NO175593B - Fremgangsmåte for fastfase-peptidsyntese - Google Patents
Fremgangsmåte for fastfase-peptidsynteseInfo
- Publication number
- NO175593B NO175593B NO893773A NO893773A NO175593B NO 175593 B NO175593 B NO 175593B NO 893773 A NO893773 A NO 893773A NO 893773 A NO893773 A NO 893773A NO 175593 B NO175593 B NO 175593B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- meth
- acryloyl
- washing
- everytime
- time
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 22
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 title claims description 7
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 title claims description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 42
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 42
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 26
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 16
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 14
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 14
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 14
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 13
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 11
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 11
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 10
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 9
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 claims description 7
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 claims description 6
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims description 4
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Natural products CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- UTDSSTFBUGDVAI-LURJTMIESA-N (2s)-1-prop-2-enoylpyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)C=C UTDSSTFBUGDVAI-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 2
- PPRBGMXQDAMDAB-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-(prop-2-enoylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)C=C PPRBGMXQDAMDAB-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- UHWCAAMSQLMQKV-ZETCQYMHSA-N (2s)-3-methyl-2-(prop-2-enoylamino)butanoic acid Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)C=C UHWCAAMSQLMQKV-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims description 2
- XLPJNCYCZORXHG-UHFFFAOYSA-N 1-morpholin-4-ylprop-2-en-1-one Chemical compound C=CC(=O)N1CCOCC1 XLPJNCYCZORXHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AIHDNLMBKLUVCV-UHFFFAOYSA-N 2-(prop-2-enoylamino)hexanoic acid Chemical compound CCCCC(C(O)=O)NC(=O)C=C AIHDNLMBKLUVCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 claims description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 2
- 101100074998 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) nmp-2 gene Proteins 0.000 claims description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Substances CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims description 2
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 claims description 2
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N tetrahydropyrrole Substances C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000007649 L alpha amino acids Chemical class 0.000 claims 2
- 125000003647 acryloyl group Chemical group O=C([*])C([H])=C([H])[H] 0.000 claims 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N dichloromethane Natural products ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- XTUSEBKMEQERQV-UHFFFAOYSA-N propan-2-ol;hydrate Chemical compound O.CC(C)O XTUSEBKMEQERQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N thiophenol Chemical compound SC1=CC=CC=C1 RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M sodium hydroxide Inorganic materials [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- VWWKKDNCCLAGRM-GVXVVHGQSA-N (2s)-2-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]acetyl]amino]-3-methylbutanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VWWKKDNCCLAGRM-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 3
- -1 Boc group Chemical group 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N N-methyl-pyrrolidine Natural products CN1CC=CC1 AHVYPIQETPWLSZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N NMP Substances CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical class C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010009932 leucyl-alanyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 3
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- FUKOTTQGWQVMQB-UHFFFAOYSA-N (2-bromoacetyl) 2-bromoacetate Chemical compound BrCC(=O)OC(=O)CBr FUKOTTQGWQVMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N (2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RJPKQCFHEPPTGL-ZLUOBGJFSA-N Cys-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RJPKQCFHEPPTGL-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 2
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N L-Leucyl-L-Arginyl-L-Proline Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- JKGHDYGZRDWHGA-SRVKXCTJSA-N Leu-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JKGHDYGZRDWHGA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- CGOMLCQJEMWMCE-STQMWFEESA-N Phe-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 CGOMLCQJEMWMCE-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- QKQDTEYDEIJPNK-GUBZILKMSA-N Ser-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO QKQDTEYDEIJPNK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 2
- AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AMXMBCAXAZUCFA-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 2
- GGXUDPQWAWRINY-XEGUGMAKSA-N Tyr-Ile-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 GGXUDPQWAWRINY-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 2
- JAGGEZACYAAMIL-CQDKDKBSSA-N Tyr-Lys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N JAGGEZACYAAMIL-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical class [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DMBKPDOAQVGTST-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVFZOVWCLRSYKC-UHFFFAOYSA-N 1-methylpyrrolidine Chemical compound CN1CCCC1 AVFZOVWCLRSYKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLPAQAXAZQUXBG-UHFFFAOYSA-N 1-pyrrolidin-1-ylprop-2-en-1-one Chemical compound C=CC(=O)N1CCCC1 WLPAQAXAZQUXBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003287 1H-imidazol-4-ylmethyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[*])=C1[H] 0.000 description 1
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZGPACAKMCUCKX-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyacetamide Chemical group NC(=O)CO TZGPACAKMCUCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 125000000030 D-alanine group Chemical group [H]N([H])[C@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 1
- 125000003941 D-tryptophan group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(C([C@@](N([H])[H])(C(=O)[*])[H])([H])[H])=C([H])N([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N DMF Natural products CC1=CC=C(C)O1 GSNUFIFRDBKVIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000610640 Homo sapiens U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- NFVNYBJCJGKVQK-ZDUSSCGKSA-N N-[(Tert-butoxy)carbonyl]-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 NFVNYBJCJGKVQK-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 101001110823 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-A Proteins 0.000 description 1
- 101000712176 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) 60S ribosomal protein L6-B Proteins 0.000 description 1
- RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N Trifluoroethanol Chemical compound OCC(F)(F)F RHQDFWAXVIIEBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100040374 U4/U6 small nuclear ribonucleoprotein Prp3 Human genes 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- KPGVUOQMOHGHEW-LBPRGKRZSA-N boc-his(dnp)-oh Chemical compound C1=NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O KPGVUOQMOHGHEW-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229940100630 metacresol Drugs 0.000 description 1
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Natural products C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001160 methoxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC(*)=O 0.000 description 1
- GPXGYCOUOXWPOW-UHFFFAOYSA-N methyl 2-(prop-2-enoylamino)acetate Chemical compound COC(=O)CNC(=O)C=C GPXGYCOUOXWPOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYGYHGXUJBFUJU-UHFFFAOYSA-N n-[2-(prop-2-enoylamino)ethyl]prop-2-enamide Chemical compound C=CC(=O)NCCNC(=O)C=C AYGYHGXUJBFUJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Polymerization Catalysts (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse gjelder fastfase-peptidsyntese.
