NO145013B - Makromolekylaere adenin-derivater for anvendelse som substrat ved affinitetskromatografering, og ved enzymatiske og/eller ko-enzymatiske reaksjoner - Google Patents
Makromolekylaere adenin-derivater for anvendelse som substrat ved affinitetskromatografering, og ved enzymatiske og/eller ko-enzymatiske reaksjoner Download PDFInfo
- Publication number
- NO145013B NO145013B NO752083A NO752083A NO145013B NO 145013 B NO145013 B NO 145013B NO 752083 A NO752083 A NO 752083A NO 752083 A NO752083 A NO 752083A NO 145013 B NO145013 B NO 145013B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- enzymatic
- adenine
- macromolecular
- water
- derivatives
- Prior art date
Links
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical class NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 16
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title claims description 9
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 title claims description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 title description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 16
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims description 15
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 claims description 11
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 claims description 7
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 6
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims description 5
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 claims description 3
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 claims description 3
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 claims description 3
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 2
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-N NADP zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001456 adenosine triphosphate Drugs 0.000 claims description 2
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims 1
- LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N adenosine monophosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(OP(O)(O)=O)C1O LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 17
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 13
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- UJTTUOLQLCQZEA-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-(4-hydroxybutyl)carbamate Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCCCCO)C3=CC=CC=C3C2=C1 UJTTUOLQLCQZEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 4
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NKXYQYUYJMQGII-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-4-(7h-purin-6-ylamino)butanoic acid;pyridine-3-carboxamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1.OC(=O)CC(O)CNC1=NC=NC2=C1NC=N2 NKXYQYUYJMQGII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003335 secondary amines Chemical group 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FCZOVUJWOBSMSS-UHFFFAOYSA-N 5-[(6-aminopurin-9-yl)methyl]-5-methyl-3-methylideneoxolan-2-one Chemical compound C1=NC2=C(N)N=CN=C2N1CC1(C)CC(=C)C(=O)O1 FCZOVUJWOBSMSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 238000000424 optical density measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/008—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions for determining co-enzymes or co-factors, e.g. NAD, ATP
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
- C08F8/10—Acylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G69/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic amide link in the main chain of the macromolecule
- C08G69/48—Polymers modified by chemical after-treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G73/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing nitrogen with or without oxygen or carbon in the main chain of the macromolecule, not provided for in groups C08G12/00 - C08G71/00
- C08G73/02—Polyamines
- C08G73/0273—Polyamines containing heterocyclic moieties in the main chain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G73/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing nitrogen with or without oxygen or carbon in the main chain of the macromolecule, not provided for in groups C08G12/00 - C08G71/00
- C08G73/06—Polycondensates having nitrogen-containing heterocyclic rings in the main chain of the macromolecule
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Polyamides (AREA)
- Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
- Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører makromolekylære adenin-derivater for anvendelse som substrat ved affinitetskromatografering, og ved enzymatiske og/eller koenzymatiske reaksjoner, og det særegne ved de makromolekylære adenin-derivater i henhold til oppfinnelsen er at de inneholder en eller flere enheter med den generelle formel I
hvori n er 1, 2, 3 eller 4 og radikalet
er avledet fra adeninkjerneholdig nikotinamid-adenin-dinukleotid, nikotinamid-adenin-dinukleotidfosfat, adenosinmonofos-
fat, cyklisk adenosin-monofosfat, adenosindifosfat, adenos-intrifosfat, adenosin eller adenin, idet det N-atom som er knyttet til CO-gruppen hører til en vannoppløselig eller vann-uoppløselig makromolekylær forbindelse som inneholder en eller flere primære eller sekundære amingrupper og utgjøres av polyetylenimin, poly-L-lysin eller aminert agarose .
Disse trekk ved oppfinnelsen fremgår av patentkravet.
