NO175214B - - Google Patents
Info
- Publication number
- NO175214B NO175214B NO862100A NO862100A NO175214B NO 175214 B NO175214 B NO 175214B NO 862100 A NO862100 A NO 862100A NO 862100 A NO862100 A NO 862100A NO 175214 B NO175214 B NO 175214B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- alpha
- enzyme
- enzymatic mixture
- amidating
- substrate
- Prior art date
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 69
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 69
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 208000037196 Medullary thyroid carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 208000023356 medullary thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 208000013818 thyroid gland medullary carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 13
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 6
- 102100039087 Peptidyl-alpha-hydroxyglycine alpha-amidating lyase Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims abstract description 5
- 108010007262 peptidylglycine monooxygenase Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 17
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 claims description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 claims description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 claims description 3
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 claims description 3
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical group N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 claims description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 claims description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 claims description 2
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims 4
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims 3
- 229920002616 peptidyl amide Polymers 0.000 claims 2
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims 2
- 238000002305 strong-anion-exchange chromatography Methods 0.000 claims 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 claims 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 abstract description 8
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 abstract description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 abstract description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 abstract description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 abstract description 3
- -1 Cu+2 ions Chemical class 0.000 abstract 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 47
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 11
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000002862 amidating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- KETVITBYSZOWFK-RYUDHWBXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylbutanamide Chemical compound CC(C)[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 KETVITBYSZOWFK-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- HALGLMAADGHVSV-UHFFFAOYSA-N 1-aminopropane-2-sulfonic acid Chemical compound NCC(C)S(O)(=O)=O HALGLMAADGHVSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWEGIYMHTZXVBP-OCCSQVGLSA-N Dtyr-Val-Gly Chemical class [O-]C(=O)CNC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]([NH3+])CC1=CC=C(O)C=C1 NWEGIYMHTZXVBP-OCCSQVGLSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000000637 Melanocyte-Stimulating Hormone Substances 0.000 description 1
- 108010007013 Melanocyte-Stimulating Hormones Proteins 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229940059260 amidate Drugs 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940108928 copper Drugs 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N etomidate Chemical compound CCOC(=O)C1=CN=CN1[C@H](C)C1=CC=CC=C1 NPUKDXXFDDZOKR-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 230000000720 neurosecretory effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001192 peptidylglycine Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000135 prohibitive effect Effects 0.000 description 1
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012609 strong anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010037823 tyrosylvalinamide Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/17—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with reduced ascorbate as one donor, and incorporation of one atom of oxygen (1.14.17)
- C12Y114/17003—Peptidylglycine monooxygenase (1.14.17.3)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Den intracellulære prosessering (spalting og/eller modifisering av funksjonelle grupper) av prekursorformer av native proteiner, etter deres translasjon fra nukleinsyrekodende sekvenser, har blitt klart dokumentert.
Generelt kan celler fra pattedyr og andre eukaryotiske celler foreta visse post-translatoriske prosesserende trinn, mens prokaryoter ikke kan det. Enkelte prokaryoter, såsom E. coli blir mye brukt som vertsorganismer for dannelse av pattedyrproteiner via rekombinant DNA (rDNA) teknologi, fordi de lett kan dyrkes i "batch" fermentering og fordi de generelt er godtkarakterisert. Imidlertid krever mange pattedyrproteiner, dannet ved genetisk manipuleringstekno-logi, en viss form for post-translatorisk behandling og dette må ofte oppnås ved å bruke innviklede in vitro kjemiske eller enzymatiske fremgangsmåter som er kostnads-begrensende for produksjonsformål i stor skala.
En type behandlingsaktivitet innbefatter spesifikk amidering (omdannelse av -COOH-grupper til -CONH2-grupper) av den karboksylterminale aminosyre i et protein. Mange naturlig forekommende hormoner og peptider inneholder slik modifisering, noe som ofte er essensielt hvis proteinet skal være biolog-isk aktivt. Et eksempel er kalsitonin, hvor substitueringen av et ikke-amidert prolinresiduum for det amiderte prolin av den native form, resulterer i 3.000 ganger reduksjon av bio-logisk aktivitet.
Det middel som frembringer denne C-terminal (alfa) amidering gjenkjenner et glycinresiduum som umiddelbart følger amino-syren som skal amideres (R-X-gly, hvor R er hoveddelen av proteinet, X er residuet som amideres og "gly" er glycin-residuet). Glycinet spaltes og overfører faktisk aminenheten til den endelige aminosyre for derved å amidere den.
Enzymatiske blandinger i stand til å amidere karboksylterminalen av peptider og proteiner, har blitt beskrevet fra et flertall kilder. Feks rapporterte A.F.Bradbury et al, Nature 298, 1982, s. 686-688, en a-amiderende enzymaktivitet å være tilstede i svinehypofyse. I. Husain og S.S. Tate, FEBS Letters, Vol. 152, 2, 1983, s. 277-281, beskrev en a-amiderende aktivitet å være tilstede i bovinhypofyse-neurosekretoriske granuler.
