NO176052B

NO176052B - Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive nukleosidderivater

Info

Publication number: NO176052B
Application number: NO911322A
Authority: NO
Inventors: Jo Klaveness; Kjell Undheim; Frode Rise; Jostein Hatlelid
Original assignee: Nycomed As
Priority date: 1988-10-05
Filing date: 1991-04-04
Publication date: 1994-10-17
Also published as: ZA897594B; AU4333889A; ES2058481T3; DK58791A; NO911322L; FI92491C; JPH04500968A; FI911621A0; NO176052C; EP0362967A1; NZ230919A; DK58791D0; DE68918036D1; WO1990004602A1; FI92491B; NO911322D0; ATE111104T1; DE68918036T2; GB8823320D0; EP0437469A1

Description

Denne oppfinnelsen gjelder en fremgangsmåte for fremstilling av antivirus-forbindelser og mer spesifikt estere og amider av nukleosid-derivater som er aktive mot humant immun-sviktvirus (HIV), retroviruset som forårsaker sykdommen AIDS.

AIDS er en relativt ny sykdom. Den ble oppdaget i 1981 og flere tusen tilfeller av sykdommen er diagnostisert siden da. Det antas at antallet vil øke til minst flere hundre tusen i de neste år. Situasjonen er spesielt alvorlig i flere Sentral-Afrikanske land. AIDS er dødelig og rundt 40% av alle diagnostiserte tilfeller har endt med døden. Av de som hadde diagnosen AIDS for tre eller flere år siden, anslås det at 85% nå er døde.

Kliniske symptomer er vekttap, kronisk diaré, vedvarende feber og tilfeldige infeksjoner på grunn av tap av T-celler, som således forstyrrer den totale balanse i immunsystemet. Pasienten mister sin evne til å bekjempe ellers ubetydelige infeksjoner.

Flere forskjellige fremgangsmåter for å bekjempe infek-sjonen er prøvd. Blant fremgangsmåtene forsøkt, er stimulering av immunsystemet og vanlig behandling av de (sekundære) livs-truende infeksjoner. Så langt har den mest lovende fremgangsmåte vært å angripe formeringen av HIV-viruset. Flere forskjellige forbindelser som griper inn i formeringen er for-søkt, for eksempel fosfonoformiat (Foscarnet), suramin, Evans Blue, 3'-azido-3'-deoksytymidin (AZT) og 2', 3'-dideoksynukleosider.

Europeisk patentanmeldelse nr. 0196185A, for eksempel beskriver farmasøytiske blandinger som inneholder AZT, en kjent forbindelse som har vist seg løfterik ved behandling av AIDS og AIDS-relaterte tilstander. Det antas at AZT virker ved å hemme reverstranskriptase, et vitalt enzym i livssyklusen til retrovirus.

Videre arbeid er gjort på alternative reverstranskriptase-inhibitorer som kan unngå begrensningene og ulempene ved AZT, for eksempel benmargsundertrykkelse eller behovet for hyppig administrering av relativt store mengder, og blant de antydet, har vært 2', 3'-dideoksynukleosider.

Syntese og virkning av disse forbindelser er beskrevet (Mitsuya og Broder, Proe. Nati. Acad. Sei. 83, 1911 (1986)) og det ble vist at både 2'- og 3'-posisjonene må være ikke-substituert, mens 5'-hydroksygruppen må være tilstede, antagelig for å muliggjøre in vivo overføring til de tilsvarende nukleotider.

Europeisk patentanmeldelse nr. 0206497A omtaler 2', 3'-dideoksyribofuranosid-derivater av cytosin eller purinbaser som antivirus-forbindelser. Mens det er referanse til estere av disse forbindelser som mulige metabolske forløpere, er det ingen antydning at estere ville inneha noen fordelaktige egenskaper sammenlignet med de opphavelige 5'-hydroksyfor-bindelser, og ingen estere er spesifikt angitt eller deres syntese eksemplifisert. Det finnes ingen referanse til noen tilsvarende tymidinforbindelser eller noen nukleosid-derivater som har N-acylerte aminogrupper.

Vi har nå funnet at forestring eller eterdannelse av 4-eller 5'-oksygen og/eller amidering av eksocykliske eller endocykliske nitrogenatomer tilstede i purin- eller pyrimidin-ringen kan gi signifikante fordeler når det gjelder opptak, total aktivitet og innvirkningsposisjon. Vår samtidig innsendte PCT-anmeldelse PCT/GB88/00224 beskriver visse estere og amider av denne type som bærer acylgrupper i 5-posisjon eller på eksocykliske nitrogener; den foreliggende oppfinnelse utvider dette prinsipp til et videre område av beslektede forbindelser.

Således, ifølge oppfinnelsen tilveiebringes en fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser med formel (I)

(hvori Z er et hydrogenatom eller en azidogruppe,

Y<1> er et hydrogenatom eller en fysiologisk godtagbar gruppe med formel

R<1>(0)nCO(COR<2>R<3>)m-

der n er 0 eller 1, m er 0 eller 1 og

R<1> er lavere alkyl, benzyl eller tienyl, eller der n er lik 0, et hydrogenatom/

R<2> og R<3> er uavhengig hydrogenatomer eller lavere alkylgrupper; og

X er en gruppe valgt fra

(der gruppene Y<2>, Y3 og Y<4> er som definert for Y<1> og kan være like eller forskjellige fra Y<1> eller hverandre, R4 er et hydrogenatom eller en gruppe -NY<3>Y<4>, der Y<3> og Y<4> har betydningene ovenfor og R<5> er et hydrogenatom eller en lavere alkylgruppe, med det forbehold at minst én av gruppene Y<1>, Y<2>, Y<3> og Y<4> er en gruppe R1 (0) nC0 (OCR2R3) m der m er lik 1) og/eller salter derav.

