NO129481B - - Google Patents

Description

Fremgangsmåte ved fremstilling av bruksferdig og

lagerstabil prøveplate med serologiske, diagnostiske preparater.

Foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for frem-

stilling av bruksferdig og lagerstabil prøveplate med serologiske, diagnostiske preparater inneholdende eventuelt forbehandl-ede erythro-

cyter fra sauer eller latex som bærer for antigener eller anti-

legemer eller antigen-antilegemekomplekser eller suspensjoner derav.

Serologiske fremgangsmåter basert på antigen-antilegeme-

reaksjoner som gjør det mulig å indikere tilstedeværelsen av for-skjellige proteiner såvel som normale eller patologiske antilegemer,

har lenge vært kjent. Noen eksempler på slike metoder er følgende:

indikasjon ved hjelp av serologisk diagnostisk fremstilling av veksthormonet. (p. Weiser: Eine Methodik der Bestimmung hypophysHrer Gonadotropine mittels HHraagglutinations-Hemmungsreakt ion, Zbl. GynHk, 87/1965, H.46.S. 1569-1573) av det chorionogonadotropiske hormon som forefinnes i urinen hos gravide kvinner (Joyce L. Bell: Compara-tive Study of Immunological Tests, for Pregnancy Diagnosis . Journal^ of Clinical Pathology, Vol. 22, side 79/1969) av patologiske anta,-legemer i visse sykdommer i skjoldbruskkjertelen (Martti Oka,; Penti SeppHlB og Leena Mikkonen: Latex Slide Test in Thyroid Diseases.

Acta Medica Scandinavia , Vol . 179hefte 2/l§66) . Av det patologiske protein i serum fra revmatiske pasienter (Singer, J.jM;- : . Plotz, Ch. M:: Am. J. Med. 21, 888/1956)", Tonder, 0.: Studies on the Mechanism of the Waaler-Rose Test, Norwegian'University Press, Bergen, Oslo, 1962); av patologiske antilegemer i smittsom raono-nucleose (Beatrice Saemann-Naville: Mononucleose-Schnell-test, Objektt rHger-Agglut inat ion f ormolisiert eir Pf erdeerythrocyt en . - Schweiz. med. Wsch. 96, nr. 49, l649-l65l/l96o/, Hoff. G. and

Bauer s.: A New Rapid Slide Test for Infectious Mononucleosis ,

J. Am. med. Ass. JAMA 194, 351/1965) , etc..: ;

I enktelte av de. ovenfor nevnte testmetoder er antigenet

eller antilegemet, som er nødvendig for testen, bundet til :lyo-filiserte røde blodlegemer, i andre er de bundet til syntetiske materialer, dvs. til partikler av polystyrenlatex. Mesteparten av disse serologiske metoder krever voluminøse labofatorieiirnretninger, men selv de enkleste blir gjort mer kompliserte på grunn av.det faktum at det ikke bare er serumet og blodet som skal téstés, men også at lyofilisat eller væske og preserverte reagenser er; nødvendige. Oppløsninger av reagensene, såvel som deres behandling fra de hen-siktsmessige lagringskar, gjør vanligvis enkle metoder kompliserte, slik at det kreves meget dyktig laboratoriepersonell til å behandle dem. \

Hensikten med denne oppfinnelse er å eliminere de beskrevne ulemper ved de immunologiske metoder som er basert på koågulasjon av røde blodlegemer eller latex, og fremskaffe én fremgangsmåte som tillater anvendelse av'de nødvendige reagenser klår til bruk i prøve-platen ved fordampning, Derved kan -man oppnå -.den ; ho vedf or del at

bare serumet eller urinen som skai . undersøkes er . nødvendig ved for-skjellige serologiske, diagnostiske tester, •? og.ytterligere kan- ; disse serologiske metodene.vesentlig forenkles-ved hjelp av fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen,, . ;, >-■■'- '■■■•">