Forkortelsene benyttet i denne patentbeskrivelse er i samsvar med anbefalingene fra IUPAC-IUB felleskommisjonen for biokjemisk nomenklatur fra 1983 (1983 Recommendations of the IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature), som vist i Eur. J. Biochem., 138, 9-37 (1984). I tillegg, anvendes de følgende:
TFA trifluoreddiksyre
DCM diklormetan
DMF dimetylformamid
NMP N-metylpyrrolidin
DMAc dimetylacetamid
Aminosyrer og deres rester har L-konfigurasjon hvis ikke annet er angitt, for eksempel Ala = L-alanin, DAla = D-alanin. Uttrykket (met)acrylic- er brukt for å indikere enten akryl-eller metakryl-.
De vanlige fremgangsmåter for fastfase-peptidsynteser består av de følgende operasjonssekvenser: 1. - Fjerning av beskyttelsen på Boc-gruppen; 2. - Vaskinger; 3. - Nøytralisering av NH2 i a-posisjon; 4. - Vaskinger;
5. - Koblinger og
6. - Vaskinger.
Trinnene med fjerning av beskyttelse og nøytralisering oppnås ved å behandle resin-peptidet med TFA og diisopropyletylamin-oppløsninger i DCM. Dette samme oppløsningsmidlet benyttes også til mellomliggende vaskinger. Uansett koblingsreagenset som benyttes (symmetrisk anhydrid, dicykloheksylkarbodiimid, hydroksybenzotriazol, osv.), gjennomføres koblingsreaksjonen enten i DCM eller i DMF.
I samsvar med dette, omfatter fastfase-peptidsynteser store mengder av ganske kostbare oppløsningsmidler og reagenser, så som TFA; således er prisen på et peptid direkte avhengig av prisen på DCM, NMP, DMF, DMAc og TFA som er benyttet ved syntesen.
Derfor ville det være av særlig interesse å finne billigere oppløsningsmidler og reagenser for å senke fremstillingskostnadene på peptider vesentlig.
Vårt europeiske patent nr. 0 079 842 beskriver polyakryl-resiner som er kopolymere av tre monomere på følgende måte: (i) en første monomer som er opphavet til den kopolymere og er en av: 1-(met)akryloyl-pyrrolidin,
1-(met)akryloyl-piperidin,
1-(met)akryloyl-perhydroazepin,
1- (met)akryloyl-4-metyl-piperazin,
4-(met)akryloyl-morfolin,
N,N-dimetyl-(met)akrylamid og
N,N-dietyl-(met)-akrylamid
(ii) en annen monomer som danner tverrbindinger i den kopolymere og er en av: N,N'-di(met)akryloyl-diaminometan og
N,N'-di(met)akryloyl-1,2-diaminoetan, og
(iii) en tredje monomer som aktiverer kopolymeren og er en av de følgende syrer: 2- (met)akrylamido-eddiksyre,
3- (met)akrylamido-propionsyre,
4- (met)akrylamido-smørsyre,
6-(met)akrylamido-heksansyre,
N-(met)akryloyl-L-alanin,
N-(met)akryloyl-L-valin,
N-(met)akryloyl-L-leucin,
N-(met)akryloyl-L-fenylalanin,
N-(met)akryloyl-L-tyrosin,
N-(met)akryloyl-L-metionin,
N-(met)akryloyl-L-lysin og
N-(met)akryloyl-L-prolin
eller er en metylester av en av disse syrer.
Disse kopolymere har frie karboksy- eller metoksykarbonylgrupper som kommer fra den tredje monomere. Vårt europeiske patent nr. 814 08 beskriver videre polyakryl-resiner hvori disse grupper har dannet amider med etylendiamin. Det beskriver også bruken av disse ytterligere polyakryl-resiner i fastfase-peptidsyntese, men bare i forbindelse med de kostbare oppløsningsmidler som vanligvis brukes med polystyren-resiner, som diskutert her ovenfor.
