NO140824B

NO140824B - Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive 7alfa-hydroxy-oestratriener

Info

Publication number: NO140824B
Application number: NO753455A
Authority: NO
Inventors: Karl Petzoldt; Hans-Joerg Vidic; Klaus Prezewowsky; Yukishige Nishino; Rudolf Wiechert; Henry Laurent
Original assignee: Schering Ag
Priority date: 1974-10-14
Filing date: 1975-10-13
Publication date: 1979-08-13
Also published as: DK135378C; IE42167B1; PL103989B1; NL7512041A; DK439975A; HU176715B; GB1528796A; YU243975A; IE42167L; US4011314A; CS205009B2; NZ178886A; PH13802A; IL48276A; IL48276A0; FR2287908B1; JPS5165747A; ES441784A1; ATA775475A; NO140824C

Description

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte ved fremstilling av 7-hydroxy -øst ratriener med den generelle formel:

hvor

R^ er hydrogen, alkanoyl med 1-15 carbonatomer, cyclopentyl, tetrahydropyranyl eller en sulfonsyrerest med 1-15 carbonatomer,

R2 og R^, som er like eller forskjellige, er hydrogen, alkanoyl med

1-15 carbonatomer eller tetrahydropyranyl, og R ? kan dessuten være en sulfonsyrerest med 1-15 carbonatomer, og R^ er ethynyl eller klorethynyl.

Fremgangsmåteforbindelsene oppviser en gunstig dissosiert farmakologisk aktivitet. På grunn av den sterke vaginotrope og svakt uterotrope virkning er de fortrinnsvis egnet til behandling av kvinner i postmenopausen. Således kan de anvendes ved behandling av østrogenmangellidelser ved hvilke en sentralt rettet virkning på uterus skal unngåes, men en virkning på vagina imidlertid er ønsket. Fremgangsmåteforbindelsene er dessuten an-vendbare som utgangsmaterialer ved fremstilling av farmakologisk verdifulle steroider.

Den gunstige østrogene dissosiasjon lar seg f.eks. påvise ved sialinsyreprøven på mus såvel efter oral som efter subkutan applikasjon. Således oppviser fremgangsmåteforbindelsene, som er vist i tabell 1 med eksempel på 17a-ethynyl-1,3,5(10)-østra-t rien -3 , 7a , 17B-t riol , en dissosiasjonskvotient som langt over-treffer den for standardsubstansen østradiol og 17a-ethynyl-øst radiol.

Sialinsyreprøven utføres som følger:

Musene ovarektomeres. Fra den 10. dag efter kastreringen får dyrene en gang daglig i 3 dager forbindelsen som skal prøves peroralt. Den 4. dag avlives dyrene. Vagina og uterus taes straks ut og innveies til hydrolyse i et reagensglass. Bestemmelsen av sialinsyren skjer ifølge Svennerholm [Biochem. Biophys. Acta 24

(1957) 6o4]- Den doseavhengige økning i organvekten av vagina og uterus såvel som reduksjonen i sialinsyreinnhold bestemmes hvor-fra den relative virkningsstyrke av forsøksforbindelsen sammen-lignet med standardforbindelsen østradiol kan finnes. De relative virksomheter settes i forhold til hverandre og gir dissosia-sjonsgraden Q. For standardforbindelsen østradiol er Q = 1. Forbindelser med Q>1 er relativt vaginotrope, og de med Q<1 er relativt uterotrope.

De i tabell 1 angitte terskelverdier er bestemt ved den vanlige Allen-Doisy-prøve på rotter.

Opparbeidelse av fremgangsmåteforbindelsene til legemiddel-preparater skjer på vanlig vis idet man opparbeider virkestoffet med de i den galeniske farmasi vanlige bærermaterialer, fortynn-ingsmidler, smakskorrigenser osv. til de ønskede administrasjons-former som tabletter, dragéer, kapsler, oppløsninger osv. Virke-stoffkonsentrasjonen i de således fremstilte legemidler er avhengig av applikasjonsformen. Således inneholder en tablett fortrinnsvis 0,01 til IO mg, oppløsninger til parenteral applikasjon inneholder 0,1 til 20 mg/ml oppløsning.