,F-remgangsmåtén•:i-rhennolici? t il: foreliggende oppf^innélse er

kjennetegnet-.; yed :<até de nevnte! préparåtér^ -blandes1 iriéd vandige løs-

ninger av naturlige, semi-syntetiske eller syntetiske polymerer eller syntetiske harpikser som er forenelige med det biologiske materiale, og som er egnet til å danne en film etter tørking, hvilken film er egnet til å oppløses ved tilsetning av vann, og som, om ønsket, inneholder et baktericid middel, hvoretter løsningen på-føres prøveplaten og tørkes. Etter tørkingen eller fordampingen dekkes reagensene med en beskyttende hinne som forhindrer avskall-ing, oppløsning eller dekomposisjon, hvorved reagensene preserveres.

Som filmdannende synt et iske eller semisynt et iske, vannløselige polymerer kan man benytte polyvinylalkohol, polyvinylpyrrolidon, polyvinylmethylether, carboxymethylcellulose eller methylcellulose og andre vannløselige lineære polymerer. Som filmdannende syntetisk harpiks kan man benytte produkter på urea-formaldehyd-, melamin-formaldehyd-, casein-formaldehyd- eller alkydbasis, som tilfreds-stiller kravene til vannløselighet og blandbarhet med de biologiske substanser. Som filmdannende naturlig polymer er f.eks. bruken av gelatin eller klister foreslått. Som bakteriedrepende middel tilsatt den vandige løsningen av det filmdannende materiale, kan man benytte f.eks. merthiolat (natrium-ethyl-kvikksølv-(II)-thiosali-cylat) eller natriumthiazid.

Testplaten kan bestå av metall, glass, speil eller av et plastmateriale, som kan dekkes, hvis ønskelig, av en lakk. De lakkbelagte plater tørkes fortrinnsvis i 2b, timer, og den vandige løs-ning av antigen-antilegemekompleksene med filmdannende materialer, tilføres deretter bare på den overflate av platen som er blitt tørket etter påføring av lakken.

Preparatet som er fremstilt i henhold til oppfinnelsen og tørket på platen, er utmerket egnet til utførelse av diagnostiske prosedyrer, basert på direkte og passiv hemagglutinering, hvori mikromengder tørket på platen og egnet til lagring i lengre perioder, blir benyttet som reagens. En betydelig fordel ved fremgangsmåten i henhold til foreliggende oppfinnelse er, i tillegg til de betyde-lige økonomiske, at reagensene kan benyttes på en meget rask og enkel måte direkte i konsultasjonsrommet eller ved pasientens seng, etter tørking til "klar til bruk" tilstand, på en meget enklere.måte enn hittil, uten bruk av laboratorieutstyr, som et middel ved medi-sinske diagnoser. Testmetoden i henhold til oppfinnelsen har den ytterligere fordel at når reaksjonen mellom det diagnostiske preparat og serum eller urin er fullført, blir det beskyttende belegg gjendannet på testsubstansen på reversibel måte, slik at det er mulig å lagre testresultatene festet på platen.

Alt man har å gjøre ved bruk av reagenset for diagnostisk analyse, er å plassere en dråpe av testmaterialet på den,<1> hvorpå testmaterialets vanninnhold vil løse det beskyttende belegg, og den ønskede reaksjon finner sted.

De følgende eksempler tjener t il å illustrere fremgangsmåten

i

ifølge oppfinnelsen mer utførlig.

i

Eksempel 1

Fremstilling av et thyreoid-antigent, serologisk, diagnostisk preparat

Til en suspensjon av et thyreoid-antigen bundet til poly-styrenlatexpartikler fremstilt ved en kjent metode (TA-test = Hyland Laboratories, Los Angeles, California, U.S.A.) ble det tilsatt en løsning av polyvinylalkohol i et volum ekvivalent med 50% av suspensjonen. Det er tilrådelig å benytte en av de kommersielle poly-vinylalkoholer, slik som "Vinavilol 4_88" (Montecatini) eller "Rhodovilol 4/125/P" (Rhone-Poulenc). Konsentrasjonen av polyvinylalkohol i vann eller i en løsning av fysiologisk natriumklorid er omkring 18%, til hvilket merthiolat eller natriumthiazid'tilsettes som bakteriedrepende middel fortynnet til et forhold på 1:5000.