Oppfinnelsen gir en fremgangsmåte for fastfase-peptidsyntese, og fremgangsmåten omfatter tilknytning av en første aminosyrerest valgt fra de naturlig forekommende L-a-aminosyrer til et hydrofilt polyakryl-resin, kobling av én eller flere aminosyre-rester valgt fra de naturlig forekommende L-a-aminosyrer så det dannes det ønskede peptid og frigjøring av peptidet fra resinet, karakterisert ved at fremgangsmåten ved koblingen omfatter trinn med vasking av resinet i vann, i én eller flere vandige oppløsninger, eller i kombinasjoner av disse.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen utnytter de hydrofile egenskaper som polyakryl-resiner har i motsetning til polystyren-resiner. Polyakryl-resinene til bruk i fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen er fortrinnsvis de beskrevet i våre europeiske patenter nr. 0 079 842 og 0 081 408 som diskutert ovenfor.
Den første aminosyre-rest kan festes til matriks ved hjelp av glykolamid-enheten (B. Calas et al., Tetrahedron, 1985, 4_1, 5331). Tidligere forsøk med andre labile bindings-enheter så som hvori X = Br, Cl eller OH, viste seg å være utilfredsstillende.
Resinet kan deretter vaskes i vann. Den neste aminosyren i peptidsekvensen som skal bygges, kan tilsettes ifølge den følgende oppskrift (anvendbar når den beskyttende gruppe er Boe) :
1. - Vasking: destillert vann - 2 til 4 ganger,
2 min. hver gang; 2. - Fjerning av beskyttelse: HCl (6N) i vann - 1 gang, 2 min. og 1 gang til, 30 minutter;
3. - Vasking: destillert vann - 4 til 6 ganger,
2 min. hver gang; 4. - Nøytralisering: 1 ekvivalent borat-buffer 12,5 mM pH 8,5 til 9,0-1 gang, 1 til 2 min. og 1 gang til, 1 til 2 min.;
5. - Vasking: destillert vann - 4 til 6 ganger,
1 til 2 min. hver gang; 6. - Vasking: DMF - 2 ganger, 1 til 2 min. hver gang;
7. - Kobling: symmetrisk anhydrid (2 ekvivalenter,
2 ganger i DMF)
8. - Vasking: DMF eller NMP - 2 ganger, 2 min. hver gang;
og
9. - Vasking: destillert vann - 4 ganger,
2 min. hver gang.
Utviklingen av koblingsreaksjonen kan kontrolleres ved ninhydrin eller fluorescamin.
Alternativt, når den beskyttende gruppe er Fmoc, kan fremgangsmåten for forlengelse være som følgende:
1. - Vasking: destillert vann - 4 til 6 ganger,
2 min. hver gang; 2. - Fjerning av beskyttelse: piperidin eller dietylamin i vann; 3. - Vasking: isopropanol, 2 ganger, 2 min. hver gang;
destillert vann - 4 til 6 ganger, 2 min. hver gang; 4. - Eventuell vasking: DMF - 1 gang, 2 min.; 5. - Kobling: symmetrisk anhydrid (3 ganger i overskudd
av DMF) og
6. - Vasking: DMF (2 ganger, 2 min. hver gang);
destillert vann - 6 ganger, 2 min. hver gang.
Når syntesen er fullstendig, adskilles peptidet fra opphavet ved selektiv bryting av glykolamid-bindingene ved hjelp av en av de følgende behandlinger:
- NaOH i isopropanol
- NH3 i trifluoretanol eller metanol eller etanol eller isopropanol,
- N2H4 i DMF og
- CH3OH i trietylamin.
Ved denne fremgangsmåte, fremkom referansepeptidet til Dorman (Leu Ala Gly Val) og LHRH-analoger med utbytter på omtrentlig over 50%.
Oppfinnelsen vil forståes bedre ut fra beskrivelsen av de følgende eksempler:
Eksempel 1
Syntese av DTrp<6->LHRH: pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-DTrp-Leu-Arg-Pro-Gly. 5 g av et pblyakryl-resin (0,55 mmol NH2/g) , fremstillet ved kopolymerisering av 1-akryloyl-pyrrolidin, N,N'-diakryloyl-1,2-diaminoetan og metyl 2-akrylamidoacetat som beskrevet i Eksempel 19 fra EP 0 079 842, ble behandlet på følgende måte:
1/ vaskinger med DCM (4 ganger, 2 min. hver gang)
2/ nøytralisering med 5% diisopropyletylamin i DCM
(2 ganger, 2 min. hver gang)
3/ vaskinger med DCM (4 ganger, 2 min. hver gang)
4,29 g (0,0165 mol) bromeddiksyre-anhydrid i 50 ml DCM ble tilsatt til resinet. Etter 45 min. risting, ble DCM-oppløsningen fjernet ved filtrering og det bromerte resin ble vasket på følgende måte:
1/ DCM (4 ganger, 2 min. hver gang)
2/ DMF (4 ganger, 2 min. hver gang)
Cesiumsalt av BOcGlyOH (4,22 g, 0,0137 mol) fremstillet ifølge Mery et al. (Int. J. Protein Peptide Res., 1988, 3_1, 412) ble løst opp i DMF (75 ml) og denne oppløsningen ble tilsatt til resinet. Blandingen ble ristet i 2 dager ved omgivelsenes temperatur. På dette tidspunkt ble DMF filtrert fra og polymeret ble vasket med:
1/ DMF (10 ganger, 2 min. hver gang)
2/ Metanol (4 ganger, 2 min. hver gang)
3/ DCM (4 ganger, 2 min. hver gang)
4/ Dietyleter (4 ganger, 2 min. hver gang)
Resinet ble tørret under høyt vakuum i nærvær av KOH-perler i 12 timer. Mengden av Gly tilknyttet var 0,483 mmol/g, bestemt ved aminosyreanalyse etter hydrolyse i 6N HC1 i evakuerte og forseglede rør ved 110°C i 24 timer.
