NO146287B - Fotoluminescerende materiale og fremgangsmaate ved dets fremstilling. - Google Patents

Abstract

Fotoluminescerende materiale og fremgangsmåte ved dets fremstilling.

Description

Fremgangsmåte for fremstilling av vaksine mot meslinger.

Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte til fremstilling av en forbedret meslingvaksine.

Meslingvirus er av tidligere forskere med

hell tilpasset (adapted) slik at det er i stand til å gro og formere seg i ikke-menneskelig vev eller cellekulturer. Stammer av meslingvirusen som er egnet til innpodning i mennes-ker, er vist å kunne erholdes ved svekkelse (attenuation) i slike ikke-menneskelige cellekulturer.

Klinisk prøvning av den tilpassede og svekkede, levende meslingvirus erholdt på

denne måte, viste at den er i stand til å danne antistoffer i de innpodede personer og immuni-sere dem mot meslinginfeksjon. Uheldigvis utviklet det seg uønskede reaksjoner så som høy feber, hos en rekke av de innpodede personer. En stor del av barna som var innpodet med vaksiner fremstilt av den tilpassede og svekkede stamme av den meslingvirus som hittil har vært tilgjengelig, utviklet alvorlig utslett og andre reaksjoner som et resultat av innpodningen.

De uønskede bivirkninger kunne dempes

eller til en viss grad hindres ved at det samtidig ble injisert gammaglobulin som har en avgjort virkning når det gjelder å beskytte barna mot de mer alvorlige symptomer på de uønskede reaksjoner. Denne hindring av reaksjoner ved hjelp av den kombinerte anvendelse av meslingvaksine og gammaglobulin er tung-vint og kostbar og vanligvis ikke egnet til innpodningsprogrammer i stor målestokk.

Det er nå funnet at vesentlige bivirkninger og uønskede symptomer kan hindres eller

i det minste reduseres meget hos den inkuberte person, hvis man for immuniseringen anvender en forbedret vaksine som er fremstilt av den såkalte Schwarz-stamme av levende meslingvirus. Denne nye vaksine krever ikke at det samtidig injiseres gammaglobulin. Like god eller bedre virkning når det gjelder hyp-pigheten og alvorligheten av reaksjoner hos de innpodede personer kan nå oppnåes ved å anvende den forbedrede meslingvaksine fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse alene.

Schwarz-stammen av meslingvirus skilles fra de hittil kjente stammer av meslingvirus ved at vesentlig uønskede bivirkninger og reaksjoner ikke forekommer hos personer som innpodes med denne, og ved at de vanlige patologiske symptomer på meslinger ikke er til stede, uten at dette reduserer den immuni-serende evne og effektivitet.

Den forbedrede sikkerhet og virkning av Schwarz-stammen av meslingsvirus som et innpodningsmiddel kan oppnåes ved svekkelse av tilpasset meslingvirus på en slik måte at virusens ondartethet svekkes mer enn tilfelle er for de svekkelsesbehandlinger som hittil har vært anvendt.

De nye, forbedrede vaksiner fremstilt i henhold til foreliggende oppfinnelse som inneholder svekket, levende meslingvirus, kan lett fremstilles i henhold til foreliggende oppfinnelse ved å formere og dyrke Schwarz-stammen av meslingsvirus i et kulturmedium som omfatter levende dyreceller, og å atskille celle- og avfallsmaterialet fra kulturmediet. Vaksinen som erholdes på denne måte, kan anvendes direkte eller lagres, og de vanlige for-tynningsmidler, stabilisatorer osv., kan tilsettes til enhver tid. Lagringen lettes hvis vaksinen er frosset og blir holdt i denne tilstand til senere bruk.

