JPH08187076A - 商業的規模の採取前に濃縮された組織培養物が生産する生のＴ．ゴンデイイ（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）のブラデイゾイト、ならびに製品および方法 - Google Patents
商業的規模の採取前に濃縮された組織培養物が生産する生のＴ．ゴンデイイ（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）のブラデイゾイト、ならびに製品および方法Info
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- JPH08187076A JPH08187076A JP7252066A JP25206695A JPH08187076A JP H08187076 A JPH08187076 A JP H08187076A JP 7252066 A JP7252066 A JP 7252066A JP 25206695 A JP25206695 A JP 25206695A JP H08187076 A JPH08187076 A JP H08187076A
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/10—Protozoa; Culture media therefor
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）に対
するネコの防護のための商業的規模のワクチンに適する
採取前組織培養物が生産するＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇ
ｏｎｄｉｉ）を調製するための効率のよい方法の提供。 【解決手段】 ブラディゾイトを採取前に濃縮した商業
的規模の組織培養物が生産する生のＴ．ゴンティイ
（Ｔ. ｇｏｎｄｉｉ)のブラディゾイト、ならびにかか
るブラディゾイトの調製方法。
するネコの防護のための商業的規模のワクチンに適する
採取前組織培養物が生産するＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇ
ｏｎｄｉｉ）を調製するための効率のよい方法の提供。 【解決手段】 ブラディゾイトを採取前に濃縮した商業
的規模の組織培養物が生産する生のＴ．ゴンティイ
（Ｔ. ｇｏｎｄｉｉ)のブラディゾイト、ならびにかか
るブラディゾイトの調製方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、トキソプラスマ症
に対するネコの保護に関する。より具体的には、本発明
は商業的規模の濃縮された組織培養物が生産する生のト
キソプラスマ ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブ
ラディゾイト、それらのワクチン、診断薬ならびに同物
質の生成および使用の方法に関する。
に対するネコの保護に関する。より具体的には、本発明
は商業的規模の濃縮された組織培養物が生産する生のト
キソプラスマ ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブ
ラディゾイト、それらのワクチン、診断薬ならびに同物
質の生成および使用の方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】トキソプラスマ症はヒトおよび家畜動物
の重大な寄生性疾患である。従来の技術では、それがセ
ロネガティブの妊婦についての重大な問題として報告さ
れている。妊娠中に感染するとその女性は奇形もしくは
死亡した胎児を生むことがある。当該技術分野ではま
た、それが後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）患者およ
び特定の免疫抑制剤療法を受けている癌患者のような免
疫無防備状態の個体にとっての重大な問題として報告さ
れている。報告されるところによると、これらの個体の
多くのものはトキソプラスマ症で死亡している。
の重大な寄生性疾患である。従来の技術では、それがセ
ロネガティブの妊婦についての重大な問題として報告さ
れている。妊娠中に感染するとその女性は奇形もしくは
死亡した胎児を生むことがある。当該技術分野ではま
た、それが後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）患者およ
び特定の免疫抑制剤療法を受けている癌患者のような免
疫無防備状態の個体にとっての重大な問題として報告さ
れている。報告されるところによると、これらの個体の
多くのものはトキソプラスマ症で死亡している。
【０００３】ネコはＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）の複雑な生活環の明確な宿主である。これらは小哺
乳類（具体的にはＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）に感染し、そしてそれらの接合子嚢を保持するマウ
ス）を摂取することにより感染する。Ｔ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の性的複製周期はネコの腸内で
生じ、そしてふん便内に排出される接合子嚢の生産をも
たらす。この接合子嚢は経口的経路を介して他の哺乳類
を感染することができる。ここで特に問題となるのは、
土壌およびごみ箱内の接合子嚢との接触か、もしくは感
染した動物の調理不十分な状態の肉を食べることのいず
れかによるヒトの感染である。
ｉ）の複雑な生活環の明確な宿主である。これらは小哺
乳類（具体的にはＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）に感染し、そしてそれらの接合子嚢を保持するマウ
ス）を摂取することにより感染する。Ｔ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の性的複製周期はネコの腸内で
生じ、そしてふん便内に排出される接合子嚢の生産をも
たらす。この接合子嚢は経口的経路を介して他の哺乳類
を感染することができる。ここで特に問題となるのは、
土壌およびごみ箱内の接合子嚢との接触か、もしくは感
染した動物の調理不十分な状態の肉を食べることのいず
れかによるヒトの感染である。
【０００４】その感染を防ぐためには、ネコの感染およ
び後続の接合子嚢の排出を防ぐ安全な商業的規模のワク
チンを持つことが所望される。現在、当該技術分野で知
られる商業的規模のワクチンは、マウスの脳内でＴ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を増殖させることによ
る通常の方法で調製されている。これまで当該技術分野
では、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラデ
ィゾイトの商業的規模の組織培養生産のために都合のよ
い方法は開示されていなかった。
び後続の接合子嚢の排出を防ぐ安全な商業的規模のワク
チンを持つことが所望される。現在、当該技術分野で知
られる商業的規模のワクチンは、マウスの脳内でＴ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を増殖させることによ
る通常の方法で調製されている。これまで当該技術分野
では、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラデ
ィゾイトの商業的規模の組織培養生産のために都合のよ
い方法は開示されていなかった。
【０００５】従来の技術の説明となるのは、Ｌｉｎｄｓ
ａｙ，ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，１
９９１ ７７（１）、ページ１２６−１３２）であり、
これは、ウシの単球、ヒト胎児の肺細胞、およびメーデ
ィン−ダービー（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ）種のウシ肝
臓細胞内でのＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の
ヤギ単離物による組織嚢の形成を開示している。しかし
ながら、得られるこの製品を給餌されたネコはそのふん
便内に接合子嚢を排出した。この開示は、この生物体に
対する活性について薬剤を検査するためにＴ．ゴンディ
イ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の組織培養増殖物を含むこの
調製物を用いることができることを教示している。この
開示は、ワクチンを開発するための組織培養物の使用は
教示していない。この開示は、組織培養調製物中にブラ
ディゾイトを生産させるための抗体の使用は教示してい
ない。
ａｙ，ｅｔ ａｌ（Ｊ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，１
９９１ ７７（１）、ページ１２６−１３２）であり、
これは、ウシの単球、ヒト胎児の肺細胞、およびメーデ
ィン−ダービー（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ）種のウシ肝
臓細胞内でのＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の
ヤギ単離物による組織嚢の形成を開示している。しかし
ながら、得られるこの製品を給餌されたネコはそのふん
便内に接合子嚢を排出した。この開示は、この生物体に
対する活性について薬剤を検査するためにＴ．ゴンディ
イ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の組織培養増殖物を含むこの
調製物を用いることができることを教示している。この
開示は、ワクチンを開発するための組織培養物の使用は
教示していない。この開示は、組織培養調製物中にブラ
ディゾイトを生産させるための抗体の使用は教示してい
ない。
【０００６】Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ（Ｉｎｆｅｃｔｉ
ｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、Ｊａｎ．１９８６、
ページ１４７−１５６）は、マウスの星状膠細胞内での
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）嚢のインビトロ
培養法を開示している。この文献は、タキゾイトを含む
組織培養細胞の過剰増殖を阻害してブラディゾイトを含
む組織嚢の発育を可能にするためにガンマーインターフ
ェロンを使用する試みを開示している。この文献は、抗
体もしくは酵素の使用は教示してはいない。この文献は
ワクチン生産のための組織培養物内で増殖させた組織嚢
の使用は教示していない。この文献は有意な数の組織嚢
を形成するには４０〜８０日を必要とすることを教示し
ている。このような長期間の増殖の費用はワクチンの商
業的生産では認められないであろう。
ｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、Ｊａｎ．１９８６、
ページ１４７−１５６）は、マウスの星状膠細胞内での
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）嚢のインビトロ
培養法を開示している。この文献は、タキゾイトを含む
組織培養細胞の過剰増殖を阻害してブラディゾイトを含
む組織嚢の発育を可能にするためにガンマーインターフ
ェロンを使用する試みを開示している。この文献は、抗
体もしくは酵素の使用は教示してはいない。この文献は
ワクチン生産のための組織培養物内で増殖させた組織嚢
の使用は教示していない。この文献は有意な数の組織嚢
を形成するには４０〜８０日を必要とすることを教示し
ている。このような長期間の増殖の費用はワクチンの商
業的生産では認められないであろう。
【０００７】Ｓｈｉｍａｄａ ｅｔ ａｌ．（Ａｒｃ
ｈ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．、Ｖｏｌ９２、Ｄｅｃ
１９７４）は、レイトン（Ｌｅｉｇｈｔｏｎ）管内のウ
サギ角膜内皮細胞内でＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄ
ｉｉ）のＲＨ種を増殖させることができることを開示し
ている。この文献は、タキゾイトの増殖を阻害するため
の抗体およびモルモット補体の使用を教示している。こ
の文献は、単独の免疫血清もしくは単独のモルモット補
体はタキゾイトの増殖を最小限度阻害するに過ぎないこ
と、およびこれら２つのものの組み合わせは相乗的であ
ることを教示している。しかしながら、この文献は、タ
キゾイトを死滅させるための酵素の使用、あるいはワク
チンの調製法もしくは検査法は教示していない。
ｈ． Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．、Ｖｏｌ９２、Ｄｅｃ
１９７４）は、レイトン（Ｌｅｉｇｈｔｏｎ）管内のウ
サギ角膜内皮細胞内でＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄ
ｉｉ）のＲＨ種を増殖させることができることを開示し
ている。この文献は、タキゾイトの増殖を阻害するため
の抗体およびモルモット補体の使用を教示している。こ
の文献は、単独の免疫血清もしくは単独のモルモット補
体はタキゾイトの増殖を最小限度阻害するに過ぎないこ
と、およびこれら２つのものの組み合わせは相乗的であ
ることを教示している。しかしながら、この文献は、タ
キゾイトを死滅させるための酵素の使用、あるいはワク
チンの調製法もしくは検査法は教示していない。
【０００８】米国特許第４，８２４，６６６号は、微生
物のタキゾイトを単球様リンパ腫細胞株のような非接着
性のヒト細胞株内に接種し、そしてその細胞株を、その
株を維持したままタキゾイトの増殖を促進することが可
能な組織培養用培地内で維持することを含む、トキソプ
ラスマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）属の寄生虫の大規模な
増殖物を生産する方法を開示している。この特許はブラ
ディゾイトの大規模生産は開示していない。
物のタキゾイトを単球様リンパ腫細胞株のような非接着
性のヒト細胞株内に接種し、そしてその細胞株を、その
株を維持したままタキゾイトの増殖を促進することが可
能な組織培養用培地内で維持することを含む、トキソプ
ラスマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）属の寄生虫の大規模な
増殖物を生産する方法を開示している。この特許はブラ
ディゾイトの大規模生産は開示していない。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】これまでの記載事項に
より、従来の技術は商業的規模の濃縮された組織培養物
が生産するＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）ワク
チンの需要を満たすことに失敗していることが理解され
るであろう。この失敗は、以下に記載する関連的な問題
が原因であると思われる。従来の技術では恐らく、組織
培養物中でＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を増
殖させる際の免疫原性の損失が問題であろうことが判っ
た。従来の技術では恐らく、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇ
ｏｎｄｉｉ）ワクチンにおける抗原量が問題であろうこ
とが判った。従来の技術では恐らく、有効なワクチンを
生産するのに十分な量でＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎ
ｄｉｉ）のブラディゾイトの生存率を保持することが問
題であろうことが判った。
より、従来の技術は商業的規模の濃縮された組織培養物
が生産するＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）ワク
チンの需要を満たすことに失敗していることが理解され
るであろう。この失敗は、以下に記載する関連的な問題
が原因であると思われる。従来の技術では恐らく、組織
培養物中でＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を増
殖させる際の免疫原性の損失が問題であろうことが判っ
た。従来の技術では恐らく、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇ
ｏｎｄｉｉ）ワクチンにおける抗原量が問題であろうこ
とが判った。従来の技術では恐らく、有効なワクチンを
生産するのに十分な量でＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎ
ｄｉｉ）のブラディゾイトの生存率を保持することが問
題であろうことが判った。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明により、安全で商
業的規模の、組織培養物が生産するＴ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）、ならびにそれらのワクチンお
よび診断薬が提供される。
業的規模の、組織培養物が生産するＴ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）、ならびにそれらのワクチンお
よび診断薬が提供される。
【００１１】これまでの記載事項に従うと、本発明は、
採取前に濃縮された商業的規模の組織培養物が生産する
生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディ
ゾイトを包含する。本発明で有用なＴ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）は、Ｔ−２６３として表示され
る株のような接合子嚢陰性の表現型を特徴とする株のも
のであることができる。
採取前に濃縮された商業的規模の組織培養物が生産する
生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディ
ゾイトを包含する。本発明で有用なＴ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）は、Ｔ−２６３として表示され
る株のような接合子嚢陰性の表現型を特徴とする株のも
のであることができる。
【００１２】本発明は更に、採取前に濃縮された商業的
規模の組織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトを調製するための方
法も含む。この態様においては、この方法は、（ｉ）あ
る組織培養物をＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）
に感染させ、（ｉｉ）高生産率になるまでＴ．ゴンディ
イ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を増殖させ、（ｉｉｉ）タキ
ゾイトを含む組織培養物の過剰増殖を阻害し、かつ組織
嚢内のブラディゾイトの形成を刺激化し、（ｉｖ）得ら
れるブラディゾイトを高生産率になるまで増殖させ、
（ｖ）残存するタキゾイトの数を減少させ、（ｖｉ）そ
の嚢からブラディゾイトを放出させ、そして（ｖｉｉ）
その組織培養物を採取することを含む。本発明に従う
と、組織培養物の採取は採取後の濃縮がワクチンもしく
は診断薬を調製するのに妨げとなる。
規模の組織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトを調製するための方
法も含む。この態様においては、この方法は、（ｉ）あ
る組織培養物をＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）
に感染させ、（ｉｉ）高生産率になるまでＴ．ゴンディ
イ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を増殖させ、（ｉｉｉ）タキ
ゾイトを含む組織培養物の過剰増殖を阻害し、かつ組織
嚢内のブラディゾイトの形成を刺激化し、（ｉｖ）得ら
れるブラディゾイトを高生産率になるまで増殖させ、
（ｖ）残存するタキゾイトの数を減少させ、（ｖｉ）そ
の嚢からブラディゾイトを放出させ、そして（ｖｉｉ）
その組織培養物を採取することを含む。本発明に従う
と、組織培養物の採取は採取後の濃縮がワクチンもしく
は診断薬を調製するのに妨げとなる。
【００１３】更に本発明は、採取前に濃縮された商業的
規模の組織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトの有効量を含むワク
チンおよび診断薬を包含する。このワクチンは、生の
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイ
トの免疫原的な有効量を含む。この診断薬は、検出可能
な免疫複合体を提供するためのＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトの有効量を含む。更に
本発明は、ワクチンもしくは診断薬を投与する方法も含
む。
規模の組織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトの有効量を含むワク
チンおよび診断薬を包含する。このワクチンは、生の
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイ
トの免疫原的な有効量を含む。この診断薬は、検出可能
な免疫複合体を提供するためのＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトの有効量を含む。更に
本発明は、ワクチンもしくは診断薬を投与する方法も含
む。
【００１４】本発明をより十分に記載するのを補助する
ために、本明細書内で用いられる幾つかの用語を以下の
ように文脈内に挿入する。用語「採取前に濃縮された」
は、組織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトを採取前に濃縮するこ
とを意味する。用語「商業的規模」は、遠心分離もしく
は限外濾過のような採取後濃縮技術が存在しないことを
意味する。損傷性の採取後濃縮技術を用いなければ、免
疫原的定量可能なかなりの高生産率で生のブラディゾイ
トの免疫原的有効量を取得することができる。用語「免
疫原的有効量」は、ネコが接合子嚢を排出することを妨
ぐためのワクチンに調剤することができる生のブラディ
ゾイトの量を意味する。
ために、本明細書内で用いられる幾つかの用語を以下の
ように文脈内に挿入する。用語「採取前に濃縮された」
は、組織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトを採取前に濃縮するこ
とを意味する。用語「商業的規模」は、遠心分離もしく
は限外濾過のような採取後濃縮技術が存在しないことを
意味する。損傷性の採取後濃縮技術を用いなければ、免
疫原的定量可能なかなりの高生産率で生のブラディゾイ
トの免疫原的有効量を取得することができる。用語「免
疫原的有効量」は、ネコが接合子嚢を排出することを妨
ぐためのワクチンに調剤することができる生のブラディ
ゾイトの量を意味する。
【００１５】用語「免疫原的定量可能な」は、防護を付
与するワクチンの用量中の生のブラディゾイトの数を的
確に測定する能力を意味する。マウスの注射およびその
後のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）抗体の検
出、もしくは組織培養物の接種およびその後の細胞障害
性効果（ＣＰＥ）の観察のいずれかを必要とするアッセ
イ法によりＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の免
疫原的定量可能量を決定することができる。理解される
であろうが、免疫原性物質の正確な定量が商業もしくは
認可を受ける目的では必要となるであろう。
与するワクチンの用量中の生のブラディゾイトの数を的
確に測定する能力を意味する。マウスの注射およびその
後のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）抗体の検
出、もしくは組織培養物の接種およびその後の細胞障害
性効果（ＣＰＥ）の観察のいずれかを必要とするアッセ
イ法によりＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の免
疫原的定量可能量を決定することができる。理解される
であろうが、免疫原性物質の正確な定量が商業もしくは
認可を受ける目的では必要となるであろう。
【００１６】採取前に濃縮される組織培養物が生産する
生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディ
ゾイトは、商業的規模で安全に調製することができるこ
とを我々は見いだした。また、これらのワクチンはトキ
ソプラスマ症に対する防護に特に有用であることも見い
だした。本発明はこれ以降に更に十分に記述される。
生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディ
ゾイトは、商業的規模で安全に調製することができるこ
とを我々は見いだした。また、これらのワクチンはトキ
ソプラスマ症に対する防護に特に有用であることも見い
だした。本発明はこれ以降に更に十分に記述される。
【００１７】
【発明の実施の形態】先に記載されるように、本発明は
採取前に濃縮された商業的規模の組織培養物が生産する
生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディ
ゾイトを含む。一般的に、本発明において有用なＴ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）は防護用抗体を含み、
かつ複製能を欠損するものである。用語「複製能を欠損
する」は、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）株
が、環境に排出されることがある接合子嚢を生産するこ
とができないことを意味する。本発明において有用な
