NO169850B - Fremgangsmaate for ekstracellulaer fremstilling av homopolysakkarider (ps), soppstammen som produserer disse ps, ps selv og deres anvendelse - Google Patents

Fremgangsmaate for ekstracellulaer fremstilling av homopolysakkarider (ps), soppstammen som produserer disse ps, ps selv og deres anvendelse Download PDF

Info

Publication number
NO169850B
NO169850B NO875319A NO875319A NO169850B NO 169850 B NO169850 B NO 169850B NO 875319 A NO875319 A NO 875319A NO 875319 A NO875319 A NO 875319A NO 169850 B NO169850 B NO 169850B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
dsm
fungal strains
homopolysaccharide
culture
weight
Prior art date
Application number
NO875319A
Other languages
English (en)
Other versions
NO875319L (no
NO875319D0 (no
NO169850C (no
Inventor
Walter Lindoerfer
Kai-Udo Sewe
Fritz Wagner
Sylvia Muenzer
Sabine Nachtwey
Peter Rapp
Udo Rau
Stephan Doerte
Original Assignee
Wintershall Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wintershall Ag filed Critical Wintershall Ag
Publication of NO875319D0 publication Critical patent/NO875319D0/no
Publication of NO875319L publication Critical patent/NO875319L/no
Publication of NO169850B publication Critical patent/NO169850B/no
Publication of NO169850C publication Critical patent/NO169850C/no

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C08ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08BPOLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0024Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid beta-D-Glucans; (beta-1,3)-D-Glucans, e.g. paramylon, coriolan, sclerotan, pachyman, callose, scleroglucan, schizophyllan, laminaran, lentinan or curdlan; (beta-1,6)-D-Glucans, e.g. pustulan; (beta-1,4)-D-Glucans; (beta-1,3)(beta-1,4)-D-Glucans, e.g. lichenan; Derivatives thereof
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145Fungal isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645Fungi ; Processes using fungi

