NL8201765A

NL8201765A - Stabiele verbinding van glucosaminesulfaat, werkwijze ter bereiding ervan en farmaceutische samenstellingen, die deze verbinding bevatten.

Info

Publication number: NL8201765A
Application number: NL8201765A
Authority: NL
Original assignee: Rotta Research Lab
Priority date: 1981-04-30
Filing date: 1982-04-28
Publication date: 1982-11-16
Also published as: PT74784B; BE893010A; CH651576A5; JPH0128757B2; US4642340A; NL193615C; FR2504929B1; PT74784A; IT1148050B; GB2101585B; GB2101585A; IT8167596A0; JPS57185297A; FR2504929A1; DE3215844A1; GR75999B; NL193615B; DE3215844C2

Description

v . N.o. 31.029 t i t

Stabiele verbinding van glucosaminesulfaat, werkwijze- ter bereiding ervan en farmaceutische samenstellingen, die deze verbinding bevatten.___

Het onderwerp van de onderhavige uitvinding is een gemengd zout van glucosaminesulfaat en natriumchloride, een werkwijze voor de bereiding van dit zout en het gebruik van het zout voor de bereiding van farmaceutische vormen>die anderszins niet verkrijgbaar 5 of moeilijk te verkrijgen zijn,van glucosaminesulfaat.

Glucosaminesulfaat is een bekende en uiterst belangrijke stof voor de behandeling van reumatische koorts, artritis en artrose klachten, zowel in de acute als de chronische vormen en in het algemeen alle pathologische omstandigheden, die afkomstig zijn van 10 metabolische ongeregeldheden van het osteo-articulaire weefsel.

De synthese van glucosaminesulfaat werd beschreven door Breuer in 1898 (Chem. Ber. 32» 2197) en een industriële werkwijze is het onderwerp van het Britse octrooischrift 1056331, het Amerikaanse octrooischrift 5.683.076 en het Zwitserse octrooischrift 15 525.861.

Het is echter tot dusverre niet. mogelijk geweest enkele ongunstige eigenschappen van deze verbinding te elimineren,, in het bijzonder de sterk hygroscopische aard ervan en het gemak waarmee de aminogroep ervan oxydeert indien deze niet volledig in zoutvorm 20 is gebracht.

Deze ongunstige eigenschappen geven aanleiding tot moeilijkheden en beperkingen bij het praktisch gebruik van glucosaminesulfaat. Bijvoorbeeld vereisen orale vormen, zoals tabletten of capsules, anti-oxydatiemiddelen, zoals natriumhyposulfiet in hun 25 formuleringen, welke stoffen, hoewel deze de oxydatie van de aminogroep blokkeren, het probleem van de hygroscopische aard van het sulfaat onopgelost laten; dit maakt de bereiding van deze vormen in omgevingen met een relatieve vochtigheid van ten hoogste 30 % noodzakelijk, met resultaten die zelfs dan onbevredigend zijn en 30 met een stabiliteit levensduur, die praktisch voor hun gebruik onvoldoende is. Soortgelijke opmerkingen zijn van toepassing op rectale' vormen (suppositoria), die, zelfs indien onder droge, gekoelde omstandigheden gehouden, aanzienlijk snel afbreken.

Over.H^ves· de injecteerbare vormen, die tamelijk moeilijk te 35 bereiden zijn, maar die voor praktische doeleinden voldoende sta- 8201765 2 * i biel zijn. Het is niet mogelijk door vriezen gedroogde preparaten te bereiden» aangezien onv.er ander lijk produkteh verkregen worden met het uiterlijk en de hoedanigheid van viskeuze oliën, die dus praktisch niet bruikbaar zijn* 5 Gevonden werd nur -dat het mogelijk is glucosaminesulfaat te stabiliseren door de vorming van een gemengd zout daarvan met na- triumchloride* Dit resultaat is bepaald verrassend, doordat het dat niet voorspelbaar was een hygroscopisc-h zout, zoals glucosaminesulfaat, gestabiliseerd zou kunnen worden met natriumchloride, dat 10 een ander hygroscopisch zout is.

Het gemengde zout, dat het onderwerp van de onderhavige uitvinding is en dat kortheidshalve "glucosamine-SP,T zal worden ge-noeffld wordt gevormd door ïonogeen rooster* waarin de kationen be-staan uit geprotoneerd glucosamine en Na en de anionen Cl en 15 SO” zijn, welke kationen en anionen op een zodanige wijze zijn verdeeld, dat de eenvoudigste formule 2 (C^H^ N0^)+. Na+. SO”. 2C1 is en de structuurformule de formule van het formuleblad is.

Het smeltpunt ervan ligt boven 300° C en de gevoeligheid voor relatieve vochtigheid uit de omgeving is zelfs bij hoge temperatu-20 ren (zoals later zal worden gezien) nagenoeg te verwaarlozen.

