .g, 67 %), sm.p.

129 - 132° C.

Reaksjonsskjema D, trinn b: N-[ 2-( 1, 3- dihydro- l, 3- dioxo- 2H-isoindol- 2- yl)- l- oxo- 3- fenylpropyl]- 0- 2- propenyl- L- serinmethylester

Oppløs 25 g (63 mmol) N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-L-serin-méthylester i methylénklorid/cyklohexan (1:1, 600 ml). Tilsett 26 g

(128 mmol) allyltrikloracetimidat og 5 ml (56,6 mmol) trifluormethansulfonsyre. Omrør ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære i 5 timer og fortynn med methylenklorid. Vask med mettet vandig natriumhydrogencarbonat, vann, tørk (MgS04)

og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi (gradient 20 % ethylacetat/hexan til 35 % ethylacetat/hexan) under dannelse av tittelforbindelsen; sm.p. 95 - 97° C.

Reaks jonsskjema D, trinn c: [ S-( R* , R<*>)] - N-[ 2-( 1, 3- dihydro-1, 3- dioxo- 2H- isoindol- 2- yl)- l- oxo- 3- fenylpropyl]- 3, 4- dihydro-2H- 1, 4- oxazin- 3- carboxylsyre- methylester

Oppløs.13 g (29,8 mmol) N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-0-2-propehyl-L^seriri-methylester i methylenklorid/methanol (10:1, 220 ml). Avkjøl til -78° C og spyl med en blanding av ozon/oxygen i ca. 10 minutter inntil en blå farge vedvarer. Spyl med nitrogen i 10 minutter ved -78° C for å fjerne overskudd av ozon.

Behandl med 60 ml (0,82 mol) methylsulfid og tillat blandingen

å oppvarmes til romtemperatur. Omrør ved romtemperatur i 2,5 timer, fordamp løsningsmidlet i vakuum og oppløs residuet i 200 ml ethylacetat. Vask med vann, mettet natriumklorid,

tørk (MgSO^) og fordamp løsningsmidlet .i ./vakuum under dannelse av det intermediære N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-0-2-oxoethyl-L-serin-methylester som et skum (13,6 g) .

Oppløs 13,6 g N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-0-2-oxoethyl-L-serinmethylester i methylenklorid/trifluoreddiksyre (10:1/330 ml). Omrør ved romtemperatur i 2,5 timer og fordamp løsningsmidlet

i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi (35 % ethylacetat/ hexan) og omkrystalliser (ethylacetat/hexan) under dannelse avtittelforbindelsen (8,52 g, 68 %); sm.p. 70 - 72° C.

Reaksjonsskjema D, trinn d: [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bg]]- 7-[ ( 1, 3-dihydro- 1, 3- dioxo- 2H- isoindol- 2- yl)]- 3, 4, 6, 7 , 8, 12b- hexahydro-6- oxo-lH-[ 1, 4]- oxazino[ 3, 4- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre-dif enylmethylester

Oppløs 2,5 g (5,9 mmol) [S-(R<*>, R<*>)]-N-[2-(1,3-dihydro-1,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-3,4-dihydro-2H-l,4-oxazin-3-carboxylsyre-methylester i 5 ml methylenklorid og tilsett dråpevis til en på forhånd fremstilt løsning av 4/0 ml (45 mmol) trifluormethansulfonsyre og 1,0 ml (7,1 mmol) trifluoreddiksyreanhydrid. Anbring under en nitrogenatmosfære og omrør ved romtemperatur i 123 timer. Hell over i en skilletrakt inneholdende 200 g is og 200 ml ethylacetat. Separer den organiske fase, vask med 3 x 200 ml vann og 100 ml mettet vandig natriumklorid. Ekstraher den organiske fase med 4 x 40 ml 10 vekt% kaliumhydrogencarbonat og 40 ml vann. Legg 100 ml ethylacetat over de kombinerte basiske, vandige faser og avkjøl på et isbad. Tilsett dråpevis 6N saltsyre for å justere pH til 1 mens temperaturen holdes ved 5 - 10° C. Separer den organiske fase og ekstraher den vandige fase med 3 x 200 ml ethylacetat, vask med mettet natriumklorid og tørk (MgS04). Fordamp løsningsmidlet i vakuum og tørk residuet under høyt vakuum ved 56° C i 24 timer under dannelse av mellomproduktet [4S-[4a, 7a(R<*>)-12bg]]-7-[(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)]-3,4,6,7,8, 12b-hexahydro-6-oxo-lH-[1,4]-oxazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre (1,75 g, 73 %) .

Oppløs 500 mg (1,23 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12b8]]-7- [(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)]-3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-01,4]-oxazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre i 12 ml methylenklorid og behandl med 360 mg (1,86 mmol) difenyldiazomethan. Omrør i 5,5 timer og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi

(gradient 20 % ethylacetat/hexan til 35 % ethylacetat/hexan)

under dannelse av tittelforbindelsen (563 mg, 80 %); sm.p.

178 - 181° C (isopropanol).

Reaksjonsskjema D, trinn e: [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bB]]- 7-( amino)- 3, 4, 6, 7, 8, 12b- hexahydro- 6- oxo- lH-[ 1, 4]- oxazino[ 3, 4- a]-[ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre- difenylmethylester

Oppløs 296 mg (0,517 mmol) [4S-04a, 7a(R<*>), 12bB]]-7-[(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)]-3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[l,4]-oxazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester i 5 ml methanol og behandl med hydrazinmonohydrat (1,1 ml av en IM løsning i methanol, 1,1 mmol). Omrør ved romtemperatur i 44 timer, fordamp løsningsmidlet i vakuum og oppslem residuet i 10 ml methylenklorid. Filtrer og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av tittelforbindelsen (218 mg, 95 %) .