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Vannløselige biopolymerer har i teknikken funnet anvendelse innen forskjellige områder. US-patent 3.301.848 (som herved inntas som referanse) beskriver vannløselige, ikke-ioniske polysakkarider med definert struktur som glukaner. Disse oppnås mikrobielt ved dyrking av mikroorganismen Sclerotium glukanikum n.sp., NRRL 3006, som metabolitter. De er imidlertid relativt lavmolekylære. Det samme gjelder for de polysakkarider som er beskrevet i GB-patent 2.178.437.
W.L. Griffith og A.L. Compere beskriver i Dev. Ind.Micro-biol. 19, 609-617, (1977) den mikrobielle produksjon av høyviskøse glukaner ved dyrking av mikroorganismen Sclerotium rolfsii, ATCC 15206, i et næringsmedium med et innhold av uorganiske salter, glukose og en liten mengde gjærekstrakt med en dyrkningsvarighet på 2,5 dager. De produserte glukanene viser en minskning av løseligheten i vann ved pH-verdier fra 1,5 til 4.
Gjenstand for oppfinnelsen er en fremgangsmåte for ekstracellulær fremstilling av homopolysakkarider (PS) med høy spesifikk viskositet, soppstammen, som produserer disse PS, PS selv og deres anvendelse.
Det er oppgave for oppfinnelsen å fremstille ikke-ioniske homopolysakkarider med høy spesifikk viskositet, høy temperatur- og salt-stabilitet og med langtids-stabilitet. Med "stabilitet" menes, at molekylvekten og dermed egenskapene under (eventuelt samtidige) innvirkning av forhøyet temperatur, salter og luftoksygen ikke forandrer seg vesentlig.
Krav 6 gjelder soppstammene DSM 3887, DSM 3888, DSM 3889 og DSM 3892, som ble deponert i den tyske samling for mikroorganismer (DSM), Gottingen, 28.10.86.
Fremgangsmåten i følge oppfinnelsen er definert i den karakteriserende delen av krav 2.
Oppgaven for oppfinnelsen løses derved, at mikroorganismer i form av de soppstammer som er nevnt i kravene 6 og 2 dyrkes i et næringsmedium under lufting og bevegelse ved en temperatur fra ca. 15 til 40°C, deretter oppvarmes i 2 til 30, fortrinnsvis 5 til 15 minutter til 7 0 til 90, fortrinnsvis 75 til 85°C, så snart soppstammene er fullvokst, deretter skylles kulturløsningen fra cellemassen og det dannede homopolysakkaridet med praktisk talt bare glukose som monomer grunnbestanddel med en renhetsgrad i området fra 0,03 til 0,1 vekt% restprotein isoleres derfra.
Som næringsmedium stilles til disposisjon for soppstammene de vanlige nitrogen- og karbonkildene som de kan utnytte, såvel de uorganiske ionene som er nødvendige for veksten, og hensiktsmessig i en slik konsentrasjon, at det ved avbrudd av dyrkningen består en restkonsentrasjon av karbon-kilden i en størrelsesorden på 0,1 vekt%, beregnet på total-løsningen. De produserte, ikke-ioniske PS har en viskositet i området fra 50 til 190 m.Pa.s ved en skjærhastighet D = 0,3/s"<1 >ved 40°C, bestemt med 0,3 g PS, oppløst i 1000 ml vann med høyt saltinnhold (med opptil 100 g/l alkali-ioner og opptil 30 g/l jordalkali-ioner). Denne viskositeten forblir praktisk talt konstant ved en temperatur på 60°C i luft i 1 år og lenger. Under oksygen-utelukkelse gjelder dette sogar for temperaturer opptil 90°C. Viskositeten til de ikke-ioniske PS som frem-stilles i følge oppfinnelsen, blir bare litt påvirket ved en konsentrasjon fra 0,1 til 1 g/l i temperaturområdet fra ca. 20 til 60°C og i skjærområder fra ca. D = 3,0 s"<1> og større, slik at den for praktiske formål kan ansees som konstant. Også etter en times oppvarming av en løsning som inneholder 0,3 g/l av de PS som oppnås i følge oppfinnelsen i en autoklav ved nøytral pH-verdi til 120°C ved 1 bar overtrykk er viskositeten etter avkjøling ved 20°C og erstatning av det fordampede vannet praktisk talt ikke påvirket i et skjærområde fra D = 0,1 til 300 s"<1>. PS består av en lineær kjede av en 1,3-sammenknyttet /3-D-glykopyranose med forskjellig substitusjonsgrad og 1,6-bundede /3-D-glykopyranosyl-grupper.
Soppstammene immobiliseres før anvendelsen hensiktsmessig og en bærersubstans, fortrinnsvis et polyuretanskum, og dannelsen av PS gjennomføres semikontinuerlig eller helkonti-nuerlig med dette immobilisiatet.
De PS som oppnås i følge oppfinnelsen egner seg fremragende for anvendelse som dispergerings- eller emulgerings-midler (alene eller i kombinasjon med anioniske og/eller ikke-ioniske tensider), som strukturviskøse fortykningsmidler, som vannretensjonsmidler såvel som for forbedring av vedhefting av stoffer til faste overflater. Ved anvendelse som fortykningsmiddel tenkes det spesielt på anvendelsen ved borespylinger, ved sekundær og tertiær flømming av jordoljeleier og generelt for nedsettelse av gnidningsmotstander i strømmene, spesielt i turbulente, vandige væsker for nedsettelse av trykktap. Som dispergeringsmiddel kommer eksempelvis anvendelser i landbrukskjemikalier som fungicider, pesticider såvel som i næringsmiddel- og formiddelområdet i betraktning.
