KR20200100033A - 변형된 뉴클레오시드 포스포르아미다이트 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 화학식 (I) 및 화학식 (II)의 5'-포스포르아미다이트 뉴클레오시드 단량체 화합물 및 이를 함유하는 조성물, 및 제조 방법 및 사용 방법에 관한 것이며, 상기 화학식 (I) 및 화학식 (II)에서 치환체는 첨부된 청구범위에 정의된 바와 같다.
Description
관련 출원과의 상호참조
본 출원은 2017년 9월 14일자로 출원된 미국 가출원 제62/558,763호에 대한 우선권의 이익을 주장하는 미국 출원으로서, 이의 전체 내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
올리고뉴클레오티드 합성은 원하는 서열의 주문 제작 올리고뉴클레오티드에 대한 접근을 제공하는 데 매우 중요하다. 원하는 올리고뉴클레오티드를 얻기 위하여, 빌딩 블록(building block)(단량체)들이 생성물의 서열에 의해 요구되는 순서로 성장하는 올리고뉴클레오티드 사슬에 순차적으로 결합된다.
예를 들어 2' 및/또는 3' 위치에 변형을 갖는 변형된 올리고뉴클레오티드가, 예를 들어 치료적 응용에 유용한 것으로 지난 수년에 걸쳐 증가된 관심을 받아 왔다. 변형된 올리고뉴클레오티드를 작제하기 위한 합성 방법이 존재하지만, 변형된 올리고뉴클레오티드들의 다양한 어레이를 합성하기 위한 추가적인 합성 선택지가 필요하다. 새로운 변형된 올리고뉴클레오티드에 대한 수요를 충족시키기 위하여, 더 높은 수율로 그리고 높은 부피로 합성될 수 있는 고순도의 새로운 단량체 뉴클레오시드가 필요하다.
본 명세서에 기재된 단량체는 변형된 올리고뉴클레오티드의 합성에 유용한 신규한 단량체를 제공함으로써 이러한 필요성을 충족시킨다.
본 발명은 5'-포스포르아미다이트 뉴클레오시드 단량체 화합물 및 이를 함유하는 조성물, 및 제조 방법 및 사용 방법에 관한 것이다.
본 발명은 화학식 (I)로 나타낸 구조를 갖는 화합물에 관한 것이다:
(X는 O 또는 NH이고; Y는 O-PG,-O(CR4 2)aCR4 3, -O(CR4 2)bOCR4 3 및 -O(CR4 2)b-CR4=CR4 2로 이루어진 군으로부터 선택되고; Z는 H이고; PG는 보호기이고; B는 천연 또는 비변형된 핵염기 또는 변형된 핵염기 또는 이들의 보호된 버전이고; 각각의 R1은 독립적으로 C1-6 알킬 또는 사이클로알킬이고; R2는 CH2CH2CN 또는 C1-6 알킬이거나; 또는 하나의 R1과 R2는 함께, 선택적으로 치환된 C1-6 사이클로알킬을 형성하고; R3은 H 또는 PG이고; R4는 각각의 경우에 독립적으로 H 또는 F이고; a는 0 내지 2의 정수이고; b는 1 내지 3의 정수임). 일부 실시 형태에서, X가 O일 때, Y는 -O(CR4 2)aCR4 3, -O(CR4 2)bOCR4 3 또는 -O(CR4 2)b-CR4=CR4 2이다.
본 발명은 또한 화학식 (II)로 나타낸 구조를 갖는 화합물에 관한 것이다:
(X는 O 또는 NH이고; Z는 H이고; B는 천연 또는 비변형된 핵염기 또는 변형된 핵염기 또는 이들의 보호된 버전이고; R1은 독립적으로 C1-6 알킬 또는 사이클로알킬이고; R2는 CH2CH2CN 또는 C1-6 알킬이거나; 또는 하나의 R1과 R2는 함께, 선택적으로 치환된 C1-6 사이클로알킬을 형성하고; R3은 H 또는 보호기이고; A는 -(CR'R')1-2-이고; R'은 각각의 경우에 독립적으로 H 또는 Me임).
일부 실시 형태에서, X는 NH이고, Y는 O-PG, OEt 또는 O-메톡시에톡시이고, Z는 H이다.
일부 실시 형태에서, R1은 C2-3 알킬이다. 일부 실시 형태에서, R1은 아이소프로필이다.
실시 형태에서, R3은 PG이다. 일부 실시 형태에서, PG는 트라이틸이다. 일부 실시 형태에서, PG는, X가 NH일 때 모노메톡시트라이틸(MMTr) 또는 트라일릴이다. 일부 실시 형태에서, PG는, X가 O일 때 4,4'-다이메톡시트라이틸(DMTr) 또는 트라이틸이다.
일부 실시 형태에서, B는 아데닌(A), 구아닌(G), 티민(T), 시토신(C), 우라실(U) 및 5-메틸시토신(5-me-C), 또는 이들의 보호된 버전으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, B는 6-N-벤조일아데노신(ABz), 4-N-벤조일시티딘(CBz), 및 2-N-아이소부티릴구아노신(GiBu)으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 적어도 하나의 화학식 (I) 또는 화학식 (II)의 화합물을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 실시 형태에서, 조성물은 반응물질, 용매 및 불순물로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 다른 작용제를 추가로 포함한다. 실시 형태에서, 조성물은 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만 또는 1% 미만의 불순물을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 조성물은 95% 초과, 예를 들어 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상의 순도를 갖는다.
추가로 본 발명은 적어도 하나의 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 화학식 (I)의 화합물을 다른 단량체와 반응시켜 올리고뉴클레오티드를 형성하는 단계를 포함한다.
본 발명은 본 명세서에서 더 상세히 설명된다.
본 발명의 화합물
본 발명의 화합물은 하나 이상의 하기 화학식 (I) 및/또는 화학식 (II)의 화합물을 포함한다:
(상기 식에서,
X는 O 또는 NH이고; Y는 O-PG,-O(CR4 2)aCR4 3, -O(CR4 2)bOCR4 3(예를 들어, OEt, O-메톡시에톡시, 및 OCF3)로 이루어진 군으로부터 선택되고; Z는 H이고; PG는 보호기이고; B는 천연 또는 비변형된 핵염기 또는 변형된 핵염기 또는 이들의 보호된 버전이고; 각각의 R1은 독립적으로 C1-6 알킬 또는 사이클로알킬이고; R2는 CH2CH2CN 또는 C1-6 알킬이거나; 또는 하나의 R1과 R2는 함께, 선택적으로 치환된 C1-6 사이클로알킬을 형성하고; R3은 H 또는 PG이고; R4는 각각의 경우에 독립적으로 H 또는 F이고; a는 0 내지 2의 정수(예를 들어, 0, 1 또는 2)이고; b는 1 내지 3의 정수(예를 들어, 1, 2 또는 3)이고, A는 -(CR'R')1-2-이고; R'은 각각의 경우에 독립적으로 H 또는 Me임).
일부 실시 형태에서, X가 O일 때, Y는 -O(CR4 2)aCR4 3, -O(CR4 2)bOCR4 3 또는 -O(CR4 2)b-CR4=CR4 2이다. 일부 실시 형태에서, X는 O이고, Y는 OEt 또는 O-메톡시에톡시이고, Z는 H이다. 다른 실시 형태에서, X는 NH이고, Y는 OP, OEt 또는 O-메톡시에톡시이고, Z는 H이다.
화학식 (I)의 뉴클레오티드에서, Y는 -O(CR4 2)2OCR4 3이다. 일부 실시 형태에서, R4는 각각의 경우에 H이다. 다른 실시 형태에서, 적어도 하나의 R4는 F이며, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개의 R4는 F이다. 일부 실시 형태에서, CR4 3은 1, 2 또는 3개의 F 원자를 함유한다. 예를 들어, 실시 형태에서, Y는 -OCH2CH2OCH3 (또는 MOE), -OCF2CH2OCH3, -OCH2CF2OCH3, -OCH2CH2OCF3, -OCF2CF2OCH3, -OCH2CF2OCF3, -OCF2CH2OCF3, -OCF2CF2OCF3, -OCHFCH2OCH3, -OCHFCHFOCH3, -OCHFCH2OCFH2, -OCHFCH2OCHF2 및 -OCH2CHFOCH3로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I)의 뉴클레오티드에서, Y는 -OCR4 3, -O(CR4 2)1-3OCR4 3, 또는 -O(CR4 2)1-2CR4 3이다. 일부 실시 형태에서, Y는 -OCR4 3 또는 -OCR4 2CR4 3이다. 일부 실시 형태에서, R4는 각각의 경우에 H이다. 다른 실시 형태에서, 적어도 하나의 R4는 F이며, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 R4는 F이다. 일부 실시 형태에서, OCR4 3은 1, 2 또는 3개의 F 원자를 함유한다. 예를 들어, 실시 형태에서, Y는 -OCH3 (또는 Me), -OCFH2, -OCHF2, OCF3, -OCH2OCH3, -OCFH2OCH3, -OCHF2OCH3, -OCF3OCH3, -OCH2OCFH2, -OCH2OCHF2, -OCH2OCF3, -OCFH2OCH3, -OCFH2OCFH2, -OCFH2OCHF2, -OCFH2OCF3, -OCHF2OCH3, -OCHF2OCFH2, -OCHF2OCHF2, -OCHF2OCF3, -O(C R4 2)3OC R4 3, -OCH2CH3 (또는 Et), -OCFH2CH3, -OCHF2CH3, -OCF3CH3, -OCH2CFH2, -OCH2CHF2, -OCH2CF3, -OCFH2CH3, -OCFH2CFH2, -OCFH2CHF2, -OCFH2CF3, -OCHF2CH3, -OCHF2CFH2, -OCHF2CHF2, -OCHF2CF3, -OCH2CH2CH3, OCF2CH2CH3, OCH2CF2CH3, OCH2CH2CF3, OCF2CF2CH3, OCH2CF2CF3, OCF2CH2CF3, OCF2CF2CF3, OCHFCH2CH3, OCHFCHFOCH3, OCHFCH2CFH2, OCHFCH2CHF2 및 OCH2CHFCH3로 이루어진 군으로부터 선택된다. 실시 형태에서, Y는 -OCH3(또는 Me) 또는 -OCH2CH3(또는 Et)이다.
화학식 (I)의 일부 실시 형태에서, Y는 -O(CR4 2)b-CR4=CR4 2이다. 일부 실시 형태에서, b는 1, 2 또는 3이다. 일부 실시 형태에서, R4는 각각의 경우에 H이다. 다른 실시 형태에서, 적어도 하나의 R4는 F이며, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개의 R4는 F이다. 일부 실시 형태에서, CR4 2는 1개 또는 2개의 F 원자를 함유하며, 예를 들어 내부 R4 2가 1개 또는 2개의 F 원자를 함유하거나, 또는 말단 R4 2가 1개 또는 2개의 F 원자를 함유한다.
일부 실시 형태에서, R1은 C2-3 알킬(예를 들어, 에틸 또는 아이소프로필)이다.
일부 실시 형태에서, R3은 보호기, PG이다. 보호기는 아민 또는 알코올 보호기, 예컨대 실릴 보호기(예를 들어, tert-부틸다이메틸실릴 에테르(TBMDS), tert-부틸다이페닐실릴(TBDPS), 트라이아이소프로필실릴 에테르(TIPS)) 또는 모노메톡시트라이틸(MMTr) 또는 4,4'-다이메톡시트라이틸(DMTr) 또는 트라이톨릴 또는 임의의 다른 적합한 보호기, 예컨대 문헌[Wuts, Peter GM, and Theodora W. Greene. Greene's protective groups in organic synthesis. John Wiley & Sons, 2006]에 기재된 것들을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 하나 초과의 알코올 및/또는 아민이 보호될 때, 알코올 및/또는 아민은 직교로 보호될 수 있다.
화학식 (II)의 화합물에서, A는 -(CR'R')1-2-이다. 일부 실시 형태에서, A는 -(CR'R')-이고, 다른 실시 형태에서 A는 -(CR'R')2-이다. R'은 각각의 경우에 독립적으로 H 또는 Me이다. 일부 실시 형태에서, 하나의 R'은 Me이고, 나머지 R'은 H이다. 다른 실시 형태에서, 모든 R'은 H이다. 일부 실시 형태에서, 화학식 (II)에서 X는 NH이다. 일부 실시 형태에서, R'이 H이고 X가 NH일 때, A는 -(CR'R')1-이 아니다.
천연 또는 비변형된 핵염기 또는 변형된 핵염기 또는 이들의 보호된 버전은 특별히 제한되지 않는다. 일부 실시 형태에서, B는 푸린 염기, 예컨대 아데닌(A) 및 구아닌(G), 다이아미노푸린(DAP), 및 피리미딘 염기, 예컨대 티민(T), 시토신(C) 및 우라실(U) 및/또는 다른 합성 및 천연 핵염기, 예컨대 5-메틸시토신(5-me-C), 5-하이드록시메틸 시토신으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, B는 보호된 핵염기, 예컨대 보호된 U, T, C, 5meC, A 또는 G이다. 보호 모이어티(moiety)는 당업계에 알려져 있으며, 특별히 제한되지는 않지만, 예를 들어 아미노 보호기(예를 들어, 아세트아미드 보호기, 예컨대 벤즈아미드 및 아이소부티르아미드)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, B는 6-N-벤조일아데노신(ABz), 4-N-벤조일시티딘(CBz), 및 2-N-아이소부티릴구아노신(GiBu)이다.
일부 실시 형태에서, 화합물은 하기 표로부터 선택된다.
일부 실시 형태에서, 화합물은 하기 표로부터 선택된다.
조성물
본 발명은 또한 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 반응물질 또는 용매 또는 불순물을 포함하는 조성물을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물을 포함하는 조성물은 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9%, 99.95% 또는 그 이상의 순도를 갖는다.
사용 방법
본 발명의 조성물은 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 위한 합성 전구체로서 사용될 수 있으며, 상기 올리고뉴클레오티드는, 예를 들어 미국 가출원 제62/420801호, 제62/394737호, 제62/394738호 및 제62/394739호에 기재된 것들이며, 이들 출원은 각각 참고로 포함된다. 변형된 올리고뉴클레오티드는 당업계의 방법에 의해, 예를 들어, 탈블로킹(deblock), 커플링 및 대기 단계에 대해 변경시켜 기록된 93-단계 사이클을 사용하여 ABI-394 합성기 상에서 합성될 수 있다. 고체 지지체는 3'-NHTr-5'-LCAA-CPG일 수 있다. 각각의 올리고뉴클레오티드는 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 개별적으로 합성된다.
제조 방법
본 발명의 조성물은 하기 실시예에 기재된 것과 같은 합성 절차에 의해 합성될 수 있다.
일부 실시 형태는 출발 물질의 2'-O-알킬화를 포함하며, 예를 들어 하기와 같다:
(상기 식에서, PG는 보호기, 예컨대 트라이틸이고, BP는 보호된 핵염기이며, 예를 들어 PMB로 보호된 핵염기임). 상기 화합물은 알킬화된 후, PGO를 탈보호하고, 예를 들어 Bz 모이어티로 재보호한 후, 핵염기를 탈보호하고, 후속으로 N3를 N-R3으로 전환시킨다.
일부 실시 형태는 화합물의 보호를 포함하는데, 예를 들어 앞서의 단락에서 핵염기가 푸린인 경우, C-6-OBn으로 보호한다. 일부 실시 형태에서, 이는, 산성 조건 하에서, 예를 들어 5'-O-DMTr 및 C-2-NH-MMTR 기의 탈보호 동안 탈푸린화를 감소시킨다. 다른 실시 형태는 화합물 내의 고리외(exocyclic) 아민 기의 보호를 포함하는데, 예를 들어 앞서의 단락에서 핵염기가 푸린인 경우, 부피가 큰(bulky) 보호기, 예컨대 4-모노메톡시 트라이틸 기로 보호하여, 고수율로 2'-O-알킬화를 달성한다.
일부 실시 형태는 화합물의 보호를 포함하는데, 예를 들어 앞서의 단락에서 핵염기가 피리미딘인 경우, 피리미딘을 PMB 모이어티로 보호함으로써 2'-O-알킬화를 달성한다.
정의
본 명세서에 사용되는 용어는 단지 특정 실시 형태를 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범주를 제한하려는 것이 아님을 이해해야 한다. 달리 지시되지 않는 한 하기 정의가 적용될 것이다.
"약제학적으로 허용되는"은 생물학적이지 않거나 또는 달리 바람직하지 않은 물질을 지칭하는 것으로, 즉, 이러한 물질은, 어떠한 바람직하지 않은 생물학적 효과도 야기하지 않거나 이를 함유한 조성물의 임의의 다른 성분과 유해한 방식으로 상호작용하지 않으면서, 환자에게 투여되는 약제학적 조성물 내로 혼입될 수 있다. 용어 "약제학적으로 허용되는"이 약제학적 담체 또는 부형제를 지칭하는 데 사용되는 경우, 이러한 담체 또는 부형제는 독성 및 제조 시험의 필수 기준을 충족하였거나 그것이 미국 식품의약국에 의해 작성된 비활성 성분 가이드(Inactive Ingredient Guide)에 포함되는 것으로 암시된다.
"변형된 뉴클레오시드"는 변형된 당 모이어티 및/또는 변형된 핵염기를 독립적으로 갖는 뉴클레오시드를 지칭한다.
"비변형된" 또는 "천연" 핵염기는 푸린 염기 아데닌(A) 및 구아닌(G), 및 피리미딘 염기 티민(T), 시토신(C) 및 우라실(U)을 포함한다. "변형된 핵염기"는 다른 합성 및 천연 핵염기, 예컨대 5-메틸시토신(5-me-C), 5-하이드록시메틸 시토신, 잔틴, 하이포잔틴, 2-아미노아데닌, 아데닌 및 구아닌의 6-메틸 및 다른 알킬 유도체, 아데닌 및 구아닌의 2-프로필 및 다른 알킬 유도체, 2-티오우라실, 2-티오티민 및 2-티오시토신, 5-할로우라실 및 시토신, 피리미딘 염기의 5-프로피닐(-C≡C-CH3) 우라실 및 시토신 및 다른 알키닐 유도체, 6-아조 우라실, 시토신 및 티민, 5-우라실(유사우라실), 4-티오우라실, 8-할로, 8-아미노, 8-티올, 8-티오알킬, 8-하이드록실 및 다른 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-할로, 특히 5-브로모, 5-트라이플루오로메틸 및 다른 5-치환된 우라실 및 시토신, 7-메틸구아닌 및 7-메틸아데닌, 2-F-아데닌, 2-아미노-아데닌, 8-아자구아닌 및 8-아자아데닌, 7-데아자구아닌 및 7-데아자아데닌, 및 3-데아자구아닌 및 3-데아자아데닌을 포함한다. 추가의 변형된 핵염기는 트라이사이클릭 피리미딘, 예컨대 페녹사진 시티딘(1H-피리미도[5,4-b][1,4]벤족사진-2(3H)-온), 페노티아진 시티딘(1H-피리미도[5,4-b][1,4]벤조티아진-2(3H)-온), G-클램프, 예컨대 치환된 페녹사진 시티딘(예를 들어, 9-(2-아미노에톡시)-H-피리미도[5,4-b][1,4]벤족사진-2(3H)-온), 카르바졸 시티딘(2H-피리미도[4,5-b]인돌-2-온), 피리도인돌 시티딘(H-피리도[3,2,5]피롤로[2,3-d]피리미딘-2-온)을 포함한다. 변형된 핵염기는 또한 푸린 또는 피리미딘 염기가 다른 헤테로사이클로 치환된 것들, 예를 들어 7-데아자-아데닌, 7-데아자구아노신, 2-아미노피리딘 및 2-피리돈을 포함할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 변형된 핵염기는 5-메틸시토신, 2,6-다이아미노푸린, 5-메틸우라실 및 g-클램프로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, g-클램프는 하기와 같다:
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태(부정 관사 및 정관사)는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의한다. 또한, 청구항은 임의의 선택적인 요소를 배제하도록 작성될 수 있음에 유의한다. 그러한 바와 같이, 이러한 언급은 청구항 요소의 인용 또는 "부정적" 제한의 사용과 관련하여 "오로지", "단지" 등과 같은 배타적인 용어의 사용에 대한 선행사(antecedent basis)로서의 역할을 하도록 의도된다.
용어 "약"은 당업자에 의해 이해될 것이며, 그것이 사용되는 문맥에 따라 어느 정도 달라질 것이다. 이 용어의 사용이 당업자에게 명백하지 않은 경우, 그것이 사용된 문맥을 고려하여, "약"은 특정 용어의 최대 ±10%를 의미할 것이다. 본 명세서에서, 소정의 범위는 수치 값들 앞에 용어 "약"이 존재하는 것으로 제시된다. 본 명세서에서, 용어 "약"은 그 뒤에 나오는 정확한 숫자뿐만 아니라, 그 용어 뒤에 나오는 숫자에 가깝거나 근사한 숫자에 대한 축어적 지지(literal support)를 제공하기 위해 사용된다. 숫자가 구체적으로 언급된 숫자에 가깝거나 그와 근사한지의 여부를 결정함에 있어서, 가깝거나 근사한 언급되지 않은 숫자는 그것이 제시되고 있는 문맥에서, 구체적으로 언급된 숫자와 실질적으로 동일한 숫자를 제공하는 숫자일 수 있다.
값의 범위가 제공되는 경우, 그러한 범위의 상한치와 하한치 사이의, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않는 한 하한치 단위의 10분의 1까지의 각각의 개재 값, 및 그러한 기재된 범위 내의 임의의 다른 언급된 또는 개재된 값은 본 발명 내에 포함되는 것으로 이해된다. 이들 더 작은 범위의 상한치 및 하한치가 독립적으로 더 작은 범위 내에 포함될 수 있으며, 이들은 또한 언급된 범위 내의 임의의 구체적으로 배제된 한계치를 제외하고 본 발명 내에 포함된다. 언급된 범위가 한계치들 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 그러한 포함된 한계치들 중 어느 하나 또는 둘 모두를 배제하는 범위가 또한 본 발명 내에 포함된다.
본 발명은 기재된 특정 실시 형태로 제한되지 않는데, 그 이유는 그러한 것들이 당연히 변동될 수 있기 때문이다. 또한, 본 명세서에 사용되는 용어는 단지 특정 실시 형태를 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범주는 단지 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것이기 때문에, 제한적인 것으로 의도되지 않음이 이해되어야 한다.
본 명세서를 읽을 때 당업자에게 명백할 바와 같이, 본 명세서에 기술되고 예시된 각각의 개별 실시 형태는 본 발명의 범주 또는 사상으로부터 벗어남이 없이 다른 몇몇 실시 형태들 중 임의의 것의 특징부로부터 용이하게 분리되거나 그와 조합될 수 있는 별개의 구성요소 및 특징부를 갖는다. 임의의 언급된 방법은 언급된 사건들의 순서로 또는 논리적으로 가능한 임의의 다른 순서로 수행될 수 있다.
본 명세서에 인용된 모든 간행물 및 특허는 마치 각각의 개별 간행물 또는 특허가 구체적으로 그리고 개별적으로 참고로 포함되는 것으로 지시되는 것처럼 본 명세서에 참고로 포함되며, 간행물이 인용되는 것과 관련하여 방법 및/또는 재료를 개시하고 설명하기 위해 본 명세서에 참고로 포함된다. 어떠한 간행물의 인용도 본 출원일에 앞서 그의 개시를 위한 것으로, 본 발명이 선행 발명에 의해 그러한 간행물보다 선행되지 않음을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 또한, 제공된 간행물의 날짜는 실제 공개 날짜와 상이할 수 있으며, 실제 공개 날짜는 독립적으로 확인될 필요가 있을 수 있다.
실시예
하기 실시예는 당업자가 본 발명을 실시하는 것을 돕기 위해 본 발명의 소정의 실시 형태를 예시한다. 따라서, 실시예는 결코 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 여겨지지 않는다.
실시예 1 내지 실시예 4
적절히 보호된 2'-O-메톡시 에틸-3'-아미노뉴클레오시드-5'-포스포르아미다이트 빌딩 블록(실시예 1, 실시예 2, 실시예 3, 및 실시예 4)을 반응도식 1, 반응도식 2, 반응도식 3, 반응도식 4, 및 반응도식 5에 나타낸 화학적 변환 후에 제조하였다.
반응도식 1
반응도식 1은 우라실 염기 3'-NH-MMTr-2'-O-메톡시에틸 포스포르아미다이트의 합성(예컨대, 실시예 1)을 개시한다. 핵심 3'-아지도-2'-메톡시에틸 중간체 3-3을 무수 중간체 3-2를 통해 저수율로 얻었다.
저수율의 알킬화 때문에, 3-1을 BOMCl/ DBU와 반응시켜 N-3 보호된 중간체 3-4를 얻었으며, 이것을 2-브로모에틸 메틸 에테르 / Ag2O / NaI/DMF를 사용함으로써 알킬화하여 2'-O-메톡시에틸 유도체 3-5를 얻었다. 수소화 조건(Pd/C/H2)을 사용하여 N-3-BOM 기를 탈보호하여, 상당량의 과환원된 부산물 3-6b와 함께, 10 내지 20%의 원하는 3'-아미노 중간체 3-6a를 얻었다.
반응도식 2
반응도식 2는 고수율로 2'-O-알킬화를 달성하기 위한 대안적인 접근법을 개시한다. 중간체 3-1을 PMBCl / DBU / DMF로 처리하여 N-3 보호된 중간체 4-2를 얻었으며, 이것을 2-브로모에틸 메틸 에테르 / Ag2O / NaI/DMF를 사용하여 2'-O 알킬화하여 2'-O-메톡시에틸 유도체(중간체 4-3)를 얻었다. 중간체 4-3을 5'-탈트라이틸화하고, 벤조일 클로라이드를 사용하여 그의 5'-하이드록실 기를 재보호하여 중간체 4-5를 얻었다. 온화한 조건에서 중간체 4-5의 PMB 기를 탈보호하여 중간체 4-6을 얻었다. 중간체 4-6의 3'-아지도 기를 아민으로 환원시키고, 이어서 이것을, 예를 들어 4-모노메톡시트라이틸클로라이드와 반응시킴으로써 즉시 보호하여 4-8을 얻었다. 이어서, 5'-벤질 에스테르를 알칼리 용액을 사용하여 절단한 후, 알려진 방법을 사용하여 포스피틸화(phosphitylation)하여 원하는 2'-O-메톡시에톡시 우리딘 포스포르아미다이트 단량체 4-10을 얻었다.
중간체 ( 4-2 )의 제조: DMF(120.00 mL) 중 3-1(45.30 g, 88.56 mmol)의 용액에 PMBCl(20.80 g, 132.84 mmol) 및 DBU(44.61 g, 177.12 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, EA로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 컬럼으로 정제하여, 백색 고체로서 4-2(52.00 g, 82.32 mmol)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 632.3 [M+H]+.