Det vil være klart at noen av gruppene X, for eksempel de der Y<2> er et hydrogenatom, er tautomere av andre av gruppene X og eksisterer i likevekt med dem.

De lavere alkylgrupper R<1>, R<2>, R3 og R<5> inneholder fortrinnsvis 1 til 6 karbonatomer. Imidlertid, betegner R<2> fortrinnsvis et hydrogenatom. R<3> er fortrinnsvis et hydrogenatom eller mere foretrukket en metylgruppe, R<5> er fortrinnsvis et hydrogenatom eller en metylgruppe.

Det vil bemerkes at forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan bære mer enn én av gruppene Y<1>, Y<2>, Y<3> og Y<4>. I forbindelsene med formel (I) D og E, foretrekkes det at m i gruppen Y<4> er 0 (null). Gruppene Y<2> har fortrinnsvis formel R1. CO-, R^O.O.CR^<3> eller R^O.CO.O.CT^R<3->.

Saltene av forbindelsene med formel (I) kan være syre-addisjonssalter med organiske eller uorganiske syrer, for eksempel saltsyre eller fosforsyre eller metansulfonsyre, etandisulfonsyre, 2-naftylsulfonsyre, trimetyleddiksyre og pamosyre. Antivirus balanserende ioner så som fosfonoformiat eller suramin kan også benyttes. Organiske eller uorganiske basesalter kan dannes med sure grupper tilstede i molekylet; egnede balanserende ioner omfatter alkalimetallioner så som natrium og kaliumioner, toverdige ioner så som kalsium og sinkioner og organiske ioner så som tetra-alkylammonium og kolin eller ioner avledet fra meglumin eller etylendiamin. Salter ifølge oppfinnelsen kan dannes ved omsetninger av forbindelsene med. formel (I) med en passende syre eller base.

Forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan benyttes ved behandling og/eller profylakse av retrovirus-infeksjoner, særlig HIV-infeksjoner. De kan tilberedes på vanlig måte ved blanding av én eller flere forbindelser med formel (I) som definert ovenfor med eksipienser og/eller bærestoffer.

Det antas at forbindelser med formel (I) ikke selv er inhibitorer av revers transkriptase men overføres in vivo til 5-hydroksy-2', 3'-dideoksynukleosider. Ikke desto mindre gir substitusjon på de respektive 0- og N-atomer overraskende fordeler når det gjelder å opptak og forlenget virkning. Forbindelsene med formel (I) er mer lipofile enn de opphavelige forbindelser og dette tillater rask og virkningsfull absorpsjon fra mage-tarmkanalen; absorpsjonshastigheten kan optimaliseres ved omhyggelig valg av substituentgruppe for å gi den ønskede balanse mellom lipofile og hydrofile egenskaper. Den lipofile natur til forbindelsene med formel (I) gir også molekylene evne til å trenge gjennom cellemembranen lettere og fører til høyere intracellulære konsentrasjoner, og gir et forbedret dose/virkningsforhold. Den jevne hydro-lysering av forbindelsen sikrer en forlenget konsentrasjon av den aktive forbindelse i cellen og tillater derved lengre intervaller mellom doseringene, og unngår derved en alvorlig ulempe ved tidligere kjente forbindelser så som AZT.

Til slutt, kan forbindelsene fremstilt ifølge oppfinnelsen trenge gjennom blod-hjernebarrieren og således tillate behandling av neurologiske forstyrrelser som er observert å ha forbindelse med tilstedeværelse av neurotrope virus, for eksempel retrovirus så som HIV, og lentivirus (Yarchoan et al, The Lancet, 17. januar, 1987, side 132). Dette er en betydningsfull fordel sammenlignet med de tilsvarende ikke-substituerte forbindelser eller andre antivirus-forbindelser og er ikke referert til noen steder i tidligere arbeider, for eksempel i EP-A-0196185 eller i EP-A-0206497. Forsøk er gjort på å behandle disse neurologiske forstyrrelser med AZT, men med begrenset suksess.

Forbindelser med formel (I) fremstilles ifølge oppfinnelsen ved omsetning av en forbindelse med formel (II)

[der Y<1> og Z er som definert her tidligere og X<B> er som definert her tidligere for X bortsett fra at enhver av gruppene Y<1>, Y<2>, Y<3> og Y<4> i tillegg kan representere en beskyttende gruppe, med det forbehold at minst én av Y<1>, Y<2>, Y<3 >og Y<4> er et hydrogenatom] med et reagens som tjener til å føre inn en gruppe R^OJnCO. (OCR<2>R<3>)ra som definert ovenfor fulgt der det er nødvendig av fjerning av eventuelle beskyttende grupper og/eller uønskede substituenter som slik er innført.

Det bør bemerkes at der i utgangsmaterialet, mer enn én av Y<1>, Y<2>, Y<3> og Y<4> er hydrogen, kan multiple reaksjoner forekomme.

Der det er ønskelig å sikre at acylering eller alkylering skjer mens én eller flere grupper Y<1>, Y2, Y<3> og Y<4> forblir som hydrogenatomer, kan det være ønskelig å beskytte de siste først, for å danne en forbindelse med formel (I) hvori én eller flere av Y<1>, Y<2>, Y3 og Y<4> er beskyttende grupper, og disse fjernes etter innføring av den ønskede acyl- eller etergruppe. Slike beskyttende grupper kan faktisk være vanlige N- eller 0-beskyttende grupper inkludert gruppene R<1>OCO- som kan fjernes . selektivt i nærvær av gruppen(e) som er ment å forbli. Således kan for eksempel et N-benzyloksykarbonyl benyttes for å beskytte en eksocyklisk aminogruppe og hvis gruppen som er ment å forbli ikke er en som kan fjernes ved reduksjon, for eksempel en alkoksykarbonylgruppe med rett kjede, kan N-benz-yloksykarbonylgruppen lett fjernes selektivt med bruk av hydrogen og en edelmetall-katalysator så som palladium. Tris-ubstituerte silylgrupper kan også benyttes som beskyttende grupper, særlig for 5'-oksygenatomet og omfatter trialkylsilyl for eksempel trimetylsilyl, dimetyl-t-butylsilyl, og teksyldimetyl-silylgrupper.