BocGly-resin (4,47 g) ble vasket med vann (4 ganger, 2 min. hver gang) og Boc-gruppen ble spaltet av ved bruk av 6N HC1 i vann (2 ganger, 1 gang 2 min. og 1 gang igjen 30 min.). HC1 ble fjernet ved filtrering og resinet vasket med vann (6 ganger, 2 min. hver gang). Nøytraliseringen ble utført ved bruk av borat-buffer (12,5 mmol, pH 9), resinet ble behandlet 2 ganger med 50 ml buffer (1 min. hver gang). Etter vasking med vann (6 ganger, 2 min. hver gang) og med DMF (2 ganger, 2 min. hver gang) ble symmetrisk anhydrid av BocProOH i DMF
(50 ml) tilsatt til resinet.
Oppløsningen av symmetrisk anhydrid ble fremstillet på følgende måte: BocProOH (3,55 g, 0,0165 mol) ble løst opp i 40 ml DMF, oppløsningen ble avkjølt til 0°C og dicykloheksylkarbodiimid (1,69 g, 8,25 mmol) i 10 ml DCM ble tilsatt. Etter røring ved 0°C i 30 min. og filtrering, ble oppløsningen dampet inn under høyt vakuum uten oppvarming, og resten ble løst opp i DMF og tilsatt til resinet. Blandingen ble ristet i 30 min., på dette tidspunkt var den kvalitative ninhydrin-testen til Kaiser et al. (Anal. Biochem. 1970, 34., 575) negativ noe som indikerte et koblingsutbytte høyere enn 99,6%. DMF ble deretter fjernet og resinet ble vasket to ganger med DMF (2 min. hver gang) og med vann (4 ganger, 2 min. hver gang).
Denne fremgangsmåte ble benyttet for å føre inn de andre aminosyrer i DTrp<6->LHRH-sekvensen. De symmetriske anhydrider ble fremstillet ved å bruke: BocArg(Mts)OH (7,52 g,
0,0165 mol), BocLeuOH (4,11 g, 0,0165 mol), BocDTrpOH (5,02 g, 0,0165 mol), BocTyr (2,6 diklorbenzyl)OH eller BocTyr (2,6 DCB)0H (7,26 g, 0,0165 mol), BocSer(Bzl)OH (4,86 g,
0,0165 mol), BocTrpOH (5,02 g, 0,0165 mol), BocHis (dinitrofenyl)OH eller BocHis (Dnp)OH (6,94 g, 0,0165 mol), pyro-GluOH (2,13 g, 0,0165 mol).
Etter innføring av pyro-GluOH, ble resinet vasket med metanol (4 ganger, 2 min. hver gang), med dietyleter (4 ganger, 2 min. hver gang) og tørret i høyt vakuum ved omgivelsenes temperatur i 48 timer.
Peptid-resinet ble deretter behandlet med tiofenol
(10 ml) i DMF (50 ml) for å fjerne dinitrofenylgruppen på histidin-sidekj eden.
Etter 45 min. risting, ble tiofenoloppløsningen filtrert og resinet vasket med DMF (4 ganger, 2 min. hver gang), DCM (4 ganger, 2 min. hver gang) og dietyleter (4 ganger, 2 min. hver gang). Resinet ble tørret under høyt vakuum i 12 timer. Det ble behandlet 2 ganger (30 min. hver gang) ved 0°C med 50 ml av den følgende på forhånd avkjølte oppløsning: trifluormetansulfonsyre (3,6 ml), anisol (4 ml), tioanisol (4 ml), metakresol (4 ml) og trifluoreddiksyre (40 ml). Etter at beskyttelsen var slutt, ble resinet vasket med DCM (2 ganger, 2 min. hver gang), DCM/DMF (50-50) (2 ganger, 2 min. hver gang), diisopropyletylamin 5% i DCM (2 ganger, 1 min. hver gang), DMF (3 ganger, 2 min. hver gang), isopropanol-vann (70-30) (3 ganger, 2 min. hver gang). Peptid-resin ble deretter suspendert i en NH3-mettet trifluor-etanolisk oppløsning (250 ml).
