NO142241B

NO142241B - Fremgangsmaate til fremstilling av en stabil, vandig loesning for topisk anvendelse paa levende vev

Info

Publication number: NO142241B
Application number: NO743385A
Authority: NO
Inventors: David Clough; Gary Charles Francis Ruder
Original assignee: Smith & Nephew Pharma
Priority date: 1973-09-24
Filing date: 1974-09-20
Publication date: 1980-04-14
Also published as: SE7411915L; SE429494B; HU173655B; NO743385L; FR2244454A1; NL7412570A; AU7362574A; CH618604A5; HU171831B; CA1027043A; DK139658B; NO142241C; DE2445270A1; FR2244454B1; DK498274A; DK139658C; DE2445270C2

Description

Fremgangsmåte ved fremstilling av 17a-hydroxy-20-oxo-4-pregnen-(3,2-c)-pyrazolforbindelser.

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte ved fremstilling av hittil ukjente 17a-hydroxy-20-oxo-4-pregnen-(3,2-c)-pyrazolforbindelser av en av de generelle formler:

hvor betegner g-hydroxy eller keto, R 2 betegner hydrogen, fluor eller methyl, R3 betegner a-methyl, Ø-methyl eller methylen, R4 betegner hydrogen eller acyl, Rg betegner hydrogen, acyl, alkyl, cycloalkyl, arylalkyl eller en arylgruppe som eventuelt kan være substituert med et halogenatom, en alkylgruppe eller en alkoxygrup-pe, og X betegner hydrogen eller halogen.

De nye (3,2-c)-pyrazolsteroider har sterk antiinflamma-torisk virkning, betydelig sterkere enn modersteroidene, og de er spesielt effektive for behandling av arthritis og beslektede syk-dommer, da de gir en kortisonlignende virkning i små doser, hvorved uønskede bivirkninger holdes i sjakk.

Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen for fremstilling av de nye (3,2-c)-pyrazolsteroider utmerker seg ved at en forbindelse av den generelle formel:

hvor R-^, Rj, R3 og X har de ovenfor angitte betydninger, omsettes med et alkylformiat og natriumhydrid i inert atmosfære, hvorved det fåes en forbindelse av den generelle formel: hvor R-p R 2> Rq °S X nar de ovenfor angitte betydninger, hvilken forbindelse omsettes i inert atmosfære med et hydrazin av den generelle formel R5NHNH2, hvor R,- har den ovenfor angitte betyd-ning, eller et salt derav, hvorved det fåes en forbindelse av en av de generelle formler:

hvor R-p R2) R3, R5 og X har de ovenfor angitte betydninger, hvilken forbindelse, dersom Rg er hydrogen, om ønskes omsettes med et acyleringsmiddel, et alkylhalogenid eller et arylalkylhalogenid, hvorved hydrogenet erstattes med en acyl-,' alkyl- eller arylalkyl-gruppe, hvorpå en eventuell 11-kétogruppe om ønskes reduseres til den tilsvarende ll(3-hydroxygruppe, hvoretter forbindelsen omsettes med en syre for avspaltning av methylendioxydgruppene, og den der-

ved erholdte 21-hydroxyforbindelse om ønskes omdannes til en 2.1-ester ved omsetning med et acyleringsmiddel.

Omsetningen av det som utgangamateriale anvendte 17a,20,20,21-bis-(methylendioxy)-4-pregnen-3-on av formel II med alkylformiat og natriumhydrid i inert atmosfære utføres hensiktsmessig ved at man oppløser steroidet i et oppløsningsmiddel såsom benzen og avkjøler den dannede oppløsning til romtemperatur, hvoretter ethylformiat tilsettes. Luften i reaksjonsbeholderen skiftes ut med nitrogen, natriumhydrid tilsettes, og blandingen omrøres ved romtemperatur i flere timer.

For omsetning av 17a , 20 , 20 , 21-bis(methylendioxy)-2-hydroxymethylen-H-pregnen-3-onet av formel III med hydrazinforbindelsen er det hensiktsmessig å oppløse steroidet i absolutt ethanol og å oppvarme oppløsningen med hydrazinforbindelsen (eller et salt av denne forbindelse i nærvær av en buffer, såsom natriumacetat) i inert atmosfære. Dersom hydrazinforbindelsen er hydrazinhydrat, kan steroidoppløsningen med fordel tilsettes en 1:1-oppløsning av hydrazinhydrat og absolutt ethanol, hvoretter blandingen kokes under nitrogenatmosfære i ca. 4 5 minutter med tilbakeløpskjøling. I dette tilfelle fåes en forbindelse av formel IV hvor Rg er hydrogen. Dette hydrogen kan om ønskes skiftes ut ved å omsette forbindelsen med et alkylerings.middel, aralkyleringsmiddel eller acyleringsmiddel. Som acyleringsmiddel kan det hensiktsmessig anvendes benzoesyreanhydrid, tertiært butylacetylklorid, eddiksyreanhydrid, propionsyreanhydrid eller et polybasisk anhydrid, såsom 6,B-dimethylglutarsyreanhydrid eller ravsyreanhydrid. Acyleringen utføres hensiktsmessig i nærvær av en organisk base, såsom pyridin.

