NO153011B - Fremgangsmaate ved fremstilling av trestatin a, b og c - Google Patents
Fremgangsmaate ved fremstilling av trestatin a, b og c Download PDFInfo
- Publication number
- NO153011B NO153011B NO790469A NO790469A NO153011B NO 153011 B NO153011 B NO 153011B NO 790469 A NO790469 A NO 790469A NO 790469 A NO790469 A NO 790469A NO 153011 B NO153011 B NO 153011B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- trestatin
- trestatins
- amylase
- isp
- powder
- Prior art date
Links
- 229930186167 Trestatin Natural products 0.000 title claims description 79
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 14
- WEDWQCPYKKZMDF-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[5-[5-[3,4-dihydroxy-6-methyl-5-[[4,5,6-trihydroxy-3-(hydroxymethyl)cyclohex-2-en-1-yl]amino]oxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-(hydro Chemical compound OC1C(O)C(NC2C(C(O)C(O)C(CO)=C2)O)C(C)OC1OC(C(C1O)O)C(CO)OC1OC(C(C1O)O)C(CO)OC1OC(C(C1O)O)C(CO)OC1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O WEDWQCPYKKZMDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 68
- PYVAAPGPTLLDGV-AGKSRYJLSA-N (2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3r,4r,5s,6r)-5-[(2r,3r,4r,5s,6r)-5-[(2r,3r,4r,5s,6r)-5-[(2r,3r,4s,5s,6r)-5-[[(1s,4r,5r,6s)-4-[(2s,3r,4r,5s,6r)-5-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4-dihydroxy-6-methyl-5-[[(1s,4r,5s,6s)-4,5,6-trihydroxy-3-(hydroxymethyl)cyclohex-2-en-1-yl]amino] Chemical compound O([C@H]1O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1O[C@H](C)[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)N[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(=C1)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O)[C@H]1O)N[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)C(CO)=C1)O)C)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O PYVAAPGPTLLDGV-AGKSRYJLSA-N 0.000 claims description 36
- PYVAAPGPTLLDGV-UHFFFAOYSA-N Trestatin A Natural products OC1C(O)C(NC2C(C(O)C(O)C(CO)=C2)O)C(C)OC1OC(C(C1O)O)C(CO)OC1OC(C(=C1)CO)C(O)C(O)C1NC(C(C1O)O)C(C)OC1OC(C(C1O)O)C(CO)OC1OC(C(C1O)O)C(CO)OC1OC(C(C1O)O)C(CO)OC1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O PYVAAPGPTLLDGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 16
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 2
- 150000002336 glycosamine derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 24
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 13
- 229910001868 water Inorganic materials 0.000 description 13
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 12
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 10
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 9
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O ammonium group Chemical group [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 8
- 239000003392 amylase inhibitor Substances 0.000 description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- 239000002585 base Substances 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 6
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 6
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 5
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 5
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 5
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 4
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 4
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 101710128742 Cytochrome b6-f complex iron-sulfur subunit 2 Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 4
- 229940122816 Amylase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010060378 Hyperinsulinaemia Diseases 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 241000218589 Streptomyces olivaceus Species 0.000 description 3
- 241000187412 Streptomyces plicatus Species 0.000 description 3
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 3
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBBDOOHMGLLEGJ-UHFFFAOYSA-N methane;hydrochloride Chemical compound C.Cl FBBDOOHMGLLEGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930192475 Amylostatin Natural products 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- BGMYHTUCJVZIRP-UHFFFAOYSA-N Nojirimycin Natural products OCC1NC(O)C(O)C(O)C1O BGMYHTUCJVZIRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 2
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 2
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000035879 hyperinsulinaemia Effects 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 2
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- BGMYHTUCJVZIRP-GASJEMHNSA-N nojirimycin Chemical compound OC[C@H]1NC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O BGMYHTUCJVZIRP-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,4-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1O WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical group CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical group CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241000203809 Actinomycetales Species 0.000 description 1
- -1 Amino sugar compounds Chemical class 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000775660 Anarhichas lupus Type-3 ice-structuring protein 1.5 Proteins 0.000 description 1
- 101000775628 Anarhichas lupus Type-3 ice-structuring protein 1.9 Proteins 0.000 description 1
- FIHZWZBEAXASKA-UHFFFAOYSA-N Anthron Natural products COc1cc2Cc3cc(C)cc(O)c3C(=O)c2c(O)c1C=CC(C)C FIHZWZBEAXASKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical class [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710128746 Cytochrome b6-f complex iron-sulfur subunit 1 Proteins 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical class [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000544912 Melanoides Species 0.000 description 1
- ZZIKIHCNFWXKDY-UHFFFAOYSA-N Myriocin Natural products CCCCCCC(=O)CCCCCCC=CCC(O)C(O)C(N)(CO)C(O)=O ZZIKIHCNFWXKDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000643905 Nostoc sp. (strain PCC 7120 / SAG 25.82 / UTEX 2576) Cytochrome b6-f complex iron-sulfur subunit 3 Proteins 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000001746 Pancreatic alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010029785 Pancreatic alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 101710184309 Probable sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 description 1
- 101000775697 Pseudopleuronectes americanus Ice-structuring protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000509474 Streptomyces flavovirens Species 0.000 description 1
- 102400000472 Sucrase Human genes 0.000 description 1
- 101710112652 Sucrose-6-phosphate hydrolase Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical class [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000002814 agar dilution Methods 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000025938 carbohydrate utilization Effects 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Chemical class 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000000081 effect on glucose Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003451 hyperinsulinaemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008980 hyperinsulinism Diseases 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N keto-D-fructose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO BJHIKXHVCXFQLS-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000004132 lipogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Chemical class 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000019631 mycelium development Effects 0.000 description 1
- ZZIKIHCNFWXKDY-GNTQXERDSA-N myriocin Chemical compound CCCCCCC(=O)CCCCCC\C=C\C[C@@H](O)[C@H](O)[C@@](N)(CO)C(O)=O ZZIKIHCNFWXKDY-GNTQXERDSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 238000002103 osmometry Methods 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000013573 potato product Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 1
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/22—Cyclohexane rings, substituted by nitrogen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører fremgangsmåte for fremstilling av aminosukkerderivatene trestatin A, trestatin B og trestatin C„ med formel
hvor n er 1, 2 eller 3,.
deres salter og blandinger derav.
Trestatin A, trestatin B og trestatin C er basiske hvite pulvere med folgende fysikalskkjemiske egenskaper:
a) Elementær-analyse:
b) Molekyl vekt (osmometri) : c) Smeltepunkt: d) Spesifikk dreining: e) Ultrafiolett-absorpsjonsspektrum (i vann): Trestatin A, trestatin B og trestatin C viser ende-absorpsjon. f) Infrarodt-absorpsjonsspektrum (i KBr): g) "Hi NMR-spektrum (i D20 ved 100 MHz): h) Loselighet i løsningsmidler: Trestatin A, trestatin B og trestatin C og deres hydroklorider er lett loselig i vann, loselig i dimetylsulfoksyd, svaktlose-lig i etanol og aceton og ulbselig i etylacetat og kloroform,
i) Fargereaksjon:
Trestatin A, trestatin B og trestatin C gir en positiv perman-ganat og Anthron-reaksjon og en negativ Sakaguchi-reaksjon.
