JPS584553B2 - シンキ １ アルフア − ヒドロキシステロイドノ セイホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規の薬物学的に有効な１α−ヒドロキシス
テロイド、その製法及びこの化合物を含有する医薬品に
関する。

この新規１α−ヒドロキシステロイドは次の一般式で表
わされる： 〔式中ＲＩはメチル基又はエチル基を表わし、Ｒ２及び
Ｒ３は水素原子又は炭素原子数１〜８のアルカノイル基
を表わし、Ｒ４は水素原子又はエチニル基を表わす〕。

本発明によれば、基Ｒ２及びＲ３は同一又は異なるもの
であってよい。

好適なアルカノイル基Ｒ２及びＲ３の例としては次のも
のが挙げられる：ホルミル基、アセチル基、グロピオニ
ル基、ブチリル基、ペンタノイル基、ヘキサノイル基、
ヘプタノイル基及びオクタノイル基。

一般式■の新規１α−ヒドロキシステロイドを製造する
ための本発明の方法は次のとおりである二一般式■： 〔式中Ｒ１及びＲ４は前記のものを表わす〕の化合物を
カロネクトリア・デコラ、グロメレラ・グリシンズ、ア
スペルギルス・クシバツス、セプトミキサ・アフイニス
、ムコール・グリセオシアヌス、イルペックス・ラクテ
ウス又はフサリウム・アフイニスの菌培養液を用いて醗
酵させ、所望の場合は遊離のヒドロキシル基をエステル
化する。

本発明の方法は例えば次の菌を使用して実施することが
できる： グロメレラ・グリシンズ（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａｇｌｙ
ｃｉｎｅｓ ） （ＡＴＣＣ １ １ ８ ７ １ ）
カロネクトリア・デコラ（ Ｃａｌｏｎｅｃｔｒｉａｄ
ｅｃｏｒａ ） （ ＡＴＣＣ １ ４ ７ ６，７
）アスペルギルス・クラバツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓｃｌａｖａｔｕｓ ） （ＡＴＣＣ ９ ５ ９ ８
）セプトミキサ・アフイニス（ Ｓｅｐｔｏｍｙｘａ
ａｆｆｉｎｉｓＸＡＴｃｃ ６ ７ ３ ７ ）ムコー
ル・グリセオシアヌス（Ｍｕｃｏｒｇｒｉｓｅｏｃｙａ
ｎｕｓ） （ＡＴＣＣ １ ２ ０ ７ ｂ ）イルペ
ックス・ラクテウス（ Ｉｒｐｅｘ ｌａｃｔｅｕｓ
）（ＩＦＯ５３６７） フサリウム・シリアツム（ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｉｌ
ｉａｔｕｍ）（ ＣＢＳ １ ３ ２ ３ ５ ） カロネクトリア・デコラ、アスペルギルス・クラバツス
が有利である。

ヒドロキシル化の実施は、通例、ステロイドの生物学的
ヒドロキシル化のために菌培養液を用いる方法で行なう
。

従って、差当り、一般に慣用の予備実験で、好適な醗酵
条件、例えば、最も好適な栄養媒体、好適な基質溶液、
基質濃度、工業的条件（例えば醗酵の温度、通気、ｐＨ
又は時間）の選択、基質添加量及び微生物の酵素への基
質接触は、分析的に殊に薄層クロマトグラフイにより測
定される。