Eipper et al, PNAS, Vol. 80, 1983, s. 5144-5148, rapporterte en a-amiderende enzymaktivitet å være tilstede i de bakre, mellomliggende og fremre lapper av rottehypofyse.
Gomez et al, FEBS Letters, Vol. 167, 1, 1984, s. 160-164, bestemte at rottehypotalamus også inneholdt en a-amiderende enzymaktivitet.
A.F. Bradbury og D.G. Smythe i Peptides Structure and Func-tion: Proceedings of the Eight American Peptide Symposium; s. 249-252 (1983), V.J. Editors Hruby og D.H. Rich beskrev tilstedeværelsen av en a-amiderende enzymaktivitet i tyroide kjertler hos rotte.
R.E. Mains et al, Endocrinology, Wol. 114, 1984, s. 1522-1530, rapporterte at en murin cellelinje avledet fra den bakre hypofyselapp (ATT-20), inneholdt en a-amiderende enzymaktivitet som tydligvis minket med tiden i kultur.
Kjertler eller organer kjent for å inneholde amiderte peptider, kan inneholde et enzym som er i stand til å katalysere amideringsreaksjonen. Feks har lavere former for liv, såsom hai (Saualus acanthias) ha blitt rapportert av T.L. 0'Donnhue et al, Peptides 3, 1982, s. 353-395, å inneholde amiderte peptider i hypofyseekstrakter. R.H. Scheller et al, Cell, Vol. 32, 1983, s. 7-22, rapporterte tilstedeværelsen av amideringssignalpeptider i havsneglen Apylsia. Til tross for den tilsynelatende brede fordeling av denne aktivitet i naturen, har lite informasjon blitt publisert angående dets fysiokjemiske karakteristika. Dette kan være pga de meget
lave nivå av enzym tilstede i disse neuroendokrine organer.
Tidligere har rensingen og karakteriseringen av det a-amiderende enzym ikke blitt publisert. Fysiokjemiske egenskaper av delvis rensede enzympreparater har imdlertid blitt rapportert.
De første til å rapportere en omtrentlig molekylvekt for det a-amiderende enzym var A.F. Bradbury et al, Nature, Vol 298, 1982, s. 686-688. Ved å bruke "Sephadex G-100", antydet de en minste tilsynelatende molekylmasse på ca 60.000 dalton.
Senere studier har antydet molekylmassen til enzymet å være mellom 60.000 og 70.000 dalton. Disse innbefatter I. Husain og S.S. Tate, FEBS Letters, Vol. 152, 2, 1983, s. 277-281; B.A. Eipper, PNAS, Vol.. B.A. , 167, 1, 1984, s. 160-64, og J.S. Kizer et al, PNAS, Vol. 81, 1984, s. 3228-3232.
Eipper et al, PNAS, Vol. 80, 1983, s. 5144-48 har rapportert at i tillegg til molekylært oksygen, kreves to kofaktorer for maksimal enzymaktivitet: disse er askorbinsyre og kobber (II) ion.
Den kjemiske reaksjon som resulterer i amideringen av karboksylterminalen av et peptid, krever en kilde for amino-gruppen. A.F. Bradbury et al, Nature, Vol. 298, 1982, s. 686-688, demonstrerte at glycin spaltes og donerer amino-enheten til den endelige aminosyre som resulterer i amideringen av denne. Kravet for glycin som aminogruppedonor har blitt bekreftet av andre forfattere.
A.E.N. Landymore et al, BBRC, Vol. 117 1, 1983, s. 289-293, demonstrerte at D-alanin også kunne virke som aminodonor i amideringsreaksjonen. Senere arbeid av Kizer et al, PNAS, Vol. 81, 1984, s. 3228-3232, viste to distinkte enzymaktivi-teter i rottehjerne som var i stand til å katalysere den a-amiderende reaksjon. Enzymformen med høyere molekylær masse (70.000 dalton) har en spesifisitet begrenset til glycin ved den karboksylterminale ende av substratet. Enzymet med lavere molekylær masse aksepterer et substrat med 3-alanin som den karboksylterminale aminosyre.
pH-optiraum for det a-amiderende enzym ekstrahert og delvis renset fra svinehypofyse, ble rapportert av A.F. Bradbury og D.G. Smythe, BBRC, Vol. 112, 2, 1983, s. 372-377 til å være ca 7,0. B.A. Eipper et al, PNAS, Vol. 80, 1983, s. 5144-5148 bekreftet disse resultater ved å rapportere et pH-optimum på 7 for et a-amiderende enzym sam var delvis renset fra rotte-hypofyse. De bemerket også at enzymaktiviteten falt raskt ved pH-nivå under 6,5 eller over 7,5.
I alle tidligere nevnte publikasjoner inneholdt ekstraktene og de delvis rensede enzyxnblandinger i tillegg proteolytiske enzymer som brøt ned det potensielle substrat og produkter, såvel som det a-amiderende enzym.
Foreliggende oppfinnelse omhandler en enzymatisk blanding omfattende et a-amiderende enzym sem angitt i krav l's ingress, en fremgangsmåte for fremstilling av en slik blanding ifølge krav 8, samt en anvendelse derav for fremstilling av et a-amidert produkt.