Reaksjonsskjema A: [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bB]]- 7-[( l- oxo- 2-carboxymethyl- 3- fenylpropyl) amino]- 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b-hexahydro- 6- oxo- lH-[ 1, 4]- oxazino[ 3, 4- a][ 2] benzazepin- 4-carboxylsyre

Oppløs 450 mg (1,018 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bB]]-7-(amino)-3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[1,4]-oxazino[3,4-a]-[2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester og 296 mg

(1,12 mmol) 3-fenyl-2-t-butylcarboxymethylpropionsyre i 10 ml methylenklorid. Tilsett 280 mg (1,13 mmol) EEDQ og omrør ved romtemperatur i 16 timer. Fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromatografi under dannelse av [4S,[4a, 7a(R<*>), 12b8]]-7-[(l-oxo-2-(t-butylcarboxy)methyl-3-fenyl-propylj. amino ]-1,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH- [1,4]-oxazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester.

Oppløs 266 mg (0,387 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bB]]-7-[(l-oxo-2-(t-butylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)-amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[1,4]-oxazino-[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester i 3 ml vannfritt methylenklorid og behandl med 0,2 ml (1,8 mmol) anisol. Avkjøl på et is-methanolbad og tilsett 0,8 ml (10 mmol) trifluoreddiksyre og omrør i 2,5 timer ved 0° C.

Fordel mellom 25 ml ethylacetat og 15 ml saltvann. Separer

den organiske fase og vask med 15 ml saltvann. Tørk (N^SO^)., fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromato- ■ grafi under dannelse av tittelforbindelsen som en diasterome-1-risk blanding.

Eksempel 8

Fremstilling av [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bg]]- 7-[( l- oxo- 2- carboxymethyl- 3- fenylpropyl) amino]-!, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- hexahydro- 6-oxo- lH-[ 1, 4]- thiazino[ 3, 4- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre

Oppløs 466 mg (1,018 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bB]]-7-(amino)-3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[1,4]-thiazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester og 296 mg (1,12 mmol) 3-fenyl-2-t-butylcarboxymethylpropion-syre i 10 ml methylenklorid. Tilsett 280 mg (1,13 mmol) EEDQ og omrør ved romtemperatur i 16 timer. Fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromatografi under dannelse av [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bg]]-7-[(l-oxo-2-(t-butyloxycarboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-l,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[1,4]-thiazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester.

Oppløs 550 mg (0,78 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bg]]-7-[ (l-oxo-2-(t-butylcarboxyl)methyl-3-fenylpropyl) amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[1,4]-thiaz ino[3,4-a][2]-benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester i 10 ml methylenklorid og behandl med 0,2 ml (1,8 mmol) anisol og 0,8 ml (10,4 mmol) trifluoreddiksyre. Omrør i 3,25 timer ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære. Fordamp løsnings-midlet i vakuum og rens ved silicagelkromatografi under dannelse av tittelforbindelsen.

Eksempel 9

Fremstilling av [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bg]]- 7-[( l- oxo- 2- carboxymethyl- 3- fenylpropyl) amino]- 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- hexahydro- 6-oxo- lH-[ 1, 4]- azaz ino[ 3, 4- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre

Reaksjonsskjema E, trinn a; N-[ 2-( 1, 3- dihydro- l, 3- dioxo- 2H-isoindol- 2- yl)- l- oxo- 3- fenylpropyl]-( S)- 3-[( trifluoracetyl- 2-propenyl) amino]- 2- amino- propionsyre- methylester

Oppløs 47,6 g (0,2 mol) N a-(benzyloxycarbonyl)-g-(amino)-L-alanin i 500 ml methanol og behandl med 0,5 ml konsentrert svovelsyre. Oppvarm til 60° C i 16 timer, avkjøl og reduser løsningsmidlet med 50 % i vakuum. Fortynn med 500 ml ethylether, vask med mettet natriumhydrogencarbonat og deretter med saltvann. Tørk (MgS04) og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av N OL-(benzyloxycarbonyl)-8-(amino)-L-alanin-methylester.

Oppløs 15,9 g (63 mmol) N ct-(benzyloxycarbonyl)-8-(amino)-L-alanin-methylester i methylenklorid/cyklohexan (1:1, 600 ml). Tilsett 26 g (128 mmol) allyltrikloracetimidat og 5 ml (56,6 mmol) trifluormethansulfonsyre. Omrør ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære i 5 timer og fortynn med methylenklorid. Vask med mettet vandig hydrogencarbonat, vann, tørk:(MgS04) og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi under dannelse av Na<->(benzyloxy-carbonyl) -3-(allylamino)-L-alanin-methylester.

Oppløs 663 ml (2,27 mmol) N OL-(benzyloxycarbonyl)-8-(allylamino)-L-alanin-methylester i 15 ml vannfritt tetrahydrofuran. Bedhandl med 18 3 jUl: (2,27 mmol) pyridin etterfulgt av 321 jil (2,27 mmol) trifluoreddiksyreanhydrid og omrør ved romtemperatur over natten. Fordel mellom ethylether og vann. Separer den organiske fase, tørk (MgSO^) og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi under dannelse av N ct-(benzyloxycarbonyl)-8-(trifluoracetyl-allylamino) -L-alanin-methylester.

Anbring 215 mg (0,86 mmol) bortribromid i en kolbe og avkjøl til 0° C. Tilsett forsiktig 5 ml trifluoreddiksyre under omrøring. Fordamp løsningsmidlet under dannelse av bor-tris(trifluoracetat) .

Oppløs 0,3 g (0,86 mmol) bortris(trifluoracetat) i 10 ml trifluoreddiksyre og tilsett 105 mg (0,27 mmol) Na-(benzyloxycarbonyl)-3-(trifluoracetyl-allylamino)-L-alanin-methylester. Omrør under en argonatmosfære i 1 time og fordamp deretter løsningsmidlet i vakuum ved romtemperatur. Tilsett methanol og fordamp gjentagende ganger. Rens ved silicagelkromatografi under dannelse av 3-(trifluoracetyl-allylamino) -L-alanin-methylester-hydroklorid.