Hvis formeringen av Schwarz-stammen av meslingvirus utføres ved betingelser og temperaturer som medfører den mulighet at virusen går over til en mer ondartet form, er det en god forholdsregel at det ved fremstilling av kulturer av mikroorganismer (seed pools) fra den eksisterende Schwarz-stamme av virusen, inkluderes minst flere passeringer (pas-sages) ved betingelser som nedsetter ondartheten, f.eks. ved dyrkning av virusen ved flere passeringer ved temperaturer under 35 °C, og fortrinnsvis under 32 °C. Hvis Schwarz-stammen av virus skulle gå over i en mer ondartet form til tross for alle for-holdregler, er den ikke lenger et egnet utgangsmateriale for den foreliggende oppfin-nelses formål, og må erstattes med nytt materiale som er i overensstemmelse med defini-sjonen av Schwarz-stammen av meslingvirus angitt i det foregående.

Avhengig av den ønskede bruk, kan vaksinene som er erholdt fra kulturmediet, fortynnes med et egnet fortynningsmiddel, fortrinnsvis med sterilisert, destillert vann. Alternativt kan vaksinen frysetørkes for lagring og rekonstitueres med et egnet fortynningsmiddel, fortrinnsvis ved tilsetning av sterilisert, destillert vann, før bruk.

Det er ofte en fordel at det til vaksinen settes en stabilisator for denne. Lactose-gluta-matoppløsning har vist seg å være en utmer-ket stabilisator for dette formål.

Den levende Schwarz-stamme av meslingvirus, som er utgangsmaterialet for fremstilling av de forbedrede vaksiner ifølge oppfinnelsen, kan lett fremstilles ved tilpasning av meslingvirus slik at den er i stand til å gro i levende, ikke-menneskelig cellevev eller i medier som inneholder slike levende, ikke-menneskelige celler, og ved svekkelse av den tilpassede viru ved hjelp av flere passeringer gjennom et kulturmedium som omfatter levende, ikke-menneskelige dyreceller under betingelser som nedsetter ondartheten, og ved temperaturer under 35 °C, men ved en temperatur som er over den ved hvilken formering av virusen opphører. Istedenfor å tilpasse naturlig (native) meslingvirus, kan man som utgangsmateriale også anvende en tilpasset stamme av meslingvirus som f.eks. er erholdt ved tilpasning og svekkelse av tidligere forskere fra Edmonston-stammen av meslingvirus, som f.eks. Enders-stamme. Svekkelse av de tilgjengelige, tilpassede stammer ved hjelp av flere passeringer av virusen gjennom kultur-medier som inneholder levende, ikke-menneskelige dyreceller, på en måte som nedsetter ondartheten beskrevet i det foregående, frem-bringer Schwarz-stammen av meslingvirus.

Minst en del av inkuberingen under svek-kelsesbehandlingen utføres ved en temperatur under 35 °C, og mer hensiktsmessig under 32 °C. I det minste flere passeringer eller en del av et større antall passeringer bør utføres ved en temperatur under 35° C, og fortrinnsvis ved en temperatur fra 28 til 32°C. Eventuelt kan imidlertid alle passeringer for svekkelse av virusen utføres ved de angitte lavere temperaturer.

Meslingvirusen kan lett tilpasses slik at den er i stand til å formere seg i kyllingsfos-tervev eller i et kulturmedium som inneholder levende celler av slikt vev. Dette samme vev eller næringsmedium som inneholder levende celler av slikt vev, kan også tjene som vekstmedium for fremstilling av vaksine fra Schwarz-stammen av virusen.