En dråpe (0,05 ml) av den slik fremstilte suspensjon over-føres på en metallplate belagt med lakk, og dråpens vanninnhold for-dampes. Hvis det er nødvendig, kan man benytte en vifte for å lette fordampningen. Hovedkravet til kvaliteten av metallplaten er at den tillater en meget klar indikasjon og vurdering av resultatene fra den diagnostiske test. Empiriske resultater har vist at' det er for-delaktig å benytte en metallplate fremstilt ved vakuumforming av et herdet, nikkel-plettert og magnetisert metall med høy renhetsgrad og lavt gassinnhold, med følgende sammensetning:

Efter fordampning blir det dannet en beskyttende film som

vil preservere reagenset i en betydelig tid i en tilstand klar til bruk. Istedenfor polyvinylalkohol av den ovenfor beskrelvne kvalitet, kan man også benytte methylcellulose ved fremstilling av det diag-,

•■ ■ 1 '

I

nostiske preparat.

Testmetoden for thyreoid-antilegemer kan utføres på følgende måte ved anvendelse av reagenset i henhold til foreliggende oppfinnelse: 0,05 ml av det serum som skal undersøkes overføres på antigenet som er tørket på den lakkbehandlede metallplate, hvorpå polyvinylalkoholbelegget på reagenset oppløses. Etter 30 sekunders venting, blir substansen omrørt, hvoretter platen forsiktig ristes. Resultatene av agglutinasjonstesten kan bli vurdert på vanlig måte etter 5 minutter.

Eksempel 2

Gamma- globulin- antigent serologisk, diagnostisk preparat

Til en suspensjon av gamma-globulin-antigen bundet til-polystyrenlatex fremstilt på kjent måte (tilvirker: Human Oltoanyagtermelo' és Kutato Intézet, Budapest, dvs. HUMÅN institutt for forskning og produksjon av immunologiske substanser) ble det tilsatt en vandig løsning av methylcellulose i en mengde som tilsvarer 50% av suspensjonen. Methylcellulosen benyttes i 5% løsning. Om ønskelig tilsettes et bakteriedrepende middel løst i vann i et forhold på

1:5000 til suspensjonen. Suspensjonen overføres til en lakkbelagt metallplate som beskrevet i eksempel 1, og tørkes.

Analysen av den revmatiske faktor ble utført ved hjelp av gamma-globulin-antigen-preparatet som beskrevet i eksempel 1, men med den forskjell at serumet som skulle undersøkes, først ble fortynnet til et forhold 1:IO ved hjelp av en borsyrepuffer med pH = 8,2.

Eksempel 3

Gamma- globulin- antigenholdig serologisk, diagnostisk preparat

Til en suspensjon av gamma-globulin-antigen bundet til røde blodlegemer fra sau, preservert med en 3%-ig formaldehydløsning, fremstilt på kjent måte, ble det tilsatt en løsning av polyvinylalkohol i et volum tilsvarende 50% av suspensjonen. Konsentrasjonen av polyvinylalkoholen er identisk med den som ble benyttet i eksempel 1.

En slik fremstilt suspensjon ble overført på en lakkbelagt metallplate ifølge eksempel 1 og tørket. Istedenfor å overføre suspensjonen til en metallplate kan den overføres til en speiloverflate.

Undersøkelsen ble utført med hensyn på den revmatiske faktor, ved bruk av gamma-globulin-antigen-preparatet på en måte som beskrevet i eksempel 2.