Reduksjon av et 11-ketoradikal i en erholdt forbindelse av en av formlene IV til den tilsvarende 11-3-hydroxygruppe kan utføres f.eks. ved å tilsette en mettet oppløsning av natriumborhydrid til en oppløsning av steroidet i en blanding av triethylamin og isopropanol, til hvilken blanding det foretrekkes å tilsette en liten mengde vann, og deretter la blandingen stå natten over.

Omsetningen av den erholdte forbindelse av en av formlene IV (etter eventuelle utskiftninger i 1'- eller 2'- og/eller 11-stillingen) med syre for avspaltning av methylendioxydgruppene kan foretaes f.eks. med en 60 % vandig oppløsning av maursyre.

Ved reaksjonen fåes som regel en blanding av en 21-hydroxy og en 21-acyloxyforbindelse, hvor 21-acylgruppen stammer fra den organiske syre som anvendes ved reaksjonen. En blanding av steroidene inneholdende en 21-hydroxy- bg en 21-acyloxygruppe kan adskilles ved kromatografering. Eventuelle acylgrupper, som finnes ved R^ eller ved F, kan om ønskes fjernes ved behandling av steroidet med natriummethoxyd i methanol ved romtemperatur.

Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen illustreres i de nedenstående eksempler.

Eksempel 1

1,350 g 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-ll<g->hydroxy-16a-methyl-4-pregnen-3-on oppløses i 23 ml tørt, varmt benzen, og den dannede oppløsning avkjøles til romtemperatur og behandles med 0,96 ml friskt destillert ethylformiat. Luften i reaksjonsbeholderen fortrenges med nitrogen, og 560 mg natriumhydrid (som en 58 % dispersjon i mineralolje) tilsettes. Beholderen evakueres påny og fylles med nitrogen, og blandingen omrøres med magnetrører ved

romtemperatur i 18 timer. Blandingen helles over i et overskudd av en mettet vandig oppløsning av natriumdihydrogenfosfat, og produktet ekstraheres 4 ganger med benzen. De organiske ekstrakter vaskes 3 ganger med vann og tørkes over natriumsulfat. Ved av-destillering av oppløsningsmidlet fåes det urene produkt, som opp-løses i ether og renses som natriumsaltet ved ekstraksjon med en 10 % oppløsning av natriumcarbonat. De vandige alkaliske ekstrakter gjøres atter sure med et overskudd av en mettet vandig oppløs-ning av natriumdihydrogenfosfat og ekstraheres med ether og med kloroform. De sammensatte organiske ekstrakter tørres over natrium-sulf at og inndampes til tørrhet, hvorved det fåes 850 mg 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-ll6-hydrozy-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3-on, som har følgende egenskaper: X ^^sian°"''= 249,8 my (e = 249), X maks = 307,5 mp (e = 100).

Det dannede 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-llg-hydroxy-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3-on oppløses i 9,2 ml absolutt ethanol og behandles med en oppløsning av 0,16 ml hydrazinhydrat oppløst i 0,16 ml absolutt ethanol. Blandingen kokes med tilbakeløpskjøling i nitrogenatmosfære i ca. 4 5 minutter og inndampes deretter til tørrhet under forminsket trykk. Inndampningsresten vaskes 3 ganger med koldt vann, og det dannede amorfe stoff tørres ved 80° C i 1 time i kraftig vakuum, hvorved det fåes ca.-820 mg 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-

4-pregnen-ll<g->ol, X maks = 261 my (e = 220).

Til en oppløsning av 100 mg 17a,20,20,21-bis(methylen-dioxy)-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-llB-ol i 2 ml pyridin settes 0,5 ml eddiksyreanhydrid. Blandingen tillates å stå ved romtemperatur. En blanding av is og vann tilsettes deretter. Etter henstand i ca. 30 minutter ekstraheres produktet med ethylacetat. Ethylacetatekstrakten vaskes i rekkefølge med vann, iskold IN svovelsyre (inntil pH-verdien av vannsjiktet er 1 - 3), mettet vandig natriumhydrogencarbonat (inntil pH-verdien av vannsjiktet er 8), og vann (inntil vannsjiktet reagerer nøytralt). Ethylacetat-oppløsningen tørkes over vannfritt natriumsulfat. Derpå avdestilleres oppløsningsmidlet ved ca. 40° C i vakuum, hvorved man får 1' -acetyl-17a ,20 , 20, 21-bis-(methylend'ioxy )-16a-methyl- (3 , 2-c) - pyrazol-4-pregnen-llB-ol, som isoleres ved tilsetning av vann og filtrering.

