NO135801B - - Google Patents
Download PDFInfo
- Publication number
- NO135801B NO135801B NO2721/72A NO272172A NO135801B NO 135801 B NO135801 B NO 135801B NO 2721/72 A NO2721/72 A NO 2721/72A NO 272172 A NO272172 A NO 272172A NO 135801 B NO135801 B NO 135801B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- antigen
- antibody
- serum
- australia
- suspension
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 71
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 71
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 71
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 38
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 37
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 4
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 4
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 3
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 21
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 21
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 18
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 18
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 9
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 9
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 4
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 230000028654 Type IV pili-dependent aggregation Effects 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000012817 gel-diffusion technique Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Diagnostisk reagens.
Description
Nærværende oppfinnelse vedrorer diagnostiske reagenser av den
art som er angitt i krav l's ingress.
Australia-antigenet som ble funnet av Blumberg et al., J.Amer. Med.Assoc, 191, 541 (1965)-, Ann.Int.Med. , 66, 924 (1967) er tilstede i blodet hos en meget liten del av befolkningen, men det å finne det ved hurtige og pålitelige midler er av storste betydning for å unngå bruken for transfusjonsformål av blod som inneholder antigenet, hvilket kan fremkalle såkalt serum-hepatitis hos mottageren. Slik hepatitis, som kan utvikle seg etter en lang inkubasjonsperiode, kan være alvorlig og også
fatal i noen tilfeller. Det er også viktig å være i stand til å finne antilegemet til Australia-antigen hos personer eller dyr som kan ha vært infisert eller immunisert med Australia-antigen.
Det er derfor et behov for diagnostiske provemetoder som er hurtige, folsomme og gir mulighet for rutinegjentagelse på et stort antall blodprover, bruk av en minimal mengde diagnostisk reagens og er pålitelige, dvs. er i stand til å fastslå nær-
vær av antigenet (eller dets antilegeme) i enhver blodprove enten denne er totalt blod, serum eller plasma, som inneholder det og samtidig gir et minimalt antall av "falske positive" resul-tater, dvs. falske angivelser på nærværet av antigenet (eller antilegemet).
Det diagnostiske reagens for Australia-antigen eller antile-
gemet til dette består av en vandig suspensjon av findelte, syntetiske harpikspartikler av i det vesentlige ensartet form og storrelse som er overtrukket med antilegemet spesifikt for
Australia-antigen eller henholdsvis med Australia-antigenet som sådant. Fortrinnsvis er partiklene sfæriske polystyrenpartikler som har en diameter på ca. 0,16 pm, men partikler av poly-styren eller andre syntetiske harpikser, f.eks. akrylharpikser som har ensartete dimensjoner på fra 0,06-0,4 um, kan være egnet, og reagensen er særpreget ved det som er angitt i krav l's karakteriserende del.
Fra U.S. patent nr. 3.551.555 er det kjent å anvende et indifferent protein til stabilisering av partiklene, eksempelvis okse-serum-albumin, imidlertid er det indifferente protein adsorbert på bærepartiklene for partiklene påfbres antigenet. Hensikten med å påfore bærepartiklene et belegg av et indifferent protein, for antigenet påfbres, er å forhindre forandringer i antigenets struktur, eller å fylle porene i bærepartiklene, som ellers ville bli fylt med antigenet. Antigen i slike porer vil ikke være tilgjengelige for en agglutineringsreaksjon, hvilket fremgår av patentets kolonne 3, linjene 46 - 62. Partikler som på for-hånd er belagt med et inert protein er angitt å være mere folsomme.
Det fremgår av patentet at med et indifferent protein menes
.et protein som ikke tar del i den immunokjemiske reaksjon etc.
Det er et vesentlig trekk ved reagenset ifolge foreliggende oppfinnelse at det inneholder normalt serum, som således kommer i kontakt med blodproven som skal undersokes. Ifolge det nevnte U.S. patentskrift vil proteinet, som ikke kan be-tegnes som "normalt serum", foreligge i form av et indre belegg som ikke kommer i kontakt med blodproven, men utgjor kun et mellomliggende lag mellom bærepartiklene og laget av det påforte antigen.