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の、説明的であ
るが制限的ではない例はＴ−２６３突然変異体であるこ
とがある。この突然変異体はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐ
ｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され
ており、そしてＡＴＣＣ受託番号第Ｎｏ．４０６１５号
が与えられている。
採取前に濃縮された商業的規模の組織培養物が生産する
生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディ
ゾイトを含む。一般的に、本発明において有用なＴ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）は防護用抗体を含み、
かつ複製能を欠損するものである。用語「複製能を欠損
する」は、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）株
が、環境に排出されることがある接合子嚢を生産するこ
とができないことを意味する。本発明において有用な
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の、説明的であ
るが制限的ではない例はＴ−２６３突然変異体であるこ
とがある。この突然変異体はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐ
ｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され
ており、そしてＡＴＣＣ受託番号第Ｎｏ．４０６１５号
が与えられている。
【００１８】変性された生の突然変異体もしくは弱毒化
突然変異体は、「Ｃ」株のようないずれかのＴ．ゴンデ
ィイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）株のタキゾイトを、Ｎ−メ
チル−Ｎ−ニトロ−ニトロソ−グアニジン［Ｐｆｆｅｆ
ｆｅｒｋｒｏｎ，Ｅ．Ｒ．ａｎｄ Ｐｆｅｆｆｅｒｋｒ
ｏｎ，Ｌ．Ｃ．、”Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉ
ｉ：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａ
ｒｙ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｅ
ｍｐｅｒａｔｕｒｅ ＳｅｎｓｉｔｉｖｅＭｕｔａｎｔ
ｓ．”Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐａｒａｓｉｔｏｌ
ｏｇｙ ３９、３６５−３７６（１９７６）］のような
アルキル化剤に露出させ、そして一つもしくは複数の代
謝拮抗薬に耐性を示す突然変異体を単離することにより
作出することができる。その後に、この耐性突然変異体
を更に接合子嚢陰性表現型について選択し、そして最終
的にネコを防護する能力について選択する。
突然変異体は、「Ｃ」株のようないずれかのＴ．ゴンデ
ィイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）株のタキゾイトを、Ｎ−メ
チル−Ｎ−ニトロ−ニトロソ−グアニジン［Ｐｆｆｅｆ
ｆｅｒｋｒｏｎ，Ｅ．Ｒ．ａｎｄ Ｐｆｅｆｆｅｒｋｒ
ｏｎ，Ｌ．Ｃ．、”Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉ
ｉ：Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａ
ｒｙ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｅ
ｍｐｅｒａｔｕｒｅ ＳｅｎｓｉｔｉｖｅＭｕｔａｎｔ
ｓ．”Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐａｒａｓｉｔｏｌ
ｏｇｙ ３９、３６５−３７６（１９７６）］のような
アルキル化剤に露出させ、そして一つもしくは複数の代
謝拮抗薬に耐性を示す突然変異体を単離することにより
作出することができる。その後に、この耐性突然変異体
を更に接合子嚢陰性表現型について選択し、そして最終
的にネコを防護する能力について選択する。
【００１９】Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の
増殖を促進するいずれかの組織培養初代細胞もしくは細
胞株を本発明に従って使用することができる。詳しく説
明すると、組織培養細胞もしくは細胞株を、ウシ胎児の
肺細胞、マウスの星状膠細胞、ヒトの包皮繊維芽細胞
（Ｈｕｍａｎ Ｆｏｒｅｓｋｉｎ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓ
ｔ）、およびヒトの二倍体肺細胞（Ｈｕｍａｎ Ｄｉｐ
ｌｏｉｄ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ）（ＭＲＣ−５）からな
る群から選択することができる。また、クランデル（Ｃ
ｒａｎｄｅｌｌ）細胞株（ネコ）、クッター種の研究用
イヌの腎臓細胞株（Ｃｕｔｔｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ Ｄｏｇ Ｋｉｄｎｅｙ ＣｅｌｌＬｉｎｅ）
（ＣＬＤＫ）、ベロ細胞株（Ｖｅｒｏ Ｃｅｌｌ Ｌｉ
ｎｅ）、およびメーディン−ダービー（Ｍａｄｉｎ−Ｄ
ａｒｂｙ）種のウシの腎臓（ＭＤＢＫ）細胞株も使用す
ることができる。具体的には、ウシ胎児の肺細胞のよう
な増殖の遅い細胞が生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎ
ｄｉｉ）のブラディゾイトを増殖させるのに有用であ
る。これらの細胞は、本発明のＴ．ゴンディイ（Ｔ．ｇ
ｏｎｄｉｉ）の特定の増殖条件に特に適する。
増殖を促進するいずれかの組織培養初代細胞もしくは細
胞株を本発明に従って使用することができる。詳しく説
明すると、組織培養細胞もしくは細胞株を、ウシ胎児の
肺細胞、マウスの星状膠細胞、ヒトの包皮繊維芽細胞
（Ｈｕｍａｎ Ｆｏｒｅｓｋｉｎ Ｆｉｂｒｏｂｌａｓ
ｔ）、およびヒトの二倍体肺細胞（Ｈｕｍａｎ Ｄｉｐ
ｌｏｉｄ Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ）（ＭＲＣ−５）からな
る群から選択することができる。また、クランデル（Ｃ
ｒａｎｄｅｌｌ）細胞株（ネコ）、クッター種の研究用
イヌの腎臓細胞株（Ｃｕｔｔｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ Ｄｏｇ Ｋｉｄｎｅｙ ＣｅｌｌＬｉｎｅ）
（ＣＬＤＫ）、ベロ細胞株（Ｖｅｒｏ Ｃｅｌｌ Ｌｉ
ｎｅ）、およびメーディン−ダービー（Ｍａｄｉｎ−Ｄ
ａｒｂｙ）種のウシの腎臓（ＭＤＢＫ）細胞株も使用す
ることができる。具体的には、ウシ胎児の肺細胞のよう
な増殖の遅い細胞が生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎ
ｄｉｉ）のブラディゾイトを増殖させるのに有用であ
る。これらの細胞は、本発明のＴ．ゴンディイ（Ｔ．ｇ
ｏｎｄｉｉ）の特定の増殖条件に特に適する。
【００２０】理解されるであろうが、既述の、（ｉ）あ
る組織培養物をＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）
に感染させる段階、および（ｉｉ）Ｔ．ゴンディイ
（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイトを増殖させる段階
は、組織培養物中に高生産率のタキゾイトを提供する段
階と見なすことができる。得られる組織培養物はＴ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイトを含み、
これをやはり先に記載される段階（ｉｉｉ）から（ｖｉ
ｉ）までに供することができる。具体的であるが制限的
ではない態様においては、この方法は、ある組織培養物
を当該技術分野に知られる技術により高細胞カウント数
にまで増殖させることを含む。組織培養物を高細胞カウ
ント数にまで増殖させる技術は当該技術分野で知られて
いるものの、本発明では高細胞カウント数が必要とされ
ることの認識は本発明の一部分と見なされる。高細胞カ
ウント数を有する組織培養物を、ある感染多重度（ＭＯ
Ｉ）でＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）に感染さ
せて高生産率のタキゾイトを生産する。用語「感染多重
度（ＭＯＩ）」は、各細胞に感染する最多数の生物体を
生産する細胞の実際のカウント数（数）に対する、細胞
培養物を感染させるのに用いるＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイトの数の比率を意味する。本
発明において有用であるのは０．００１〜１．０の、そ
して好ましくは０．０１〜０．５のＭＯＩである。典型
的には、このＭＯＩは０．０５である。Ｔ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイトは、高生産率のタ
キゾイトを生産するための誘導的、組織培養物増殖条件
下で増殖させる。この条件は、増殖培地の１ミリリット
ル当たりの最多カウント数（数）のタキゾイトを生産す
るのに有効な、選択されるタキゾイト：細胞：増殖培地
比を含む。細胞の至適増殖（最多細胞カウント数／ｍ
Ｌ）を促進するのに必要な増殖培地は、ダルベッコーの
最少必須培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ
ＥｓｓｅｎｔｉｓｌＭｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）、ア
ールのラクトアルブミン加水分解物（Ｅａｒｌ’ｓ Ｌ
ａｃｔａｌｂｕｍｉｎ Ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ）、ア
ールの最少必須培地（Ｅａｒｌ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ
Ｅｓｓｅｎｔｉｓｌ Ｍｅｄｉｕｍ）、高濃度のグルコ
ース、グルコースおよびグルタミンを含むＤＭＥＭから
なる群より選択することができる。タキゾイトの最高増
殖（高生産率）を援助するのに必要な増殖培地は、高濃
度のグルコース、ならびにグルタミンおよびウシ胎児血
清を含むＤＭＥＭを含む。培地の量は、１７５０ｃｍ2
の表面当たり２００ｍＬから１０００ｍＬにまで変化す
ることがある。３００〜５００ｍＬの培地が好んで使用
されるであろう。この組織培養物増殖条件は更に、６．
５と７．５との間のｐＨ、ならびに３４℃と３９℃との
間の温度を含む。この条件が、６．８と７．２との間の
ｐＨ、ならびに３５℃と３７℃との間の温度を含むこと
が好ましい。得られるタキゾイトのカウント数は少なく
とも１×１０5／ｍＬ（組織培養物液）となるはずであ
る。
る組織培養物をＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）
に感染させる段階、および（ｉｉ）Ｔ．ゴンディイ
（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイトを増殖させる段階
は、組織培養物中に高生産率のタキゾイトを提供する段
階と見なすことができる。得られる組織培養物はＴ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイトを含み、
これをやはり先に記載される段階（ｉｉｉ）から（ｖｉ
ｉ）までに供することができる。具体的であるが制限的
ではない態様においては、この方法は、ある組織培養物
を当該技術分野に知られる技術により高細胞カウント数
にまで増殖させることを含む。組織培養物を高細胞カウ
ント数にまで増殖させる技術は当該技術分野で知られて
いるものの、本発明では高細胞カウント数が必要とされ
ることの認識は本発明の一部分と見なされる。高細胞カ
ウント数を有する組織培養物を、ある感染多重度（ＭＯ
Ｉ）でＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）に感染さ
せて高生産率のタキゾイトを生産する。用語「感染多重
度（ＭＯＩ）」は、各細胞に感染する最多数の生物体を
生産する細胞の実際のカウント数（数）に対する、細胞
培養物を感染させるのに用いるＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイトの数の比率を意味する。本
発明において有用であるのは０．００１〜１．０の、そ
して好ましくは０．０１〜０．５のＭＯＩである。典型
的には、このＭＯＩは０．０５である。Ｔ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイトは、高生産率のタ
キゾイトを生産するための誘導的、組織培養物増殖条件
下で増殖させる。この条件は、増殖培地の１ミリリット
ル当たりの最多カウント数（数）のタキゾイトを生産す