Doseringen av fremgangsmåteforbindelsene kan endre

seg med administrasjonsmåten og den i hvert tilfelle anvendte forbindelse. Dessuten kan den endre seg efter den som i hvert tilfelle behandles. I alminnelighet administreres fremgangsmåteforbindelsene i en konsentrasjon som kan bevirke virksomme resultater uten å forårsake noen uheldige eller skadelige bi-virkninger. Således administreres de f.eks. i en dosehøyde som ligger i området fra ca. 0,02 mg til ca. 20 mg, skjønt under omstendigheter kan endringer forekomme slik at en dosehøyde på mere enn 20 mg, f.eks. inntil 50 mg, anvendes. Imidlertid anvendes fortrinnsvis en dosehøyde i området fra ca. 0,05 mg til

ca . 5 mg•

Foreliggende oppfinnelse angår en analogifremgangsmåte ved fremstilling av de terapeutisk aktive 7a-hydroxy-østratriener med den generelle formel I, og fremgangsmåten kjennetegnes ved at

a) et 7o.-hydroxy-østratrien-l7-on med den generelle formel:

hvor R^ og R2 er som ovenfor angitt, ethynyleres eller klor-ethynyleres med en metallorganisk forbindelse i 17a-stillingen, og at alt efter betydningen av R1, R2 og R^ i sluttproduktet, avspaltes eventuelt ether- eller estergrupper og/eller frie hydroxygrupper forethres og/eller forestres, eller

b) et 17a.-R^-øst rat rien med den generelle formel:

hvor R^ og R^ er som ovenfor angitt, fermenteres med en gjær-kultur av slekten Absidia, Aspergillus, Rhizopus, Pellicularia eller Diplodia, og alt efter den endelig ønskede betydning av Rl' R209 R3 i sluttproduktet, forethres og/eller forestres eventuelt én eller flere hydroxygrupper.

Innføringen av gruppen R^ kan utføres ved kjente fremgangsmåter med en metallorganisk ethynyl- eller klorethynylforbindelse, som f.eks. med ethynylmagnesiumbromid eller et alkalimetall-acetylid, som kaliumacetylid. Den som ethynyleringsmiddel anvendte metallorganiske forbindelse kan også dannes in situ og bringes til reaksjon med 17-ketonet med formel II. således kan man f.eks. la ketonet i et egnet oppløsningsmiddel innvirke på acetylen eller kloracetylen og et alkalimetall, fortrinnsvis i nærvær av en tertiær alkohol eller ammoniakk, eventuelt under for-høyet trykk. Kloracetylen kan dannes under reaksjonen fra 1,2-diklorethylen og en etherisk lithiummethyloppløsning (eks-

empel 14 b) .

7a-0H-forbindelser med den generelle formel I kan også fremstilles ad mikrobiologisk vei fra I7a-R^-østradiol med den generelle formel III. 7a-hydroxyleringen skjer med gjærkulturer av slektene Absidia, Aspergillus, Rhizopus, Pellicularia og Diplodia. Egnede stammer er f.eks.

Absidia orchidis (ATCC 8990),

Aspergillus luchuensis (CBS),

Rhizopus nigricans (ATCC 6227b),

Pellicularia filamentosa (ATCC 13 289),

Diplodia natalensis (ATCC 9055),

Rhizopus oryzae (ATCC 4858),

Rhizopus kazanensis (ATCC 8998),

Rhizopus cohuii (ATCC 8996),

Rhizopus shanghaiensis (ATCC IO 329),

Rhizopus stolonifer (ATCC IO 4o4)•

Ved utførelsen skjer fermenteringen under de samme betingelser som anvendes ved de kjente fermenteringsoverfør inger av steroider med gjærkulturer. Fortrinnsvis utføres den fermenta - tive hydroxylering av forbindelsene med formel III i submers-kulturer av de ovennevnte stammer under aerobe betingelser. Her-under fordyrkes gjærkulturene under lufting i et næringsmedium som inneholder de for vekstene av gjæren nødvendige carbohydrater, eggehvitestoffer, næringssalter og vekst stoffer. Efter utført fordyrkning tilsettes til kulturen substratet som vandig suspensjon eller oppløst i et egnet oppløsningsmiddel som methanol, ethanol, glycolmonomethylether, dimethylformamid eller dimethylsulfoxyd, og der fermenteres inntil omsetningen er avsluttet. Overføringen av substratet følges fortrinnsvis ved tynnskikts-kromatografisk analyse av prøveekstrakter. Som ved alle kjente mikrobiologiske overføringer av steroider er også ved foreliggende fremgangsmåte den optimale substratkonsentrasjon og den optimale ferment eringstid avhengig av substratets spesielle struktur og selve fermenteringsbetingelsene, og må fastlegges av fagmannen ved rutinemessige forprøver.