Det "normale serum" som er tilstede i foreliggende reagens er ikke indifferent, men tar aktivt del i prosessen og vil fun-gere til å minimalisere antallet av "falske positive" reaksjoner .
Antilegemet spesifikt for Australia-antigenet er fortrinnsvis utvunnet fra serum som oppnås fra pattedyr, f.eks. mennesker, får, geiter eller marsvin som inneholder antilegemet eller er blitt immunisert med sterkt renset Australia-antigen fra men-neskeblod. Anti-serumet renses for å fjerne fra dette gjenværende antilegemer for menneskelige serum-proteiner eller andre stoffer som ville gripe forstyrrende inn ved bruken av den diagnostiske reagens for fastslåelse av nærværet av Australia-antigenet .
Australia-antigenet som sådant fremstilles fra serum som erholdes fra mennesker hvis blod inneholder antigenet. Antigenet ekstra-heres fra serumet og renses slik at ingen påvisbare serumpro-teiner eller andre komponenter blir tilbake som ville gripe forstyrrende inn ved bruken av diagnostisk reagens for å fastslå nærværet av antilegemet for Australia-antigen.
Den vandige suspensjon inneholder fortrinnsvis ca. 0,5 g/100 ml av harpikspartiklene, men kan inneholde fra 0,1-3 g/100 ml av harpikspartiklene. For fremstillingen av diagnostisk reagens for Australia-antigen inneholder suspensjonen fortrinnsvis ca. 0,05 g/100 ml av antilegemet for dette, adsorbert på harpikspartiklene, men dette kan også varieres i overensstemmelse med partiklenes konsentrasjon. Mengden av antilegeme skal være akkurat tilstrekkelig for å forhindre auto-aggregasjon av harpikspartiklene. For sfæriske polystyrenpartikler (0,16 um i diameter) er dette ca. 1/10 av vekten av partiklene. En mengde mindre enn 1/20 av vekten av 0,16 um harpikspartikler er blitt funnet å forårsake auto-aggregasjon. Mengder over 1/10 forer til nedsatt folsomhet av den diagnostiske reagens når det an-vendes for å bestemme nærværet av antigen, skjont mengder opp til det dobbelte av vekten av 0,16 um harpikspartikler kan brukes.
Suspensjonen inneholder fortrinnsvis et inert protein som stabiliseringsmiddel f.eks. serum albumin som tilsettes'etter ad-sor.pejon av antigenet eller antilegemet på partiklene i en konsentrasjon på f.eks. 0,1 g/100 ml. Et konserveringsmiddel, f.eks. natriumazid, i en konsentrasjon av 0,1 g/100 ml kan også
være tilstede.
Ifolge oppfinnelsen inneholder den diagnostiske reagens som nevnt også normalt serum (dvs. serum som ikke inneholder verken antilegemet spesifikt for Australia-antigen, eller Australia-antigen som sådant) som oppnås fra de samme arter av pattedyr som de
fra hvilket serumet som inneholder antilegemet eller antigenet, ble oppnådd. Nærværet av slikt normalt serum reduserer vesentlig mengden "falske positive" indikasjoner når den diagnostiske reagens brukes for å fastslå nærværet av Autstralia-antigen (eller antilegeme) i blodprover. Fortrinnsvis innfores ca. 1 del normalt serum pr. 20-50, f.eks. 35, volumdeler av den vandige suspensjon av harpikspartikler som er overtrukket med antilegemet eller antigenet.
Den diagnostiske reagens for Australia-antigen eller antilegeme ifolge foreliggende oppfinnelse kan fremstilles ved å tilsette en suspensjon av harpikspartiklene, passende fortynnet og filtrert hvis nodvendig, til en passende fortynnet opplbsning eller suspensjon av det rensede antilegeme eller antigen og rores om ved romtemperatur inntil adsorpsjon av antilegemet eller antigenet på partiklene er fullfort. Normalt serum fra pattedy rar tene fra hvilke antilegemet eller antigenet ble oppnådd, fortynnet
"om nodvendig, tilsettes serum-albumin og eventuelt t^.lui.Ti"irl, or. derpå tilsettes i egnede mengder. Det er spesielt; viktig å tilsette suspensjonen av harpikspartikler til opplosningen eller suspensjonen av antilegeme eller antigen i stedet for den omvendte måte, da sistnevnte kan forårsake irreversibel auto-aggregasjon av harpikspartiklene.