1'-acetyl-17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-113-ol (720 mg) oppvarmes på dampbad med 24 ml av en 60 % vandig oppløsning av maursyre i ca. 30 minutter. Overskudd av reagens fjernes i vakuum under anvendelse av et vannbad av 50° C som varmekilde. Inndampningsresten skylles 4 ganger med n-hexan og tørkes deretter ved 6 0° C i kraftig vakuum, hvorved det fåes et amorft stoff, som er en blanding av 1'-acetyl-113,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-2o-on og 1'-acetyl-21-formyloxy-118,17a-dihydroxy-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-20-on, hvilke forbindelser adskilles ved kromatografering.

500 mg av dette urene produkt oppløses i 2,4 ml ren metha-.noi og tillates å stå og reagere med 0,9 ml av en 1,3 3 N oppløsning av natriummethoxyd i methanol ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære i 10 minutter. Alkoxydet nøytraliseres med eddiksyre,

og blandingen inndampes deretter til tørrhet og skylles med n-hexan. Inndampningsresten vaskes med vann, filtreres og tørkes til konstant vekt, hvorved det fåes ca. 375 mg 118,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-(3,2-c) -pyrazol-4-pregnen-2o-on, X ^g^<01> = 263 my (£ = 233).

Eksempel 2

2,60 g 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-9a-fluor-16a-methyl-4-pregnen-3,11-dion oppløses i 95 ml tørt benzen under anvendelse av tørr apparatur og behandles med 2,43 ml friskt destillert ethylformiat. Ca. 1,19 g av en dispersjon av natriumhydrid i

mineralolje (ca. 51 %) tilsettes, etterfulgt av ca. 1,19 g friskt fremstilt tørt natriummethoxyd (tørket ved ca. 17 5° C med oljepumpe 1 4 timer). Luften i apparatet fortrenges påny med nitrogen, og blandingen,som straks blir gul, omrøres ved romtemperatur i 1 -

1,5 timer. På dette tidspunkt er farven av reaksjonsblandingen mørk oransje. Blandingen avkjøles på isbad, og en kold, mettet oppløsning av natriumdihydrogenfosfat tilsettes gradvis for å spal-te overskudd av hydrid og for å nøytralisere alkoxydet. Ether tilsettes, og sjiktene skilles. De vandige sjikt ekstraheres tilbake med ether, og de sammenslåtte organiske sjikt vaskes syrefrie med vann og ekstraheres derpå 3-4 ganger med en 5 % vandig oppløsning av natriumhydrogencarbonat. Disse ekstrakter tillates å stå. Produktet ekstraheres deretter 4-5 ganger med en kold 2 % vandig oppløsning av natriumhydroxyd. For å unngå emulgering helles det vandige alkali forsiktig i skilletrakten, og sjiktene adskilles uten å ryste trakten. De to siste ekstrakter kan rystes med forsik-tighet. Den mørke væske ekstraheres tilbake to ganger med ether, og tilslutt surgjøres koldt med en mettet vandig oppløsning av natriumdihydrogenfosfat. Den nøytrale ether-benzen-fraksjon settes til side og behandles som beskrevet i det etterfølgende. Produktet ekstraheres med ether, og etherekstraktene vaskes syrefrie med en mettet oppløsning av natriumklorid. Etter tørking over magnesiumsulfat, inndampes etheroppløsningen til tørrhet, og det amorfe produkt omkrystalliseres fra methanol, hvorved det fåes 1,0 7 g (39 %) produkt med smeltepunkt 230 - 23 2° C, når smelte-punktsprøven oppvarmes fra 19 5° C. Stoffet er velegnet som ut-gangsmateriale ved de etterfølgende trinn. Den ultrafiolette absorpsjon i methanol inneholdende 2 % 2,5 N NaOH viser X ma^s <= >2 39 my (e = 342) og X maks = 360 my ( e = 213). Moderlutene gir et produkt av mindre renhet. En analytisk prøve av 17a , 20 , 20 , 21-bis-(methylendioxy)-9a-fluor-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3,11-dion, dannet ved omkrystallisasjon fra ether og fra methanol, gir et lavere smeltepunkt (221 - 224° C), men forbedrer den ultrafiolette absorpsjon (X <e>!r<n> = 239 my (e = 429), 359 , 5 my (e = 263)).