Eksempel 4

Serologisk, diagnostisk preparat inneholdende choriongonadotropin-hormon- antigen og - antilegeme. !__

Til en suspensjon av choriongonadotropisk hormon-antigen bundet til polystyrenlatex-partikler (Gravindex-Ortho biagnostics, Raritan, New Jersey, U.S.A.; Pregnosticon-Planotest = Organon, Oss, Nederland; Prepurex = Burroughs Wellcome and Co., London, England; DAP-Test = Wampole Lab. Stamford, Conn., U.S.A.) ble det tilsatt en polyvinylalkoholløsning, med én konsentrasjon som i eksempel 1, i et volum som tilsvarer 50% av suspensjonen. Samtidig'med nevnte antigen fremstilles en løsning fra immunserumet som inneholder anti-choriongonadotropinhormon-antilegemer, fortynnet ved hjelp av den ovenfor nevnte polyvinylalkoholløsning, til et slikt forhold at dets mengde som benyttes i reaksjonen, blir nøytralisert av 1,5-2 I.U. HGG pr. ml urin.

0,05 ml porsjoner av a itigensuspensjonen fremstilt som be-

i

skrevet og løsningen av immunserum blir hver for seg separat påført den lakkbehandlede metallplate og tørket som beskrevet i eksempel 1.

i Graviditetsundersøkelser kan utføres ved hjelp av det beskrevne preparat i henhold til oppfinnelsen, og er egnet, blant

i

annet, som graviditetsindikator på følgende måte:

på den lakkbelagte metallplate hvor det foreligger tørket antigen og immunserum, blir 0,2 ml porsjoner urin påført, hvorved polyvinylalkoholfilmen som dekker reagensene, oppløs<i>es. Etter 30 sekunders venting blir dråpene blandet, og etter'4 minutters hen-stand blir metallplaten forsiktig ristet, hvoretteriresultatene av agglutinasjonstesten kan vurderes i løpet av 1 minutt.

Eksempel 5 i

i

Serologisk, diagnostisk preparat inneholdende choriongonadotropin-hormon- antigen og - antilegeme

i

Til et choriongonadotropin-antigen, konservert med en 3%-ig formalinløsning fremstilt på kjent måte, og, om ønskelig, bundet til røde blodlegemer fra sauer, tilsettes en løsning av polyvinylalkohol konsentrert som beskrevet i eksempel 1, i en mengde tilsvarende 5o% av suspensjonens volum. Den videre fremgangsmåte foretaes som be-

I

skrevet i eksempel 4-

Graviditetstester kan utføres ved hjelp av testsubstansen fremstilt i henhold til oppfinnelsen, dg er egnet, blant annet, som graviditetsindikator på følgende måte: Prosedyren i et hvilket som helst av eksemplene kan utføres ved å benytte som filmdannende materialer, gelatin eller klister, eller likeledes polyvinylpyrrolidon eller carboxymethylcellulose, såvel som prekondensater basert på syntetiske harpikser slik som urea-formaldehyd, melamin-formaldehyd, etc.

Claims (2)

1. Fremgangsmåte ved fremstilling av bruksferdig og lagerstabil prøveplate med serologiske, diagnostiske preparater inneholdende eventuelt forbehandlede erythrocyter fra sauer eller latex som bærer for antigener eller antilegemer eller antigen-antilegemekomplekser eller suspensjoner derav, karakterisert ved at de nevnte preparater blandes med vandige løsninger av naturlige, semi-syntetiske eller syntetiske polymerer eller syntetiske harpikser som er forenelige med det biologiske materiale, og som er egnet til å danne en film etter tørking, hvilken film er egnet til å oppløses ved tilsetning av vann, og som, om ønsket, inneholder et baktericid middel, hvoretter løsningen påføres prøveplaten og tørkes.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det som baktericid middel anvendes merthiolat (natrium-ethyl-kvikksølv-(li)-thiosalicylat) eller natriumthiazid.

3» Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det som prøveplate anvendes en metall-, glass-, speilglass- eller plastplate eventuelt belagt med lakk.