Generelt, der mer enn én av Y<1>, Y<2>, Y<3> og Y<4> er hydrogen, og en blanding av forbindelser dannes, kan de individuelle komponenter lett skilles for eksempel ved kromatografering.

Der 5'-O-monoalkylering skal gjennomføres (dvs. innføring av en gruppe Y<1> der m er 1) er det særlig virksomt å danne et dianion av nukleosidet (for eksempel ved omsetni-ng med natriumhydrid) og omsette dette med én ekvivalent av alkyler-ingsmidiet. Det er selvfølgelig fremdeles mulig å benytte beskyttede former av nukleosidet, for eksempel ved acylering av et nukleofilt nitrogenatom før saltdannelse med natriumhydrid.

Egnede acyleringsmidler til bruk ved omsetningen har formelen Ac-L der L er en utgående gruppe. Når acylgruppen Ac-avledes fra en karboksylsyre, dvs. den har formel P^-CO-, så omfatter egnede acyleringsmidler syrehalogenidene og syre-anhydridene hensiktsmessig i nærvær av en base; når acylgruppen er avledet fra en karbonsyre, dvs. den har formel R<1>.O.CO-, så omfatter acyleringsmidlene halogenformiatestere og reaktive karbonsyrediestere. I slike reagenser kan halogenet for eksempel være klor eller brom. Basen til bruk ved omsetningen med syrehalogenidet eller -anhydridet kan for eksempel være en heterocyklisk base så som pyridin eller 4-dimetylaminopyridin. Den siste øker hastigheten på reaksjonen og kan med hell benyttes med pyridin. Omsetningen vil normalt gjennomføres i nærvær at et inert oppløsningsmiddel for eksempel et substituert amidoppløsningsmiddel så som dimetyl-formamid, dimetylacetamid eller et halogenert hydrokarbon så som diklormetan.

Generelt har vi funnet at ved bruk av syreanhydrider som acyleringsmidler for å føre inn en gruppe R^O, finner 0-acylering i 5'-posisjon lettere sted enn N-acylering, mens ved bruk av, syrehalogenider, dominerer N-acylering eller til og med N-diacylering. Imidlertid, kan N-acylgrupper R^O- fjernes selektivt, for eksempel ved. omsetning med en fenol så som p-metylfenol. Der multippel substituering skal gjennomføres, kan en sterkere base så som natriumhydrid være fordelaktig.

Egnede acyloksyalkyleringsmidler til bruk i oppfinnelsen vil generelt ha formel RxCO. 0. CR2R3L eller Rx0. CO. 0. CR2R3L, der L er en utgående gruppe. Således kan gruppen L for eksempel være et halogenatom så som et klor- eller bromatom eller en hydrokarbonsulfonyloksygruppe så som en tosyloksy- eller mesyloksygruppe.

Alkyleringsreaksjonen vil vanligvis gjennomføres i nærvær av en base, hensiktsmessig et uorganisk karbonat så som kaliumkarbonat eller et alkalimetallhydrid så som natriumhydrid. Baser som brukt til acylering kan også være nyttige.

Utgangsforbindelsene med formel (II) der Y<1>, Y<2>, Y<3> og Y<* >alle er hydrogenatomer, er godt beskrevet i litteraturen - se for eksempel Lin et al, J. Med. Chem. 30, 440 (1987). Utgangs-forbindelser der én eller flere av Y<1>, Y2, Y<3> og Y<4> er forskjellig fra hydrogen, kan tilberedes ved forberedende reaksjoner som beskrevet ovenfor.

Farmasøytiske blandinger inneholdende forbindelsene fremstilt ifølge denne oppfinnelsen kan tilberedes, hensiktsmessig med midler godt kjent innen faget og kan administreres ad enhver hensiktsmessig vei, for eksempel oralt, rektalt, vaginalt, intravenøst eller intramuskulært. Eksempler på egnede preparater omfatter tabletter og kapsler, vandige preparater til intravenøs injeksjon og oljebaserte preparater til intramuskulær injeksjon. Passende doseringer vil ligge innen området 0,1-100 mg per kilo kroppsvekt per 24 timers periode. Blandingene ifølge oppfinnelsen kan også inneholde andre aktive antivirusmidler for eksempel acyklovir, fos-fonofornat, suramin, Evans Blue, interferoner eller AZT.

Oppfinnelsen illustreres ved de følgende eksempler (utgangsmaterialer er enten kjente materialer eller fremstilles ifølge vår samtidig innsendte PCT-anmeldelse PCT/GB88/00224). Capsugel er et varemerke.

Eksempel 1

3-acetoksymetyl-2',3'-dideoksyuridin (formel (I)A,

Y<2> = acetoksymetyl, R<5>=Y<X>=H)

En blanding av 2', 3'-dideoksyuridin (1 mmol) og kaliumkarbonat (0,8 mmol) i tørr N,N-dimetylacetamid (20 ml) røres ved omgivelsenes temperatur i 2 timer, en oppløsning av acetoksymetylklorid (0,7 mmol) i tørr N,N-dimetylacetamid (5 ml) tilsettes dråpevis under røring, blandingen røres ved omgivelsenes temperatur i 36 timer, filtreres, filtratet dampes inn og produktet renses ved lynkromatografering på silikagel ved bruk av etylacetat:lettbensin.