Ved en foretrukket utførelsesform for fremgangsmåten til fremstilling av Schwarz-stammen av meslingvirus etableres vevkulturer av ikke-menneskelige dyrevev på vanlig måte i en næringsvæske, som er ikke-giftig for meslingvirus, og som underholder veksten av slikt vev, og innpodes med levende meslingvirus. De innpodede vevkulturer inkuberes deretter ved 35 til 37 °C for en viss tid, og virusen føres i seriepasseringer på det samme dyrevev i et antall av passeringer som er tilstrekkelig til å sikre at virusen er tilpasset til å gro på det spesielle vev som anvendes. På denne måte er det f.eks. funnet at meslingvirus kan tilpasses å gro på hundenyrevev, oksenyrevev, svinenyrevev og kyllingfostervev. Etter den foregående tilpasningskultur, føres virusen i serie i vevkultur, på det spesielle substrat til hvilket det er tilpasset, og inkubering av virusen utføres ved «undernormale» temperaturer fra ca. 28 til ca. 32°'C for å oppnå modifisering av virusen, hvorved den modifiserte virus, når den injiseres i barn som ikke er immune mot meslinger, er i stand til å stimulere fremstillingen av beskyttede mes-ling-antistoffer uten å frembringe nevneverdig utslett, høy feber eller andre vanlige patologiske symptomer på meslinger. Den foregående fremgangsmåte til dyrkning av meslingvirus, når den utføres på fuglevev, særlig kyllingfostervev, representerer en foretrukket utfø-relsesform av oppfinnelsen.

Ved en ytterligere fremgangsmåte til fremstilling av Schwarz-stammen av meslingvirus innpodes den opprinnelige, levende meslingvirus i etablert dyrevevkultur og inkuberes ved undernormale temperaturer, som angitt ovenfor, uten foregående tilpasning til det særlige vev ved normale inkuberingstempera-turer. Seriepassering og inkubering ved nevnte undernormale temperaturer, fortrinnsvis fra ca. 28 til ca. 32 °C, fortsettes deretter i et tilstrekkelig antall passeringer til at man opp-når den ønkede svekkelse av virusen.

Alternativt, når frisk, naturlig meslingvirus anvendes som utgangsmateriale, er det ofte ønskelig å bevirke den opprinnelige formering av virusen i en menneskevevkultur som f.eks. menneskenyre-vevkultur menneske-amnion-vevkultur eller menneskehjerte-vevkultur, eller i en dyrekultur som det er kjent er gunstig som vertsvev for formering av slik naturlig virus, som f.eks. i hundenyre-vevkultur. Ved slike prosesser kan det være ønskelig å fortsette virkningen på slikt menneske- eller hundevev i en rekke seriepasseringer inntil identiteten og renheten av den etablerte virus kan fastslåes. Tilpasning av virusen til andre ikke-menneskelige dyrevev, og svekkelse av nevnte virus ved inkubering ved lave temperaturer, utføres deretter ved hjelp av den ovenfor beskrevne fremgangsmåte. Ved et-hvert tilpassende trinn før inkuberingen settes i gang ved undernormale temperaturer, vil det være åpenbart at mellomliggende passeringer til andre vev eller til befruktede egg ved hjelp av vanlig teknikk kan utføres uten at man går ut over rammen av foreliggende oppfinnelse. Det er også mulig å utføre svek-kelsen med eksisterende stammer av meslingvirus som er tilpasset til å gro i levende, ikke-menneskelige vev eller vekstmedier som inneholder celler av slikt vev, som f.eks. Enders-stamme av meslingvirus.