De nye trestatiner, d.\£.s. trestatin A, trestatin B og
trestatin C fremstilles ifolge oppfinnelsen ved at man dyrker Streptomyces dimorphogenes ATCC 31.484 eller ATCC 31.485 under aerobe betingelser i vandig medium, adskiller trestatinene fra dyrkingsvæsker og om ønsket skiller trestatin A, trestatin B og trestatin C fra hverandre, og om ønsket isolerer dem i form av salter derav. Stammene Streptomyces dimorphogenes NR-320-OM7HB og Streptomyces dimorphogenes NR-320-0M7HBS ble isolert frå
en jordprøve fra Chichibu-shi, Saitama-ken, Jaoan
Stammene NR-320-OM7HB og Streptomyces dimorphogenes NR-320-0M7HBS ble deponert ved Agency of Industrial Science and Technology, Fermentations Research Institute, Japan under betegnelsen "FERM-P No. 3664" hhv. "FERM-P No. 3665".
Stammene ble videre deponert ved American Type Culture Col-lection (ATCC) Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852
(USA) som folger:
og har de folgende mykologiske karakteristika: t
I. Morfologi
Mikroskopisk utviklet FERM-P No. 3664 overveiende rett og sjelden spiralformig luftmycel med 10-50 sporer pr. kjede av godt forgrenet mycel på forskjellige ISP-medier. Sporene har en glatt overflate og de er fra 0,6-1,0 x 0,8-1,4 u store. Forgreninger i spiralformig mycel eller sporangium-dannelse ble ikke konstatert. Videre observerte man ved luftmycelets morfologi en liten populasjon (mindre enn 1%) med spiralformig luftmycel, som opptrådte som klaser inne i en dominerende
o
populasjon med rett sporékjede. Ved enkel ti soler ing av den ^piralformede koloni viste det seg at klonet bibeholdt sin morfologi av spiralformig luftmycel gjennom generasjoner, idet stadig en liten del (0,7-2%) rett luftmycel ble produsert som kvaster eller kolonier. Disse underarter som erholdes ved enkeltisolering av de spiralformige kolonier av stammen FERM-P 3664 betegnes som FERM-P 3665. En tydelig fordel i karakteristika av FERM-P 3664 og FERM-P 3665 ble ikke konstatert bortsett fra morfologien hos de forskjellige luftmyceler.
II. Dyrkningskarakteristika
Stammen FERM-P 3664 og FERM-P 3665 har de samme, i tabell I oppforte dyrkningskarakteristika. Alle forsok ble.utfort med kulturer som hadde vokst ved 27°C med unntagelse av magermelkforsoket som ble utfort ved 37°C. Fargebestemmelser ble utfort med 14-21 dager gamle kulturer ifolge Color Harmony.Manual, 4th ed. 1958 (Container Cooperation of America, Chicago).
III. Fysiologiske egenskaper
Ingen tydelig forskjell ble konstatert i de etterfølgende karakteristika mellom stammene FERM-P nr. 3664 og 3665.
1) Temperaturområde for vekst
På ISP-2-medium ble middels til rikelig vekst observert ved 20°, 25°, 27°, 30°, 37° og 45°C, dog ikke ved 6°C og 55°C. Optimal veksttemperatur viste seg å være ca.,37°C.. 2) Gelatinsmelting på glukose-pepton-gelatin-agar ved 27°C.
En smelting av middels styrke inntrådte rundt 12. dag.
3) Stivelseshydrolyse på uorganisk salt-stivelse-agar ved 27°C.
Det inntraff en hydrolyse av middels intensitet.
4) Koagulering og; peptonisering i 10% magermelkmedium ved 3 7°C.
En peptonisering av sterk intensitet ble observert rundt
5. dag. Koagulasjonen var negativ.
5) Kaseinhydrolyse på 10% magermelk-næringsagar ved 27°C.
Det ble observert en hydrolyse av middels til sterk intensitet.
6) Nitratreduksjon på ISP-8-medium ved 27°C.
Negativ.
7) Melanindannelse ved 27°C.
På pepton-gjær-jernagar (ISP-6) dannes intet pigment.
Pigmentdannelsen ble også på trypton-gjærmedium (ISP-1) og tyrosin-agar (ISP-7) funnet negativ.
8) Karbohydratutnyttelse på Pridham-Gottlieb-Agar-medium (ISP-9) ved 27°C
Rikelig vekst ble observert med L-Arabinose, D-xylose, D-glukose, D-fruktose, sukrose, inositol, raffinose, D-mannitol og L-rhamnose.
Sammenfattet kan de ovenfor nevnte mikrobiologiske egenskaper av stammen FERM-P nr. 3664 og 3665 beskrives som folger: Stammene er Actinomycetales og tilhorer familien Streptomyces. Luftmycelets form er rett og spiralformet (overveiende rett hos NR-320-OM7HB og overveiende spiralformet ved NR-320-OM7HBS) . Virveldannelse ble ikke funnet. Sporene av begge stammer er glatte på overflaten og 0,6-1,0 x 0,8-1,4 u store. Stammene utvikler på forskjellige ISP medier lyse-grå til lysebrun-grå luftmyceler fra lysegul-brun til gul-brun vekst med brunaktig loselig pigment. Melanoid pigment ble ikke dannet på pepton-gjær-jern-agar og sann-synligvis ikke på trypton-gjærbrygg og tyrosin-agar. Stammene peptoniserte sterkt magermelk. Gelatinsmeltingen var svak, mens stivelseshydrolyse opptrådte i middels grad.
I alle som ovenfor utforte forsok viste det seg ingen forskjell mellom NR-320-OM7HBS og NR-320-OM7HB.
Disse karakteristika gjor det nærliggende at stammene ligner S. nigrifaciens [Waksman, S.A. (1961) Ciassification, identification and description of genera and species, The Actinomycetes Vol. 2, The Williams and Wilkins Co., Baltimore. Shirling, E.B. & D. Gottlieb (1968) Cooperative description of type culture of Streptomyces, II. Species descriptions from the first study, Inst. J. Syst. Bacteriol., 18:69-189. Buchanan, R.E. & N.E. Gibbons (1974) Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8th ed., The Williams' and Wilkins
Co., Baltimore. Waksman, S.A. (1919) Cultural studies
of species of Actinomyces, Soil Sei., 8:167-171.], S. olivaceus [Waksman, S.A. (1961) Classification, identification and description of genera and species. The Actinomycetes Vol. 2, The Williams and Wilkins Co., Baltimore. Shirling, E.B. & D. Gottlieb (1968) Cooperative description of type culture of Streptomyces, II. Species descriptions from the first study, Inst. J. Syst. Bacteriol., 18:69-189. Buchanan, R.E. & N.E. Gibbons (1974) Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8th ed., The Williams and Wilkins Co., Baltimore. Waksman,
S.A. (1919) Cultural studies of species of Actinomyces,
Soil Sei., 8:167-171. Breed, R.S., E.G.D. Murray & N.R. Smith
(1957) Bergey1s Manual of Determinative Bacteriology, 7th ed., The Williams and Wilkins Co., Baltimore] and S. plicatus [Buchanan, R.E. & N.E. Gibbons (1974) Bergey"s Manual of Determinative Bacteriology, 8th ed., The Williams and Wilkins Co., Baltimore. Shirling, E.B. & D. Gottlieb (1969) Cooperative description of type culture of Streptomyces, IV. Species descriptions from the second, third and fourth studies, Inst. J. Syst. Bacteriol., 19:391-512. Parke, Davis and Co.