Efter utført fermentering isoleres fermenteringsproduktene på i og for seg kjent vis. Isoleringen kan f.eks. skje på den måte at ferment eringsvæskene ekstraheres med et polart, ikke-vannoppløselig oppløsningsmiddel, som ethylacetat, butylacetat eller methylisobutylketon, ekstraktet inndampes, og det således erholdte råprodukt eventuelt renses ved kromatografi og/eller krystallisasjon. Frie hydroxygrupper kan derpå forestres eller forethres. Forest rede eller forethrede hydroxygrupper kan over-føres til de frie hydroxygrupper.

For forestringen kommer de vanlige i steroidkjemien anvendte fremgangsmåter på tale. Da hydroxygruppene i 3-> 7- og 17-stilling oppviser forskjellig reaksjonsdyktighet, kan hydroxygruppene forestres trinnvis. Alt efter valget av reaksjonsbe-tingelser får man 3-mono-, 3,7-di- eller 3,7,17-trialkanoylforbind-elsene. Alkanoyleringen i 3- og 7-stillingen skjer fortrinnsvis med pyridin/syreanhydrid, hhv. pyridin/syrehalogenid, ved værelsetemperatur. Hvis alkanoyleringen ved lavere temperatur avbrytes efter ca. 0,3 til 1 time, får man 3-monoalkanoylforbindelsen, men fortsettes derimot alkanoyleringen i flere timer, dannes 3,7-dialkanoylforbindelsen. For alkanoylering av 17P-hydroxygruppen i 3>7-dialkanoylater lar man f.eks. syreanhydrid i nærvær av sterke syrer som p-toluensulfonsyre eller perklorsyre ved værelsetemperatur eller pyridin/syreanhydrid under oppvarmning, innvirke på steroidet. Disse fremgangsmåter kan også benyttes for å over-føre den frie trihydroxyforbindelse direkte til trialkanoylatet. Fra trialkanoylatene kan ved skånsom partiell forsåpning 3-hydroxygruppen frigjøres.

Trihydroxyforbindelsen såvel som mono- og diesteren kan overføres til de tilsvarende tetrahydropyranylethere med dihydropyran i nærvær av en sterk syre som p-toluensulfonsyre. Fra 3-monoalkanoyl- hhv. 3,7-dialkanoyl-7,17-, hhv. -17-tetrahydropyranyletherne kan 3- hhv. 3,7-hydroxygruppene frigjøres ved alkalisk forsåpning.

Spaltningen av tetrahydropyranyletherne skjer under milde betingelser under syretilsetning, f.eks. med oxalsyre i methylenklorid og methanol ved koketemperatur.

Forethringen med en alkyl- eller cycloalkylgruppe i 3-stillingen utføres fortrinnsvis med et tilsvarende halogenid i nærvær av en svak base, som kaliumcarbonat, natriumcarbonat osv. i alkoholisk oppløsning ved værelsetemperatur, eller med alkyl-eller cycloalkylhalogenid i nærvær av en sterk base som natriumhydrid ved værelsetemperatur.

Forbindelser som er forethret i 3-stillingen, kan derpå forestres i 7- og 17-stilling med carboxylsyrer eller omsettes med dihydropyran.

En i 3-stillingen monoalkanoylert forbind-

else kan overføres til 7-sulfonsyreesteren, idet man omsetter 3-monoalkanoylforbindelsen på i og for seg kjent vis i nærvær av et tertiært amin med et sulfonsyrehalogenid ved værelsetemperatur. Analogt kan en i 3-stillingen forethret forbindelse sulfoneres i 7-st illingen.