Eksempel 2

3,5'-O-bis(acetoksymetyl)-2',3'-dideoksyuridin (formel (I)A, Y<x>=Y2=acetoksymetyl, R<5>=H) og

0A, 5'-O-bis(acetoksymetyl-2',3'-dioksyuridin (biprodukt)

En blanding av 2',3'-dideoksyuridin (1 mmol) og natriumhydrid (2 mmol) i tørr DMF (50 ml) røres ved omgivelsenes temperatur i 2 timer, en oppløsning av acetoksymetylklorid (2 mmol) i tørr DMF (10 ml) tilsettes dråpevis under røring, blandingen røres ved omgivelsenes temperatur i 24 timer, filtreres, filtratet dampes inn og produktblåndingen skilles ved lynkromatografering på silikagel med bruk av etylacetat:lettbensin.

Eksempel 3

NA, 5 ' -0-di (benzyloksykarbonyl) -NA-pivaloyloksymetyl-2',3'-dideoksycytidin (Formel (I)C, Y<1>=Y<4> benzyloksykarbonyl, Y<3> = pivaloyloksymetyl) og 3-pivaloyloksymetyl-N*, 5'-0-di(benzyloksykarbonyl) 4-imino-3,4-dihydro-2',3'-dideoksycytidin

(Formel- (I) D, Y<2>=pivaloyloksymetyl, Y<1> = Y<*> = benzyloksykarbonyl)

NA, 5'-0-di(benzyloksykarbonyl)-2',3'-dideoksycytidin

(1 mmol) løses opp i tørr DMF (20 ml), oppløsningen avkjøles til 0°C, natriumhydrid (1,1 mmol) tilsettes, blandingen røres ved 0°C i 1 time når bobling av hydrogen er stoppet, pivaloyl-oksymetylklorid (1,1 mmol) i tørr DMF (10 ml) tilsettes dråpevis, den resulterende blanding røres ved omgivelsenes temperatur i 36 timer, mesteparten av oppløsningsmidlet fjernes under 40°C med bruk av en oljepumpe, vann tilsettes til resten og blandingen ekstraheres med etylacetat. Den tørrede (MgSOJ etylacetatoppløsning dampes inn og resten gjennomgår lynkromatografering med bruk av lettbensin:etylacetat som vasker ut tittelforbindelsen.

Eksempel 4

N<4->pivaloyloksymetyl-2',3'-dideoksycytidin

(Formel (I)C, Y^Y^H, Y<3>=pivaloyloksymetyl)

N*, 5' -O-di (benzyloksykarbonyl) -N*-pivaloyloksymetyl-2 ' , 3 ' - dideoksycytidin (0,2 mmol) tilsettes til en suspensjon av 5% palladium på karbon (25 mg) i etanol (25 ml), luften fjernes under vakuum og blandingen hydrogeneres ved atmos-færisk trykk inntil hydrogenolysen er fullstendig (ca. 3 timer). Blandingen filtreres deretter, filtratet dampes inn ved redusert trykk og produktet renses ved filtrering (kromatografering) på nøytral silikagel med bruk av kloroform: etanol.

Eksempel 5

3- pivaloyloksvmetvl- 3'- deoksytymidin

1) 3'-deoksytymidin (0,0449 g, 0,198 mmol) og imidazol (0,0328 g, 0,482 mmol) ble løst opp i DMF (0,5 ml)_. Teksyldi-metylsilylklorid (0,047 ml, 0,238 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 19 timer. Oppløsningsmidlet ble fjernet under redusert trykk og kloroform (15 ml) ble tilsatt til resten, vasket med vann (5 ml x 2) , tørret (MgSOJ og dampet inn. Resten ble kromatografert på silisiumoksyd med bruk av etylacetat-heksan (7:3); utbytte 0,0578 g (79%) av

5'- 0- teksyldimetyl- silyl- 3'- deoksytymidin som et hvitt pulver. Smp. 109-110°C (ikke korrigert).

<X>H NMR (CDC13, 300 MHZ) 6: 0,14 (s, 6H), 0,86-0,90 (m, 12H), 1,64 (m, 1H), 1,91 (s, 3H), 1,93-2,02 (m, 3H), 2,26-2,41 (m, 1H), 3,66-3,96 (ABX, 2H), 4,08-4,17 (m, 1H), 6,05 (dd, 1H) , 7,51 (d, 1H), 8,50 (b, 1H).

<13>C NMR (CDCI3) 8: -3,51, -3,43, 12,47, 18,31, 18,41, 20,12, 20,32, 25,32, 25,38, 32,30, 33,91, 64,24, 80,76, 85,68, 110,18, 135,53, 150,14, 163,59.

ii) 5'-O-teksyldimetylsilyl-3'-deoksytymidin (0,02 54 g, 0,0689 mmol) og kaliumkarbonat (0,0111 g, 0,0803 mmol) ble suspendert i DMF (1 ml) og rørt i 1,5 timer ved romtemperatur. Blandingen ble avkjølt til 0°C og klormetylpivalat (0,013 ml, - 0,0895 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 18 timer før oppløsningsmidlet ble dampet bort under redusert trykk. Resten ble kromatografert på silisiumoksyd med bruk av etylacetat-heksan (35:65); utbytte 0,031 g (93%) 3- pivalovloksymetyl- 5'- O- teksvldimetvlsilyl- 3'- deoksy-t<y>midin som et glassaktig materiale.