この場合、栄養媒体１１当り基質約５０〜１００ｍｇ濃
度を使用するのが有利であることが明らかである。

ｐＨ値は、５〜７の範囲の値に調節するのが有利である
。

培養温度は２０〜４０℃特に２５〜３５℃の範囲である
。

通気のために培養液１ｌ当り空気１ｌ／ｍｉｎを供給す
る。

基質の変換は試料抽出物の薄層クロマトグラフイ分析に
より行なうのが有利である。

一般に、２０〜１２０時間後に、充分な量のヒドロキシ
ル化されたステロイドが生じた。

微生物学的ヒドロキシル化の際に、屡々、一般式■の本
発明による１α−ヒドロキシステロイドと共に異性体１
β−ヒドロキシステロイドも生じる。

反応生成物の単離及び精製は公知方法で行なう。

例えば、反応生成物を有機溶剤例えばメチルインブチル
ケトンで抽出し、抽出物を蒸発濃縮させ、反応生成物を
カラムクロマトグラフイで分離し、精製することができ
る。

本発明方法を用いて、例えば次の一般式■の１α・１７
β−ジヒドロキシステロイドを製造することができる： １α・１７β−ジヒドロキシ−１７α−エテニル−４−
エストレン−３−オン及び １α・１７β−ジヒドロキシ−１８−メチル−１７α−
エテニル−４−エストレン−３−オン。

遊離ヒドロキシ基の場合により引続き行なわれるエステ
ル化は、通例、ステロイド化学に慣用の２級及び３級ヒ
ドロキシル基のエステル化のために使用する方法で行な
う。

好適なエステル化法として例えば、塩基性触媒例えば炭
酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸カリウム、
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ピリジン、ルチジ
ン、コリジン又は４−ジメチルアミノピリジンの存在で
、ステロイドと無水酸又は酸クロリドとの反応が挙げら
れる。

一般式Ｉの新規１α−ヒドロキシステロイドは、薬物学
的に有効な物質である。

これらは、１位でヒドロキシル化されていないステロイ
ド（これから前記のものが製造される）と類似の作用ス
ペクトルを示し、即ち、新規化合物は強力なゲスターゲ
ン作用を示す。

１位でヒドロキシル化されていない化合物に比べて、男
性ホルモン副作用は明らかに弱められている。

更に、本発明の化合物においてエストロケン作用が現れ
る。

この特性に基づき、新規化合物は非常に重要な作用物質
である。

治療上の使用のために、新規化合物は、ガレヌス製剤に
慣用の添加物、賦形剤及び矯味矯臭剤と共に、公知方法
で慣用の医薬品形に加工する。

経口適用のために殊に錠剤、糖衣丸、カプセル、丸剤、
懸濁液又は溶液が使用され、非経口適用のために、殊に
油溶液、例えばゴマ油及びヒマシ油が使用され、これら
は場合により、付加的になお稀釈剤、例えば安息香酸ベ
ンジル又はベンジルアルコールを含有していてよい。

このように製造された医薬品中の作用物質の濃度は適用
形式によってきまる。

新規医薬品は、経口避姶薬として、循環不全の治療のた
めに、かつ更年期障害治療剤として好適である。

これらは、経口避姶薬として、エストロゲンの添加なし
でも使用できる。

もちろん、新規ゲスタゲンと公知エストロゲンとの組合
せを使用することもできる。

次に実施例につき本発明方法を説明する。

例１ １２０℃で３０分間オートクレープ中で滅菌したグルコ
ース５％、コーン・ステイープ・リカ一０．５％、硝酸
ナトリウム０．２％、燐酸二水素カリウム０．１％、塩
化カリウム０．０５％、硫酸マグネシウム０．０５％及
び硫酸鉄（ｎ）０．００２％からなる栄養液５００ｍｌ
を有する２ｌエーレンマイヤーフラスコに、カロネクト
リア・デコラ（ＡＴＣＣ１４７６７）の凍結乾燥物を接
種し、３０℃で５日間回転振動器上で振動する。

この予備培養液を、次いで、１２１℃及び１．１ａｔｕ
で滅菌した予備培養液と同じ組成の媒地１５ｌの充填さ
れた２０ｌ一醗酵槽に接種する。

消泡剤としてのシリコンＳＨの添加のもとに、２９℃で
通気及び攪拌下に２４時間醗酵させる。

培養液１ｌを無菌条件下に、同じ組成の前記と同様な滅
菌栄養培地１４ｌ中に移し、同じ条件下に醗酵させる。

１２時間後に、ジメチルホルムアミド７５ｍｌ中の１７
β−ヒドロキシ−１７α一エテニル−４−エストレンー
３−オン７．５２の滅菌溶液を加え、更に培養する。

使用した基質が完全に変換した後（接触時間３８時間）
に醗酵槽内容物をメチルインブテルケトン各１０ｌと振
り、抽出物を浴温５０℃で真空中で蒸発濃縮させる。

残分を、消泡剤除去のためにヘキサンで数回洗浄し、最
後に珪酸力ラム上で、段階的濃度の塩化メテレンー塩化
メテレン／アセトン（ ８＋２ ）を用いてクロマトグ
ラフイにかける。