Mer spesielt omhandler oppfinnelsen en slik blanding sam er angitt i krav l's karakteriserende del. Blandingen kan spesielt inneholde renset peptidylglycin a-amiderende mono-oksygenase sam er et enzym ekstra-herbart fra medulære tyroid-carcinoma og sam har molekyl masse på ca 60.000 - 65.000 daltons, og sam har blitt renset
for å oppvise et enkelt homogent veldefinert bånd ved elektroforetiske fremgangsmåter utført på SDS/polyakrylamidgeler og som har en spesifikk enzymatisk aktivitet på minst 50 mU pr mg protein. 1U = omdannelse av 1 millimol Dansyl-D-Tyr-Val-Gly-COOH til 1 millimol Dansyl-D-Tyr-Val-CONH2pr min ved 37"C og pH 7,0. Det er også inkludert i oppfinnelsen anvendelse av en slik blanding for fremstilling av et a-amidert produkt fra peptid- eller polypeptidsubstrater,
inneholdende et terminalt glycinresiduum ved å reagere substratet med oksygen i nærvær av det fri eller immobiliserte opprensede enzym, askorbat og kobber, og der er også inklu-
dert fremgangsmåten for dens fremstilling som angitt i krav 8.
Det har nå blitt funnet at homogent opprenset cx-amiderende
enzym kan erholdes gjennom en multisteg-prosedyre som benyt-ter en kombinasjon av størrelsesutskillelse og ionebyttekro-matografi fra faste tumorvevekstrakter, tumorcellelinjer og vevskulturmedia fra slike cellelinjer.
Enzymet har blitt ekstrahert fra rotte-medulære tyroid-carcinoma utviklet i WAG/Rij Wistar-rotter, som beskrevet av B.A. Roos et al, Endocrinolgy, 1979, Vol. 150, #1, s. 27-32. Dette vev har blitt deponert som IVI-10028. Enzymet har også blitt ekstrahert fra andre kilder, spesielt menneske- og rotte-medulære tyroid-carcinoma-cellelinjer. Rottecellelin-jen 77(74) ble avledet fra rotte-medulær tyroid-carcinoma-tumorer ved serial passasje, som beskrevet av M. Muszynski et al, JBC, 1983, Vol. 258, s. 11678-83. Denne cellelinje har blitt deponert som IVI-10029. En human cellelinje HTT 54(34) ble utviklet av B.A. Roos ved VA Medical Center i Cleveland, Ohio ved å bruke humane medulære tyroid-carcinoma- celler for den primære kultur. Den humane cellelinje HTT 54(34) har blitt deponert som IVI-10031. Definerte vevskulturmedia fra både humane og rottecellelinjer har blitt vist å inneholde vesentlige nivåer av a-amiderende enzymaktivitet noe som indikerer at en del av enzymet utskilles fra cellene.
Enzymet erholdes og renses ved først å utsette råmaterialet for anionebytterkromatografi. Prøven kan feks bli påsatt som masse på en preparativ anionbyttekolonne, såsom et DE-52 resin fra Whatman, Limited. Det a-amiderende aktivitetsinne-holdende produkt utsettes så for størrelsesutskillelseskro-matografi på et resin med passende utskillende egenskaper, feks en "Sephacryl S-200 superfine" kolonne som er til-gjengelig fra Pharmacia Fine Chemicals. Den aktivitetsinne-holdende eluantfraksjon blir så utsatt for ionebytterkroma-tografi ved å bruke en sterk anionebyttemasse. Et resin som kan brukes er Mono Q HR5/5 sterkt anionbytteresin fraPharmacia Fine Chemicals, og én eller flere passasjer gjennom kolonnen kan kreves for homogen opprensing av enzymet. Hvert rensesteg kan overvåkes for både protein-innhold og nivå av a-amiderende aktivitet. Denne informasjon brukes for å regne ut den spesifikke aktivitet til enzymet, og virker som indikator for den relative renhet av enzymet.
Det resulterende enzym er peptiylglycin a-amiderende mono-oksygenase (rottekilde: IVI-10032; human kilde: IVI-10033) som har en molekylær masse på ca 60.000 - 65.000 daltons. Den har blitt renset slik at den oppviser en spesifikk enzymatisk aktivitet (antall enheter av a-amideringsaktivitet pr mg protein) på minst ca 25 mU og fortrinnsvis minst ca 50 mU/mg protein. Det har også blitt renset -for å oppvise et enkelt homogent veldefinert bånd etter elektroforese på natriumdodecylsulfat/polyakrylamidgeler (SDS-PAGE).