Ved en utførelsesform av prosessen etableres kulturen av ikke-menneskelige dyrevev som angitt ovenfor, og så snart god vekst av vevet er åpenbar, erstattes den opprinnelige mengde næringsvæske med frisk næringsvæske, og kul-turene innpodes med levende meslingvirus. Under inkuberingen av virusen kan man anvende forsiktig bevegelse av kulturkarene, som f.eks. ved hjelp av en roterende trommel. Alternativt kan statiske dyrkningsmetoder anvendes forutsatt at man sørger for at vevcellene er neddykket i næringsvæsken. Formering av virusen fremgår vanligvis av en tydelig cytopatogen effekt på vevcellene som kan observeres under mikroskopet. I noen tilfelle imidlertid, særlig på de tidlige trinn av virusens tilpasning til en ny type vertsceller, kan en tydelig cytopatogen effekt først iakttaes etter en lang inkuberingsperiode, hvis den i det hele tatt kan iakttaes. I slike tilfelle kan imidlertid formering av virusen følges ved å titrere en del av den innpodede vevkultur-væske i en kultur av menneskevev, som f.eks. menneskeamnionvev, menneskehjertevev eller lignende, som er mottagelig overfor nevnte virus. Det sistnevnte viser tydelig en typisk cytopatogen effekt når det infiseres med meslingvirus. Ved den foretrukne utførelsesform passerer virusen i serie gjennom suksessive, friske dyrevevkulturer med inkubering ved 35°C i noen få, fortrinnsvis ca. 10, seriepasseringer for å sikre tilpasning til det særlige vev som anvendes. Ytterligere seriepasseringer i slik vevkultur gjennomføres deretter i alle tilfelle ved inkubering av virusen ved undernormale temperaturer, fortrinnsvis fra ca.

28 til ca. 32 °C, for å gjennomføre den ønskede

svekkelse av virusen. Det nøyaktige antall seriepasseringer som er nødvendig ved de lavere temperaturer, vil variere avhengig av slike faktorer som den særlige stamme meslingvirus som anvendes, dens tidligere dyrk-ningshistorie, og det særlige vev som anvendes i vevkulturen. I kyllingfoster-vevkultur er det oppnådd gode resultater med hensyn til svekkelse når man har anvendt ca. 40 seriepasseringer av virusen ved en inkuberingstemperatur fra 28 til 32 °C.

Når svekkelse av virusen er opnådd på den foregående måte, kan den ønskede, svekkede Schwarz-stamme av virus opprettholdes ved hjelp av vevkultur av den samme type vev til hvilken virusen er tilpasset, og med fortsatt inkubering ved temperaturer fra 28 til 32 °C. Generelt er det ønskelig, men ikke nød-vendig, å overføre virusen til friske vevkulturer når fra ca. 20 til 75 prosent, fortrinnsvis fra ca. 25 til 50 prosent, av cellene i en gitt mengde innpodet vevkultur viser en cytopatogen effekt.

Lignende teknikk anvendes til å formere den svekkede virus for å oppnå lagre (pools) for vaksinefremstilling. Ved den sistnevnte prosess inkuberes kulturen inntil virusen har formert seg slik at man har fått en passende konsentrasjon derav, og væsken fra vevkul-turkarene oppsamles ved dekantering under aseptiske betingelser og klares ved sentrifugering, filtrering eller lignende. Det resulterende produkt kan anvendes direkte som en vaksine eller, avhengig av konsentrasjonen av virusen, det kan anvendes med et egnet, injiserbart fortynningsmiddel eller stabilise-rende oppløsning som er ikke-giftig for virusen, slik at man får en ferdig, flytende vaksine. Hvis en vesentlig del av vevcellene i kulturen ikke er gått i oppløsning som følge av den cytopatogene virkning av virusens vekst, tilsettes frisk væske, som f.eks. en passende vaksinestabiliseringsoppløsning, avbalansert saltoppløsning, friskt næringsmedium eller lignende, til kulturkarene etter den ovenfor-nevnte dekantering, og nevnte kar og innhold føres gjennom en fryse- og tineprosess slik at man får frigjort ytterligere virus fra vevcellene. Den resulterende væske oppsamles og lagres sammen med det tidligere oppsamlede slik at man får et vaksinekonsentrat. Dette frigjøres for vevceller og avfallsmaterialet på passende måte, som angitt ovenfor, og virus-innholdet standardiseres ved titrering som f.eks. mot menneskevevkulturceller. Deretter kan eventuet vaksinekonsentratet anvendes direkte til vaksinering av ikke-immune men-nesker, eller det kan fortynnes med en steril stabilisator som f.eks. lactose-glutamatopp-løsning, og lagres frosset, fortrinnsvis ved en temperatur fra —20 til —70 °C, før det skal brukes. Alternativt kan den stabiliserte vaksine frysetørkes slik at man får et tørt vak-sineprodukt som lett kan lagres og som kan rekonstitueres med sterilt vann eller lignende like før det skal anvendes.