Filtreringsegenskapene til de PS som er oppnådd i følge oppfinnelsen, som uttrykk for initierbarheten i porøse medier som formasjoner som inneholder jordolje er fremragende: De ligger ved en prøve med 0,3 g PS/1 vann med høyt saltinnhold med opptil 100 g/l alkali-ioner og opptil 30 g/l jordalkali-ioner ved en trykkfiltrering med 1 bar overtrykk over et 3 urti membranfilter med 200 ml løsning 5 sek. skåret i området fra 0,5 til 3,0 min. og uskåret i området fra 0,8 til 10 min., eller over en 1,2 /im membranf ilter 5 sek. skåret i området fra 1,6 til 18 min. og uskåret i området fra 4,0 til 14 min.
Dyrkingen av suspensjonskulturen innstilles på ca. 40 til 180, fortrinnsvis 50 til 80 timer.
Fremgangsmåten i følge oppfinnelsen gir PS umiddelbart i meget ren form. Restproteininnholdet ligger i området fra ca. 0,03 til 0,1 vekt%.
"Vannløselig" i oppfinnelsen betyr, at minst 1, fortrinnsvis minst 2 0 g PS er løselig i 1 liter av 20°C. PS i følge oppfinnelsen er vannløselig på tross av sin høye molekylvekt, fordi de i høy grad er substituert med sidekjeder. De skiller seg fra de polysakkarider som er beskrevet i US-patent 3.301.848 bl.a. ved sin vesentlig høyere molekylvekt. Deres overlegne egenskaper beror hovedsakelig på dette.
Karakteriseringen av de mikroorganismene som foretrukket anvendes, i form av soppstammer fremgår av følgende tabell.
Viskosimetriske data for karakterisering av polysakkaridene.
77° = Skjærviskositet i ro (en vandig PS-løsning med
0,3 g/l).
n = Flyteindeks (flow behaviour index)
Forklaring finnes i:
"Non-Newtonian Flow Behaviour of Colloid-Disperse Glucan Solutions", som herved inntas som referanse.
[tj] = Staudinger index (intrinsic viscosity) gir rombe-hovet for en polymerklump i fortynnet løsning (<=0,5 g/l) og får via Mark-Houwink ligningen n = K«MG<a> i direkte\ forhold til MG.
MG = Molekylvekt
PG = Polymerisasjonsgrad MG/162
162 = D-glukose - 1 H20
Fremgangsmåten i følge oppfinnelsen forklares ved hjelp av følgende eksempler.
7
Eksempel 1
Fremstilling av et homopolysakkarid, type AW 106 med soppstammen DSM 3889.
To skrå-agarkulturer av stammen DSM 3889 ble oppsvømmet i hver 3 ml 0,9 %ig koksaltløsning og denne ble podet med 500 ml av en næringsløsning, som inneholder 1,5 g NaN03, 0,5 g K2HP04 • 3 H20, 0,25 g MgS04 • 7 H20, 0,25 g KCL, 1,0 g gjærekstrakt og 5,0 g glukose. Under rysting ved suspensjonskulturen dyrket ved 27°C i 60 timer ved pH 4,5. Med den således fremstilte forkulturen ble en 15 liters bioreaktor, utstyrt med 3 6-bladede skiverørere, podet, som inneholdt 10 liter av et kulturmedium med følgende sammensetning:
Dyrkingen ble gjennomført i 80 timer med 27°C under omrøring med 500 omdreininger pr. minutt og en lufting på 1,67 liter steril luft pr. liter næringsmedium og minutt ved en start-pH-verdi på 3,5. Under dyrkingen falt pH-verdien til 2,7, etter avslutning av dyrkingen var restglukoseinnholdet mindre enn 0,1 vekt%.
Kultursuspensjonen ble oppvarmet i 30 min. til 80°C, fortynnet med 50 1 avionisert vann og sentrifugert ved 15.000 G. Poly-sakkarid AW 106 ble utfelt fra supernatanten med i-propanol (1:1 volumforhold), frafiltrert, vasket med 70 %ig, vandig i-propanolløsning, bunnfallet resolvatisert i en 1 1 avionisert vann og frysetørket. Det ble oppnådd 120 g poly-sakkarid AW 106. Produktet inneholdt som monomerbyggesten glukose og mindre enn 0,05 vekt% protein. 0,3 g AW 106, opp-løst i 1000 ml avleiringsvann (sammensetning g/l: CaCl2 42,6, MgCl2 10,5, NaCl 138,0, Na2S04 1,2 og NaBo2 • 4 H20 0,4) hadde ved en skjærhastighet på 0,3 s"<1> og 40°C en viskositet på 137,7 mPas.
Eksempel 2
Fremstillingen av et homopolysakkarid, type AW 110, med soppstammen DSM 3887.
Fire skrå-agarkulturer av stammen DSM 3887 ble hver oppslemmet i 3 ml 0,9 %ig koksaltløsning og en næringssaltløsning inneholdende 1,0 g K2HP0A • 3 H20, 1,5 KCl, 1,5 g NaN03, 0,5 g MgS04 • 7 H20, 0,5 gjærekstrakt og 10,0 g glukose med disse. Under rysting ble suspensjonskulturen dyrket ved 27°C i 54 timer ved pH 4,5. Med denne inokuleringskulturen ble en 70 liters bioreaktor inokulert, hvilken bioreaktor var utstyrt med et Intensor ©-System fra firma Giovanola, Monthey, Sveits, som inneholdt et næringsmedium med følgende sammensetning:
Dyrkingen ble gjennomført i 96 timer ved 27°C under omrøring med 1200 omdreininger pr. min. og en lufting på 0,5 liter steril luft pr. liter næringsmedium og minutt ved en start-pH-verdi på 4,5. Etter avslutning av dyrkingen hadde pH-verdien falt til 3,0,og xylosen var nesten forbrukt.
Dyrkningsmediet ble oppvarmet til 85°C og cellemassen ble fraskilt ved denne temperaturen ved hjelp av en trykkfiltrering. Det klare, høyviskøse filtratet ble, som beskrevet i eksempel 1, utfelt med isopropanol og frysetørket. Det ble oppnådd 435 g av homopolysakkaridet, type AW 110. Produktet inneholdt som monomer grunnbestandel utelukkende glukose med et restinnhold av protein på under 0,03 vekt%.
Elementæranalysen ga følgende sammensetning:
0,3 g AW 110 i 1000 ml avleiringsvann for jordolje-utvinning med sammensetning i følge eksempel 1, ga ved en skjærhastighet på 0,3 s"<1> og 40°C en viskositet på 81,6 mPas.
Eksempel 3
Fremstilling av et homopolysakkarid, type AW 114, med soppstammen DSM 3888.
To skrå-agarkulturer av stammen DSM 3888 ble hver sus-pendert i 3 ml 9 %ig koksaltløsning og 500 ml av en nærings-salt løsning, som inneholdt 3,0 g gjærekstrakt, 0,75 g (NHA)2HP04, 0,5 g K2HP04 • 3 H20, 0,25 g MgS04 • 7 H20 og 10 g glukose inokulert med denne suspensjonen. Under rysting ble suspensjonskulturen dyrket ved 27°C i 96 timer ved pH 5,3. De dannede pelletene ble homogenisert med en Ultra-Turrax®-rører ved 20.000 omdreininger pr. min. i 10 sek., og med denne homo-geniserte inokuleringskulturen ble en 15 liters bioreaktor, utstyrt med 3 6-bladede skiverørere, inokulert, som inneholdt 10 liter av et næringsmedium med følgende sammensetning:
Dyrkingen ble gjennomført i 76 timer ved 27°C under omrøring med 400 omdreininger pr. min. og en lufting med 0,1 liter steril luft pr. liter næringsmedium og minutt ved en start-pH-verdi på 5,3. Etter avslutning av dyrkingen var pH-verdien falt til 4,6 og rest-xylose-innholdet gikk opp til 0,1 vekt%.
Reaksjonssatsen ble oppvarmet til 8 0°C, tilsatt 10 g formaldehyd, og ved skjærbehandling med en Ultra-Turrax i 10 sek. ved 20.000 omdreininger pr. min. ble polysakkaridet over-veiende frigjort fra de oppnådde pellets. Deretter ble celle-materialet fraskilt ved en trykkfiltrering og det klare filtratet ble fritt fra lavmolekylære substanser ved en ultrafiltrering med utelukkelsesgrense på 100.000 dalton. Ultrafiltratet ble som beskrevet i eksempel 1, utfelt med isopropanol og frysetørket. Det ble oppnådd 72 g av homopolysakkarid AW 114. Produktet inneholdt som monomer grunn-bestanddeler utelukkende glykose med et restinnhold av protein på under 0,05 vekt%.
Elementæranalysen ga følgende sammensetning:
0,3 g AW 114, oppløst i 1000 ml avleiringsvann med sammensetning som i eksempel 1, ga ved en skjærhastighet på 0,3 s' 1 og 40°C en viskositet på 188,7 mPas.
Eksempel 4
Fremstilling av et homopolysakkarid, type AW 117, med soppstammen DSM 3892.
2 skrå-agarkulturer av stammen DSM 3892 ble oppslemmet i hver av 3 ml 0,3 %ig koksaltløsning og 500 ml av en nærings-saltløsning som inneholdt 0,5 g gjærekstrakt, 0,5 g K2HP04 • 3 H20, 0,25 g MgS04 • 7 H20, 0,25 g sitronsyre • H20 og 5 g sakkarose inokulert med denne kulturen. Under rysting og en rotasjonsrystemaskin ved 100 omdreininger pr. min. ble sus-pens j onskulturen dyrket ved 25°C i 72 timer ved pH 5,6. Med denne forkulturen ble en 15-liters bioreaktor som var utstyrt med et lederrør med propellrører, inokulert, som inneholdt 10 liter næringsmedium med følgende sammensetning:
Dyrkingen ble gjennomført i 48 timer ved 25°C under omrøring med 600 omdreininger pr. minutt og en lufting på 1,0 1 steril luft pr. liter næringsmedium og minutt ved en utgangs-pH-verdi på 5,6. Etter avslutning av dyrkingen var pH-verdien falt til 3,2 og rest-glukose-innholdet gikk opp til 0,15 vekt%.
Kulturmediet ble tilsatt 8 liter avionisert vann, oppvarmet til 85°C og cellemassen fraskilt ved hjelp av en trykkfiltrering. Den klare kulturløsningen ble oppkonsentrert ved hjelp av en ultrafiltrering med en utelukkelsesgrense på 100.000 Dalton til et homopolysakkarid-innhold på 10 g/l og frysetørket. Det ble oppnådd 90 g homopolysakkarid AW 117.
Etter hydrolyse av produktet i 6 N H2S04 ved 90°C under N2-atmosfære ble det tynnsjiktkromatografisk og ved hjelp av høytrykksvæske-kromatografi fastslått bare glukose som monomerbestanddel.
Elementæranalysen ga følgende sammensetning:
Fra dette kan det beregnes et restinnhold av protein på 0,56%.
0,3 g AW 117, oppløst i 1000 ml avleiringsvann i følge eksempel 1, ga ved en skjærhastighet på 0,3 s"<1> og 40°C en viskositet på 144,5 mPas.
For å fastslå om de PS som er oppnådd ved hjelp av fremgangsmåten i følge oppfinnelsen er egnet til tertiær-fremføring av jordolje, ble de soppstammene som er nevnt i krav 1 dyrket i submerskultur, trykkfiltrert og vidtgående befridd for uorganiske ioner, for rest-glukose og for proteiner til etterfølgende utrafiltrering med en utelukkelsesgrense på 100.000 dalton. Denne "stamløsningen" ble tilsatt formaldehyd som baktericid og som stabilisator.
Følgende bedømmelseskriterier ble prøvet med disse "stamløsninger": Viskositeten i avleiringsvann med sammensetning som i eksempel 1, méd et totalsaltinnhold på 190 g/l.
Polymerkonsentrasjonen ble innstilt slik, at for den tekniske anvendelse ved 40 til 60°C gikk viskositetene opp til 30 til 40 mPas ved en skjærsenkning på D = 0,3 s"<1>. For karakterisering ble viskositetene ved D = 0,3 s"<1> og D = 3"<1 >brukt.
Dataene i den følgende tabellen viser at 0,3 g/l av de fremstilte homopolysakkarid-løsninger er tilstrekkelig. Det er fastslått, at den spesifikke viskositeten ved 60°C er høyere og avhengigheten av temperaturen mindre enn hos de handels-produkter som er anvendt som sammenligning.