중간체 ( 4-3 )의 제조: DMF(120.00 mL) 중 4-2(50.00 g, 79.15 mmol)의 용액에 2-브로모에틸 메틸 에테르(16.50 g, 118.73 mmol) 및 Ag2O(18.34 g, 79.15 mmol, 2.57 mL)를 첨가하고, 이어서 NaI(5.93 g, 39.58 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. LC-MS는 잘 진행되고 있음을 보여주었다. 여과하고, 물 및 EA를 첨가하고, 유기 층을 농축시키고, 컬럼으로 정제하여, 무색 오일로서 4-3(52.00 g, 75.39 mmol)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 690.4 [M+H]+.
중간체 ( 4-4 )의 제조: DCM(200.00 mL) 중 4-3(52.00 g, 75.39 mmol)의 용액에 TFA(150.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 차가운 NH4OH에 서서히 첨가하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 정제하여, 무색 오일로서 4-4(31.00 g, 69.28 mmol)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 448.2 [M+H]+. 1H-NMR (DMSO-d 6, 400 ㎒): δ ppm 8.02 (d, J = 8.12 ㎐, 1H), 7.26-7.23 (m, 2H), 6.87-6.84 (m, 2H), 5.87-5.81 (m, 2H), 5.38 (t, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.96-4.85 (m, 2H), 4.36-4.34 (m, 1H), 4.17-4.14 (m, 1H), 4.00-3.97 (m, 1H), 3.83-3.77 (m, 1H), 3.75-3.72 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.70-3.68 (m, 1H), 3.61-3.56 (m, 1H), 3.45-3.43 (m, 2H), 3.18 (s, 3H).
중간체 ( 4-5 )의 제조: 피리딘(200.00 mL) 중 4-4(31.00 g, 69.28 mmol)의 용액에 BzCl(13.14 g, 93.87 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하고, 농축시키고, 컬럼으로 정제하여, 백색 고체로서 4-5(35.10 g, 63.8 mmol)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 552.2 [M+H]+.
중간체 ( 4-6 )의 제조: 아세토니트릴(300.00 mL) 및 물(100.00 mL) 중 4-5(35.10 g, 63.8 mmol)의 용액에 질산제2세륨암모늄(105 g, 191.40 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하고, 농축시키고, EA로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 컬럼으로 정제하여, 황색 고체로서 4-6(27.5 g, 63.75 mmol)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 432.2 [M+H]+.
중간체 ( 4-7 )의 제조: THF(500.00 mL) 중 4-6(27.50 g, 63.75 mmol)의 용액에 Pd/C(3.00 g)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하고, 여과하고, 농축시켜, 황색 고체로서 4-7(25.00 g, 61.67 mmol)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 406.2 [M+H]+.
중간체 ( 4-8 )의 제조: DCM(300.00 mL) 중 4-7(25.00 g, 61.67 mmol)의 용액에 MMTrCl(28.49 g, 92.51 mmol) 및 콜리딘(14.95 g, 123.34 mmol)을 첨가하고, 이어서 AgNO3(15.7 g, 92.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하고, 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 황색 고체로서 4-8(33.00 g, 48.69 mmol)을 얻었다.
중간체 ( 4-9 )의 제조: 4-8(14.50 g, 21.39 mmol)의 용액에 물(20 mL) 중의 메탄올(200 mL) 중 1 N NaOH를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, DCM으로 추출하고, 유기 층을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 백색 고체로서 4-9(11.50 g, 20.05 mmol)를 얻었다. 1H-NMR (DMSO-d 6, 400 ㎒): δ ppm 11.26 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 7.47-7.44 (m, 4H), 7.34-7.17 (m, 8H), 6.82 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 5.50-5.48 (m, 2H), 5.13 (t, J = 3.6 ㎐, 1H), 4.05-3.98 (m, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.52-3.49 (m, 1H), 3.34-3.32 (m, 2H), 3.14 (s, 3H), 3.08-3.04 (m, 1H), 2.89-2.86 (m, 1H), 2.70 (d, J = 10.0 ㎐, 1H), 1.51 (d, J = 4.4 ㎐, 1H).
( 4-10 )의 제조: DCM(100.00 mL) 중 4-9(11.50 g, 20.05 mmol)의 용액에 DMAP(489.85 mg, 4.01 mmol) 및 DIPEA(10.36 g, 80.19 mmol, 14.01 mL)를 첨가하였다. 이어서, CEPCl(5.70 g, 24.06 mmol)을 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3로 켄칭(quenching)하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물(crude product)을 얻었다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC(Flash-Prep-HPLC)로 정제하였다. 생성물을 무수 톨루엔 중에 용해시키고, 3회 농축시켰다. 이어서, 생성물을 무수 아세토니트릴 중에 용해시키고, 3회 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 13 g의 4-10을 얻었다. MS m/z [M-H] - (ESI): 772.3; 1H-NMR (CDCl3, 400 ㎒): 9.01(s, 1H), 8.07-7.61(m, 1H), 7.53-7.41(m, 6H), 7.29-7.15 (m, 5H), 6.79-6.76 (m, 2H), 5.63-5.57 (m, 2H), 4.27-4.15 (m, 2H), 4.06-3.95 (m, 1H), 3.85-3.77(m, 1H), 3.75(s, 3H), 3.69-3.35(m, 7H), 3.23(d, J=4 ㎐, 1H), 2.26-2.91(m, 3H), 2.59(t, J = 6.4 ㎐, 1H), 1.75-1.39(m, 1H), 1.21-1.11(m, 12H). 31PNMR (162 ㎒, CDCl3): 149.10, 148.26.
실시예 2
2'-O-메톡시에톡시-NH-벤조일-시토신 포스포르아미다이트 화합물 5-4는, 하기 반응도식 3에 나타낸 바와 같이, 우리딘 중간체 4-8을 3'-아미노 시티딘 유사체 5-1로 전환시킨 후, 알려진 프로토콜을 사용하여 포스피틸화하여 원하는 2'-O-메톡시에톡시 시티딘 포스포르아미다이트 단량체 5-4를 얻음으로써 수득하였다.
반응도식 3
중간체 ( 5-1 )의 제조: 아세토니트릴(250.00 mL) 중 4-8(18.50 g, 27.30 mmol)의 용액에 TPSCl(16.49 g, 54.60 mmol) 및 DMAP(6.67 g, 54.60 mmol)를 첨가하고, 이어서 TEA(5.52 g, 54.60 mmol, 7.56 mL)를 이 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에서 실온에서 5시간 동안 교반하였다. NH4OH(50.00 mL)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 용액을 농축시키고, EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 유기 층을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 황색 고체로서 5-1(16.00 g, 23.64 mmol)을 얻었다.
중간체 ( 5-2 )의 제조: 피리딘(100.00 mL) 중 5-1(16.00 g, 23.64 mmol)의 용액에 0℃에서 BzCl(4.96 g, 35.46 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 농축시키고, 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 백색 고체로서 5-2(17.40 g, 22.28 mmol)를 얻었다.
중간체 ( 5-3 )의 제조: 화합물 5-2(17.40 g, 22.28 mmol)를 0℃에서 피리딘/MeOH/H2O(65/30/5) 중 1 N NaOH 용액 180 mL에 첨가하였다. 현탁액을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액을 첨가함으로써 켄칭하였다. 용액을 EA로 추출하고, 합한 유기 층을 포화 NaHCO3 용액, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼으로 정제하여, 백색 고체로서 5-3(12.50 g, 18.47 mmol)을 얻었다. 1H-NMR (DMSO-d 6, 400 ㎒): δ ppm 12.25 (s, 1H), 8.53 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 8.01 (d, J = 5.2 ㎐, 2H), 7.64-7.60 (m, 1H), 7.52-7.42 (m, 6H), 7.31 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 7.26-7.14 (m, 7H), 6.79 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 5.55 (s, 1H), 5.23 (t, J = 3.6 ㎐, 1H), 4.09-3.97 (m, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.70-3.66 (m, 1H), 3.38-3.34 (m, 2H), 3.17 (s, 3H), 3.11-3.05 (m, 1H), 2.96-2.91 (m, 1H), 2.68 (d, J=10.8 ㎐, 1H), 1.49 (d, J=4 ㎐, 1H).
( 5-4 )의 제조: DCM(100.00 mL) 중 5-3(12.50 g, 18.47 mmol)의 용액에 DMAP(451.30 mg, 3.69 mmol) 및 DIPEA(9.55 g, 73.88 mmol, 12.90 mL)를 첨가하고, 이어서 CEPCl(5.25 g, 22.16 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO3로 켄칭하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 생성물을 무수 톨루엔 중에 용해시키고, 3회 농축시켰다. 이어서, 생성물을 무수 아세토니트릴 중에 용해시키고, 3회 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 13 g의 5-4를 얻었다. MS m/z [M-H] - (ESI): 875.4. 1H-NMR (400 ㎒, CDCl3): δ ppm 8.64-8.20 (m, 2H), 7.90-7.88 (m, 2H), 7.62-7.58 (m, 1H), 7.53-7.39 (m, 8H), 7.25-7.15 (m, 6H), 6.78-6.74 (m, 2H), 5.69 (d, J=1.72 ㎐, 1H), 4.37-4.21 (m, 2H), 4.10-4.03 (m, 1H), 3.90-3.79 (m, 2H), 3.75 (d, J=1.64 ㎐, 3H), 3.68-3.52 (m, 3H), 3.46-3.42 (m, 2H), 3.26 (d, J=1.2 ㎐, 3H), 3.17-2.97 (m, 2H), 2.94-2.87 (m, 1H), 2.67-2.48 (m, 2H), 1.79-1.51(m, 1H),1.26-1.18 (m, 12H). 31PNMR (162 ㎒, CDCl3): 148.93, 148.03
실시예 3
2'-O-메톡시에틸 아데노신 유사체 6-10의 합성을 하기 반응도식 4에 나타낸 바와 같이 달성하였다. 염기성 조건(NH3/MeOH) 하에 중간체 6-2를 둠으로써 다이올 6-3을 얻었으며, 이어서 TBDPSCl을 사용하여 5'-하이드록시 기를 보호하여 6-4를 얻었다(중간체 6-4). 이어서, 2-브로모에틸 메틸 에테르/NaH/DMF를 사용하여 6-4를 2'-O 알킬화하여, 6-4의 C-6-고리외 아민의 보호 없이, 2'-O-메톡시에틸 유도체 6-5를 얻었다. 본 발명의 방식으로, 중간체 6-4의 2'-OH 기의 선택적 알킬화를 달성하였다.
반응도식 4
중간체 6-5의 3'-아지도 기를 아민 6-7로 환원시키고, 이어서 이것을, 예를 들어 4-모노메톡시트라이틸클로라이드와 반응시킴으로써 즉시 보호하여, TBAF/THF를 사용하여 5'-OTBDPS 기를 탈보호한 후에 전구체 6-8을 얻었다. 알려진 프로토콜을 사용하여 6-9의 포스피틸화를 행하여 원하는 2'-O-메톡시에톡시 아데닌-NH-벤조일 포스포르아미다이트 단량체 6-10을 얻었다.
중간체 ( 6-2 )의 제조: 건성 ACN(1.20 L) 중 화합물 1(79.50 g, 210.68 mmol)의 용액에 N-(5H-푸린-6-일)벤즈아미드(100.80 g, 421.36 mmol) 및 BSA(180.07 g, 884.86 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 현탁액이 투명해질 때까지 50℃에서 교반하였다. 이어서, 혼합물을 -20℃에서 냉각시키고, TMSOTf(93.54 g, 421.36 mmol)를 주사기로 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하에서 70℃에서 72시간 동안 교반하고, 포화 NaHCO3로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 이어서 용매를 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 정제하여, 황색 고체로서 화합물 6-2(107.50 g, 192.26 mmol, 91.26% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ = 11.28 (s, 1H), 8.64 (d, J = 6.4 ㎐, 2H), 8.05 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.84 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.66 (t, J = 7.6 ㎐, 1H), 7.56 (t, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.33 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 6.37 (d, J = 3.6 ㎐, 1H), 6.17 (dd, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.09 (t, J = 6.8 ㎐, 1H), 4.69-4.56 (m, 2H), 4.40-4.38 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.17 (s, 3H). ESI-LCMS: m/z 557.2 [M+H]+.
중간체 ( 6-3 )의 제조: 화합물 6-2(107.50 g, 192.26 mmol)의 용액을 에탄올(600.00 mL) 중 33 중량% 메틸아민 중에 용해시키고, 이어서 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시키고, 석유 에테르(1.5 L) 중 50% EtOAc로 세척하고, 여과하여, 담황색 고체로서 화합물 6-3(52.50 g, 179.64 mmol, 93.44% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 293.1 [M+H]+.
중간체 ( 6-4 )의 제조: 피리딘(500.00 mL) 중 화합물 6-3(52.50 g, 179.64 mmol), 이미다졸(18.32 g, 269.46 mmol) 및 TBDPS-Cl(54.34 g, 197.60 mmol)의 용액을 20℃에서 2시간 동안 교반하였으며, LC-MS는 6-3이 소비되었음을 보여주었다. 이어서, MeOH(30 mL)로 켄칭하고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 화합물 6-4(72.60 g, 136.81 mmol, 76.16% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ = 8.29 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.63-7.59 (m, 4H), 7.48-7.33 (m, 8H), 6.36 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.10-5.06 (m, 1H), 4.47 (t, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.14-4.11 (m, 1H), 3.94 (dd, J = 11.2 ㎐, 1H), 3.83 (dd, J = 11.6 ㎐, 1H), 0.99 (s, 9H). ESI-LCMS: m/z 531.3 [M+H]+.
중간체 ( 6- 5 )의 제조: 건성 DMF(400.00 mL) 중 6-4(35.00 g, 65.96 mmol) 및 1-브로모-2-메톡시에탄(18.33 g, 131.91 mmol)의 용액에 NaI(19.77 g, 131.91 mmol) 및 Ag2O(15.29 g, 65.96 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 빙수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 6-5(23.70 g, 40.26 mmol, 61.04% 수율)를 그리고 백색 고체로서 TBDPS의 부산물(5.20 g, 9.81 mmol, 14.87% 수율)을 얻었다(손실). 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ = 8.31 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.63-7.60 (m, 4H), 7.47-7.44 (m, 2H), 7.40-7.36 (m, 6H), 6.10 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.02 (t, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.69 (t, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.18-4.14 (m, 1H), 3.95 (dd, J = 11.6 ㎐, 1H), 3.84 (dd, J = 11.6 ㎐, 1H), 3.78-3.75 (m, 2H), 3.45 (t, J = 4.8 ㎐, 1H), 3.16 (s, 3H), 0.99 (s, 9H). ESI-LCMS: m/z 589.5 [M+H]+.
중간체 ( 6- 6 )의 제조: 0℃에서 피리딘(300.00 mL) 중 6-5(31.23 g, 53.04 mmol)의 용액에 BzCl(11.22 g, 79.56 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 0℃로 냉각시키고, 수산화암모늄(20 mL, 30%)을 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 이어서 용매를 증발시키고, 300 mL의 H2O 및 600 mL의 EA를 첨가하여 용액을 분리시키고, 수층을 EA로 추출하고, 유기 층을 합하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 6-6(28.70 g, 41.42 mmol, 78.09% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 693.4 [M+H]+.
중간체 ( 6- 7 )의 제조: EA(150.00 mL) 중 6-6(28.70 g, 41.42 mmol)의 용액에 H2 하에서 Pd/C(3.00 g) 및 MeOH(150.00 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 여과하고, 여과액을 농축시켜, 회색 고체로서 6-7(25.49 g, 38.22 mmol, 92.27% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 667.3 [M+H]+.
중간체 ( 6- 8 )의 제조: DCM(300.00 mL) 중 6-7(25.49 g, 38.22 mmol) 및 AgNO3(12.98 g, 76.44 mmol)의 용액에 콜리딘(13.89 g, 114.66 mmol) 및 MMTrCl(19.43 g, 57.33 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 빙수에 붓고, 유기 층을 DCM으로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 정제하여, 회색 고체로서 6-8(32.79 g, 34.92 mmol, 91.36% 수율)을 얻었다.
중간체 ( 6- 9 )의 제조: THF(300.00 mL) 중 6-8(32.79 g, 34.92 mmol)의 용액에 TBAF(1M, 35.00 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 제거하고, 잔류물을 EA를 사용하여 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 6-9(22.22 g, 31.71 mmol, 90.82% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, CDCl3): δ = 8.68 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.04 (d, J = 7.2 ㎐, 2H), 7.61-7.57 (m, 1H), 7.53-7.48 (m, 6H), 7.40 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 7.21-7.12 (m, 6H), 6.73 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 6.09 (d, J = 2.4 ㎐, 2H), 4.08-4.02 (m, 2H), 3.93-3.87 (m, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.58-3.53 (m, 1H), 3.43-3.39 (m, 3H), 3.24-3.19 (m, 4H), 2.19 (br, 1H).
( 6- 10 )의 제조: 건성 DCM(100.00 mL) 중 6-9(14.00 g, 19.98 mmol), DMAP(488.19 mg, 4.00 mmol) 및 DIPEA(6.46 g, 49.95 mmol, 8.73 mL)의 용액에 Ar 하에서 CEPCl(5.68 g, 23.98 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 10% NaHCO3(aq.) 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하고, 이어서 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물(10 g, ACN 10 mL 중에 용해됨)을 플래시 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체로서 6-10(12.60 g, 13.98 mmol, 69.99% 수율)을 얻었다. 이어서, 생성물을 건성 톨루엔(15 mL) 중에 용해시키고, 3회 농축시키고, 건성 ACN으로 3회 농축시켰다. 1H-NMR (400 ㎒, CDCl3): δ = 9.12 (d, J = 46.8 ㎐, 1H), δ = 8.71 (d, J = 11.6 ㎐, 1H), 8.50 (s, 0.6H), 8.22 (s, 0.4H), 8.04 (t, J = 7.2 ㎐, 2H), 7.63-7.59 (m, 1H), 7.55-7.46 (m, 6H), 7.40-7.37 (m, 2H), 7.19-7.06 (m, 6H), 6.69 (dd, J = 8.8 ㎐, 2H), 6.03 (d, J = 3.2 ㎐, 1H), 4.36-4.24 (m, 2H), 3.92-3.78 (m, 2H), 3.71 (d, J = 11.6 ㎐, 3H), 3.67-3.33 (m, 7H), 3.29 (d, J = 11.2 ㎐, 3H), 3.17-3.10 (m, 1H), 2.88 (dd, J = 27.2 ㎐, 1H), 2.65-2.50 (m, 2H), 2.38 (d, J = 4.4 ㎐, 0.4H), 1.80 (d, J = 4.0 ㎐, 0.6H), 1.23-1.15 (m, 12H). 31PNMR (400 ㎒, CDCl3): 148.86, 148.22. ESI-LCMS: m/z 901.3 [M+H]+.
실시예 4
구아노신 염기 2'-메톡시에톡시 포스포르아미다이트 7-13의 합성은 반응도식 5에 나타나 있다. C-3-아지도리보스 1과 핵염기 2-아미노-6-클로로푸린의 입체선택적 커플링이 다양한 구아노신 염기 3'-NH-MMTr-2'-O-알킬화 포스포르아미다이트를 얻기 위한 핵심 단계인 것으로 상정되었다. 이것은 효율적인 2'-O-알킬화를 얻는 데 그리고 임의의 염기 알킬화를 없애는 데 절대적으로 필요하였다. 이러한 목적으로, C-3'-아지도-클로로-아민 푸린 뉴클레오시드 7-2b를 1과 2-아미노-6-클로로 푸린의 핵염기 커플링으로부터 약 70% 단리 수율로 합성하였다. 이어서, MMTrCl을 사용하여 7-2의 2-아미노 기를 보호하여 7-3을 얻었으며, 이것을 NH4OH/0℃를 사용함으로써 2'-O-아세틸 및 5'-O-톨루오일 기를 탈보호한 후 2'-하이드록시 중간체 7-4를 얻었다.
중간체 7-4의 5'-O-톨루일 기를 염기로 처리함으로써 탈보호한 후, 트라이틸 기를 사용하여 5'-OH 기를 재보호하여 알킬화를 위한 핵심 2'-OH 중간체 9-6을 얻었다. 본 발명의 탈보호 및 재보호 전략은 염기성 조건(NaHMDS/DMF) 하에서의 2'-O-알킬화 중간체 7-7의 효율적인 합성에 필요하였다.
반응도식 5
다음으로, 조심스럽게 제어된 산성 조건 하에서 6-메톡시 기의 가수분해와 탈트라이틸화를 동시에 행하여 3'-아지도-2'-메톡시 구아노신 중간체 7-8을 얻었으며, 이것에 iBuCl을 가하여 비스아이소부티레이트 7-9를 얻은 후, 중간체의 3'-아미노 기를 환원시키고 MMTr 보호를 행하여 3'NH-MMTr -2'-메톡시 에톡시 구아노신 뉴클레오시드 7-11을 얻었다. 추가로, 저온에서 염기성 조건을 사용하여 5'-O-아이소부티레이트를 선택적으로 탈보호하여 2'-메톡시 에톡시 구아노신 아미다이트 전구체 7-12를 얻었다. 표준 프로토콜을 사용하여 7-12의 포스피틸화를 행하여 원하는 2'-O-메톡시에톡시 구아노신 포스포르아미다이트 단량체 7-13을 얻었다.
중간체 ( 7-2 )의 제조: 건성 ACN(1300.00 mL) 중 1(60.00 g, 152.00 mmol)의 용액에 2-아미노-6-클로로푸린(54.0 g, 318.5 mmol) 및 BSA(136.0 g, 667.82 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 투명해질 때까지 50℃에서 교반하였다. 이어서, 혼합물을 -20℃에서 냉각시키고, TMSOTf(60.0g, 271.00 mmol)를 적가하였다. 이어서, 혼합물을 70℃에서 18시간 동안 교반하고, 포화 NaHCO3로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 실리카 겔 상에서 정제하고, 재결정화하여 백색 고체로서 7-2(55.20 g, 113.38 mmol)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, CDCl3): δ ppm 7.87 (d, J = 8.4 ㎐, 2H), 7.82 (s, 1H), 7.25 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 6.09 (dd, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.17 (s, 2H), 4.84-4.80 (m, 2H), 4.60-4.56 (m, 1H), 4.44-4.41 (m, 1H), 2.43 (s, 3H), 2.22 (s, 3H). ESI-LCMS: m/z 487.1 [M+H]+.
중간체 ( 7-3 )의 제조: DCM(300.00 mL) 중에 용해시킨 7-2(33.2 g, 68.20 mmol)의 용액에 DMAP(1.67g, 13.60 mmol) 및 DIEA(22.04g, 136.4 mmol), MMTrCl(42.0 g, 136.4 mmol)을 첨가하였다. 그리고, 혼합물을 N2 하에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 포화 NaHCO3로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 잔류물을 실리카 겔로 정제하여, 백색 고체로서 화합물 7-3(51.00 g, 67.20 mmol, 98.51% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 759.4 [M+H]+.
중간체 ( 7-4 )의 제조: THF(400 L) 중 7-3(54.00 g, 212.06 mmol)의 용액에 0℃에서 NH4OH(100.00 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반하고, 농축시키고, DCM 중 1 내지 2% MeOH를 사용하여 실리카 겔로 정제하여, 황색 고체로서 7-4(51.00 g, 178.48 mmol, 99.98% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ ppm 8.26 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.78-7.76 (m, 2H), 7.35-7.25 (m, 12H), 7.16 (t, J = 7.2 ㎐, 2H), 6.82 (dd, J = 8.8 ㎐, 2H), 6.14 (s, 1H), 5.62 (s, 1H), 4.40-4.35 (m, 4H), 3.69 (s, 3H), 3.36 (s, 1H), 2.39 (s, 3H). ESI-LCMS: m/z 717.4 [M+H]+.
중간체 ( 7-5 )의 제조: 메탄올 중 나트륨 메톡사이드의 용액(300.00 mL, 2 N)에 7-4(47.00 g, 65.54 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 중에서 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 CC(DCM:메틸 알코올 = 50:1)로 정제하여, 백색 고체로서 7-5(36.50 g, 61.38 mmol, 93.66% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ ppm 8.15 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.41-7.32 (m, 4H), 7.32-7.23 (m, 6H), 7.18 (t, J = 7.16 ㎐, 2H), 6.85 (d, J = 8.68 ㎐, 2H), 6.19 (s, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.28 (s, 1H), 4.81 (s, 1H),4.20-4.06 (m, 1H), 3.90 (s, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.65-3.50 (m, 2H). ESI-LCMS: m/z 595.4 [M+H]+.
중간체 ( 7-6 )의 제조: 건성 DCM(5.00 mL) 중 7-5(36.50 g, 61.38 mmol)의 용액에 DIPEA(15.87 g, 122.77 mmol, 21.44 mL), DMAP(1.50 g, 12.28 mmol) 및 TrtCl(20.48 g, 73.66 mmol)을 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 질소 하에서 실온에서 20시간 동안 교반하고, 진공 중에서 농축시켰다. 생성물을 cc(PE:EA = 10:1 내지 3:1)로 정제하여, 백색 고체로서 7-6(46.00 g, 54.96 mmol, 89.55% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ ppm 8.08 (s, 1H), 7.47-7.35 (m, 7H), 7.34-7.10 (m, 20H), 6.80 (d, J = 7.76 ㎐, 2H), 6.25 (s, 1H), 5.81 (s, 1H), 4.86 (s, 1H) 4.10-3.87 (m, 2H), 3.69 (s, 3H),3.56-3.30 (m, 2H), 3.29-3.02 (m, 3H).2.00(s, 1H). ESI-LCMS: m/z 837.4 [M+H]+.
중간체 ( 7-7 )의 제조: 건성 DMF(300.00 mL) 중 7-6(32.00 g, 38.23 mmol)의 용액에 -10℃에서 테트라부틸암모늄 요오다이드(3.82 g, 11.47 mmol), 1-브로모-2-메톡시에탄(15.94 g, 114.69 mmol) 및 NaHMDS(21.03 g, 114.69 mmol)를 적가하였다. 얻어진 현탁액을 -10℃에서 30시간 동안 교반하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 진공 중에서 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 백색 고체로서 7-7(31.46 g, 35.15 mmol, 91.94% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ ppm 8.04 (s, 1H), 7.40-7.34 (m, 6H), 7.33-7.08 (m, 20H), 6.78 (d, J = 8.9 ㎐, 2H), 5.83 (s, 1H), 4.04-3.98 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.67-3.46 (m, 3H), 3.44-3.36 (m, 2H), 3.27-3.15(m,2H),3.12 (s, 3H),2.88(s,1H). ESI-LCMS: m/z 895.4 [M+H]+.