Oppløs 104,8 g (0,36 mol) 3-(trifluoracetyl-allyl-amino) -L-alanin-methylester-hydroklorid i 300 ml tetrahydrofuran og avkjøl deretter til 0° C og tilsett .88 ml (0,8 mol) 4-methylmorfolin. Tilsett dråpevis en løsning av 108,7 g (0,36 mol) N-fthaloyl-(S)-fenylalanin-syreklorid i 200 ml tetrahydrofuran. Tillat blandingen å oppvarmes til romtemperatur og omrør i 3 timer. Filtrer og'konsentrer filtratet i vakuum. Oppløs residuet i ethylacetat og separer den organiske fase. Vask med vann og deretter med mettet natriumklorid og tørk (MgS04). Fordamp løsningsmidlet i vakkum under dannelse av en olje. Rens ved silicagelkromatograf i under dannelse av tittelforbindelsen.

Reaksjonsskjema E, trinn b: [ S-( R*, R*)]- N-[ 2-( 1, 3- dihydro-1, 3- dioxo- 2H- isoindol- 2- yl)- l- oxo- 3- fenylpropyl]- 3, 4- dihydro-2H- 4- trifluoracetyl- 1, 4- azazin- 3- carboxylsyre- methylester

Oppløs 15,8 g (29,8 mmolt N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl) -l-oxo-3-fenylpropyl] - (S) -[ (trif luor-acetyl-2-propenyl)amino]-2-aminopropionsyre-methylester i methylénklorid/methanol (10:1, 220 ml). Avkjøl til -78° C

og spyl med en blanding av ozon/oxygen i ca. 10 minutter inntil en blå farge vedvarer. Spyl med nitrogen i 10 minutter ved

-78° C for å fjerne overskudd av ozon. Behandl med 60 ml (0,82 mol) methylsulfid og tillatt blandingen å oppvarmes til romtemperatur. Omrør ved romtemperatur i 2,5 timer, fordamp løsningsmidlet i vakuum og oppløs residuet i 200 ml ethylacetat. Vask med vann, mettet natriumklorid, tørk

(MgS04) og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av mellomproduktet N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-N-2-oxoethyl-methylester.

Oppløs 15,9 g (29,8 mmol) N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl}-l-oxo-3-fenylpropyl]-(S)-3-[(trifluoracetyl-2-oxoethyl)amino]-2-amino-propionsyre-methylester i methylenklorid/trifluoreddiksyre (10:1/330 ml). Omrør ved romtemperatur i 2,5 timer og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi under dannelse av tittelforbindelsen.

Reaks jonsskjema E, trinn c: [ 4S-[ 4a, 7a ( R*), 1. 2bg]]- 7-[ (, lf 3- dihydro- 1, 3- dioxo- 2H- isoindol- 2- yl) ]- 3, 4, 6, 7, 8, 12b-hexahydro- 6- oxo- lH- 4- trifluoracetyl-[ 1, 4]- azazino[ 3, 4- a][ 2]-benzazepin- 4- carboxylsyre- difenylmethylester

Oppløs 3,04 g (5,9 mmol) [S-(R<*>, R<*>)]-N-[2-(1,3-dihydro-1,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-3,4-dihydro-2H-4-trifluoracetyl-1,4-azazin-3-carboxylsyre-methylester i 5 ml methylenklorid og tilsett dråpevis til en på forhånd fremstilt løsning av 4,0 ml (45 mmol) trifluormethansulfonsyre og 1,0 ml (7,1 mmol) trifluoreddiksyreanhydrid. Anbring under en nitrogenatmosfære og omrør ved romtemperatur

i 123 timer. Hell over i en: iskilletrakt inneholdende 200 g is og 200 ml ethylacetat. Separer den organiske fase, vask med 3 x 200 ml vann og 100 ml mettet vandig natriumklorid. Ekstraher den organiske fase med 4 x 40 ml 10_vekt% kaliumhydrogencarbonat og 40 ml vann. Legg 100 ml ethylacetat over de kombinerte basiske vandige faser og avkjøl på et isbad. Tilsett dråpevis 6N saltsyre for å justere pH.itil 1 mens temperaturen opprettholdes ved 5 - 10° C. Separer den organiske fase og ekstraher den vandige fase med 3 x 2 00 ml ethylacetat, vask med mettet natriumklorid og tørk (MgS04). Fordamp løsningsmidlet i vakuum og tørk residuet under høy-vakuum ved 56° .C:.;i 24 timer under dannelse av mellomproduktet [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bB]]-7-[(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)3-3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-4-trifluoracetyl-[l,4]-oxazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre.

Oppløs 616 mg (1,23 mmol) [4S-[4a, 7a (R*), 12b8]]-7-[(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)]-3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-4-trifluoracetyl-[1,4]-azazino[3,4-a][2]-benzazepin-4-carboxylsyre i 12 ml methylenklorid og behandl med 360 mg (1,86 mmol) difenyldiazomethan. Omrør i 5,5 timer og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatograf i under dannelse av tittelforbindelsen.

Reaksjonsskjema E, trinn e: [ jS-[ 4a, 7a( R*), 12bB]]- 7-( amino)- 3, 4, 6, 7, 8, 12b- hexahydro- 6- oxo- lH-[ 1, 4]- azazino[ 3, 4- a]-[ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre- difenylmethylester

Oppløs 345 mg (0,517 mmol) [4S-04a, 7a(R<*>), 12bB]]-7-[(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)]-3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-4-trifluoracetyl-[1,4]-azazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylmethylester i 5 ml methanol og behandl med hydrazinmonohydrat (1,1 ml av en IM løsning i methanol, 1,1 mmol). Omrør ved romtemperatur i 44

timer, og fordamp løsningsmidlet i vakuum og oppslem residuet i 10 ml methylenklorid. Filtrer og fordamp

løsningsmidlet i vakuum under dannelse av tittelforbindelsen.