るのに有効な、選択されるタキゾイト：細胞：増殖培地
比を含む。細胞の至適増殖（最多細胞カウント数／ｍ
Ｌ）を促進するのに必要な増殖培地は、ダルベッコーの
最少必須培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ
ＥｓｓｅｎｔｉｓｌＭｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）、ア
ールのラクトアルブミン加水分解物（Ｅａｒｌ’ｓ Ｌ
ａｃｔａｌｂｕｍｉｎ Ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ）、ア
ールの最少必須培地（Ｅａｒｌ’ｓ Ｍｉｎｉｍｕｍ
Ｅｓｓｅｎｔｉｓｌ Ｍｅｄｉｕｍ）、高濃度のグルコ
ース、グルコースおよびグルタミンを含むＤＭＥＭから
なる群より選択することができる。タキゾイトの最高増
殖（高生産率）を援助するのに必要な増殖培地は、高濃
度のグルコース、ならびにグルタミンおよびウシ胎児血
清を含むＤＭＥＭを含む。培地の量は、１７５０ｃｍ2
の表面当たり２００ｍＬから１０００ｍＬにまで変化す
ることがある。３００〜５００ｍＬの培地が好んで使用
されるであろう。この組織培養物増殖条件は更に、６．
５と７．５との間のｐＨ、ならびに３４℃と３９℃との
間の温度を含む。この条件が、６．８と７．２との間の
ｐＨ、ならびに３５℃と３７℃との間の温度を含むこと
が好ましい。得られるタキゾイトのカウント数は少なく
とも１×１０5／ｍＬ（組織培養物液）となるはずであ
る。
【００２１】細胞障害性効果が観察されるような十分な
高レベルにまでタキゾイトが増殖した際には、タキゾイ
トの増殖（適切には、過剰増殖として本明細書で称され
る）を阻害し、そしてタキゾイトを刺激化させて組織嚢
を形成させる。これは、その組織培養物に対するＴ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）特異的抗体、および好
ましくはＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のタキ
ゾイト特異的抗体の添加により実施することができる。
このタキゾイト特異的抗体は、タキゾイトによるこの組
織培養物の過剰増殖を阻害するのに十分な量で添加す
る。０．１％〜１０％、および好ましくは３％〜５％の
濃度を利用することができる。タキゾイト特異的抗体の
説明的であるが制限的ではない例は、ヤギ、ウサギ、ウ
マ、およびウシからなる群より選択することができる。
これまでの記載事項から組織嚢中のブラディゾイトが得
られる。
高レベルにまでタキゾイトが増殖した際には、タキゾイ
トの増殖（適切には、過剰増殖として本明細書で称され
る）を阻害し、そしてタキゾイトを刺激化させて組織嚢
を形成させる。これは、その組織培養物に対するＴ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）特異的抗体、および好
ましくはＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のタキ
ゾイト特異的抗体の添加により実施することができる。
このタキゾイト特異的抗体は、タキゾイトによるこの組
織培養物の過剰増殖を阻害するのに十分な量で添加す
る。０．１％〜１０％、および好ましくは３％〜５％の
濃度を利用することができる。タキゾイト特異的抗体の
説明的であるが制限的ではない例は、ヤギ、ウサギ、ウ
マ、およびウシからなる群より選択することができる。
これまでの記載事項から組織嚢中のブラディゾイトが得
られる。
【００２２】組織嚢中のブラディゾイトを、それらの内
のかなりの数のものが保存および／またはワクチン製剤
の条件が原因となる消耗を切り抜けるような高生産率に
まで増殖させる。用語「高生産率」は、採取された組織
培養物の濃縮を伴わずに有効なワクチンへと製剤するこ
とかできる、多数の採取前の組織培養物が生産する生の
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイ
トを意味する。保存および製剤条件下での生のブラディ
ゾイトの高率消耗のために、本明細書では高生産率の生
のブラディゾイトが要求される。詳しく説明すると、安
定用化学物質の添加、液体窒素中での凍結、および凍結
乾燥のようなワクチン製剤段階が、ブラディゾイトの生
存率の２〜４ｌｏｇの減少をもたらす。従って、組織培
養採取物の各ミリリットル中約２．５×１０5の生のブ
ラディゾイトを例とする高生産率の生のブラディゾイト
を提供すると有利である。
のかなりの数のものが保存および／またはワクチン製剤
の条件が原因となる消耗を切り抜けるような高生産率に
まで増殖させる。用語「高生産率」は、採取された組織
培養物の濃縮を伴わずに有効なワクチンへと製剤するこ
とかできる、多数の採取前の組織培養物が生産する生の
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイ
トを意味する。保存および製剤条件下での生のブラディ
ゾイトの高率消耗のために、本明細書では高生産率の生
のブラディゾイトが要求される。詳しく説明すると、安
定用化学物質の添加、液体窒素中での凍結、および凍結
乾燥のようなワクチン製剤段階が、ブラディゾイトの生
存率の２〜４ｌｏｇの減少をもたらす。従って、組織培
養採取物の各ミリリットル中約２．５×１０5の生のブ
ラディゾイトを例とする高生産率の生のブラディゾイト
を提供すると有利である。
【００２３】組織培養物への酵素の添加により、組織培
養物中に残存するタキゾイトの数が減少し、そして生の
ブラディゾイトが組織嚢から放出される。蛋白質分解酵
素を、０．０００１％〜５％の、そして好ましくは０．
０００１％〜０．１％ ｗ／ｖの濃度で利用することが
できる。本発明において有用な酵素は、ペプシン、トリ
プシン、およびキモトリプシンからなる群より選択され
る蛋白質分解酵素であることがある。
養物中に残存するタキゾイトの数が減少し、そして生の
ブラディゾイトが組織嚢から放出される。蛋白質分解酵
素を、０．０００１％〜５％の、そして好ましくは０．
０００１％〜０．１％ ｗ／ｖの濃度で利用することが
できる。本発明において有用な酵素は、ペプシン、トリ
プシン、およびキモトリプシンからなる群より選択され
る蛋白質分解酵素であることがある。
【００２４】得られる組織培養物質を、容器表面に吸着
することがある細胞、組織嚢、および生のブラディゾイ
トの化学的もしくは機械的除去により採取することがで
きる。機械的手段は、ガラスビーズ、高速撹拌、もしく
はこすりとりを含むことができる。化学的手段は、トリ
プシンのような酵素の添加を含むことができる。Ｔ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の採取前に濃縮された
組織培養物を商業的な規模で調製する際には、典型的に
は、ローラーボトル、生物反応装置、もしくは類似容器
のような大容量の組織培養系（容器）が利用される。生
物反応装置が好まれる。これらの容器を使用すると、少
なくとも１０リットルのブラディゾイト採取物質を各バ
ッチ当たりに取得することができる。詳しく説明する
と、本発明に記載される商業的規模の組織培養物は、採
取液のミリリットル当たり５００，０００もの多量なブ
ラディゾイトを生産することができる。従って本発明
は、生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラ
ディゾイトを調製するための簡便かつコスト有効的な方
法を提供する。それとは対照的に、マウスにおける商業
的規模のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の調製
法は、マウス当たり約１０用量のワクチンを生産する。
マウスには注射器／針を用いてＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）の注射を施し（安全でない業務）、これ
を少なくとも２８日間は維持および給餌および保護し、
そしてその後に採取を行う必要がある。この方法は極端
に労力集約的でありかつ費用がかかる。
することがある細胞、組織嚢、および生のブラディゾイ
トの化学的もしくは機械的除去により採取することがで
きる。機械的手段は、ガラスビーズ、高速撹拌、もしく
はこすりとりを含むことができる。化学的手段は、トリ
プシンのような酵素の添加を含むことができる。Ｔ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の採取前に濃縮された
組織培養物を商業的な規模で調製する際には、典型的に
は、ローラーボトル、生物反応装置、もしくは類似容器
のような大容量の組織培養系（容器）が利用される。生
物反応装置が好まれる。これらの容器を使用すると、少
なくとも１０リットルのブラディゾイト採取物質を各バ
ッチ当たりに取得することができる。詳しく説明する
と、本発明に記載される商業的規模の組織培養物は、採
取液のミリリットル当たり５００，０００もの多量なブ
ラディゾイトを生産することができる。従って本発明
は、生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラ
ディゾイトを調製するための簡便かつコスト有効的な方
法を提供する。それとは対照的に、マウスにおける商業
的規模のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の調製
法は、マウス当たり約１０用量のワクチンを生産する。
マウスには注射器／針を用いてＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）の注射を施し（安全でない業務）、これ
を少なくとも２８日間は維持および給餌および保護し、
そしてその後に採取を行う必要がある。この方法は極端
に労力集約的でありかつ費用がかかる。
【００２５】本発明の方法を、典型的には密閉系（容
器）内で実施するのが本発明の特徴でもある。そのため
細胞の接種のための注射器および針は全く必要ない。実
際、密閉系の使用により、その方法を実施する個体の感
染が回避される。従って本発明は、組織培養物が生産す
る生のブラディゾイトおよびワクチンを調製するための
安全な方法が提供される。
器）内で実施するのが本発明の特徴でもある。そのため
細胞の接種のための注射器および針は全く必要ない。実
際、密閉系の使用により、その方法を実施する個体の感
染が回避される。従って本発明は、組織培養物が生産す
る生のブラディゾイトおよびワクチンを調製するための
安全な方法が提供される。
【００２６】ワクチンもしくは診断薬を、本発明の生の
ブラディゾイトで製剤することができる。このワクチン
は、液体、凍結、もしくは凍結乾燥状態であることがで
き、そしてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、糖、お
よび血清のような化学物質の添加によって採取された組
織培養物を安定化させることにより製剤することができ
る。典型的には、保存化物質を液体窒素内で凍結させ
る。用量当たり１０という少ないブラディゾイトが接合
子嚢排出に対する防護を提供することができる。典型的
にはこのワクチンは、用量当たり約１００〜２００のブ
ラディゾイトを含む。このワクチンが主にブラディゾイ
トからできていることは本発明特有の特徴である。すな
わちこのワクチンはタキゾイトを含まないか、もしくは
実質的に含まない。
ブラディゾイトで製剤することができる。このワクチン
は、液体、凍結、もしくは凍結乾燥状態であることがで
き、そしてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、糖、お
よび血清のような化学物質の添加によって採取された組
織培養物を安定化させることにより製剤することができ
る。典型的には、保存化物質を液体窒素内で凍結させ
る。用量当たり１０という少ないブラディゾイトが接合
子嚢排出に対する防護を提供することができる。典型的
にはこのワクチンは、用量当たり約１００〜２００のブ
ラディゾイトを含む。このワクチンが主にブラディゾイ
トからできていることは本発明特有の特徴である。すな
わちこのワクチンはタキゾイトを含まないか、もしくは
実質的に含まない。
【００２７】認識されるであろうが、ワクチン中のブラ
ディゾイトに伴うタキゾイトの存在が偽りの抗原定量値
の原因となることがあり、これはタキゾイトが、ネコが
接合子嚢を排出するのを妨げないためである。タキゾイ
トならびにブラディゾイトを含むワクチンはネコの診断
用テストにおいて偽りの陽性セロコンバージョンを生じ
ることがある。実際、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄ
ｉｉ）ワクチン中の有意な数のタキゾイトの存在は、商
業的規模の組織培養物が生産するＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）ワクチンの有効性を「妨害」するであ
ろう。組織培養物が生産するＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇ
ｏｎｄｉｉ）を含むワクチンの信頼性が高い抗原量を可
能にするためには、ワクチンのタキゾイト含有量を調節