Blandingen ble ristet ved omgivelsenes temperatur i 15 timer, den trifluor-etanoliske oppløsning som inneholdt DTrp<6->LHRH hvor beskyttelsen var fjernet, ble samlet og resinet ble vasket med vann (4 ganger, 2 min. hver gang), metanol (4 ganger, 2 min. hver gang) og vann (6 ganger, 2 min. hver gang). Filtratene ble samlet, pH ble bragt til ca. 4 med IN saltsyre; de ble konsentrert under vakuum uten oppvarming. Resten ble fraksjonert på en kolonne med karboksymetylcellulose (Wathman CM 52, 10 x 2 cm) med en lineær gradient av NaCl (10 mM AcONa pH 5,0 til 10 mM av AcONa, 0,15M NaCl pH 5,0). Passende fraksjoner ble samlet, lyofilisert og avsaltet ved gelfiltrering på en kolonne (100 x 2,5 cm) av Sephadex G10 i 10M HC1. Peptidfraksjonen ble deretter renset ved HPLC på en kolonne (270 x 20 mm) Lichrosorb RP18 (10 /im) ved bruk av trifluoreddiksyre (TFA) 0,01% i vann og acetonitril til utvasking.
Utbytte: 51% (basert på aminogruppene på resinet som det startes med).
Aminosyreanalyse: Glu 0,99 (1), Leu 1,0 (1), His 1,0 (1), Trp 1,89 (2), Ser 0,96 (1), Tyr 0,97 (1), Pro 0,99 (1), Gly 1,07 (1).
For noen aminosyrer som er mindre stabile ved sure forhold, kan de analytiske verdier være lavere enn de ventede på grunn av nedbrytning av disse.
Den samme fremgangsmåte ble benyttet for de følgende peptider:
Dorman-peptid: Leu Ala Gly ValOH
Utbytte = 46,6%
Gly = 0,96, Ala = 0,94, Val = 1,05, Leu = 1,04.
Laminin: Tyr Ile Gly Ser ArgNH2
Utbytte = 35,6%
Ser = 0,75, Gly = 1,03, Ile = 0,99, Tyr = 1, Arg = 0,99.
CDC 28 kinose-protein fra celle-syklusen til
"Pombee" gjær
Utbytte = 44,1% (urenset peptid)
Tyr Lys Ala Leu Asp Leu Arg Pro GlyOH
Asp = 1, Gly = 1,08, Ala = 1, Leu = 1,05 x 2, Tyr = 0,99, Arg = 0,99, Lys = 1, Pro = 1.
Tyrosin-fosfatase
Utbytte = 58,6% (urenset peptid)
Cys Ser Asp Ser Glu Lys Leu Asn Leu Asp Ser IleOH
Asp = 0,95 x 3, Ser = 0,58 x 3, Glu = 0,67, Ile = 1,1, Leu =1,1.
Onkogen: Phe Arg Gly Thr Leu Arg
Utbytte = 53,4%
Phe = 0,97, Arg = 2 x 1,1, Gly = 1,02, Thr = 0,99,
Leu = 1.
Eksempel 2
Syntese av Leu-Ala-Gly-Val
1 g av polyakryl-resinet benyttet i Eksempel 1 ble behandlet på følgende måte:
1/ vaskinger med DCM (4 ganger, 2 min. hver gang)
2/ nøytralisering med 5% diisopropyletylamin i DCM
(2 ganger, 2 min. hver gang)
3/ vaskinger med DCM (4 ganger, 2 min. hver gang).
0,858 g (3,3 mmol) bromeddiksyreanhydrid i 10 ml DCM ble tilsatt til resinet. Etter 45 min. risting, ble DCM-oppløsningen fjernet ved filtrering og det bromerte resin ble vasket på følgende måte:
1/ DCM (4 ganger, 2 min. hver gang)
2/ DMF (4 ganger, 2 min. hver gang)
Cesiumsalt av FmocValOH (1,29 g, 2,75 mmol) fremstillet ifølge Mery et al., (Int. J. Peptide Protein Res. 1988, 31, 412) ble løst opp i DMF (15 ml) og oppløsningen ble tilsatt til resinet. Suspensjonen ble ristet ved omgivelsenes temperatur i 3 dager. På dette tidspunkt ble DMF filtrert fra og polymeren ble vasket med:
1/ DMF (10 ganger, 2 min. hver gang)
2/ Metanol (4 ganger, 2 min. hver gang)
3/ DCM (4 ganger, 2 min. hver gang)
4/ Dietyleter (4 ganger, 2 min. hver gang)
Resinet ble tørret under høyt vakuum i nærvær av KOH-perler i 12 timer. Mengden av Val tilknyttet var 0,492 mmol/g, bestemt ved aminosyreanalyse etter hydrolyse i 6N HC1 i evakuerte og forseglede rør i 24 timer.
FmocVal-resin (1,1 g) ble vasket med vann (4 ganger, 2 min. hver gang) og Fmoc-gruppen ble spaltet ved bruk av 10% piperidin eller dietylamin i vann (2 ganger, 2 min. hver gang). Resinet ble deretter vasket med isopropanol (2 ganger, 2 min. hver gang) og med vann (4 ganger, 2 min. hver gang).