I norsk patentskrift 142.081 er omhandlet adeninderivater
som er gjort funksjonelle i 6-stillingen ved å omsette en forbindelse som inneholder adeninkjerner med epoksyder av karboksylsyrer eller karboksylsyreestere. Reaksjonen fort-
setter med en omleiring inntil amin-gruppen i 6-stil.ling av adeninkjernen er gjort funksjonell til å gi forbindelser med den generelle formel II
hvori R står for hydrogen eller lavere alkyl. I det nevnte patentskrift utgjøres adeninderivatene av nikotinamid-adenin-dinukleotider. Den erkjennelse som ligger til grunn for den foreliggende oppfinnelse er at slike forbindelser, som er gjort funksjonelle i 6-stillingen av adeninkjernen, kan om-settes med en polymer som inneholder minst en primær eller sekundær amingruppe til å gi de ovenfor definerte makromolekylære adeninderivater. Omsetningen kan enkelt foregå
i nærvær av et karbodiimid, enten vannoppløselig, f.eks. N-etyl-N'-(3-dimetyl-aminopropyl) karbondiimid-hydroklorid eller uoppløselig, som f.eks. N,N'-dicykloheksylkarbodiimid, som kondenseringsmiddel.
Kondensasjonsreaksjonen mellom de funksjonelle karboksyl-gruppene i adeninderivatet og aminogruppen i makromolekylet til å gi amidbindinger gjennomføres i vann eller i en bland-ing dannet av vann og et vannoppløselig organisk oppløsnings-middel som f.eks. pyridin, tetrahydrofuran, dioksan, etc. ved temperaturer på fra 5 - 50°C, foretrukket ved romtemperatur .
De makromolekylære adeninderivater som oppnås har mange an-vendelser .
De kan i tilfellet av makromolekylære nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD)-derivater og de andre, tidligere angitte adeninholdige derivater anvendes ved affinitets-kromato-grafering eller som ikke-spredende koenzymer.
Når det således anvendes vannnoppløselig makromolekyler,
kan de anvendes som vannoppløselige ikke-spredbare makromolekylære koenzymer. Dette utvider anvendelsesområdet for de kjente enzymatiske systemer hvori enzymet er mekanisk innesluttet i oppløselige strukturer, som f.eks. fibere, polyakrylamid-gel, mikrokapsler, etc, som er ugjennomtreng-elige for makromolekyler, slik at når et enzym eller et poly-enzymatisk system innesluttes sammen med et vannoppløselige makromolekylært koenzym er begge i berøring og koenzymet spres derfor ikke utenfor den omsluttende struktur, noe som tidligere ikke var mulig på grunn av den lave molekylvekt av koenzymet.
Når det anvendes uoppløselige makromolekyler kan derivatene anvendes for affinitetskromatografering eller enzymatiske reaksjoner kan gjennomføres i heterogen fase hvor da koenzymet lett kan gjenvinnes.
Oppfinnelsen illustreres ved hjelp av følgende eksempler.
EKSEMPEL 1
Fremstilling av 4-(NAD-N<6>)-3-hydroksybutyryl-PEI (I, n = 1,-N^^ er radikalet av polyetylenimin (PEI)).
127 mg polyetylenimim-hydroklorid ved pH 6 (fremstilt ved å tilsette konsentrert HCl til PEI med en molekylvekt på omtrent 50.000 og deretter inndamping til tørrhet) i en vandig løsing ved en konsentrasjon på 25% (vekt/volum) ble tilsatt 10 g nikotinamid 6-(2-hydroksy-3-karboksypropylamino)
purin-dinukleotid (II) oppløst i 0,125 ml destillert vann og deretter tilsattt 10 mg N,N'-dicykloheksylkarbodiimid oppløst i 0,125 ml pyridin. Blandingen ble holdt under omrøring ved
romtemperatur i 36 timer og deretter filtrert. Filtratet og de tilsatte kombinerte produkter fra vaskingene med vann totalt volum = 10 ml) ble anbragt i en sentrifuge og utfelt med 10 ml 1 M fosfatbuffer med pH 6. Hele blandingen ble sentrifugert i 10 minutter ved 39.000 g og oppløsingen ble skilt fra det polymere bunnfall ved dekantering. Polymeren ble ytterligere renset ved oppløsing i 2 ml av en oppløsning 2M NaCl og 0,05 M acetat-buffer ved pH 5,5. Den oppnådde oppløsning ble tilsatt 8 ml vann og på nytt felt med 10 ml 1 M fosfat-buffer ved pH 6 og sentrifugert i 10 minutter ved 39.000 g hvorfra polymeren ble gjenvunnet ved dekantering. Denne rensing ble gjentatt fire ganger. ,
Produktet ble på nytt oppløst i en oppløsning av 2 M NaCl
og 0,05 acetat-buffer ved pH 5,5 og ble anbragt i et dia-lyse-forsøksrør og dialysert i løpet av 24 timer mot 250 ml
-4
av en oppløsning 2 M NaCl og 10 M HC1.