(1954) Antibiotics and methods for obtained same, British Pat. Specification 707, 332 April 14, Pat. Office, London]. Sammenligningen av de' foreliggende stammenemed ISP-stammene fremgår av tabell II.. Det viste seg at de to stammene, nemlig NR-320-OM7HB og NR-320-OM6HBS er forskjellige fra hver av disse tre foran nevnte nær beslektede arter.
I sammenligning med S. nigrifacies adskiller NR-320-OM7HB
seg fra forstnevnte ved peptoniseringen av magermélk og ved utnyttelse av sukrose, inositol og raffinose. Morfologisk dannet S. nigrifacies aldri spiraler. Disse fakta sammen med produksjonen av et olivengrått luftmycel, gronn-gult substratmycel på ISP-3-medium og manglende evne til inhibe-ringsproduksjon gjor det usannsynlig at begge stammene danner en identisk art.
På den annen side forekommer sporekjedene av S. plicatus ISP 5319 hovedsakelig i spiralform på ISP-2-, 3-, 4- og 5-medier.
Selv om slyngeformet luftmycel ble funnet mindre hyppig,
så man ingen rett form hos ISP 5319 som adskiller S. plicatus fra NR-320-OM7HB. Videre ble grunnleggende forskjeller funnet i utbredelsen av luftmycelet, pigmenteringen, koagu-leringen, gelatinsmeltingen og anvendelsen av sukrose og raffinose.
Blant de tre undersokte arter viste S. olivaceus seg nærmest beslektet med NR-320-OM7HB. Således viste S. olivaceus ISP 5072 spiralforming i de fleste deler på ISP-2-, 3-, 4- og 5-medier, delvis med slyngeformet-rette sporekjeder på luftmycelet. Den adskiller seg dog både fra NR-320-OM7HB og fra NR-320-OM7HBS ved at spiralformede, slyngeformede og rette sporekjeder eksisterer innenfor, en klase av luftmycel ved siden av hverandre, hvilket aldri ble observert ved NR-320-0M7HB og NR-320-OM7HBS. Mellom ISP 5072 og NR-320-OM7HB ble videre forskjeller observert i produksjonen av loselig pigment (ingen pigmentering ved ISP 5072 på ISP-2-, 3-, 4- og 5-medier), utvikling av luftmycel (tynt luftmycel ved ISP 5072), utnyttelse av karbonkilder (sukrose/raffinose) og produksjon av oc-amylase-inhibitor (ingen hemning gjennom ISP 5072-metabolitter); Alle disse resultater viste at NR-320-OM7HB og også NR-320-OM7HBS synes å være nær beslektet, men ikke identisk med arten S. olivaceus ISP 5072.
Det synes derfor berettiget å betrakte denne taksinomiske gruppe som en ny art av slekten Streptomyces og disse arter betegnes her som Streptomyces dimorphogenes nov. sp. WATANABE og MARUYAMA, 1978. Typestammen av S. dimorphogenes er NR-320-OM7HB (FERM-P nr. 3664). Etymologien: di (dual), (Gr.), morphe' (Form) + Genesis, basert på at det foreligger to former i sporekjedenes morfologi, d.v.s. den stedvise fordeling av spiralkjedeformede kvaster som minoritet.
En biotype, NR-320-OM7HBS (FERM-P nr. 3665) er dominant i den spiralformede sporekjeden med delvis fordeling av rette sporekjeder som mindre klaser ville da hensiktsmessig måtte betegnes som S. dimorphogenes subsp. spiroformatus i betrakt-ning av luftmycelets morfologi. Typestammen FERM-P nr. 3664 skulle da tilsvarende betegnes som S. dimorphogenes subsp. dimorphogenes.
Trestatinene kan ifolge oppfinnelsen erholdes ved at man dyrker en trestatin-produserende mikroorganisme av slekten Streptomyces, f.eks. Streptomyces dimorphogenes sp. nov., Watanabe & Maruyama (NR-320-OM7HB FERM-P nr. 3664) eller Streptomyces dimphorphenes subsp. spiroformatus (NR-320-OM7HBS, FERM-P nr. 3665) under aerobe betingelser i et vandig medium.
Dyrkingen kan utfores i et dyrkningsmedium som inneholder de vanlige næringsstoffer som disse mikroorganismene kan utnytte. Karbonkilder er f.eks. stivelse, dextrin, glukose, glyserol, sukrose, trehalose, melasse eller blandinger derav; nitro-genkilder er f.eks. soyabonnepulver, kjottekstrakt, pepton, gjærekstrakt, maissvellevann, ammoniumsulfat, natriumnitrat, ammoniumklorid eller blandinger derav. Kulturmediet kan om nodvendig inneholde uorganiske substanser som kalsiumkarbonat, natriumklorid og/eller salter av sink, kopper, mangan eller jern. Ytterligere kan et antiskummiddel som silikon eller vegetative oljer tilsettes for å forhindre en skumning under dyrkningen.
Dyrkningen kan foretas under aerobe betingelser i et vandig medium, spesielt ved dypkulturfermentering. Mediets pH
ved begynnelsen av dyrkningen er ca. 7. Den foretrukne tem-peratur ligger i området fra 20 - 40°, spesielt fra 25 -
30°C.
Etter dyrkning i 1 - 5 dager under de ovenfornevnte betingelser kan trestatinene erholdes fra fermentatet. Dyrkningen avbrytes med fordel på den tid ved hvilken trestatinenes storste virksomhet er nådd. Mengden av de erholdte trestatiner kan bestemmes ved den folgende metodei
Bestemmelse av trestatiner
Trestatinene viser en sterk hemningsvirkning på oc-amylase.
De kan folgelig bestemmes ved hjelp av en metode som anvender cc-amylase-testen til P. Bernfeld (Methods in Enzymology, I, 149, 1955).
To enheter (en enhet oc-amylase er den enzymmengde som under
de etterfølgende betingelser uten trestatin katalyserer dannel-sen av sukkeret som skal reduseres i en mengde ekvivalent med 1 u mol maltose) svinepankreas-oc-amylase i 0,1 ml 6,4 mM ammoniumsulfatlosning settes til 0,6 ml 20 mM fosfatpuffer (pH 6,9) som inneholder 10 mM natriumklorid og forskjellige mengder trestatin. Blandingen inkuberes etter 5 min. ekvili-brering ved 37°C etterfulgt av en tilsetning av 0,5 ml 4%'ig stivelseslosning 5 min. ved 3 7°C. Reaksjonen avsluttes ved tilsetning av 2 ml dinitrosalicylsyrereagens (fremstilt ifolge P. Bernfeld). Blandingen oppvarmes 5 min. på det kokende vannbadet og fortynnes så med 10 ml vann. Absorpsjonen (A^) av den erholdte fargede løsning måles ved 540 nm, hvoretter aktiviteten av oc-amylasehemningen kan beregnes ved den folgende ligning:
Aq Absorpsjon uten enzym
A£ Absorpsjon uten trestatin
Hemningsenheten (IU) defineres som den mengde trestatin som under de ovenfor beskrevne forsøksbetingelser forårsaker en 50%'ig enzymhemning.