Symmetrisk anhydrid av FmocGlyOH i DMF (15 ml) ble tilsatt til resinet. Oppløsningen av symmetrisk anhydrid ble fremstillet på følgende måte: FmocGlyOH (0,981 g, 3,3 mmol) ble løst opp i DCM (15 ml), oppløsningen ble avkjølt til 0°C og dicykloheksylkarbodiimid (0,339 g, 1,65 mmol) i DCM (10 ml). Den blakkede blanding ble rørt i 20 min. ved 0°C, bunnfallet av dicykloheksyl-urinstoff ble fjernet ved filtrering og filtratet ble konsentrert i vakuum ved romtemperatur. Den oljeaktige rest ble løst opp i DMF (15 ml) og oppløsningen ble tilsatt til resinet. Blandingen ble ristet ved romtemperatur i 45 min., på dette tidspunkt var den kvalitative ninhydrin-test til Kaiser et al.
(Anal. Biochem. 1970, 34., 575) negativ. DMF ble fjernet ved filtrering og resinet ble vasket med DMF (2 ganger, 2 min. hver gang) og så med vann (6 ganger, 2 min. hver gang).
Denne fremgangsmåte ble benyttet for å innføre de følgende aminosyrer: Leu og Ala. Det symmetriske anhydrid ble fremstillet ved å starte med 1,16 g (3,3 mmol) FmocLeuOH og 1,02 g (3,3 mmol) FmocAlaOH. Etter fullføring av syntesen, ble peptid-resin addisjonsproduktet vasket med isopropanol (4 ganger, 2 min. hver gang), vann (4 ganger, 2 min. hver gang) og isopropanol-vann (70-30) (4 ganger, 2 min. hver gang).
Peptid-resin ble deretter suspendert i isopropanol-vann (70-30) og 1,1 ml IN NaOH ble tilsatt. Blandingen ble ristet ved omgivelsestemperatur i 5 timer, isopropanol-vann-oppløsningen som inneholdt Leu-Ala-Gly-Val ble samlet og resinet ble vasket med vann (4 ganger, 2 min. hver gang), metanol (4 ganger, 2 min. hver gang) og vann (4 ganger, 2 min. hver gang). Filtratene ble samlet, pH ble bragt til 4 med IN HC1, oppløsningen ble konsentrert under vakuum ved romtemperatur. Resten ble renset ved HPLC på en kolonne (250 x 20 mm) med Lichrosorb RP 18 (10 /xm) ved bruk av TFA 0,1% i vann og acetonitril til utvaskingene.
Utbytte: 54% (basert på aminogruppene på resinet som det startes med).
Aminosyreanalyse: Leu 1,02 (1), Ala 0,99 (1), Gly 1,1 (1), Val 1,0 (1).
Den samme fremgangsmåte ble benyttet for syntesen av de følgende peptider:
Dorman-peptid: Leu Ala Gly ValOH
Utbytte = 46,6%
Gly = 0,93, Ala = 0,91, Val = 1,01, Leu = 1.
Laminin: Tyr Ile Gly Ser ArgNH2
Utbytte = 46,3%
Ser = 0,79, Gly = 1,01, Ile = 0,96, Tyr = 0,89, Arg = 0,93.
- CDC 28 kinase-protein fra celle-syklusen til
"Pombee" gjær
Utbytte = 48,6% (urenset peptid)
Tyr Lys Ala Leu Asp Leu Arg Pro GlyOH
Asp = 0,97, Gly = 1,02, Ala = 0,98, Leu = 1,02 x 2,
Tyr = 0,98, Arg = 0,96, Lys = 1, Pro = 0,97.
- Tyrosin-fosfatase
Utbytte = 61,6% (urenset peptid)
Cys Ser Asp Ser Glu Lys Leu Asn Leu Asp Ser IleOH
Asp = 0,99 x 3, Ser = 0,63 x 3, Glu = 0,73, Ile = 1,03, Leu = 1.
Onkogen: Phe Arg Gly Thr Leu Arg
Utbytte = 49,2%
Phe == 1, Arg = 2 x 1,04, Gly = 1, Thr = 0,96, Leu = 0,98.
Claims (5)
1. Fremgangsmåte for fastfase-peptidsyntese, der fremgangsmåten omfatter tilknytning av en første aminosyre-rest valgt fra de naturlig forekommende L-a-aminosyrer til et hydrofilt polyakryl-resin, kobling av ytterligere én eller flere aminosyre-rester valgt fra de naturlig forekommende L-a-aminosyrer så det dannes det ønskede peptid og frigjøring av peptidet fra resinet,
karakterisert ved at fremgangsmåten ved koblingen omfatter trinn med vasking av resinet i vann, i én eller flere vandige oppløsninger, eller i en kombinasjon av disse.