Reaks jonsskjema A: [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bg ] ]- 7-[ ( l- oxo- 2-carboxymethyl- l- fenylpropyl) amino]-!, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- hexahydro-6- oxo- lH-[ 1, 4]- azazino[ 3, 4- a][ 2] benzazepin- 4- carboxylsyre

Oppløs 449 mg (1,018 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bB]]-7- {amino).-3 > 4 f 6 , 7, 8 ,12b-hexahydro-6-oxo-lH- [1,4]-azazino-[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-difenylester og 296 mg (1,12 mmol) 3-fenyl-2-t-butylcarboxymethylpropionsyre i 10 ml methylenklorid. Tilsett 280 mg (1,13 mmol) EEDQ .og omrør ved romtemperatur i 16 timer. Fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromatografi under dannelse av [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bB]]-7-[(l-oxo-2-(t-butylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl) amino]-l,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[1,4]-azazino[3,4-a][2]benzazapin-4-carboxylsyre-difenylmethylester.

Oppløs 536 mg (0,78 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bB]]-7-[(l-oxo-2-(t-butylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6^oxo-lH-[1,4]-azazino[3,4-a][2]-benzazapin-4-carboxylsyre-difenylmethylester i 10 ml methylenklorid og behandl med 0,2 ml (1,8 mmol) anisol og 0,8 ml (10,4 mmol) trifluoreddiksyre. Omrør i 3,25 timer ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære. Fordamp løsnings-midlet i vakuum og.:rens ved silicagelkromatograf i under dannelse av tittelforbindelsen.

Eksempel 10

Fremstilling av [ 4S-[ 4a, 7a( R*), 12bB]]- 7-[( l- oxo- 2- carboxymethyl- 3- fenylpropyl) amino]- l, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 12b- hexahydro- 6- oxo-1H-[ 1, 4]- N^- trifluoracetyl- azazino[ 3, 4- 2][ 2] benzazepin- 4-carboxylsyre

Oppløs 1,06 g (2,27 mmol) [4S-[4a, 7a(R<*>), 12b$]]-7-[(l-oxo-2-carboxymethyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[l,4]-azazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre i 15 ml vannfritt tetrahydrofuran. Behandl med 183 yl (2,27 mmol) pyridin etterfulgt av 321 yl (2,27 mmol) trifluoreddiksyreanhydrid og omrør ved romtemperatur over natten.

Fordel mellom ethylether og vann. Separer den organiske fase, tørk (MgS04) og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi under dannelse av tittelforbindelsen.

Eksempel 11

[ 6a ( R*) , llbBH6-[ ( S>- ( l- oxo- 2- carboxymethyl- 3- fenylpropyl) - amino 1- 1/ 2, 3, 5, 6, 7, llbTTheptahydro- 5- oxo- pyrrolo [ 2 , l- a ] [ 2 ] - benzazepin- 3( S)- carboxylsyre- methylester

Reaksjonsskjema G, trinn a: N-( fenylmethylen)- 2-( 3- butenyl)— glycin- methylester

Oppløs 15,4 ml (110 mmol) diisopropylamin i 250 ml tetrahydrofuran, anbring under en nitrogenatmosfære og avkjøl til -78° C. Tilsett n-butyllithium (39 ml av en 2,7M løsning i hexan, 105 mmol). Omrør i 30 minutter og tilsett dråpevis en løsning av 17,7 g (100 mmol) N-(fenylmethylen)glycin-methylester i 25 ml tetrahydrofuran. Omrør i 15 minutter og tilsett 13,5 g (100 mmol) 4-brombuten og la blandingen langsomt oppvarmes til romtemperatur. Tilsett 20 ml (100 mmol) hexamethylfosforamid.og omrør under en nitrogenatmosfære i 3 timer. Hell over i vann, ekstraher i ethylether og vask flere ganger..medisaltvann. Tørk (MgSO^) og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av tittelforbindelsen som en ravfarvet olje (25 g).

Reaksjonsskjema G, trinn b; 2-( 3- butenyl) glycin- methylester

Oppløs 25 g N-(fenylmethylen)-2-(3-butenyl)glycin-methylester i 400 ml ethylether og omrør med 150 ml IN saltsyre og 150 ml vann. Anbring under en argonatmosfære og omrør i 2 timer. Separer den vandige fase og juster til pH 9, ekstraher i kloroform, tørk og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av tittelforbindelsen som en lys olje (4,5 g).

Reaksjonsskjema G, trinn c: ( S)- N-[ 2-( 1, 3- dihydro- l, 3- dioxo-2H- isoindol- 2- yl)- l- oxo- 3- fenylpropyll- 2-( 3- butenyl)- glycinmethy lestere

Oppløs 6,0 g (20 mmol) N-fthaloyl-(S)-fenylalanin (2) og 6,0 g (24 mmol) EEDQ i 30 ml methylenklorid. Tilsett 3,0 g-(21 mmol) 2-(3-butenyl)glycin-methylester og omrør i 18 timer. Hell over i methylenklorid, vask med 2 x 100 ml 10 % saltsyre og deretter med natriumhydrogencarbonat. Tørk og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av 8,3 g gul olje. Rens ved silicagelkromatografi (25 % ethylacetat/hexan) under dannelse av en diastereomerisk blanding av tittelforbindelsene som et skum (5,2 g).

Reaks jonsskjema G, trinn d; ( S) - N-[ 2-( 1, 3- dihydro- rl, 3- dioxo-2H- isoindol- 2- yl)]-( S)- fenylalanyl]- 2-( 3- oxopropyl) glycin-methylester

Oppløs 4,2 g (10 mmol) av den diasteromeriske blanding av (S)-N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-l-oxo-3-fenylpropyl]-2-(3-butenyl)-glycin-methylestere i 100 ml methylenklorid og 10 ml absolutt methanol. Avkjøl til -78° C og behandl med ozon inntil en blåfarve vedvarer. Avgass med oxygen og tilsett 10 ml methylsulfid og 0,5 ml pyridin. Tillat blandingen langsomt å oppvarmes til romtemperatur og omrør i 18 timer. Vask med 10 % saltsyre og deretter med saltvann. Tørk og fordamp løsningsmidlet i vakuum under dannelse av en diasteromerisk blanding av tittelforbindelsen som en olje

(4,5 g).