JIlclXS

1,00 g 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-9a-fluor-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3,ll-dion (smeltepunkt 230 - 232° C) suspenderes i 44 ml absolutt ethanol og behandles med 0,38 ml hydrazinhydrat (99 - 100 %). Luften i apparatet fortrenges med nitrogen, og blandingen oppvarmes hurtig til kokepunktet. Etter kokning i 1 time med tilbakeløpskjøling inndampes blandingen til

tørrhet. Den oljeaktige inndampningsrest behandles med vann, og det amorfe stoff fjernes ved filtrering, vaskes omhyggelig med vann og tørkes. Utbyttet er ca. 900 ml. Råproduktet oppløses i absolutt ethanol og konsentreres i vakuum, inntil fast stoff utskilles. Dette stoff oppløses påny ved oppvarming, og det settes tilside for langsom utkrystallisering, hvorved det fåes 700 mg 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-9a-fluor-16a-methyl-(3,2-c)-pyra-

PH DH

zol-4-pregnen-ll-on, X = 260 my (e = 215). Stoffet smelter over 300° C.

455 mg 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-9a-fluor-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-ll-on suspenderes i 75 ml av en oppløsning av natriumborhydrid i isopropanol, som fremstilles ved oppslemming av et overskudd av natriumborhydrid i isopropanol, kraftig omrøring i ca. 15 minutter og filtrering for fraskillelse av overskudd av natriumborhydrid. Til suspensjonen settes 0,816 ml av en oppløsning av 0,55 ml triethylamin i 1,45 ml isopropanol. Blandingen omrøres, og det tilsettes så meget methylenklorid (ca.

3 0 ml) under avkjøling at blandingen blir homogen. En vanndråpe (ca. 1/20 ml) tilsettes, og blandingen omrøres i nitrogenatmosfære ved romtemperatur i 18 timer. Det utskilles vanligvis noe uopp-løselig stoff under reaksjonen. Derpå avkjøles blandingen, og overskudd av natriumborhydrid spaltes ved tilsetning av kold 2,5 N saltsyre. Blandingen (pH ca. 5) inndampes til tørrhet i vakuum og inndampingsresten vaskes med vann og tørres, hvorved det fåes 42 5 mg 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-9a-fluor-llg-hydroxy-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen, som ikke viser noen mettet carbonylab-sorpsjon i det infrarøde område (Nujol). Smeltepunkt 240° C under spaltning. Hydrogenkloridet karakteriseres ytterligere ved en hydrogenbinding (3,5 - 4,5 y) og ved skarpe maksima ved 6,1 y og 6,2 7 y. Hydrogenkloridet er uoppløselig i vann og i methylenklorid. (I nærvær av begge oppløsningsmidler hydrolyserer saltet og gir det frie amin, som er uoppløselig i methylenklorid). Den ultrafiolette absorpsjon av hydrogenkloridet viser X CH 3 OH= 265 my

m^t-K s

(e = 208). Produktet forkulles ved ca. 273° C. Analyse for klor: Beregnet 7,14 %; funnet: 7,14 %.

Til en oppløsning av 100 mg 17a,20,20,21-bis(methylen-dioxy)-9a-fluor-ll8-hydroxy-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen i 2 ml pyridin settes 0,5 ml eddiksyreanhydrid. Blandingen tillates å stå i 18 timer ved romtemperatur. En blanding av is og vann tilsettes deretter. Etter henstand i ca. 30 minutter ekstraheres produktet med ethylacetat. Ethylacetatekstrakten vaskes i rekke-følge med vann, iskold 1 N svovelsyre (inntil pH-verdien av vannsjiktet er 1 - 3), mettet vandig natriumhydrogencarbonat (inntil pH-verdien av vannsjiktet er 8), og vann (inntil vannsjiktet reagerer nøytralt). Ethylacetatet avdestilleres deretter ved ca.

40° C i vakuum, hvorved det fåes 1'-acetyl-17a,20,20,21-bis(methy-lendioxy)-9a-fluor-118-hydroxy-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen, som isoleres ved tilsetning av vann og filtrering.

1'-acetyl-17a,20,2 0,21-bis-(methylendioxy)-9a-fluor-116-hydroxy-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen (25 mg) oppvarmes på dampbad med 6 ml av en 50 % vandig oppløsning av maursyre i ca. 3 0 minutter. Overskudd av reagens fjernes under redusert trykk på vannbad ved ca. 50° C. Inndampningsresten skylles med n-hexan. Deretter oppløses inndampningsresten i aceton og utfelles med n-hexan, hvorved det fåes en amorf blanding av 9a-fluor-113,17a,21-trihydroxy-16a-methyl- (3 , 2-c) -pyrazol-4-pregnen-20 -on og 11 -acetyl-9a-fluor-21-formyloxy- 116,17a-dihydroxy-16a-methyl-(3,2-c)-pyra-zol-4-pregnen-20-on, hvilke forbindelser adskilles ved kromatografering.