Tabellen viser at ved f.eks. 40°C må det anvendes 1 g/l Flocon® 4800 sammenlignet med bare 0,3 g/l av PS, type AW 114, som er oppnådd i følge oppfinnelsen, ved sammenlignbare viskositeter.
Vurderingen av tabellen viser også, at det samme handelsproduktet på grunn av sin sterke avhengighet av temperaturen ved T over 60°C, ikke mer kan komme til anvendelse. Derimot oppviser homopolysakkaridet som er fremstilt ved hjelp av fremgangsmåten i følge oppfinnelsen, en lite
temperaturavhengig viskositet.
Handelsproduktet "Actigum" behøver for innstilling av viskositeten fra 3 0 til 40 mPa.s ved D = 0,3 s"<3> og ved T = 60°C en mengde på 0,5 g/l. Derimot krever det produkt, type AW 114, som er fremstilt ved hjelp av fremgangsmåten i følge oppfinnelsen, bare anvendelse av 0,3 g/l.
Filtreringsforhold:
Som teknisk regel skal løsningene av homopolysakkaridene flyte fritt uten tilstoppelse gjennom filteret med en porediameter Dp = 1,2 jim. Det blir filtrert 200 ml av løsningene av polysakkaridene gjennom et filter med 47 mm diameter ved et trykk på 0,4 bar. Forholdet mellom gjennomstrømningshastig-heten for den første firedelen og gjennomstrømningshastigheten for den fjerde firedelen utgjør det såkalte "milliporefilter-forholdet" (MPFR). Godt filtrerbare løsninger oppviser en MPFR-verdi under 1,6. Dette filtreringsforholdet kan forbedres ennå mer ved skjærbehandling av "stamløsningene".
I den følgende tabellen er dataene for viskositene og filtreringen av de PS som er oppnådd ved hjelp av fremgangsmåten i følge oppfinnelsen med soppstammene i følge krav 1 oppført.
Typebetegnelsene
AW: 106, 110, 114, 117
tilsvarer soppstammene:
DSM: 3889, 3887, 3888, 3892 77 0,3; rj 3,0 : betyr viskositeter ved skjærhastigheter på 0,3 henholdsvis 3,0 s"<1>.
MPFR = Milliporefilterforhold
Dp = Porediameter
Kons. = Konsentrasjon i g/l.
Som "løsningsmiddel" ble det anvendt leirplassvann i følge eksempel 1.
"Skjærbetingelsene" er:
7000 omdreininger pr. min. x 3 min. i en "Ultraturrax-omløpsapparatur" fra firma Janke & Kunkel, Staufen, DE.
- betyr ikke skjærbehandlet
+ betyr skjærbehandlet.
Alle løsningene er filtrert med membranfilteret med 3 /im henholdsvis 5 /nm.
Viskositetsangivelsene etter filtreringen er målt ved T = 25°C i mPa.s.
Tabellen viser at typene AW 114 og AW 117 er meget godt filtrerbare allerede uten skjærbehandling. Ved skjærbehand-1ingen senkes fortrinnsvis viskositeten i det nedre området av skjærbehandlingssenkningen, D = 0,3 s"<1>. Derved avflates viskositetskurven og viskositeten kan innstilles ved hjelp av disse forholdsreglene.
Langtidsstabilitet:
Med løsninger som er skjærbehandlet og filtrert for praksis, ble langtidsstabiliteten for viskositeten ved T = 40°C, 60°C og 85°C med forskjellige løsninger som er stabilisert med 200 eller 1000 ppm formaldehyd, med og uten utelukkelse av oksygen (02) .
Typen AW 114 er eksempelvis stabil ved 60°C etter en tid på et år og lenger. Dette resultatet bekreftes eksempelvis også for typen AW 117. Disse to løsningene av homopolysakkarider var stabilisert med formaldehyd, imidlertid ikke frie for surstoff.
En viktig verdi for den praktiske anvendelsen er filtre-ringstiden for de PS som oppnås i følge oppfinnelsen. I den følgende tabellen er filtreringstidene i minutter ved anvendelse av membranfiltret med 1,2 ^m og med 3 jum porediameter oppført ved en filterdiameter på 47 mm. For bestemmelse av filtreringsegenskapen oppløses 0,3 g/l PS i avleiringsvann i følge eksempel 1 og trykkfiltreres ved 1 bar gjennom membranfilteret. Den tid i minutter som er nødvendig for filtrering
av 200 ml bestemmes.
Det viser seg forskjellige filtreringstider. Negative løsninger av typen AW 114 og AW 117 viser gode filtreringsegenskaper etter ultrafiltrering uten en skjærbehandling. Produktene AW 106 og AW 110 krever en skjærbehandling på 5 sek. i Waring blandemaskin for å oppnå en teknisk brukbar filtreringstid for gode filtreringsegenskaper.
De homopolysakkarider som er fremstilt ved hjelp av fremgangsmåten i følge oppfinnelsen, gjør det mulig å fremstille produkter med de filtreringstidene som er nødvendige for den tekniske anvendelsen.
Tabeller for filtreringstider ved 2 forskjellige poredia-metre for membranfiltret i minutter.
* Skjærbehandling 5 sek.i Waring blandemaskin.
De PS som er fremstilt ved hjelp av fremgangsmåten i følge oppfinnelsen under anvendelse av mikroorganismer i form av soppstammer i følge krav 1, har den fordelen at de har god vannløslighet. Disse produktene er derfor og på grunn av deres reologiske egenskaper mangesidig anvendbare i teknikken i form av løsninger, men dessuten også som formede masser eller i form av filmer og tråder.
Ytterligere fordeler oppnås av løsningene fra temperatur-stabiliteten, langtidsstabiliteten og skjærstabiliteten, såvel som av deres innstillbare filtrerbarhet.