Oppløsningen ble så dialysert mot porsjoner av 250 ml 10<->^ HCl i fire dager idet oppløsingen ble ombyttet daglig og produktet som var inneholdt dialyse-forsøksrøret ble gjenvunnet ved en frysetørring. Det ble på denne måte oppnådd 90 mg polymer med jLmaks ved 260 nanometer. Bestemmelsen av NAD, aktivt som koenzym, kovalent bundet til polymeren ble gjennomført i en vandig oppløsing av polymeren ved en kvantitativ enzymatisk reduksjon med alkoholdehydrogenase -.fra gjær i en 0,15 M tris-buffer ved pH 9 i nærvær av 0,5 M etylalkohol og 0,075 M semikarbazid-hydroklorid.
Det spektrofotometriske måling av NADH gjennomført ved 340 nanometer viste at 28,5 mmol NAD, reduserbar på enzymatisk måte, var bundet pr. gram polymer.
Det således oppnådde makromolekylære NAD viste i forhold til naturlig NAD, en bemerkelsesverdig koenzym-aktivitet i nærvær av adskillige dehydrogenaser. F.eks. i tilfellet av laktiko-dehydrogenase fra kaninmuskel, viste det en aktivitet på 55% .i forhold til naturlig koenzym. Bestemmelsen ble gjennomført i 0,1 M ammoniumkarbonat-buffer ved pH 8,5 og ved 25°C.
EKSEMPEL 2
Fremstilling av 4-(NAD-N<6>)-3-hydroksybutyryl-PEI (1, n =
1,-N er radikalet av polyetylenimin (PEI)).
125 mg PEI oppnådd som angitt i eksempel 1 ved pH 6 i en vandig oppløsning ved 25% (vekt/volum) ble tilsatt 40 g nikotinamid-6-(2-hydroksy-3-karboksypropylamino)purin-dinukleotid (II) oppløst i 0,5 ml vann og deretter til-
satt 40 mg N-etyl-N'-(3-dimetylaminopropyl)karbodiimid-hydroklorid oppløst i 0,5 ml vann.
Blandingens pH ble bragt til 5,5 ved hjelp av 1 M NaOH. Blandingen ble holdt under omrøring ved romtemperatur i
48 timer.
Etter at vann var tilsatt for å oppnå et totalt volum på
10 ml ble oppløsningen anbragt i en sentrifuge og felt med
10 ml 1 M fosfat-buffer ved pH 6. Hele blandingen ble sentrifugert i 10 minutter ved 39.000 g cg oppløsningen ble sep-arert fra det polymere bunnfall. For å rense polymeren ble denne oppløst i 2 ml av en oppløsning i 2 M NaCl og 0,05 M acetat-buffer ved pH 5,5. Den således oppnådde oppløsning ble tilsatt 8 ml vann og på nytt felt ut med 10 ml av en 1
M fosfat-buffer ved pH 6, og den ble deretter sentrifugert
i 10 minutter ved 39.000 g og polymeren ble gjenvunnet ved dekantering. Denne rensing ble gjennomført fire ganger. Produktet ble på nytt oppløst i en oppløsning 2 M NaCl og 0,05 M acetat-buffer ved pH 5,5, anbragt i en dialysebeholder og dialysert i 24 timer mot 250 ml av en oppløsning 2 M
_4
NaCl og 10 M HC1 i 4 døgn idet oppløsningen ble daglig ombyttet, og det oppnådde produkt i dialysebeholderen ble gjenvunnet ved frys tørking.
Det ble oppnådd 85,7 g polymer med \ maks = 266 nanometer.