500 mg av dette råprodukt oppløses i 2,4 ml ren methanol og omsettes med 0,9 ml av en 1,33 N oppløsning av natriummethoxyd i methanol ved romtemperatur under nitrogenatmosfære i 10 minutter. Alkoxydet nøytraliseres med eddiksyre, og blandingen inndampes deretter til tørrhet, filtreres og tørkes til konstant vekt til 9a-fluor-118,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-20-on. Hydrokloridet smelter ved 300° C under spaltning.

Eksempel 3

Ca. 6 g 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-116-hydroxy-16a-methyl-4-pregnen-3-on suspenderes i ca. 35 ml tørt benzen, og til denne suspensjon settes 6 ml ethylformiat og ca. lg friskt fremstilt natriummethoxyd. Blandingen tillates å stå ved romtemperatur under nitrogen i 1 - i time og avkjøles deretter på isbad. Deretter gjøres blandingen sur med et overskudd av en mettet vandig oppløsning av kaliumdihydrogenfosfat. Ether tilsettes, og produktet ekstraheres flere ganger med en vandig oppløsning av natriumhydroxyd. Ekstraktene ekstraheres tilbake med ether, det surgjøres med kold 2,5 N HC1 og ekstraheres deretter med methylenklorid. Methylenkloridekstraktene vaskes med vandig mettet natriumkloridoppløsning, tørres over raagnesiumsulfat og inndampes deretter til tørrhet. Det dannede skum gir en kraftig ferriklorid-reaksjon og omkrystalliseres med ether-petrolether, hvorved 17a, 20 ,2 0 , 21-bis(methylendioxy)-118-formyloxy-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3-on fåes. Denne forbindelse oppviser infra-røde absorpsjonsegenskaper svarende til A-ring-hydroxymethylen, hvilken struktur er i overensstemmelse med den ultrafiolette absorpsjon i alkalisk methanol, X CH 3 OH= 242 my og 357 my. Enn-videre oppviser forbindelsen et kraftig maksimum i det infrarøde område ved 5,84 - 5,85 my og likeledes ved 8,5 my. Disse maksima er karakteristiske for 11 -formiat.

Til 1,433 g 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-llB-formyl-oxy-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3-on, suspendert i 18

ml absolutt ethanol, settes 0,45 ml fenylhydrazin, og blandingen kokes med tilbakeløpskjøling i 40 minutter under nitrogen. Ved avkjøling utfelles 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-lla-formyloxy-16a-methyl-l'-fenyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen.

17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-llB-formyloxy-16a-methyl-1'-fenyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen (720 mg) oppvarmes på dampbad med 24 ml 60 % vandig oppløsning av maursyre i ca. 30 minutter. Overskudd av reagenset avdestilleres i vakuum på vannbad ved ca. 50° C. Inndampningsresten skylles 4 ganger med n-hexan og tørres deretter ved 60° C i kraftig vakuum, hvorved det fåes en fast blanding av 113,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-l'-fenyl-(3,2-c) -pyrazol-4-pregnen-20-on og 118>17a,21-trihydroxy-16a-methyl-l'-fenyl-(3,2-c) -pyrazol-4-pregnen-2 0-on-formiat.

500 mg av dette råprodukt oppløses i 2,4 ml rent methanol og bringes til å reagere med 0,9 ml av en 1,3 3 N oppløsning av natriummethoxyd i methanol ved romtemperatur under nitrogenatmosfære i 10 minutter. Dette alkoxyd nøytraliseres med eddiksyre, og blandingen inndampes til tørrhet og skylles med n-hexan. Inndampingsresten vaskes med vann, filtreres og tørkes til konstant vekt, hvorved fåes 118,17a,2l-trihydroxy-16a-methyl-l'-fenyl-(3,2-c) - pyrazol-4-pregnen-20-on. Forbindelsen isomeriseres til 2'-forbindelsen ved omdannelse til hydrokloridet som smelter ved 14 3 - 14 5°C.

Eksempel 4

Til 200 mg 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-ll8-hydroxy-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3-on, fremstilt som beskre-

vet i eksempel 1, i 7 ml absolutt ethanol, settes 82 mg natrium-

acetat og derpå 102 mg cyclohexylhydrazinoxalat. Blandingen kokes under nitrogen i 1 time. Uoppløselig materiale fjernes ved filtrering. Filtratet inndampes til tørrhet. Inndampningsresten opp-

løses i 3 ml ether, og etheroppløsningen vaskes i rekkefølge med 2 % vandig natriumhydroxyd og derpå med vann til nøytral reaksjon. Etheroppløsningen tørkes deretter over magnesiumsulfat, filtreres

og inndampes til tørrhet, hvorved det fåes 19 7,7 mg av et gult stoff bestående av 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-1'-cyclohexyl-16a-methyl-(3,2-c) -pyrazol-4-pregnen-llB-ol, X maks = 273 my (e = 165).