Selvom fortsatt inkubering ved de fore-skrevne undernormale temperaturer foretrek-kes for å sikre den ønskede svekkelse av virusen slik at man får Schwarz-stammen av virus med det minst mulige antall suksessive passeringer, kan mindre variasjoner innføres. Seriepasseringer ved 28 til 32 °C kan f.eks. avbrytes av én eller noen få passeringer ved høyere temperaturer, forutsatt at det totale antall passeringer ved den undernormale temperatur er tilstrekkelig til å bibringe den ønskede svekkelse. Etter den ønskede svekkelse er oppnådd kan på lignende måte én eller to formeringspasseringer for økning av vaksinelagre, gjennomføres ved passende høy-ere temperaturer, hvis man ønsker det.

Eksempel 1.

VEVKULTURTEKNIKK

Åtte til ti dager gamle kyllingfostere ble finhakket under aseptiske betingelser, etterat øynene var fjernet, og det resulterende, fin-hakkede vev ble vasket med fosfatbuffered saltoppløsning. Det vaskede vev ble trypsinert på vanlig måte i en Erlenmeyerkolbe omrørt med en magnetisk rører. Det trypsinerte vev ble sentrifugert ved 1000 omdreininger pr. min. i 3 minutter, og de resulterende konsen-trerte celler ble suspendert i et vekstmedium slik at man fikk 500 000 til 600 000 celler pr. milliliter. Vekstmediet bestod av Earle's basiske saltoppløsning (natriumklorid 6,8 g, ka-liumklorid 0,4 g, calciumklorid 0,2 g, magne-siumsulfatheptahydrat 0,2 g, surt natriumfos-fat 0,125 g, glucose 1,0 g, natriumbicarbonat 2,2 g og fenolrødt 0,02 g oppløst i vann slik at man tilsammen fikk 1000 milliliter) inne-holdende 5 prosent kalveserum og 0,5 prosent lactalbumin-hydrolysat og ytterligere inne-holdende 200 enheter penicillin og 200 mikro-gram streptomycin pr. milliliter. Den resulterende suspensjon ble innpodet i mengder på 1 milliliter i sterile rør og inkubert i 24 til

48 timer ved 35°C. En lignende fremgangsmåte ble også anvendt til fremstilling av større porsjoner ved å innføre 60 til 70 milli-

liter av suspensjonen i Blake eller Roux kul-turkolber.

Etter den opprinnelige inkuberingsperiode for kyllingfoster-vevcellene, ble vekstmediet fjernet fra disse, cellene ble vasket to ganger med medium nr. 199 fra Morgan og Parker (Morgan et al., Proceedings of the Society for Experimenatl Biology and Medicine, 1950, 73, s. 1—8), og 2 milliliter av medium 199, uten serum og justert til en pH på 7—7,2, ble deretter tilsatt til hvert rør, eller 100 milliliter av nevnte medium til hver kolbe. Hvert rør ble deretter innpodet med 0,2 milliliter aktiv, levende meslingvirussuspensjon eller hver kolbe med 1 milliliter slik virussuspensjon, og de resulterende kulturer ble inkubert ved en temperatur fra 32 til 28°C i en tidsperiode som var tilstrekkelig til å bibringe formering av virusen. Generelt fremgikk virusens vekst av at cellene i vevkulturen oppviste en cytopatogen effekt, og seriepassering av virusen til nytt vevkulturmedium ble vanligvis utført når fra ca. 25 til 50 prosent av cellene i den innpodede kultur oppviste den cytopatogene effekt. Alternativt kan veksten av virusen i vevkulturen følges ved å titrere kulturmediet i en kultur av menneskevevceller, som f.eks. men-neskeamnion, menneskehjerte eller annet egnet vev ved den metode som er angitt i Schwarz og Zirbel, Proceedings of the Society for Experimentdl Biology and Medicine, 1959, vol. 102, s. 711—714.