Det rensede peptidyl-glycin a-amiderende mono-oksygenase brukes for å amidere a-karboksylgruppen til et polypeptid med et terminalt glycinresiduum, hvor glycinet virker som en aminogruppedonor. Substratpeptidet eller polypeptidet kan være renset fra naturlige kilder, syntetisert fra dets enkelte aminosyrer eller dannet ved rekombinante DNA-teknikker. Det glycinterminerende polypeptid kombineres med oksygen i nærvær av en effektiv mengde av enzymet. Mengden av enzym som kreves avhenger av flere variable velkjente i faget, innbefattende spesielt, men ikke begrenset til, de følgende: Den spesifikke aktivitet av et gitt enzym, mengden og den kjemiske natur til substratet som skal konverteres, tiden hvor omdannelse skal finne sted og temperatur og pH til reaksjonsblandingen. Fagmannen vil gjenkjenne andre variable som kan ha innvirkninger på den nøyaktige mengde enzym som kreves i en gitt situasjon. Oksygen anvendes vanligvis i støkiometrisk mengde, men overskudd av oksygen innvirker ikke på reaksjonen. Tilstedeværelse av kobberioner er også krevet og kan tilføres ved hjelp av ethvert kobber-salt, hvis anion ikke innvirker ugunstig på reaksjonene. Når enzymet har en spesifikk enzymatisk aktivitet på ca 1 mU/mg protein, inntreffer maksimal oc-amidering med en konsentrasjon på 4,7 jjm kobber ioner. Ettersom renheten av enzymet økes, minker konsentrasjonskravene for de eksogene kobberioner. Den enzymatiske aktivitet kan også økes ved hjelp av ethvert salt, så lenge kationet av saltet ikke innvirker ugunstig på reaksjonen. For å rense et enzym med en spesifikk enzymatisk aktivitet på ca 50 mU/mg protein, inntrer maksimal aktivitet av a-amideringen ved ca 5,5 mm askorbat. a-amideringsaktivitet kan økes ved tilsetning av katalase. a-amideringsreaksjonens pH-optimum er mellom 6,5 og 7,5.
Siden peptidylglycin a-amiderende mono-oksygenase har blitt tilstrekkelig renset, er det nå mulig å erholde monoklonale antistoffer rettet mot enzymet ved standard prosedyrer. Monoklonale antistoffer tillater enzymgjenvinnende prosedyrer fra medulære tyroid-carcinoma å lette eller i det hele tatt erstattes av immunoabsorpsjons-opprensingsprosedyrer. Enzymet har også blitt tilstrekkelig opprenset for å tillate dets aminosyresekvens å bli bestemt. Denne informasjon er nødvendig for å tillate isolering av det genetiske materiale som koder for enzymet og dets etterfølgende inkorporering i en passende encellet organisme eller vertscelle, isolert fra en multicellulær organisme som ikke inneholder DNA som koder for peptidylglysin a-amiderende enzym. Dette oppnås ved standart rekombinant DNA-prosedyrer som funnet i E.F. Maniatis et al, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, 1982; eller R. Wu, ed., Methods in Enzymo-logy, Vol. 68, Academic Press, 1979. De resulterende celler som inneholder det heterologe DNA som koder for peptidyl-glycin a-amiderende enzym, tillater fremstilling av til-strekkelige mengder av enzymet for å utføre in vitro post-translasjonal a-amidering og tillater teoretisk disse celler å utføre denne modifisering av et peptid eller polypeptid in vivo.
Den a-amiderende aktivitet av det rensede enzym ifølge foreliggende oppfinnelse, ble demonstrert ved å bruke et substrat av radio-iodinert D-Tyr-Val-Gly, et peptid hvis sekvens etteraper karboksylterminalen av den melanocytt-stimulerte hormonprekursor. Assays ble utført i 100 inM TES (N-tris/hydroksymetyl/metyl-2-aminoetansulfonsyre)buffer, pH 7,0ved 37°C i 3 timer. Produktet (125<I>/Tyr-Val-NH2) ble separert fra substratet ved kationebyttekromatografi. Den amiderende enzymaktivitet ble også demonstrert ved å bruke et syntetisk substrat som etterapet sekvensen av karboksylterminalen til kalsintonin, (Tyr<25>Gly<33>)-kalsitionin (26-32) .
Selv om foreliggende oppfinnelse har blitt beskrevet i sam-menheng med foretrukne utførelsesformer derav, kan variasjo-ner med modifikasjoner være innlysende for fagmannen.
Claims (26)
1. Enzymatisk blanding omfattende et alfa-amiderende enzym som er i stand til å katalysere omdannelsen av et peptidyl-substrat til et peptidyl-amid hvor peptidylamidet har en amino-gruppe på stedet for en C-terminal aminosyre i substratet,
karakterisert vedat den enzymatiske blanding er tilstrekkelig ren med hensyn på det alfa-amiderende enzym til å oppvise en spesifikk aktivitet på minst 25 mU pr. mg protein som er tilstede i den enzymatiske blanding, og hvor den enzymatiske blanding er i stand til å katalysere alfa-amidering av et peptidyl-substrat fra naturlig kilde, uten at proteolytisk degradering av substrat, produkt eller alfa-amiderende enzym finner sted.
2. Enzymatisk blanding ifølge krav 1,karakterisert vedat blandingen inneholder minst et alfa-amiderende enzym fra en kilde valgt fra gruppen omfattende medullære thyroid-carcinom-svulster, celle-linjer av medullær-thyroid-carcinom og vevskultur-medier fra slike cellelinjer.