<X>H NMR (CDCI3, 300 MHZ) <S:0,14 (s, 6H) , 0,87-0,90 (m, 12H) , 1,17 (s, 9H) , 1,56-1,70 (m, 1H), 1,94 (d, 3H), 1,95-2,02 (m, 3H), 2,30-2,44 (m, 1H), 3,67-3,97 (ABX, 2H), 4,11-4,17 (m, 1H), 5,90-5,98 (AB, 2H), 6,06 (dd, 1H), 7,54 (d, 1H).

<13>C NMR (CDCI3) 5: -3,49, -3,42, 13,09, 18,31, 20,12, 20,33, 25,34, 26,92, 32,37, 33,91, 38,71, 64,22, 64,,90, 80,92, 86,35, 109,37, 134,50, 150,23, 162,58, 177,43.

iii) 3-pivaloyloksymetyl-5'-O-teksyldimetylsilyl-3'-deoksytymidin (0,029 g, 0,061 mmol) ble løst opp i THF (0,5 ml) og en 0,25M oppløsning av tetrabutylammoniumfluorid i THF

(0,5 ml) ble tilsatt. Blandingen ble rørt i 30 minutter før oppløsningsmidlet ble dampet bort. Resten ble løst opp i kloroform (7 ml) og vasket med vann (1 ml). Den organiske fase ble tørret (MgSOJ , dampet inn og resten renset ved preparativ

TLC. Platene ble vasket ut med dietyleter (3x) og produktet ekstrahert fra hovedbåndet med kloroform-metanol (9:1); utbytte 0,0170 g (83%) av tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff. Smp. 64-66°C (ikke korrigert).

<X>H NMR (CDC13, 300 MHz) S: 1,17 (s, 9H), 1,93 (d, 3H), 1,95-2.15 (m, 4H), 2,32-2,48 (m, 1H), 3,72-4,03 (ABX, 2H), 4,14-4,21 (m, 1H), 5,90-5,97 (AB, 2H), 6,10 (dd, 1H), 7,60 (d, 1H). <13>C NMR (CDC13) 6: 13,12, 24,91, 26,90, 32,22, 38,71, 63,42, 64,89, 81,10, 86,73, 109,62, 135,04, 150,26, 162,51, 177,47.

Eksempel 6

3. 5'- O- di( pivaloyloksymetyl)- 3'- deoksytymidin

3'-deoksytymidin (0,050 g, 0,221 mmol) ble løst opp i DMF (1 ml) og avkjølt til 0°C. Natriumhydrid (0,0147 g, 80% i olje, 0,49 mmol) ble tilsatt og blandingen rørt ved 0°C i 1 time før klormetylpivalat ble tilsatt. Blandingen ble rørt ved 0°C i 1 time og deretter ved romtemperatur i 20 timer. TLC indikerte delvis overføring til det dialkylerte produkt og blandingen ble avkjølt til 0°C og natriumhydrid (0,0027 g, 80% i olje, 0,090 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt ved 0<?>C i 1 time før klormetylpivalat (0,013 ml, 0,090 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt i 1 time ved 0°C og ved romtemperatur i 19 timer før oppløsningsmidlet ble dampet bort under redusert trykk. Kloroform (10 ml) ble tilsatt til resten og blandingen vasket med mettet natriumklorid (5 ml x 2) og vann (5 ml x 2) . Kloroformfasen ble tørret (MgS0A) , dampet inn og resten gjennomgikk preparativ TLC. Platene ble eluert med dietyleter-pentan-metanol (50:50:0,1) (7x) og produktet ekstrahert fra hovedbåndet med kloroform-metanol; utbytte 0,042 g (42%) som en farveløs olje.

<X>H NMR (CDCI3, 300 MHz) 6: 1,19 (s, 9H), 1,24 (s, 9H), 1,95-2,10 (m, 6H), 2,30-2,50 (m, 1H), 3,74-4,06 (ABX, 2H), 4,20-4,30 (m, 1H), 5,33-5,40 (AB, 2H), 5,92-5,99 (AB, 2H), 6,10-6.16 (m, 1H) , 7,66 (d, 1H) .

<13>C NMR (CDCI3) 6: 13,04, 25, 13, 26,91, 32,51, 38,70, 38,84, 64,87, 70,16, 79,42, 86,40, 88,49, 109,44, 134,83, 150,24, 162,53, 177,39, 177,75.

Eksempel 7

5 ' - O- pivaloyloksymetyl- 3'- deoksytymidin

En blanding av 3'-deoksytymidin (0,0103 g, 0,046 mmol) og natriumhydrid (0,0029 g, 80% i olje, 0,097 mmol) i DMF (0,5 - ml) ble rørt ved 0°C i 1 time. Klormetylpivalat (0,007 0 ml, 0,048 mmol) ble tilsatt og blandingen rørt ved 0°C i 3 timer. Ammoniumklorid IM (3 ml) ble tilsatt og blandingen ekstrahert med dietyleter (3 ml). Eterekstraktet ble vasket med mettet natriumklorid (3 ml x 2) , tørret (MgS0A) og dampet inn. Resten ble kromatografert på silisiumoksyd med bruk av kloroform-metanol; utbytte 0,0068 g (43%) som et glassaktig materiale. <X>H NMR (CDC13, 300 MHz) 6: 1,23 (s, 9H), 1,90-2,18 (m, 6H), 2,30-2,50 (m, 1H), 3,73-4,05 (ABX, 2H), 4,18-4,28 (m, 1H), 5,33-5,39 (AB, 2H), 6,08-6,14 (m, 1H), 7,62 (d, 1H), 8,44 (b, 1H) .

<13>C NMR (CDCI3) <S: 12,59, 25,29, 27,03, 32,58, 38,97, 70,33, 79,40, 85,83, 88,60, 110,37, 136,01, 150,26, 163,69, 177,92.

Eksempel 8 5'- O- pivaloyloksvmetyl- 3'- azido- 3'- deoksytymidin .