アセトン／イングロビルエーテルからの結晶化の後に、
融点２０７〜２０８℃の１α・１７β−ジヒドロキシー
１７α−エチニル−４−エストレンー３−オンが得られ
る。

例２ １α・１７β−ジヒドロキシ−１７α−エチニル−４−
エストレンー３−オン１００ｍｇにピリジン３ｍｌ及び
無水酢酸０．３ｍｌを加え、３０〜３５℃で２０時間攪
拌する。

混合物を高真空で濃縮し、残分な酢酸エステル中に入れ
、酢酸エステル相を洗浄し、乾燥させ、これを真空中で
濃縮すると、１７β−ヒドロキシ−１α−アセトキシ−
１７α−エチニル−４−エストレンー３−オンカ無色油
状物として得られた。

例３ １２０℃でオートクレープ中で３０分間滅菌したグルコ
ース３．０％、コーンスティーブ１．０％、ＮａＮ０３
０．２％、ＫＨ２ＰＯ４０．１％、Ｋ２ＨＰＯ４０．２
％、ＭｇＳＯ４０．０５％、ＦｅＳＯ， ０．００２％
及びＫＣ１０．０５％からなる栄養液５００ｍｌを有す
る２ｌのエーレンマイヤーフラスコに、アスペルギルス
・クラバツス（ＡＴＣＣ ９ ５ ９ ８ ）の凍結乾
燥物を接種し、３０℃で２日間回転振動機上で振動する
。

この予備培養液を用いて、予備培養液と同じ組成の１２
１℃及び１．１ａｔｕで滅菌した培地の充填された５０
ｌ−醗酵槽に接種する。

消泡剤としてのシリコンＳＲの添加のもとに、２９℃で
、通気下にかつ攪拌下に７２時間醗酵させる。

この培養液９００ｍｌを無菌条件下に前記と同じ組成の
滅菌栄養培地１４７中に移し、同じ条件下に培養する。

２４時間後に、水性ツイーン（ Ｔｗｅｅｎ ）■８０
の存在で蒸溜水中の微細に粉砕し、滅菌した１７α−エ
チニル−１７β−ヒドロキン−１８−メチル−４−エス
トレン−３−オン７．５ｇの滅菌懸濁液を加え、更に醗
酵させる。

変換経過は、醗酵物試料のメチルイソプチルケトンー抽
出物の薄層クロマトグラフイ分析により追跡する。

約９０時間の接触時間の後に、変換は完全である。

菌ミセルを炉去し、培養炉液をメチルイソブチルケトン
各１０７で２回抽出する。

これに平行して、炉去したミセルなメチルイソプチルケ
トン、アセトン及び水の混合物と共に攪拌し、この際抽
出する。

有機抽出物溶液を一緒にし、真空中、５０℃の浴温で蒸
発乾涸させる。

残分をヘキサンで数回洗浄し、最後に珪酸力ラム上でク
ロマトグラフイにかける。

更に精製するために、生成物を塩化メチレン／ベンゾー
ルから結晶させ、ベンゾール−溶剤和物は、ベンゾール
の除去のために、再度エタノール／水から再結晶させる
。

純粋な１７α−エチニル−１α・１７β−ジヒドロキシ
ー１８−メチル−４−エストレン−３−オンは１８０℃
で融解する。

例３と同様に、１７α−エチニル−１７β−ヒドロキシ
−１８−メチル−４−エストレン−３−オンを、グロメ
レラ・グリシンス（ＡＴＣＣ１１８７１）、セプトミキ
サ・アフイエス（ＡＴＣＣ ６７３７ ）、ムコール、
グリセオシアヌス（ＡＴＣＣ１２０７ｂ）、イルペック
ス・ラクテウス（ＩＦＯ５３６７）又はフサリウム・シ
リアツム（ＣＢ３１３２３５）を用いて培養醗酵させる
。