Etter fermenteringen kan isoleringen av de fremstilte trestatiner fra fermentatløsningen oppnås med i og for seg kjente metoder, f.eks. på fblgende vis: Mycelet fraskilles ved sentrifugering eller filtrering. Trestatinene er vannloselige, svakt basiske forbindelser. Som folge av dette kan konvensjonelle metoder anvendes for isolering og rensning av trestatinene, som anvendes for isolering og rensning av en vann-loselig basisk substans. F.eks. kan dette.oppnås ved adsorp-sjonsmetoder med et absorpsjonsmiddel som aktivt karbon eller kationbytterharpikser, eller fellingsmetoder med et løsningsmiddel som en alkohol eller aceton, eller kromatogra-fiske metoder under anvendelse av cellulose eller sephadex eller med kombinasjoner av de foran nevnte metoder.
Isoleringen av trestatin A, trestatin B og trestatin C som enkeltforbindelser fra fermenteringsfiltratet kan hensiktsmessig utfores ved soylekromatografi under anvendelse av en blanding av H-formen og ammoniumformen av en svakt sur kationbytterharpiks. En fordelaktig metode er den folgende: pH i fermenteringsfiltratet innstilles med alkali som natriumhydroksyd, kaliumhydroksyd, natriumkarbonat eller kalium-karbonat på pH 7. Filtratet blandes som aktivt karbon og lbsningen filtreres. Trestatinene elueres fra karbonet med 30 - 70%, fortrinnsvis 50%'ig vandig aceton. Elueringsmidlet innstilles fortrinnsvis med en syre på pH 1-3 og elueringen utfores ved 50 - 70°C. Eluatet konsentreres og konsentratet sendes gjennom en kationbytterharpiks-soyle som Dowex 50 (H-form). Soylen vaskes med vann og elueres med IN vandig ammoniakk. Fraksjonene med amylase-hemmeaktivitet oppsamles, konsentreres under redusert trykk og lyofiliseres, hvorved et pulverformig råprodukt som inneholder trestatinene erholdes. Råproduktet behandles med metanol for å fjerne metanolloselige forurensninger. Trestatinene er nesten ulb-selige i metanol. Den metanol-uloselige resten med trestatinene loses i vann. Lbsningen sendes gjennom en anionbytter-harpiks-soyle som Dowex 1 (acetat-form). Soylen utvikles med vann og eluatet fraksjoneres. De aktive fraksjonene oppsamles, konsentreres under redusert trykk og settes på en kationbytterharpikssbyle som Dowex 50 (ammonium-form).
Soylen elueres med vann. Fraksjonene med amylase-hemnings-aktivitet oppsamles, konsentreres og lyofiliseres, hvorved et pulver erholdes som ved hbytrykksvæske-kromatografi viser at det hovedsakelig består av trestatin A, trestatin B og trestatin C. De vandige lbsningene av de nevnte trestatiner sendes gjennom en kationbytterharpikssbyle som Amberlit CG 50 (blanding av H-formen og ammonium-formen). Det foretrukne forhold av H-form til ammonium-form ligger i området fra 1:9 - 9:1 (volumdeler). Soylen elueres med vann, hvorved trestatin B, trestatin A og trestatin C erholdes i den angitte rekkefolge. Hvert således erholdte trestatin rekromatogra-feres, hvorved de rene trestatiner A, B og C erholdes. Disse trestatiner kan om onsket overfores i forskjellige salter som hydrokloridene, sulfatene, fosfatene, acetatene, oksalatene.
Smeltepunkt av hydrokloridene:
Trestatin A-hydroklorid:
163 - 190°C (Opplosning under skumhing)
Trestatin B-hydroklorid:
158 - 186°C (Opplosning under skuirning)
Trestatin C-hydroklorid:
190 - 200°C (Opplosning under skuming)
Spesifikk dreining av hydrokloridet:
Trestatin A-hydroklorid:
[<x]£<5> = +162,5° (c = 1,0, 0,01N HC1)
Trestatin B-hydroklorid:
[a]J° = +169° (c = 1,0, 0,01N HC1)
Trestatin C-hydroklorid:
[ct]J<5> = +160,5° (c = 1,0, 0,01N HC1)
Titrering (i vann):
Disse data i forbindelse med den ovenfor angitte molekylvekt viser at trestatin A, B og C er tosyrige, ensyrige hhv. tres.yr.ige baser.
Summeformel:
Kjerneresonansspektrene (i B^ O ved lOO MHz) av trestatinene A, B og C som frie baser ble opptatt med et JEOL FX-100 spektrometer med "homo gated decoupling" (innstråling ved 6 4,71 ppm) under anvendelse av DSS som intern standard og er angitt i fig. 4, 5 og 6.
Tynnsjiktskromatografi:
Under de ovenfor beskrevne betingelser er Rf-verdiene for trestatinene A, B og C 0,19, 0,28 hhv. 0,14.
Hoytrykkvæske-kroma togra f i:
Under de ovenfor beskrevne betingelser utgjor retensjons-tidene til trestatinene A, B og C 5,5, 3,4 hhv. 8,8 min.. Kromatogrammene befinner seg i fig. 7.
Papirelektroforese:
Under de ovenfor beskrevne betingelser vandrer alle trestatiner mot katoden: trestatin A: 12 cm, trestatin B: 9 cm, trestatin C: 13 cm.
Struktur:
Ved hydrolyse med 4N saltsyre ved 80°C i 3 timer gir trestatinene A, B og C glukose og et amin. Aminet har en pKa<1> på 3,9 og summef ormel ci3<H>2lN07' nvilfcet fremgår av "high resolution" massespektrum. Trestatinene A, B og C inneholder 5, 4 og 6 mol glukose. Mild syrehydrolyse (80°C, 4 timer) med Dowex 50 (H-form som katalysator gir trehalose («c-D-gluko-pyranosyl-a-D<-glukopyranosid) . Ingen av trestatinene A, B
og C inneholder aminosyrer.
Ut fra de ovenfor nevnte egenskaper folger at forbindelsene ifolge oppfinnelsen trestatin A, B og C er svakt basiske amirtoglukosider med trehalose som felles strukturelt element.
Trestatin A, trestatin B og trestatin C har en hoy amylase-hemningsaktivitet, som påvises i det folgende, og kan anvendes som amylase-hemmere.
Konvensjonelle amylase-hemmere som tilveiebringes på fer-mentativ måte er de folgende: 1) Nojirimycin, Niwa et al. (Agr. Biol. Chem., 34, 966, 1970)
Nojirimycin er et monosaccharid og som folge derav entydig forskjellig fra trestatinene ifolge oppfinnelsen.
2) Peptidsukker, S. Ueda et al. (Agr. Biol. Chem., 37, 2025, 1973 og Agr. Biol. Chem., 40, 1167, 1976)
Peptidsukkeret inneholder aminosyrer som strukturelt element.
3) Amylostatin A, S. Murao et al. (Japanese patent appli-" cation, Kokai 123891/1975)
I nevnte patentansokning beskrives at amylostatin A ikke absorberes av sterkt sure kationbytterharpikser i området pH 1-14. Som nevnt adsorberes trestatinene av en slik ionebytterharpiks.
4) Amylase-inhibitor, K. Ueda et al. (Japanese patent application, Kokai 54990/1976)
Denne amylase-hemmer har en molekylvekt på ca. 600 som
er forskjellig fra trestatinene A, B og C.