For påvisning av nærvær av Australia-antigen eller dettes antilegeme blandes en forsoksprove av serum, plasma eller normalt blod, eventuelt blandet med et vandig fortynningsmidde1, med et egnet (f.eks. likt) volum diagnostisk reagens ifolge oppfinnelsen for Australia-antigen henholdsvis antilegeme, og blandingen fortsettes i minst 2 minutter, fortrinnsvis fra 5-10 minutter. Hvis Australia-antigen eller dettes antilegeme er tilstede i forsoksprbven inntreffer agglutinering av harpiks-, f.eks. poly-styren, partiklene under dannelse av synlige agglomerater.
Hvis ingen agglomerater fremkommer innen 5 minutter, angir dette fraværet av Australia-antigenet eller dettes antilegeme i forsoksproven.
Ved en alternativ undersokelsesmetode for å fastslå nærvær av antilegemet til Australia-antigenet rores forsoksproven om med et standard volum av en renset opplosning eller suspensjon av Australia-antigen som er utvunnet fra menneskeblodplasma, den diagnostiske reagens for Australia-antigen tilsettes og blandingen rores om over en lignende periode. Agglutinering av harpikspartiklene viser da fraværet av antilegeme i forsoksproven. Hvis harpikspartiklene ikke agglutinerer i lopet av 5 minutter angir dette nærværet av antilegeme i forsoksproven, og slikt antilegeme har reagert med det tilsatte antigen og således hem-met etterfblgende agglutinering av harpikspartiklene ved antigenet .
Som nevnt foran innfores normalt serum fra samme pattedyrarter som fra hvilke antilegemet eller antigenet ble avledet i den diagnostiske reagens for antigen henholdsvis antilegeme. Dette er særlig viktig ved utforelse av prbven på antigen for å redusere opptreden av "falske positive" reaksjoner. F.eks. hvis normalt marsvin-serum ikke innarbeides i diagnostisk reagens som inneholder antilegeme avledet fra marsvin-antiserum, finner en at ca. 10% av menneskesera, som ikke inneholder Australia-antigen, agglutinerer harpikspartiklene som har antilegemet til Australia-antigen adsorbert på seg.
Dette skyldes muligvis nærvær av stoffer i slike menneskesera
som reagerer med andre bestanddeler som stammer fra marsvin-antiserum fra hvilket antilegemet til Australia-antigen ble oppnådd. Når det normale marsvin-serum imidlertid innarbeides finner en at bare 1 - 3% av menneskesera vil agglutinere harpikspartiklene i fravær av Australia-antigen fra sera. Dette kan skyldes bestanddeler i det normale marsvin-serum som er i stand til å reagere med slike bestanddeler i menneskelige sera og således hindrer dem fra å forårsake agglutinering av harpikspartiklene .
Hvis forsoksproven er normalt blod, må den forst behandles for
å opplose cellene i det å forebygge koagulering for det under-søkes på nærvær av et Australia-antigen eller dettes antilegeme. For dette formål kan det behandles med et vandig fortynningsmiddel som inneholder et ikke-ionisk overflateaktivt middel av poly-oksyetylert alkylfenol-type, f.eks. iso-oktyl-fenoksy-polyoksy-etyl-etanol ("Triton X-100", Rohm & Haas Co.) og natriumcitrat.
Hvis forsoksproven er blodplasma,' må den inneholde et anti-koaguleringsmiddel, f.eks. ethvert av standard-antikoaguler-ringsmidlene, slik som natriumcitrat, og med fordel behandles det også med det samme vandige fortynningsmiddel (som inneholder et ikke-ionisk overflateaktivt midde]) som normalt blod for å lose opp eventuelt gjenværende celler som er tilstede i proven.
De folgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.