Reaksjonsskjema F, trinn c: ( S)- N-[ 2-( 1, 3- dihydro- l, 3- dioxo-2H- isoihdol- 2- yl)]- l- oxo- 3- fenylpropyl- l, 2, 3- trihydro- 2( S)-pyrrolcarboxylsyre- methylester og ( S)- N-[ 2-( 1, 3- dihydro- l, 3-dioxo- 2H- isoindol- 2- yl)]- l- oxo- 3- fenylpropyl- 1, 2, 3- trihydro-2( R)- pyrrolcarboxylsyre- methylester

Oppløs 4,5 g av den diastereomeriske blanding av (S)-N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)]-(S)-fenyl-alanyl] -2- (3-oxopropyl).glycin-methylestere i 150 ml 1,1,1-triklorethan og behandl med 0,5 ml trifluoreddiksyre. Oppvarm til tilbakeløpskokning i 18 timer, fordamp løsningsmidlet og rens ved silicagelkromatografi (80 % ethylacetat/hexan) under dannelse av 2(S)-tittelforbindelsen (700 mg) og 2(R)-tittelforbindelsen (600 mg).

Reaksjonsskjema F, trinn d: [ 6a( R*), llbB]- 6-[( S)-( 1, 3- dihydro-1, 3- dioxo- 2H- isoindol- 2- yl)]- 1, 2. 3, 5, 6, 7, llb- heptahydro- 5- oxo-pyrrolo[ 2, l- a][ 2] benzazepin- 3( S)- carboxylsyre- methylester

Oppløs 338 mg (0,836 mmol) (S)-N-[2-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)]-l-oxo-3-fenylpropyl-l,2,3-trihydro-2(S)-pyrrolcarboxylsyre-methylester i 10 ml vannfritt methylenklorid og tilsett 5 ml trifluormethansulfonsyre.

Omrør i 3,5 timer, avkjøl på et isbad og tilsett forsiktig

25 ml .vann. Ekstraher med 75 ml ethylacetat og vask med 25 ml mettet natriumhydrogencarbonat. Tørk (Na2S04) og fordamp løsningsmidlet i vakuum. Rens ved silicagelkromatografi (1:1 ethylacetat/hexan til 2:1 ethylacetat/hexan) under dannelse av tittelforbindelsen som et hvitt skum (314 mg, 93 %).

Reaks jonsskjema F, trinn e: [ 6a( R*), llbB]- i;6-[•^ SXTamjLno]-1, 2, 3, 5, 6, 7, llb- heptahydro- 5- oxo- pyrrol[ 2, l- a][ 2] benzazepin-3( S)- carboxylsyre- methylester

Oppløs 244 mg (0,603 mmol) [6a(R<*>), 11bB]?6-[(S)-(1,3-dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)]-1,2,3,5,6,7,11b-heptahydro-5-oxo-pyrrolo[2,l-a][2]benzazepin-3(S)-carboxylsyre-methylester i 3 ml methanol og behandl med hydrazinmonohydrat (0,70 ml av en IN løsning i methanol) og omrør ved romtemperatur i 24 timer. Tilsett ytterligere hydrazinmonohydrat (0,3 ml av en IM løsning i methanol) og omrør i 4 8 timer. Filtrer gjennom ét filterhjelpestoff, fordamp løsningsmidlet

i vakuum og tilsett methylenklorid. Filtrer langsomt gjennom en blanding av ét." filterhjelpestdff og MgSO^ og fordamp deretter løsningsmidlet i vakuum under dannelse av tittelforbindelsen som en gul olje (181 mg).

Reaksjonsskjema A: [ 6a ( R*), llbB]- 6-[.( SH-( l- oxo- 2- car±ioxy:jI methyl- 3- fenylpropyl) amino]- l, 2, 3, 5, 6, 7, llb- heptahydro- 5-oxo- pyrrolo[ 2, 1- a][ 2] benzazepin- 3( S)- carboxylsyre- methylester

Oppløs 223 mg (0,845 mmol) 3-fenyl-2-t-butyl-carboxymethylpropionsyre i 6 ml methylenklorid, avkjøl på

et is-methanolbad og behandl med 0,94 ml (11 mmol) oxalylklorid. Omrør i 1,5 time, fordamp løsningsmidlet i vakuum ved 0 - 5° C. Fortynn residuet med 3 ml methylenklorid og tilsett en løsning av 155 mg (0,565 mmol) £6a(R<*>),, llb$]-6-[(S)-amino]-1,2,3,5,6,7-llb-heptahydro-5-oxo-pyrrolo[2,l-a]-[2]benzazepin-3(S)-carboxylsyre-methylester i 6 ml methylenklorid. Tilsett 68 yl (0,85 mmol) pyridin og omrør i 2

timer. Fortynn med 60 ml ethylacetat og vask med 30 ml IN

saltsyre og 2 x 30 ml mettet natriumhydrogencarbonat. Tørk (MgSO^), fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromatograf i under dannelse av [6a.(R<*>), llb8}-6-[ (S) - ( 1-ox6-2t (t-butylcarboxy).arethy 1-3-fenylpropyl).amino-}-1,3 r3 , 5 ,6 / ^^llb-heptahydro^S-oxo.-pyrrolol^:/l-a] [ 2 ]benzazepin-3 (S)-carboxylsyre-methylester.