5) Aminosukker-forbindelser, W. Frommer et al. (DOS 2,347,782)
Disse forbindelser er ensyrige baser mens trestatin A er
en tosyrig base og trestatin C en tresyrig base. Trestatin B har til tross for at den er en ensyrig base trehalose som struktur-element og er dermed forskjellig fra amino-sukrene til Frommer et al.
Amylase-hemmer med trehalose-elementer er hittil ikke beskrevet.
De biologiske egenskapene til trestatinene og deres salter er de folgende:
1) Akutt toksisitet:
En akutt toksisitet påvises ikke selv ved 5Q0 mg/kg trestatin A, B og C oralt hos rotter ved fSring (det er 65-700-ganger den virksomme dose). En trestatin-blanding tilsvarende pre-paratet som i eksempel 1 betegnes som trinn III-pulver tåles godt i daglige doser opptil 8000 mg/kg i 10 dager av mus og rotter.
2) Antimikrobielt spektrum:
Mangel på antimikrobiell virkning hos trestatin A, B og C bestemt ved hjelp av en agar-fortynningsmetode fremgår av den folgende tabell:
3) Amylase-hemningsvirkning:
Hemningsvirkningen på svinepankreas oc-amylase av trestatin A, B og C, deres salter og blandinger derav er beskrevet i det etterfolgende. Aktivitetene ble bestemt ved den ovenfor nevnte metode.
Trestatinene kan også hemme oc-amylase fra Bacillus subtilis og Aspergillus oryzae og amylo-a-1,4-a-l,6-glukosidase fra Aspergillus niger. Da har dog ingen hemningsvirkning på
(3-amylase fra sote poteter.
Fordoyelsen av stivelse, hovedkarbohydratet i humane næringsmidler, begynner mad virkningen av oc-amylase. Dette enzymet befinner seg i spyttet og i pankreassekretet. Pankreasamylasen er hovedsakelig ansvarlig for fullstendig fordoyelse av stivelse i Gastro-intestinal-trakten. Den katalyserer oppspaltningen av karbohydratpolymeren som derpå resulterer i maltose som igjen gjennom intestinale disaccharider hydrolyseres til glukose. Folgelig observeres kort etter et måltid av stivelses-holdige næringsmidler en utpreget hyperglycemi som forer til en hyperinsulinemi.
Som kjent er denne hyperglycemi meget utpreget og hoyst uons-ket hos diabetikere. Hos overvektige mennesker er denne hyperglycemi ofte fulgt av en oket insulinsekresjon som kan fore til utmattelse av (3-cellene i pankreas. Dertil beguns-tiger en hyperinsulinemi lipogenesen som bidrar til hyperlipidemi.
Trestatin A, B og C og preparater som inneholder ett eller flere av disse trestatiner, kan nedsette post-prandial hyperglycemi og hyperinsulinemi, som det viser seg ved eksperi-menter på rotter og mus etter stivelsesbelastning (side 22
og tabell 1) eller etter administrering av for (tabell 2).
Reduksjonen av hyperglycemi som induseres gjennom oral sukrosetilforsel (tabell 1) viser ved siden av hemning av oc-amylasen en viss sukrase-hemning. Det utoves ingen virkning på glukose-indusert hyperglycemi.
Trestatinene fremstilt ifølge oppfinnelsen er følgelig verdifulle ved behandling av diabetikere, fedme, hyperlipidemi og atheroscle-rose.
Da a-amylase i spytt kan bidra til karies gjennom fordoyel-
sen av stivelse, kan trestatinene også anvendes for å forhindre eller nedsette utvikling av karies.
Trestatinene og deres salter ifblge oppfinnelsen kan anvendes som medikamenter f.eks. i form av farmasøytiske preparater, som inneholder dem i blanding med et for enteral anvendelse egnet organisk eller uorganisk inert bæremateriale som f.eks. vann, gelatin, gummi arabikum, laktose, stivelse, magnesium-stearat, talkum, vegetabilskeoljer og polyalkylenglykoler.
De farmasøytiske preparatene kan foreligge i fast form f.eks. som tabletter, drageer eller kapsler eller i flytende form f.eks. som ldsninger eller suspensjoner.
En doseringsenhet kan inneholde 20-50 mg virkestoff. Den daglige dosering på voksne kan bevege seg mellom 10 og 200 mg og må varieres som folge av de individuelle behov.
Trestatinene og deres salter kan også anvendes som tilsetning til næringsmidler og diétpreparater som sukker, frukt-saft, sjokolade, marmelade, potetprodukter og brod. For-målstjenelig inneholder slike næringsmidler eller preparater 0,1 til 1 vekt-% av trestatinene ifolge oppfinnelsen.
De folgende eksempler belyser oppfinnelsen ytterligere.
Eksempel 1
I Fermentering
Et vekstmedium ble fremstilt av folgende bestanddeler:
pH i ovennevnte losning ble innstilt ved tilsetning av 6N natriumhydroksyd til 6, deretter ble 3,2 g kalsiumkarbonat og 20 g soyabonnemel tilsatt og næringsløsningen ble damp-sterilisert 20 min. ved 120°C.
Sporer av en skråagarkultur av Streptomyces dimorphogenes sp. NR-320-OM7HB (FERM-P nr. 3664) ble podet i 10 500 ml Erlenmeyer-kolber som hver inneholdt 110 ml sterilisert medium. Kolbene ble satt på en roterende rystemaskin med et omdreiningstall på 185/min. og rystet 72 timer ved 27°C. Deretter ble kulturene anvendt for poding av en 50 1 fer-menteringsbeholder som inneholdt 25 1 av det samme mediet. Fermenteringssyklusen utgjorde ca. 43 timer, hvorunder temperaturen ble holdt på 27°C og filtrert luft ble til-fort med en hastighet på 25 l/min.. Rystehastigheten var 300 bevegelser/min.. Et typisk trestatin-fermentat (pH 6,9)
4
hadde en aktivitet på 3,1 x 10 IU/ml.
II I solering
1) Karbonadsorpsj on:
Fermentatet som ble erholdt fra den ovenfor beskrevne trestatin-fermentering ble innstilt på pH 7,0 med 5N natriumhydroksyd
og deretter filtrert. Filtratet (19 1, 3,1 x 10 4 IU/ml,
5,9 x IO<8> IU/totalt) ble blandet med 380 g aktivt karbon og blandingen rort 20 min. ved romtemperatur og deretter filtrert. Karbonkaken ble vasket med 4 1 springvann og oppslemmet i 10 1 varm 50%'ig vandig aceton. Suspensjonen ble stilt på pH 2 ved tilsetning av 6N HC1, holdt 20 min. under roring ved 60°C, hvorved blandingen ved leilighetsvis tilsetning av 6N HC1 ble holdt på pH 2. Blandingen ble så filtrert og karbonkaken igjen behandlet med ytterligere 10 1 50%'ig vandig aceton på samme måte. De samlede filtrater ble stilt
på pH 7 og tilsetning av 6N NaOH og små mengder felling ble frafiltrert. Filtratet (5,6 x IO<8> IU/totalt) ble konsen-
trert under redusert trykk til ca. 3 1. En del av konsentratet ble lyofilisert og ga et rått trestatin-kompleks som morkebrunt pulver (3,2 x 10^ IU/g), som her betegnes som trinn I-pulver.