Omsettes en trihydroxyforbindelse med et sulfonsyrehalogenid i nærvær av et tertiært amin ved værelsetemperatur, får man 3,7-disulfonsyreesteren. I tilfelle omsetningen med methansulfon-syreklorid er det hensiktsmessig å beskytte 17-hydroxygruppen, f.eks. ved overføring til 17-tetrahydropyranyletheren, da en i 17-stilling ubeskyttet hydroxygruppe ved innvirkning av methan-sulf onsyreklorid lett kan avspaltes. Dessuten er det da gunstig å arbeide ved temperaturer på ca. -10° til +15°C.

Fremstillingen av 3,7-dihydroxy-17-tetrahydropyranyletheren skjer ved at man overfører den med syreanhydrid hhv. -halogenid i pyridin ved værelsetemperatur erholdte 3,7-diacylforbindelse med dihydropyran i nærvær av en sterk syre som p-toluensulfonsyre til den tilsvarende 17-tetrahydropyranylether, og frigjør hydroxygruppene i 3- og 7-stillingen ved alkalisk forsåpning.

Ved fremstilling av en 3-monosulfonsyreester omsettes en 3-hydroxy-7,17-bis-(tetrahydropyranylether) med et sulfonsyrehalogenid i nærvær av et tertiært amin ved værelsetemperatur. Fremstillingen av 3-hydroxy-7,17-bis-(tetrahydropyranylether) skjer f.eks. ved omsetning av 3-monoacylforbindelsen med dihydropyran med påfølgende alkalisk forsåpning av estergruppen i 3-stillingen.

Eksempel 1

Mikrobiologisk 7a- hydroxylering

En 2-liters Erlenmeyerkolbe som inneholder 500 ml av en i

30 minutter ved 120°C i autoklav sterilisert næringsoppløsning av 3% glucose, 1% maisstøpvæske., 0,2% nat r iumnit rat , 0,1% kalium-dihydrogenfosfat, 0,2% dikaliumhydrogenfosfat, 0,05% magnesium-sulfat, 0,002% ferrosulfat og 0,05% kaliumklorid, podes med en lyofilkultur av Diplodia natalensis (ATCC 9055), og rystes i 72 timer ved 30°C i en rotasjonsryster. Med denne forkultur podes så en 20-liters fermentator som er fylt med 15 liter av et ved 121 oC og 1,1 ato sterilisert medium av samme sammensetning som forkulturen. Under tilsetning av silicon SH som antiskum-ningsmiddel fermenteres ved 29°C under luftning (10 l/min.),

0,7 ato trykk og omrøring (220 rpm) i 24 timer. 1 liter av kul-turvæsken overføres under sterile betingelser i 14 liter av et som ovenfor sterilisert næringsmedium av samme sammensetning og dyrkes under de samme betingelser. Efter 12 timer tilsettes en sterilfiltrert oppløsning av 3 g ethynyløstradiol i 100 ml dimethylsulfoxyd.

Forløpet av overføringen følges ved tynnskiktskromatograf-isk analyse av methylisobutylketonekstraktet av fermenterings - prøver. Efter fullstendig overføring (45 timers kontakttid) ut-røres fermenteringsinnholdet med 2 x 10 liter methylisobutylketon, og ekstraktet inndampes ved 50°C badtemperatur i vakuum. For å fjerne antiskumningsmidlet opptaes residuet i methanol, silikon-oljen fraskilles i en skilletrakt, oppløsningen filtreres så gjennom et foldefilter og inndampes på ny til tørrhet. Det gjen-værende råprodukt oppløses nu i methylenklorid og kromatograferes for rensning over en silicagelsøyle ved hjelp av en oppløsnings-middelgradient av methylenklorid-methylenklorid/aceton. Efter krystallisasjon fra eddiksyreester smelter den rene hvite 17a-ethynyl-1,3,5(10)-østratrien-3,7a-17P-triol ved 234 - 235°C (spaltning). C2Q<H>2^<0>3 (MV 312,4)•

Eksempel 2

500 mg 17a-ethynyl-l,3,5(10)-østratrien-3,7a,176-triol opp-løses i IO ml pyridin, 0,5 ml eddiksyreanhydrid tilsettes, og der omrøres i 20 minutter under isavkjøling. Derefter innrøres opp-løsningen i 100 ml avkjølt 8%-ig svovelsyre, og det utfelte bunnfall vaskes nøytralt. Efter tørring omkrystalliseres fra ether/hexan, og man får ren 3-acetoxy-17a-ethynyl-1,3,5(10)-østratrien-7a,l78-diol med smeltepunkt 133 - 135°C.