중간체 ( 7-8 )의 제조: 1,4-다이옥산(150.00 L) 중 7-7(42.00 g, 46.93 mmol)의 용액에 실온에서 6 N 염산(46.93 mmol, 150.00 mL)을 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 석유 에테르로 추출하였다. 수층을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 중에서 농축시켜, 백색 고체로서 7-8(20.00 g, 37.12 mmol)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ ppm 11.08-10.82(m,1H),8.41-8.13 (m, 1H), 7.35-6.99(m,1H),6.85-6.62 (m, 2H), 5.90-5.78 (m, 1H), 4.71 (t, J = 5.16 ㎐, 1H), 4.46 (t, J = 4.64 ㎐, 1H), 4.02-3.97(m, 1H), 3.78-3.70 (m, 2H), 3.70-3.62 (m, 1H), 3.57(dd, J = 12.12 ㎐, 1H), 3.43 (t, J = 4.60 ㎐, 2H),3.18(s,3H). ESI-LCMS: m/z 367.2 [M+H] +.
중간체 ( 7-9 )의 제조: 피리딘(100.00 mL) 중 7-8(20.00 g, 54.60 mmol)의 용액에 실온에서 아이소부틸 클로라이드(17.45 g, 163.80 mmol)를 적가하였다. 얻어진 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 추출하고, 물로 세척하였다. 유기 층을 진공 중에서 농축시켰다. 피리딘 중에 용해시키고, 실온에서 아이소부틸 클로라이드(17.45 g, 163.80 mmol)를 적가하였다. 얻어진 현탁액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 백색 고체로서 7-9(13.00 g, 25.67 mmol)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 507.3 [M+H]+.
중간체 ( 7- 10 )의 제조: THF(100.00 mL) 중 7-9(13.00 g, 25.67 mmol)의 용액에 탄소 상의 팔라듐 10%(1.30 g)를 첨가하고, 혼합물을 H2에서 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 여과하고, 여과액을 진공 중에서 농축시켜, 갈색 고체로서 7-10(11.70 g, 24.35 mmol)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 481.3 [M+H]+.
중간체 ( 7-11 )의 제조: DCM(150.00 mL) 중 7-10(11.70 g, 24.35 mmol)의 용액에 0℃에서 MMTrCl(11.25 g, 36.53 mmol) 및 2,4,6-콜리딘(5.90 g, 48.70 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 0℃에서 AgNO3(6.20 g, 36.53 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에서 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 백색 고체로서 7-11(8.5 g, 11.22 mmol)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 753.5 [M+H]+.
중간체 ( 7-12 )의 제조: 피리딘(50.00 mL) 중 7-11(8.5 g, 11.29 mmol)의 용액에 0℃에서 2 N NaOH(50.00 mL)를 적가하고, 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 포화 NH4Cl(aq.)을 사용하여 pH = 7 내지 8로 중화시키고, 300 mL의 H2O 및 800 mL의 DCM을 첨가하여 용액을 분리하였으며, 수성 층을 DCM으로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰으며, 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 7-12(6.3 g, 9.23 mmol, 81.73% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ ppm 11.78 (br s, 1H),11.41 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.46 (t, J = 7.28 ㎐, 4H), 7.31-7.21 (m, 6H), 7.15(t, J = 7.32 ㎐, 2H), 6.76(d, J = 8.92 ㎐, 2H),5.82 (s, 1H), 5.08 (t, J = 4.08 ㎐, 1H), 3.99-3.85(m, 3H), 3.65 (s, 3H), 3.62-3.55 (m, 1H), 3.42-3.38 (m, 2H), 3.29-3.19 (m, 1H), 3.10 (s, 3H), 3.06-2.99 (m, 1H), 2.89-2.74 (m, 2H), 1.96 (d, J =4.08 ㎐, 1H), 1.20-1.12 (m, 6H). ESI-LCMS: m/z 883.4 [M+H]+.
( 7-13 )의 제조: DCM(60 mL) 중 7-12(6.3 g, 9.10 mmol)의 용액에 DMAP(222.00 mg) 및 DIPEA(5.9 mL)를 첨가하였다. 이어서, CEPCl(2.60 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 혼합물을 포화 NaHCO3 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 5.04 g의 7-13을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, CDCl3): δ ppm 11.96 (br s, 1H), 8.57 (s, 1H), 7.98-7.67 (m, 1H), 7.55-7.46 (m, 4H), 7.42-7.34 (m, 2H), 7.25-7.18 (m, 4H), 7.18-7.08 (m, 2H), 6.78-6.68 (m, 2H), 5.79-5.69 (m, 1H), 4.27-4.11 (m, 2H), 4.10-3.73 (m, 2H), 3.73-3.67(m,3H), 3.66-3.31 (m, 7H), 3.30-3.21 (m, 3H), 2.07-2.97 (m, 1H), 2.94-2.78 (m, 1H), 2.70-2.50 (m, 3H), 2.30-1.68 (m, 1H), 1.30-1.07 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, CDCl3): 149.09, 148.09. ESI-LCMS: m/z 883.4 [M+H]+.
실시예 5
적절히 보호된 2'-O-에틸-3'-아미노-5'-포스포르아미다이트(실시예 8, 실시예 9, 실시예 10, 실시예 11)를 반응도식 6 내지 반응도식 10에 나타낸 화학적 변환 후에 제조하였다.
먼저, 티민 염기 3'-NH-MMtr-2'-O-에틸 포스포르아미다이트, 실시예 9의 합성의 경우, 중간체 2를, 예를 들어 다이메틸아미노피리딘의 존재 하에서 메틸 프로피올레이트로 보호하여(반응도식 6), 염기 N-3 보호된 중간체 8-4를 얻음으로써 더 높은 수율로의 2'-O-알킬화를 용이하게 하였다. 추가로, 8-4를 탈아세틸화하여 C-2'-하이드록시 중간체 8-5를 얻었다.
반응도식 6
요오도에탄을 사용하여 추가로 알킬화하여 2'O-에틸 뉴클레오시드 8-6을 얻었다. 중간체 8-6을 앞서의 반응도식 1에 나타낸 화합물 4-10에 대한 것과 유사한 화학반응에 따라, 티민 염기 2'-O-에틸-3'-아미노-5'-포스포르아미다이트 8-11로 전환시켰다.
중간체 ( 8- 4 )의 제조: MeCN(400 mL) 중 8-2(22.0 g, 49.62 mmol)의 용액에 DMAP(1.2 g, 9.92 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 3(5.8 g, 419.5 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 N2 하에서 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 농축시키고, (PE:EA = 6:1)로 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 황색 오일로서 8-4(22.0 g, 40.63 mmol, 81.9% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 564 [M+Na]+.
중간체 ( 8- 5 )의 제조: MeOH(400 mL) 중 8-4(28.0 g, 51.71 mmol)의 용액에 0℃에서 진한 NH4OH 수용액(28 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 농축시키고, (PE:EA = 10:1 내지 2:1)로 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 황색 오일로서 8-5(21.0 g, 42.04 mmol, 81.3% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 522 [M+Na]+.
중간체 ( 8- 6 )의 제조: 요오도에탄(100 mL) 중 8-5(20.0 g, 40.04 mmol)의 용액에 Ag2O(18.6 g, 80.08 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 교반하고, 규조토로 여과하고, 농축시키고, 황색 오일로서 8-6(16.0 g, 30.33 mmol, 75.7% 수율)을 얻었으며, 이것을 다음 단계에서 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 528 [M+H]+.
중간체 ( 8- 7 )의 제조: MeCN(400 mL) 중 8-6(16.0 g, 30.33 mmol)의 용액에 피롤리딘(8.63 g, 121.32 mol, 12 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 농축시키고, (DCM:MeOH = 100:1 내지 50:1)로 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 황색 오일로서 7(12.0 g, 27.94 mmol, 92.1% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 430 [M+H]+.
중간체 ( 8- 8 )의 제조: THF(200 mL) 중 8-7(12.0 g, 27.94 mmol)의 용액에 Pd/C(1.2 g)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에서 실온에서 하룻밤 교반하였다. LC-MS는 7이 완전히 소비되었음을 보여주었다. 여과하고, DCM(100 mL * 3)으로 세척하고, 이어서 농축시켜, 회색 고체로서 8-8(11.0 g, 27.27 mmol, 97.6% 수율)을 얻었으며, 이것을 다음 단계에 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 404 [M+H]+.
중간체 ( 8- 9 )의 제조: DCM(80 mL) 중 8-8(10.0 g, 24.79 mmol)의 용액에 MMTrCl(11.4 g, 37.18 mmol), 2,4,6-콜리딘(2.0 g, 16.61 mmol, 6.5 mL) 및 AgNO3(6.3 g, 37.18 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 여과하고, 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 이어서 농축시키고, (PE:EA = 5:1 내지 1:1)로 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 담황색 고체로서 8-9(16.0 g, 23.68 mmol, 95.5% 수율)를 얻었다.
중간체 ( 8-10 )의 제조: 8-9(4.0 g, 5.92 mmol)를 1.0 N NaOH 용액(20 mL, MeOH/H2O = 9:1)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반하고, 농축시키고, DCM(20 mL * 2)으로 추출하고, 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 (DCM:MeOH = 200:1 내지 50:1)로 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 백색 고체로서 8-10(3.0 g, 53.8 mmol, 90.9% 수율)을 얻었다.
( 8-11 )의 제조: DCM(2.0 mL) 중 8-10(2.36 g, 4.23 mmol)의 용액에 DMAP(103 mg, 0.8 mmol) 및 DIPEA(2.2 g, 16.92 mmol, 2.96 mL)를 첨가하였다. 이어서, CEPCl(1.0 g, 4.23 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 포화 NaHCO3(5 mL)로 세척하고, 유기 층을 분리하고, 수층을 DCM(10 mL * 2)으로 세척하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시키고, 플래시 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체로서 8-11(2.45 g, 3.23 mmol, 76.36% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ 8.62 (s, 1H), 7.74 (dd, J = 1.4 ㎐, 0.5H), 7.60-7.50 (m, 4H), 7.51-7.41 (m, 2H), 7.34- 7.16 (m, 7H), 7.12 (d, J = 1.4 ㎐, 0.5H), 6.88-6.76 (m, 2H), 5.66 (s, 1H), 4.37-4.23 (m, 1H), 4.16-4.05 (m, 1H), 4.05-3.94 (m, 0.5H), 3.88-3.74 (m, 4.5H), 3.72-3.35 (m, 3H), 3.22 (td, J = 10.3, 4.7 ㎐, 0.5H), 3.03-2.89 (m, 1.5H), 2.80-2.69 (m, 1H), 2.61 (t, J = 6.5 ㎐, 1H), 2.37 (td, J = 6.6, 1.3 ㎐, 1H), 1.97 (d, J = 3.5 ㎐, 0.5H), 1.91 (dd, J = 11.4, 1.2 ㎐, 3H), 1.52 (d, J = 4.7 ㎐, 0.5H), 1.29-1.17 (m, 12H), 1.08 (td, J = 7.0, 4.9 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, CDCl3) δ 149.31, 147.14. ESI-LCMS: m/z 576 [M+H]+.
실시예 6
2'-O-에틸-NH-벤조일 5-메틸 시토신 포스포르아미다이트 9-3은, 하기 반응도식 7에 나타낸 바와 같이, 티미딘 중간체 8-8을 3'-아미노 시티딘 유사체 9-1로 전환시킨 후, 알려진 프로토콜을 사용하여 포스피틸화하여 원하는 2'-O-에틸 시티딘 포스포르아미다이트 단량체 9-3을 얻음으로써 수득하였다.
반응도식 7
중간체 ( 9-1 )의 제조: 건성 MeCN(40 mL) 중 8-8(8.2 g, 12.09 mmol)의 용액에 TPSCl(2.5 g, 24.18 mmol) 및 DMAP(2.95 g, 24.18 mmol)를 첨가하고, 이어서 TEA(2.5 g, 24.18 mmol, 3.4 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 N2 하에서 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 진한 NH4OH 수용액(20 mL)을 첨가하고, 얻어진 혼합물을 실온에서 추가 3시간 동안 교반되게 하고, 이어서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼으로 정제하여, 담황색 오일로서 9-1(7.7 g, 11.35 mmol, 수율 93.9%)을 얻었다.
중간체 ( 9-2 )의 제조: 피리딘(80 mL) 중 9-1(8.0 g, 11.86 mmol)의 용액에 0℃에서 벤조일 클로라이드(2.0 g, 14.23 mmol, 1.6 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 추가 1시간 동안 교반하였으며, 2.0 N NaOH(80 mL, MeOH/H2O = 9:1)를 0℃에서 첨가하고, 이어서 혼합물을 0℃에서 추가 2시간 동안 교반되게 하고, 포화 NH4Cl 용액(20 mL)으로 켄칭하고, DCM(30 mL * 2)으로 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(DCM:MeOH = 200:1 내지 50:1)로 정제하여, 황색 고체로서 9-2(5.4 g, 8.2 mmol, 66.3% 수율)를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ 13.35 (s, 1H), 8.40-8.28 (m, 2H), 7.93 (d, J = 1.3 ㎐, 1H), 7.61-7.51 (m, 5H), 7.51-7.43 (m, 4H), 7.33-7.22 (m, 6H), 6.89-6.72 (m, 2H), 5.66 (s, 1H), 4.26-4.19 (m, 2H), 4.08 (dt, J = 10.4, 2.0 ㎐, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.74-3.63 (m, 1H), 3.12 (td, J = 10.3, 4.5 ㎐, 1H), 2.95-2.84 (m, 2H), 2.05 (d, J = 1.1 ㎐, 3H), 1.91 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 1.29 (t, J = 7.1 ㎐, 1H)1.13 (t, J = 7.0 ㎐, 3H).
( 9- 3 )의 제조: DCM(4 mL) 중 9-2(4.2 g, 6.36 mmol)의 용액에 DMAP(776 mg, 6.36 mmol), DIPEA(821 mg, 6.36 mmol, 1.1 mL), 그리고 이어서 CEPCl(1.5 g, 6.36 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 포화 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, DCM(30 mL * 2)으로 추출하였으며, 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 용매를 증발시키고, 잔류물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하여, 담황색 고체로서 9-3(4.9 g, 5.69 mmol, 89.47% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ 13.31 (s, 1H), 8.40-8.31 (m, 2H), 8.03 (s, 0.5H), 7.60-7.52 (m, 5H), 7.52-7.43 (m, 4H), 7.40 (s, 0.5H), 7.31-7.18 (m, 7H), 6.86-6.78 (m, 2H), 5.67 (d, J = 2.3 ㎐, 1H), 4.42-4.26 (m, 1H), 4.24-4.11 (m, 1H), 4.06-3.98 (m, 0.5H), 3.90-3.81 (m, 1.5H), 3.79 (d, J = 3.0 ㎐, 3H), 3.75-3.56 (m, 2H), 3.55-3.37 (m, 1H), 3.22 (td, J = 10.4, 4.5 ㎐, 0.5H), 3.04-2.87 (m, 1.5H), 2.86-2.73 (m, 1H), 2.63 (t, J = 6.4 ㎐, 1H), 2.40 (t, J = 6.5 ㎐, 1H), 2.13 (dd, J = 19.9, 1.1 ㎐, 3H), 1.99 (d, J = 3.8 ㎐, 0.5H), 1.54 (d, J = 4.5 ㎐, 0.5H), 1.31-1.21 (m, 12H), 1.10 (td, J = 7.0, 4.8 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, CDCl3) δ 149.48, 147.08. ESI-LCMS: m/z 861 [M+H]+.
실시예 7
2'-O-에틸 아데노신 포스포르아미다이트 10-8의 합성을 하기 반응도식 8에 나타낸 바와 같이 달성하였다. 부피가 큰 보호기, 예컨대 4-모노메톡시 트라이틸 기에 의한 6-4의 고리외 아민 기의 보호는 고수율로 2'-O-알킬화를 달성하는 데 필요하였다. 이어서, 중간체 6-4를 Ag2O/EtI와 반응시켜, MMTr 기의 탈보호 후에 94% 단리 수율로 2'-O-에틸 중간체 10-2를 얻었다. 이러한 보호 전략은 고수율로의 핵심 3'-아지도-2'-OEt 중간체 10-3의 효율적인 합성을 가져왔다. 이 중간체 10-3을 화합물 6-10에 대해 기재된 것과 유사한 화학반응(반응도식 4)에 따라, 2'-O-에틸 아데노신 포스포르아미다이트 10-8로 전환시켰다.
반응도식 8
중간체 ( 10- 1 )의 제조: DCM(400.00 mL) 중 화합물 6-4(23.6 g, 44 mmol)의 용액에 DMAP(543 mg, 4 mmol) 및 TEA(9.2 g, 9 mmol), MMTr-Cl(20.6 g, 67 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 N2 하에서 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. LC-MS는 6-4가 소비되었음을 보여주었으며, 포화 NaHCO3로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 석유 에테르 중 20 내지 50% EtOAc를 사용하여 실리카 겔 상에서 정제하여, 담황색 고체로서 화합물 10-1(26.1 g, 32 mmol, 73.09% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ = 8.38 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.60-7.55 (m, 4H), 7.46-7.20 (m, 19H), 6.84 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 6.35 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 5.95 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.14-5.12 (m, 1H), 4.46 (t, J = 5.6 ㎐, 2H),4.11-4.05 (m, 1H), 3.90-3.82 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 0.94 (s, 8H). ESI-LCMS: m/z 803.4 [M+H]+.
중간체 ( 10- 2 )의 제조: CH3CH2I(200 mL) 중 화합물 10-1(26.1 g, 32 mmol)의 용액에 Ag2O(9.7 g, 42 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 환류시켰다. 이어서, 여과하여, 황색 고체로서 화합물 10-2(25.4 g, 30 mmol, 94.04% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 831.3 [M+H]+.
중간체 ( 10-3 )의 제조:화합물 10-2(25.4 g, 30 mmol)의 용액을 DCM(200 mL) 중에 용해시키고 TCA(12 mL)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 6시간 동안 교반하고(LC-MS는 10-2가 소비되었음을 보여주었음), 이어서 포화 NaHCO3로 세척하고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 DCM 중 1 내지 3% MeOH를 사용하여 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 화합물 10-3(15.7 g, 28 mmol, 91.95% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ = 8.33 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.63-7.60 (m, 4H), 7.47-7.37 (m, 8H), 6.09 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 4.95(t, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.67(t, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.17-4.13 (m, 1H), 3.97-3.93 (m, 1H), 3.86-3.82 (m, 1H), 3.68-3.63 (m, 2H),1.15-1.11 (m, 3H), 0.97 (s, 9H). ESI-LCMS: m/z 589.2 [M+H]+.
중간체 ( 10-4 )의 제조: 0℃에서 피리딘(150 mL) 중 화합물 10-3(15.7 g, 28 mmol)의 용액에 BzCl(4.7 g, 34 mmol)을 5분에 걸쳐 주사기로 첨가하고, 이어서 혼합물을 20℃까지 가온되게 하였다. 이어서, N2 하에서 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 0℃로 냉각시키고, 수산화암모늄(20 mL, 30%)을 첨가하고, 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EA 및 물로 희석시키고, EA로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 화합물 10-4(10.9 g, 16 mmol, 58.52% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 663.8 [M+H]+.
중간체 ( 10-5 )의 제조: THF(100 mL) 중 화합물 10-4(10.9 g, 16 mmol)의 용액에 Pd/C(1.9 g)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에서 20℃에서 6시간 동안 교반하고, 이어서 여과하고, 여과액을 농축시켜, 백색 고체로서 화합물 10-5(9.8 g, 15 mmol, 93.95% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 637.4 [M+H]+.
중간체 ( 10-6 )의 제조: 무수 DCM(100 mL) 중 화합물 10-5(9.8 g, 15 mmol)의 용액에 콜리딘(3.7 g, 31 mmol) 및 AgNO3(3.9 g, 31 mmol), MMTr-Cl(5.7 g, 18 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 N2 하에서 20℃에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 여과하고, H2O로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 석유 에테르 중 20 내지 50% EA를 사용하여 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 화합물 10-6(10.5 g, 11 mmol, 75.19% 수율)을 얻었다.
중간체 ( 10-7 )의 제조: THF(100 mL) 중 화합물 10-6(10.5 g, 11 mmol)의 용액에 TBAF(1 M)(11 mmol, 12 mL)를 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 하룻밤 교반하고, 이어서 포화 NaHCO3로 세척하고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 DCM 중 1 내지 2% MeOH를 사용하여 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 화합물 10-7(5.6 g, 8 mmol, 72.28% 수율)을 얻었다.
( 10-8 )의 제조: DCM(50 mL) 중 화합물 10-7(5.6 g, 8 mmol)의 용액에 DMAP(204 mg, 2 mmol) 및 DIPEA(3.2 g, 25 mmol, 4.3 mL)를 첨가하고, CEPCl(2.3 g, 10 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. TLC는 10-7이 소비되었음을 보여주었으며, 포화 NaHCO3 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피 및 플래시 분취용 HPLC로 정제하여, 백색 고체로서 10-8(5.30 g, 6.09 mmol, 72.88% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒,CDCl3): δ = 9.17 (s,0.5H), 9.07 (s, 0.5H), 8.75 (s,0.5H), 8.72 (s, 0.5H), 8.51 (s,0.5H), 8.22 (s, 0.5H),8.05 (t, J = 7.2 ㎐, 2H), 7.65-7.61 (m, 1H), 7.57-7.48 (m, 6H), 7.39 (dd, J = 8.8 ㎐, 2H),7.21-7.10 (m, 6H), 6.74-6.69 (m, 2H), 6.01 (d, J = 3.9 ㎐, 1H), 4.40-4.21 (m, 2H), 4.14-4.11 (m, 0.5H), 3.99-3.93 (m, 0.5H), 3.88-3.80 (m, 1H), 3.70-3.50 (m, 7H), 3.41-3.32 (m, 1H), 2.93-2.80 (m, 2H), 2.68-2.50 (m, 2H), 2.27 (d, J = 4.0 ㎐, 0.5H), 2.27 (d, J = 4.0 ㎐, 0.5H), 1.25-1.12 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, CDCl3): 148.79, 148.08. ESI-LCMS: m/z 870.3[M+H]+.
실시예 8
하기 반응도식 9에 나타낸 구아노신 염기 2'-O-에틸 포스포르아미다이트 12-9의 합성은 핵심 2'-하이드록시 중간체 7-4로부터 출발하였다. 하기 반응도식 9에 나타낸 바와 같이, 중간체 7-4를 EtI/Ag2O 또는 EtI/K2CO3를 사용하여 2'-O-알킬화하였지만, 원하는 2'-OEt 중간체 7-5를 고수율로 얻을 수 없었다.
반응도식 9
따라서, 2'-O-알킬화를 개선하고 산성 조건 하에서 더 안정한 구아노신 중간체를 제조하기 위한 혁신적인 방법을 하기 반응도식 10에 나타낸 바와 같이 설계하였다. 6-클로로 중간체 7-4를 NaH/BnOH/THF와 반응시켜, 한 단계로 BnOH로의 C-6-Cl의 치환과 5'-O-톨루오일에스테르의 가수분해를 동시에 행하여 C-6-OBn 중간체 12-1을 얻었다.
반응도식 10
5'-하이드록시 기를 DMTr로 선택적으로 보호하여 2'-OH 뉴클레오시드 12-2를 얻었다. 얻어진 중간체 12-2를 NaH/EtI와 반응시켜 2'-O-에틸 중간체 12-3을 얻었으며, 이것을 산성 조건(TFA/DCM) 하에서 처리하여, 어떠한 탈푸린화도 없이 5'-하이드록시 중간체 12-4를 얻었다. 이어서, 12-4와 iBuCl을 반응시켜 비스-아이소부티레이트 중간체 12-5를 얻었으며, 이것을 Pd/C를 사용하여 수소화하여 2'-O-에틸 구아노신 중간체 12-6을 얻었다. 이러한 탈보호 및 재보호 전략은 염기성 조건(NaH/EtI/THF) 하에서의 효율적인 2'-O-알킬화에 성공적으로 적용되었다. 얻어진 2'-O-에틸 중간체 12-6을 실시예 12에서 화합물 7-13에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 따라 원하는 2'-O-에틸구아노신 포스포르아미다이트 단량체 12-9로 전환시켰다.
중간체 ( 12-1 )의 제조: 50 mL THF 중 화합물 7-4(48.0 g, 66 mmol)의 용액에 벤질 알코올 중 소듐 벤질옥사이드 용액(90 mL의 벤질 알코올 중에 NaH(13 g)를 첨가함으로써 새로 제조됨) 90 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 50 mL의 포화 NH4Cl 용액으로 처리하였다. 혼합물을 CH2Cl2로 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 12-1(17.5 g, 26 mmol, 45.63%)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ ppm 8.13 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.34-7.16 (m, 15H), 6.82 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 6.13 (s, 1H), 5.76 (s, 1H),5.20-5.12 (m, 1H), 5.10-4.78 (m, 2H), 3.88-3.70 (m, 2H),3.60 (s, 3H), 3.58-3.51 (m,1H), 3.34 (s, 1H). ESI-LCMS: m/z 671.2 [M+H]+.
중간체 ( 12-2 )의 제조: 피리딘(200 mL) 중 화합물 12-1(17.5 g, 26 mmol)의 용액에 0℃에서 DMTrCl(10.5 g, 31 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 35℃에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 생성물 12-2(21.8 g, 22 mmol, 85.87% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 974.6 [M+H]+.
중간체 ( 12-3 )의 제조: THF(300 mL) 중 12-2(21.8 g, 22 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(1.1 g, 44 mmol)를 첨가하였다. 이어서, EtI(10.4 g, 67 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 35℃에서 4시간 동안 교반하고, 이어서 50 mL의 포화 NH4Cl 용액으로 처리하였다. 혼합물을 CH2Cl2로 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4로 건조시켰다. 용매를 증발시켜, 황색 고체로서 12-3(21.2 g, 21 mmol, 94.55% 수율)을 얻었다.
중간체 ( 12-4 )의 제조: DCM(200 mL) 중 12-3(21.2 g, 21 mmol)의 용액에 0℃에서 TFA(10 mL)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 35℃에서 4시간 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3로 켄칭하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 12-4(8.7 g, 20 mmol, 96.32% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ ppm 8.17 (s, 1H), 7.53-7.50 (m, 2H), 7.42-7.36 (m, 3H), 6.61 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 5.91-5.90 (m, 1H), 5.76 (s, 1H),5.51-5.50 (m, 2H), 4.76-4.75 (m, 1H), 4.55-4.54 (m, 1H),4.06-3.97 (m, 3H), 3.64-3.58 (m, 4H), 2.51 (s, 1H). ESI-LCMS: m/z 427.2 [M+H]+.
중간체 ( 12-5 )의 제조: 피리딘(100 mL) 중 12-4(8.7 g, 20 mmol)의 용액에 iBuCl(5.4 g, 51 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 12-5(8.5 g, 15 mmol, 73.54% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 567.4 [M+H] +.
중간체 ( 12-6 )의 제조: THF(100 mL) 중 12-5(8.5 g, 15 mmol)의 용액에 25℃에서 Pd/C(801 mg, 6 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 H2 하에서 16시간 동안 교반하였다. 여과하고, EA로 세척하고, 농축시켜, 황색 고체로서 조 생성물 12-6(6.7 g, 14 mmol, 99.15% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 451.3 [M+H] +.