De werkwijze voor de.bereiding van glucosamine-SP bestaat in hoofdzaak uit de volgende trappen: oplossen van droog deeltjesvor-raig natriumchloride onder roeren in een hoeveelheid gedestilleerd water, die kan variëren tussen 5,5 em 7,5 (hij voorkeur 6,5) maal 25 het gewicht van het natriumchloride zelf bij een temperatuur van 50°C tot 70°C (bij voorkeur 60°C); oplossen in de verkregen oplossing van de stoechiometrische hoeveelheid glucosaminesulfaat bij een oplostemperatuur van 35°C tot k5°C (bij voorkeur i*Q°C) onder roeren; precipitatie van glucosamine-SP door de toevoeging van een 30 vloeibaar precipitatiemiddel, dat met water mengbaar is en waarin glucosamine-SP een oplosbaarheid heeft die niet groter is dan 0,1 gew./vol.#, terwijl onder roeren te werk wordt gegaan bij een temperatuur van kO°C tot 50°C (bij voorkeur bij /*5°C); voltooien van de precipitatie bij een verlaagde temperatuur en winnen van het 35 geprecipiteerde glucosamine-SP.

De vloeibare precipitatiemiddelen die gebruikt kunnen worden zijn bijvoorbeeld aceton, ethanol, acetonitril, tetrahydrofuran en dioxan en worden bij voorkeur toegevoegd in volumina van 5 tot 7 (bij voorkeur 6) maal het volume van het gedestilleerde water, dat kO gebruikt wordt om de uitgangszouten op te lossen. Met voordeel 8201765 3 • v * wordt de toevoeging van het vloeibare precipitatiemiddel uitge-voerd gedurende een periode van 2,5 tot 3,5 (bij voorkeur 3) uren, waarna de verkregen suspensie van glucosamine-SP gedurende een verdere periode,· variabel tussen 12 en. 24 (bij voorkeur 18) uren onder 5 langzaam roeren en op een temperatuur van 25°C tot 35° C (bij voorkeur 30°C) wordt gehandhaafd om zowel de volledige precipitatie als de juiste groei van de kristallen mogelijk te maken. Wanneer eenmaal de noodzakelijke-tijd is verstreken wordt de reactiemassa ' verder gekoeld op een temperatuur van 0°C tot 10°C (bij voorkeur 10 5°C) en de glucosamine-SP kristallen- worden afgefiltreerd en in een oven met circulerende lucht gedroogd, bijvoorbeeld bij een temperatuur van 45°C tot 65°C (bij voorkeur 55°C) gedurende een tijdsperiode, die van 12 tot 24 (bij voorkeur 18) uren kan variëren.

Het glucosaminesulfaat, dat met het natriumchloride voor de 15 synthese wordt gebruikt, kan in hoofdzaak bereid worden zoals beschreven in het Zwitserse octrooischrift 525*861 door vrijmaking van het glucosamine uit het hydrochloride in een water bevattend alcoholisch milieu bij aanwezigheid van triëthylamine en daaropvolgende behandeling van de verkregen base in een acetonmilieu met 20 de stoechiometrische hoeveelheid geconcentreerd zwavelzuur voor het verkrijgen van het glucosaminesulfaat. In het geciteerde octrooischrift wordt, diethylether gebruikt, maar bij industriële bereidingen op grote schaal verdient het de voorkeur aceton te gebruik en, dat veel minder gevaarlijk is en bovendien een produkt 25 met dezelfde eigenschappen als beschreven in het octrooischrift geeft.

Voorbeeld I

Bereiding van glucosamine-SP onder toepassing van aceton als precipitatiemiddel 30 75 ml gedestilleerd water worden in een vierhalskolf gebracht met een nuttig volume van 750 ml, voorzien van een bladroerder, een thermometer en een koeler en de kolf wordt in een elektrisch verwarmd bad op 60°C verwarmd» 11,68 g (0,2 mol, molecuulgewicht 58,4) natriumchloride, vooraf in een oven bij 70°C tot constant 35 gewicht gedroogd, worden onder matig roeren C170 i 10 omwentelingen per minuut) geroerd· en de massa wordt op 60°C onder roeren gehandhaafd tot de vaste stof volledig is opgelost, hetgeen ongeveer.

20 minuten duurt» Als algemene regel dient de roerbehandeling zodanig te worden uitgevoerd dat zowel de afzetting van deeltjes op de 40 bodem van de kolf als hun afzetting tegen de wanden wordt vermeden, 8201765 ; <? k aangezien in alle gevallen de oplossing moeilijken .zou worden.

Wanneer eenmaal de vaste stof volledig is opgelost wordt de· temperatuur op ltO°C verlaagd en worden g (0,-1 mol, molecuul- ' gewicht k561-4) glucosaminesulfaat (vooraf bereid en in een omgeving 5 gehouden met een relatieve vochtigheid die niet groter is dan 30 % en een temperatuur niet boven 15°C) toegevoegd, waarbij de temperatuur en de roerbehandeling op 170 · 10 omwentelingen per minuut wordt gehandhaafd vanwege d^ hiervoor uiteengezette redenen. Tijdens deze trap zou een temperatuur boven k5°C kunnen resulteren in 10 een produkt dat geel wordt, terwijl bij een temperatuur beneden 35°C het glucosaminesulfaat voor praktische doeleinden te langzaam zou oplossen.