Etter tilstrekkelig passeringer som angitt ovenfor for å bibringe den den ønskede svekkelse av virusen, ble én eller noen få ytterligere passeringer i kyllingfoster-vevkultur ut-ført ved 32 til 28 °C i en stor nok målestokk til at virusen formerte seg tilstrekkelig slik at man fikk en beholdning av vaksinekonsentrat. Vaksinekonsentratet ble oppsamlet på vanlig måte ved dekantering, frysing og ti-ning, og vasking. Den oppsamlede vaksine ble klaret ved sentrifugering av kulturvæsken og vaskevæskene inntil alle vevceller og alt celle-avfall var fjernet.

Eksempel 2.

FREMSTILLING AV PRØVING AV

VAKSINE

Ved fremstilling av en vaksine i henhold til den fortrukne utførelsesform av foreliggende oppfinnelse, blir Edmonston-stammen av meslingvirus, som beskrevet av Enders et al., ved hjelp av seriepassering holdt i en kyllingfoster-vevkultur med inkubering ved 35 °C i 19 suksessive passeringer. Deretter ble denne kyllingfoster-tilpassede virus ført i serie ved hjelp av teknikken i henhold til eksempel 1 i 37 suksessive passeringer i kyllingfoster-vevkultur med inkubering ved 32 °C. Den resulterende, svekkede virus fra den 37. passering ble ført gjennom tre avsluttende, for-tynnings-kyllingfoster-vevkultur- passeringer, fulgt av to ytterligere passeringer i slik vevkultur for å formere virusen og frembringe en vaksinebeholdning. Ved hver av disse sistnevnte passeringer ble kulturen inkubert ved 32 °C. De resulterende vaksinekonsentrater ble atskilt fra vevcellene og avfallsmaterialet og fortynnet med et likt volum lactose-glutamat-oppløsning som en stabilisator. Lactose-glu-tamat-stabiliseringsopløsningen hadde følgen-de sammensetning:

Vann, slik at man tilsammen får 1 liter En del av den ferdige vaksine ble titrert mot menneskehjerte-vevceller. Vaksinene ble funnet å inneholde fra 103,5 til 104.:J> vevkultur-infeksjonsdoser 50 prosent (VKID5()) pr. 0,2 milliliter. Hver vaksinebeholdning ble prøvet ved hjelp av innpodning i thioglycolat-bakte-rienæringsmedium, ved intraperitoneal og sub-cutan innpodning i marsvin og mus og ved in-tramuskulær og intracerebral innpodning i cynomolge aper, og funnet å være uten for-urensninger. Ni barn som ikke var immune mot meslinger, ble innpodet med 0,2 milliliters doser av vaksinen, to intramuskulært og 7 subcutant. Ingen av de innpodede barn fikk meslingutslett og bare én viste en betydelig stigning i temperatur, som bare var midler-tidig, under observasjonsperioden etter vaksineringen.

Eksempel 3.

Seriepasseringer av virusen fra den 37. lav-temperaturpassering fra eksempel 2 ble fortsatt, som i eksempel 2, for i alt 65 passeringer ved 32 °C inkuberingstemperatur. Vaksinebe-holdninger med lactose-glutamatstabilisator ble fremstilt som tidligere og frysetørket. Den rekonstituerte vaksine fra dette frysetørkede materiale hadde en titer fra 102,r> til 104>5 VKID50 pr. 0,2 milliliter. En del av vaksinen ble også bevart ved direkte frysing. Vaksinen ble prøvet for sikkerhet som i eksempel 2.