Bestemmelsen av NAD, aktivt som koenzym, kovalent bundet
til polymeren ble gjennomført i en vandig oppløsning av polymeren ved en kvantitativ enzymatisk reduksjon med alkohol-dehydrogenase fra gjær i 0,15 M buffer tris ved pH 9
i nærvær av 0,5 M etyl-alkohol og 0,075 M semikarbazid-hydroklorid. Den spektrofotometriske måling ved 340 nanometer av dannet NADH-derivat viste at 125 mikromol enzymatisk reduserbart NAD var bundet pr. gram polymer.
EKSEMPEL 3
Fremstilling av 4-(NAD-N<6>)-3-hydroksybutyryl-PLYS (I, n =
1, -N radikalet av poly-L-lysin (PLYS).
100 g poly-L-lysin-hydrobromid, med molekylvekt ca. 50.000, oppløst i 1 ml vann ble tilsatt 40 mg nikotinamid-6-(2-hydroksy-3-karboksypropylamino)purin-dinukleotid (II)/ oppløst i 0,5 ml vann og deretter tilsatt 40 mg N-etyl-N'(3-dimetylamino-propyl)-karbodiimid-hydroklorid opp-
løst i 0,5 ml vann. Blandingens pH ble bragt til 5,5
med 1 M NaOH.
Reaksjonsblandingen ble så holdt under omrøring ved romtemperatur i 48 timer.
Blandingen ble så overført til en dialysebeholder og dialysert i 24 timer mot 250 ml av en oppløsning 2M NaCl og 10<->^ M HCl. Den ble så dialysert mot porsjoner på 250 ml 10 M HCl i fire døgn, idet oppløsningen ble ombyttet daglig. Produktet som var inneholdt i dialysebeholderen ble gjenvunnet ved frysetørking og det ble oppnådd 75,4 mg polymer med yV. maksimum ved 260 nanometer.
Bestemmelsen av NAD, aktivt fra et koenzym-synspunkt, kovalent bundet til poly-L-lysin ble gjennomført ved spektrofotometri, etter en enzymatisk kvantitativ reduksjon av polymeren med alkohol-dehydrogenase fra gjær i buffer tris 0,15 M ved pH 9 i nærvær av 0,5 M etylalkohol og 0,075 M semikarbazid-hydroklorid, og måling ved 340 nanometer viser dannet NAD-derivat. Dette gav 90 mikromol enzymatisk reduserbart NAD kovalent bundet pr. gram polymer.
EKSEMPEL 4
Fremstilling av 4-(NAD-N<6>)-3-hydroksybutyryl-aminoagarose (I, n = 1, -N ^ = radikalet av agarose 4B som er gjort .funksjonelt ved hjelp av bromcyanmetoden, med 1,6-diamino-heksan, til å inneholde fra 6 til 10 mol amin-rester pr.
ml gel. For funksjonaliseringen av agarosen ble det anvendt handelsproduktet "Sepharose 4B" som etter behandlingen med 1,6-diaminoheksanet til å danne den aminerte agarose betegnes med "AHSEPH" eller "AH-Sepharose-4B".
500 mg "AHSEPH" (handelsbetegnelse AH - sefarose 4B) ble blandet godt med 0,5 M NaCl oppløsning, deretter vasket med 200 ml 0,5 M NaCl og deretter med destillert vann. Når gelen nådde omtrent 2 ml volum ble den tilsatt 92 mg nikotinamid 6-(2-hydroksy-3-karboksypropylamino)-purin-dinukleotid (II) oppløst i 2 ml destillert vann og pH ble bragt til 5 med 1 M NaOH. Suspensjonen ble omrørt ved romtemperatur ved hjelp av en røreinnretning med lav hastighet dg ble så dråpe-vis tilsatt 75 mg N-etyl-N'-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimid-hydroklorid oppløst i 2 ml destillert vann. Under de første fem timer måtte pH holdes på omtrent 5 (1 M HCl ble tilsatt) og en forsiktig røring ble også opprettholdt. Omsetningen ble gjennomført i løpet av 24 timer hvoretter gelen ble frafiltrert og vasket, først med 200 ml av en opp-_4
løsning 1 M NaCl og 10 M HCl og deretter med destillert vann og gas ca. 1,8 ml fuktig gel, A. maks = 266 nanometer.