Oppløs 85 mg (0,163 mmol) [6a(R<*>), llbB]-6-[(S)-(l-oxo-2-(t-butylocarboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,5,6,7,llb-heptahydro-5-oxo-pyrrolo[2,l-a][2]benzazepin-3(S)-carboxylsyre-methylester i 3 ml methylenklorid og behandl med 0,19 ml (1,7 mmol) anisol. Avkjøl på et is-methanolbad og tilsett 0,8 ml (10 mmol) trifluoreddiksyre og omrør i 2,5 timer ved 0°:;c. Fordel mellom 25 ml ethylacetat og 15 ml saltvann. Separer den organiske fase og vask med 15 ml saltvann. Tørk (Na2S04), fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromatografi under dannelse av tittelforbindelsen.

Eksempel 12

Fremstilling av [ 6a( R*), llbB]- 6-[( S)-( l- oxo- 2- carboxymethyl-3- fenylpropyl) amino]-!, 2, 3, 5, 6, 7, llb- heptahydro- 5- oxo- pyrrolo-[ 2, l- a][ 2] benzazepin- 3( S)- carboxylsyre

Oppløs 45 mg (0,098 mmol) [6a(R<*>), llbB]-6-[(S)-(l-oxo-2-carboxymethyl-3-fenylpropyl)amino]-l,2,3,5,6,7^11b-heptahydro-5-oxo-pyrrolo[2,l-a][2]benzazepin-3(S)-carboxylsyre-methylester i 1,5 ml methanol ved 0° C og tilsett 0,6 ml (0,6 mmol) IN vandig lithiumhydroxyd. Tilsett tetrahydrofuran for å oppnå en løsning (4 ml) og omrør i 17 timer ved romtemperatur, avkjøl på et isbad og tilsett 1 ml IN saltsyre. Fordel mellom 30 ml methylenklorid og 15 ml vann og separer den organiske fase. Tørk (Na2S04), fordamp løsningsmidlet i vakuum og rens ved silicagelkromatografi under dannelse av tittelforbindelsen.

Som anvendt her, angir uttrykket "pasient" varm-blodige dyr eller pattedyr, innbefattende mus, rotter og mennesker. En pasient har behov for behandling for å inhibere enkefalinase når pasienten lider av akutt eller kronisk smerte og har behov for en endorfin- eller enkefalin-formidlet analgesisk effekt. I tillegg har en pasient behov for behandling for å inhibere enkefalinase når pasienten lider av en sykdomstilstand karakterisert ved unormaliteter i væske, elektrolytt, blodtrykk, intraokulært trykk, renin eller aldosteronhomeo-stase, slik som hypertensjon, nyresykdommer, hyperaldosteronemia, hjertehypertrofi, glaukom og kongestiv hjertesvikt.

I disse tilfeller har pasienten behov for en ANP-formidlet diuretisk, natriuretisk, hypotensiv, hypoaldosteronemisk effekt. Inhibering av enkefalinase ville tilveiebringe en endorfin- eller enkefalin-formidlet analgesisk effekt ved inhibering av den metaboliske nedbrytning av endorfiner og enkefaliner. Inhibering av enkefalinase ville tilveiebringe en ANP-formidlet diuretisk, natriuretisk, hypotensiv, hypoaldosteronemisk effekt ved inhibering av den metaboliske nedbrytning av ANP.

I tillegg har en pasient behov for behandling for å inhibere enkefalinase når pasienten har behov for en antidepressiv effekt eller en reduksjon i strengheten av avven-nings symptomer assosiert med avslutning av opiat- eller morfinadministrering.

Identifiseringen av dé pasienter som har behov for behandling for å inhibere enkefalinase, hører til fagmannens kunnskap. En fagmann kan lett identifisere, ved anvendelse av kliniske tester, fysikalsk eksaminasjon og medisinsk/ familiehistorie, de pasienter som har behov for en endorfin-eller enkefalin-formidlet analgesisk effekt, eller hvem som har behov for en ANP-formidlet diuretisk, natriuretisk, hypotensiv eller hypoaldosteronemisk effekt.

En effektiv enkefalinaseinhiberende mengde av en forbindelse av formel ".(I) er en mengde som er effektiv til å inhibere enkefalinase, og således inhibere den metaboliske nedbrytning av de naturlig forekommende sirkulerende regulerende peptider slik som endorfin, innbefattende enkefaliner og ANP. Vellykket behandling skal også forstås å omfatte profylakse ved behandling av en pasient i slike tilfeller som for eksempel i en pre-operativ prosedyre hvor en pasient vil lide av akutt eller kronisk smerte i den nær-meste fremtid.

En effektiv enkefalinaseinhiberende mengde av en forbindelse av formel (I) er en mengde som er effektiv til å inhibere enkefalinase i en pasient med behov for dette, som resulterer for eksempel i endorfin- eller enkefalin-formidlede analgesiske effekter eller i ANP-formidlet diuretisk, natriuretisk, hypotensiv, hypoaldosteronemisk effekt.

En effektiv enkefalinaseinhiberende dose kan lett bestemmes ved anvendelse av konvensjonelle teknikker og ved observering av resultater erholdt under analoge omstendigheter. Ved bestemmelse av den effektive dose tas et utall av faktorer

i betraktning, innbefattende: arten av pasient; dens størrelse, alder og generelle helse; den spesifikke sykdom som er involvert; graden av eller innbefattelsen eller strengheten av sykdommen; responsen av den individuelle pasient; den bestemte forbindelse som administreres; administreringsmåte; biotil-gjengelighetskarakteristikaene for det administrerte preparat; det valgte doseregime og anvendelse av ledsagende medikamenter ing.

En effektiv enkefalinaseinhiberende mengde av en forbindelse av formel (I) vil generelt variere fra ca. 0,01

mg pr. kg kroppsvekt pr. dag (mg/kg/dag) til ca. 20 mg/kg/dag.

En daglig dose på fra cal 0,1 mg/kg til ca. 10 mg/kg er foretrukket .