3. Enzymatisk blanding ifølge krav 1,karakterisert vedat den spesifikke aktivitet er minst 50 mU pr. mg protein som er tilstede.
4. Enzymatisk blanding ifølge krav 1,karakterisert vedat det alfa-amiderende enzym er tilstede ved en renhet som er tilstrekkelig til å oppvise et enkelt homogent bånd på SDS-PAGE.
5. Enzymatisk blanding ifølge krav 1,karakterisert vedat det alfa-amiderende enzym er erholdt fra rotte.
6. Enzymatisk blanding ifølge krav 1,
karakterisert vedat det alfa-amiderende enzym har en molekylvekt på mellom 60.000 og 65.000 kDa og er et pattedyr-enzym.
7. Enzymatisk blanding ifølge krav 1,karakterisert vedat det alfa-amiderende enzym har en molekylvekt på mellom 60.000 og 65.000 kDa og er et rotte eller et humant enzym.
8. Fremgangsmåte ved fremstilling av den enzymatiske blanding ifølge krav 1,
karakterisert vedat en uren prøve av et alfa-amiderende enzym blir underkastet et første og et andre kromatograferings-trinn, hvor det andre kromtograferings-trinn blir utført på den del av eluanten fra første elueringstrinn som oppviser aktivitet som er karakteristisk for det alfa-amiderende enzym, hvor et av de nevnte kromatograferingstrinn er størrelses-ekskluderende kromato-grafi som er i stand til a skille fra hverandre proteiner med en molekylvekt på omkring 65.000 Dalton, og det andre kromatograferings-trinnet er sterk anionebytter-kromatogra-fering.
9. Fremgangsmåte ifølge krav 8,karakterisert vedat den urene prøve er valgt fra gruppen omfattende medullære thyroid-cacinom-tumorer, cellelinjer av medullær thyroid-carcinom og vevskultur-medier fra slike cellelinjer.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 8,karakterisert vedat en sterk anionebytter-kromatografering blir utført etter størrelsesutskillelses-kromatogra f eringen.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 10,karakterisert vedat den ytterligere omfatter et ekstra anionebytter-kromatograferingstrinn før nevnte størrelses-ekskluderende kromatograferingstrinn.
12. Fremgangsmåte ifølge krav 8,karakterisert vedat det anvendes en uren prøve erholdt fra rotte som utgangsmateriale.
13. Fremgangsmåte ifølge krav 8,karakterisert vedat den urene prøve er et alfa-amiderende enzym som har molekylvekt mellom 60.000 og 65.000 kDa og er et pattedyrenzym.
14. Fremgangsmåte ifølge krav 8,karakterisert vedat den urene prøve er et alfa-amiderende enzym som har molekylvekt mellom 60.000 og 65.000 kDa og er et rotte eller et humant enzym.
15. Anvendelse av den enzymatiske blanding ifølge ethvert av kravene 1-7 for fremstilling av et alfa-amidert produkt.
16. Anvendelse ifølge krav 15 hvor den enzymatiske blanding inneholder minst ett alfa-amiderende enzym fra en kilde valgt fra gruppen omfattende medullær thyroid carcinom-tumorer, celle-linjer av medullære thyroide carcinomer og vevskulturmedier fra slike cellelinjer.
17. Anvendelse ifølge krav 15 hvor den spesifikke aktivitet er minst 50 mU pr. mg totalt protein.
18. Anvendelse ifølge krav 15 hvor det alfa-amiderende enzym er tilstede i den enzymatiske blanding ved en renhet som er tilstrekkelig til å oppvise et enkelt homogent bånd på SDS-PAGE.
19. Anvendelse ifølge krav 15 hvor det alfa-amiderende enzym er erholdt fra rotte.
20. Anvendelse ifølge krav 15 hvor substratet settes i kontakt med den enzymatiske blanding i nærvær av minst én substans valgt fra gruppen omfattende kopper-ioner, molekylært oksygen og et reduksjonsmiddel.
21. Anvendelse ifølge krav 15 hvor substratet settes i kontakt med den enzymatiske blanding i nærvær av en reaksjons-økende konsentrasjon av katalase.
22. Anvendelse ifølge krav 15 hvor substratet settes i kontakt med den enzymatiske blanding i nærvær av et reduksj onsmiddel.
23. Anvendelse ifølge krav 22 hvor reduksjonsmiddelet omfatter ascorbat.
24. Anvendelse ifølge krav 15 hvor den enzymatiske blanding omfatter peptidyl glycin alfa-amiderende mono-oksygenase, og hvor substratet innbefatter et glycin-residuum ved C-terminalen av en peptidkjede.
25. Anvendelse ifølge krav 15 hvor substratet er valgt fra gruppen omfattende naturlig forekommende peptider, substrater dannet ved rekombinante DNA-teknikker og substrater dannet ved in vitro syntese av sammenhengende aminosyrer.