Eksempel 3

Gjennom en suspensjon av 3,7 g kalium-t-butylat i 20 ml absolutt tetrahydrofuran (THF) ledes ved -10°C acetylen i 1 time. Til den dannede deigaktige masse tildryppes under omrøring en oppløs ning av 500 mg 3>7a—dihydroxy—1,3,5(IO)-øst rat rien-17-on oppløst i 45 ml absolutt THF ved -10°C, acetylen innledes i ytterligere 1 time, og der efterrøres i 1/2 time. For opparbeidelse helles reaksjonsblandingen i eddiksurt isvann mettet med natrium-klorid, forbindelsen ekstraheres med eddiksyreester, og den organiske fase vaskes nøytral med natriumkloridoppløsning. Råproduktet (630 mg) omkrystalliseres fra aceton/hexan over kull. Man får 474 mg 17a-ethynyl-1,3,5(10)-øst rat rien-3,7a,178-triol med smeltepunkt 230 - 232°C.

Eksempel 4

En oppløsning av 100 mg 17a-ethynyl-1,3,5(IO)-øst rat rien - 3,7a, 17(3-triol i 5 ml eddiksyreester tilsettes ved værelsetemperatur efter hverandre 1 ml eddiksyreanhydrid og 1 dråpe 70%-ig perklorsyre. Efter 3 minutter tilsettes 1 dråpe pyridin, der vaskes med mettet natriumkloridoppløsning, tørres og inndampes. Man får 78 mg 3 , 7a , 17(3-t r iacetoxy-17a-ethyny 1-1,3 ,5 (IO)-øst ra - trien som en amorf forbindelse.

UV (methanol): £21$~ °7d0

£26i <=> 54<1>

<e>267 <=> 715

£274<=><6>9<6>

Eksempel 5

Til en oppløsning av 150 mg 17a.-eth.ynyl-1,3 ,5 (10) -øst ra - trien-3,7a,17(3-triol i 3 ml pyridin tilsettes 1 ml eddiksyreanhydrid, og blandingen hensettes i 16 timer ved værelsetemperatur. Reaksjonsblandingen inndampes under tilsetning av cyclo-hexan eller carbontetraklorid til tørrhet. Residuet oppløses i eddiksyreester og vaskes med vann. Efter tørring og inndampning får man 120 mg råprodukt, som renses ved skiktkromatografi. Man får 110 mg 3 , 7a-diacetoxy-17a-ethynyl -1, 3 , 5 (10) -øst rat rien-17|3 -ol med smeltepunkt 165 - l66°C.

Eksempel 6

200 mg l7a-ethynyl-1,3,5(10)-østratrien-3,7a,17S-triol opp-løses i 3 ml methanol og 1 ml cyclopentylbromid ved oppvarmning, og derpå tilsettes 200 mg kaliumcarbonat , og der oppvarmes til kokning i 12 timer under nitrogen. Derpå helles reaksjonsblandingen i eddiksurt isvann, og der ekstraheres med methylenklorid. Den organiske fase vaskes nøytral, tørres og inndampes. Råproduktet (150 mg) renses ved skiktkromatografi, og man får 110 mg 17a-ethynyl-3-cyclopentyloxy-1,3,5(10)-øst rat rien-7a,17B-diol-med smeltepunkt 126 - 128°C

Eksempel 7

En oppløsning av 350 mg 17a-ethynyl-3-cyclopentyloxy-1,3,5(10)-øst rat rien-7a,176-diol i 5 ml eddiksyreester tilsettes 1 ml eddiksyreanhydrid og 1 dråpe 70%-ig perklorsyre og omrøres i 3 minutter ved værelsetemperatur. Derpå tilsettes 0,5 ml pyridin, der vaskes med mettet natriumkloridoppløsning, tørres og inndampes. Man får 310 mg 7a,l7B-diacetoxy-17a-ethynyl-3-cyclo-pentyloxy-1,3,5(10)-østratrien som en amorf forbindelse.