A. Fremstilling av diagnostiske reagenser
Eksempel 1
En 40 g/100 ml suspensjon av 0,16 um polystyrenkuler, (Styrene Products Limited ("Product No. 24016")) fortynnes til 5% med glycin-pufret saltopplosning og steriliseres ved tilsetning av (3-propiolakton under pH kontroll. Det tilsettes derpå til 9 volumdeler av egnet fortynnet, renset marsvin-serum fra dyr '
som er immunisert med Australia-antigen. Polystyrensuspensjonen tilsettes langsomt under omroring og omroringen fortsettes i 30 minutter. Polystyrenkulene sentrifugeres, vaskes straks på sentrifugen med pufret saltopplosning og gjensuspenderes til det opprinnelige volum i pufret saltopplosning. Okseserum-albumin (1 g/100 ml) tilsettes for å stabilisere suspensjonen av polystyrenkuler og omroringen fortsettes i 30 minutter. En fortynnet oppløsning av normalt serum fra ikke-immuniserte marsvin (fortynnet 1:3,5 med glycin-pufret saltopplosning) ble tilsatt i-en mengde på 1/10 av volumet av suspensjonen og blandingen rores igjen om i 30 minutter. Til slutt rystes blandingen kraftig for å dispergere enhver agglomerering av partikler.
Alle opplosninger som brukes steriliseres ved filtrering og inneholder 0,1% natriumazid som konserveringsmiddel. Produktet holdes ved 4°C, ved hvilken temperatur det er stabilt i minst 3 måneder.
Virkningen av en sats av diagnostisk reagens undersokes ved å proves mot et panel på minst 50 menneskesera som inneholder forskjellige kjente titere av Australia-antigen. Denne virkning sammenlignes med virkningen av standardprover for Australia-antigen (geldiffusjon og kontra-immunoelektroforese) mot panelet og skulle gi i det minste lik folsomhet. Selektiviteten undersokes mot minst 100 menneskesera og blodprover kjent for ikke å inneholde-Australia-antigen når ikke mere enn 3%
av provene skulle gi en reaksjon.
Det rensede marsvin-antiserum som ble anvendt fremstilles som folger: c
Marsvin immuniseres med Australia-antigen som er renset, fra prover av menneskeplasma ved isopyknisk behandling i en cesium-klorid- eller kaliumbromid-gradient i en sonesentrifuge fulgt av sonesentrifugering i en sukrosegradient. En primær immuni-sering med antigen med Freund's komplette hjelpemiddel i fot-putene folges av to intraperitoneale inokuleringer av antigen uten hjelpemiddel. Etter oppsamling av sera samlet opp fra marsvin fjernes gjenværende antilegeme til menneskeserumproteiner hvis nodvendig ved å bringe antiserumet i kontakt med normalt menneskeserum polymerisert med etylkloroformat. Serumet ren-
ses derpå ved utfelling med 14% vandig natriumsulfat, dialy-seres mot vandig fosfat pufret med saltopplosning og kan opp-varmes ved 56 oC i 30 minutter hvis onsket for a odelegge komple-ment. Natriumazid (0,1%) tilsettes derpå som konserveringsmiddel. For bruk ved fremstilling av den diagnostiske reagens fortynnes antiserumet hensiktsmessig. Den optimale fortynning velges ved å fremstille små satser av den diagnostiske reagens med forskjellige fortynninger av antiserumet og prove disse mot et panel av mennsekesera kjent for å inneholde Australia-antigen. Fortynningen som gir den beste virkning mot panelet når overtrukket på harpikspartikler, velges for fremstilling av den diagnostiske reagens. Normalt ligger den optimale fortynning mellom 1:20 og 1:100.
B. Provemetoder for å fastslå nærværet av Australia- antigen.
Eksempel 2
En dråpe (40 ul) av forsoksproven av menneskeserum anbringes
på en sort glass- (eller plastisk) plate. En dråpe av diagnostisk reagens fremstilt som i eksempel 1 tilsettes og blandingen rores om med en apoteker-trepinne inntil dråpens diameter er ca. 2 cm. Platen rystes svakt frem og tilbake i 5 minutter. Etter denne tid viser en serumprove som inneholder Australia-anitgen avgjort agglutinering; skjont en sterkt positiv prove vil agglutinere polystyrenpartiklene i lbpet av 15 - 30 sekunder. Negative sera gir ingen synlig agglutinering i lopet av 5 minutter.