する必要がある。ワクチンからタキゾイトを本質的に排
除することの必要性の方がむしろ重要であり、それはタ
キゾイトはブラディゾイトと比較して組織培養物中での
増殖がより良好であるためである。規制的および／また
は商業的見地から、ワクチン内の実質的な数のタキゾイ
トの存在は望ましくない。
ディゾイトに伴うタキゾイトの存在が偽りの抗原定量値
の原因となることがあり、これはタキゾイトが、ネコが
接合子嚢を排出するのを妨げないためである。タキゾイ
トならびにブラディゾイトを含むワクチンはネコの診断
用テストにおいて偽りの陽性セロコンバージョンを生じ
ることがある。実際、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄ
ｉｉ）ワクチン中の有意な数のタキゾイトの存在は、商
業的規模の組織培養物が生産するＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）ワクチンの有効性を「妨害」するであ
ろう。組織培養物が生産するＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇ
ｏｎｄｉｉ）を含むワクチンの信頼性が高い抗原量を可
能にするためには、ワクチンのタキゾイト含有量を調節
する必要がある。ワクチンからタキゾイトを本質的に排
除することの必要性の方がむしろ重要であり、それはタ
キゾイトはブラディゾイトと比較して組織培養物中での
増殖がより良好であるためである。規制的および／また
は商業的見地から、ワクチン内の実質的な数のタキゾイ
トの存在は望ましくない。
【００２８】本発明の実施の際には、このワクチンをネ
コに投与してネコが接合子嚢を排出するのを防ぐことが
できる。この投与は、引用により本明細書に取り込まれ
る同時係属中の米国特許出願第０８／１１８，９０５号
に記載される独特なストロー技術を介して経口的に行わ
れる。ネコへの他の投与法には、筋肉内的、皮下的、腸
内的、もしくは膣内的投与が含まれるであろう。
コに投与してネコが接合子嚢を排出するのを防ぐことが
できる。この投与は、引用により本明細書に取り込まれ
る同時係属中の米国特許出願第０８／１１８，９０５号
に記載される独特なストロー技術を介して経口的に行わ
れる。ネコへの他の投与法には、筋肉内的、皮下的、腸
内的、もしくは膣内的投与が含まれるであろう。
【００２９】本発明の実施の際にはまた、組織培養物が
生産するＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を含む
診断薬を、トキソプラスマ症の存在もしくは非存在を検
出するのに用いることができる。現在、Ｔ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の検出用の全ての診断用テスト
はタキゾイドを含む。本発明に従って生産される生のブ
ラディゾイトは、診断用テストにおける抗原としての利
用により良く適合するであろう。これは、生のブラディ
ゾイトがネコにとって防護的である一方で、生のタキゾ
イトはネコにおける抗体応答を刺激化することが可能で
あるもののネコを防護することはできないためである。
本発明に従って生産される生のブラディゾイトもしくは
不活化させた（死滅化させた）ブラディゾイトを用いて
診断テスト系に有用なマトリックスをコートすることが
できる。このマトリックスの例は、ＥＬＩＳＡプレー
ト、ポリマー、もしくは濾紙細片などであることがあ
る。生のブラディゾイトもしくは死滅化ブラディゾイト
でのマトリックスのコーティング後には、このマトリッ
クスを試薬類および動物からの血清と混合することがで
きる。血清が、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）
感染を有し、かつ再露出から保護されている動物からの
ものである場合には、ブラディゾイト（タキゾイトの代
わりに）の使用によりこの保護状態が検出されるはずで
ある。
生産するＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を含む
診断薬を、トキソプラスマ症の存在もしくは非存在を検
出するのに用いることができる。現在、Ｔ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の検出用の全ての診断用テスト
はタキゾイドを含む。本発明に従って生産される生のブ
ラディゾイトは、診断用テストにおける抗原としての利
用により良く適合するであろう。これは、生のブラディ
ゾイトがネコにとって防護的である一方で、生のタキゾ
イトはネコにおける抗体応答を刺激化することが可能で
あるもののネコを防護することはできないためである。
本発明に従って生産される生のブラディゾイトもしくは
不活化させた（死滅化させた）ブラディゾイトを用いて
診断テスト系に有用なマトリックスをコートすることが
できる。このマトリックスの例は、ＥＬＩＳＡプレー
ト、ポリマー、もしくは濾紙細片などであることがあ
る。生のブラディゾイトもしくは死滅化ブラディゾイト
でのマトリックスのコーティング後には、このマトリッ
クスを試薬類および動物からの血清と混合することがで
きる。血清が、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）
感染を有し、かつ再露出から保護されている動物からの
ものである場合には、ブラディゾイト（タキゾイトの代
わりに）の使用によりこの保護状態が検出されるはずで
ある。
【００３０】以下の実施例は、本発明の具体的態様を更
に詳しく説明する。しかしながらこれらの実施例は、こ
れまでの開示で十分に特徴が記載されている本発明の範
囲を制限することを意味するのではない。
に詳しく説明する。しかしながらこれらの実施例は、こ
れまでの開示で十分に特徴が記載されている本発明の範
囲を制限することを意味するのではない。
【００３１】
【実施例】実施例１ ブラディゾイトを含むＴ−２６３組織嚢の組織培養物増
殖の特定の実施例が以下のとうりに開示される。マウス
腹膜内滲出物中で生産された親種（Ｍａｓｔｅｒ Ｓｅ
ｅｄ）から取得され、かつ５×１０5／ｍＬのタキゾイ
トを含む実用種（ｗｏｒｋｉｎｇ ｓｅｅｄ）タキゾイ
トのバイアル瓶を解凍し、そして１×１０6の細胞を含
む融合性のヒト包皮繊維芽細胞（Ｈｕｍａｎ Ｆｏｒｅ
ｓｋｉｎＦｉｂｒｏｂｌａｓｔ）（ＨＳＦ）の単層培養
物に添加した。従ってこのＭＯＩは０．５であった。こ
の組織培養物を細胞障害性効果（ＣＰＥ）が終了するま
で発育させた。この最初の組織培養物増殖（継代）は、
タキゾイトを組織培養に適合させるために実施した。ウ
シ胎児の肺（Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ＢｏｖｉｎｅＬｕｎ
ｇ）（ＥＢＬ）細胞を、ダルベッコーの最少必須培地
（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎ
ｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）＋１０％のウシ
胎児血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）
（ＦＢＳ）＋グルタミンおよびゲンタマイシンを用いて
７５ｃｍ2中で増殖させた。この細胞が融合状態になっ
た際にこの培地を除去し、そして１２ｍｌ／フラスコの
トキソプラスマ保持用培地（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ Ｍ
ａｉｎｔｅｎａｎｃｅ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＴＭＭ＝４５
００ｍｇ／ｍＬのグルコース、３％のＦＢＳ、１％の２
ｍＭグルタミン、および５０ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシ
ンを含むＤＭＥＭ）を添加した。この後にＨＳＦ細胞培
養物からの５×１０5のタキゾイトを添加した。このフ
ラスコを３７℃、５％のＣＯ2の雰囲気下で４日間イン
キュベートした。４日目に、ＥＬＩＳＡにより陽性であ
ることが決定されている５％のヤギもしくはウサギの抗
トキソプラスマ血清を含む新鮮なＴＭＭを各フラスコに
添加した。これらのフラスコを既述の条件下で更に３日
間インキュベートした。７日目にはこれらの嚢を増殖用
表面からかき取ることにより採取した。この方法を用い
るとフラスコ当たり約１００，０００のブラディゾイト
を含む約２００の嚢、すなわち採取した組織培養採取物
に対してミリリットル当たり約８，０００の生のブラデ
ィゾイトが取得された。
殖の特定の実施例が以下のとうりに開示される。マウス
腹膜内滲出物中で生産された親種（Ｍａｓｔｅｒ Ｓｅ
ｅｄ）から取得され、かつ５×１０5／ｍＬのタキゾイ
トを含む実用種（ｗｏｒｋｉｎｇ ｓｅｅｄ）タキゾイ
トのバイアル瓶を解凍し、そして１×１０6の細胞を含
む融合性のヒト包皮繊維芽細胞（Ｈｕｍａｎ Ｆｏｒｅ
ｓｋｉｎＦｉｂｒｏｂｌａｓｔ）（ＨＳＦ）の単層培養
物に添加した。従ってこのＭＯＩは０．５であった。こ
の組織培養物を細胞障害性効果（ＣＰＥ）が終了するま
で発育させた。この最初の組織培養物増殖（継代）は、
タキゾイトを組織培養に適合させるために実施した。ウ
シ胎児の肺（Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ＢｏｖｉｎｅＬｕｎ
ｇ）（ＥＢＬ）細胞を、ダルベッコーの最少必須培地
（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎ
ｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）＋１０％のウシ
胎児血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）
（ＦＢＳ）＋グルタミンおよびゲンタマイシンを用いて
７５ｃｍ2中で増殖させた。この細胞が融合状態になっ
た際にこの培地を除去し、そして１２ｍｌ／フラスコの
トキソプラスマ保持用培地（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ Ｍ
ａｉｎｔｅｎａｎｃｅ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＴＭＭ＝４５
００ｍｇ／ｍＬのグルコース、３％のＦＢＳ、１％の２
ｍＭグルタミン、および５０ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシ
ンを含むＤＭＥＭ）を添加した。この後にＨＳＦ細胞培
養物からの５×１０5のタキゾイトを添加した。このフ
ラスコを３７℃、５％のＣＯ2の雰囲気下で４日間イン
キュベートした。４日目に、ＥＬＩＳＡにより陽性であ
ることが決定されている５％のヤギもしくはウサギの抗
トキソプラスマ血清を含む新鮮なＴＭＭを各フラスコに
添加した。これらのフラスコを既述の条件下で更に３日
間インキュベートした。７日目にはこれらの嚢を増殖用
表面からかき取ることにより採取した。この方法を用い
るとフラスコ当たり約１００，０００のブラディゾイト
を含む約２００の嚢、すなわち採取した組織培養採取物
に対してミリリットル当たり約８，０００の生のブラデ
ィゾイトが取得された。
【００３２】ブラディゾイトを含むこれらの生の組織嚢
を用いてワクチンを調製した。組織嚢が未処理のままで
ある（ペプシン未処理）ワクチン、あるいはこの組織嚢
を３７℃下、０．０５％のペプシンで１０分間消化させ
た（ペプシン消化）ワクチンを調製した。後者の処理
は、残存するタキゾイトを死滅させるばかりでなくブラ
ディゾイトを放出させもする。このワクチン製剤を組織
嚢もしくはブラディゾイトの具体的な量を含むように希
釈し、そして各調剤はネコのワクチン接種を行う時点で
マウスにおいて逆力価測定した。
を用いてワクチンを調製した。組織嚢が未処理のままで
ある（ペプシン未処理）ワクチン、あるいはこの組織嚢
を３７℃下、０．０５％のペプシンで１０分間消化させ
た（ペプシン消化）ワクチンを調製した。後者の処理
は、残存するタキゾイトを死滅させるばかりでなくブラ
ディゾイトを放出させもする。このワクチン製剤を組織
嚢もしくはブラディゾイトの具体的な量を含むように希
釈し、そして各調剤はネコのワクチン接種を行う時点で
マウスにおいて逆力価測定した。
【００３３】５匹のネコを、ペプシン未処理の組織嚢の
形態の１０、１００、もしくは１０００のブラディゾイ
トのいずれかでワクチン接種した。追加的な５匹のネコ
（調剤当たり）をペプシン消化した嚢の形態の１０、１
００、もしくは１０００のブラディゾイトのいずれかで
ワクチン接種した。用量あたりのブラディゾイト濃度は
マスウにおける逆力価測定により確認した。初回ワクチ
ン接種後２１日目には、全てのネコに、それぞれ１、１
０、もしくは１００のブラディゾイトを含む製剤でのブ
ースター注射を施した。初回ワクチン接種後４３日目に
は、Ｔ−２６５と表示される有毒の接合子嚢排出性Ｔ．
ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）株の１０，０００の
ブラディゾイトで全てのネコを刺激化した。ワクチン接
種を施さなかった５匹のネコを刺激化して対象として用