2. Fremgangsmåte i henhold til krav 1, karakterisert ved at det hydrofile polyakryl-resinet er en kopolymer av tre monomere som følger: (i) en første monomer som utgjør et skjelett i den kopolymere og er én av
1-(met)akryloyl-pyrrolidin, 1-(met)akryloyl-piperidin, 1-(met)akryloyl-perhydroazepin, 1- (met)akryloyl-4-metyl-piperazin,
4-(met)akryloyl-morfolin, N,N-dimetyl-(met)akrylamid og N,N-dietyl-(met)akrylamid (ii) en annen monomer som danner tverrbindinger i kopolymeren og er en av: N,N'-di(met)akryloyl-diaminometan og N,N'-di(met)akryloyl-l,2-diaminoetan og (iii) en tredje monomer som aktiverer kopolymeren og er en av de følgende syrer: 2- (met)akrylamido-eddiksyre, 3- (met)akrylamido-propionsyre, 4- (met)akrylamido-smørsyre, 6-(met)akrylamido-heksansyre, N-(met)akryloyl-L-alanin,
N-(met)akryloyl-L-valin,
N-(met)akryloyl-L-leucin, N-(met)akryloyl-L-fenylalanin, N-(met)akryloyl-L-tyrosin, N-(met)akryloyl-L-metionin, N-(met)akryloyl-L-lysin og N-(met)akryloyl-L-prolin
eller en metylester av en av disse syrer.
3. Fremgangsmåte i henhold til krav 1, karakterisert ved at det hydrofile polyakryl-resinet er en kopolymer i henhold til krav 2, som har dannet amid med etylendiamin.
4. Fremgangsmåte i henhold til noen av de foregående krav, karakterisert ved at den N-beskyttende gruppe brukt ved aminosyre-koblingen er Boe og fremgangsmåten ved koblingen er: 1. - Vasking: destillert vann - 2 til 4 ganger, 2 min. hver gang; 2. - Fjerning av beskyttelse: (6N) HC1 i vann - 1 gang, 2 min. og 1 gang igjen, 30 minutter; 3. - Vasking: destillert vann - 4 til 6 ganger, 2 min. hver gang; 4. - Nøytralisering: 1 ekvivalent 12,5 mM borat-buffer pH 8,5 til 9,0-1 gang, 1 til 2 min. og 1 gang igjen, 1 til 2 min.; 5. - Vasking: destillert vann - 4 til 6 ganger, 1 til 2 min. hver gang; 6. - Vasking: DMF - 2 ganger, 1 til 2 min. hver gang; 7. - Kobling: symmetrisk anhydrid (2 ekvivalenter, 2 ganger i DMF) 8. - Vasking: DMF eller NMP - 2 ganger, 2 min. hver gang; og 9. - Vasking: destillert vann - 4 ganger, 2 min. hver gang.
5. Fremgangsmåte i henhold til noen av kravene 1 til 3, karakterisert ved at den N-beskyttende gruppe benyttet ved aminosyre-koblingen er Fmoc og fremgangsmåten ved koblingen er: 1. - Vasking: destillert vann - 4 til 6 ganger, 2 min. hver gang; 2. - Fjerning av beskyttelse: ca. 10% piperidin eller dietylamin i vann; 3. - Vasking: isopropanol, 2 ganger, 2 min. hver gang;
destillert vann - 4 til 6 ganger, 2 min. hver gang; 4. - Eventuell vasking: DMF - 1 gang, 2 min.; 5. - Kobling: symmetrisk anhydrid (3 ganger i overskudd av DMF) og 6. - Vasking: DMF (2 ganger, 2 min. hver gang);
destillert vann - 6 ganger, 2 min. hver gang.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB888822502A GB8822502D0 (en) | 1988-09-24 | 1988-09-24 | New peptide synthesis method |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO893773D0 NO893773D0 (no) | 1989-09-22 |
| NO893773L NO893773L (no) | 1990-03-26 |
| NO175593B true NO175593B (no) | 1994-07-25 |
| NO175593C NO175593C (no) | 1994-11-02 |
Family
ID=10644204
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO893773A NO175593C (no) | 1988-09-24 | 1989-09-22 | Fremgangsmåte for fastfase-peptidsyntese |
Country Status (30)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0768265B2 (no) |
| KR (1) | KR900004761A (no) |
| AR (1) | AR244701A1 (no) |
| AT (1) | AT400439B (no) |
| AU (1) | AU622705B2 (no) |
| BE (1) | BE1002237A3 (no) |
| CA (1) | CA1333441C (no) |
| CH (1) | CH679672A5 (no) |
| DE (1) | DE3931731C2 (no) |
| DK (1) | DK468589A (no) |
| ES (1) | ES2018924A6 (no) |
| FI (1) | FI101474B1 (no) |
| FR (1) | FR2636951B1 (no) |
| GB (2) | GB8822502D0 (no) |
| GR (1) | GR1000564B (no) |
| HK (1) | HK47792A (no) |
| IE (1) | IE62008B1 (no) |
| IT (1) | IT1231960B (no) |
| LU (1) | LU87592A1 (no) |
| MA (1) | MA21633A1 (no) |
| MY (1) | MY106567A (no) |
| NL (1) | NL8902361A (no) |
| NO (1) | NO175593C (no) |
| NZ (1) | NZ230712A (no) |
| OA (1) | OA09243A (no) |
| PT (1) | PT91784B (no) |
| SE (1) | SE8903121L (no) |
| SG (1) | SG40692G (no) |
| TN (1) | TNSN89104A1 (no) |
| ZA (1) | ZA897151B (no) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5811241A (en) * | 1995-09-13 | 1998-09-22 | Cortech, Inc. | Method for preparing and identifying N-substitued 1,4-piperazines and N-substituted 1,4-piperazinediones |