26. Anvendelse ifølge krav 15 hvor substratet er kalsitonin.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US06/655,366 US4708934A (en) | 1984-09-27 | 1984-09-27 | α-amidation enzyme |
PCT/US1985/001616 WO1986002099A1 (en) | 1984-09-27 | 1985-08-26 | Alpha-amidation enzyme |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO862100L NO862100L (no) | 1986-05-27 |
NO175214B true NO175214B (no) | 1994-06-06 |
NO175214C NO175214C (no) | 1994-09-14 |
Family
ID=24628603
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO86862100A NO862100L (no) | 1984-09-27 | 1986-05-27 | Alfa-amideringsenzym. |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4708934A (no) |
EP (1) | EP0201511B1 (no) |
JP (1) | JP2594037B2 (no) |
AT (1) | ATE92522T1 (no) |
CA (1) | CA1341037C (no) |
DE (1) | DE3587506T2 (no) |
DK (1) | DK241486D0 (no) |
FI (1) | FI100993B1 (no) |
HU (1) | HU195857B (no) |
LT (1) | LT2661B (no) |
NO (1) | NO862100L (no) |
RU (1) | RU1802814C (no) |
WO (1) | WO1986002099A1 (no) |
Families Citing this family (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6319685B1 (en) * | 1984-09-27 | 2001-11-20 | Unigene Laboratories, Inc. | Alpha-amidating enzyme compositions and processes for their production and use |
DE3612302A1 (de) * | 1986-04-11 | 1987-10-15 | Hoechst Ag | Chromophore peptide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zum nachweis der peptidylglycin-(alpha)-amidierenden monooxygenase |
JPH0775541B2 (ja) * | 1986-06-07 | 1995-08-16 | 壽之 松尾 | C末端アミド化酵素及びその製造方法 |
JP2598050B2 (ja) | 1987-07-17 | 1997-04-09 | サントリー株式会社 | C−末端α−アミド化酵素 |
US5821083A (en) * | 1987-07-17 | 1998-10-13 | Suntory Limited | Recombinant C-terminal α-amidating enzyme |
US5789234A (en) * | 1987-08-14 | 1998-08-04 | Unigene Laboratories, Inc. | Expression systems for amidating enzyme |
US6255067B1 (en) * | 1987-09-15 | 2001-07-03 | The Johns Hopkins University | cDNA encoding peptidyl-glycine alpha-amidating monooxygenase (PAM) |
JP2653820B2 (ja) * | 1988-03-14 | 1997-09-17 | 壽之 松尾 | アミド化酵素及びその製造方法 |
US5354675A (en) * | 1988-05-30 | 1994-10-11 | Shiseido Company Ltd. | C-terminal amidating enzyme composition, process for preparing, and use of the same |
JP2512575B2 (ja) * | 1988-05-30 | 1996-07-03 | 株式会社資生堂 | C末端アミド化酵素組成物、調製方法および使用 |
JP2845468B2 (ja) * | 1989-01-17 | 1999-01-13 | サントリー株式会社 | ヒト甲状腺由来C―末端α―アミド化酵素 |
US5871995A (en) * | 1989-08-15 | 1999-02-16 | Shiseido Company, Ltd. | Purified enzymes participating in C-terminal amidation |
EP0448513A3 (en) * | 1990-03-21 | 1991-12-27 | Japat Ltd | Process for production of peptidylglycine alpha-hydroxylating monooxygenase and use thereof |
DK220890D0 (da) * | 1990-09-14 | 1990-09-14 | Ole Buchardt | Fremgangsmaade til fremstilling af c-terminalt amiderede peptider |
US5580751A (en) * | 1990-09-14 | 1996-12-03 | Carlsberg A/S | Process for the preparation of C-terminally amidated peptides |
JP2774769B2 (ja) * | 1993-04-26 | 1998-07-09 | 賢治 寒川 | アドレノメデュリン |
WO1997013410A1 (en) * | 1995-10-13 | 1997-04-17 | Boston Medical Center Corporation | Hybrid molecules containing amidated polypeptide binding ligands |
US5912014A (en) * | 1996-03-15 | 1999-06-15 | Unigene Laboratories, Inc. | Oral salmon calcitonin pharmaceutical products |
EP2088188B1 (en) | 1997-04-16 | 2011-08-31 | Unigene Laboratories, Inc. | Direct expression of peptides into culture media |
US6507788B1 (en) | 1999-02-25 | 2003-01-14 | Société de Conseils de Recherches et D'Applications Scientifiques (S.C.R.A.S.) | Rational selection of putative peptides from identified nucleotide, or peptide sequences, of unknown function |
US8088734B2 (en) | 2003-01-21 | 2012-01-03 | Unigene Laboratories Inc. | Oral delivery of peptides |
US7445911B2 (en) * | 2004-11-24 | 2008-11-04 | Unigene Laboratories Inc. | Enzymatic reactions in the presence of keto acids |
DE102004058306A1 (de) * | 2004-12-01 | 2006-07-27 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Carboxy-terminal amidierten Peptiden |
PA8660701A1 (es) | 2005-02-04 | 2006-09-22 | Pfizer Prod Inc | Agonistas de pyy y sus usos |