NAD-innholdet kovalent bundet til den aminerte agarosegelen ble bestemt ved spektrofotometriske målinger ved 260 nanometer for koenzymet i oksydert form (NAD) og ved 340 nanometer for koenzym (NADH) enzymatisk redusert med ved alkohol-dehydrogenase fra gjær i buffer tris 0/15 M ved pH 9 i nærvær av 0,5 M etylalkohol og 0,075 M semikarbazid-hydroklorid.
De ultrafiolette spektra ble tatt ved å suspendere gelen
i en vandig oppløsning med l%"Polyox WSR 301" som bremset sedimenteringen av selve gelen.
Fra målingen av den optiske densitet ved 266 nanometer
viste det seg at totalt 2.04 mikromol NAD var kovalent bundet pr. gram tørr agarose.
Fra den enzymatiske redusksjon og optiske densitetsmålinger
ved 340 nanometer viste det seg at mengden av enzymatisk reduserbar NAD kovalent bundet til polymeren var 1,15 mikromol pr. gram tørr agarose.
Claims (1)
1. Makromolekylære adeninderivater for anvendelse som substrat ved affinitetskromatografering, og ved enzymatiske og/eller koenzymatiske reaksjoner,
karakterisert ved at de inneholder en
eller flere enheter med den generelle formel I
hvori n er 1, 2, 3 eller 4 og radikalet er avledet fra adeninkjerneholdig nikotinamid-adenin-dinukleotid, nikotinamid-adenin-dinukleotidfosfat, adenosinmono-fosfat, cyklisk adenosin-monofosfat, adenosindifosfat, adenosin-trifosfat, adenosin eller adenin, idet det N-atom som er knyttet til CO-gruppen hører til en vannoppløselig eller vannuopp-løselig makromolekylær forbindelse som inneholder en eller flere primære eller sekundære amingrupper og utgjøres av polyetylenimin, poly-L-lysin eller aminert agarose.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT23900/74A IT1046849B (it) | 1974-06-12 | 1974-06-12 | Processo per la preparazione di derivati adeninici macromolecola rizzati e prodotti cosi ottenuti |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO752083L NO752083L (no) | 1975-12-15 |
| NO145013B true NO145013B (no) | 1981-09-14 |
| NO145013C NO145013C (no) | 1981-12-28 |
Family
ID=11210748
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO752083A NO145013C (no) | 1974-06-12 | 1975-06-11 | Makromolekylaere adenin-derivater for anvendelse som substrat ved affinitetskromatografering, og ved enzymatiske og/eller ko-enzymatiske reaksjoner |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4088639A (no) |
| JP (1) | JPS5645402B2 (no) |
| BE (1) | BE830113R (no) |
| CA (1) | CA1061042A (no) |
| CH (1) | CH605951A5 (no) |
| CS (1) | CS193047B2 (no) |
| DD (1) | DD122987A5 (no) |
| DE (1) | DE2525825C3 (no) |
| DK (1) | DK264475A (no) |
| FR (1) | FR2274637A2 (no) |
| GB (1) | GB1510894A (no) |
| HU (1) | HU173386B (no) |
| IL (1) | IL47339A (no) |
| IT (1) | IT1046849B (no) |
| LU (1) | LU72709A1 (no) |
| NL (1) | NL166722C (no) |
| NO (1) | NO145013C (no) |
| SE (1) | SE426596B (no) |
| SU (1) | SU691095A3 (no) |
| YU (1) | YU149075A (no) |
| ZA (1) | ZA753518B (no) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1039756B (it) * | 1975-07-10 | 1979-12-10 | Snam Progetti | Procedimento per migliopare l at tivita di enzimi ossidoriduttasici inglobati in strutture filamentose |
| US4199498A (en) * | 1975-07-15 | 1980-04-22 | Snamprogetti S.P.A. | Macromolecularized adenine derivatives |
| IT1065294B (it) * | 1976-12-23 | 1985-02-25 | Snam Progetti | Procedimento per la preparazione di fibre a struttura porosa,fibre porose cosi'ottenute e impieghi delle stesse |