約９０時間の接触時間の後に、菌ミセルを瀘去する。

培養濾液及び菌ミセルをメチルイソブチルケトン、アセ
トン及び水からの混合物で抽出する。

有機抽出物溶液を集め、真空中、５０℃の浴温で蒸発乾
涸させ、結晶させる。

得られた１７α−エチニル−１α・１７β−ジヒドロキ
シ−１８−メチル−４−エストレン−３−オンは、例３
で製造した生成物と同じである。

例４ １７α一エチニル−１α・１７β−ジヒドロキシ−１８
−メチル−４−エストレンー３−オン５００ｍｇをピリ
ジン１０ｍｌ中に溶かし、無水酢酸０．５ｍｌを加え、
冷蔵庫中で３０時間放置する。

反応を完結させるために、引続き、室温で数時間攪拌す
る。

その後、反応混合物を高度真空中で蒸発濃縮し、残分を
酢酸エステル中に取り、蒸溜水で中性になるまで洗浄す
る。

硫酸ナトリウム上での乾燥及び酢酸エステル溶液の濃縮
の後に、１αーアセトキシー１７α−エテニル−１７β
−ヒドロキシー１８−）チル−４−エストレンー３−オ
ンが得られる。

例５ １７α−エチニル−１α・１７β−ジヒドロキシ−１８
−メチルー４−エストレンー３−オン６５０〜をピリジ
ン１５ｍｌ中に取り、無水エナント酸２ｍｌを加え室温
で１６時間攪拌する。

引続き、混合物を高度真空中で濃縮し、残分な酢酸エス
テル中に取り、蒸溜水で中性になるまで洗浄する。

乾燥した酢酸エステル相の濃縮の後に、１７α−エチル
−１α−ヘプタノイルオキシ−１７β−ヒドロキシ−１
８−メチル−４−エストレン−３−オンが淡黄色油状物
として残る。

例６ １７α−エチニル−１α・１７β−ジヒドロキシ−４−
エストレンー３−オン３００■にピリジン１０ｍｌ及び
無水酢酸１．５ｍｌを加え、室温で４日間窒素気下に攪
拌する。

その後、反応混合物を高度真空中で蒸発濃縮し、残分な
酢酸エステル中に取り、蒸溜水で中性になるまで洗浄す
る。

硫酸ナトリウム上の乾燥及び真空中の酢酸エステル溶液
の濃縮の後に、１７α−エチニル−１α・１７β−ジア
セトキシ−４−エストレンー３−オンが得られる。

同様な方法で、１７α−エチニル−１α・１７β−ジヒ
ドロキシ−１８−メチル−４−エストレン−３−オンか
ら、１７α一エチニル−１α・１７β−ジアセトキシ−
１８−メチル−４−エストレンー３−オンが得られる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式■： 〔式中Ｒ１はメチル基又はエチル基を表わし、Ｒ２及び
   Ｒ３は水素原子又は炭素原子数１〜８のアルカノイル基
   を表わし、Ｒ４はエテニル基を表わす〕の１α−ヒドロ
   キシステロイドを製造するために、一般式■： 〔式中Ｒ１及びＲ４は前記のものを表わす〕の化合物な
   カロネクトリア・デコラ（ＡＴＣＣ １ ４ ７ ６
   ７）、アスペルキルス・クラバツス（ＡＴＣＣ ９ ５
   ９ ８）、グロメレラ・グリシンズ（ＡＴＣＣ １
   １ ８ ７ １ ）、セプトミキサ・アノイニス（ＡＴ
   ＣＣ６７３７）、ムコール・グリセオシアヌス（ＡＴＣ
   ＣＩ２０７ｂ）、イルペックス・ラクテウス（ＩＦＯ５
   ３６７）、ヲサリウム・シリアツム（ＣＢ８１３２３５
   ）の菌培養液を用いて醗酵させ、場合により遊離のヒド
   ロキシル基をエステル化することを特徴とする、新規１
   α−ヒドロキシステロイドの製法。