UV (methano<l>)<:><£> 222 <=> 9060

6227 = 8730

6274 = 1460

e28o<=> 1920

6288 = 1770

Eksempel 8

3 g ethynyl-østradiol inkuberes analogt med eksempel 1 med Absidia orchidis (ATCC 8990),

Aspergillus luchuensis (CBS),

Rhizopus nigricans (ATCC 6227 b),

Pellicularia filamentosa (ATCC 13 289),

Rhizopus oryzae (ATCC 4858),

Rhizopus kazanensis (ATCC 8998),

Rhizopus cohuii (ATCC 8996),

Rhizopus shanghaiensis (ATCC 10 329) eller

Rhizopus stolonifer (ATCC 10 404)•

Efter 45 timers kontakttid utrystes ferment eringsinnholdet med 2 x 10 1 methylisobutylketon, og ekstraktet inndampes ved 50°C badtemperatur i vakuum. Residuet renses og omkrystalliseres analogt med eksempel 1. Man får I7a-ethyny1-1,3,5(10)-øst ratrien-3, 7a , 17(3 -t r iol i mengder på 400 - 700 mg, som er identisk med det i eksempel 1 erholdte produkt.

Eks empe1 9

500 mg 17a-ethynyl-l,3,5(10)-østratrien-3,7a,178-triol opp-løses i IO ml pyridin, 1 ml smørsyreanhydrid tilsettes, og blandingen omrøres i 6o minutter ved værelsetemperatur. Derpå inn-røres oppløsningen i lOO ml avkjølt 8%-ig svovelsyre, og det utfelte bunnfall vaskes nøytralt. Efter tørring omkrystalliseres fra éther/hexan, og man får ren 3~butyryloxy-17a-ethynyl-1,3,5(10) -østratrien-7a,17(3-diol med smeltepunkt 130 - 131°C.

Eksempel 10

500 mg 17a-ethynyl-l,3,5(10)-østratrien-3,7a,178-triol opp-løses i IO ml pyridin, tilsettes 3 ml smørsyreanhydrid og omrøres i 72 timer ved værelsetemperatur. Derpå innrøres oppløsningen i

100 ml avkjølt 8%-ig svovelsyre, og det utfelte bunnfall vaskes nøytralt . For ytterligere rensning kromatograferes produktet over en silicagelsøyle og omkrystalliseres fra ether/hexan. Den rene 3,7a-dibutyryloxy-17a-ethynyl-l,3,5(10)-østråtrien-176-ol smelter ved 132,5 - 133°C.

Eksempel 11

a) En suspensjon av 500 mg 3,7a-dihydroxy-l,3,5(10)-østratrien-17-on i 20 ml benzen tørres azeotropt ved inndampning til IO - 15 ml. Efter avkjøling tilsettes efter hverandre 1,1 ml dihydropyran, og 5,4 mg p-toluensulfonsyre (avvannet ved azeotrop av-destillering av en benzenoppløsning), og der omrøres i 2,5 timer ved værelsetemperatur under nitrogen. Efter avsluttet omsetning

tilsettes 1 dråpe pyridin, oppløsningen vaskes nøytral med natriumhydrogencarbonatoppløsning og vann, tørres og inndampes.

Man får 750 mg 3,7a-bis-tetrahydropyranyloxy-1,3,5(10)-øst rat rien-17-on som en olje som anvendes uten rensning i den efterfølgende reaksjon b).

b) Fra 1,35 g lithium og 7,9 ml methyljodid fremstilles i 75 ml absolutt ether en oppløsning av lithiummethyl. Til denne

tilsettes 3,75 ml diklorethylen i 15 ml absolutt ether, og der omrøres ved værelsetemperatur i 1,5 timer. Til denne oppløsning av lithiumkloracetylen tildryppes 600 mg 3,7a-bis-tetrahydro-py ranyloxy-1 , 3 , 5 ( IO) -øst rat r ien-17-on i 30 ml absolutt tetrahydrofuran, der omrøres i 1 time ved værelsetemperatur og i 1 time under tilbakeløpskokning. Derpå avkjøles og spaltes under isav-kjøling med mettet natriumkloridoppløsning. Den organiske fase vaskes nøytral med vann, tørres og inndampes. Man får 240 mg 3,7a-bis-tet rahydropyranyloxy-17a-klorethynyl-1,3,5(IO)-østra - trien-173-ol som en oljeaktig forbindelse. Den karakteriseres efter etherspaltning ifølge eksempel 12.