En pasient har et behov for behandling for å inhibere ACE når pasienten lider av hyp.er tens jon, kronisk kongestiv hjertesvikt, hyperaldosteronemia eller erkjennelsessykdommer. Inhibering av ACE reduserer nivåene av angiotensin II og inhibiberer således vasopressoreffektene, de hypertensiye og hyper-aldosteronemiske effekter forårsaket derved. En effektiv ACE-inhiberende mengde av en forbindelse av formel (I) er den mengde som er effektiv til å inhibere ACE i en pasient med behov for dette, som resulterer for eksempel i en hypotensiv effekt. En effektiv ACE-inhiberende mengde og en effektiv ACE-inhiberende dose er de samme som er beskrevet ovenfor for en effektiv enkefalinase-inhiberende mengde og dose.

Ved en utførelse av behandling av en pasient kan forbindelsene av formel (I) administreres i en hvilken som helst form ejler måte som gjør forbindelsen biotilgjengelig i effektive mengder, innbefattende orale og parenterale ruter. Eksempelvis kan forbindelsen administreres oralt, subkutant, intramuskulært, intravenøst, transdermalt, intranasalt, rektalt og lignende. Oral administrering foretrekkes generelt. Fagmannen vedrørende fremstilling av formuleringer kan lett velge den riktige form og måte for administrering, avhengig av den sykdomstilstand som skal behandles, graden av sykdommen og andre relevante omstendigheter.

Forbindelsene av formel (I) kan administreres i form av farmasøytiske preparater eller medikamenter som fremstilles ved kombinasjon av forbindelsene av formel (I) med farmasøytisk akseptable bærere eller eksipienter, hvis art og mengde bestemmes av den valgte administreringsrute og standard farmasøytisk praksis.

Særlig tilveiebringer den foreliggende oppfinnelse farmasøytiske preparater omfattende en effektiv mengde av en forbindelse av formel (I) i blanding eller på annen måte i assosiasjon med én eller flere farmasøytisk akseptable bærere eller eksipienser.

De farmasøytiske preparater eller medikamenter fremstilles på kjent måte innen det farmasøytiske fag.

Bæreren eller eksipiensen kan være et fast, halvfast eller væskeformig materiale som kan tjene som en bærer eller et medium for den aktive bestanddel. Egnede bærere eller eksipienser er velkjente innen faget. Det farmasøytiske preparat kan være tilpasset for oral eller parenteral bruk

og kan administreres til pasienten i form av tabletter, kapsler, stikkpiller, løsninger, suspensjoner eller lignende.

De farmasøytiske preparater kan administreres oralt, for eksempel med et inert fortynningsmiddel eller med en spiselig bærer. De kan være innelukket i gelatinkapsler eller presset til tabletter. For oral, terapeutisk administrering kan forbindelsene av formel (I) inkorporeres med eksipienser og anvendes i form av tabletter, pastiller, kapsler, eliksiker, suspensjoner, siruper, kjeks, tyggegummi og lignende. Disse preparater- skal inneholde minst 4 % av forbindelsene av formel (I), den aktive bestanddel, men kan varieres avhengig av den bestemte form, og kan hensiktsmessig være mellom 4 % til ca. 70 % av vekten av enheten. Mengden av aktiv bestanddel tilstedeværende i preparatene er slik at en enhetsdoseform egnet for administrering vil bli erholdt. Tablettene, pillene, kapslene, pastillene og lignende kan også inneholde én eller flere av følgende adjuvanser: bindemidler slik som mikrokrystallinsk cellulose, gummitragant eller gelatin; eksipienser slik som stivelse eller lactose, oppbrytende midler slik som alginsyre, "Primogel", maisstivelse og lignende; smøremidler slik som magnesiumstearat eller "Sterotex"; glidemidler slik som kolloidalt siliciumdioxyd; og søtningsmidler slik som sukrose eller sakkarin kan tilsettes, eller smaksgivende midler slik som peppermynte, methylsalicylat eller appelsin-smak. Når doseringsenhetsformen er en kapsel, kan den i tillegg til materialer av den\;ovenfdr angitte type inneholde en væskeformig bærer slik som polyethylenglykol eller en fettolje. Andre doseringsenhetsformer kan inneholde andre forskjellige materialer som modifiserer den fysikalske form av doseringsenheten, for eksempel som belegg. Således kan tabletter eller piller belegges med sukker, skjellakk eller andre enteriske belegningsmidler. En sirup kan i tillegg til den aktive bestanddel inneholde sukrose som et;søtnings-middel og visse konserveringsmidler, farvestoffer og smaksgivende midler. Materialer anvendt ved fremstilling av disse forskjellige preparater skal være farmasøytisk rene og ikke-toksiske i de anvendte mengder.

For parenteral administrering kan forbindelsene av formel (I) inkorporeres i en løsning eller suspensjon. Disse preparater skal inneholde minst 0,1 % av en forbindelse ifølge oppfinnelsen, men kan varieres til å være mellom 0,1 og ca. 50 % av vekten derav. Mengden av aktiv bestanddel tilstedeværende i slike preparater er slik at en egnet dose vil bli erholdt.

Løsningene eller suspensjonene kan også inneholde

én eller flere av de følgende adjuvanser: sterile fortynnings-midler slik som vann for injeksjon, saltvannsløsning, blåste oljer, polyethylenglykoler, glycerol, propylenglykol eller andre syntetiske løsningsmidler; antibakterielle midler slik som benzylalkohol eller methylparaben; antioxydanter slik som ascorbinsyre eller natriumbisulfitt; chelaterende midler slik som ethylendiamintetraeddiksyre; buffere .slik som acetater, citrater eller fosfater, og midler for justering av tonisite-ten slik som natriumklorid eller dextrose. Det parenterale preparat kan være innelukket i ampuller, éngangssprøyter eller multiple doseampuller fremstilt av glass eller plast.