Eksempel 3
En dråpe (tilnærmet 4 ul) av venost eller fingerkapillarblod
fra mennesker tilsettes til et ror som inneholder 200 ul av en
fortynnet opplosning med fblgende sammensetning: 0,1% trinatrium-citrat, 0,1% natriumazid og 0,02% av et ikke-ionisk overflateaktivt middel (iso-oktylfenoksy-polyetoksyetanol, "Triton X-100", Rohm & Haas Co.) i destillert vann. Etter blanding ved svak rystning og henstand i 10 minutter for å lose cellene i blodet anbringes 2 dråper av blandingen sammen på en sort glass- eller plast-plate og en dråpe av den diagnostiske reagens fremstilt som i eksempel 1 tilsettes, og proven utfores som i eksempel 2.
Eksempel 4
20 ul blod (venost eller kapillarblod) tilsettes til tilnærmet 50 ul av en fortynnet opplosning med sammensetning som i eksempel 3 på en sort glass- eller plast-plate. Blodet og fortyn-ningsmidlet rores om med en apoteker-trepinne, og blandingen får henstå mellom 5 og 10 minutter for å sikre fullstendig losning av blodcellene. En dråpe diagnostisk reagens fremstilt som i eksempel 1 tilsettes og proven utfores som i eksempel 2.
Eksempel 5
Blod som inneholder ethvert av standard-antikoaguleringsmid-lene slik som citrat sentrifugeres for å fjerne hovedparten av cellene. Det resulterende plasma skilles fra de sammenpak-kede cellene og undersokes derpå på Australia-antigen ved en av metodene i eksemplene 3 eller 4, noyaktig som for normalt blod.
Det er fordelaktig når man utforer en rekke prover ifolge noen av eksemplene 2 - 5 å inkludere et kjent "positivt" eller "negativt" serum i hver serie for sammenligningsformål.
C. Provemetode for å fastslå nærværet av Australia-antigenfets
antilegeme.
Serier av dobbelte fortynninger av kjent Australia-antigenhol-dig menneskelig serum fremstilles ved å bruke normalt menneskeserum (dvs. fritt for Australia-antigen eller dettes antilegeme) som et fortynningsmiddel. En dråpe av hver av fortynningene undersokes med diagnostisk reagens som i eksempel 2 og den hoyeste fortynning ved hvilken en maksimal agglutingeringsreak-
sjon ennå inntrer tegnes opp. Denne fortynning velges som for-
tynning for bruk ved hver prove. En dråpe (40 ul) av den ut-
valgte fortynning av antigen-holdig serum tilsettes til en dråpe (40 ul) av en forsbksprove av menneskeserum på en sort glass-
(eller plast-) plate og de to blandes med en engangs apoteker-trepinne. Etter henstand i 5 minutter for å tillate at antigen-antilegeme-innvirkning inntrer tilsettes en dråpe (40 ul) av diagnostisk reagens fremstilt som i eksempel 2 og blandes kort med en trepinne. Platen rystes derpå svakt frem og tilbake i 5
minutter. Etter denne tid vil agglutinering ha inntruffet med ethvert proveserum som ikke inneholder antilegeme. Hvor agglutinering ikke inntrer viser dette nærværet av antilegeme i proveserumet. For sammenligning skal en samtidig prove som anvender en dråpe av et serum kjent for å være fritt for Australia-antigen eller dettes antilegeme utfores. Her er en sterk agglutineringsreaksjon å vente.
Titeret for antilegeme i ethvert proveserum kan fastlegges ved
å utfore proven som foran på dobbelte fortynninger av prove-
serumet i normalt serum. Sluttpunktet er den hbyeste fortyn-
ning av proveserumet som ikke gir agglutinering med den diag-
nostiske reagens ved proven som er beskrevet i eksempel C.
Claims (2)
1. Diagnostisk reagens for Australia-antigen eller dets antilegeme, bestående av en vandig suspensjon av finfordelte,
syntetiske harpikspartikler med i det vesentlige ensartet form og storrelse og som er overtrukket med antilegemet som er spesifikt for Australia-antigenet eller med Australia-antigenet selv, og hvor reagensen eventuelt også inneholder et konserveringsmiddel og et inert protein som stabiliseringsmiddel, f.eks. serum-albumin, karakterisert ved at suspensjonsmediet i reagensen .ytterligere inneholder normalt serum fra samme dyreart som antilegemet eller antigenet ble fremstilt fra.