Eksempel 12

En oppløsning av 200 mg 3,7a-bis-tetrahydropyranyloxy-17a-klorethynyl-1,3,5(10)-østratrien-178-ol, 500 mg oxalsyre i IO ml methanol, 5 ml methylenklorid og 5 ml vann oppvarmes under kokning i 1 time. Derpå fortynnes med eddiksyreester og vaskes nøytralt med mettet natriumkloridoppløsning. Efter tørring og inndampning får man 150 mg 17a-klorethynyl-1,3,5(10)-østratrien-3,7a,178-triol med smeltepunkt 209 - 221°C (spaltning).

Eksempel 13

a) En oppløsning av 250 mg 3,7a-dihydroxy-1,3,5(10)-øst ra - trien-17-on i 1 ml dimethylsulfoxyd tilsettes under avkjøling og

omrøring 250 mg natriumhydrid (50%-ig suspensjon i pa raffinolje) og omrøres i 30 minutter ved værelsetemperatur under nitrogen. Der tilsettes så 0,57 ml cyclopentylbromid og omrøres videre i 1,5 timer ved værelsetemperatur under nitrogen. Derpå helles reaksjonsblandingen i eddiksurt isvann, filtreres, og bunnfallet taes opp i eddiksyreester. Efter nøytralvasking, tørring og inndampning får man et råprodukt som renses ved søylekromatografi. Man får 200 mg 3-cyclopentyloxy-7a-hydroxy-1,3,5(10)-øst rat rien-17-on.

b) For ethynylering innledes acetylen i 1 time gjennom en suspensjon av 1,5 g kalium-t-butylat i 10 ml absolutt THF. Til

den dannede grøtaktige masse tildryppes en oppløsning av 200 mg 3-cyclopentyloxy-7a-hydroxy-l,3,5(IO)-østratrien-17-on i 20 ml absolutt tetrahydrofuran ved -10°C under omrøring, acetylen inn-føres i 1 time, og der efterrøres i 1/2 time. Til opparbeidelse helles blandingen i eddiksurt isvann, der ekstraheres med eddiksyreester, og den organiske fase vaskes nøytral med natrium-kloridoppløsning. Efter tørring, inndampning og kromatografisk rensning får man 110 mg 17a-ethynyl-3-cyclopentyloxy-1,3,5(10)-østratrien-7a,176-diol med smeltepunkt 126 - 128°C

Eksempel l4

Til en oppløsning av 450 mg 3~acetoxy-17a-ethynyl-l,3,5(10)-østratrien-7a,178-diol i 30 ml absolutt benzen tilsettes ved værelsetemperatur 7 ml triethylamin og, under sterk omrøring, 1,4 ml isopropylsulfonsyreklorid, og der omrøres i 48 timer ved værelsetemperatur. Derefter helles reaksjonsblandingen på is, og forbindelsen ekstraheres med ether. Etherfasen vaskes, tørres og inndampes, og råproduktet renses ved gradientkromatografi. Man får 250 mg 17a-ethynyl-3-acetoxy-7a-isopropyl-sulfonyloxy-1,3,5(10)-østratrien-178-ol som et amorft stoff. U.V. (methanol): €215= 9800

e26o = 610

£268 " 78<5>

€276<=><750>

Eksempel 15

En oppløsning av 350 mg 17a-ethynyl-l,3,5(10)-østratrien-3,7a., 176-triol i 35 ml absolutt benzen tilsettes 5 ml triethylamin og under kraftig omrøring 2 ml isopropylsulfonsyreklorid. Der omrøres i 38 timer ved værelsetemperatur, blandingen helles så på is og ekstraheres med ether. Etherfasen vaskes med vann, tørres og inndampes. Råproduktet renses ved gradientkromatografi, og man får 125 mg 17a-ethynyl-3,7a-bis-isopropylsulfonyloxy-1,3,5(10)-østratrien-176-ol som en olje.