2) Dovex 50 adsorpsjon:
Konsentratet (ca. 3 1, 5,6 x 10 8 IU/total) ble satt på o en
sbyle (80 x 7,5 cm) av Dowex 50 (H-form, 3,5 1 20-50 mesh)
med en hastighet av ca. 10 ml/min.. Soylen ble vasket med 10,5 1 deionisert vann, eluert med IN ammoniakk og fraksjonert. Fraksjonene som inneholdt mer enn 3 x 10 IU/ml trestatin ble slått sammen, konsentrert under redusert trykk og lyofilisert og ga 75,4 g brunt pulver (7,0 x IO<6>
IU/g, 5,3 x 10 8 IU/total), som i det folgende betegnes som trinn II-pulver.
3) Metanol- behandling:
75,4 g trinn II-pulver ble oppslemmet i 3,770 ml metanol og rort 2 timer ved romtemperatur. Den uloselige delen ble
filtrert, vasket med litt metanol, torket og ga 41,5 g brunt pulver (1,1 x IO<7> IU/g, 4,6 x IO<8> IU/total), i det folgende kalt trinn III-pulver. 4) Dowex 1- kromatografi; 41.5 g trinn III-pulver ble opplost i 100 ml deionisert vann. Lbsningen ble satt på en sbyle (87 x 5,5 cm) av Dowex 1 (acetat-form, 2,050 ml, 200-400 mesh). Soylen ble utviklet med deionisert vann med en hastighet på 2,5 ml/min. og eluatet fraksjonert i 17 ml fraksjoner. De aktive fraksjonene 35-70 ble slått sammen, konsentrert, inndampet under redusert trykk og lyofilisert og ga 22,6 g av et gult pulver (1,8 x 10<7 >IU/g, 4,1 x 10 Q IU/total) i det folgende kalt trinn IV-pulver. 5) Dowex 50- kromatografi;
22.6 g trinn IV-pulver ble opplost i 50 ml deionisert vann og lbsningen satt på en sbyle (85 x 6,6 cm) av Dowex 50 (ammonium-form, 2,900 ml, 200-400 mesh). Soylen ble eluert med deionisert vann (2,5 ml/min.) og eluatet samlet i 17 ml fraksjoner. De aktive fraksjoner 65-89 ble slått sammen, konsentrert og lyofilisert og ga 10,6 g trestatin-kompleks som lysegult pulver (3,6 x 10 7 IU/g, 3,8 x 10 8 IU/total),
i det folgende kalt trinn V-pulver.
III Adskillelse av trestatin-komplekset i trestatin A, B
og C
10,6 g trinn V-pulver ble lost i 20 ml destillert vann og lbsningen satt på en sbyle (78 x 4,8 cm) av Amberlit CG 50 (blandingsbed bestående av 3,5 deler ammonium-form og 6,5 deler H-form, 1,420 ml, type I). Soylen ble eluert med destillert vann med 2,0 ml/min. og eluatet samlet i 14 ml fraksjoner. De aktive fraksjoner ble underkastet hbytrykks-væskekromatografi under de etterfølgende betingelser: Soyle: u Bondapak/karbohydrat
(1/4" x 1', Waters Associate)
Bærer: CH3CN:H20 (63:37)
Gjennomlopshastighet: 4,0 ml/min.
Injeksjonsvolum: 2-10 ul
Påvisning: Ultrafiolett absorpsjon ved 210 nm
De tilsvarende fraksjoner ble renset, konsentrert og lyofilisert. Resultatene er angitt i det folgende:
IV Fremstilling av trestatin A
Et rent trestatin A-preparat ble fremstilt ved rekromato-grafering på Amberlit CG 50. 1,17 g av trestatin A som ble erholdt ifdlge avsnitt III ble lost i 4 ml destillert vann og satt på en soyle (133 x 1,7 cm) av Amberlit CG 50 (blandingsbed bestående av 8 deler H-form og 2 deler ammonium-form, .300 ml, type II). Soylen ble eluert med destillert vann og eluatet samlet i 7 ml fraksjoner, idet de enkelte fraksjonene ble kontrollert som ovenfor beskrevet ved hoy-trykksvæskekromatografi. Fraksjonene 245-465 inneholdt trestatin A og ble slått sammen, konsentrert og lyofilisert og ga 649 mg trestatin A som hvitt pulver med de ovenfor angitte egenskaper.
V Fremstilling av trestatin B
Et rent trestatin B-preparat ble erholdt ved rekromatografi på Amberlit CG 50. 450 mg av trestatin B erholdt ifolge avsnitt III ble opplost i 2 ml destillert vann og satt på
en soyle (122 x 1,7 cm) av Amberlit CG 50 (blandingsbad, bestående av 8 deler H-form og 2 deler ammonium-form, 280 ml, type II). Soylen ble eluert med destillert vann og eluatet samlet i 3 ml-fraksjoner og kontrollert ved hbytrykksvæske-kromatografi som ovenfor beskrevet. Fraksjonene 121-129 inneholdt trestatin B og ble slått sammen, konsentrert og lyofilisert. Man fikk 170 mg trestatin B som hvitt pulver med de ovenfor angitte egenskaper.
VI Fremstilling av trestatin C
Et rent trestatin C-preparat ble erholdt ved rekromatografi på Amberlit CG 50. 720 mg trestatin C erholdt ifolge avsnitt III ble lost i 3 ml destillert vann og satt på en soyle (133 x 1,7 cm) av Amberlit CG 50 (blandingsbed bestående av 6,2 deler H-form og 3,8 deler ammonium-form, 300 ml,
type II). Soylen ble eluert med destillert vann og eluatet samlet i 6 ml-fraksjoner og overvåket ved hbytrykksvæske-kromatografi som ovenfor beskrevet. Fraksjonene 42-59 inneholdt trestatin C og. ble slått sammen, konsentrert og lyofilisert. Man fikk 515 mg trestatin C som hvitt pulver med de ovenfor beskrevne egenskaper.
Eksempel 2
Fremstilling av trestatin A- hydroklorid
95 mg trestatin A ble opplost i 1 ml destillert vann og pH stilt på 2,0 ved tilsetning av 0,IN saltsyre. Lbsningen ble konsentrert under redusert trykk til et volum på ca.
0,5 ml. Deretter ble 6 ml etanol tilsatt og den dannede hvite felling ble samlet ved sentrifugering, vasket med 2 ml etanol og tbrket under redusert trykk. Man fikk 97 mg trestatin A-dihydroklorid som hvitt pulver.
Eksempel 3
Fremstilling av trestatin B- hydroklorid
92 mg av trestatin B erholdt ifolge eksempel 1 ble opplost i 1 ml destillert vann og losningen innstilt på pH 2,0 med 0,1N saltsyre. Losningen ble inndampet under redusert trykk til ca. 0,5 ml og blandet med 7 ml etanol. Fellingen ble sentrifugert, vasket med 2 ml etanol og torket og ga 91 mg trestatin B-monohydroklorid som hvitt pulver.
Eksempel 4
Fremstilling av trestatin C- hydroklorid
90 mg av det ifolge eksempel 1 fremstilte trestatin C ble opplost i 1 ml destillert vann og losningen innstilt på
pH 2,0 med 0,IN saltsyre. Losningen ble inndampet til 0,5 ml, blandet med 6 ml etanol, sentrifugert, fellingen vasket med 2 ml etanol og torket. Man fikk 91 mg trestatin C-trihydroklorid som hvitt pulver.