중간체 ( 12- 7 )의 제조: 무수 DCM(70 mL) 중 화합물 12-6(6.7 g, 14 mmol)의 용액에 콜리딘(3.7 g, 31 mmol) 및 AgNO3(3.0 g, 17 mmol), MMTr-Cl(5.5 g, 17 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 N2 하에서 20℃에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 여과하고, H2O로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 화합물 12-7(8.4g, 11 mmol, 75.19% 수율)을 얻었다.
중간체 ( 12-8 )의 제조: 화합물 12-7(8.4 g, 11 mmol)을 0℃에서 MeOH/THF/H2O(65/30/5) 중 1 N NaOH 용액 80 mL에 첨가하였다. 현탁액을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl 용액을 첨가함으로써 켄칭하였다. 용액을 DCM으로 추출하고, 합한 유기 층을 포화 NaHCO3 용액, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 12-8(5.60 g, 8.35 mmol, 72.28% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO): δ ppm 12.13 (br s, 1H), 11.38 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.47-7.44 (m, 4H), 7.30-7.13 (m, 8H), 6.75 (d, J = 8.96 ㎐, 2H), 5.79 (s, 1H), 5.10 (t, J = 4.28 ㎐, 1H), 3.95-3.89 (m, 3H), 3.65 (s, 3H), 3.46-3.26 (m, 2H), 2.84-2.80 (m, 2H), 2.79-2.72 (m, 1H), 1.85 (s, 1H), 1.18-1.13 (m, 6H). 1.08-0.98 (m, 3H).
( 12-9 )의 제조: DCM(50 mL) 중 12-8(5.60 g, 8.35 mmol)의 용액에 DMAP(220 mg) 및 DIPEA(3 mL)를 첨가하였다. 이어서, CEPCl(2.6 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 포화 NaHCO3 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 컬럼 크로마토그래피 및 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 5.4 g(70.04%)의 12-9를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, CDCl3): δ ppm 12.11 (br s, 1H), 8.88 (s, 1H), 7.97-7.64 (m, 1H), 7.51-7.49 (m, 4H), 7.39-7.34 (m, 2H)，7.23-7.09 (m, 6H), 6.75-6.69 (m, 2H), 5.67-5.65 (m, 1H), 4.22-4.08 (m, 2H), 3.84-3.29 (m, 10H), 2.87-2.51 (m, 5H), 2.08-1.61(m, 1H), 1.24-1.07 (m, 18H), 1.01-0.98 (m, 3H). 31PNMR (162 ㎒, CDCl3): 149.03, 147.96. ESI-LCMS: m/z 853.4 [M+H]+.
실시예 9
반응도식 11
중간체 ( 13-3 )의 제조: DMF(1.5 L) 중 13-2(260.0 g, 605.5 mmol) 및 DBU(305.0 g, 1.21 mol)의 용액에 PMBCl(113.7 g, 908.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜, 황색 오일로서 조 생성물 13-3(460.0 g, 조 상태)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 550 [M+H]+.
중간체 ( 13-4 )의 제조: THF(1.5 L) 및 H2O(500 mL)의 혼합물 중 13-3(460.0 g, 조 상태)의 용액에 NaOH(167.4 g, 4.1 mol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 이어서 냉수에 붓고, EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 PE:EA = 5:1로 세척하여, 백색 고체로서 생성물 13-4(212.0 g, 544.4 mmol, 89.92% 수율(2 단계에 걸침))를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 390 [M+H]+.
중간체 ( 13- 5 )의 제조: DCM(2 L) 중 13-4(207.0 g, 531.6 mmol) 및 피리딘(210.2 g, 2.6 mol, 214 mL)의 용액에 N2 하에서 DMTrCl(197.6 g, 584.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, MeOH로 켄칭하고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 고체로서 13-5(330.0 g, 477.0 mmol, 89.7% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 7.81 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.39 (d, J = 7.6 ㎐, 2H), 7.33 (t, J = 7.6 ㎐, 2H), 7.28-7.25 (m, 7H), 6.91 (d, J = 7.6 ㎐, 4H), 6.86 (d, J = 8.4 ㎐, 2H), 6.33 (d, J = 5.2 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 5.49 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 4.91 (s, 2H), 4.51 (dd, J = 5.2, 8.8 ㎐, 1H), 4.21 (t, J = 6.8 ㎐, 1H), 4.08-4.05 (m, 1H), 3.75 (s, 6H), 3.72 (s, 3H). ESI-LCMS: m/z 692 [M+H]+.
중간체 ( 13- 6 )의 제조: 건성 THF(750 mL) 중 13-5(150.0 g, 216.8 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(10.4 g, 433.7 mmol) 및 메틸 p-톨루엔설포네이트(66.1 g, 433.7 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반되게 하고, TBAI(16.0 g, 43.3 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 2일 동안 교반하고, 이어서 포화 NH4Cl(aq.)로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 고체로서 13-6(55.0 g, 70.0 mmol, 32.28% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 786 [M+H]+.
중간체 ( 13-7 )의 제조: 건성 DMF(500 mL) 중 13-6(52.0 g, 66.1 mmol) 및 K2CO3(18.2 g, 132.3 mmol)의 용액에 Ar 하에서 메틸 p-톨루엔설포네이트(18.4 g, 99.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 7(38.5 g, 48.1 mmol, 72.74% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d6): δ = 7.81 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 7.41-7.38 (m, 2H), 7.34-7.31 (m, 2H), 7.28-7.23 (m, 7H), 6.92-6.90 (m, 4H), 6.84-6.81 (m, 2H), 5.98 (d, J = 3.6 ㎐, 1H), 5.59 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 5.40 (dd, J = 3.6, 6.4 ㎐, 1H), 4.90 (dd, J = 14.0, 32.0 ㎐, 2H), 4.67 (dd, J = 6.4, 7.6 ㎐, 1H), 4.09-4.05 (m, 1H), 3.74 (d, J = 0.8 ㎐, 6H), 3.70 (s, 3H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -75.31, -75.69, -76.69, -77.35. ESI-LCMS: m/z 800 [M+H]+.
중간체 ( 13-8 )의 제조: THF(600 mL) 중 13-7(33.0 g, 41.2 mmol)의 용액에 0℃에서 NaBH4(2.3 g, 61.8 mmol) 및 EtOH(20 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반되게 하고, 포화 NH4Cl(aq.)로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 13-8(25.0 g, 32.3 mmol, 78.51% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 7.78 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 7.41-7.38 (m, 2H), 7.34-7.30 (m, 2H), 7.28-7.21 (m, 7H), 6.92-6.89 (m, 4H), 6.84-6.82 (m, 2H), 5.98 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.83 (t, J = 6.8 ㎐, 1H), 5.60 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 5.30 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.90 (dd, J = 14.0, 33.2 ㎐, 2H), 4.61 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.08-4.05 (m, 1H), 3.74 (d, J = 0.8 ㎐, 6H), 3.70 (s, 3H), 3.39 (dd, J = 4.0, 14.8 ㎐, 1H), 3.30 (dd, J = 2.8, 11.2 ㎐, 1H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -79.67, -80.04, -80.87, -81.25. ESI-LCMS: m/z 772 [M+H]+.
중간체 ( 13-9 )의 제조: THF(250 mL) 중 13-8(26.0 g, 33.6 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(808 mg, 33.6 mmol) 및 MeI(23.9 g, 168.4 mmol, 10.4 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반되게 하고, 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜, 황색 오일로서 조 생성물 13-9(29.0 g)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 786 [M+H]+.
중간체 ( 13-10 )의 제조: DCM(200 mL) 중 13-9(29.0 g, 36.9 mmol)의 용액에 MeOH(20 mL) 중 p-TsOH(10.0 g)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하고, pH가 7이 될 때까지 포화 NaHCO3로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 13-10(13.5 g, 27.9 mmol, 82.90% 수율(2 단계에 걸침))을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d6): δ = 7.99 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 7.22 (d, J = 8.4 ㎐, 2H), 6.85 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 6.01 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 5.89 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 5.46 (t, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.17 (t, J = 6.4 ㎐, 1H), 4.90 (dd, J = 14.0, 32.4 ㎐, 2H), 4.43 (t, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.00-3.97 (m, 1H), 3.74-3.67 (m, 6H), 3.64-3.60 (m, 1H), 3.33 (s, 3H). ESI-LCMS: m/z 484 [M+H]+.
중간체 ( 13- 11 )의 제조: DCM(300 mL) 중 13-10(28.0 g, 57.9 mmol) 및 TEA(11.7 g, 115.8 mmol, 16 mL)의 용액에 Ar 하에서 BzCl(12.2 g, 86.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 투명 오일로서 13-11(31.0 g, 52.7 mmol, 91.10% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d6): δ = 8.00 (d, J = 3.2 ㎐, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.68 (t, J = 7.6 ㎐, 1H), 7.54 (t, J = 7.6 ㎐, 1H), 7.20 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 6.82 (d, J = 8.4 ㎐, 2H), 5.97 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.78 (d, J = 8.4 ㎐, 1H), 5.38 (t, J = 6.4 ㎐, 1H), 4.87 (dd, J = 14.0, 27.2 ㎐, 2H), 4.65-4.60 (m, 2H), 4.56-4.51 (m, 1H), 4.28-4.24 (m, 1H), 3.76 (t, J = 10.4 ㎐, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.35 (s, 3H). ESI-LCMS: m/z 588 [M+H]+.
중간체 ( 13-12 )의 제조: ACN(300 mL) 및 H2O(100 mL)의 혼합물 중 13-11(30.0 g, 51.0 mmol)의 용액에 CAN(83.9 g, 153.1 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 45℃에서 24시간 동안 교반한 후에, 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 13-12(20.0 g, 42.7 mmol, 83.80% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 468 [M+H]+.
중간체 ( 13-13 )의 제조: THF(150 mL) 중 13-12(13.0 g, 27.8 mmol)의 용액에 TPP(10.9 g, 41.7 mmol) 및 H2O(5.0 g, 278.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 5시간 동안 교반하고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 13-13(11.5 g, 26.0 mmol, 93.67% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 442 [M+H]+.
중간체 ( 13-14 )의 제조: DCM(100 mL) 중 13-13 (10.5 g, 23.7 mmol) 및 DMAP(581 mg, 4.7 mmol)의 용액에 N2 하에서 MMTrCl(11.0 g, 35.6 mmol) 및 TEA(4.8 g, 47.5 mmol, 6.6 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, MeOH로 켄칭하고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 13-14(15.7 g, 22.0 mmol, 92.47% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 714 [M+H]+.
중간체 ( 13- 15 )의 제조: 1 N NaOH(MeOH:H2O = 4:1)(80 mL) 중 13-14(4.0 g, 5.6 mmol)의 용액인 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 반응물을 포화 NH4Cl(aq.)을 사용하여 pH = 7 내지 8로 중화시키고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 13-15(3.2 g, 5.2 mmol, 93.66% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.37 (d, J = 2.4 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 7.91 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.50-7.48 (m, 4H), 7.39-7.36 (m, 2H), 7.29 (t, J = 7.6 ㎐, 4H), 7.22-7.18 (m, 2H), 6.86 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 6.19 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.67 (dd, J = 2.0, 8.0 ㎐, 1H), 5.16 (t, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.28 (t, J = 5.6 ㎐, 1H), 3.78 (dd, J = 7.6, 12.8 ㎐, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.38 (s, 3H), 3.31-3.26 (m, 4H), 3.06-3.01 (m, 1 H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -73.96, -74.34, -78.81, -79.20. ESI-LCMS: m/z 610 [M+H]+.
( 13- 16 )의 제조: 건성 DCM(30 mL) 중 13-15(1.5 g, 2.4 mmol) 및 DCI(145 mg, 1.2mmol)의 용액에 Ar 하에서 CEP[N(iPr)2]2(816 mg, 2.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 10% NaHCO3(aq.) 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 13-16(1.5 g, 1.8 mmol, 75.28% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.41 (s, 1 H), 7.64 (dd, J = 8.0, 41.6 ㎐, 1H), 7.51-7-47 (m, 4H), 7.38-7.36 (m, 2H), 7.29 (t, J = 7.6 ㎐, 4H), 7.20 (t, J = 7.2 ㎐, 2H), 6.86 (dd, J = 3.6, 8.8 ㎐, 2H), 6.14 (dd, J = 6.8, 106.8 ㎐, 1H), 5.69 (dd, J = 8.0, 66.4 ㎐, 1H), 3.82-3.63 (m, 7H), 3.61-3.42 (m, 5H), 3.39-3.28 (m, 7H), 3.20-2.93 (m, 1H), 2.75-2.72 (m, 1H), 2.68-2.64 (m, 1H), 1.10 (dd, J = 4.8, 6.8 ㎐, 6H), 1.00 (dd, J = 6.4, 36.4 ㎐, 6H). 31P-NMR (162 ㎒, DMSO-d 6): 148.37, 147.75. 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -73.87, -74.25, -74.62, -78.45, -78.83, -78.99, -79.37. ESI-LCMS: m/z 808 [M-H]-.
실시예 10
반응도식 12
중간체 ( 14- 17 )의 제조: 건성 ACN(100 mL) 중 14-14(7.1 g, 9.9 mmol), DMAP(2.4 g, 19.9 mmol) 및 TEA(2.0 g, 19.9 mmol, 2.77 mL)의 용액에 TIPSCl(4.5 g, 14.9 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 후에, 진한 NH4OH(30 mL)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 완료 시에, 용매를 제거하고, 잔류물을 EA 중에 용해시키고, 포화 NH4Cl(aq.) 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 14-17(6.1 g, 8.5 mmol, 86.03% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 713 [M+H]+.
중간체 ( 14-18 )의 제조: 0℃에서 피리딘(50 mL) 중 14-17(5.1 g, 7.1 mmol)의 용액에 BzCl(1.5 g, 10.7 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후에, 200 mL의 H2O 및 300 mL의 EA를 첨가하여 용액을 분리하고, 수성 층을 EA로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜, 황색 오일로서 조 생성물 14-18(6.2 g)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 817 [M+H]+.
중간체 ( 14-19 )의 제조: 피리딘(60 mL) 중 조 생성물 14-18(6.2 g)의 용액에 0℃에서 2 N NaOH(MeOH:H2O = 4:1 중)(30 mL)를 적가하고, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 포화 NH4Cl(aq.)로 중화시켜 pH = 7 내지 8을 얻었으며, 300 mL의 H2O 및 400 mL의 EA를 첨가하여 용액을 분리하였으며, 수성 층을 EA로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 MPLC로 정제하여, 백색 고체로서 14-19(4.1 g, 5.7 mmol, 80.3% 수율(2 단계에 걸침))를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.30 (s, 1H, D2O로 교환됨), 8.47 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 8.02 (d, J = 7.6 ㎐, 2H), 7.63 (t, J = 7.2 ㎐, 1H), 7.54-7.45 (m, 6H), 7.35-7.25 (m, 7H), 7.19 (t, J = 7.2 ㎐, 2H), 6.83 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 6.10 (d, J = 3.6 ㎐, 1H), 5.19 (t, J = 4.0 ㎐, 1H), 3.77-3.70 (m, 6H), 3.64-3.61 (m, 2H), 3.46-3.43 (m, 1H), 3.35 (s, 3H), 3.31-3.26 (m, 1H), 3.03 (d, J = 8.8 ㎐, 1H, D2O로 교환됨). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -73.47, -73.85, -78.26, -79.64. ESI-LCMS: m/z 713 [M+H]+.
( 14- 20 )의 제조: 건성 DCM(20 mL) 중 14-19(1.7 g, 2.3 mmol) 및 DCI(170 mg, 1.1 mmol)의 용액에 Ar 하에서 CEP[N(iPr)2]2(790 mg, 2.6 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 10% NaHCO3(aq.) 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 14-20(1.8 g, 1.9 mmol, 82.7% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.35 (s, 1 H), 8.20 (dd, J = 8.0, 81.6 ㎐, 1H), 8.03-8.00 (m, 2H), 7.64 (t, J = 7.6 ㎐, 1H), 7.54-7.44 (m, 6H), 7.37-7.16 (m, 9H), 6.82 (dd, J = 9.2, 16.4 ㎐, 2H), 6.14 (dd, J = 4.8, 90.4 ㎐, 1H), 4.15-4.02 (m, 1H), 3.90-3.40 (m, 11H), 3.36-3.24 (m, 6H), 3.12-2.98 (m, 1H), 2.77-2.73 (m, 2H), 1.13 (d, J = 6.8 ㎐, 6H), 1.05 (dd, J = 6.8, 28.0 ㎐, 6H). 31P-NMR (162 ㎒, DMSO-d 6): 148.20, 147.96. 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -73.36, -73.74, -73.98, -74.36, -77-89, -78.28, -78.55, -78.94. ESI-LCMS: m/z 913 [M+H]+.
실시예 11
반응도식 13
중간체 ( 15-21 )의 제조: 건성 아세토니트릴(900 mL) 중 화합물 15-1(90 g, 238.5 mmol)의 용액에 N-(5H-푸린-6-일)벤즈아미드(85.6 g, 357.7 mmol) 및 BSA(155.3 g, 763.2 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 50℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 -5℃에서 냉각시키고, TMSOTf(79.5 g, 357.8 mmol)를 주사기로 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 N2 하에서 80℃에서 72시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, 농축시켰다. 그리고 이어서, 물을 첨가하고, EA로 추출하였다. 추출물을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 고체로서 15-21(120 g, 215.62 mmol, 90.4% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.56 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.00 (t, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.76-7.74 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.64~7.60 (t, J = 7.5 ㎐, 1H), 7.54~7.50 (t, J = 7.68 ㎐, 2H), 7.27~7.25 (d, J = 7.8 ㎐, 2H,), 6.31 (d, J = 3.3 ㎐, 1H), 6.14~6.11 (m, 1H), 5.05~5.01 (t, J = 8.0 ㎐,1H), 4.67~4.63 (m, 1H), 4.53-4.49 (m, 1H), 4.37-4.34 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.12 (s, 3H). ESI-LCMS: m/z 556 [M+H]+.
중간체 ( 15-22 )의 제조: 메탄올(1300 mL) 중 15-21(120 g, 215.6 mmol) 및 메틸아민(267.9 g, 8.6 mol)의 용액을 N2 하에서 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, PET 중 25% EA에서 1시간 동안 교반하여, 백색 고체로서 15-22(52 g, 1778.0 mmol, 82.5% 수율)를 얻었다.1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.36 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.40 (s, 2H), 6.24-6.22 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 5.91~5.90 (d, J = 4 ㎐, 1H), 5.63~5.60 (m, 1H), 5.04~5.00 (m, 1H,), 4.34~4.32 (m, 1H), 3.99~3.98 (d, J = 4 ㎐,1H), 3.72~3.55 (m, 2H). ESI-LCMS: m/z 292 [M+H]+.
중간체 ( 15- 23 )의 제조: 피리딘(250 mL) 중 15-22(50 g, 171.1 mmol) 및 DMTrCl(121.7 g, 359.3 mmol)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 켄칭하고, EA로 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 고체로서 15-23(117 g, 130.4mmol, 76.2% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.29 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.20-7.12 (m, 19H), 6.74 (m, 8H), 5.87 (s, 1H), 5.08 (s, 1H), 4.39 (s, 1H), 3.62 (s, 12H), 3.32~3.10 (m, 2H). ESI-LCMS: m/z 896 [M+H]+.
중간체 ( 15-24 )의 제조: 15-23(115 g, 128.2 mmol) 및 THF(800 mL)의 용액을 N2 하에서 5℃에서 교반하였다. NaH(4.0 g, 167.4 mmol)를 10℃ 미만에서 서서히 첨가하고, 소듐 클로로다이플루오로아세테이트(25.5 g, 167.4 mmol) 및 TBAI(5.6 g, 16.7 mmol)를 5℃에서 첨가하였다. 반응물을 18시간 동안 환류시켰다. 실온으로 냉각시키고, 반응물을 포화 NH4Cl(aq.)로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 조 고체로서 15-24(56 g, 56.6 mmol, 48.3% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 990 [M+H]+.
중간체 ( 15-25 )의 제조: 건성 DMF(560 mL) 중 15-24(56 g, 57.3 mmol), 메틸 p-톨루엔설포네이트(15.8 g, 84.8 mmol) 및 K2CO3(15.6 g, 113.0 mmol)의 용액을 N2 하에서 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 15-25(33 g, 32.8 mmol, 58.1% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d6): δ = 8.40 (s, 1H), δ = 7.82 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.31-7.16 (m, 18H), 6.82-6.79 (m, 8H), 6.24-6.23 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 6.00-5.99 (t,1H), 4.88-4.85 (t, 1H),4.17-4.14 (m, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.68 (s, 12H),3.31-3.30 (m, 2H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -75.75, -76.14, -76.89, -77.28. ESI-LCMS: m/z 1004 [M+H]+.
중간체 ( 15-26 )의 제조: THF(300 mL) 중 15-25(30 g, 29.9 mmol)의 용액에 5℃에서 NaBH4(1.7 g, 44.8 mmol) 및 EtOH(100 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반되게 하고, 포화 NH4Cl(aq.)로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 고체로서 15-26(22 g, 22.5 mmol, 75.4% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.35 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.26-7.13 (m, 21H), 6.77-6.75 (m, 9H), 6.14-6.13 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.90 (t, 1H), 4.74~4.72 (t, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.63 (s, 12H), 3.28~3.25 (m, 2H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -79.94, -80.31, -80.77, -81.15. ESI-LCMS: m/z 976 [M+H]+.
중간체 ( 15- 27 )의 제조:THF(100 mL) 중 15-26(20 g, 20.5 mmol)의 용액에 5℃에서 NaH(491.7 mg, 20.5 mmol) 및 메틸 p-톨루엔설포네이트(11.4 g, 61.5 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반되게 하고, 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 고체로서 15-27(16.5 g, 16.7 mmol, 81.3% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.40 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.37-7.30 (m, 4H), 7.28-7.26 (m, 5H), 7.24-7.18 (m, 12H),6.84-6.81 (m, 8H), 6.17-6.16 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.92-5.89 (t, 1H), 4.79~4.76 (t, 1H), 4.15~ 4.11 (m, 1H), 3.70 (s, 12H), 3.31 (s, 5H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -76.83, -77.22, -78.05, -78.43. ESI-LCMS: m/z 990 [M+H]+.
중간체 ( 15-28 )의 제조: DCM(155 mL) 중 15-27(15.5 g, 15.6 mmol)의 용액에 MeOH(30 mL) 중 TsOH(6.2 g, 36.0 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하고, pH가 7 내지 8이 될 때까지 포화 NaHCO3로 세척하고, EA로 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 15-28(4.6 g, 11.4 mmol, 72.8% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 386 [M+H]+.
중간체 ( 15-29 )의 제조: 피리딘(40 mL) 중 15-28(4.4 g, 11.3 mmol)의 용액에 5℃에서 BzCl(8.0 g, 56.7 mmol)을 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되게 하고, 아주 소량의 물로 켄칭하고, 중간 생성물이 소실될 때까지 수산화암모늄을 4℃에서 서서히 첨가하였다. 혼합물을 EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 15-29(6.0 g, 10.1 mmol, 89.1% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.67-8.66 (t, 1H), 8.47-8.44 (t, 1H), 8.02-7.97 (m, 4H), 7.69-7.62 (m, 2H), 7.56-7.52 (m, 4H), 6.32-6.31 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 6.09~6.06 (m, 1H), 5.00~ 4.98 (m, 1H), 4.71~ 4.67 (m, 1H), 4.58~ 4.54 (m, 1H), 4.43~ 4.41 (m, 1H), 3.77~ 3.72 (m, 2H), 3.31 (m, 3H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -76.97, -77.35, -78.19, -78.57. ESI-LCMS: m/z 594 [M+H]+.
중간체 ( 15-30 )의 제조: THF(70 mL) 중 15-29(6.0 g, 10.1 mmol)의 용액에 N2 하에서 PPh3(4.0 g, 15.1 mmol) 및 물(1.8 g, 100.9 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 45℃에서 15시간 동안 교반하고, 냉수에 붓고, 2 N HCl(aq.)에 의해 pH = 1 내지 2로 조정하고, EA로 추출하였다. 이어서, 수성 상을 포화 NaHCO3(aq.)를 사용하여 pH = 7 내지 8로 조정하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜, 백색 고체로서 15-30(5.5 g, 9.7 mmol, 95.9% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.67 (s, 2H), 8.03-8.01 (m, 2H), 7.88-7.86 (m, 2H), 7.65-7.61 (m, 2H), 7.56-6.46 (m, 5H), 6.30~6.29 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.42~ 5.40 (m, 1H), 4.69~ 4.66 (m, 1H), 4.51~ 4.47 (m, 1H), 4.08~ 4.09 (m, 2H), 3.87-3.80 (m, 2H), 3.46 (s, 5H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -75.65, -76.03, -77.47, -77.86. ESI-LCMS: m/z 568 [M+H]+.
중간체 ( 15-31 )의 제조: 건성 DCM(55 mL) 중 15-30(5.5 g, 9.6 mmol)의 용액에 N2 하에서 MMTrCl(4.5 g, 14.5 mmol) 및 TEA(2.0 g, 19.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1.0시간 동안 교반되게 하고, 물로 켄칭하고, DCM으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 고체로서 15-31(7.3 g, 8.7 mmol, 89.8% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.46 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.00-7.98 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.62-7.44 (m, 12H), 7.38-7.34 (m, 4H), 7.17-7.12 (m, 4H), 7.06~7.01 (m, 2H), 6.67~ 6.65 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 6.17 (s, 1H), 4.57~ 4.54 (d, J = 12 ㎐, 1H), 4.35~ 4.18 (m, 4H), 3.70~ 3.65 (m, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.31 (s, 3H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -73.61, -74.00, -77.94, -78.32. ESI-LCMS: m/z 840 [M+H]+.
중간체 ( 15-32 )의 제조: 피리딘(70 mL) 중 15-31(7.2 g, 8.5 mmol)의 용액에 5 내지 10℃에서 2 N NaOH(aq.)(510.0 mg, 10.3 mmol)를 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반되게 하고, 포화 NH4Cl(aq.)을 사용하여 pH 7 내지 8로 중화시키고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 15-32(5.8 g, 7.9 mmol, 92.2% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.63 (s, 2H), 7.99-7.97 (d, J=8.0 ㎐, 2H), 7.64-7.60 (m, 1H), 7.54-7.50 (m, 2H), 7.42-7.38 (m, 4H), 7.27-7.25 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.21- 7.16 (m, 4H), 7.12- 7.09 (m, 2H), 6.72- 6.70 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 6.28-6.27 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 5.59 (m, 1H), 3.96 (s, 4H), 3.76-3.74 (m, 1H), 3.68-3.63 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.47-3.41 (m, 2H), 3.27 (s, 3H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -74.13, -74.51, -78.09, -78.47. ESI-LCMS: m/z 736 [M+H]+.