いた。ワクチン接種後３日目〜１４日目、およびブース
ター注射の際、ならびに刺激化後１４日の間、接合子嚢
の排出についてふん便試料を調査した。このようなふん
便調査は接合子嚢についてのふん便試料の顕微鏡的判定
を必要とした。その上、このふん便試料を遠心分離し、
そして上清を取り出し、そしてマウス内に腹膜内注射
（ＩＰ）した。注射後４週間目にこれらのマウスの脱血
を行い、そしてＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）
のセロコンバージョンについて検査した。ふん便の上清
を注射したマウスのセロコンバージョン（間接的凝集力
価は≧１：４０である）により、検査したふん便試料中
には少なくとも一つの接合子嚢の排出が存在したことが
示される。
形態の１０、１００、もしくは１０００のブラディゾイ
トのいずれかでワクチン接種した。追加的な５匹のネコ
（調剤当たり）をペプシン消化した嚢の形態の１０、１
００、もしくは１０００のブラディゾイトのいずれかで
ワクチン接種した。用量あたりのブラディゾイト濃度は
マスウにおける逆力価測定により確認した。初回ワクチ
ン接種後２１日目には、全てのネコに、それぞれ１、１
０、もしくは１００のブラディゾイトを含む製剤でのブ
ースター注射を施した。初回ワクチン接種後４３日目に
は、Ｔ−２６５と表示される有毒の接合子嚢排出性Ｔ．
ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）株の１０，０００の
ブラディゾイトで全てのネコを刺激化した。ワクチン接
種を施さなかった５匹のネコを刺激化して対象として用
いた。ワクチン接種後３日目〜１４日目、およびブース
ター注射の際、ならびに刺激化後１４日の間、接合子嚢
の排出についてふん便試料を調査した。このようなふん
便調査は接合子嚢についてのふん便試料の顕微鏡的判定
を必要とした。その上、このふん便試料を遠心分離し、
そして上清を取り出し、そしてマウス内に腹膜内注射
（ＩＰ）した。注射後４週間目にこれらのマウスの脱血
を行い、そしてＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）
のセロコンバージョンについて検査した。ふん便の上清
を注射したマウスのセロコンバージョン（間接的凝集力
価は≧１：４０である）により、検査したふん便試料中
には少なくとも一つの接合子嚢の排出が存在したことが
示される。
【００３４】表１は、いずれかの製剤でのワクチン接種
もしくはブースター注射後には接合子嚢は全く排出され
ないことを示す。６つのワクチンの内の５つがネコの防
護をもたらしたたことを注記する。１００パーセント
（５／５）の対照用のネコが感染しており、そして刺激
化後に接合子嚢を排出した。個々のワクチンの結果の分
析により、ペプシン処理化嚢ワクチンはより一貫した防
護をもたらすことが示される。１０のブラディゾイトを
含む投与剤は刺激化後に４０％のネコを防護した。１０
０のブラディゾイトを含むワクチンは８０％のネコを防
護した。１０００のブラディゾイトを含むワクチンは刺
激化後に６０％のネコを防護した。ペプシン未処理の嚢
から調製されたワクチン（ブラディゾイトは嚢から放出
されておらず、かつタキゾイトが混在していた）は、１
０のブラディゾイトの用量レベルでは８０％のネコを、
１００のブラディゾイトの用量レベルでは０％を、そし
て１０００のブラディゾイトの用量レベルでは７５％の
ネコを防護した。この矛盾は商業用製品にとっては望ま
しくない。従って、ブラディゾイトの放出およびタキゾ
イトの破壊をもたらす組織培養物中で増殖させた組織嚢
のペプシン消化が、ワクチンの商業用製品にとっては好
ましい。
もしくはブースター注射後には接合子嚢は全く排出され
ないことを示す。６つのワクチンの内の５つがネコの防
護をもたらしたたことを注記する。１００パーセント
（５／５）の対照用のネコが感染しており、そして刺激
化後に接合子嚢を排出した。個々のワクチンの結果の分
析により、ペプシン処理化嚢ワクチンはより一貫した防
護をもたらすことが示される。１０のブラディゾイトを
含む投与剤は刺激化後に４０％のネコを防護した。１０
０のブラディゾイトを含むワクチンは８０％のネコを防
護した。１０００のブラディゾイトを含むワクチンは刺
激化後に６０％のネコを防護した。ペプシン未処理の嚢
から調製されたワクチン（ブラディゾイトは嚢から放出
されておらず、かつタキゾイトが混在していた）は、１
０のブラディゾイトの用量レベルでは８０％のネコを、
１００のブラディゾイトの用量レベルでは０％を、そし
て１０００のブラディゾイトの用量レベルでは７５％の
ネコを防護した。この矛盾は商業用製品にとっては望ま
しくない。従って、ブラディゾイトの放出およびタキゾ
イトの破壊をもたらす組織培養物中で増殖させた組織嚢
のペプシン消化が、ワクチンの商業用製品にとっては好
ましい。
【００３５】このワクチンをいずれかの所望の様式でネ
コに投与することができる。現在では経口様式の投与が
好まれる。０．１ｍＬ〜２．０ｍＬ、および好ましくは
０．２ｍＬ〜１．０ｍＬの用量をネコ当たりに使用する
ことができる。これまでに記載されるワクチンは液体で
あったが、凍結乾燥形態もしくは凍結形態のワクチンを
作成および使用することは当業者の技術範囲内に含まれ
る。
コに投与することができる。現在では経口様式の投与が
好まれる。０．１ｍＬ〜２．０ｍＬ、および好ましくは
０．２ｍＬ〜１．０ｍＬの用量をネコ当たりに使用する
ことができる。これまでに記載されるワクチンは液体で
あったが、凍結乾燥形態もしくは凍結形態のワクチンを
作成および使用することは当業者の技術範囲内に含まれ
る。
【００３６】組織培養物中で増殖させたＴ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）ワクチンはネコを免疫化し、そ
してそのためそれらのネコが有毒な排出性株に後に露出
されてもにネコが排出を行わないようにすることができ
る。追加的には、組織培養物中で調製されるブラディゾ
イトを診断アッセイの開発に使用することができる。表
１は本発明を更に詳しく説明する。
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）ワクチンはネコを免疫化し、そ
してそのためそれらのネコが有毒な排出性株に後に露出
されてもにネコが排出を行わないようにすることができ
る。追加的には、組織培養物中で調製されるブラディゾ
イトを診断アッセイの開発に使用することができる。表
１は本発明を更に詳しく説明する。
【００３７】実施例２ ローラーボトル中でのＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄ
ｉｉ）のブラディゾイトの、採取前に濃縮された組織培
養物の調製のための増殖条件を以下に更に詳しく説明す
る。
ｉｉ）のブラディゾイトの、採取前に濃縮された組織培
養物の調製のための増殖条件を以下に更に詳しく説明す
る。
【００３８】実用種の調製． ＨＳＦ細胞のような迅速
に増殖する細胞を使用して、実施例１に記載される方法
を介して親種から高生産率の実用種Ｔ．ゴンディイ
（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイトを生産した。
に増殖する細胞を使用して、実施例１に記載される方法
を介して親種から高生産率の実用種Ｔ．ゴンディイ
（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイトを生産した。
【００３９】最少容量の培地中でのＥＢＬ細胞増殖の至
適化． ＥＢＬ細胞を、様々な容量の細胞増殖用培地を
含むローラーボトル内に入れる。使用する培地はＤＭＥ
Ｍ＋１０％のウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ
Ｓｅｒｕｍ）である。最少量の溶媒中の最大増殖率を
決定する目的で、８時間の間隔をおいてこれらのローラ
ーボトルからの試料についての細胞計数を行う。実用種
での感染についての至適時間を、最少容量の培地中の最
大数の健常細胞の生産にかかる時間を評定することによ
り決定する。３００ｍＬのダルベッコーの最少必須培地
（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎ
ｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）＋１０％のウシ
胎児血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）が
これらの細胞を９Ｌのローラーボトル中で７日以内に融
合状態にまで増殖させるであろうことが見いだされた。
適化． ＥＢＬ細胞を、様々な容量の細胞増殖用培地を
含むローラーボトル内に入れる。使用する培地はＤＭＥ
Ｍ＋１０％のウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ
Ｓｅｒｕｍ）である。最少量の溶媒中の最大増殖率を
決定する目的で、８時間の間隔をおいてこれらのローラ
ーボトルからの試料についての細胞計数を行う。実用種
での感染についての至適時間を、最少容量の培地中の最
大数の健常細胞の生産にかかる時間を評定することによ
り決定する。３００ｍＬのダルベッコーの最少必須培地
（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎ
ｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）＋１０％のウシ
胎児血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ）が
これらの細胞を９Ｌのローラーボトル中で７日以内に融
合状態にまで増殖させるであろうことが見いだされた。
【００４０】ＭＯＩの決定． 前段階からのＥＢＬ細胞
が融合状態（１×１０6／ｍＬ）になる際に、これらに
ＤＭＥＭ＋４．５ｇ／ｍＬのグルコース、３％のＦＢ
Ｓ、１％の２ｍＭグルタミン、および５０ｍｇ／ｍＬの
ゲンタマイシンを含む新鮮な培地を再供給する。その後
にこれらを、１×１０3／ｍＬ〜１×１０7／ｍＬ（組織
培養用培地）の範囲にわたるカウント数のＨＳＦ中で増
殖させたタキゾイトで感染させる。タキゾイトの継代中
に試料を採取し、そして１ｍＬの試料中のタキゾイト数
を計数する。組織培養用培地の１ミリリットル当たりに
最多のタキゾイトを生産するＭＯＩを算出する。このよ
うなＭＯＩは一般的に０．０１と０．５との間であり、
そしてローラーボトル系にとって最高のＭＯＩは０．０
５である。このＭＯＩは、組織培養用培地の１ミリリッ
トル当たりの至適生産率のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏ
ｎｄｉｉ）のタキゾイトを生産させるように各細胞を感
染するのに要するＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）のタキゾイト数を提供する。
が融合状態（１×１０6／ｍＬ）になる際に、これらに
ＤＭＥＭ＋４．５ｇ／ｍＬのグルコース、３％のＦＢ
Ｓ、１％の２ｍＭグルタミン、および５０ｍｇ／ｍＬの
ゲンタマイシンを含む新鮮な培地を再供給する。その後
にこれらを、１×１０3／ｍＬ〜１×１０7／ｍＬ（組織
培養用培地）の範囲にわたるカウント数のＨＳＦ中で増
殖させたタキゾイトで感染させる。タキゾイトの継代中
に試料を採取し、そして１ｍＬの試料中のタキゾイト数
を計数する。組織培養用培地の１ミリリットル当たりに
最多のタキゾイトを生産するＭＯＩを算出する。このよ
うなＭＯＩは一般的に０．０１と０．５との間であり、
そしてローラーボトル系にとって最高のＭＯＩは０．０
５である。このＭＯＩは、組織培養用培地の１ミリリッ
トル当たりの至適生産率のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏ
ｎｄｉｉ）のタキゾイトを生産させるように各細胞を感
染するのに要するＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）のタキゾイト数を提供する。
【００４１】タキゾイトの至適増殖． ＭＯＩを決定し
た後、一連の新しいローラーボトルを調製する。これら
のローラーボトルは前段階で特定される培地を含み、そ
してｐＨ６．０と８．０との間の範囲の組織培養物のｐ
Ｈを調製するために様々な緩衝液が添加されている。イ
ンキュベーション温度（３７℃）、酸素圧、およびＣＯ
2レベルはこの実験については一定に保持される。試料
は８〜１２時間の間隔をおいて取り出し、そしてタキゾ
イトを計数する。最多数のタキゾイトが生産されるｐＨ
は６．８と７．４との間である。タキゾイトの至適生産
率は、３５℃と３７℃との間の温度でもたらされる。従
って、タキゾイトは６．８と７．４との間のｐＨ、３７
℃付近の温度で、追加的酸素およびＣＯ2の供給を全く
伴わずに最も多く生産される。
た後、一連の新しいローラーボトルを調製する。これら
のローラーボトルは前段階で特定される培地を含み、そ
してｐＨ６．０と８．０との間の範囲の組織培養物のｐ
Ｈを調製するために様々な緩衝液が添加されている。イ
ンキュベーション温度（３７℃）、酸素圧、およびＣＯ
2レベルはこの実験については一定に保持される。試料