Claims (7)

1. Homopolysakkarid med høy spesifikk viskositet, karakterisert ved at det har en molekylvekt på 8-22,5 x IO<6>, og at det omfatter 1,3-til knytt et jS-D-gluko-pyranose med 1,6-bundne /3-D-glukopyranosyl-grupper som substituenter og at det har et restproteininnhold på 0,03-0,1 vekt%, og er produsert av soppstammene ifølge krav 6.
2. Fremgangsmåte for ekstracellulær fremstilling av homopolysakkarider ifølge krav 1 med høy spesifikk viskositet, karakterisert ved at mikrorganismer i form av minst én av soppstammene Fungi imperfecti DSM 3887, DSM 3889, DSM 3892 eller Basidiomyceter DSM 3888 dyrkes i et næringsmedium i 40-180 timer under aerobe betingelser ved en temperatur i området fra 15 til 40°C og en pH-verdi på 6-2,5, kultursuspensjonen oppvarmes deretter så snart soppstammene er utvokst, i 2-30 min. til 70-90°C, kulturløsningen skilles deretter fra cellemassen, og det dannede, vannløselige homopolysakkarid av 1,3 - tilknyttet /3-D-glukopyranose med 1,6-bundne jS-D-glukopyranosyl-grupper som substituenter med molekylvekter på minst 8xl0<6> og restproteininnhold på 0,03-0,1 vekt% isoleres derfra på vanlig måte.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at det som karbonkilde anvendes stivelse, hemicellulose, glukose eller sakkarose i en slik konsentrasjon at kultursuspensjonen fortsatt er blandbar i 3-fase-systemet fast/flytende/gass.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 2 eller 3, karakterisert ved at ved soppstammer hvor 1,3- eller 1,6-glukanasen eller begge er positive, anvendes en C-kilde med en slik konsentrasjon, at ved avbrudd av dyrkningen består en restkonsentrasjon på ca. 0,1 vekt%.
5. Fremgangsmåte ifølge et av kravene 2 til 4, karakterisert ved at soppstammene immobiliseres på en bærersubstans ved hjelp av vanlige metoder, og at dannelsen av homopolysakkaridene gjennomføres semikontinuerlig eller kontinuerlig med dette immobilisat.
6. Biologisk ren kultur av soppstammer, karakterisert ved at de er fra klassen Fungi imperfecti og har betegnelsene DSM 3887, DSM 3889, DSM 3892 og fra klassen av Basidiomyceter og har betegnelsen DSM 3888, og at de har morfologiske egenskaper som angitt i tabell side 4 i beskrivelsen og at de fremstiller homopolysakkarid ifølge krav l.
7. Anvendelse av homopolysakkaridet ifølge krav 1 som dispergerings- og emulgeringsmiddel, som fortykningsmiddel, som vannretensjonsmiddel og for forbedring av vedheftingen av stoffer til faste overflater.
NO875319A 1986-12-19 1987-12-18 Fremgangsmaate for ekstracellulaer fremstilling av homopolysakkarider (ps), soppstammen som produserer disse ps, ps selv og deres anvendelse NO169850C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19863643467 DE3643467A1 (de) 1986-12-19 1986-12-19 Verfahren zur extrazellulaeren herstellung nichtionischer biopolymerer und deren verwendung