En blanding av 3'-azido-3'-deoksytymidin (0,0335 g, 0,125 mmol) og natriumhydrid (0,0079 g, 80% i olje,

0,2 63 mmol) i DMF (1,5 ml) ble rørt ved 0°C i 1,5 timer. Klormetylpivalat (0,020 ml, 0,138 mmol) ble tilsatt og blandingen rørt ved 0°C i 1 time. Eddiksyre (0,0072 ml, 0,126 mmol) ble tilsatt og oppløsningsmidlet dampet bort. Resten ble kromatografert på silisiumoksyd med bruk av kloroform-metanol; utbytte 0,031 g (63%) som en olje.

<X>H NMR (CDCI3, 300 MHz) 6: 1,22 (s, 9H), 1,94 (d, 3H), 2,20-2,50 (m, 2H), 3,76-4,02 (m, 3H), 4,22-4,32 (m, 1H), 5,34 (s, 2H) , 6,23 (t, 1H) , 7,44 (d, 1H) , 9,35 (b, 1H) .

<13>C NMR (CDCI3) 6: 12,51, 26,91, 37,71, 38,90, 59,91, 68,49, 82,58, 84,55, 88,27, 111,32, 135,39, 150,38, 163,88, 177,88.

Eksempel 9

NA- benzyloksvkarbonvl- 5'- O- pivaloyloksymetvl- 2'. 3 '- dideoksy-c<y>tidin

En blanding av N<4->benzyloksykarbonyl-2',3'-dideoksycytidin (0,022 g, 0,0637 mmol) og natriumhydrid (0,0044 g, 80% i olje, 0,147 mmol) i DMF (1,5 ml) ble rørt ved 0°C i 1,5 timer. Blandingen ble avkjølt til -50°C og klormetylpivalat

(0,0102 ml, 0,0702 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt ved -50°C i 3,5 timer. Mettet ammoniumklorid (1 ml) ble tilsatt og oppløsningsmidlene dampet bort. Resten ble kromatografert på silisiumoksyd med bruk av kloroform-metanol; utbytte: 0,0145 g (50%) som en olje.

<X>H NMR (CDC13, 300 MHZ) 6: 1,24 (s, 9H), 1,80-2,00 (m, 2H) , 2,10-2,25 (m, 1H) , 2,42-2,60 (m, 1H) , 3,73-4,12 (ABX, 2H) , 4,22-4,34 (m, 1H), 5,23 (s, 2H), 5,27-5,43 (AB, 2H), 6,07 (dd, 1H), 7,15-7,30 (b, 1H) , 7,30-7,48 (m, 6H), 8,32 (d, 1H).

Eksempel 10

2' 3'- Dideoksv- 5'- O- pivalovloksvmetvlcvtidin

N<4->Benzyloksykarbonyl-2',3'-dideoksy-5'-O-pivaloyloksy-metylcytidin (52 5 mg, 1,144 mmol) ble oppløst i etanol (50 ml) . Palladium på trekull (162 mg, 10%) ble tilsatt, og hydro-genolyse ble utført ved omgivelsestemperatur ved 1 atm i 10 minutter. Produktet ble renset ved "flash"-kromatografi (silika), under anvendelse av kloroform/etanol (9:1) som elueringsmiddel. Dette ga 313 mg (84%) av en hvit, fast forbindelse.

Smeltepunkt 172 °C

Elementæranalyse: C: 52,94 (55,37%), H:5,55 (7,13%).

^■H-NMR (200 MHZ, CDCI3) 5:1,23 (s, 9H, 3 x CH3), 1,90 - 2,60 (m, 4H, H-3', H-2'), 3,68 - 4,10 (ABX, 2H, H-5'), 4,10-4,35 (m, 1H, H-4'), 5,20, 5,45 (dd, J = 6Hz, 43 Hz, 2H, CH2), 5,72 (d, J = 7 Hz, 1H, H-5) , 6,08 (m, 1H, H-l')., 7,91 (d, J = 7 Hz, 1H, H-6) .

<13>C-NMR (50 MHZ, CDCI3) 5:25,58, 27,46, 33,55, 39,36, 70,82, 80,04, 87,32, 89,10, 94,09, 141,10, 156,64, 166,61, 178,36.

Eksempel 11

3- pivaloyloksymetyl- 5'- O- propionyl- 3'- azido- 3'- deoksytymidin

3'-azido-3'-deoksytymidin (0,0504 g, 0,189 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (0,0023 g, 0,019 mmol) ble løst opp i pyridin (2 ml) og avkjølt til 0°C. Propionanhydrid (0,0265 ml, 0,206 mmol) ble tilsatt og blandingen rørt ved romtemperatur under nitrogen i 24 timer før oppløsningsmidlet ble dampet bort under redusert trykk. Toluen ble tilsatt og dampet bort under redusert trykk og det resterende kromatografert på silisiumoksyd med bruk av kloroform og kloroform-metanol (98,2); utbytte 0,060 g, (98%) 5'- O- propionvl- 3'- azido- 3'-deoksytymidin som en farveløs olje.

5'-0-propionyl-3'-azido-3'-deoksytymidin (0,042 g,

0,130 mmol) og kaliumkarbonat (0,0198 g, 0,143 mmol) ble suspendert i DMF (1 ml) og rørt ved romtemperatur under nitrogen i 1,5 timer. Blandingen ble avkjølt til 0°C og klormetylpivalat (0,0226 ml, 0,156 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt ved 0°C i 30 minutter og deretter ved romtemperatur i 19 timer før oppløsningsmidlet ble dampet bort under redusert trykk. Resten ble kromatografert på silisiumoksyd med bruk av etylacetat-heksan (4:6); utbytte 0,045 g (81%) som en farveløs olje.