150 mg av det ovennevnte stoff oppvarmes under nitrogen

med 5 ml av en 60 % vandig oppløsning av maursyre i ca. 40 minutter. Bladningen inndampes til tørrhet, og deretter tilsettes vann. Produktet ekstraheres med kloroform, og kloroformoppløsningen vaskes med mettet vandig natriumkloridoppløsning, 5 % vandig natriumhydro-gencarbonatoppløsning og derpå med vann. Kloroformoppløsningen tørkes over magnesiumsulfat og inndampes til tørrhet, hvorved det fåes en inndampningsrest på 7'6 mg. Denne taes opp i ether inneholdende litt methanol, omrøres med 75 mg aktivkull, filtreres og inndampes deretter til tørrhet, hvorved fåes lip,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-l' -cyclohexyl-(3 , 2-c) -pyrazol-4-pregnen-20-on, X ma]<s =

276 my (e = 199).

Eksempel 5

En blanding av 90 mg 17a,20,20,21-bisCmethylendioxy)-ll6-hydroxy-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3-on 5 fremstilt som beskrevet i eksempel 1, og 0,028 ml fenylhydrazin kokes under nitrogen i 1,2 ml absolutt ethanol i 50 minutter. Reaksjonsblandingen inndampes til tørrhet. Vann tilsettes, og produktet frafiltreres som et amorft stoff som vaskes i rekkefølge med vann, fortynnet syre, vann og petrolether. Produktet omkrystalliseres fra methanol, hvorved det fåes 17a>20,20,21-bis(methylendioxy)-116-hydroxy-16a-methyl-l' -f enyl-(3 , 2-c) -pyrazol-4-pregnen, X ma;ks =

260 my (e = 308).

30 mg av dette produkt oppvarmes på dampbad med 2 ml

60 % maursyre i 35 minutter. Oppløsningsmidlene avdestilleres i

vakuum, hvorpå det tilsettes vann, og produktet filtreres, hvorved det fåes en blanding av 116,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-l'-fenyl-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-20-on og 21-formiatet av dette. Til-stedeværelsen av formiat fremgår av den infrarøde absorpsjon ved 5,81 og 8,5 y.

500 mg av dette råprodukt oppløses i 2,4 ml ren methanol og omsettes med 0,9 ml av en 1,3 3 N oppløsning av natriummethoxyd i methanol ved romtemperatur under nitrogenatmosfære i 10 minutter. Alkoxydet nøytraliseres med eddiksyre, og blandingen inndampes til tørrhet og skylles med n-hexan. Inndampningsresten vaskes med vann, filtreres og tørres til konstant vekt, hvorved fåes 116,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-l'-fenyl-(3,2-c)-pyrazol-4-preg-nen-20-on, X ma^g3 = 2,8 - 3,0 y, 5,84 y, 6,13 y, 6,21 y og 6,61 y.

Eksempel 6

Til en blanding av 223 mg 17a,20,20,21-bis(methylen-dioxy)-116-hydroxy-2-hydroxymethylen-16a-methylen-4-pregnen-3-on, fremstilt som beskrevet i eksempel 1, i 5 ml absolutt ethanol, settes 49 mg natriumacetat og derpå 95 mg p-toylhydrazinhydrogen-klorid. Blandingen kokes med tilbakeløpskjøling under nitrogen i 45 minutter. Etter avkjøling utfelles et fast stoff som frafiltreres. Filtratet inndampes til tørrhet, og det tilsettes vann. Produktet filtreres, vaskes med vann, fortynnet syre og påny med vann, inntil reaksjonen er nøytral, hvorved fåes 17a,20,20,21-bis-(methylendioxy)-16a-methyl-l'-(p-tolyl)-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-II6-0I, X maks 262,5 my, (e = 276).

Produktet renses ved oppløsning av 2 35 mg av det urene materiale i 30 ml methanol og omrøring ved romtemperatur med 2 35 mg aktivkull. Produktet filtreres, og filtratet konsentreres og omkrystalliseres, hvorved fåes 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-16a-methyl-1'-(p-tolyl)-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-ll-ol, smeltepunkt 161 - 163,5° C, U.V. X , 263 my, (e = 329); I.R. 3 y område, 6,15 y, 6,55 y, 9,06 y. 13 mg av ovennevnte produkt oppvarmes på dampbad med 1 ml av en 6 0 % vandig oppløsning av maursyre i ca. 3 5 minutter. Blandingen inndampes til tørrhet, det tilsettes vann, og produktet fra filtreres, hvorved fåes 116,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-l'-(p-tolyl)-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-20-on, I.R. 2,74 y, 2,8 til 3,0 y,

5,82 y, 6,1 til 6,55 y; U.V. A maks 265 my, (e =355).