| JPS55500053A (no) * | 1978-01-16 | 1980-01-31 | ||
| US4701521A (en) * | 1978-07-17 | 1987-10-20 | The Trustees Of Boston University | Method of effecting cellular uptake of molecules |
| DE2841414C2 (de) * | 1978-09-22 | 1980-04-03 | Gesellschaft Fuer Biotechnologische Forschung Mbh (Gbf), 3300 Braunschweig | Verfahren zur Herstellung von an Makromoleküle gebundenen, ein Adeninringsystem enthaltenden Koenzymen |
| US4711955A (en) * | 1981-04-17 | 1987-12-08 | Yale University | Modified nucleotides and methods of preparing and using same |
| US4828979A (en) * | 1984-11-08 | 1989-05-09 | Life Technologies, Inc. | Nucleotide analogs for nucleic acid labeling and detection |
| US4870181A (en) * | 1985-02-04 | 1989-09-26 | A. H. Robins Company, Incorporated | Process for the preparation of 2-alkoxy-N-(1-azabicyclo[2.2.2])octan-3-yl)aminobenzamides |
| US5109124A (en) * | 1988-06-01 | 1992-04-28 | Biogen, Inc. | Nucleic acid probe linked to a label having a terminal cysteine |
| US5569650A (en) * | 1993-06-11 | 1996-10-29 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | C-nucleoside isosters of analogs thereof and pharmaceutical compositions |
| US20040265870A1 (en) * | 2003-04-09 | 2004-12-30 | Invitrogen Corporation | Methods of synthesizing and labeling nucleic acid molecules |
| CN114656576B (zh) * | 2022-03-09 | 2022-11-25 | 中国农业大学 | 一种环磷酸腺苷-大枣酸性多糖复合物及制备方法与应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1803978C2 (de) * | 1968-10-18 | 1985-05-02 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Gewinnung von S-Adenosyl-l-methionin und S-Adenosyl-l-ethionin |
| US3758456A (en) * | 1971-07-16 | 1973-09-11 | Syntex Corp | Beta d driboheptofuranosyl nucleosides |
| US3853845A (en) * | 1971-08-18 | 1974-12-10 | Icn Pharmaceuticals | 5-n-aminoacyl-5-aminouridines |
| US3852268A (en) * | 1973-02-12 | 1974-12-03 | Abbott Lab | Inosine-5 -carboxylic acid amides |
-
1974
- 1974-06-12 IT IT23900/74A patent/IT1046849B/it active
-
1975
- 1975-05-22 IL IL47339A patent/IL47339A/xx unknown
- 1975-05-30 ZA ZA00753518A patent/ZA753518B/xx unknown
- 1975-06-05 FR FR7517606A patent/FR2274637A2/fr active Granted
- 1975-06-09 CS CS754027A patent/CS193047B2/cs unknown
- 1975-06-10 LU LU72709A patent/LU72709A1/xx unknown
- 1975-06-10 DD DD186554A patent/DD122987A5/xx unknown
- 1975-06-10 YU YU01490/75A patent/YU149075A/xx unknown
- 1975-06-10 DE DE2525825A patent/DE2525825C3/de not_active Expired
- 1975-06-11 BE BE157228A patent/BE830113R/xx active
- 1975-06-11 NO NO752083A patent/NO145013C/no unknown
- 1975-06-11 DK DK264475A patent/DK264475A/da not_active Application Discontinuation
- 1975-06-11 HU HU75SA2804A patent/HU173386B/hu unknown
- 1975-06-11 CH CH756075A patent/CH605951A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-06-12 GB GB25277/75A patent/GB1510894A/en not_active Expired
- 1975-06-12 SE SE7506766A patent/SE426596B/xx unknown
- 1975-06-12 JP JP7024575A patent/JPS5645402B2/ja not_active Expired
- 1975-06-12 CA CA230,074A patent/CA1061042A/en not_active Expired
- 1975-06-12 NL NL7507043.A patent/NL166722C/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-06-12 US US05/586,354 patent/US4088639A/en not_active Expired - Lifetime
- 1975-06-12 SU SU752143264A patent/SU691095A3/ru active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| LU72709A1 (no) | 1975-10-08 |