は８〜１２時間の間隔をおいて取り出し、そしてタキゾ
イトを計数する。最多数のタキゾイトが生産されるｐＨ
は６．８と７．４との間である。タキゾイトの至適生産
率は、３５℃と３７℃との間の温度でもたらされる。従
って、タキゾイトは６．８と７．４との間のｐＨ、３７
℃付近の温度で、追加的酸素およびＣＯ2の供給を全く
伴わずに最も多く生産される。
【００４２】高生産率のブラディゾイトの調製． タキ
ゾイトを刺激化してそれらを次の発生段階（ブラディゾ
イトを含む組織嚢）に転化させるが、この際にその環境
はそれらの生存に不利なものとなる。ブラディゾイトの
増殖は、組織培養物中のタキゾイトを刺激化させて組織
嚢へと転化させることで開始する。これは、ＤＭＥＭ＋
４．５ｇ／ｍＬのグルコース、３％のＦＢＳ、１％の２
ｍＭグルタミン、５０ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシン、お
よびＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイ
ト特異的抗血清を含む新鮮な培地を感染組織培養物に再
供給することにより達成される。このような抗血清は、
０．１％と１０％との間、好ましくは５％付近の量で添
加する。この抗血清の添加後に、タキゾイトの増殖用の
条件を最少限度に留めると、それらはブラディゾイトを
含む組織嚢へと変異し始める。組織嚢が形成され始める
時点で、ブラディゾイトの増殖に特異的な新鮮な栄養素
を含む増殖用培地（このセクションに既述されたものと
同一の新鮮な培地）を供給する。この組織培養物のイン
キュベーションは、少なくとも２．５×１０5／ｍＬ
（組織培養液）の至適ブラディゾイトカウント数が生じ
るまで継続させる。このカウント数は、その培養物の顕
微鏡的観察、次いで嚢内のブラディゾイトの計数、およ
び追加的にその組織培養物表面の指定される領域内の嚢
の数（ローラーボトル内のｃｍ2当たりの嚢、もしくは
生物反応装置内のビーズ当たりの嚢）の計数を行うこと
により決定される。
ゾイトを刺激化してそれらを次の発生段階（ブラディゾ
イトを含む組織嚢）に転化させるが、この際にその環境
はそれらの生存に不利なものとなる。ブラディゾイトの
増殖は、組織培養物中のタキゾイトを刺激化させて組織
嚢へと転化させることで開始する。これは、ＤＭＥＭ＋
４．５ｇ／ｍＬのグルコース、３％のＦＢＳ、１％の２
ｍＭグルタミン、５０ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシン、お
よびＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のタキゾイ
ト特異的抗血清を含む新鮮な培地を感染組織培養物に再
供給することにより達成される。このような抗血清は、
０．１％と１０％との間、好ましくは５％付近の量で添
加する。この抗血清の添加後に、タキゾイトの増殖用の
条件を最少限度に留めると、それらはブラディゾイトを
含む組織嚢へと変異し始める。組織嚢が形成され始める
時点で、ブラディゾイトの増殖に特異的な新鮮な栄養素
を含む増殖用培地（このセクションに既述されたものと
同一の新鮮な培地）を供給する。この組織培養物のイン
キュベーションは、少なくとも２．５×１０5／ｍＬ
（組織培養液）の至適ブラディゾイトカウント数が生じ
るまで継続させる。このカウント数は、その培養物の顕
微鏡的観察、次いで嚢内のブラディゾイトの計数、およ
び追加的にその組織培養物表面の指定される領域内の嚢
の数（ローラーボトル内のｃｍ2当たりの嚢、もしくは
生物反応装置内のビーズ当たりの嚢）の計数を行うこと
により決定される。
【００４３】残存するタキゾイトの除去． ブラディゾ
イトのカウント数が最大値である際に、この組織培養物
を、０．０１％と１．０％との間の範囲にわたる濃度の
ペプシン、トリプシン、もしくはキモトリプシンのよう
な酵素で処理する。
イトのカウント数が最大値である際に、この組織培養物
を、０．０１％と１．０％との間の範囲にわたる濃度の
ペプシン、トリプシン、もしくはキモトリプシンのよう
な酵素で処理する。
【００４４】ブラディゾイトの採取． 酵素処理段階後
にその組織培養物を採取する。採取は、その組織培養物
への更に別の酵素（最高１．０％までの濃度のトリプシ
ン）の添加によるか、あるいは細胞が接着している表面
からその細胞をかきとるためのガラスビーズもしくは類
似マトリックスを添加することによるように細胞を機械
的に除去することによって、細胞、組織嚢、およびブラ
ディゾイトを無菌的に除去することにより実施すること
ができる。採取が終了した際には、この組織培養採取物
質は少なくとも２．５×１０5のブラディゾイト／ｍＬ
を含むはずであり、そしてこれらを採取後濃縮を伴うこ
となくワクチンへと直接調製することができる。
にその組織培養物を採取する。採取は、その組織培養物
への更に別の酵素（最高１．０％までの濃度のトリプシ
ン）の添加によるか、あるいは細胞が接着している表面
からその細胞をかきとるためのガラスビーズもしくは類
似マトリックスを添加することによるように細胞を機械
的に除去することによって、細胞、組織嚢、およびブラ
ディゾイトを無菌的に除去することにより実施すること
ができる。採取が終了した際には、この組織培養採取物
質は少なくとも２．５×１０5のブラディゾイト／ｍＬ
を含むはずであり、そしてこれらを採取後濃縮を伴うこ
となくワクチンへと直接調製することができる。
【００４５】ネコ用のワクチンへの調製． この組織培
養採取物を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および
ＦＢＳのような化学物質の添加により安定化させ、０．
２ｍＬ／ストローでストロー輸送系内に充填させ、そし
て液体窒素内で凍結する。このような方法は生のブラデ
ィゾイトに不利な影響を及ぼし、その結果ブラディゾイ
トの生存率の２〜４ｌｏｇの損失を生じる。生のブラデ
ィゾイトは、凍結および凍結乾燥の際にも、記載されて
いるものに類似する製造率の損失を伴うことがある。
養採取物を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）および
ＦＢＳのような化学物質の添加により安定化させ、０．
２ｍＬ／ストローでストロー輸送系内に充填させ、そし
て液体窒素内で凍結する。このような方法は生のブラデ
ィゾイトに不利な影響を及ぼし、その結果ブラディゾイ
トの生存率の２〜４ｌｏｇの損失を生じる。生のブラデ
ィゾイトは、凍結および凍結乾燥の際にも、記載されて
いるものに類似する製造率の損失を伴うことがある。
【００４６】Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の
生のブラデジゾイトワクチンの投与． 生のブラディゾ
イトを含む凍結ストローを液体窒素から取り出し、解凍
し、そしてネコを免疫化する目的でネコに経口的に配給
する。免疫化計画および検査方法は実施例１に記載され
る。
生のブラデジゾイトワクチンの投与． 生のブラディゾ
イトを含む凍結ストローを液体窒素から取り出し、解凍
し、そしてネコを免疫化する目的でネコに経口的に配給
する。免疫化計画および検査方法は実施例１に記載され
る。
【００４７】実施例３ 以下の事柄は本発明をより詳しく説明する。採取前に濃
縮された商業的規模の製品用にローラーボトルを用いる
際には、培地の量は１７５０ｃｍ2の表面当たり２００
ｍＬから１０００ｍＬまでに変化することがある。ｐＨ
は６．６と７．５との間であるべきである。温度調節は
３５℃と３９℃との間に保つべきである。ＥＢＬ細胞
を、それらが１×１０6細胞／ｍＬに達するまでＤＭＥ
Ｍ＋１０％のＦＢＳ中で増殖させる。細胞をＤＭＥＭ、
４．５ｇ／ｍＬのグルコース、３％のＦＢＳ、１％の２
ｍＭグルタミン、および５０ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシ
ンを含む新鮮な培地中、０．０１〜０．０５のＭＯＩの
タキゾイトで感染させる。タキゾイトを３〜５日の期間
にわたり３７℃で至適カウント数に増殖させる。この
際、新鮮な培地（先に定義されている）＋３〜５％の
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）タキゾイト特異
的抗体をこの感染化組織培養物に添加する。ローラーボ
トルを更に３〜４日間インキュベートし、この間にこの
組織培養物をブラディゾイトを含む組織嚢の発達につい
て顕微鏡的に観察する。ブラディゾイトの至適カウント
数が達成される際に、０．０５％のペプシンおよび５ｇ
のガラスビーズを各ローラーボトルに添加し、そして追
加的に３０〜６０分間インキュベートする。これらのロ
ーラーボトルの内容物を、各ガラスビーズを分離して取
り出す回収用装置を介してそれらを移動させることによ
り合わせる。２．５×１０6を超えるブラディゾイトを
含む採取された組織培養物を、その後にワクチンの調剤
もしくは診断薬の調製用に用いることができる。Ｔ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を組織培養物中で商業
的規模で増殖させると、２００ｍＬ〜１Ｌの組織培養物
用培地を含む一つのローラーボトルが５００用量もの多
くのワクチンを生産することができる。
縮された商業的規模の製品用にローラーボトルを用いる
際には、培地の量は１７５０ｃｍ2の表面当たり２００
ｍＬから１０００ｍＬまでに変化することがある。ｐＨ
は６．６と７．５との間であるべきである。温度調節は
３５℃と３９℃との間に保つべきである。ＥＢＬ細胞
を、それらが１×１０6細胞／ｍＬに達するまでＤＭＥ
Ｍ＋１０％のＦＢＳ中で増殖させる。細胞をＤＭＥＭ、
４．５ｇ／ｍＬのグルコース、３％のＦＢＳ、１％の２
ｍＭグルタミン、および５０ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシ
ンを含む新鮮な培地中、０．０１〜０．０５のＭＯＩの
タキゾイトで感染させる。タキゾイトを３〜５日の期間
にわたり３７℃で至適カウント数に増殖させる。この
際、新鮮な培地（先に定義されている）＋３〜５％の
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）タキゾイト特異
的抗体をこの感染化組織培養物に添加する。ローラーボ
トルを更に３〜４日間インキュベートし、この間にこの
組織培養物をブラディゾイトを含む組織嚢の発達につい
て顕微鏡的に観察する。ブラディゾイトの至適カウント
数が達成される際に、０．０５％のペプシンおよび５ｇ
のガラスビーズを各ローラーボトルに添加し、そして追
加的に３０〜６０分間インキュベートする。これらのロ
ーラーボトルの内容物を、各ガラスビーズを分離して取
り出す回収用装置を介してそれらを移動させることによ
り合わせる。２．５×１０6を超えるブラディゾイトを
含む採取された組織培養物を、その後にワクチンの調剤
もしくは診断薬の調製用に用いることができる。Ｔ．ゴ
ンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を組織培養物中で商業
的規模で増殖させると、２００ｍＬ〜１Ｌの組織培養物
用培地を含む一つのローラーボトルが５００用量もの多
くのワクチンを生産することができる。
【００４８】本発明に従う大用量の組織培養物中で調製
されるブラディゾイト抗原は、野生型のＴ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）での刺激後にはネコが排出を行
わないようにすることができ、すなわちこれは異型の
種、すなわちＴ−２５６の接合子嚢排出を回避させるこ
とができるということである。次の表は実施例１に基づ
く組織培養物ワクチン接種研究を示す。
されるブラディゾイト抗原は、野生型のＴ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）での刺激後にはネコが排出を行
わないようにすることができ、すなわちこれは異型の
種、すなわちＴ−２５６の接合子嚢排出を回避させるこ
とができるということである。次の表は実施例１に基づ
く組織培養物ワクチン接種研究を示す。
【００４９】
【表１】
【００５０】
【表２】
【００５１】
【表３】
【００５２】本発明は説明を目的とするこれまでの記述
に詳細に記載されているが、このような詳細は単にその
目的のためのみのものであり、そして請求項に制限され
る場合を除き、本発明における変法が本発明の精神およ
び範囲から逸脱することなく当業者により作成されるこ
とがあることが理解されるべきである。
に詳細に記載されているが、このような詳細は単にその
目的のためのみのものであり、そして請求項に制限され
る場合を除き、本発明における変法が本発明の精神およ
び範囲から逸脱することなく当業者により作成されるこ
とがあることが理解されるべきである。
【００５３】本発明の主な特徴または態様は以下のとう
りである。
りである。
【００５４】１． 採取前に濃縮された商業的規模の組
織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎ
ｄｉｉ）のブラディゾイト。
織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎ
ｄｉｉ）のブラディゾイト。