2. Diagnostisk reagens ifolge krav 1, karakterisert ved at suspensjonen inneholder 1 volumdel normalt serum pr- 20 - 50 deler suspensjon.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB3609771A GB1390617A (en) | 1971-07-31 | 1971-07-31 | Diagnostic reagents test method and pack |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO135801B true NO135801B (no) | 1977-02-21 |
| NO135801C NO135801C (no) | 1977-06-08 |
Family
ID=10384922
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO2721/72A NO135801C (no) | 1971-07-31 | 1972-07-28 | |
| NO3782/72A NO138394C (no) | 1971-07-31 | 1972-10-20 | Fremgangsmaate for aa fastslaa naervaer av australia-antigen i en blodproeve |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO3782/72A NO138394C (no) | 1971-07-31 | 1972-10-20 | Fremgangsmaate for aa fastslaa naervaer av australia-antigen i en blodproeve |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS4829487A (no) |
| AR (1) | AR192962A1 (no) |
| AT (1) | AT316752B (no) |
| AU (1) | AU472607B2 (no) |
| BE (1) | BE787014A (no) |
| BR (1) | BR7205058D0 (no) |
| CH (1) | CH572621A5 (no) |
| DK (1) | DK144988C (no) |
| ES (2) | ES405387A1 (no) |
| FI (1) | FI55408C (no) |
| FR (1) | FR2148081B1 (no) |
| GB (1) | GB1390617A (no) |
| IE (1) | IE36589B1 (no) |
| IL (1) | IL39991A0 (no) |
| IT (1) | IT963332B (no) |
| NL (1) | NL163877C (no) |
| NO (2) | NO135801C (no) |
| SE (1) | SE410768B (no) |
| ZA (1) | ZA725257B (no) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3992517A (en) * | 1975-02-19 | 1976-11-16 | Pfizer Inc. | Detection of hepatitis B surface antigen by latex agglutination |
| US4642285A (en) * | 1975-09-29 | 1987-02-10 | Diamedix Corporation | Sandwich EIA for antigen |
| US4474878A (en) * | 1975-09-29 | 1984-10-02 | Cordis Laboratories, Inc. | Sandwich EIA for antigen associated with hepatitis |
| CA1100037A (en) * | 1977-03-11 | 1981-04-28 | Chung-Mei Ling | Hb.sub.c ag coated on solid phase |
| JP2572035B2 (ja) * | 1986-02-12 | 1997-01-16 | ユニチカ株式会社 | マルチフイラメント糸 |
-
0
- BE BE787014D patent/BE787014A/xx not_active IP Right Cessation
-
1971
- 1971-07-31 GB GB3609771A patent/GB1390617A/en not_active Expired
-
1972
- 1972-07-24 IE IE1035/72A patent/IE36589B1/xx unknown
- 1972-07-25 IL IL39991A patent/IL39991A0/xx unknown
- 1972-07-25 SE SE7209728A patent/SE410768B/xx unknown
- 1972-07-25 IT IT27383/72A patent/IT963332B/it active
- 1972-07-26 AU AU45020/72A patent/AU472607B2/en not_active Expired
- 1972-07-27 DK DK373072A patent/DK144988C/da active
- 1972-07-27 FI FI2104/72A patent/FI55408C/fi active
- 1972-07-27 AT AT648072A patent/AT316752B/de not_active IP Right Cessation
- 1972-07-28 NO NO2721/72A patent/NO135801C/no unknown
- 1972-07-28 FR FR7227335A patent/FR2148081B1/fr not_active Expired
- 1972-07-28 BR BR5058/72A patent/BR7205058D0/pt unknown
- 1972-07-31 CH CH1134472A patent/CH572621A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1972-07-31 ZA ZA725257A patent/ZA725257B/xx unknown
- 1972-07-31 ES ES405387A patent/ES405387A1/es not_active Expired