( 15-33 )의 제조: 건성 DCM(30 mL) 중 15-32(3 g, 4.1 mmol) 및 DCI(240.4 mg, 2.0 mmol)의 용액에 N2 하에서 CEP[N(iPr)2]2(1.5 g, 4.9 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반되게 하고, 포화 NaHCO3로 켄칭하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 15-33(3.1 g, 3.3 mmol, 81.2% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.20 (s, 1H), 8.69-8.68 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 8.50-8.48 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 8.05-8.03 (m, 2H), 7.66-7.62 (m, 1H), 7.57-7.45 (m, 6H), 7.40- 7.33 (m, 2H), 7.30- 7.11 (m, 6H), 6.85- 6.76 (m, 2H), 6.45-6.30 (m, 1H), 4.77-4.74 (m, 0.5H), 4.00-3.99 (m, 0.5H), 3.86-3.84 (m, 0.5H), 3.77-3.70 (m, 5H), 3.67-3.59 (m, 4H), 3.56-3.51 (m, 1H), 3.50-3.34 (m,3H),3.32 (s, 3H), 3.08-3.06 (m, 0.5H), 2.77-2.65 (m, 2H), 1.08-0.99 (m, 12H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -73.92, -74.27, -74.30, -74.65, -77.64, -78.03, -78.55, 78.93. ESI-LCMS: m/z 936 [M+H]+.
실시예 12
반응도식 14
중간체 ( 16-34 )의 제조: 건성 ACN(1.5 L) 중 16-1(150.0 g, 397.5 mmol) 및 6-클로로구아닌(101.1 g, 596.3 mmol)의 용액에 Ar 하에서 BSA(259.5 g, 1.27 mol)를 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 -5℃에서 냉각시키고, TMSOTf(590.5 g, 2.66 mol)를 주사기로 첨가하였다. 그 후에, 혼합물을 60℃에서 5시간 동안 교반하고, 농축시켜 ACN을 제거하였으며, 잔류물을 EA(2.0 L) 중에 용해시키고, 포화 NaHCO3(aq.) 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜, 황색 고체로서 조 생성물 16-34(265.0 g)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 487 [M+H]+.
중간체 ( 16-35 )의 제조: DCM(2.5 L) 중 16-34(조 상태, 265 g, 353.8 mmol) 및 TEA(107.4 g, 1.06 mol, 148 mL)의 용액에 MMTrCl(164.0 g, 530.7 mmol) 및 DMAP(8.6 g, 70.8 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하고, 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 고체로서 16-35(160.0 g, 210.8 mmol, 53.0% 수율(2 단계에 걸침))를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 759 [M+H]+.
중간체 ( 16-36 )의 제조: 벤질 알코올(200 mL) 중 35(20.0 g, 26.39 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(5.3 g, 131.93 mmol)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되게 하고, 냉수로 켄칭하고, EA로 추출하고, 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 16-36(11.2 g, 16.72 mmol, 63.1% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 671 [M+H]+.
중간체 ( 16- 37 )의 제조: DCM(500 mL) 중 16-36(49.0 g, 73.1 mmol) 및 피리딘(28.9 g, 365.3 mmol, 29 mL)의 용액에 실온에서 DMTrCl(27.2 g, 80.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 16-37(58.9 g, 60.6 mmol, 82.9% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 973 [M+H]+.
중간체 ( 16- 38 )의 제조: 건성 THF(300 mL) 중 16-37(58.9 g, 60.6 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(5.1 g, 127.8 mmol, 60% 순도) 및 메틸 p-톨루엔설포네이트(19.5 g, 127.8 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반되게 하고, TBAI(4.7 g, 12.8 mmol)를 첨가하였다. 그 후에, 혼합물을 80℃에서 24시간 동안 교반하고, 포화 NH4Cl(aq.)로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 블랭크 고체로서 조 생성물 16-38(30.9 g)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 1067 [M+H]+.
중간체 ( 16-39 )의 제조: DMF(200 mL) 중 조 16-38(30.9 g) 및 K2CO3(8.0 g, 58.1 mmol)의 용액에 실온에서 소듐 클로로다이플루오로아세테이트(5.4 g, 29.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 포화 NH4Cl(aq.)로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 고체로서 16-39(9.8 g, 9.1 mmol, 15.0% 수율(2 단계에 걸침))를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 1081 [M+H]+.
중간체 ( 16-40 )의 제조: THF(180 mL) 중 16-39(9.3 g, 8.6 mmol)의 용액에 0℃에서 NaBH4(488 mg, 12.9 mmol) 및 EtOH(15 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, 포화 NH4Cl(aq.)로 켄칭하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 16-40(8.5 g, 7.0 mmol, 81.63% 수율, 87% 순도)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 1053 [M+H]+.
중간체 ( 16-41 )의 제조: THF(80 mL) 중 16-40(8.3 g, 7.9 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(472 mg, 11.8 mmol, 60% 순도) 및 메틸 p-톨루엔설포네이트(2.9 g, 15.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반되게 하고, 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜, 황색 오일로서 조 생성물 16-41(9.1 g)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 1067 [M+H]+.
중간체 ( 16-42 )의 제조: DCM(100 mL) 중 조 16-41(9.1 g)의 용액에 MeOH(10 mL) 중 p-TsOH(10 g)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하고, TEA로 중화시켜 pH = 7을 얻고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 칼럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 황색 고체로서 16-42(3.2 g, 6.5 mmol, 82.3% 수율(2 단계에 걸침))를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.14 (s, 1H), 7.52-7.50 (m, 2H), 7.42-7.33 (m, 3H), 6.62 (s, 2H, D2O로 교환됨), 6.01 (d, J = 6.4 ㎐, 1H), 5.62 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.49 (t, J = 12.8 ㎐, 2H), 5.39 (t, J = 5.6 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 4.64 (dd, J = 3.6, 5.6 ㎐, 1H), 4.02 (dd, J = 3.6, 7.2 ㎐, 1H), 3.74-3.66 (m, 3H), 3.64-3.59 (m, 1H), 3.32 (s, 3H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -77.52, -77.91, -78.17, -78.55). ESI-LCMS: m/z 493 [M+H]+.
중간체 ( 16-43 )의 제조: 피리딘(30 mL) 중 16-42(3.2 g, 6.5 mmol)의 용액에 0℃에서 i-BuCl(2.1 g, 19.5 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, MeOH로 켄칭하고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 황색 오일로서 16-43(3.2 g, 5.5 mmol, 84.59% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 10.60 (s, 1H, D2O로 교환됨), 8.42 (s, 1H), 7.57-7.54 (m, 2H), 7.44-7.35 (m, 3H), 6.20 (d, J = 2.8 ㎐, 1H), 5.71 (dd, J = 2.4, 5.6 ㎐, 1H), 5.68-5.64 (m, 3H), 4.41 (dd, J = 3.6, 12.0 ㎐, 1H), 4.24 (dd, J = 5.6, 12.0 ㎐, 1H), 4.19-4.15 (m, 1H), 3.80 (t, J = 10.4 ㎐, 2H), 3.38 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 2.45-2.38 (m, 1H), 1.12 (dd, J = 2.4, 6.8 ㎐, 6H), 0.97 (dd, J = 6.8, 16.4 ㎐, 6H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -76.48, -76.87, -77.62, -78.01). ESI-LCMS: m/z 633 [M+H]+.
중간체 ( 16-44 )의 제조: THF(20 mL) 중 16-43(1.6 g, 2.5 mmol)의 용액에 Pd/C(200 mg)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에서 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고, 여과액을 농축시켜, 백색 고체로서 16-44(1.2 g, 2.3 mmol, 91.86% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.60 (s, 1H, D2O로 교환됨), 8.22 (s, 1H), 6.05 (d, J = 2.8 ㎐, 1H), 5.14 (dd, J = 3.2, 5.6 ㎐, 1H), 4.40 (dd, J = 2.4, 12.0 ㎐, 1H), 4.17 (dd, J = 5.6, 12.0 ㎐, 1H), 3.93-3.73 (m, 4H), 3.38 (s, 3H), 1.14 (d, J = 7.2 ㎐, 6H), 1.04 (dd, J = 7.2, 12.4 ㎐, 6H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -75.73, -76.12, -77.46, -77.84). ESI-LCMS: m/z 517 [M+H]+.
중간체 ( 16-45 )의 제조: DCM(40 mL) 중 16-44(3.0 g, 5.8 mmol) 및 콜리딘(1.8 g, 14.5 mmol)의 용액에 MMTrCl(2.7 g, 8.7 mmol) 및 AgNO3(986 mg, 5.8 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하고, 여과액을 물로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 16-45(3.8 g, 4.8 mmol, 82.94% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 12.16 (s, 1H, D2O로 교환됨), 11.48 (s, 1H, D2O로 교환됨), 7.86 (s, 1H), 7.50 (dd, J = 5.2, 7.2 ㎐, 4H), 7.37 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 7.28 (t, J = 7.2 ㎐, 4H), 7.20 (t, J = 7.2 ㎐, 2H), 6.83 (d, J = 9.2 ㎐, 2H), 6.11 (d, J = 3.2 ㎐, 1H), 4.18 (dd, J = 5.2, 8.8 ㎐, 1H), 4.08 (t, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.44-3.97 (m, 1H), 3.74 (dd, J = 7.6, 10.4 ㎐, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.46-3.41 (m, 1H), 3.16 (d, J = 8.0 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 2.86-2.79 (m, 1H), 2.33-2.26 (m, 1H), 1.13 (t, J = 7.2 ㎐, 6H), 0.89 (dd, J = 7.2, 14.8 ㎐, 6H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -74.01, -74.39, -78.00, -78.38). ESI-LCMS: m/z 789 [M+H]+.
중간체 ( 16- 46 )의 제조: 피리딘(40 mL) 중 16-45(3.8 g, 4.8 mmol)의 용액에 0℃에서 2 N NaOH(MeOH:H2O = 4:1)(15 mL)를 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 포화 NH4Cl(aq.)을 사용하여 pH = 7 내지 8로 중화시키고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 16-46(3.0 g, 4.2 mmol, 87.50% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 12.16 (s, 1H, D2O로 교환됨), 11.68 (s, 1H, D2O로 교환됨), 8.19 (s, 1H), 7.51 (dd, J = 5.2, 7.2 ㎐, 4H), 7.38 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 7.31 (t, J = 7.2 ㎐, 4H), 7.21 (t, J = 7.2 ㎐, 2H), 6.87 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 6.26 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.15 (t, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.76 (t, J = 6.0 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 3.75-3.70 (m, 5H), 3.42 (d, J = 2.4 ㎐, 1H), 3.38-3.28 (m, 5H), 3.23 (d, J = 6.4 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 3.16-3.10 (m, 1H), 2.88-2.81 (m, 1H), 1.15 (dd, J = 6.4, 7.2 ㎐, 6H). 19F-NMR (376 ㎒, DMSO-d6): -74.73, -75.12, -78.79, -79.17. ESI-LCMS: m/z 719 [M+H]+.
( 16- 47 )의 제조: 건성 DCM(50 mL) 중 16-46(3.0 g, 4.2 mmol) 및 DCI(394 mg, 3.3 mmol)의 용액에 Ar 하에서 CEP[N(iPr)2]2(1.5 g, 5.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 10% NaHCO3(aq.) 및 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 16-47(3.0 g, 3.2 mmol, 77.81% 수율)을 얻었다.1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 12.13 (s, 1H), 11.65 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 8.11 (s, 0.35H), 7.95 (s, 0.65H), 7.50 (t, J = 7.2 ㎐, 4H), 7.38-7.26 (m, 6H), 7.20 (dd, J = 8.4, 16.0 ㎐, 2H), 6.88 (d, J = 9.2 ㎐, 0.7H), 6.82 (d, J = 8.8 ㎐, 1.3H), 6.31 (d, J = 6.8 ㎐, 0.35H), 6.14 (d, J = 4.4 ㎐, 0.65H), 4.97 (t, J = 6.4 ㎐, 0.35H), 3.97 (t, J = 4.4 ㎐, 0.65H), 3.82-3.54 (m, 9H), 3.48-3.14 (m, 9H), 2.86-2.69 (m, 2H), 1.24-0.92 (m, 18H). 31P-NMR (162 ㎒, DMSO-d 6): 148.35, 148.24. ESI-LCMS: m/z 919 [M+H]+.
실시예 13
반응도식 15
중간체 ( 17-2 )의 제조: ACN(1.2 L) 중 17-1(120 g, 318 mmol)의 용액에 BSA(208 g, 1016 mmol) 및 N4-벤조일시토신(102 g, 474 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 투명해질 때까지 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 -10℃로 냉각시켰다. TMSOTf(84 g, 381 mmol)를 혼합물에 서서히 첨가하였다. 이어서, 가온하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 NaHCO3를 pH가 7.5가 될 때까지 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축시켜 잔류물을 얻었다. 잔류물을 EA 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 유기 용액을 농축시켜, 황색 오일로서 조 17-2(160 g)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 533 [M+H]+.
중간체 ( 17-3 )의 제조: 피리딘(1.5 L) 중 조 17-2(160 g)의 용액을 0℃에서 메탄올 및 물 중 2 N NaOH 용액 600 mL에 첨가하였다. 현탁액을 0℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액(1 L)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 용액을 물(15 L)에 첨가하여 고체를 얻었다. 고체를 여과하고, (PE:EA = 3:1)로 세척하여, 백색 고체로서 17-3(80 g, 214 mmol, 67%(2 단계에 걸침))을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 373 [M+H]+.
중간체 ( 17-4 )의 제조: 피리딘(1 L) 중 17-3(80 g, 214 mmol)의 용액에 DMTrCl(87 g, 257 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. MeOH(50 mL)를 혼합물에 첨가하였다. 용액을 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 EA 중에 용해시키고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시켰다. 유기 용액을 농축시켜, 황색 오일로서 조 17-4(160 g)를 얻었으며, 이것을 다음 단계에 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 675 [M+H]+.
중간체 ( 17-5 )의 제조: DCM(1 L) 중 조 17-4(160 g)의 용액에 이미다졸(22 g, 332 mmol) 및 TBSCl(46 g, 310.62 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM(1 L)으로 희석시켰다. 물을 첨가하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 농축시켜, 조 17-5(200 g)를 얻었으며, 이것을 다음 단계에 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 789 [M+H]+.
중간체 ( 17-6 )의 제조: 메틸아민(1 L) 중 조 17-5(200 g)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용액을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 17-6(130 g, 204.42 mmol, 94.8% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 685 [M+H]+.
중간체 ( 17-7 )의 제조: DCM(1 L) 중 17-6(142 g, 207.34 mmol)의 용액에 콜리딘(50.25 g, 414.69 mmol) 및 MMTrCl(95.79 g, 311.01 mmol)을 첨가하였다. 이어서, AgNO3(52.83 g, 311.01 mmol)를 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하였다. 유기 용액을 물로 세척하였다. 유기 층을 농축시켜, 황색 고체로서 조 17-7(190 g, 198.50 mmol, 95.73% 수율)을 얻었으며, 이것을 다음 단계에 직접 사용하였다. ESI-LCMS: m/z 957.4 [M+H]+.
중간체 ( 17-8 )의 제조: THF(1 L) 중 17-7(190 g, 198.50 mmol)의 용액에 TBAF(77.85 g, 297.74 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 유기 용액을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 17-8(160 g, 189.81 mmol, 95.6% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 843.4 [M+H]+.
중간체 ( 17-9 )의 제조: DMF(1 L) 중 17-8(154 g, 182.70 mmol)의 용액에 Ag2O(84.68 g, 365.39 mmol, 11.86 mL), (2-브로모에톡시)-tert-부틸다이메틸실란(78.67 g, 328.85 mmol) 및 NaI(41.08 g, 274.04 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 45℃에서 12시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하였다. 혼합물을 여과하고, 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 용액을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 흑색 고체로서 17-9(90 g, 89.89 mmol, 49.2% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 1001.4 [M+H]+.
중간체 ( 17-10 )의 제조: THF(500 mL) 중 17-9(90 g, 89.89 mmol)의 용액에 TBAF(35.25 g, 134.83 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 물을 혼합물에 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 황색 고체로서 17-10(75 g, 84.56 mmol, 94.1% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 887.2 [M+H]+.
중간체 ( 17-11 )의 제조: THF(400 mL) 중 17-10(54 g, 60.88 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH(1.75 g, 73.06 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후에, 반응물을 0℃로 냉각시키고, CS2(9.50 g, 121.76 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 이 온도에서 10분 후에, MeI(15.45 g, 109.58 mmol)를 혼합물에 첨가하였다. 그리고 이어서, 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 유기 용액을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 17-11(50 g, 51.17 mmol, 84.1% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 977.2 [M+H]+.
중간체 ( 17-12 )의 제조: DCM(100 mL) 중 17-11(17 g, 17.40 mmol)의 용액에 메탄올(10 mL) 중 PTSA(5.99 g, 34.79 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시켰다. 진한 NH4OH를 첨가하여 pH = 7.5를 얻었다. 물을 첨가하고, 생성물을 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 17-12(10 g, 14.82 mmol, 85.2% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 675.1 [M+H]+.
중간체 ( 17-13 )의 제조: DCM(800 mL) 중 17-12(40 g, 59.28 mmol)의 용액에 TFA(150 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시켰다. 진한 NH4OH를 용액에 첨가하여 pH = 7.5를 얻었다. 물을 첨가하고, 생성물을 DCM으로 추출하였다. 유기 층 용액을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 17-13(21 g, 52.18 mmol, 88.0% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 403.0 [M+H]+.
중간체 ( 17-14 )의 제조: 피리딘(500 mL) 중 17-13(26 g, 64.60 mmol)의 용액에 Ac2O(19.79 g, 193.81 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하였다. 용액을 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피 및 MPLC로 정제하여, 백색 고체로서 17-14(21 g, 43.16 mmol, 66.8% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 487.0 [M+H]+.
중간체 ( 17-15 )의 제조: DCM(75 mL) 중 DBH(4.19 g, 14.64 mmol)의 용액에 -60℃에서 HF/피리딘(10 mL)을 서서히 첨가하였다. 이어서, DCM 중에 용해된 SM-1(2.5 g, 5.14 mmol)을 혼합물에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반하였다. DCM을 혼합물에 첨가하였다. 포화 NaHCO3를 혼합물에 서서히 첨가하여 pH = 7.0을 얻었다. 용액을 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 컬럼 크로마토그래피 및 MPLC로 정제하여, 백색 고체로서 17-15(1.1 g, 2.37 mmol, 46.1% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 465.1 [M+H]+. 19F NMR (376 ㎒, 클로로포름-d) δ -55.49.
중간체 ( 17-16 )의 제조: 메틸아민(30 mL) 중 17-15(4.6 g, 9.91 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 17-16(3.7 g, 9.73 mmol, 98.2% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 381.1 [M+H]+.
중간체 ( 17-17 )의 제조: AcOH(5 mL) 및 물(5 mL) 중 17-16(1.7 g, 4.47 mmol)의 용액에 NaNO2(30.40 g, 447.04 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LC-MS는 70% 전환율을 보여주었다. EA 및 물을 첨가하였다. 유기 층을 농축시키고, MPLC로 정제하여, 백색 고체로서 17-17(1.5 g, 3.93 mmol, 88.0% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 382.2 [M+H]+.
중간체 ( 17-18 )의 제조: DCM(30 mL) 중 17-17(2.23 g, 5.85 mmol)의 용액에 이미다졸(796.36 mg, 11.70 mmol) 및 TBSCl(1.32 g, 8.77 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 유기 층을 농축시켜, 백색 고체로서 조 17-18(2.8 g, 5.65 mmol, 96.6% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 496.4 [M+H]+.
중간체 ( 17-19 )의 제조: THF(30 mL) 중 17-18(2.8 g, 5.65 mmol)의 용액에 PPh3(1.78 g, 6.78 mmol) 및 물(203.59 mg, 11.30 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에서 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 17-19(2.5 g, 5.32 mmol, 94.2% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 470.3 [M+H]+.
중간체 ( 17-20 )의 제조: DCM(40 mL) 중 17-19(2.8 g, 5.96 mmol)의 용액에 TEA(1.21 g, 11.93 mmol, 1.66 mL) 및 MMTrCl(2.76 g, 8.95 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 17-20(3.1 g, 4.18 mmol, 70.1% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.36 (d, J = 2.2 ㎐, 1H), 7.67 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.46 (td, J = 8.6, 1.3 ㎐, 4H), 7.37-7.30 (m, 2H), 7.25 (t, J = 7.5 ㎐, 4H), 7.22 - 7.14 (m, 2H), 6.84 ― 6.77 (m, 2H), 5.54 (s, 1H), 5.44 (dd, J = 8.0, 2.2 ㎐, 1H), 4.17 ― 4.01 (m, 4H), 3.90 (dd, J = 9.8, 2.4 ㎐, 1H), 3.70 (s, 4H), 3.07 (td, J = 10.1, 4.5 ㎐, 1H), 3.03 ― 2.93 (m, 1H), 2.82 (d, J = 10.3 ㎐, 1H), 1.51 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 0.84 (s, 9H), 0.12 (s, 3H), -0.03 (s, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -58.72.
중간체 ( 17-21 )의 제조: THF(30 mL) 중 17-20(3.1 g, 4.18 mmol)의 용액에 TBAF(1.64 g, 6.27 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 17-21(2.2 g, 3.51 mmol, 83.9% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.30 (d, J = 2.0 ㎐, 1H), 7.98 (d, J = 8.1 ㎐, 1H), 7.52-7.42 (m, 4H), 7.37-7.30 (m, 2H), 7.30-7.23 (m, 4H), 7.23-7.14 (m, 2H), 6.87-6.79 (m, 2H), 5.52 (d, J = 2.0 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 1.5 ㎐, 1H), 5.17 (t, J = 3.8 ㎐, 1H), 4.13 (t, J = 4.2 ㎐, 2H), 4.05 (dd, J = 4.2, 2.1 ㎐, 2H), 3.90 (dt, J = 10.0, 2.2 ㎐, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.67 (dt, J = 11.4, 3.7 ㎐, 1H), 3.39 (td, J = 6.4, 5.1 ㎐, 1H), 3.10 (td, J = 10.3, 4.3 ㎐, 1H), 2.97 (dt, J = 11.8, 4.7 ㎐, 1H), 2.68 (d, J = 10.6 ㎐, 1H), 1.44 (d, J = 4.3 ㎐, 1H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -58.82.
( 17-22 )의 제조: DCM(10 mL) 중 17-21(1.4 g, 2.23 mmol)의 용액에 DCI(318.88 mg, 2.23 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2(872.87 mg, 2.90 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 DCM으로 희석시켰다. 유기 층을 포화 NaHCO3, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 1.3 g의 조 생성물을 얻었다. 생성물을 진공 중에서 40℃에서 하룻밤 건조시켰다. 이로써, 백색 고체로서 17-22(1.15 g, 1.39 mmol, 62.28% 수율)를 얻었다. MS m/z [M-H] - (ESI): 826.4; 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.37 (s, 1H), 7.78 (d, J = 8.1 ㎐, 0.6 H), 7.59-7.44 (m, 4.4 H), 7.41-7.33 (m, 2H), 7.27 (m, 4H), 7.24-7.14 (m, 2H), 6.88-6.79 (m, 2H), 5.57-5.48 (m, 1.4H), 5.44 (d, J = 8.0 ㎐, 0.6H), 4.25-4.13 (m, 2H), 4.13-3.90 (m, 3H), 3.79 ― 3.38 (m, 8H), 3.03 (m, 2H), 2.86 (dd, J = 26.4, 10.4 ㎐, 1H), 2.79-2.67 (m, 2H), 1.67 (d, J = 4.5 ㎐, 0.4 H),1.26 (d, J = 4.5 ㎐, 0.6 H), 1.18 (d, J = 6.7 ㎐, 3H), 1.15 ― 1.02 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d6) δ 148.03, 146.68.
실시예 14
반응도식 16
중간체 ( 18-23 )의 제조: 피리딘(10 mL) 중 18-16(1.2 g, 3.16 mmol)의 용액에 0℃에서 BzCl(971.92 mg, 6.94 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하였다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시켰다. 유기 층을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 18-23(1.58 g, 2.68 mmol, 85.1% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 589.1 [M+H]+
중간체 ( 18-24 )의 제조: THF(20 mL) 중 18-23(1.47 g, 2.50 mmol)의 용액에 물(90.00 mg, 5.00 mmol) 및 PPh3(786.20 mg, 3.00 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 분위기 하에서 50℃에서 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 18-24(1.35 g, 2.40 mmol, 96.1% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 563.2 [M+H]+.
중간체 ( 18-25 )의 제조: DCM(40 mL) 중 18-24(1.4 g, 2.49 mmol)의 용액에 TEA(503.71 mg, 4.98 mmol, 694.29 uL) 및 MMTrCl(1.15 g, 3.73 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시키고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 18-25(2 g, 2.40 mmol, 96.3% 수율)를 얻었다. 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d6) δ -58.72.
중간체 ( 18-26 )의 제조: 피리딘(30 mL) 중 18-25(2 g, 2.40 mmol)의 용액에 0℃에서 메탄올(12 mL) 및 물(3 mL) 중 NaOH(287.46 mg, 7.19 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 포화 NH4Cl을 첨가하여 pH = 8을 얻었다. 생성물을 EA로 추출하였다. 유기 층을 농축시키고, MPLC로 정제하여, 백색 고체로서 18-26(1.5 g, 2.05 mmol, 85.69% 수율)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.27 (s, 1H), 8.55 (d, J = 7.5 ㎐, 1H), 8.11-7.94 (m, 2H), 7.77-7.57 (m, 1H), 7.57-7.40 (m, 6H), 7.40-7.10 (m, 9H), 6.97-6.76 (m, 2H), 5.56 (s, 1H), 5.36-5.18 (m, 1H), 4.15 (dd, J = 9.7, 5.4 ㎐, 4H), 4.01 (d, J = 10.2 ㎐, 1H), 3.84 (d, J = 11.7 ㎐, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.18-2.97 (m, 2H), 2.66 (d, J = 10.9 ㎐, 1H), 1.48 (d, J = 4.1 ㎐, 1H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -58.75.
( 18-27 )의 제조: DCM(30 mL) 중 18-26(1.4 g, 1.92 mmol)의 용액에 DCI(226.08 mg, 1.92 mmol) 및 CEP[N(iPr)2]2(749.69 mg, 2.49 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 DCM으로 희석시켰다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었다. 조 생성물을 HPLC로 정제하였다. 생성물을 진공 중에서 40℃에서 하룻밤 건조시켰다. 이로써, 백색 고체로서 18-27(1.65 g, 1.77 mmol, 92.51% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 877 [M+H]+ . 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 11.33 (s, 1H), 8.34 (d, J = 7.4 ㎐, 0.6H), 8.20 (d, J = 7.4 ㎐, 0.6H), 8.02 (dt, J = 8.3, 1.2 ㎐, 2H), 7.73-7.57 (m, 1H), 7.57-7.40 (m, 6H), 7.40-7.30 (m, 3H), 7.30-7.10 (m, 6H), 6.86-6.71 (m, 2H), 5.60 (d, J = 1.1 ㎐, 1H), 4.41-4.03 (m, 5H), 4.00-3.39 (m, 8H), 3.05 (m, 2H), 2.92-2.70 (m, 3H), 1.53 (d, J = 4.2 ㎐, 0.4H), 1.29 (d, J = 4.2 ㎐, 0.6H), 1.26-1.00 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d6) δ 148.41, 146.88.