| IL47339A (en) | 1978-08-31 |
| SE426596B (sv) | 1983-01-31 |
| ZA753518B (en) | 1976-05-26 |
| US4088639A (en) | 1978-05-09 |
| DK264475A (da) | 1975-12-13 |
| AU8178175A (en) | 1976-12-09 |
| DE2525825B2 (de) | 1980-02-28 |
| IT1046849B (it) | 1980-07-31 |
| JPS5645402B2 (no) | 1981-10-26 |
| NL7507043A (nl) | 1975-12-16 |
| HU173386B (hu) | 1979-04-28 |
| IL47339A0 (en) | 1975-07-28 |
| YU149075A (en) | 1982-10-31 |
| GB1510894A (en) | 1978-05-17 |
| SE7506766L (sv) | 1975-12-15 |
| CH605951A5 (no) | 1978-10-13 |
| DE2525825C3 (de) | 1980-10-23 |
| NO752083L (no) | 1975-12-15 |
| FR2274637B2 (no) | 1977-12-09 |
| BE830113R (fr) | 1975-10-01 |
| NO145013C (no) | 1981-12-28 |
| NL166722B (nl) | 1981-04-15 |
| DE2525825A1 (de) | 1975-12-18 |
| CA1061042A (en) | 1979-08-21 |
| NL166722C (nl) | 1981-09-15 |
| DD122987A5 (de) | 1976-11-12 |
| FR2274637A2 (fr) | 1976-01-09 |
| JPS5111875A (no) | 1976-01-30 |
| SU691095A3 (ru) | 1979-10-05 |
| CS193047B2 (en) | 1979-09-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO145013B (no) | Makromolekylaere adenin-derivater for anvendelse som substrat ved affinitetskromatografering, og ved enzymatiske og/eller ko-enzymatiske reaksjoner | |
| US4443594A (en) | Process for the production of adenine ring system containing co-enzymes bound to macromolecules | |
| Larsson et al. | Preparation of a NAD (H)‐polymer matrix showing coenzymic function of the bound pyridine nucleotide | |
| Carvalho et al. | Production and characterization of a new dextrin based hydrogel | |
| JPS5840474B2 (ja) | 酵素反応により有機物質を少くとも１種類の他の有機物質に変換する酵素利用法 | |
| JPS5816680A (ja) | 可溶性肝臓ウリカ−ゼ、その製法及び尿酸の測定法 | |
| CN107557412B (zh) | 一种固定化酶催化合成nadph的方法 | |
| EP4144842A1 (en) | Pei immobilized enzyme, and preparation method therefor and use thereof | |
| US4115305A (en) | Support matrix for carrying biologically active materials and process for the preparation thereof | |
| US3970521A (en) | Immobilized glycoenzymes | |
| US4336188A (en) | Method for the preparation of macromolecularized adenine derivatives | |
| JP3117092B2 (ja) | セファロスポリン誘導体をグルタリル−７−アミノセファロスポラン酸誘導体に連続転化する方法 | |
| DK145062B (da) | Fremgangsmaade til udvinding af et polypeptid fra en vandig oploesning | |
| Coughlin et al. | Preparation and properties of soluble–insoluble nicotinamide coenzymes | |
| Bückmann | A new synthesis of coenzymically active water-soluble macromolecular NAD and NADP derivatives | |
| Riva et al. | Effect of coupling site and nature of the polymer on the coenzymatic properties of water-soluble macromolecular NAD derivatives with selected dehydrogenase enzymes | |
| CA1301686C (en) | Enzyme reactor with cofactor immobilized on a polymer | |
| US5399681A (en) | Method for preparing N6 -substituted NAD, NADP or FAD | |
| US4199498A (en) | Macromolecularized adenine derivatives | |
| SU1690544A3 (ru) | Способ получени иммобилизованных нуклеофильных соединений | |
| Smith et al. | The reactions of the oxidase and reductases of Paracoccus denitrificans with cytochromes c | |
| KR101252928B1 (ko) | ｐＨ 민감성 고분자 담체에 고정된 고정화 효소 및 상기 고정화 효소를 이용한 선형 알파－１，４－글루칸의 제조방법 | |
| PL128365B1 (en) | Method of manufacture of undissolvable biocatalysts | |
| Schmidt et al. | [28] Coenzyme activity of NAD+ bound to polymer supports through the adenine moiety | |
| Solomon et al. | Flavin-protein interaction in bound glucose oxidase |