XH NMR (CDC13, 300 MHz) <S: 1,19 (s) og 1,19 (t) [12H], 1,96 (d, 3H), 2,29-2,57 (m) og 2,41 (q) [4H], 4,06-4,15 (m, 1H), 4,16-4,25 (m, 1H), 4,31-4,42 (ABX, 2H), 5,91-5,98 (AB, 2H), 6,15 (t, 1H), 7,27 (d, H-6).

<13>C NMR (CDC13)5: 9,03, 13,27, 27,02, 27,43, 37,73, 38,84, 60,54, 63,19, 64,95, 81,91, 86,10, 110,49, 134,10, 150,04, 162,27, 173,72, 177,48.

Eksempel 12

3- a-( etyloksykarbonyloksy) etyl- 5'- O- propionvl- 3'- deoksytymidin

3'-deoksytymidin (0,0352 g, 0,156 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (0,0020 g, 0,016 mmol) ble løst opp i pyridin (3 ml) og avkjølt til 0°C. Propionanhydrid (0,0241 ml,

0,187 mmol) ble tilsatt og blandingen ble rørt ved romtemperatur under nitrogen i 24 timer før oppløsningsmidlet ble

dampet bort under redusert trykk. Toluen ble tilsatt og dampet bort under redusert trykk og det gjenværende ble kromato-graf ert på silisiumoksyd med bruk av kloroform og kloroform-metanol (98,2); utbytte 0,0435 g (99%) 5'- O- propionvl- 3'-deoksytymidin som et halvveis fast stoff.

5'-O-propionyl-3'-deoksytymidin (0,063 g, 0,22 3 mmol) og kaliumkarbonat (0,0339 g, 0,245 mmol) ble suspendert i DMF

(2 ml) og rørt ved romtemperatur under nitrogen i 1,5 timer. Blandingen ble avkjølt til 0°C og 1-kloretyletylkarbonat

(0,039 ml, 0,291 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt ved 0°C i 3 0 minutter og ved romtemperatur i 2 timer. Temperaturen ble øket til 60°C og blandingen rørt i 19,5 timer før oppløsnings-midlet ble dampet bort under redusert trykk. Resten ble kromatografert på silisiumoksyd med bruk av etylacetat-heksan (50:50) (Rf 0,17); utbytte 0,0477 g (54%) som en olje.

<X>H NMR (CDC13, 300 MHz) 6: 1,18 (t, 3H) , 1,29 (t, 3H) , 1,70-1,87 (m) og 1,86 (d) [4H], 1,94 (d, 3H), 1,97-2,14 (m, 2H), 2,35-2,52 (m) og 2,40 (q) [3H] , 4,12-4,25 (m, 2H) 4,26-4,40 (m, 3H), 6,07-6,12 (m, 1H), 7,20-7,28 (m, 1H), 7,36 (d, 1H). <13>C NMR (CDCI3) 8: 9,09, 13,23 og 13,36*, 14,15, 17,86 og 17,94*, 25,81 og 25,84*, 27,48, 32,25 og 32,35*, 64,34, 64,79, 77,49, 78,46 og 78,56*, 86,52 og 86,58<*>, 109,81 og 109,84<*>, 133,92 og 133,97<*>, 149,82, 153,81 og 153,85*, 162,57 og 162,59*, 174,06.

<*> Forskjellige forflytninger for de to enantiomere (på grunn a<y> -CH(CH3)-N) observeres.

Eksempel 13

5'- O- propionvl- 3- g-( tienyloksykarbonyloksy) etyl-3'- az ido- 3'- deoksytymidin

5'-O-propionyl-3'-azido-3'-deoksytymidin (0,051 g,

0,158 mmol) og kaliumkarbonat (0,024 g, 0,174 mmol) ble suspendert i DMF og rørt ved romtemperatur under nitrogen i 1 time. Blandingen ble avkjølt til 0°C og 1-kloretyl-tienyl-karbonat (0,046 g, 0,208 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 17 timer og deretter ved 55°C i 9 timer. Oppløsningsmidlet ble dampet bort under redusert trykk og resten kromatografert på silisiumoksyd med bruk av kloroform og kloroform-metanol (99:1). Produktet som inneholder fraksjoner Rf 0,3 (kloroform-metanol (99:1) besto av to diastereoisomere komponenter, Rf 0,18 og Rf 0,22 (etylacetat-heksan (4:1); utbytte 0,050 g.

Eksempel 14

N6- benzyloksykarbonvl- 5'- O- pivalovloksymetvl- 2'. 3'-dideoksvadenosin

2',3'-dideoksyadenosin (0,1 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (0,1 mmol) ble løst opp i pyridin og blandingen avkjølt til 0°C. Benzylklorformiat (0,2 mmol) ble tilsatt og den resulterende blanding rørt ved romtemperatur under nitrogen i 24 timer. 4-dimetylaminopyridin (0,1 mmol) ble tilsatt og blandingen avkjølt til 0°C. Benzylklorformiat

(0,2 mmol) ble tilsatt og blandingen rørt ved romtemperatur i 24 timer. Tilsetning av 4-dimetylaminopyridin og benzylklorformiat ble gjentatt tre ganger med 24 timers -røring mellom hver tilsetning før oppløsningsmidlet ble dampet bort under redusert trykk. Resten ble kromatografert på silisiumoksyd med bruk av kloroform, kloroform-metanol (99:1) og kloroform-metanol (9:1) og ga N<6->benzyloksykarbonyl-2',3'-dideoksyadenosin.