실시예 15
반응도식 17
중간체 ( 19-2 )의 제조: 무수 피리딘(500 mL) 중 19-1(48.0 g, 138.2 mmol)의 용액에 0℃에서 TIPDSCl(52.2 g, 165.8 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반되게 하였다. 완료 시에, 혼합물을 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 19-2(67 g, 113.6 mmol, 82.2% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.29 (s, 1H, D2O로 교환됨), 8.21 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 8.02-8.00 (m, 2H), 7.65-7.61 (m, 1H), 7.54-7.50 (m, 2H), 7.38 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 5.83 (d, J = 3.6 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 5.64 (s, 1H), 4.24 (d, J = 13.2 ㎐, 1H), 4.11 (s, 3H), 3.95 (d, J = 12.8 ㎐, 1H), 1.09-0.96 (m, 28H). ESI-LCMS: m/z 590 [M+H]+.
중간체 ( 19-3 )의 제조: 톨루엔(500 mL) 중 19-2(54 g, 91.5 mmol) 및 EtI(285.6 g, 1.8 mol, 146 mL)의 용액에 Ag2O(63.6 g, 274.6 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 4시간 동안 교반하고, 여과하고, 여과액을 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 19-3(41.2 g, 66.4 mmol, 72.5% 수율(2 단계에 걸침))을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.34 (s, 1H, D2O로 교환됨), 8.19 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 7.97 (d, J = 7.6 ㎐, 2H), 7.63 (t, J = 7.2 ㎐, 1H), 7.51 (t, J = 7.6 ㎐, 2H), 7.38 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 5.67 (s, 1H), 4.22 (d, J = 13.6 ㎐, 1H), 4.14 (dd, J = 4.0, 9.6 ㎐, 1H), 4.08 (d, J = 9.6 ㎐, 1H), 3.95-3.91 (m, 2H), 3.82 (dd, J = 6.8, 13.6 ㎐, 2H), 1.17 (t, J = 6.8 ㎐, 3H), 1.04-0.94 (m, 28H). ESI-LCMS: m/z 618 [M+H]+.
중간체 ( 19-4 )의 제조: THF(400 mL) 중 19-3(41.2 g, 66.4 mmol)의 용액에 TBAF(THF 중 1 M)(132.7 mmol, 133 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 고체를 얻었으며, 이것을 (PE:EA = 1:1)로 세척하여, 백색 고체로서 19-4(19.1 g, 50.6 mmol, 76.3% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.29 (s, 1H, D2O로 교환됨), 8.57 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 8.01 (d, J = 7.6 ㎐, 2H), 7.63 (t, J = 7.6 ㎐, 1H), 7.52 (t, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.36 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 5.87 (d, J = 2.8 ㎐, 1H), 5.26 (t, J = 5.2 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 5.05 (d, J = 7.2 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 4.11-4.06 (m, 1H), 3.94-3.91 (m 1H), 3.86-3.74 (m, 3H), 3.71-3.61 (m, 2H), 1.17 (t, J = 7.6 ㎐, 3H). ESI-LCMS: m/z 376 [M+H]+.
중간체 ( 19-5 )의 제조: 피리딘(200 mL) 중 19-4(19.1 g, 50.6 mmol) 및 이미다졸(5.2 g, 75.9 mmol)의 용액에 TBDPSCl(7.1 g, 60.7 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 고체를 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 19-5(20.2 g, 32.6 mmol, 64.4% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 614 [M+H]+.
중간체 ( 19-6 )의 제조: DCM(150 mL) 중 19-5 (14.0 g, 22.8 mmol) 및 콜리딘(6.9 g, 57.0 mmol)의 용액에 Ar 하에서 DMTrCl(11.6 g, 34.2 mmol) 및 AgNO3(3.9 g, 22.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 여과하고, 여과액을 물로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜, 황색 오일로서 조 생성물 19-6(26.2 g)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 916 [M+H]+.
중간체 ( 19-7 )의 제조: THF(200 mL) 중 19-6(26.2 g(조 상태))의 용액에 TBAF(THF 중 1 M)(23 mL)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하고, 냉수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여, 백색 고체로서 19-7(11.2 g, 16.5 mmol, 72.37% 수율(2 단계에 걸침))을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.30 (s, 1H, D2O로 교환됨), 8.40 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 8.02 (d, J = 7.6 ㎐, 2H), 7.65-7.61 (m, 1H), 7.54-7.49 (m, 4H), 7.35-7.30 (m, 6H), 7.26-7.23 (m, 1H), 6.89-6.86 (m, 4H), 5.96 (d, J = 3.2 ㎐, 1H), 5.08 (t, J = 4.4 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 4.01 (t, J = 5.2 ㎐, 1H), 3.79-3.78 (m, 1H), 3.73 (d, J = 1.2 ㎐, 6H), 3.66-3.55 (m 2H), 3.40-3.38 (m, 1H), 3.25-3.17 (m, 1H), 2.97-2.95 (m, 1H), 1.17 (t, J = 6.8 ㎐, 3H). ESI-LCMS: m/z 678 [M+H]+.
( 19- 8 )의 제조: 건성 DCM(50 mL) 중 19-7(5.0 g, 7.4 mmol) 및 DCI(2.2 g, 7.4 mmol)의 용액에 Ar 하에서 CEP[N(iPr)2]2(2.7 g, 8.8 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 10% NaHCO3(aq.) 및 물로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 19-8(5.5 g, 6.26 mmol, 84.91% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.34 (s, 1 H), 8.16 (dd, J = 7.6, 39.2 ㎐, 1H), 8.03-8.00 (m, 2H), 7.65-7.61 (m, 2H), 7.54-7.45 (m, 4H), 7.35-7.24 (m, 8H), 6.88-6.82 (m, 4H), 5.89 (dd, J = 3.2, 88.8 ㎐, 1H), 4.25-3.86 (m, 3H), 3.75-3.66 (m, 9H), 3.62-3.38 (m, 4H), 3.26-3.05 (m, 1H), 2.78 (dd, J = 5.6, 10.4 ㎐, 2H), 1.20-1.11 (m, 9H), 1.04 (dd, J = 6.4, 27.6 ㎐, 6H). 31P-NMR (162 ㎒, DMSO-d 6): 148.09, 147.84. ESI-LCMS: m/z 878 [M+H]+.
실시예 16
반응도식 18
중간체 ( 20-2 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 아세토니트릴(300 mL) 중 티민(8.15 g, 64.68 mmol, 1.5 eq.)의 용액에 실온에서 N,O-비스(트라이메틸실릴)아세트아미드(39 g, 194.2 mmol, 4.5 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 20-1(30 g, 43.16 mmol, 1.00 eq.)을 첨가하였다. 이어서, 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(57.48 g, 258.95 mmol, 6.0 eq.)를 0℃에서 교반하면서 적가하였다. 얻어진 용액을 80℃에서 추가 1시간 동안 교반하면서 반응되게 하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 유기 층을 물 및 포화 염화나트륨으로 각각 세척하였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 갈색 고체로서 18 g(55%)의 20-2를 얻었다. MS m/z [M+H] + (ESI): 762.
중간체 ( 20-3 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 테트라하이드로푸란(180 mL) 중 20-2(18 g, 23.9 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 수산화나트륨(47 mL, 물 중 2 N, 4.0 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 0℃에서 4시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 11.4 g(88%)의 20-3을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 548.
중간체 ( 20- 4 )의 제조: 테트라하이드로푸란(100 mL) 중 20-3(11.4 g, 20.84 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 활성탄 상의 10% 팔라듐(1.4 g)을 첨가하였다. 플라스크를 소기하고, 수소로 5회 플러싱하였다. 얻어진 용액을 실온에서 8시간 동안 교반하였다. 고체를 여과 제거하였다. 얻어진 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 10 g(92%)의 20-4를 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 522.
중간체 ( 20-5 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 피리딘(50 mL) 중 20-4(10 g, 19.19 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 1-(클로로다이페닐메틸)-4-메톡시벤젠(8.8 g, 28.79 mmol, 1.5 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 메탄올(20 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 분획(500 mL)을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 고체를 여과 제거하였다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 12.2 g(80%)의 20-5를 얻었다. MS m/z [M-H]- (ESI): 792.
중간체 ( 20-6 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(40 mL) 중 20-5(4.2 g, 5.29 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 테트라부틸암모늄 플루오라이드(THF 중 1 M, 13.0 mL, 2.5 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 10시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 분획을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 고체를 여과 제거하였다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 2.5 g(85%)의 20-6을 얻었다. MS m/z [M-H]- (ESI): 554. 1H NMR: (DMSO-d6, 300 ㎐, ppm): δ11.25 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.46 (m, 4H), 7.31-7.11 (m, 8H), 6.76 (m, 2H), 5.61 (s, 1H), 5.22 (t, J=3.0 ㎐, 1H), 3.95 (m, 1H), 3.85-3.61 (m, 6H), 2.85 (m, 1H), 2.45 (d, J=9.0 ㎐, 1H), 2.23-2.06 (m, 1H), 1.61 (m, 4H), 1.34 (d, J=12.0 ㎐, 1H).
( 20-7 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(20 mL) 중 20-6(2.5 g, 3.78 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 비스(다이아이소프로필아미노)(2-시아노에톡시)포스핀(1.7 g, 5.67 mmol, 1.5 eq.)을 첨가하였다. 이것에 실온에서 4,5-다이시아노이미다졸(440 mg, 4.15 mmol, 1.10 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 다이클로로메탄으로 희석시키고, 물로 세척하였다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 분획을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 고체를 여과 제거하였다. 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 2.3 g(67%)의 20-7을 얻었다. MS m/z [M-H] - (ESI):754. H-NMR: (DMSO-d6, 300 ㎐, ppm): δ11.31 (s, 1H), 7.76-7.41 (m, 5H), 7.37-7.10 (m, 8H), 6.87-6.68 (m, 2H), 5.66 (m, 1H), 4.04 (m, 1H), 3.83 (m, 2H), 3.70 (m, 3H), 3.69-3.45 (m, 4H), 3.30-3.00 (m, 1H), 2.88-2.54 (m, 3H), 2.45-2.12 (m, 2H), 1.87-1.64 (m, 4H), 1.51 (m, 1H), 1.17 (m, 12H).. P NMR (DMSO-d6, 300 ㎐, ppm): 152.69, 150.53.
실시예 17
반응도식 19
중간체 ( 21-21 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 N,N-다이메틸포름아미드(5000 mL) 중 (3aR,5S,6S,6aR)-5-(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-일)-2,2-다이메틸-테트라하이드로-2H-푸로[2,3-d][1,3]다이옥솔-6-올(500 g, 1.92 mol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 (브로모메틸) 벤젠(345 g, 2.02 mol, 1.05 eq.)을 첨가하였다. 수소화나트륨(123 g, 3.08 mol, 1.60 eq. 60%)을 0℃에서 몇몇 배치(batch)에 대해 첨가하였다. 얻어진 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 염화암모늄(aq.)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 황색 오일로서 670 g(조 상태)의 21-21을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 351.
중간체 ( 21-22 )의 제조: 21-21(500 g, 1.43 mol, 1.00 eq.)을 80% 아세트산(5000 mL)에 용해시켰다. 얻어진 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 얻어진 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 중탄산나트륨(aq.)으로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 황색 오일로서 440 g(조 상태)의 21-22를 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 333.
중간체 ( 21-23 )의 제조: 1,4-다이옥산(5000 mL) 중 21-22(500 g, 1.61 mol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 교반하면서 물(5000 mL) 중 과요오드산나트륨(345 g, 1.61 mol, 1.00 eq.)의 용액을 적가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 황색 오일로서 400 g(조 상태)의 21-23을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 279.
중간체 ( 21-24 )의 제조: 테트라하이드로푸란/물(1250/1250 mL) 중 21-23(250 g, 898.3 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 포름알데하이드 용액(37%, 600 mL)을 첨가하였다. 이것에 0℃에서 교반하면서 2 N 수산화나트륨(1500 mL, 3.12 eq.)을 적가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 얻어진 혼합물을 물로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 황색 오일로서 191 g(조 상태)의 21-24를 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 333.
중간체 ( 21-25 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 피리딘(3000 mL) 중 21-24(300 g, 966.7 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 교반하면서 벤조일 클로라이드(409.4 g, 2.91 mol, 3.01 eq.)를 적가하고, 이어서 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 중탄산나트륨(aq.)으로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 황색 오일로서 410 g(82%)의 21-25를 얻었다.
중간체 ( 21-26 )의 제조: 메탄올(2500 mL) 중 21-25(250 g, 482.11 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 10% 팔라듐 탄소(125 g) 및 아세트산(29 g, 482.11 mmol 1.00 eq.)을 첨가하였다. 이어서, H2(가스)를 삽입하였다. 얻어진 용액을 50℃에서 72시간 동안 교반하였다. 고체를 여과 제거하였다. 얻어진 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨(aq.)으로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 담황색 오일로서 185 g(90%)의 21-26을 얻었다.
중간체 ( 21-27 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(900 mL) 중 21-26(128 g, 299.06 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 피리딘(300 mL)을 첨가하였다. 이것에, -20℃에서 교반하면서 트라이플루오로메탄 설폰산 무수물(109.4 g, 387.9 mmol, 1.30 eq.)을 적가하였다. 얻어진 용액을 -20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 염수로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 황색 오일로서 158 g(조 상태)의 21-27을 얻었다.
중간체 ( 21-28 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 N,N-다이메틸포름아미드(1500 mL) 중 21-27(158 g, 281.89 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 아지드화나트륨(55 g, 846.02 mmol, 3.00 eq.) 및 테트라부틸암모늄 요오다이드(10.4 g, 28.18 mmol, 0.10 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 100℃에서 하룻밤 교반하였다. 이어서, 반응물을 물/얼음을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 얻어진 혼합물을 물 및 염수로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 황색 오일로서 58 g(45%)의 21-28을 얻었다.
중간체 ( 21-29 )의 제조: 메탄올/물(850/150 mL) 중 21-28(70 g, 154.4 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 탄산칼륨(6.4 g, 46.0 mmol, 0.30 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 0℃에서 5시간 동안 교반하였다. 용액의 pH 값을 10% 염산을 사용하여 7로 조정하였다. 얻어진 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 물로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 26.7 g(71%)의 21-29를 얻었다.
중간체 ( 21-30 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(360 mL) 중 21-29(12 g, 48.93 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 트라이에틸아민(14.85 g, 146.75 mmol, 3.00 eq.)을 첨가하였다. 이것에, 0℃에서 교반하면서 tert-부틸 (클로로)다이페닐실란(13.5 g, 49.12 mmol, 1.00 eq.)을 적가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 물로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 12.8 g(54%)의 21-30을 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 506.
중간체 ( 21-31 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(300 mL) 중 염화옥살릴(5.1 mL, 1.50 eq.)의 용액에 -78℃에서 교반하면서 다이메틸 설폭사이드(8.1 mL, 3.00 eq.)를 적가하였다. 얻어진 용액을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 이것에 -78℃에서 교반하면서 다이클로로메탄(100 mL) 중 21-30(26 g, 43mmol, 1.00 eq.)의 용액을 적가하고, -78℃에서 추가 45분 동안 교반하였다. 이어서, 트라이에틸아민(23.5 mL, 4.50 eq.)을 첨가하고, 교반하면서 25℃에서 추가 1시간 동안 반응되게 하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 염화수소, 포화 중탄산나트륨, 및 포화 염화나트륨으로 각각 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축시켰다. 이로써, 무색 오일로서 20 g(80%)의 21-31을 얻었다.
중간체 ( 21-32 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 에테르(200 mL) 중 21-31(20 g, 41.53 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 -100℃에서 교반하면서 메틸마그네슘 브로마이드(3 M)(28 mL, 62.30 mmol, 1.50 eq.)를 적가하였다. 얻어진 용액을 -100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 포화 염화암모늄(50 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 각각 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 무색 오일로서 14.5 g(70%)의 21-32를 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 520.
중간체 ( 21-33 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 피리딘(150 mL) 중 PH21-32(15 g, 30.14 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0 내지 5℃에서 교반하면서 메탄설포닐 클로라이드(4.5 g, 39.28 mmol, 1.30 eq.)를 적가하였다. 얻어진 용액을 0 내지 5℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 메탄올(20 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 갈색 고체로서 13.8 g(70%)의 21-33을 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 598.
중간체 ( 21-34 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 아세트산(150 mL) 중 21-33(10 g, 17.37 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 아세틸 아세테이트(19.5 g, 191.01 mmol, 11.00 eq.) 및 황산(170 mg, 1.73 mmol, 0.10 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 황색 고체로서 6.5 g(60%)의 21-34를 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 642.
중간체 ( 21-35 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 아세토니트릴(125 mL) 중 5-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-2,4-다이온(1.5 g, 11.90 mmol, 1.50 eq.)의 용액에 실온에서 N,O-비스(트라이메틸실릴)아세트아미드(5.75 g, 28.19 mmol, 3.50 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이것에 0℃에서 21-34(5 g, 8.07 mmol, 1.00 eq.)를 첨가하고, 이어서 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(2.34 g, 10.53 mmol, 1.30 eq.)를 0℃에서 교반하면서 적가하였다. 얻어진 용액을 80℃에서 추가 6시간 동안 교반하면서 반응되게 하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 염화암모늄을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 4.5 g(81%)의 21-35를 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 686.
중간체 ( 21-36 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 메탄올(90 mL) 중 21-35(9 g, 13.12 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 탄산칼륨(5.4 g, 38.79 mmol, 3.00 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 65℃에서 2시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 5 g(70%)의 21-36을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 548.
중간체 ( 21-37 )의 제조: 테트라하이드로푸란(60 mL) 중 21-36(6 g, 10.96 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 활성탄 상의 10% 팔라듐(2 g)을 첨가하였다. 플라스크를 소기하고, 수소로 5회 플러싱하였다. 얻어진 용액을 실온에서 8시간 동안 교반하였다. 고체를 여과 제거하였다. 얻어진 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 5.3 g(93%)의 21-37R 및 21-37S를 얻었다. 이어서, 혼합물을 분취용 SFC로 분리하였다. 이로써, 백색 고체로서 3.5 g을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 522.
중간체 ( 21-38 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 피리딘(35 mL) 중 21-37(3.5 g, 6.71 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 1-(클로로다이페닐메틸)-4-메톡시벤젠(2.7 g, 8.74 mmol, 1.30 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 메탄올(20 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 4 g(75%)의 21-38을 얻었다. MS m/z [M-H]- (ESI): 792.
중간체 ( 21-39 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(40 mL) 중 21-38(4 g, 5.04 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 트라이에틸아민(1 g, 9.9 mmol, 2.0 eq.)을 첨가하였다. 이것에 실온에서 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(0.97 g, 7.56 mmol, 1.50 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하고, 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물로 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 2.3 g(80%)의 21-39를 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6, 300 ㎐, ppm): δ 11.33 (s, 1H), 7.45 (m, 5H), 7.20 (m, 8H), 6.80 (m, 2H), 5.35 (t, J=5.1 ㎐, 1H), 5.15 (s, 1H), 4.23 (m, 1H), 4.05 (m, 1H), 3.81 (m, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.92 (d, J=9.7 ㎐, 1H), 2.25 (d, J=9.8 ㎐, 1H), 2.05 (s, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.12 (d, J=6.1 ㎐, 3H).
( 21-40 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(23 mL) 중 21-39의 용액에 실온에서 비스(다이아이소프로필아미노)(2-시아노에톡시)포스핀(1.62 g, 5.38 mmol, 1.30 eq.)을 첨가하였다. 이것에 실온에서 4,5-다이시아노이미다졸(490 mg, 4.15 mmol, 1.10 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 이어서, 혼합물을 물로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 2.3 g(70%)의 21-40을 얻었다. MS m/z [M-H]-(ESI): 754. 1H NMR (DMSO-d6, 400 ㎐, ppm) δ 11.37 (s, 1H), 7.45 (m, 4H), 7.28 (m, 9H), 6.80 (m, 2H), 5.18 (d, J=6.3 ㎐, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.21 (m, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.7 (m, 6H), 3.6 (m, 1H), 2.90 (m, 3H), 2.33 (m, 1H), 2.13 (m, 1H), 1.59 (d, J=21.6 ㎐, 3H), 1.20 (m, 15H). P NMR (DMSO-d6, 400 ㎐, ppm): 147.45, 147.08.
실시예 18
반응도식 20
중간체 ( 22-2 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 톨루엔(100 mL) 중 트라이페닐포스판(10.5 g, 40.03 mmol, 2.00 eq.)의 용액에 실온에서 다이아이소프로필 아조다이카르복실레이트(8.10 g, 40.03 mmol, 2.00 eq.)를 첨가하였다. 이것에 0℃에서 p-니트로벤조산(6.70 g, 40.03 mmol, 2.00 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이것에 실온에서 22-1(10 g, 20.09 mmol, 1.00 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 60℃에서 추가 8시간 동안 반응되게 하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 각각 세척하였다. 혼합물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 황색 고체로서 5 g(38%)의 22-2를 얻었다.
중간체 ( 22-3 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 메탄올(300 mL) 중 22-2(27.5 g, 42.52 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 수산화나트륨(4.6 g, 85 mmol, 2.0 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용액의 pH 값을 아세트산을 사용하여 8로 조정하였다. 얻어진 혼합물을 농축시키고, 이어서 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 황색 오일로서 16.5 g(78%)의 22-3을 얻었다.
중간체 ( 22-4 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 피리딘(160 mL) 중 22-3(16.5 g, 33.15 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0 내지 5℃에서 교반하면서 메탄설포닐 클로라이드(4.95 g, 43.23 mmol, 1.30 eq.)를 적가하였다. 얻어진 용액을 0 내지 5℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 메탄올(30 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 혼합물을 무수 염화칼슘으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 갈색 고체로서 15.3 g(70%)의 22-4를 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 598.
중간체 ( 22-5 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 아세트산(150 mL) 중 22-4(15.3 g, 26.57 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 아세틸 아세테이트(30 g, 292.2 mmol, 11.00 eq.) 및 황산(260 mg, 2.65 mmol, 0.10 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 황색 고체로서 10 g(60%)의 22-5를 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 642.
중간체 ( 22-6 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 아세토니트릴(250 mL) 중 5-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-2,4-다이온(3.0 g, 23.8 mmol, 1.50 eq.)의 용액에 실온에서 N,O-비스(트라이메틸실릴) 아세트아미드(11.5 g, 56.1 mmol, 3.50 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이것에 0℃에서 22-5(10 g, 16.14 mmol, 1.00 eq.)를 첨가하고, 이어서 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(4.68 g, 21.06 mmol, 1.30 eq.)를 0℃에서 교반하면서 적가하였다. 얻어진 용액을 80℃에서 추가 6시간 동안 교반하면서 반응되게 하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 염화암모늄을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 9 g(81%)의 22-6을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 686.
중간체 ( 22-7 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 메탄올(90 mL) 중 22-6(9 g, 13.12 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 탄산칼륨(5.4 g, 38.79 mmol, 3.00 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 65℃에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 5 g(70%)의 22-7을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 548.
중간체 ( 22-8 )의 제조: 테트라하이드로푸란(50 mL) 중 22-7(5 g, 9.13 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 활성탄 상의 10% 팔라듐(2 g)을 첨가하였다. 플라스크를 소기하고, 수소로 5회 플러싱하였다. 얻어진 용액을 실온에서 8시간 동안 교반하였다. 고체를 여과 제거하였다. 얻어진 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 4.4 g(93%)의 22-8R 및 22-8을 얻었다. 이어서, 혼합물을 분취용 SFC로 분리하였다. 이로써, 백색 고체로서 1.9 g의 22-8을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 522.
중간체 ( 22-9 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 피리딘(20 mL) 중 22-8(1.9 g, 3.64 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 1-(클로로다이페닐메틸)-4-메톡시벤젠(1.23 g, 4.01 mmol, 1.10 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 메탄올(10 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 포화 중탄산나트륨 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 2.3 g(80%)의 22-9를 얻었다. MS m/z [M-H]- (ESI): 792.
중간체 ( 22-10 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(20 mL) 중 22-9(2.3 g, 2.90 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 트라이에틸아민(723 mg, 7.25 mmol, 2.50 eq.)을 첨가하였다. 이것에, 실온에서 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(2.8 g, 17.4 mmol, 6.00 eq.)를 첨가하고, 얻어진 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 물 및 포화 염화나트륨으로 각각 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 1.7 g(80%)의 22-10을 얻었다. 1H NMR (DMSO-d6, 400 ㎐, ppm) δ11.33 (s, 1H), 7.41 (m, 4H), 7.20 (m, 7H), 7.19 (m, 2H), 6.80 (m, 2H), 5.25 (t, J=5.2 ㎐, 1H), 5.15 (s, 1H), 4.15 (m, 2H), 3.91 (q, J=6.7 ㎐, 1H), 3.73 (s, 3H), 2.73 (d, J=9.5 ㎐, 1H), 2.25 (m, 1H), 2.05 (m, 1H), 1.55 (s, 3H), 1.38 (d, J=6.8 ㎐, 3H).
( 22-11 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(20 mL) 중 22-10(1.77 g, 3.19 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 비스(다이아이소프로필아미노)(2-시아노에톡시)포스핀(1.35 g, 4.3 mmol, 1.4 eq.)을 첨가하였다. 이것에 실온에서 4,5-다이시아노이미다졸(451 mg, 3.6 mmol, 1.20 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하고, 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 각각 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 1.82 g(76%)의 22-11을 얻었다. MS m/z [M-H]-(ESI): 754. 1H NMR (DMSO-d6, 400 ㎐, ppm) δ11.4 (d, J=9.8 ㎐, 1H), 7.40 (m, 4H), 7.28 (m, 8H), 7.07 (m, 1H), 6.79 (m, 2H), 5.22 (d, J=4.0 ㎐, 1H), 4.38 (m, 1H), 4.27 (m, 1H), 4.01 (q, J=6.7 ㎐, 1H), 3.7 (m, 7H), 2.82 (m, 1H), 2.70(m, 1H), 2.13 (m, 1H), 2.32 (d, J=60.2 ㎐, 1H), 2.13 (dd, J=28.6 ㎐ 및 6.0 ㎐, 1H), 1.60 (d, J=18.0 ㎐, 3H), 1.45 (t, J=6.9 ㎐, 3H), 1.20 (m, 12H). P NMR (DMSO-d6, 400 ㎐, ppm): δ148.03, 147.53.
실시예 19
반응도식 21
중간체 ( 23-2 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 아세토니트릴(70 mL) 중 23-1(7.2 g, 9.07 mmol, 1.0 eq.)의 용액에 트라이에틸아민(2.75 g, 27.24 mmol, 3.0 eq.), 4-(다이메틸아미노)-피리딘(3.4 g, 27.24 mmol, 3.0 eq.) 및 2,4,6-트라이아이소프로필벤젠설포닐 클로라이드(8.226 g, 27.24 mmol, 3.0 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 수산화암모늄(20 mL)을 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 황색 고체로서 5.7 g(79%)의 23-2를 얻었다. MS m/z [M-H]-(ESI):791.