Publications (4)

Publication Number Publication Date
NO875319D0 NO875319D0 (no) 1987-12-18
NO875319L NO875319L (no) 1988-06-20
NO169850B true NO169850B (no) 1992-05-04
NO169850C NO169850C (no) 1992-08-12

Family

ID=6316609

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO875319A NO169850C (no) 1986-12-19 1987-12-18 Fremgangsmaate for ekstracellulaer fremstilling av homopolysakkarider (ps), soppstammen som produserer disse ps, ps selv og deres anvendelse

Country Status (5)

Country Link
EP (1) EP0271907B1 (no)
AT (1) ATE74381T1 (no)
CA (1) CA1329159C (no)
DE (2) DE3643467A1 (no)
NO (1) NO169850C (no)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2623207B1 (fr) * 1987-11-13 1990-05-18 Inst Francais Du Petrole Procede de purification d'un mout de polysaccharide dans le but d'en accroitre la filtrabilite et utilisation du mout purifie en recuperation assistee du petrole
AU608713B2 (en) * 1988-06-16 1991-04-11 Standard Oil Company, The The production of polysaccharides from filamentous fungi
DE4109457A1 (de) * 1991-03-22 1992-11-12 Wintershall Ag Verfahren zur extrazellulaeren herstellung von hochmolekularen homopolyscchariden und zu ihrer anwendung, sowie die entsprechenden pilzstaemme
JPH05199892A (ja) * 1991-09-11 1993-08-10 Shin Etsu Chem Co Ltd キトサンの製造方法
FR2827192B1 (fr) * 2001-07-13 2004-06-04 Cognis France Sa Preparations contenant des agents tensio-actifs non ioniques comme agents d'extraction
MX2012006882A (es) 2009-12-17 2012-12-05 Wintershall Holding GmbH Metodo para producir homopolisacaridos.
DK2675866T3 (en) 2011-02-16 2015-04-07 Wintershall Holding GmbH PROCEDURE FOR TRANSPORTING OIL OIL FROM OIL OIL DEPOSITS WITH HIGH DEPOSITION TEMPERATURE
US9206348B2 (en) 2011-02-16 2015-12-08 Wintershall Holding GmbH Process for mineral oil production from mineral oil deposits with high deposit temperature
JP2014511946A (ja) 2011-03-29 2014-05-19 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア グルカンを用いることによるセルロース材のコーティング方法
US8852750B2 (en) 2011-03-29 2014-10-07 Wintershall Holding GmbH Method for the coating of a cellulose material by using a glucan
EA201490694A1 (ru) 2011-10-04 2014-09-30 Винтерсхол Хольдинг Гмбх Способ извлечения нефти из подземного месторождения
WO2013171137A1 (en) 2012-05-16 2013-11-21 Wintershall Holding GmbH Method for precipitating and re-dissolving beta-glucan
WO2014049018A1 (de) 2012-09-27 2014-04-03 Wintershall Holding GmbH Fliessfähige zusammensetzung, verfahren zur herstellung der fliessfähigen zusammensetzung sowie verfahren zum fracen einer unterirdischen formation unter einsatz der fliessfähigen zusammensetzung
WO2015177150A1 (en) 2014-05-22 2015-11-26 Basf Se Lubricant compositions containing beta-glucans
WO2016066796A1 (en) 2014-10-31 2016-05-06 Wintershall Holding GmbH Method for concentrating beta-glucans
US10273514B2 (en) 2014-12-04 2019-04-30 Wintershall Holding GmbH Method for preparing an aqueous solution of beta-glucan
ES2702025T3 (es) * 2014-12-12 2019-02-27 Wintershall Holding GmbH Procedimiento para la fermentación de cepas fúngicas
CA3000556A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 Wintershall Holding GmbH Redispersion of schizophyllan
RU2018137787A (ru) * 2016-03-28 2020-04-29 Карджилл, Инкорпорейтед Твердые частицы солюбилизируемого и фильтруемого биополимера
EP3684881A4 (en) * 2017-09-20 2021-05-05 Cargill, Incorporated SOLUBLE AND FILTERABLE BIOPOLYMER SOLIDS
US20210070891A1 (en) * 2017-09-28 2021-03-11 Cargilll, Incorporated Refined beta-glucan and methods of maintaining filterability of beta-glucan compositions at various salinities
EP3549958A1 (en) * 2018-04-04 2019-10-09 Clariant International Ltd Process for the purification of complex biocompositions