Eksempel 5
Analogt med den fremgangsmåte som er beskrevet i eksempel
1 fikk man under anvendelse av Streptomyces dimorphogenes sp. NR-320-OM7HBS (FERM-P nr. 3665) trestatin A, trestatin B og trestatin C.
Figurene 1, 2 og 3 viser infrarode-absorpsjonsspektere av trestatin A, trestatin B og trestatin C.
Figurene 4, 5 og 6 viser "'"H NMR-spektrum i D20 ved 100 MHz av trestatin A, trestatin B og trestatin C.
Fig. 7 viser hoytrykksvæskekromatogram av trestatin A, B
og C.
Claims (1)
- Fremgangsmåte ved fremstilling av aminosukkerderivatenetrestatin A, trestatin B og trestatin C, med formelhvor n er 1, 2 eller 3,deres salter og blandinger derav,karakterisert ved at man dyrker Streptomyces dimorphogenes ATCC 31.484 eller ATCC 31.485 under aerobe betingelser i vandig medium, adskiller trestatinene fra dyrkingsvæsker og om ønsket skiller trestatin A, trestatin B og trestatin C fra hverandre, og om ønsket isolerer dem i form av salter derav.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB583478 | 1978-02-14 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO790469L NO790469L (no) | 1979-08-15 |
| NO153011B true NO153011B (no) | 1985-09-23 |
| NO153011C NO153011C (no) | 1986-01-02 |
Family
ID=9803510
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO790469A NO153011C (no) | 1978-02-14 | 1979-02-13 | Fremgangsmaate ved fremstilling av trestatin a, b og c. |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4273765A (no) |
| EP (1) | EP0003616B1 (no) |
| JP (1) | JPS54163511A (no) |
| AR (1) | AR219150A1 (no) |
| AT (1) | AT367451B (no) |
| AU (1) | AU527318B2 (no) |
| CA (1) | CA1121290A (no) |
| DE (2) | DE2962165D1 (no) |
| DK (1) | DK149599C (no) |
| ES (1) | ES477653A1 (no) |
| FI (1) | FI63062C (no) |
| FR (1) | FR2416901A1 (no) |
| GR (1) | GR72817B (no) |
| HU (1) | HU181442B (no) |
| IE (1) | IE47916B1 (no) |
| IL (1) | IL56626A0 (no) |
| LU (1) | LU80906A1 (no) |
| MC (1) | MC1253A1 (no) |
| NL (1) | NL7901182A (no) |
| NO (1) | NO153011C (no) |
| NZ (1) | NZ189625A (no) |
| PH (1) | PH15084A (no) |
| PT (1) | PT69218A (no) |
| SE (1) | SE7901276L (no) |
| YU (1) | YU41437B (no) |
| ZA (1) | ZA79528B (no) |
Families Citing this family (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0056194B1 (en) | 1981-01-05 | 1984-09-12 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | N-substituted pseudo-aminosugars, their production and use |
| JPS57146713A (en) * | 1981-03-09 | 1982-09-10 | Akira Endo | Hypoglycemic |
| US4595678A (en) * | 1982-03-19 | 1986-06-17 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | N-substituted pseudo-aminosugars and pharmaceutical compositions containing same |
| US4762857A (en) * | 1986-05-30 | 1988-08-09 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Trehalose as stabilizer and tableting excipient |
| US4678812A (en) * | 1986-05-30 | 1987-07-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Trehalose as stabilizer and tableting excipient |
| US4885361A (en) * | 1987-07-31 | 1989-12-05 | Hoffmann-La Roche Inc. | Sulfated oligosaccharides |
| CA2097426A1 (en) * | 1990-11-30 | 1992-05-31 | Bruce M. Cameron, Sr. | Method for the diagnosis of chronic lower back and cervical pain |
| TW381025B (en) * | 1993-08-05 | 2000-02-01 | Hoffmann La Roche | Pharmaceutical composition containing a glucosidase inhibitor and a lipase inhibitor |
| US7022684B2 (en) * | 2000-05-24 | 2006-04-04 | Pfizer Inc. | Treatment of rumen acidosis with α-amylase inhibitors |
| EP1745790A3 (en) * | 2000-05-24 | 2007-03-21 | Pfizer Limited | Treatment of rumen acidosis with alpha-amylase inhibitors |
| EP2428516A1 (en) | 2003-11-19 | 2012-03-14 | Metabasis Therapeutics, Inc. | Novel phosphorus-containing thyromimetics |
| US7262318B2 (en) * | 2004-03-10 | 2007-08-28 | Pfizer, Inc. | Substituted heteroaryl- and phenylsulfamoyl compounds |
| US20050288340A1 (en) * | 2004-06-29 | 2005-12-29 | Pfizer Inc | Substituted heteroaryl- and phenylsulfamoyl compounds |
| ATE439347T1 (de) * | 2004-11-23 | 2009-08-15 | Warner Lambert Co | 7-(2h-pyrazol-3-yl)-3,5-dihydroxy-heptansäure- derivate als hmg-co-a-reductase-inhibitoren zur behandlung von lipidemia |
| US7741317B2 (en) | 2005-10-21 | 2010-06-22 | Bristol-Myers Squibb Company | LXR modulators |
| US7888376B2 (en) | 2005-11-23 | 2011-02-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Heterocyclic CETP inhibitors |
| CN101663262B (zh) | 2006-12-01 | 2014-03-26 | 百时美施贵宝公司 | 用于治疗动脉粥样硬化和心血管疾病的作为cetp抑制剂的n-(3-苄基)-2,2-(二苯基)-丙-1胺衍生物 |
| ES2393885T7 (es) | 2007-06-04 | 2014-01-30 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Agonistas de la guanilato ciclasa útiles para el tratamiento de trastornos gastrointestinales, inflamación, cáncer y otros trastornos |
| US8969514B2 (en) | 2007-06-04 | 2015-03-03 | Synergy Pharmaceuticals, Inc. | Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of hypercholesterolemia, atherosclerosis, coronary heart disease, gallstone, obesity and other cardiovascular diseases |
| KR20100130993A (ko) * | 2008-04-11 | 2010-12-14 | 아스텔라스세이야쿠 가부시키가이샤 | 아미노당 화합물 및 그의 생산 방법 |
| ES2522968T3 (es) | 2008-06-04 | 2014-11-19 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Agonistas de guanilato ciclasa útiles para el tratamiento de trastornos gastrointestinales, inflamación, cáncer y otros trastornos |
| AU2009270833B2 (en) | 2008-07-16 | 2015-02-19 | Bausch Health Ireland Limited | Agonists of guanylate cyclase useful for the treatment of gastrointestinal, inflammation, cancer and other disorders |
| WO2010093601A1 (en) | 2009-02-10 | 2010-08-19 | Metabasis Therapeutics, Inc. | Novel sulfonic acid-containing thyromimetics, and methods for their use |
| WO2011145022A1 (en) | 2010-05-21 | 2011-11-24 | Pfizer Inc. | 2-phenyl benzoylamides |
| WO2012027331A1 (en) | 2010-08-27 | 2012-03-01 | Ironwood Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treating or preventing metabolic syndrome and related diseases and disorders |