중간체 ( 23-3 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 피리딘(70 mL) 중 23-2(5.7 g, 7.20 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 벤조일 클로라이드(1.14 g, 1.2 eq.)를 적가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 메탄올을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 담황색 고체로서 5 g(76%)의 23-3을 얻었다. MS m/z [M-H]- (ESI): 895.
중간체 ( 23- 4 )의 제조: 테트라하이드로푸란(50 mL) 중 23-3(5 g, 5.58 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 테트라부틸암모늄 플루오라이드(테트라하이드로푸란 중 1 M, 11 mL, 2.0 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 얻어진 혼합물을 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 2.5 g(68%)의 23-4를 얻었다. MS m/z [M-H]-(ESI): 657. 1H NMR (DMSO-d6, 300 ㎐, ppm) : δ13.08 (s, 1H), 8.32-8.18 (m, 2H), 7.70-7.35 (m, 8H), 7.31-7.08 (m, 8H), 6.75 (m, 2H), 5.68 (s, 1H), 5.33 (s, 1H), 4.01-3.91 (m, 1H), 3.79 (m, 3H), 3.69 (s, 3H), 2.85 (m, 1H), 2.46-2.05 (m, 2H), 1.88 (s, 3H), 1.70 (s, 1H), 1.36 (m, 1H).
( 23-5 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(25 mL) 중 23-4(2.5 g, 3.80 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 비스(다이아이소프로필아미노)(2-시아노에톡시)포스핀(1.7 g, 5.70 mmol, 1.50 eq.)을 첨가하였다. 이것에 실온에서 4,5-다이시아노이미다졸(490 mg, 4.17 mmol, 1.10 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 2.9710 g(91%)의 23-5를 얻었다. MS m/z [M+H]+(ESI): 859. 1H NMR (DMSO-d6, 300 ㎐, ppm): δ13.07 (s, 1H), 8.15 (m, 2H), 7.70-7.42 (m, 8H), 7.23 (m, 8H), 6.75 (m, 2H), 5.81-5.68 (m, 1H), 4.17-3.97 (m, 1H), 3.96-3.55 (m, 9H), 3.10-2.55 (m, 4H), 2.38-2.19 (m, 1H), 1.98 (m, 4H), 1.81-1.38 (m, 2H), 1.20 (m, 12H). P NMR (DMSO-d6, 300 ㎐, ppm): 148.11, 145.59.
실시예 20
반응도식 22
중간체 ( 24-2 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 N,N-다이메틸포름아미드(5000 mL) 중 (3aR,5S,6S,6aR)-5-(2,2-다이메틸-1,3-다이옥솔란-4-일)-2,2-다이메틸-테트라하이드로-2H-푸로[2,3-d][1,3]다이옥솔-6-올(500 g, 1.92 mol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 (브로모메틸) 벤젠(345 g, 2.02 mol, 1.05 eq.)을 첨가하였다. 수소화나트륨(123 g, 3.0 mol, 1.60 eq.)을 0℃에서 몇몇 배치에 대해 첨가하였다. 얻어진 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 포화 염화암모늄(2000 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 이로써, 황색 오일로서 670 g(조 상태)의 24-2를 얻었다. 이 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 351.
중간체 ( 24-3 )의 제조: 24-2(300 g, 856.14 mmol, 1.00 eq.)를 아세트산(물 중 80%, 3000 mL)에 용해시켰다. 얻어진 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 얻어진 혼합물을 농축시키고, 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 포화 중탄산나트륨으로 각각 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 이로써, 황색 오일로서 237 g(조 상태)의 24-3을 얻었다. 이 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 333.
중간체 ( 24-4 )의 제조: 1,4-다이옥산(2000 mL) 중 24-3(200 g, 644.44 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 교반하면서 물(2000 mL) 중 과요오드산나트륨(138 g, 644.44 mmol, 1.00 eq.)의 용액을 적가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 물로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 이로써, 황색 오일로서 160 g(조 상태)의 24-4를 얻었다. 이 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 279.
중간체 ( 24- 5 )의 제조: 테트라하이드로푸란/물(1000 mL/1000 mL) 중 24-4(200 g, 718.64 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 포름알데하이드 용액(37%, 480 mL)을 첨가하였다. 이것에 0℃에서 교반하면서 2 N 수산화나트륨(1200 mL, 3.12 eq.)을 적가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 유기 층을 물로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 이로써, 황색 오일로서 152.8 g(조 상태)의 24-5를 얻었다. 이 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 333.
중간체 ( 24-6 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 20 L 압력 탱크 반응기 내의 메탄올/아세트산(5000/500 mL) 중 24-5(500 g, 1.61 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 활성탄 상의 10% 팔라듐(250 g)을 첨가하였다. 압력 탱크를 소기하고, 수소로 5회 플러싱하였다. 얻어진 용액을 50℃(8 atm)에서 4일 동안 교반하였다. 고체를 여과 제거하였다. 얻어진 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 280 g(79%)의 24-6을 얻었다.
중간체 ( 24-7 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(6000 mL) 중 24-6(200 g, 908.2 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 교반하면서 벤즈알데하이드(436.0 g, 2722.9 mmol, 3.00 eq.)를 적가하였다. 이어서, 캄퍼설폰산(2 g)을 0℃에서 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 이어서, 반응물을 2000 mL의 포화 중탄산나트륨을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 13.5 g(48%)의 24-7을 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 331. 1H NMR (DMSO-d 6, 400 ㎐, ppm): δ 7.44-7.30 (m, 6H), 5.97 (d, J=4.1 ㎐, 1H), 5.46 (s, 1H), 5.06 (t, J=5.4 ㎐, 1H), 4.64-4.52 (m, 2H), 4.14 (d, J=13.0 ㎐, 1H), 4.08-3.93 (m, 1H), 3.74-3.65 (m, 1H), 3.38 (m, 1H), 1.46 (s, 3H), 1.23 (s, 3H).
중간체 ( 24-8 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(1000 mL) 중 염화옥살릴(30.9 g, 243.31 mmol, 1.50 eq.)의 용액에 -78℃에서 교반하면서 다이메틸 설폭사이드(37.9 g, 485.09 mmol, 3.00 eq.)를 적가하였다. 얻어진 용액을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 이것에 -78℃에서 교반하면서 다이클로로메탄(200 mL) 중 24-7(50 g, 162.17 mmol, 1.00 eq.)의 용액을 적가하였다. 얻어진 용액을 -78℃에서 추가 1.5시간 동안 교반하면서 반응되게 하였다. 이어서, 트라이에틸아민(73.9 g, 730.31 mmol, 4.50 eq.)을 -78℃에서 교반하면서 적가하였다. 얻어진 용액을 -78℃에서 추가 2시간 동안 교반하면서 반응되게 하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 희석시키고, 5% 염산, 포화 중탄산나트륨, 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 49 g(조 상태)의 24-8을 얻었다. 이 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 307.
중간체 ( 24-9 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 테트라하이드로푸란(600 mL) 중 메틸트라이페닐포스포늄 브로마이드(139.8 g, 2.00 eq.)의 용액에 포타슘 tert-부톡사이드(43.8 g, 390.33 mmol, 2.00 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이것에 테트라하이드로푸란(150 mL) 중 24-8(60 g, 195.87 mmol, 1.00 eq.)의 용액을 0℃에서 교반하면서 적가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 추가 2시간 동안 교반하면서 반응되게 하였다. 이어서, 반응물을 포화 염화암모늄(400 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 유기 층을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 38.7 g(65%)의 24-9를 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 305.
중간체 ( 24-10 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 테트라하이드로푸란(600 mL) 중 24-9(60 g, 197.16 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 9-보라바이사이클로[3.3.1]노난(테트라하이드로푸란 중 0.5 M, 789 mL, 2.00 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 35℃에서 하룻밤 교반하였다. 이어서, 수산화나트륨(물 중 2 N, 591 mL, 6.00 eq.)을 실온에서 첨가하였다. 이것에 실온에서 교반하면서 과산화수소(30%, 120 mL, 6.00 eq.)를 적가하였다. 얻어진 용액을 반응되게 하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 43.5 g(68%)의 24-10을 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 345.
중간체 ( 24-11 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 피리딘(1000 mL) 중 24-10(100 g, 310.2 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 교반하면서 벤조일 클로라이드(130 g, 924.8 mmol, 3.00 eq.)를 적가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 메탄올(200 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 혼합물을 농축시켰다. 고체를 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 110 g(83%)의 24-11을 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 449.
중간체 ( 24- 12 )의 제조: 메탄올/테트라하이드로푸란(500/100 mL) 중 24-11(200 g, 469 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 활성탄 상의 10% 팔라듐(100 g)을 첨가하였다. 플라스크를 소기하고, 수소로 5회 플러싱하였다. 얻어진 용액을 40℃에서 48시간 동안 교반하였다. 고체를 여과 제거하였다. 얻어진 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 무색 오일로서 35 g(88%)의 24-12를 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 361.
중간체 ( 24-13 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 N,N-다이메틸포름아미드(500 mL) 중 24-12(50 g, 147.77 mmol, 1.00 eq.) 및 이미다졸(19.5 g, 286.43 mmol, 2.00 eq.)의 용액에 0℃에서 교반하면서 tert-부틸다이페닐실란(44.5 g, 1.10 eq.)을 적가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 메탄올(100 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 다이클로로메탄 중에 용해시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 고체로서 60 g(70%)의 24-13을 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 599. 1H NMR (DMSO-d 6, 300 ㎐, ppm): 7.90-7.80 (m, 2H), 7.72-7.54 (m, 5H), 7.49-7.30 (m, 8H), 5.85 (d, J=4.4 ㎐, 1H), 5.59 (d, J=4.9 ㎐, 1H), 4.54 (m, 1H), 4.37 (t, J=7.0 ㎐, 2H), 4.09 (m, 1H), 3.29 (s, 2H), 2.22 (m, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.21 (s, 3H), 0.96 (s, 9H.
중간체 ( 24-14 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄/피리딘(448/134 mL) 중 24-13(64 g, 110.97 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 교반하면서 트라이플루오로메탄설폰산 무수물(46.9 g, 166.23 mmol, 1.50 eq.)을 적가하였다. 얻어진 용액을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 이로써, 고체로서 78 g(조 상태)의 24-14를 얻었다. 이 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. MS m/z [M+Na]+ (ESI): 731.
중간체 ( 24-15 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 N,N-다이메틸포름아미드(800 mL) 중 24-14(78 g, 110.04 mmol, 1.00 eq.) 및 테트라부틸암모늄 요오다이드(4 g, 10.83 mmol, 0.10 eq.)의 용액에 아지드화나트륨(21.5 g, 330.72 mmol, 3.00 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 100℃에서 하룻밤 교반하였다. 이어서, 반응물을 빙수(200 mL)를 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 갈색 오일로서 45 g(68%)의 24-15를 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI):624.
중간체 ( 24-16 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 메탄올(900 mL) 중 24-15(91 g, 151.22 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 소듐 메톡사이드(메탄올 중 30%, 50 mL, 2.00 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 유기 층을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 55g(73%)의 24-16을 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI):520.
중간체 ( 24-17 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(825 mL) 중 24-16(56 g, 112.53 mmol, 1.00 eq.) 및 트라이에틸아민(67.2 g, 664.10 mmol, 6.00 eq.)의 용액에 실온에서 4-다이메틸아미노피리딘(1 g, 8.19 mmol, 0.31 eq.) 및 4-톨루엔 설포닐 클로라이드(31.5 g, 165.22 mmol, 1.50 eq.)를 순서대로 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 무색 오일로서 55 g(75%)의 24-17을 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI):674.
중간체 ( 24-18 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 아세트산(1000 mL) 중 24-17(100 g, 153.4 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 아세틸 아세테이트(17.2 g, 168.48 mmol, 11.00 eq.) 및 황산(300 mg, 3.08 mmol, 0.20 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 빙수(600 mL)를 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 갈색 고체로서 52 g(49%)의 24-18을 얻었다. MS m/z [M+Na]+ (ESI):718.
중간체 ( 24-19 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 아세토니트릴(100 mL) 중 6-N-벤조일아데닌(6.7 g, 1.50 eq.)의 용액에 N,O-비스(트라이메틸실릴)아세트아미드(18.9 g, 92.91 mmol, 5.00 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 85℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이후에, 0℃에서 아세토니트릴(100 mL) 중 24-18(13 g, 18.68 mmol, 1.00 eq.)을 첨가하였다. 이것에 트라이플루오로메탄설폰산 트라이메틸실릴 에스테르(20.7 g, 92.91 mmol, 5.00 eq.)를 0℃에서 적가하였다. 얻어진 용액을 85℃에서 추가 4시간 동안 교반하면서 반응되게 하였다. 이어서, 반응물을 포화 중탄산나트륨(100 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하였다. 유기 층을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 8 g(49%)의 24-19를 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI):875.
중간체 ( 24-20 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 테트라하이드로푸란(55 mL) 중 24-19(7.4 g, 8.46 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 물(25 mL) 중 수산화리튬(1.01 g, 42.17 mmol, 5.00 eq.)의 용액을 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 4.3 g(77%)의 24-20을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI):661.
중간체 ( 24- 21 )의 제조: 테트라하이드로푸란(40 mL) 중 24-20(4 g, 6.05 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 활성탄 상의 10% 팔라듐(1.2 g)을 첨가하였다. 플라스크를 소기하고, 수소로 5회 플러싱하였다. 얻어진 용액을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 고체를 여과 제거하였다. 얻어진 혼합물을 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 3.8 g(99%)의 24-21을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI):635.
중간체 ( 24-22 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 피리딘(38 mL) 중 24-21(3.8 g, 5.99 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 4-메톡시트라이페닐메틸 클로라이드(2.0 g, 6.59 mmol, 1.10 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 메탄올(5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 다이클로로메탄 중에 용해시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 2.7 g(50%)의 24-22를 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI):908.
중간체 ( 24-23 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(27 mL) 중 24-22(2.7 g, 2.98 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 트라이에틸아민(750 mg, 7.41 mmol, 2.50 eq.) 및 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(2.87 g, 17.80 mmol, 6.00 eq.)를 순서대로 첨가하였다. 얻어진 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 1.8 g(90%)의 24-23을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI):669. 1H NMR (DMSO-d 6, 300 ㎐, ppm): δ11.18 (s, 1H), 8.63 (d, J=13.7 ㎐, 2H), 8.13-8.03 (m, 2H), 7.71-7.49 (m, 3H), 7.42-7.29 (m, 4H), 7.23-6.92 (m, 8H), 6.62-6.51 (m, 2H), 6.25 (s, 1H), 5.27 (t, J=4.3 ㎐, 1H), 4.04 (m, J=12.0 ㎐, 4.6 ㎐, 1H), 3.88 (t, J=5.5 ㎐, 3H), 3.57 (s, 3H), 3.04 (d, J=10.6 ㎐, 1H), 2.41 (d, J=10.8 ㎐, 1H), 2.20 (m, J=12.2 ㎐, 7.7 ㎐, 1H), 1.57 (d, J=2.5 ㎐, 1H), 1.44 (d, J=11.7 ㎐, 1H).
( 24- 24 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(20 mL) 중 24-23(1.8 g, 2.69 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 비스(다이아이소프로필아미노)(2-시아노에톡시)포스핀(1.26 g, 1.40 eq.)을 첨가하고 4,5-다이시아노이미다졸(422 mg, 1.20 eq.)을 순서대로 첨가하였다. 얻어진 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 얻어진 용액을 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 포화 중탄산나트륨 및 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 2.1 g(77%)의 24-24를 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI):869. 1H NMR (DMSO-d 6, 300 ㎐, ppm): δ11.20 (s, 1H), 8.62 (d, J=17.2 ㎐, 1H), 8.40 (m, 1H), 8.13-8.03 (m, 2H), 7.65 (m, 1H), 7.56 (m, 2H), 7.47-7.33 (m, 4H), 7.21 (t, J = 8.3 ㎐, 2H), 7.15-6.92 (m, 6H), 6.59 (d, J=8.5 ㎐, 2H), 6.31 (d, J=3.6 ㎐, 1H), 4.22-4.02 (m, 1H), 4.00-3.37 (m, 9H), 3.04 (d, J=10.6 ㎐, 1H), 2.92-2.67 (m, 2H), 2.55 (d, J=11.3 ㎐, 1H), 2.31 (m, 1H), 1.73-1.47 (m, 2H), 1.27-0.99 (m, 13H), 0.93-0.76 (m, 1H). P-NMR (DMSO-d6, 300 ㎐, ppm): δ148.21, 147.04.
실시예 21
반응도식
23
중간체 ( 25-2 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 1,2-다이클로로에탄(200 mL) 중 N-2-아세틸구아닌(12.4 g, 56.36 mmol, 3.00 eq.)의 용액에 실온에서 N,O-비스(트라이메틸실릴)아세트아미드(19 g, 93.6 mmol, 5.00 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 85℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이것에 0℃에서 25-1(13 g, 18.68 mmol, 1.00 eq.)을 첨가하고, 이어서 트라이메틸실릴 트라이플루오로메탄설포네이트(20.8 g, 93.58 mmol, 5.00 eq.)를 0℃에서 교반하면서 적가하였다. 얻어진 용액을 80℃에서 추가 2시간 동안 교반하면서 반응되게 하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 염화암모늄(80 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 5.6 g(35%)의 25-2를 얻었다. MS m/z [M+H] + (ESI): 857.
중간체 ( 25-3 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 테트라하이드로푸란(56 mL) 중 25-2(5.6 g, 6.53 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 0℃에서 1 M 수산화나트륨(56 mL)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용액의 pH 값을 아세트산을 사용하여 7로 조정하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 각각 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 2.9 g(69%)의 25-3을 얻었다.
중간체 ( 25- 4 )의 제조: 테트라하이드로푸란(30 mL) 중 25-3(2.9 g, 4.51 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 활성탄 상의 10% 팔라듐(1.2 g)을 첨가하였다. 플라스크를 소기하고, 수소로 5회 플러싱하였다. 얻어진 용액을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 고체를 여과 제거하였다. 얻어진 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 이로써, 백색 고체로서 2.5 g(90%)의 25-4를 얻었다.
중간체 ( 25-5 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 피리딘(25 mL) 중 25-4(2.5 g, 4.05 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 1-(클로로다이페닐메틸)-4-메톡시벤젠(1.9 g, 6.15 mmol, 1.50 eq.) 및 4-다이메틸아미노피리딘(150 mg, 1.23 mmol, 0.30 eq.)을 순서대로 첨가하였다. 얻어진 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 메탄올(10 mL)을 첨가함으로써 켄칭하였다. 얻어진 용액을 에틸 아세테이트로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 각각 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 2.7 g(75%)의 25-5를 얻었다.
중간체 ( 25-6 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(30 mL) 중 25-5(2.7 g, 3.04 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 트라이에틸아민(1 g, 9.88 mmol, 3.00 eq.)을 첨가하였다. 이것에 실온에서 트라이에틸아민 트라이하이드로플루오라이드(1.5 g, 9.32 mmol, 3.0 eq.)를 첨가하였다. 얻어진 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하고, 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 각각 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 1.7 g(86%)의 25-6을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 651. 1H NMR (DMSO-d6, 400 ㎐, ppm) δ 12.16 (s, 1H), 11.77 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.42 (m, 4H), 7.15 (m, 8H), 6.56 (d, J=8.4 ㎐, 2H), 5.97 (s, 1H), 5.22 (t, J=4.3 ㎐, 1H), 4.01 (m, 1H), 3.85 (m, 2H), 3.73 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 3.01 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.39 (d, J=10.9 ㎐, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.58 (d, J=2.6 ㎐, 1H), 1.41 (m, 1H), 1.18 (d, J=6.8 ㎐, 3H), 1.12 (d, J=6.8 ㎐, 3H.
( 25-7 )의 제조: 불활성 질소 분위기 하에서 다이클로로메탄(17 mL) 중 25-6(1.7 g, 2.61 mmol, 1.00 eq.)의 용액에 실온에서 비스(다이아이소프로필아미노)(2-시아노에톡시)포스핀(950 mg, 3.16 mmol, 1.30 eq.)을 첨가하였다. 이것에 실온에서 4,5-다이시아노이미다졸(340 mg, 2.91 mmol, 1.10 eq.)을 첨가하였다. 얻어진 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하고, 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 얻어진 혼합물을 물 및 포화 염화나트륨으로 각각 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 1.8 g(81%)의 25-7을 얻었다. MS m/z [M+H]+ (ESI): 851. H NMR (DMSO-d6, 400 ㎐, ppm) δ 12.18 (s, 1H), 11.80 (s, 1H), 7.98 (d, J=64.4 ㎐, 1H), 7.47 (m, 4H), 7.15 (m, 8H), 6.56 (m, 2H), 6.01 (d, J=10.0 ㎐, 1H), 3.95 (m, 3H), 3.77 (m, 2H), 3.66 (m, 1H), 3.59 (d, J=9.8 ㎐, 3H), 3.38 (m, 2H), 2.91 (m, 4H), 2.30 (m, 1H), 1.55 (m, 2H), 1.15 (m, 14H), 1.04 (d, J=6.7 ㎐, 4H). P NMR (DMSO-d6, 400 ㎐, ppm): 148.62, 147.09.
실시예 22
2'-O-비닐 아데노신 유사체 26-8의 합성을 반응도식 26에 나타낸 바와 같이 달성하였다. 중간체 6-2를 NH3/MeOH로 처리하여 화합물 26-1을 얻었다. 비닐 모이어티와 아지드의 부반응을 피하기 위하여, C3'-아지드를 환원제, 예컨대 H2, Pd/C로 환원하여 중간체 26-2를 얻었으며, 이의 유리 3'-NH2를 MMTr 보호기로 보호하여 26-3을 형성하였다. 이 염기의 N6 위치의 탈보호 후에 26-4를 얻었으며, 알릴 브로마이드를 사용하여 알킬화를 수행하여 26-5를 얻었다. 이러한 접근법은 알킬화 전에 C3'-아지드의 환원을 사용하여 비닐 모이어티와 아지드의 부반응을 피하였다. N6 위치를 벤질 클로라이드로 재보호하여 화합물 26-6을 얻었으며, 이것을 Py/NaOH/MeOH/H2O로 5'-탈보호하여 26-7을 얻었다. 표준 포스피틸화 조건을 사용하여 목표 화합물 26-8을 달성하였다.
반응도식 24
중간체 26-1 의 제조: 메탄올(500 mL) 중 6-2(32.6 g, 58.6 mmol)의 용액에 0℃에서 NH3 . H2O(50 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, 농축시키고, 잔류물을 EA 중에 용해시키고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 용매를 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 정제하여, 황색 고체로서 26-1(28.5 g, 55.4 mmol, 94.62% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 515 [M+H]+.
중간체 26-2 의 제조: THF(400.00 mL) 중 26-1(28.5 g, 55.4 mmol)의 용액에 Pd/C(3.0 g)를 첨가하고, 혼합물을 H2 하에서 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과액을 농축시켜, 회색 고체로서 26-2(21.5 g, 44.1 mmol, 79.60% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 489 [M+H]+.
중간체 26-3 의 제조: MMTrCl(20.4 g, 66.1 mmol)을 피리딘(300 mL) 중 26-2(21.5 g, 44.1 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 MeOH로 켄칭하고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 26-3(22.0 g, 28.9 mmol, 65.53% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 761 [M+H]+.
중간체 26-4 의 제조: 피리딘(200 mL) 및 AcOH(50 mL)의 혼합물 중 26-3(22.0 g, 28.9 mmol)의 용액에 하이드라진 수화물(80%)(173.5 mmol, 10 mL)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 26-4(18.0 g, 27.4 mmol, 94.79% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 657 [M+H]+.
중간체 26-5 의 제조: Ag2O(9.5 g, 41.1 mmol, 1.33 mL) 및 NaI(8.2 g, 54.8 mmol)를 건성 DMF(250 mL) 중 26-4(18 g, 27.4 mmol) 및 비닐 브로마이드(6.6 g, 54.8 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 재결정화(PE:EA = 1:1)로 정제하여, 백색 고체로서 26-5(12.1 g, 17.3 mmol, 63.36% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 7.99 (d, J = 2.0 ㎐, 1H), 7.53-7.48 (m, 6H), 7.40-7.37 (m, 2H), 7.28 (br s, 2H, D2O로 교환됨), 7.21-7.14 (m, 6H), 7.09-7.04 (m, 2H), 6.68 (d, J = 9.2 ㎐, 2H), 5.93 (s, 1H), 5.87-5.77 (m, 1H), 5.22-5.16 (m, 1H), 5.10-5.07 (m, 1H), 4.81-4.78 (m, 1H), 4.68 (dd, J = 3.2, 12.4 ㎐, 1H), 4.05-3.99 (m, 1H), 3.94-3.89 (m, 1H), 3.53 (s, 3H), 3.22-3.18 (m, 1H), 2.92 (d, J = 10.8 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 2.49 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 2.37 (s, 3H). ESI-LCMS: m/z 697 [M+H]+.
중간체 26-6 의 제조: BzCl(4.8 g, 34.4 mmol)을 0℃에서 피리딘(120 mL) 중 26-5(12 g, 17.2 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후에, 300 mL의 H2O 및 500 mL의 EA를 첨가하여 용액을 분리하고, 수성 상을 EA로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜, 황색 오일로서 조 생성물 26-6(16.2 g)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 801 [M+H]+.
중간체 26-7 의 제조: 피리딘(200 mL) 중 조 26-6(16.2 g)의 용액에 0℃에서 2 N NaOH(MeOH:H2O = 4:1)(50 mL)를 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반하고, 이어서 포화 NH4Cl (aq.)로 중화시켜 pH = 7 내지 8을 얻었으며, 500 mL의 H2O 및 800 mL의 EA를 첨가하여 용액을 분리하였으며, 수성 층을 EA로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 MPLC로 정제하여, 백색 고체로서 26-7(9.3 g, 13.6 mmol, 79.07% 수율(2 단계에 걸침))을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.15 (s, 1 H, D2O로 교환됨), 8.68 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.07-8.05 (m, 2H), 7.67-7.63 (m, 1H), 7.57-7.53 (m, 2H), 7.44-7.41 (m, 4H), 7.27 (d, J = 9.2 ㎐, 2H), 7.20-7.16 (m, 4H), 7.13-7.09 (m, 2H), 6.72 (d, J = 9.2 ㎐, 2H), 6.08 (s, 1H), 5.93-5.83 (m, 1H), 5.27-5.22 (m, 1H), 5.18 (t, J = 4.0 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 5.13-5.10 (m, 1H), 4.11-3.99 (m, 4H), 3.64 (s, 3H), 3.46-3.42 (m, 1H), 3.38-3.32 (m, 1H), 2.71 (d, J = 10.8 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 1.91 (d, J = 4.4 ㎐, 1H). ESI-LCMS: m/z 683 [M+H]+.