| IL156258A0 (en) * | 2000-12-22 | 2004-01-04 | Kinerton Ltd | Process for the synthesis of a peptide having a trp residue |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3951741A (en) * | 1973-07-10 | 1976-04-20 | Peter Pfaender | Process and apparatus for the synthesis of peptides by use of n-carboxyanhydrides |
| US4439545A (en) * | 1981-11-19 | 1984-03-27 | Societe D "Expansion Scientifique "Expansia" | Acrylic copolymers of N-acryloylpolymethyleneimines or N-acryloyldialkylamides, N,N'-acryloyldiaminoalcanes and N-acryloylaminoacids (or esters) their preparation and use as cation exchangers |
-
1988
- 1988-09-24 GB GB888822502A patent/GB8822502D0/en active Pending
-
1989
- 1989-09-18 GR GR890100587A patent/GR1000564B/el unknown
- 1989-09-19 BE BE8901003A patent/BE1002237A3/fr not_active IP Right Cessation
- 1989-09-19 ZA ZA897151A patent/ZA897151B/xx unknown
- 1989-09-20 AT AT0219989A patent/AT400439B/de not_active IP Right Cessation
- 1989-09-20 AR AR89314966A patent/AR244701A1/es active
- 1989-09-20 NZ NZ230712A patent/NZ230712A/en unknown
- 1989-09-21 ES ES8903198A patent/ES2018924A6/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-09-21 NL NL8902361A patent/NL8902361A/nl active Search and Examination
- 1989-09-21 FR FR898912394A patent/FR2636951B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1989-09-21 CH CH3435/89A patent/CH679672A5/fr not_active IP Right Cessation
- 1989-09-21 MY MYPI89001300A patent/MY106567A/en unknown
- 1989-09-21 LU LU87592A patent/LU87592A1/fr unknown
- 1989-09-22 PT PT91784A patent/PT91784B/pt active IP Right Revival
- 1989-09-22 TN TNTNSN89104A patent/TNSN89104A1/fr unknown
- 1989-09-22 DE DE3931731A patent/DE3931731C2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-09-22 SE SE8903121A patent/SE8903121L/ not_active Application Discontinuation
- 1989-09-22 IT IT8921804A patent/IT1231960B/it active
- 1989-09-22 NO NO893773A patent/NO175593C/no not_active IP Right Cessation
- 1989-09-22 OA OA59652A patent/OA09243A/xx unknown
- 1989-09-22 AU AU41614/89A patent/AU622705B2/en not_active Ceased
- 1989-09-22 DK DK468589A patent/DK468589A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-09-22 MA MA21887A patent/MA21633A1/fr unknown
- 1989-09-22 JP JP1245374A patent/JPH0768265B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-09-22 FI FI894489A patent/FI101474B1/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-09-22 IE IE303789A patent/IE62008B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-09-22 CA CA000612438A patent/CA1333441C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-09-23 KR KR1019890013716A patent/KR900004761A/ko not_active Application Discontinuation
- 1989-09-25 GB GB8921637A patent/GB2223227B/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-04-14 SG SG406/92A patent/SG40692G/en unknown
- 1992-07-02 HK HK477/92A patent/HK47792A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1318462C (en) | Synthetic resin | |
| US4569967A (en) | Synthesis of N-substituted peptide amides | |
| AU2010241171B2 (en) | Method for the manufacture of degarelix | |
| AU4199397A (en) | Improved solid-phase peptide synthesis and agent for use in such synthesis | |
| NO161977B (no) | Amino-funksjonaliserte akryl-kopolymerer. | |
| US6897289B1 (en) | Peptide synthesis procedure in solid phase | |
| NO161744B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av peptidet h-arg-x-z-y-tyr-r. | |
| US5175254A (en) | Solid phase peptide synthesis using a polyacrylic support in aqueous solution | |
| NO175593B (no) | Fremgangsmåte for fastfase-peptidsyntese | |
| NO166449B (no) | Gonadoliberinderivater. | |
| US4701499A (en) | Synthesis of N-substituted peptide amides | |
| NO148373B (no) | Fremgangsmaate ved fremstilling av et harpikspeptid | |
| US4301045A (en) | Synthesis of peptides | |
| EP0056274B1 (en) | Indole derivatives and a method for production of peptides | |
| CN114945580B (zh) | 用于合成南吉博肽的方法 | |
| Nishiyama et al. | Cyclohexyl ether as a new hydroxy-protecting group for serine and threonine in peptide synthesis 1 | |
| HU190207B (en) | Process for production of new gonadoliberine derivatives | |
| NO177100B (no) | Peptider |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |
Free format text: LAPSED IN MARCH 2001 |