| US9616097B2 (en) | 2010-09-15 | 2017-04-11 | Synergy Pharmaceuticals, Inc. | Formulations of guanylate cyclase C agonists and methods of use |
| EP2680874A2 (en) | 2011-03-04 | 2014-01-08 | Pfizer Inc | Edn3-like peptides and uses thereof |
| WO2013133685A1 (en) | 2012-03-09 | 2013-09-12 | Biotropics Malaysia Berhad | Extract formulations of rhodamnia cinerea and uses thereof |
| CA2905435A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Synergy Pharmaceuticals Inc. | Compositions useful for the treatment of gastrointestinal disorders |
| JP2016514671A (ja) | 2013-03-15 | 2016-05-23 | シナジー ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | グアニル酸シクラーゼのアゴニストおよびその使用 |
| WO2014170786A1 (en) | 2013-04-17 | 2014-10-23 | Pfizer Inc. | N-piperidin-3-ylbenzamide derivatives for treating cardiovascular diseases |
| US10011637B2 (en) | 2013-06-05 | 2018-07-03 | Synergy Pharmaceuticals, Inc. | Ultra-pure agonists of guanylate cyclase C, method of making and using same |
| MX2017002610A (es) | 2014-08-29 | 2017-10-11 | Tes Pharma S R L | INHIBIDORES DE ACIDO A-AMINO-ß-CARBOXIMUCONICO SEMIALDEHIDO DESCARBOXILASA. |
| WO2016055901A1 (en) | 2014-10-08 | 2016-04-14 | Pfizer Inc. | Substituted amide compounds |
| US20180134667A1 (en) | 2016-10-14 | 2018-05-17 | TES Pharma S.r.I. | Inhibitors of alpha-amino-beta-carboxymuconic acid semialdehyde decarboxylase |
| MX2021005904A (es) | 2018-11-20 | 2021-09-08 | Tes Pharma S R L | Inhibidores de la ácido alfa-amino-beta-carboximucónico semialdehído descarboxilasa. |
| CN113574055A (zh) | 2019-01-18 | 2021-10-29 | 阿斯利康(瑞典)有限公司 | Pcsk9抑制剂及其使用方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2064092C2 (de) * | 1970-12-28 | 1983-06-01 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Inhibitoren für Glykosidhydrolasen aus Actinomyceten |
| US4062950A (en) * | 1973-09-22 | 1977-12-13 | Bayer Aktiengesellschaft | Amino sugar derivatives |
| DE2347782C3 (de) * | 1973-09-22 | 1979-10-11 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Aminozuckerderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel |
| US4065557A (en) * | 1974-03-21 | 1977-12-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Amino sugars and their use in improving the meat:fat ratio in animals |
| USRE29903E (en) | 1975-03-19 | 1979-02-06 | American Cyanamid Company | Antibacterial antibiotics AM31α, AM31β and AM31γ |
| DE2614393C3 (de) * | 1976-04-02 | 1980-04-03 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | Aminozucker-Derivate und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel |
-
1979
- 1979-01-31 CA CA000320579A patent/CA1121290A/en not_active Expired
- 1979-02-07 ZA ZA79528A patent/ZA79528B/xx unknown
- 1979-02-07 PH PH22174A patent/PH15084A/en unknown
- 1979-02-07 AU AU44028/79A patent/AU527318B2/en not_active Ceased
- 1979-02-08 IL IL56626A patent/IL56626A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1979-02-08 AR AR275445A patent/AR219150A1/es active
- 1979-02-09 US US06/011,002 patent/US4273765A/en not_active Expired - Lifetime
- 1979-02-12 HU HU79HO2138A patent/HU181442B/hu not_active IP Right Cessation
- 1979-02-12 LU LU80906A patent/LU80906A1/de unknown
- 1979-02-12 FR FR7903452A patent/FR2416901A1/fr active Granted
- 1979-02-12 NZ NZ189625A patent/NZ189625A/xx unknown
- 1979-02-13 DK DK61179A patent/DK149599C/da active
- 1979-02-13 ES ES477653A patent/ES477653A1/es not_active Expired
- 1979-02-13 AT AT0108879A patent/AT367451B/de not_active IP Right Cessation
- 1979-02-13 PT PT7969218A patent/PT69218A/pt unknown
- 1979-02-13 GR GR58344A patent/GR72817B/el unknown
- 1979-02-13 SE SE7901276A patent/SE7901276L/ not_active Application Discontinuation
- 1979-02-13 NO NO790469A patent/NO153011C/no unknown
- 1979-02-13 MC MC791365A patent/MC1253A1/xx unknown
- 1979-02-13 IE IE274/79A patent/IE47916B1/en not_active IP Right Cessation
- 1979-02-13 JP JP1443879A patent/JPS54163511A/ja active Granted
- 1979-02-14 FI FI790486A patent/FI63062C/fi not_active IP Right Cessation
- 1979-02-14 DE DE7979100441T patent/DE2962165D1/de not_active Expired
- 1979-02-14 YU YU348/79A patent/YU41437B/xx unknown
- 1979-02-14 DE DE19792905649 patent/DE2905649A1/de not_active Withdrawn
- 1979-02-14 EP EP79100441A patent/EP0003616B1/de not_active Expired
- 1979-02-14 NL NL7901182A patent/NL7901182A/xx not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO153011B (no) | Fremgangsmaate ved fremstilling av trestatin a, b og c | |
| US4062950A (en) | Amino sugar derivatives | |
| EP0063456B1 (en) | Pseudo-aminosugars, their production and use | |
| US3876766A (en) | Glycoside-hydrolase enzyme inhibitors | |
| KR100734975B1 (ko) | 1-데옥시노지리마이신을 생산하는 바실러스 서브틸리스ｓ10 균주 및 이를 유효성분으로 함유하는 조성물 | |
| US4307194A (en) | Inhibitors, obtained from bacilli, for glycoside hydrolases | |
| US4595698A (en) | Physiologically active substance, arphamenine and production thereof | |
| GB2060629A (en) | Antibiotic substance and production and use thereof | |
| US4497797A (en) | β-Galactosidase inhibitor GT-2558 and its derivatives | |
| US4927810A (en) | Efomycin G and it's use as yield promoter in animals | |
| WO1996020945A1 (en) | Novel aminooligosaccharide derivative and process for preparing the same | |
| US4197292A (en) | Novel amylase inhibitors | |
| US4632917A (en) | Pseudooligosaccharides with an α-glucosidase-inhibiting action, their use and pharmaceutical products | |
| KR830001068B1 (ko) | 아미노당 유도체의 제조방법 | |
| US3855066A (en) | Process for the production of an amylase inhibitor | |
| KR950013857B1 (ko) | 신규 항생물질 무레이도마이신 a, b, c 및 d 그의 제조 방법 및 치료학적 용도 | |
| US4565861A (en) | Serirubicum | |
| JPS60172985A (ja) | 抗生物質ａ３９０７９因子ｓ−１およびその製造方法 | |
| US3995026A (en) | Amylase inhibitor | |
| US4572895A (en) | Process for preparing an antibiotic complex by culturing actinomyces strain ATCC 39417 | |
| PL108605B1 (en) | Method of producing acantomycin | |
| KR790001709B1 (ko) | 아미노-슈가 화합물의 제조방법 | |
| IE44803B1 (en) | Amino-sugar derivatives | |
| NO770915L (no) | Aminosukkerderivater. | |
| JPH022590B2 (no) |