EP1907561B1 (en) * | 2005-06-24 | 2013-08-28 | Unigene Laboratories, Inc. | Cell lines for expressing enzyme useful in the preparation of amidated products |
US8377863B2 (en) | 2007-05-29 | 2013-02-19 | Unigene Laboratories Inc. | Peptide pharmaceutical for oral delivery |
EP2172550B1 (en) * | 2007-06-29 | 2014-08-06 | Daiichi Sankyo Company, Limited | C-TERMINAL-alpha-AMIDATED RECOMBINANT ENZYME DERIVATIVE |
DK2389388T3 (en) | 2009-01-22 | 2017-05-01 | Keybioscience Ag | TREATMENT FOR Obesity |
CN102666570B (zh) | 2009-12-01 | 2015-12-02 | 诺沃—诺迪斯克有限公司 | 新的肽基α-羟基甘氨酸α-酰胺化裂合酶 |
TW201138808A (en) | 2010-05-03 | 2011-11-16 | Bristol Myers Squibb Co | Serum albumin binding molecules |
ES2712805T3 (es) | 2011-06-15 | 2019-05-14 | Resother Pharma Aps Næsseslottet | Productos farmacéuticos antiinflamatorios |
HUE039105T2 (hu) | 2011-11-02 | 2018-12-28 | Keybioscience Ag | Kalcitonin mimetikumok betegségek és rendellenességek kezelésére |
KR102019911B1 (ko) | 2011-11-02 | 2019-09-09 | 키바이오사이언스 아게 | 질병 및 장애 치료용 펩타이드 유사체 |
US9533022B2 (en) | 2011-11-02 | 2017-01-03 | KeyBioscience A/S | Peptide analogs for treating diseases and disorders |
US10232021B2 (en) | 2013-11-14 | 2019-03-19 | Keybioscience Ag | Calcitonin mimetics for treating diseases and disorders |
CN105939759B (zh) | 2013-12-02 | 2020-01-17 | 康德生物医疗技术公司 | 用于治疗白癜风的组合物和方法 |
EP3149035A4 (en) | 2014-05-28 | 2018-05-16 | Stealth BioTherapeutics Corp | Therapeutic compositions including therapeutic small molecules and uses thereof |
US10576124B2 (en) | 2014-05-28 | 2020-03-03 | Stealth Biotherapeutics Corp | Therapeutic compositions including frataxin, lactoferrin, and mitochondrial energy generating enzymes, and uses thereof |
US10627392B2 (en) | 2014-06-17 | 2020-04-21 | Stealth Biotherapeutics Corp | Methods of identifying and monitoring mitochondrial dysfunction using monocyte screening |
GB201500263D0 (en) | 2015-01-08 | 2015-02-25 | Keybioscience Ag | Calcitonin analogues for treating diseases and disorders |
DK3244878T3 (da) | 2015-01-12 | 2022-10-17 | Enteris Biopharma Inc | Faste orale sammensætningsformer |
WO2016130899A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Peptide inhibition of ccr3-mediated diseases or conditions |
GB201704429D0 (en) | 2017-03-21 | 2017-05-03 | Keybioscience Ag | Calcitonin mimetics for treating diseases and disorders |
GB201707955D0 (en) | 2017-05-18 | 2017-07-05 | Keybioscience Ag | Dual amylin and calcitonin receptor agonists for treating diseases and disorders |
GB201813678D0 (en) | 2018-08-22 | 2018-10-03 | Keybioscience Ag | Acylated calcitonin mimetics |
GB201813677D0 (en) | 2018-08-22 | 2018-10-03 | Keybioscience Ag | Calcitonin mimetics for treating diseases and disorders |
EP4003393A1 (en) | 2019-07-29 | 2022-06-01 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Composition and method for promoting wound healing |
GB202001024D0 (en) | 2020-01-24 | 2020-03-11 | Key Bioscience Ag | Oxyntomodulin mimetics |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6319685B1 (en) * | 1984-09-27 | 2001-11-20 | Unigene Laboratories, Inc. | Alpha-amidating enzyme compositions and processes for their production and use |
-
1984
- 1984-09-27 US US06/655,366 patent/US4708934A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-08-26 EP EP85904514A patent/EP0201511B1/en not_active Revoked
- 1985-08-26 JP JP60503976A patent/JP2594037B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-26 HU HU853879A patent/HU195857B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-08-26 AT AT85904514T patent/ATE92522T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-08-26 WO PCT/US1985/001616 patent/WO1986002099A1/en not_active Application Discontinuation
- 1985-08-26 DE DE85904514T patent/DE3587506T2/de not_active Revoked
- 1985-09-25 CA CA000491512A patent/CA1341037C/en not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-05-23 DK DK241486A patent/DK241486D0/da not_active Application Discontinuation
- 1986-05-26 FI FI862216A patent/FI100993B1/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-05-26 RU SU864027596A patent/RU1802814C/ru active