U.V. (methanol): ^21^ = 10450

e223 = 5500

e262<=> 53<0>

6267<=> 73<1>

e273<=><7i5>

Eksempel 16

a) En oppløsning av 350 mg 3»7a-diacetoxy-17a-ethynyl-1>3>5(10)-østratrien-l7B-ol i 20 ml absolutt benzen tilsettes

20 mg p-toluensulfonsyre og 1 ml dihydropyran. Der omrøres over natten ved værelsetemperatur, fortynnes så med ether, vaskes nøytralt med natriumbicarbonatoppløsning og vann og inndampes. Man får fra aceton/hexan 300 mg 3 , 7a-diacetoxy-l7a-et hynyl-17(3-tetrahydropyranyloxy-1,3>5(10)-øst rat rien med smeltepunkt 130 - 138°C. b) 250 mg 3 ,7a-diacetoxy-17a-ethynyl-17(3-tetrahydropyranyloxy - 1,3,5(10)-østratrien oppløses i IO ml methanol, der tilsettes en oppløsning av 200 mg kaliumcarbonat i 2 ml vann og oppvarmes til kokning under nitrogen i 1,5 timer. Derpå helles reaksjonsblandingen i isvann, og den organiske forbindelse ekstraheres med ether. Efter vaskning med vann, tørring og inndampning får man fra aceton/hexan 180 mg I7a-ethynyl-176-tetrahydropyranyloxy-1,3,5(10)-østratrien-3,7a-diol med smeltepunkt 163 - 170°C. c) Til en oppløsning av 230 mg 17a-ethynyl-178-tetrahydro-pyranyloxy-1,3,5(10)-østratrien-3,7a-diol i 5 ml pyridin tilsettes under isavkjøling og nitrogen 0,5 ml methansulfonsyre-klorid, og der omrøres i 48 timer under nitrogen ved ca. 4°C. Derpå helles reaksjonsblandingen i isvann, bunnfallet frafil-treres og oppløses i methylenklorid. Efter vaskning med vann, tørring og inndampning får man 200 mg 17a-ethynyl-3,7a-bis-15 mesyloxy-178-tetrahydropyranyloxy-1,3,5(10)-østratrien som råprodukt, som uten ytterligere rensning opparbeides videre.

Eksempel ly

En oppløsning av 200 mg 17a-ethynyl-3, 7a.-bis -mesyloxy -178 - tetrahydropyranyloxy-1,3,5(10)-øst rat rien-i 5 ml methanol tilsettes 500 mg oxalsyre oppløst i 2 ml vann og oppvarmes under kokning i 1/2 time. Derpå helles reaksjonsblandingen i isvann, og den organiske forbindelse ekstraheres med methylenklorid. Efter vaskning med vann, tørring og inndampning får man fra methylenklorid/hexan 120 mg I7a-ethynyl-3,7a-bis-mesyloxy-1,3,5(10)-østratrien-l78-ol med smeltepunkt 133 - l43°C

Claims

Analogif remgangsmåte ved fremstilling av terapeutisk aktive 7a-hydroxy-østratriener med den generelle formel:

hvor R1 er hydrogen, alkanoyl med 1-15 carbonatomer, cyclopentyl, tetrahydropyranyl eller en sulfonsyrerest med 1-15 carbon

atomer , I?2 og , som er like eller forskjellige, er hydrogen, alkanoyl med 1-15 carbonatomer eller tetrahydropyranyl, og R2 kan dessuten være en sulfonsyrerest med 1-15 carbonatomer, og

R, er ethynyl eller klorethynyl,

karakterisert ved at a) et 7a.-nydroxy-østratrien-17-on med den generelle formel:

hvor R^ og R2 er som ovenfor angitt, ethynyleres eller klor-ethynyleres med en metallorganisk forbindelse i l7a-stillingen,

og at alt efter betydningen av R , R og R„ i sluttproduktet,

avspaltes eventuelt ether- eller estergrupper og/eller frie

hydroxygrupper forethres og/eller forestres, eller b) et 17a-R^-østrat rien med den generelle formel:

hvor R^ og R^ er som ovenfor angitt, fermenteres med en gjær-kultur av slekten Absidia, Aspergillus, Rhizopus, Pellicularia eller Diplodia, og alt efter den endelig ønskede betydning av Rx, R2 og R^ i sluttproduktet, forethres og/eller forestres eventuelt én eller flere hydroxygrupper.