70 barn som var prøvet for mesling-komplementbindende og nøytraliserende antistoffer og som ikke viste noen slike antistoffer ved en 1:2 serumfortynning, ble innpodet subcutant med 0,2 milliliter av de ovenfor beskrevne vaksiner og deretter observert i flere uker av øvet medisinsk personell. Ingen lokale eller øyeblikkelige reaksjoner ble iakttatt hos noen av barna, bortsett fra én mild urticaria-reaksjon som fant sted ca. 4 timer etter vaksi-

neringen. Temperaturene ble tatt minst én gang daglig, og hos de fleste av barna to ganger daglig, under observasjonsperioden. En mild, febril reaksjon som varte ca. 2 dager kunne i noen tilfelle iakttaes 7 til 8 dager etter vaksineringen. Den gjennomsnittlige mak-simale rectumtemperatur for alle de vaksi-nerte barn var 38,2°C (110,7°F). Milde, mes-linglignende utslett ble iakttatt hos bare to barn på henholdsvis den 11. og 13. dag etter vaksinasjonen. Ingen alvorlige komplikasjoner av noen art fant sted under prøvene, og det ble ikke funnet noe som tydet på noen for-styrrelser i sentralnervesystemet. Tre til seks uker etter vaksineringen ble det tatt en blod-prøve av hvert av barna og prøvet for mes-ling-komplement-bindende og nøytraliserende antistoffer. 97,1 prosent av barna hadde utviklet like høyt antistoffinnhold i blodet som en naturlig meslinginfeksjon.

Eksempel J/..

Ved å følge fremgangsmåten fra eksempel 2 ble meslingvirus fra den 37. passering ved 32 °C fra nevnte eksempel, ført gjennom ti ytterligere passeringer med inkubering ved 32°'C fulgt av 15 passeringer med inkubering ved 28°C. Vaksiner fremstilt fra den 15. passering ved 28°C ble anvendt for innpodning av ikkeimmune barn. Deretter tydet observasjon og prøver av de innpodede barn på at virusens alvorlige reaksjon etter innpodning var svekket, uten at dette medførte noen merkbar nedsettelse av antigenitet.

På lignende måte kan meslingvirusen svekkes ved at den dyrkes på isolert vev ved en temperatur på ca. 28 til ca. 32 °C, under anvendelse av vev som f.eks. oksenyrevev. Ved fremstilling av vevkul turene kan andre egnede, proteolytiske enzymer anvendes istedenfor trypsin for å dispergere vevcellene. Andre kulturvæsker som f.eks. Eagle's basiske medium, medium nr. 199 med 5 til 10 prosent inaktivert hesteserum, eller en blanding be-stående av 8 deler av Earle's basiske saltopp-løsning, 1 del 5 prosent lactalbumin-hydrolysat og 1 del inaktivert heste- eller lammeserum, kan også anvendes.

Claims (1)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av en meslingvaksine av levende, svekket meslingvirus ved å formere og dyrke en tilpasset og svekket stamme av meslingvirus i et kulturmedium som omfatter levende dyreceller og ved å adskille celle- og avfallsmaterialet fra kulturmediet, karakterisert ved at man anvender Schwarz-stammen av meslingvirus som er erholdt, enten ved tilpasning av naturlig meslingvirus, slik at den er i stand til

   å gro i levende, ikke-menneskelig cellevev eller i medier som inneholder slike levende, ikkemenneskelige celler og svekkelse av den således tilpassede virus, eller ved svekkelse av allerede svekket meslingvirus, slik som Enders-stammen, ved flere passeringer i serie gjennom et kulturmedium som omfatter levende, ikke-menneskelige dyreceller, ved en temperatur under 35 °C, men ved en tempera-

   tur som er over den ved hvilken formering av virusen opphører og fortrinnsvis ved en temperatur mellom 28°—32°C, eventuelt av-brutt av enkelte passeringer ved temperaturer mellom 35 og 37 °C.