Eksempel 7

111,5 mg 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-116-hydroxy-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3-on, fremstilt som beskrevet i eksempel 1, suspenderes i 2,5 ml ethanol og behandles med 24,5 mg natriumacetat, hvoretter det tilsettes 48,5 mg p-fluor-fenyl-hydrazin-hydrogenklorid. Luften i beholderen fortrenges med nitrogen,

og blandingen oppvarmes hurtig til kokepunktet. Etter kokning med tilbakeløpskjøling i 1 time inndampes blandingen til tørrhet. Inndampningsresten oppløses i ether, ethersjiktet behandles 3 ganger med 2,5 N saltsyre og deretter 3 ganger med 2,5 N natriumhydroxyd og tilslutt med vann. Ethersjiktet tørkes over magnesiumsulfat, filtreres og konsentreres til tørrhet i vakuum. Produktet oppløses i methanol og hensettes til langsom utkrystallisasjon, hvorved det som hovedkomponent fåes 80,9 mg 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-116-hydroxy-16a-methyl-2'-(p-fluorfenyl)-4-pregnen-(3,2-c)-pyrazol, smeltepunkt 149 - 152° C, X Me?H = 260 (e = 299).

ms. KS

Moderluten kromatograferes på nøytralt aluminiumoxyd og elueres derpå med en blanding av benzen og n-hexan, hvorved det fåes ytterligere 44,5 mg produkt, som etter omkrystallisasjon fra methanol smelter ved 147 - 152° C. 70 mg 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-110-hydroxy-16a-methyl-2'-(p-fluorfenyl)-4-pregnen-(3,2-c)-pyrazol oppvarmes på dampbad med 2 ml av en 60 % oppløsning av maursyre i 3 5 minutter. Overskudd av reagens avdestilleres i vakuum under anvendelse av vannbad ved ca. 50° C. Inndampningsresten vaskes omhyggelig med vann og tørres deretter ved 80° C til dannelse av 61,1 mg inndampningsrest. Det urene produkt oppløses i 3 ml spektralren methanol og omsettes med 0,5 ml av en 0,1 N oppløsning av natriummethoxyd i methanol ved romtemperatur i 10 minutter. Produktet, som har en pH-verdi over 11, nøytraliseres med eddiksyre. Blandingen inndampes deretter til tørrhet og vaskes omhyggelig med vann, filtreres og tørkes til konstant vekt, hvorved fåes 57,5 mg 118 »17a,21-trihydroxy-16a-methyl-2 0-oxo-21-(p-fluorfenyl)-4-preg-nen- (3 , 2-c) -pyrazol, som har et absorps jonsmaksimum ved 2 50 m.o.

Ca. 137 mg 118,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-20-oxo-2'-(p-fluorfenyl)-4-pregnen-{3,2-c)-pyrazol behandles med en blanding av 4 ml pyridin og 4 ml eddiksyreanhydrid, og blandingen tillates å stå ved romtemperatur i 18 timer. Oppløsningsmidlene avdestilleres i vakuum, inndampningsresten vaskes med små porsjoner benzen. Etter tørking veier den 12 0 mg. Denne rest kromatograferes over silikagel. Fraksjonen som elueres med 8:2 petrolether:ether, omkrystalliseres fra methanol, hvorved fåes 113,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-2 0-oxo-2'-(p-fluorfenyl)-4-pregnen-(3,2-c) -pyrazol-21-acetat, med smeltepunkt 178 - 184° C. Etter ytterligere omkrystallisasjon smelter en prøve ved 186 - 188° C.

Eksempel 8

Til 223 mg 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-118-hydroxy-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3-on i 3 ml absolutt ethanol settes 49,2 mg natriumacetat og derpå 10 5 mg p-methoxyfenyl-hydrazin-hydroklorid. Reaksjonsblandingen kokes med tilbakeløps-kjøling i 5 minutter, hvorunder dens farve blir mørk. Produktet frafiltreres og inndampes til tørrhet. Residuet oppløses i ether, oppløsningen filtreres og omrøres med residuets egen vekt av "Darco G-60" (en kvalitet avfarvende trekull). Filtratet inndampes til et volum på 1 ml. Petrolether tilsettes derpå, og produktet frafiltreres, hvorved man får 17a,20,20,21-bis(methylendioxy)-16a-methyl-1'-(p-methoxyfenyl)-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-llB-ol.

I spektrets ultrafiolette område: 268 my, (e = 268).

7 0 mg av dette materiale oppvarmes på dampbad med 7 ml

60 % vandig maursyre i ca. 40 minutter under nitrogenatmosfære. Blandingen inndampes til tørrhet, residuet tilsettes vann og produktet frafiltreres. Spekteret i det infrarøde område viser en høy topp ved 5,84 y (C=0) og et maksimum ved 8,15 y. I det ultrafiolette område: X Vo 266 my, (e = 296).

niciK s

50 mg av dette materiale renses ved å oppløse det i aceton og tilsette 50 mg "Nuchar C-1000-N" (en kvalitet avfarvende trekull) til oppløsningen og derpå filtrere denne. Det tilsettes petrolether, og produktet krystalliseres. Etter flere behandlinger får man et gult, fast stoff som består av 113,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-l'-(p-methoxyfenyl)-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-20-on,

X mak, s 270 my, (e = 338).