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5461112A (en) * 1977-10-24 1979-05-17 Ono Pharmaceut Co Ltd Oncostatic polysaccharide* its preparation* and oncostatic drugs containing it as an effective component
JPS58138392A (ja) * 1982-02-13 1983-08-17 Japan Synthetic Rubber Co Ltd β−D−グルカン
JPH0757761B2 (ja) * 1984-03-08 1995-06-21 株式会社林原生物化学研究所 β−グルカンとその製造方法及び用途

Also Published As

Publication number Publication date
DE3643467A1 (de) 1988-06-30
EP0271907A2 (de) 1988-06-22
NO875319L (no) 1988-06-20
EP0271907B1 (de) 1992-04-01
CA1329159C (en) 1994-05-03
ATE74381T1 (de) 1992-04-15
NO875319D0 (no) 1987-12-18
EP0271907A3 (en) 1989-03-08
DE3777979D1 (de) 1992-05-14
NO169850C (no) 1992-08-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO169850B (no) Fremgangsmaate for ekstracellulaer fremstilling av homopolysakkarider (ps), soppstammen som produserer disse ps, ps selv og deres anvendelse
US4299825A (en) Concentrated xanthan gum solutions
NO160790B (no) Fremgangsm te for fremstilling av xanthomonas heterkkarid.
NO831406L (no) Mikrobielle polysakkarider, fremgangsmaate til deres fremstilling, dertil egnede mikroorganismer, og polysakkaridenes anvendelse
LU80512A1 (fr) Procede de production d&#39;un bouillon de fermentation contenant du xanthane et depourvu de pyruvate et son application a l&#39;extraction du petrole
US4416990A (en) Enzymatic clarification process for improving the injectivity and filtrabhility of xanthan gums
NO158354B (no) Fremgangsmaate for fortrengning av et fluid gjennom en permeabel undergrunnsformasjon.
US4873323A (en) Acid/heat modified polysaccharide biopolymers
Marqués et al. Production and rheological properties of the extracellular polysaccharide synthesized by Pseudomonas sp. strain EPS-5028
EP0039962B1 (en) Clarification of polysaccharide-containing fermentation products
Manna et al. Production and rheological characteristics of the microbial polysaccharide gellan
IE45763B1 (en) Fermentation process for the production of microbial biomass and a heteropolysaccharide biopolymer
JP5969390B2 (ja) フコース含有細菌バイオポリマー
CA2063490A1 (en) Extracellular preparation of high molecular weight homopolysaccharides and the use thereof, and the fungal strains therefor
DK151268B (da) Enzympraeparat med inulinaseaktivitet, fremgangsmaade til hydrolyse af inulin og fremgangsmaade til fremstilling af enzympraeparatet
CN116555149B (zh) 一种产黄原胶的工程菌株及其构建方法
US4689160A (en) Acid stable heteropolysaccharide s-421
CN116790695A (zh) 利用基因工程菌发酵生产高分子量黄原胶的工艺
US5130249A (en) Galactomannan polysaccharide producing organism
JPH02218701A (ja) 微生物による炭素源の発酵によって多糖類を製造する方法
Tait et al. Synthesis and properties of a mutant type of xanthan
US4440225A (en) Oil recovery using modified heteropolysaccharides in buffered brine
US5118803A (en) Zooglan polysaccharide
EP0189959B1 (en) Process for the preparation of polysaccharide aqueous solutions
US4234688A (en) Polysaccharide producing process using protease and Azotobacter