Det skal selvsagt forstås at forbindelsene av

formel (I) kan eksistere i et utall av isomeriske konfigurasjoner innbefattende strukturelle så vel som stereoisomerer. Det skal ennvidere forstås at den foreliggende oppfinnelse omfatter disse forbindelser av formel (I) i hver av de forskjellige strukturelle og stereoisomeriske konfigurasjoner som individuelle isomerer og som blandinger av :isomerer.

Den etterfølgende spesifikke forbindelse av formel

(I) er særlig foretrukket ved den sluttelige anvendelse av forbindelsene ifølge oppfinnelsen.: ,.MDL 101,2 87.

De etterfølgende studier illustrerer anvendeligheten av forbindelsene ifølge oppfinnelsen som enkefalinaseinhibi-torer og som ACE-inhibitorer.

Enkefalinase renses partielt fra rottenyre.

Enzymet ekstraheres fra mikrovilli-fraksjonen ved anvendelse av'Triton"X-100 i henhold til metoden ifølge Malfroy and Schwartz (JjBiol.Chem. 259, 14365-14370 (1984)) eller ved anvendelse av en proteolytisk behandling i henhold til metoden ifølge Almenoff and Orlowski (Biochem. 22, 590-599

(1983)). Enzymet renses ytterligere ved anionebyttekromato-grafi (Mono Q<M> —kolonne, Pharmacia) under anvendelse av et Pharmacia FPLC-system. Enzymaktiviteten kan måles ved de fluorometriske metoder ifølge Florentin et al. (Anal.Biochem. 141, 62-69 (1984)) eller ifølge Almenoff and Orlowski (J.Neurochemistry 42, 151-157 (1984)). Enzymet bestemmes i 50 mm HEPES-buffer (pH 7,4) i et 3,0 ml reaksjonsvolum inneholdende 12 yM av substratet dansyl-D-AlaGly(p-nitro)PheGly (Km=40yM) ved 25° C. Substratet (og inhibitor) tilsettes fra en konsentrert lager løsning i DMSO (opp til 0,1 ml DMSO sluttvolum). Enzymet i et lite volum (ca. 0,1 ug FPLC- renset protein) tilsettes for å starte reaksjonen, og graden av fluorescensøkning nedtegnes kontinuerlig under anvendélse-av et fluorometer (eksitering ved 339 nm, emisjon ved 562 nm).

Den enzymatiske aktivitet av ACE overvåkes under anvendelse av det spektrofotometriske substrat beskrevet av Holmquist et al. (Anal.Biochem. 95, 540-548 (1979)) og buffer-systemet beskrevet av Ryan (Methods of Enzymatic Analysis, 3.utg., H.U. Bergmeyer, utgiver; vol. V, Verlag Chemie, Weinheim, 1983, s. 20-34).

Resultatene av analysen av enzymatisk aktivitet som angitt:_i tabell 1 indikerer at forbindelsene ifølge oppfinnelsen er inhibitorer av enkefalinase så vel som inhibitorer av ACE.

Claims

1. Forbindelser, karakterisert ved at de har formelen hvori A er en binding, methylen eller oxygen, svovel eller NR4 eller NCOR5 hvori R4 er hydrogen og R5 er -CF3, R3 er hydrogen eller -CH2OC(0)C(CH3)3; R-l er hydrogen, C^-C^-alkyl eller -CH2OC( 0) -C( CH3 )3; og n er et helt tall fra 1 til 3.

2. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bp]]-7-[(l-oxo-2-carboxymethyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2, l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre.

3. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er [4S-[4a, 7a(R<*>), 12b(3] ] -7- [ (l-oxo-2-(pivaloyloxymethylcarboxy )methyl-3-f enyl-propyl) amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a]-[ 2 ] benzazepin-4-carboxylsyre-pivaloyloxymethylester.

4. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bp]]-7-[(l-oxo-2-(methylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxy1syre.

5. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bp]]-7-[(l-oxo-2-(methylcarboxy)methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-pivaloyloxymethylester.

6. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bp]]-7-[(l-oxo-2-carboxymethyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre-pivaloyloxymethyl.

7. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bp]]-7-[(l-oxo-2-(pivaloyloxymethylcarboxymethylcarboxy)-methyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-octahydro-6-oxopyrido[2,l-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre.

8. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bp] ]-7-[(l-oxo-2-carboxymethyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[1,4]-oxazino[3,4-a][2]-benzazepin-4-carboxylsyre.

9. Forbindelse ifølge krav 1, karakterisert ved at den er [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bp]]-7-[(l-oxo-2-carboxymethyl-3-fenylpropyl)amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[1,4]-tiazino[3,4-a][2]-benzazepin-4-carboxylsyre, [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bp]]-7-[(l-oxo-2-carboxymethyl-3-fenylpropyl )amino]-1,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-lH-[1,4]-azazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre, [4S-[4a, 7a(R<*>), 12bp]]-7-[(l-oxo-2-carboxymethyl-3-fenylpropyl )amino]-l,2,3,4,6,7,8,12b-hexahydro-6-oxo-1H-[1,4]-N4-trifluoracetyl-azazino[3,4-a][2]benzazepin-4-carboxylsyre, [6a(R<*>), llbp]-6-[(S)-(l-oxo-2-carboxymethyl-3-fenylpropyl)-amino]-1,2,3,5,6,7,llb-heptahydro-5-oxopyrrolo[2,l-a][2]benzazepin-3(S)-carboxylsyremethylester og [6a(R<*>), llbB]-6-[(S)-(l-oxo-2-carbox<y>meth<y>l-3-fen<y>l<p>ro<p>yl )-amino]-1,2,3,5,6,7,llb-heptahydro-5-oxopyrrolo[2,l-a][2]benzazepin-3(S)-carboxylsyre.

10. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter en effektiv immunoundertrykkende mengde av en forbindelse ifølge krav 1 i blanding eller på annen måte i assosiasjon med én eller flere farmasøytisk akseptable bærere eller eksipienser.