- 1986-05-27 NO NO86862100A patent/NO862100L/no not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-09-27 LT LTRP1130A patent/LT2661B/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO1986002099A1 (en) | 1986-04-10 |
DE3587506D1 (en) | 1993-09-09 |
LT2661B (lt) | 1994-04-25 |
FI94361B (fi) | 1995-05-15 |
FI94361C (fi) | 1995-08-25 |
US4708934A (en) | 1987-11-24 |
EP0201511A1 (en) | 1986-11-20 |
DK241486A (da) | 1986-05-23 |
AU594026B2 (en) | 1990-03-01 |
FI862216A (fi) | 1986-05-26 |
JPS62500560A (ja) | 1987-03-12 |
FI100993B1 (fi) | 1998-03-31 |
NO175214C (no) | 1994-09-14 |
RU1802814C (ru) | 1993-03-15 |
FI862216A0 (fi) | 1986-05-26 |
DK241486D0 (da) | 1986-05-23 |
AU4802785A (en) | 1986-04-17 |
CA1341037C (en) | 2000-06-27 |
DE3587506T2 (de) | 1994-01-13 |
EP0201511A4 (en) | 1988-05-31 |
NO862100L (no) | 1986-05-27 |
EP0201511B1 (en) | 1993-08-04 |
HUT41444A (en) | 1987-04-28 |
HU195857B (en) | 1988-07-28 |
JP2594037B2 (ja) | 1997-03-26 |
ATE92522T1 (de) | 1993-08-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO175214B (no) | ||
Schmidt et al. | Structure of the xylanase from Penicillium simplicissimum | |
Bietlot et al. | Facile preparation and characterization of the toxin from Bacillus thuringiensis var. kurstaki | |
RU2129606C1 (ru) | ШТАММ ESCHERICHIA COLI JM 105, ТРАНСФОРМИРОВАННЫЙ ПЛАЗМИДОЙ PAE12, - ПРОДУЦЕНТ АЛЬФА-АМИДИРУЮЩЕГО ФЕРМЕНТА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА PAE12, ЛИНИЯ КЛЕТОК С127 МЫШИ, ТРАНСФИЦИРОВАННАЯ ПЛАЗМИДОЙ PD BPV-ММТ NEO αАЕА75-ПРОДУЦЕНТ АЛЬФА-АМИДИРУЮЩЕГО ФЕРМЕНТА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА pd BPV-MMT Neo αAEA75 | |
Dus et al. | Cytochrome c2 of Rhodospirillum rubrum: II. Complete Amino Acid Sequence and Phylogenetic RELATIONSHIPS | |
Mizuno et al. | Peptide C-terminal α-amidating enzyme purified to homogeneity from Xenopuslaevis skin | |
EP0529742A1 (en) | Alpha-amidating enzyme compositions and processes for their production and use | |
Hutton et al. | The molecular cloning of the chromogranin A-like precursor of β-granin and pancreastatin from the endocrine pancreas | |
Kimura et al. | Complete Amino Acid Sequence of Crystalline (α–Glucosidase from Aspergillus niger | |
Katopodis et al. | Functional and structural characterization of peptidylamidoglycolate lyase, the enzyme catalyzing the second step in peptide amidation | |
Sidler et al. | The primary structure of Bacillus cereus neutral proteinase and comparison with thermolysin and Bacillus subtilis neutral proteinase | |
CN109486800B (zh) | 一种新型赖氨酰肽链内切酶及其制备方法 | |
Nagasawa et al. | Determination of the cleavage site involved in C-terminal processing of penicillin-binding protein 3 of Escherichia coli | |
CN109439643B (zh) | 一种新型赖氨酸特异性内切酶及其制备方法 | |
EP0647713B1 (en) | Peptidyl prolyl-cis.trans-isomerase | |
Schultes et al. | Complete amino‐acid sequence of glyceraldehyde‐3‐phosphate dehydrogenase from the hyperthermophilic eubacterium Thermotoga maritima | |
Gustchina et al. | Post X‐ray crystallographic studies of chymosin: the existence of two structural forms and the regulation of activity by the interaction with the histidine‐proline cluster of κ‐casein | |
Schlatter et al. | The primary structure of the psychrophilic lactate dehydrogenase from Bacillus psychrosaccharolyticus | |
EP0249412B1 (en) | C-terminal alpha-amidating enzyme and process for production and use thereof | |
Sacchettini et al. | Amino acid sequence of porcine heart fumarase | |
ERDWEG et al. | Studies on cytochrome c oxidase, XI. The amino-acid sequence of bovine heart polypeptide Vic | |
MXPA01004526A (es) | Amidacion enzimatica de peptidos. | |
Cheng et al. | Amino-terminal sequence and structure of monoclonal antibody-immunopurified cytochromes P 450 | |
WO1991002790A1 (en) | Enzymes which participate in c-terminal amidation, and production and use thereof | |
Iwasaki et al. | Purification and cDNA cloning of Xenopus laevis skin peptidylhydroxyglycine N‐C lyase, catalyzing the second reaction of C‐terminal α‐amidation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |
Free format text: LAPSED IN FEBRUARY 2003 |