26-8 의 제조: Ar 하에서 포스피틸화 시약(3.4 g, 11.4 mmol)을 건성 DCM(70 mL) 중 26-7(6.5 g, 9.5 mmol) 및 DCI(1.1 g, 9.5 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 10% NaHCO3(aq.) 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 26-8(7.1 g, 8.0 mmol, 84.46% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒,CDCl3): δ = 9.02 (br s, 1 H), 8.74 (d, J = 10.4 ㎐, 1H), 8.37 (d, J = 108.4 ㎐, 1H), 8.04 (t, J = 7.2 ㎐, 2H), 7.65-7.61 (m, 1H), 7.57-7.53 (m, 2H), 7.51-7.48 (m, 4H), 7.41-7.38 (m, 2H), 7.21-7.10 (m, 6H), 6.73-6.70 (m, 2H), 6.03 (d, J = 2.4 ㎐, 1H), 5.91-5.79 (m, 1H), 5.31-5.21 (m, 2H), 5.17-5.13 (m, 1H), 4.40-4.25 (m, 2H), 4.16-4.08 (m, 1H), 4.05-3.94 (m, 1H), 3.89-3.80 (m, 1H), 3.72 (dd, J = 0.8, 10.8 ㎐, 3H), 3.70-3.47 (m, 4H), 3.42-3.35 (m, 1H), 2.86 (dd, J = 10.8, 23.2 ㎐, 1H), 2.68-2.51 (m, 2H), 1.62 (dd, J = 4.4, 210.8 ㎐, 1H), 1.26-1.18 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, CDCl3): 148.85, 148.24. ESI-LCMS: m/z 883 [M+H]+.
실시예 23
구아노신 염기 2'-비닐 포스포르아미데이트(27-9)의 합성을 반응도식 27에 나타낸 바와 같이 달성하였다. 화합물 7-2의 C3'-아지드를 상응하는 아민으로 환원시켜 27-1을 얻었다. 3'-아민을 N-Boc로 보호하여 중간체 27-2를 얻었다. Ag2O 및 NaI의 존재 하에서 알릴브로마이드를 사용함으로써 2'-O-알릴화를 수행하여 중간체 27-3을 형성하였다. 3'-NH 위치에서의 Boc 보호는 이러한 특정 경우에 대해 MMTr에 비하여 더 높은 알킬화 수율을 제공하는 것으로 밝혀졌다. 고리외 아미노의 MMTr 절단을 행하여 27-4를 얻은 후, iBuCl로 탈보호하여 화합물 27-5를 얻었다. 이어서, 3' 아민을 탈보호하여 27-6을 얻었으며, 이것을 MMTrCl로 재보호한 후에 27-7을 얻었다. 5'-Tol 기를 절단하여 27-8을 형성하고, 마지막으로 포스피틸화하여 목표 화합물 27-9를 얻었다.
반응도식 25
중간체 ( 27-1 )의 제조: THF(500 mL) 중 7-2(50.5 g, 69.7 mmol)의 용액에 PPh3(27.4 g, 104.5 mmol) 및 H2O(1.3 g, 69.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 27-1(41.1 g, 59.3 mmol, 85.08% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 691 [M+H]+.
중간체 ( 27-2 )의 제조: THF(300 mL) 및 포화 NaHCO3(aq.)(200 mL)의 혼합물 중 27-1(41.1 g, 59.3 mmol)의 용액에 Boc2O(15.5 g, 71.2 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 마지막으로, 그것을 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 27-2(46.2 g, 58.2 mmol, 98.00% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 791 [M+H]+.
중간체 ( 27-3 )의 제조: 건성 DMF(400 mL) 중 비닐 브로마이드(45 g, 56.8 mmol) 및 27-2(10.3 g, 85.3 mmol)에 Ag2O(19.7 g, 85.3 mmol) 및 NaI(12.8 g, 85.3 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하고, 빙수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 27-3(35.3 g, 42.4 mmol, 74.66% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 831 [M+H]+.
중간체 ( 27-4 )의 제조: TCA(100 g, 42.1 mmol)를 DCM(400 mL) 중 27-3(35 g, 42.1 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 이 시간 후에, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3(aq.)로 중화시켜 pH = 8 내지 9를 얻었다. EA를 첨가하고, 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 27-4(18.5 g, 33.1 mmol, 78.61% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 559 [M+Na]+.
중간체 ( 27-5 )의 제조: iBuCl(5.2 g, 48.3 mmol)을 0℃에서 피리딘(200 mL) 중 27-4(18 g, 32.2 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 후에, 500 mL의 H2O 및 800 mL의 EA를 첨가하여 용액을 분리하였다. 수성 상을 EA로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 마지막으로 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 27-5(18.1 g, 28.77 mmol, 89.35% 수율)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 629 [M+H]+.
중간체 ( 27-6 )의 제조: 27-5(18 g, 28.6 mmol)를 TFA(180 mL) 및 H2O(60 mL)의 혼합물 중에 용해시켰다. 반응물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 포화 NaHCO3(aq.)로 중화시켰다. 조 생성물을 EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시켰다. 농축 후, 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 27-6(12.5 g, 24.5 mmol, 85.57% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 511 [M+H]+.
중간체 ( 27-7 )의 제조: 무수 DCM(150 mL) 중 27-6(12.5 g, 24.5 mmol)의 용액에 콜리딘(5.9 g, 49.0 mmol), AgNO3(6.2 g, 36.7 mmol), 및 MMTr-Cl(11.3 g, 36.7 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 N2 하에서 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료에 도달한 후에, 조 반응 혼합물을 여과하고, H2O로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 조 생성물 27-7(18.5 g, 23.6 mmol, 96.56% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 783 [M+H]+.
중간체 ( 27- 8 )의 제조: 피리딘(200 mL) 중 조 27-7(18.5 g, 23.6 mmol)의 용액에 0℃에서 2 N NaOH(MeOH:H2O = 4:1 중)(50 mL)를 적가하고, 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 포화 NH4Cl(aq.)로 중화시켜 pH = 7 내지 8을 얻었으며, 500 mL의 H2O 및 800 mL의 EA를 첨가하였다. 수성 상을 EA로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 MPLC로 정제하여, 백색 고체로서 27-8(12.1 g, 18.2 mmol, 77.21% 수율)을 얻었다.1H-NMR (400 ㎒,CDCl3): δ = 12.13 (s, 1H, D2O로 교환됨), 11.34 (s, 1H, D2O로 교환됨), 8.11 (s, 1H), 7.47-7.43 (m, 4H), 7.28-7.21 (m, 6H), 7.17-7.13 (m, 2H), 6.77-6.75 (m, 2H), 5.89-5.80 (m, 2H), 5.25-5.20 (m, 1H), 5.13-5.09 (m, 1H), 4.03-3.92 (m, 4H), 3.65 (s, 3H), 3.46-3.41 (m, 1H), 3.31-3.24 (m, 1H), 2.87-2.80 (m, 1H), 2.73(d, J = 10.0 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 1.91 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 1.16 (dd, J = 6.8, 11.2 ㎐, 6H). ESI-LCMS: m/z 665 [M+H]+.
( 27- 9 )의 제조: 건성 DCM(80 mL) 중 27-8(7.5 g, 11.3 mmol) 및 DCI(1.5 g, 12.4 mmol)의 용액에 Ar 하에서 포스피틸화 시약(4.4 g, 14.7 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 10% NaHCO3(aq.) 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 이로써, 백색 고체로서 27-9(7.4 g, 8.5 mmol, 75.79% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒,CDCl3): δ = 7.90 (d, J = 119.2 ㎐, 1H), 754-7.51 (m, 4H), 7.42-7.37 (m, 2H), 7.28-7.12 (m, 6H), 6.78-6.72 (m, 2H), 5.79-5.65 (m, 2H), 5.18-5.04 (m, 2H), 4.30-4.09 (m, 3H), 3.93-3.33 (m, 10H), 2.86 (dd, J = 10.0, 28.8 ㎐, 1H), 2.72-2.52 (m, 3H), 2.10 (dd, J = 4.8, 211.6 ㎐, 1H), 1.28-1.11 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, CDCl3): 149.14, 148.15. ESI-LCMS: m/z 865 [M+H]+.
실시예 24
2'-O-알릴 우리딘 포스포르아미다이트 28-5의 합성을 하기 반응도식 28에 나타낸 바와 같이 달성하였다. 간략하게 말하면, 8-5의 3'NH2 기의 MMTrCl-매개 보호를 행하여 화합물 28-4를 얻었으며, 이것을 알릴브로마이드로 알킬화하여 28-2를 얻었다. 피롤리딘으로 프로피올레이트 기의 탈보호를 달성하여 28-3을 형성하였다. 이어서, 5'-에스테르를 절단하여 중간체 28-4를 얻었으며, 이것을 포스피틸화하여 표적 포스포르아미다이트 28-5를 얻었다.
반응도식 26
중간체 ( 28-1 )의 제조: Ar 하에서 MMTrCl(15.3 g, 49.6 mmol)을 피리딘(300 mL) 중 8-5(19.0 g, 41.3 mmol)의 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. MeOH로 켄칭하고, 농축시켜 잔류물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 7(24.5 g, 33.4 mmol, 80.97% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.08 (d, J = 14.8 ㎐, 1H), 7.59-7.48 (m, 7H), 7.35-7.28 (m, 4H), 7.23-7.16 (m, 4H), 7.12-7.03 (m, 2H), 6.87 (d, J = 14.8 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.93 (d, J = 4.4 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 5.42-5.40 (m, 2H), 4.73 (d, J = 12.4 ㎐, 1H), 4.61 (dd, J = 2.8, 12.8 ㎐, 1H), 4.28-4.19 (m, 3H), 3.58 (s, 3 H), 3.13-3.04 (m, 2H), 2.38 (s, 3 H), 2.15 (t, J = 4.0 ㎐, 1H), 1.27 (t, J = 7.2 ㎐, 3H). ESI-LCMS: m/z 732 [M+H]+.
중간체 ( 28-2 )의 제조: Ar 하에서 건성 DMF(250 mL) 중 28-1(22.5 g, 30.7 mmol) 및 알릴 브로마이드(7.4 g, 61.5 mmol)의 용액에 NaI(9.2 g, 61.5 mmol) 및 Ag2O(10.7 g, 46.1 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수에 붓고, EA로 추출하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 28-2(18.8 g, 24.3 mmol, 79.22% 수율)를 얻었다.1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 8.06 (d, J = 14.8 ㎐, 1H), 7.59 (t, J = 8.0 ㎐, 3H), 7.50 (t, J = 8.4 ㎐, 4H), 7.33 (d, J = 8.4 ㎐, 2H), 7.27 (d, J = 8.0 ㎐, 2H), 7.22-7.15 (m, 4H), 7.10 (t, J = 7.2 ㎐, 1H), 7.04 (t, J = 7.6 ㎐, 1H), 6.87 (dd, J = 2.4, 22.8 ㎐, 1H), 6.72 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 5.88-5.78 (m, 1H), 5.38 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 5.22 (dd, J = 1.6, 17.2 ㎐, 1H), 5.11-5.08 (m, 1H), 4.87-4.75 (m, 2H), 4.34 (d, J = 10.4 ㎐, 1H), 4.20 (dd, J = 7.2, 14.4 ㎐, 2H), 4.06-3.99 (m, 1H), 3.55 (s, 3H), 3.32-3.30 (m, 2H), 2.79 (d, J = 10.4 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 2.37 (s, 3H), 1.84 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 1.26 (t, J = 7.2 ㎐, 3H). ESI-LCMS: m/z 772 [M+H]+.
중간체 ( 28-3 )의 제조: 피롤리딘(1.8 g, 25.9 mmol)을 아세토니트릴(200 mL) 중 28-2(20.0 g, 25.9 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔 상에서 정제하여, 담황색 고체로서 28-3(15.5 g, 23.0 mmol, 88.81% 수율)을 얻었다. ESI-LCMS: m/z 696 [M+Na]+.
중간체 ( 28-4 )의 제조: 28-3(6.0 g, 8.9 mmol) 및 2 N NaOH(MeOH: H2O = 4:1 중)(60 mL)의 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. TLC가 28-3을 완전히 소비하였음을 보여준 후에, 28-4를 DCM으로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 MPLC로 정제하여, 백색 고체로서 28-4(4.3 g, 7.7 mmol, 87.05%)를 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 11.27 (s, 1H, D2O로 교환됨), 7.97 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.47-7.44 (m, 4H), 7.34 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 7.27 (t, J = 7.2 ㎐, 4H), 7.21-7.17 (m, 2H), 6.84 (d, J = 8.8 ㎐, 2H), 5.86-5.76 (m, 1H), 5.25-5.49 (m, 2H), 5.20-5.15 (m, 1H), 5.08-5.05 (m, 1H), 4.06-4.01 (m, 2H), 3.96-3.90 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.30-3.25 (m, 1H), 3.16-3.09 (m, 1H), 2.69 (d, J = 10.4 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 1.57 (d, J = 4.4 ㎐, 1H). ESI-LCMS: m/z 556 [M+H]+.
( 28- 5 )의 제조: 건성 DCM(40 mL) 중 28-4(4.3 g, 7.7 mmol) 및 DCI(999 mg, 8.5 mmol)의 용액에 Ar 하에서 28-4(3.0 g, 10.0 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 10% NaHCO3(aq.) 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 28-5(4.4 g, 5.8 mmol, 75.68% 수율)를 백색 고체로서 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒,CDCl3): δ = 7.80 (dd, J = 8.0, 182.4 ㎐, 1H), 7.55-7-43 (m, 6H), 7.30-7.18 (m, 6H), 6.82-6.78 (m, 2H), 5.84-5.74 (m, 1H), 5.66 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.60 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 5.22-5.17 (m, 1H), 5.11-5.08 (m, 1H), 4.32-4.29 (m, 1H), 4.19-4.01 (m, 3H), 3.89-3.81 (m, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.66-3.46 (m, 3H), 3.39-3.35 (m, 1H), 3.22-3.01 (m, 1H), 2.94-2.88 (m, 1H), 2.64-2.44 (m, 1H), 1.52 (dd, J = 4.8, 140.0 ㎐, 1H), 1.25-1.15 (m, 12H). 31P-NMR (162 ㎒, CDCl3): 149.16, 148.20. ESI-LCMS: m/z 756 [M+H]+.
실시예 25
반응도식 27
중간체 ( 29-1 )의 제조: Ar 하에서 DMAP(3.6 g, 29.7 mmol), TEA(3.0 g, 29.6 mmol, 4 mL) 및 TPSCl(6.7 g, 22.2)을 건성 아세토니트릴(100 mL) 중 28-3(10.0 g, 14.8 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후에, 진한 NH3.H2O(25 mL)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 추가 15시간 동안 교반하였다. 완료 시에, 용매를 제거하고, 잔류물을 EA 중에 용해시키고, 포화 NH4Cl(aq.) 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 담황색 고체로서 29-1(8.9 g, 13.2 mmol, 89.14% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒, DMSO-d 6): δ = 7.59 (d, J = 7.6 ㎐, 2H, D2O로 교환됨), 7.50-7.43 (m, 5H), 7.35-7.29 (m, 4H), 7.22-7.17 (m, 6H), 7.14-7.06 (m, 2H), 6.71 (d, J = 9.2 ㎐, 2H), 5.88-5.79 (m, 1H), 5.55 (s, 1H), 5.39 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 5.22 (dd, J = 1.6, 17.2 ㎐, 1H), 5.08 (dd, J = 1.2, 10.4 ㎐, 1H), 4.88-4.76 (m, 2H), 4.31-4.28 (m, 1H), 4.09-4.04 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.29-3.25 (m, 1H), 3.20-3.14 (m, 1H), 2.79 (d, J = 9.2 ㎐, 1H, D2O로 교환됨), 2.41 (s, 3H), 1.61 (d, J = 4.4 ㎐, 1H). ESI-LCMS: m/z 673 [M+H]+.
중간체 ( 29-2 )의 제조: 피리딘(80 mL) 중 29-1(8.5 g, 12.6 mmol)의 용액에 0℃에서 BzCl(2.1 g, 15.1 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후에, 300 mL의 H2O 및 500 mL의 EA를 첨가하였다. 수성 층을 EA로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜, 황색 오일로서 조 생성물 29-2(11.30 g)를 얻었다. ESI-LCMS: m/z 777 [M+H]+.
중간체 ( 29-3 )의 제조: 2 N NaOH(60 mL, MeOH:H2O = 4:1)를 0℃에서 피리딘(120 mL) 중 조 생성물 29-2(12.0 g, 15.4 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 15분 동안 교반하고, 이어서 포화 NH4Cl(aq.)로 중화시키고, 500 mL의 H2O 및 800 mL의 EA를 첨가하였다. 수성 상을 EA로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 실리카 겔 상에서 정제하여, 백색 고체로서 29-3(6.5 g, 9.8 mmol, 66.2% 수율(2 단계에 걸침))을 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒,CDCl3): δ = 8.47 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 7.92 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 7.65-7.60 (m, 1H), 7.54-7.50 (m, 6H), 7.47-7.44 (m, 2H), 7.29-7.22 (m, 6H), 6.85-6.78 (m, 2H), 5.90-5.80 (m, 1H), 5.74 (s, 1H), 5.28-5.23 (m, 1H), 5.14-5.11 (m, 1H), 4.30-4.25 (m, 3H), 4.18-4.15 (m, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.54-3.48 (m, 1H), 3.13-3.07 (m, 1H), 2.84 (d, J = 10.8 ㎐, 1H), 1.92 (d, J = 4.4 ㎐, 1H). ESI-LCMS: m/z 659 [M+H]+.
( 29-4 )의 제조: Ar 하에서 CEP[N(iPr)2]2(2.4 g, 8.1 mmol)를 건성 DCM(40 mL) 중 29-3(3.8 g, 5.8 mmol) 및 DCI(816 mg, 6.9 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 10% NaHCO3(aq.) 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 얻었으며, 이것을 플래시 분취용 HPLC로 정제하였다. 29-4(3.9 g, 4.5 mmol, 78.69% 수율)를 백색 고체로서 얻었다. 1H-NMR (400 ㎒,CDCl3): δ = 8.67 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 7.94-7-91 (m, 2H), 7.64 (t, J = 7.2 ㎐, 1H), 7.56-7.42 (m, 8H), 7.28-7.20 (m, 6H), 6.81-6.77 (m, 2H), 5.87-5.78 (m, 1H), 5.74 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.25-5.20 (m, 1H), 5.11-5.08 (m, 1H), 4.43-4.34 (m, 1H), 4.27-4.21 (m, 2H), 4.15-4.09 (m, 1H), 3.94-3.84 (m, 1H), 3.79 (d, J = 1.6 ㎐, 3H), 3.73-3.56 (m, 3H), 3.46-3.42 (m, 1H), 3.22-3.03 (m, 1H), 2.87 (t, J = 10.0 ㎐, 1H), 2.69 (t, J = 6.4 ㎐, 1H), 2.63-2.54 (m, 1H), 1.72 (dd, J = 4.4, 105.6 ㎐, 1H), 1.30-1.22 (m, 12H). 31P-NMR (162 ㎒, CDCl3): 149.00, 148.08. ESI-LCMS: m/z 859 [M+H]+.
실시예 26 ― 올리고뉴클레오티드의 합성
변형된 올리고뉴클레오티드를, 탈블로킹, 커플링 및 대기 단계에 대해 변경시켜 기록된 93-단계 사이클을 사용하여 ABI-394 합성기 상에서 합성한다. 고체 지지체는 3'-NHTr-5'-LCAA-CPG이다. 각각의 올리고뉴클레오티드는 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 개별적으로 합성된다.
변형된 올리고뉴클레오티드는 음이온-교환 HPLC로 정제될 수 있다. 완충액은, 예를 들어 10% CH3CN 중 20 mM 인산나트륨, pH 8.5(완충액 A) 및 10% CH3CN 중 20 mM 인산나트륨, 1.8 M NaBr, pH 8.5(완충액 B)이다. 전장(full-length) 올리고뉴클레오티드를 함유하는 분획을 풀링(pooling)하고, 탈염하고, 동결건조시킨다.
이어서, 정제된 건조 올리고머를 Sephadex G-25 M(Amersham Biosciences)을 사용하여 탈염한다. 카트리지를 10 mL의 탈이온수로 3회 컨디셔닝한다. 마지막으로, 정제된 올리고머를 RNAse-무함유 물 중에 완전히 용해시키고, 매우 느린 적하식 용리를 사용하여 카트리지에 가한다. 무염 올리고머를 탈이온수를 사용하여 스크류 캡 바이알 내로 직접 용리한다.
대략 0.10 OD의 올리고머를 물 중에 용해시키고, 이어서 IEX-HPLC 및 LC/MS 분석용 특수 바이알에 피펫팅한다. 분석적 HPLC 및 ES LC-MS는 올리고뉴클레오티드의 완전성을 확인시켜 준다. 순도 및 분자량은 HPLC 분석(60℃, IEX - Thermo DNAPac PA-100, A - 25 mM 인산나트륨 10% 아세토니트릴 pH 11, B - 1.8 M NaBr 25 mM 인산나트륨 10% 아세토니트릴 pH 11; RPIP - Waters XBridge OST C18, A - 100 mM HFIP 7 mM TEA, B - 7:3 메탄올/아세토니트릴) 및 Promass Deconvolution for Xcalibur(미국 펜실베이니아주 뉴타운 소재의 Novatia)를 사용한 ESI-MS 분석에 의해 결정된다.
Claims (24)
- 화학식 (I)로 나타낸 화합물:
[화학식 (I)]
(상기 식에서,
X는 O 또는 NH이고;
Y는 O-PG, -O(CR4 2)aCR4 3, -O(CR4 2)bOCR4 3 및 -O(CR4 2)b-CR4=CR4 2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
Z는 H이고;
PG는 보호기이고;
B는 천연 또는 비변형된 핵염기 또는 변형된 핵염기 또는 이들의 보호된 버전이고;
각각의 R1은 독립적으로 C1-6 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R2는 CH2CH2CN 또는 C1-6 알킬이거나;
또는 하나의 R1과 R2는 함께, 선택적으로 치환된 C1-6 사이클로알킬을 형성하고;
R3은 H 또는 PG이고;
R4는 각각의 경우에 독립적으로 H 또는 F이고;
a는 0 내지 2의 정수이고;
b는 1 내지 3의 정수이며,
X가 O일 때, Y는 -O(CR4 2)aCR4 3, -O(CR4 2)bOCR4 3 또는 -O(CR4 2)b-CR4=CR4 2임). - 제1항에 있어서, X는 NH이고, Y는 O-PG, OEt 또는 O-메톡시에톡시인, 화합물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, R1은 C2-3 알킬인, 화합물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, R1은 아이소프로필인, 화합물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 트라이틸 보호기인, 화합물.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R3은, X가 NH일 때 모노메톡시트라이틸(MMTr) 또는 트라이톨릴이고, X가 O일 때 4,4'-다이메톡시트라이틸(DMTr) 또는 트라이톨릴인, 화합물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, B는 아데닌(A), 구아닌(G), 티민(T), 시토신(C), 우라실(U) 및 5-메틸시토신(5-me-C), 또는 이들의 보호된 버전으로부터 선택되는, 화합물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, B는 6-N-벤조일아데노신(ABz), 4-N-벤조일시티딘(CBz), 및 2-N-아이소부티릴구아노신(GiBu)으로부터 선택되는, 화합물.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 화합물 및 하나 이상의 반응물질 또는 용매 또는 불순물을 포함하는, 조성물.
- 제9항에 있어서, 불순물의 양은 1% 미만인, 조성물.
- 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법으로서,
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 화합물을 반응시켜 상기 올리고뉴클레오티드를 형성하는 단계를 포함하는, 방법. - 화학식 (II)로 나타낸 화합물:
[화학식 (II)]
(상기 식에서,
X는 O 또는 NH이고;
Z는 H이고;
B는 천연 또는 비변형된 핵염기 또는 변형된 핵염기 또는 이들의 보호된 버전이고;
R1은 독립적으로 C1-6 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R2는 CH2CH2CN 또는 C1-6 알킬이거나;
또는 하나의 R1과 R2는 함께, 선택적으로 치환된 C1-6 사이클로알킬을 형성하고;
R3은 H 또는 보호기이고;
A는 -(CR'R')1-2-이고;
R'은 각각의 경우에 독립적으로 H 또는 Me임). - 제12항에 있어서, X는 NH이고, Z는 H인, 화합물.
- 제12항 또는 제13항에 있어서, R1은 C2-3 알킬인, 화합물.
- 제12항 또는 제13항에 있어서, R1은 아이소프로필인, 화합물.
- 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 트라이틸 보호기인, 화합물.
- 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, R3은, X가 NH일 때 모노메톡시트라이틸(MMTr) 또는 트라이톨릴이고, X가 O일 때 4,4'-다이메톡시트라이틸(DMTr) 또는 트라이톨릴인, 화합물.
- 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, B는 아데닌(A), 구아닌(G), 티민(T), 시토신(C), 우라실(U) 및 5-메틸시토신(5-me-C), 또는 이들의 보호된 버전으로부터 선택되는, 화합물.
- 제11항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, B는 6-N-벤조일아데노신(ABz), 4-N-벤조일시티딘(CBz), 및 2-N-아이소부티릴구아노신(GiBu)으로부터 선택되는, 화합물.
- 제12항 내지 제19항 중 어느 한 항의 화합물 및 하나 이상의 반응물질 또는 용매 또는 불순물을 포함하는, 조성물.
- 제20항에 있어서, 상기 화합물은 99% 이상의 순도를 갖는, 조성물.
- 변형된 뉴클레오시드를 포함하는 올리고뉴클레오티드의 제조 방법으로서,
제12항 내지 제19항 중 어느 한 항의 화합물을 반응시켜 상기 올리고뉴클레오티드를 형성하는 단계를 포함하는, 방법. - 화학식 (I)로 나타낸 화합물의 제조 방법으로서:
[화학식 (I)]
(상기 식에서,
B는 천연 또는 비변형된 핵염기 또는 변형된 핵염기 또는 이들의 보호된 버전이고;
Z는 H이고;
Y는 -O(CR4 2)b-CR4=CR4 2이며, 여기서 R4는 각각의 경우에 독립적으로 H 또는 F이고, b는 1 내지 3의 정수이고;
X는 NH이고;
R3은 H 또는 PG이며, 여기서 PG는 보호기이고;
각각의 R1은 독립적으로 C1-6 알킬 또는 사이클로알킬이고;
R2는 CH2CH2CN 또는 C1-6 알킬이거나;
또는 하나의 R1과 R2는 함께, 선택적으로 치환된 C1-6 사이클로알킬을 형성함);
화합물 1을 환원시킨 후 화합물 2를 보호하여 화합물 3을 형성하는 단계를 포함하는, 방법:
.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 나타낸 화합물의 제조 방법으로서,
화합물 1을 환원시킨 후 화합물 2를 보호하여 화합물 3을 형성하는 단계를 포함하는, 방법:
.
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