N<6->benzyloksykarbonyl-2',3'-dideoksyadenosin (0,1 mmol) og natriumhydrid (8 0% i olje, 0,21 mmol) i DMF (2 ml) ble rørt ved 0°C i 1 time. Blandingen ble avkjølt til -50°C og klormetylpivalat (0,1 mmol) tilsatt. Blandingen ble rørt i 4 timer før eddiksyre (0,1 mmol) ble tilsatt. Oppløsningsmidlet ble dampet bort under redusert trykk og resten kromatografert på silisiumoksyd med bruk av kloroform og kloroform-metanol (99:1), dette ga tittelforbindelsen.

Farmasøytisk Eksempel A

Tilberedning av kapsler til oralt bruk

Pulveret blandes og fylles i harde gelatinkapsler (Capsugel Size 00).

Farmasøytisk Eksempel B

Tilberedning av en salve

Hvit myk paraffin smeltes og blandes inn i den flytende paraffin og røres inntil blandingen er kald. Aktiv forbindelse gnis med en porsjon av basen og gradvis blandes resten av basen inn. Salven fylles i lakkerte aluminiumtuber.(20 g) og forsegles. Salven inneholder 0,1% aktiv forbindelse.

Farmasøytisk Eksempel C

Suspensjon til parenteral administrering

Polysorbat 80, sorbitol og benzylalkohol løses opp i

500 ml destillert vann. Aktiv forbindelse siktes gjennom en 0,15 mm sikt og dispergeres i oppløsningen under kraftig røring. pH justeres til 4,5 ved dråpevis tilsetning av IM HC1. Vann tilsettes til 1000 ml, suspensjonen ble fylt i et 1 ml

rør. Rørene steriliseres ved ^-stråling. Hvert rør inneholder 2 00 mg aktiv forbindelse.

Farmasøytisk Eksempel D

Tilberedning av tabletter

Aktiv forbindelse og laktose siktes gjennom en 0,15 mm sikt og blandes sammen i 10 minutter. Det blandede pulver fuktes med en vandig oppløsning av polyvinylpyrrolidon. Massen granuleres, og det tørrede (40°C) granulat blandes med stivelse, talkumpulver og magnesiumstearat. Granulatet presses til tabletter. Tablettdiameteren er 11 mm, tablettyekten er 350 mg og hver tablett inneholder 200 mg aktiv forbindelse.

Farmasøytisk Eksempel E

Tilberedning av en suspensjon til rektal administrering

Metyl p-hydroksybenzoat (70 mg) og propyl p-hydroksybenzoat (15 mg) løses opp i vann (100 ml) ved 9 0°C. Etter avkjøling til 30°C, tilsettes metylcellulose (2 g) og blandingen ristes i 3 timer. 1 gram aktiv forbindelse siktes gjennom en 0,15 mm sikt, og dispergeres i oppløsningen under kraftig røring. Suspensjonen fylles i et 100 ml rør. Suspensjonen inneholder 10 mg aktiv forbindelse/ml.

Karboksymetylcellulose, sorbitol og natriumbenzoat løses opp i vann under røring i 2 timer. En oppløsning av essensene i etanol tilsettes. Aktiv forbindelse siktes gjennom en 0,15 mm sikt og dispergeres i oppløsningen under kraftig røring. Suspensjonen (10 g) fylles i et 20 ml rør. Hvert rør inneholder 2 00 mg aktiv forbindelse.

Farmasøytisk Eksempel G Tilberednin<g> av inieksionsoppløsning 10 mg aktiv forbindelse løses opp i 10 ml 0,9% natriumklorid. pH justeres til 4,5 med IN HC1. Oppløsningen filtreres sterilt og fylles i et 10 ml rør. Oppløsningen inneholder 1 mg aktiv forbindelse/ml.

Farmasøytisk Eksempel H

Tilberedning av tabletter ( depot- preparat)

Aktiv forbindelse, hydroksypropylmetylcellulose og laktose blandes sammen i 2 0 minutter og granuleres med en oppløsning av povidon. Magnesiumstearat tilsettes og blandingen presses til tabletter. Tablettdiameteren er 13 mm, tablettvekten er 700 mg og hver tablett inneholder 500 mg aktiv forbindelse.

Claims

Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk

aktive forbindelser med formel (I)

der Z er et hydrogenatom eller en azidogruppe, Y<1> er et hydrogenatom eller en fysiologisk godtagbar gruppe med formel R^O^CC^C-CR^3),,,-

der n er 0 eller 1, m er 0 eller 1 ogR<1> er lavere alkyl, benzyl eller tienyl, eller der n er 0, et hydrogenatom;R<2> og R<3> er uavhengig hydrogenatomer eller lavere alkylgrupper; og X er en gruppe valgt fra (der gruppene Y<2>, Y<3> og Y<*> er som definert for Y<1> og kan være det samme som eller forskjellig fra Y<1> eller hverandre, RA er et hydrogenatom eller en gruppe -NY<3>Y<4>, der Y<3> og Y<*> har betydningene ovenfor og R<5> er et hydrogenatom eller en lavere alkylgruppe) og/eller salter derav, med det forbehold at minst én av gruppene Y<1>, Y<2>, Y3 og Y<A> er en gruppe R<1>(0)nCO(OCR<2>R3)m der m er 1,

karakterisert ved at omsetning av en forbindelse med formel (II)

[der Y<1> og Z er som definert her tidligere og X<B> er som definert her tidligere for X, bortsett fra at enhver av gruppene Y<1>, Y<2>, Y<3> og Y<*> i tillegg kan betegne en beskyttende gruppe, med det forbehold at minst én av Y<1>, Y<2>, Y<3> og Y<*> er et hydrogenatom] med et reagens som tjener til å innføre en gruppe R^O^CO. (OCR2R3)TO som definert ovenfor, fulgt der det er nødvendig av fjerning av eventuelle beskyttende grupper og/eller uønskede substituenter som slik er innført.