- 1972-07-31 AR AR243342A patent/AR192962A1/es active
- 1972-07-31 JP JP47076027A patent/JPS4829487A/ja active Pending
- 1972-07-31 ES ES405388A patent/ES405388A1/es not_active Expired
- 1972-07-31 NL NL7210503.A patent/NL163877C/xx not_active IP Right Cessation
- 1972-10-20 NO NO3782/72A patent/NO138394C/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO135801C (no) | 1977-06-08 |
| FR2148081B1 (no) | 1977-08-26 |
| BR7205058D0 (pt) | 1973-11-01 |
| NL163877B (nl) | 1980-05-16 |
| IE36589L (en) | 1973-01-31 |
| NO138394B (no) | 1978-05-16 |
| NO138394C (no) | 1978-08-23 |
| IL39991A0 (en) | 1972-09-28 |
| FI55408C (fi) | 1979-07-10 |
| DK144988C (da) | 1982-12-06 |
| AU472607B2 (en) | 1976-05-27 |
| ZA725257B (en) | 1973-04-25 |
| JPS4829487A (no) | 1973-04-19 |
| DK144988B (da) | 1982-07-19 |
| NL7210503A (no) | 1973-02-02 |
| AU4502072A (en) | 1974-02-07 |
| DE2237204B2 (de) | 1977-04-07 |
| NL163877C (nl) | 1980-10-15 |
| FR2148081A1 (no) | 1973-03-11 |
| BE787014A (fr) | 1973-01-31 |
| CH572621A5 (no) | 1976-02-13 |
| IT963332B (it) | 1974-01-10 |
| DE2237204A1 (de) | 1973-02-08 |
| AR192962A1 (es) | 1973-03-21 |
| IE36589B1 (en) | 1976-12-08 |
| ES405388A1 (es) | 1975-07-01 |
| AT316752B (de) | 1974-07-25 |
| FI55408B (fi) | 1979-03-30 |
| SE410768B (sv) | 1979-10-29 |
| ES405387A1 (es) | 1975-07-01 |
| GB1390617A (en) | 1975-04-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3088875A (en) | Immunological diagnostics utilizing polystyrene latex particles of 0.15 to 0.25 micron | |
| JP3551678B2 (ja) | ヘモグロビンＡ１ｃの測定法及びキット | |
| US4711841A (en) | Method for determining one or more antigens in a sample | |
| US3992517A (en) | Detection of hepatitis B surface antigen by latex agglutination | |
| JPS6243138B2 (no) | ||
| US4588681A (en) | Process for producing adult T cell leukemia associated antigen | |
| US5043289A (en) | Method and device for assaying immunologically reactive substances of clinical interest | |
| US3562384A (en) | Immunological indicator and test system | |
| NO135801B (no) | ||
| JPH0613582B2 (ja) | 多官能性親水性球状微粒子、その製造方法及びその使用方法 | |
| KR100896396B1 (ko) | 점착성 미세소포의 제거 방법 | |
| JPH02159562A (ja) | 抗原に対してクラス特異的抗体の測定法及びこのために好適な試薬 | |
| US4090846A (en) | Indirect latex test for determination of fibrinogen degradation products | |
| JPS6224745B2 (no) | ||
| Walls et al. | Evaluation of a hemagglutination test for amebiasis, using a commercial antigen | |
| JP3328053B2 (ja) | 免疫凝集反応による抗体又は抗原の濃度定量法 | |
| US3497319A (en) | Diagnostic reagent | |
| JP3048306B2 (ja) | フィブリン分解産物及び／又はフィブリノーゲン分解産物測定試薬及びその定量方法 | |
| US4617260A (en) | RIA assay for HBcAg | |
| JPH0954091A (ja) | 抗赤血球抗体の測定法 | |
| JPS6153569A (ja) | 抗風疹ウイルス抗体感作ラテツクス及びこれを用いる抗風疹ウイルス抗体の測定方法 | |
| JPH09502263A (ja) | ヒドラジン誘導体化細胞 | |
| JPS62174659A (ja) | 抗レジオネラ菌多糖体抗体感作ラテツクス | |
| O'neill et al. | Evaluation of a modified FTA-ABS test multispot FTA-ABS. | |
| DE2237204C3 (de) | Verfahren zum Nachweis des Australien-Antigens oder des Antikörpers hierzu in einer Blut-Testprobe |