I en alternativ utførelsesform settes 49,2 mg natriumacetat og derpå 10 5 mg p-methoxyfenyl-hydrazin-hydroklorid til 2 33 mg 17a,20,20,21-bis-(methylendioxy)-llB-hydroxy-2-hydroxymethylen-16a-methyl-4-pregnen-3-on, hvorpå man lar blandingen stå ved rom- hvor betegner B-hydroxy eller keto, R2 betegner hydrogen, fluor eller methyl, R 3 betegner a-methyl, $-methyl eller methylen, R^ betegner hydrogen eller acyl, R5 betegner hydrogen, acyl, alkyl, cyclyalkyl, arylalkyl eller en arylgruppe som eventuelt kan være substituert med et halogenatom, en alkylgruppe eller en alkoxy-gruppe, og X betegner hydrogen eller halogen, karakterisert ved at en forbindelse av den generelle formel: hvor <R>1<?> R2, R3 og X har de ovenfor angitte betydninger, omsettes med et alkylformiat og natriumhydrid i inert atmosfære, hvorved det fåes en forbindelse av den generelle formel: temperatur i 5 timer. Den inndampes derpå til tørrhet. Residuet oppløses i ether, og oppløsningen ekstraheres først med en 2,5 N natriumhydroxydoppløsning, derpå med 2,5 N saltsyre, deretter med vann og sluttelig med en mettet natriumkloridoppløsning. Oppløs-ningen i ether befries for vann med magnesiumsulfat, filtreres og inndampes til tørrhet, hvorved man får et residuum som viser et maksimum i spekterets ultrafiolette område ved 270 mp, (e = 258).

Det således erholdte råprodukt oppløses i 20 ml methanol under oppvarming, og oppløsningen tilsettes 50 g "Nuchar C-1000-N". Blandingen filtreres, og filtratet inndampes til lite volum. Det tilsettes derpå vann, hvorved det utskilles 75 mg 116,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-l'-(p-methoxyfenyl)-(3,2-c)-pyra-zol-4-pregnen-20-on, som renses ved kromatografi i silikagel. Spekteret i det ultrafiolette område viser X maks273, (e = 287).

116 j17a,21-trihydroxy-16a-methyl-l'-(p-methoxyfenyl)-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-20-onet behandles med en blanding av 1,5 ml pyridin og 1,5 ml eddiksyreanhydrid, og man lar blandingen stå natten over ved romtemperatur. Oppløsningsmidlene fjernes derpå i vakuum, residuet tilsettes vann, og det erholdte 116,17a, 21-trihydroxy-16a-methyl-l'-(p-methoxyfenyl)-(3,2-c)-pyrazol-4-pregnen-20-on-21-acetat fraskilles ved filtrering. Etter tørking oppløses forbindelsen i methylenklorid, oppløsningen tilsettes noen få dråper 2,5 N saltsyre, hvorpå den inndampes til tørrhet. Det herved erholdte 118,17a,21-trihydroxy-16a-methyl-l'-(p-methoxyfenyl)-(3 ,2-c)-pyråzol-4-pregnen-20-on-21-acetat-hydroklorid er oppløselig i methylenklorid og kan krystalliseres fra aceton.

Claims

Fremgangsmåte ved fremstilling av 17a-hydroxy-20-oxo-4-pregnen-(3,2-c)-pyrazolforbindelser av en av de generelle formler:

hvor R-p R2, R3 og X har de ovenfor angitte betydninger, hvilken forbindelse omsettes i inert atmosfære med et hydrazin av den generelle formel R5NHNH2, hvor R5 har den ovenfor angitte betyd-ning, eller et salt derav, hvorved det fåes en forbindelse av en av de generelle formler: hvor R-p R2> Rg> R^ og X har de ovenfor angitte betydninger, hvilken forbindelse, dersom R^ er hydrogen, om ønskes omsettes med et acyleringsmiddel, et alkylhalogenid eller et arylalkylhalogenid, hvorved hydrogenet erstattes med en acyl-, alkyl- eller arylalkyl-gruppe, hvorpå en eventuell 11-ketogruppe om ønskes, reduseres til den tilsvarende 118-hydroxygruppe, hvoretter forbindelsen omsettes med en syre for avspaltning . av methylendioxydgruppen, og den derved erholdte 21-hydroxyforbindelse om ønskes omdannes til en 21-ester ved omsetning med et acyleringsmiddel.