【００５５】２． 接合子嚢陰性の表現型を特徴とする
株である、前記１に記載のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏ
ｎｄｉｉ）。
株である、前記１に記載のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏ
ｎｄｉｉ）。
【００５６】３． Ｔ−２６３と表示される株である、
前記１に記載のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）。
前記１に記載のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）。
【００５７】４． ｉ）ある組織培養物をＴ．ゴンディ
イ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）に感染させ、ｉｉ）高生産率
になるまでＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を増
殖させ、ｉｉｉ）タキゾイトを含む組織培養物の過剰増
殖を阻害し、そして組織嚢内のブラディゾイトの形成を
刺激し、ｉｖ）得られるブラディゾイトを高生産率にな
るまで増殖させ、ｖ）残存するタキゾイトの数を減少さ
せ、ｖｉ）その嚢からブラディゾイトを放出させ、そし
てｖｉｉ）その組織培養物を採取することを含む、採取
前に濃縮された商業的規模の組織培養物が生産する生の
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイ
トを調製するための方法。
イ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）に感染させ、ｉｉ）高生産率
になるまでＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を増
殖させ、ｉｉｉ）タキゾイトを含む組織培養物の過剰増
殖を阻害し、そして組織嚢内のブラディゾイトの形成を
刺激し、ｉｖ）得られるブラディゾイトを高生産率にな
るまで増殖させ、ｖ）残存するタキゾイトの数を減少さ
せ、ｖｉ）その嚢からブラディゾイトを放出させ、そし
てｖｉｉ）その組織培養物を採取することを含む、採取
前に濃縮された商業的規模の組織培養物が生産する生の
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイ
トを調製するための方法。
【００５８】５． 組織培養物が、ウシ胎児の肺細胞、
マウスの星状膠細胞、ヒトの包皮繊維芽細胞、およびＭ
ＲＣ−５細胞からなる群より選択される一員から得られ
る、前記４の方法。
マウスの星状膠細胞、ヒトの包皮繊維芽細胞、およびＭ
ＲＣ−５細胞からなる群より選択される一員から得られ
る、前記４の方法。
【００５９】６． 組織培養物を、高生産率のタキゾイ
トを生産するのに有効な感染多重度で感染させる、前記
４の方法。
トを生産するのに有効な感染多重度で感染させる、前記
４の方法。
【００６０】７． タキゾイトの過剰増殖をその組織培
養物へのＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）特異的
抗体の添加により阻害してブラディゾイトを生産させ
る、前記４の方法。
養物へのＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）特異的
抗体の添加により阻害してブラディゾイトを生産させ
る、前記４の方法。
【００６１】８． Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）特異的抗体が、ヤギ、ウサギ、ウマ、およびウシか
らなる群より選択される一員である、前記７の方法。
ｉ）特異的抗体が、ヤギ、ウサギ、ウマ、およびウシか
らなる群より選択される一員である、前記７の方法。
【００６２】９． 残存性タキゾイトの数の減少が、ペ
プシン、トリプシン、およびキモトリプシンからなる群
より選択される蛋白質分解酵素を添加することによる、
前記４の方法。
プシン、トリプシン、およびキモトリプシンからなる群
より選択される蛋白質分解酵素を添加することによる、
前記４の方法。
【００６３】１０． 前記１に記載される採取前に濃縮
された組織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトの免疫原的有効量を
含むワクチン。
された組織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ．
ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトの免疫原的有効量を
含むワクチン。
【００６４】１１． 生のブラディゾイトもしくは修飾
された生のブラディゾイトであることを特徴とする、前
記１０のワクチン。
された生のブラディゾイトであることを特徴とする、前
記１０のワクチン。
【００６５】１２． 液体、凍結、もしくは凍結乾燥状
態である、前記１０のワクチン。
態である、前記１０のワクチン。
【００６６】１３． 前記１の採取前に濃縮された生の
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイ
トを含むトキソプラスマ症の検出のための診断薬。
Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイ
トを含むトキソプラスマ症の検出のための診断薬。
【００６７】１４． ネコに前記１０のワクチンを投
与することを含む、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）の接合子嚢を排出しないようにネコを治療する方
法。
与することを含む、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）の接合子嚢を排出しないようにネコを治療する方
法。
【００６８】１５． 前記１３の診断用物質と、ある
生物学的試料を接触させ、そして免疫複合体の存在もし
くは非存在を検出することを含む、ネコにおけるトキソ
プラスマ症を診断する方法。
生物学的試料を接触させ、そして免疫複合体の存在もし
くは非存在を検出することを含む、ネコにおけるトキソ
プラスマ症を診断する方法。
Claims (6)
- 【請求項１】 採取前に濃縮された商業的規模の組織培
養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉ
ｉ）のブラディゾイト。 - 【請求項２】 ｉ）ある組織培養物をＴ．ゴンディイ
（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）に感染させ、ｉｉ）高生産率に
なるまでＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）を増殖
させ、ｉｉｉ）タキゾイトを含む組織培養物の過剰増殖
を阻害し、かつ組織嚢内のブラディゾイトの形成を刺激
し、ｉｖ）得られるブラディゾイトを高生産率になるま
で増殖させ、ｖ）残存するタキゾイトの数を減少させ、
ｖｉ）その嚢からブラディゾイトを放出させ、そしてｖ
ｉｉ）その組織培養物を採取することを含む、採取前に
濃縮された商業的規模の組織培養物が生産する生のＴ．
ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトを
調製するための方法。 - 【請求項３】 請求項１に記載される採取前に濃縮され
た組織培養物が生産する生のＴ．ゴンディイ（Ｔ． ｇ
ｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトの免疫原的有効量を含む
ワクチン。 - 【請求項４】 請求項１の採取前に濃縮された生のＴ．
ゴンディイ（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）のブラディゾイトを含
むトキソプラスマ症の検出のための診断薬。 - 【請求項５】 ネコに請求項３のワクチンを投与するこ
とを含む、Ｔ．ゴンディイ（Ｔ． ｇｏｎｄｉｉ）の接
合子嚢を排出させないようにネコを治療する方法。 - 【請求項６】 請求項４の診断用物質と、ある生物学的
試料を接触させ、そして免疫複合体の存在もしくは非存
在を検出することを含む、ネコにおけるトキソプラスマ
症を診断する方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US30430894A | 1994-09-12 | 1994-09-12 | |
| US304308 | 1994-09-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08187076A true JPH08187076A (ja) | 1996-07-23 |
Family
ID=23175953
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7252066A Pending JPH08187076A (ja) | 1994-09-12 | 1995-09-06 | 商業的規模の採取前に濃縮された組織培養物が生産する生のＴ．ゴンデイイ（Ｔ．ｇｏｎｄｉｉ）のブラデイゾイト、ならびに製品および方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0700991A1 (ja) |
| JP (1) | JPH08187076A (ja) |
| AU (1) | AU3046595A (ja) |
| BR (1) | BR9503991A (ja) |
| NO (1) | NO953579D0 (ja) |
| NZ (1) | NZ272921A (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU1934899A (en) | 1997-12-19 | 1999-07-12 | Heska Corporation | Toxoplasma gondii proteins, corresponding nucleic acid molecules, and uses thereof |
| WO2015196150A2 (en) | 2014-06-20 | 2015-12-23 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Mutations that confer genetic stability to additional genes in influenza viruses |
| WO2019241579A1 (en) * | 2018-06-13 | 2019-12-19 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Toxoplasma gondii vaccine |
| JP2022522112A (ja) | 2019-02-08 | 2022-04-14 | ウィスコンシン アルムニ リサーチ ファンデイション | ヒト化細胞系 |
| JP2022551805A (ja) | 2019-08-27 | 2022-12-14 | ウィスコンシン アルムニ リサーチ ファンデイション | 卵内複製のための安定化されたｈａを持つ組換えインフルエンザウイルス |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5045313A (en) * | 1989-07-07 | 1991-09-03 | The University Of Kansas | Vaccine for immunizing cats against toxoplasma oocyst shedding |
-
1995
- 1995-08-30 EP EP95113609A patent/EP0700991A1/en not_active Withdrawn
- 1995-09-04 NZ NZ272921A patent/NZ272921A/en unknown
- 1995-09-05 AU AU30465/95A patent/AU3046595A/en not_active Abandoned
- 1995-09-06 JP JP7252066A patent/JPH08187076A/ja active Pending
- 1995-09-11 NO NO953579A patent/NO953579D0/no unknown
- 1995-09-11 BR BR9503991A patent/BR9503991A/pt not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU3046595A (en) | 1996-03-28 |
| NO953579D0 (no) | 1995-09-11 |
| NZ272921A (en) | 1996-03-26 |
| EP0700991A1 (en) | 1996-03-13 |
| BR9503991A (pt) | 1996-09-24 |
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