Onder de aanbevolen omstandigheden lost het sulfaat volledig in ongeveer k5 minuten op, waarna de temperatuur op if5°C wordt ge-15 bracht en de precipitatie tot stand wordt gebracht,. Bij temperaturen beneden 43°0 heeft precipitatie te snel plaats onder vorming van kristallijne agglomeraten, die enig oplosmiddel en verontreinigingen kunnen insluiten, terwijl boven 50° C een ongewenste vergeling van de suspensie kan plaats hebben. De. precipitatrie wordt uitge-20 voerd onder toepassing van ml aceton, dat druppelsgewijze in een periode van. 3 uren wordt toegevoegd. In minder dan 2,5 uren heeft de precipitatie te snel plaats, terwijl een tijdsduur van meer dan 3,5 uren geen praktische voordelen biedt. Roeren bij 1if0 - 10 omwentelingen per minuut wordt tijdens de precipitatie 25 uitgevoerd, waarbij een juist evenwicht gewaarborgd wordt tussen homogenisering van de fasen en vorming van de optimum hoeveelheden kernen voor kristallisatie*

Wanneer eenmaal de toevoeging van. het precipitatiemiddel beëindigd is wordt de precipitatie voltooid en wordt het precipitaat 30 geconditioneerd door de temperatuur op 30°C te verlagen en de roersnelheid op 100 - 10 omwentelingen per minuut gedurende een periode van 18 uren te verminderen. Onder deze omstandigheden wordt een produkt met een grote zuiverheid verkregen, aangezien de temperatuur van 30°C in de conditioneringstrap de uitdrijving van 35 eventuele- verontreinigingen en de reorganisatie van de kristallen begunstigt, met absorptie van eventuele ionen die in oplossing blijven, terwijl de milde roerbehandeling het mogelijk maakt dat de gehele geprecipiteerde massa constant in contact gehandhaafd wordt met de oplossing zonder de gelijkmatigheid van de kristallij-1+0 ne massa te veranderen. De hiervoor aangegeven tijd is de tijd 8201765 5 . V Λ noodzakelijk ons de voltooiing van de hiervoor beschreven werkwijzen mogelijk te maken. Na 18 uren wordt, de temperatuur op 5°C verlaagd met behulp van een ijs-waterbad en wordt de verkregen kristallijne massa gefiltreerd door een.Buchner-trechter.

5 Nadat de massa goed is uitgeperst om de grootst mogelijke hoe veelheid moederloog te verwijderen, wordt de. massa naar een oven met luchtcirculatie overgebracht en 18 uren bij 55°C gedroogd- 50,5 g (rendement 88,1 %) creme-achtig witte kristallen met een bittere smaak worden verkregen.

10 Het aldus bereide glucosamine-SP heeft de volgende eigenschap pen:

Mi'croanalyse voor ^ 2^23^12^2^220,^: theoretisch. % gevonden koolstof 25,14 25,02 15 waterstof _ 4,92 4,70 stikstof 4,88 4,85 glucosamine-gehalte 97,5 - 102,5 # (volgens Elson L.A. — Morgan W.T.J. :

Biochem. J., 27, 1824 (1935)).

20 sulfaatgehalte 97,5 - 102,5 % (door precipita- tie met BaC^ en titratie met EDTA in een milieu, dat alkalisch is gemaakt met NH^, bij aanwezigheid van de indicator 25 Eriochroom.-zwart T - natrium- rhodizonaat 2 : 1).

chloride-gehalte 97,5 - 102,5 % (argentometrische methode)► natriumgehalte: 97,5 - 102,5 % (vlarafotometrie).

30 Uiterlijk, kleur, geur

Kristallijn poeder, lichte creme-kleur, geen geur en met een zeer bittere smaak.

Oplosbaarheid (bij 25°C - gew»/vol.).

Deze proef werd uitgevoerd door verzadigde oplossingen van 35 glucosamine-SP in verschillende oplosmiddelen te bereiden en de concentratie van het glucosamine volgens de Elson-Morgan colorime-trische methode, hiervoor vermeld, te bepalen.

Water : zeer oplosbaar (ongeveer 40 %)

Methanol : gering oplosbaar (ongeveer 1 #) 40 Ethanol : zeer weinig oplosbaar (ongeveer 0,03 $) 8201765 6

Aceton, acetonitril, tetrahydrofuran, dioxan: nagenoeg onoplosbaar ( < 0,01 %).

Benzeen, chloroform, koolstoftetrachloride, dichloormethaan, ligroi’ne, diethylether: onoplosbaar.

5 pH-waarde

De pH van een waterige verzadigde oplossing van glucosamine-SP bij 20°C is 3,0 t 0,2.

Verdelingscoëfficiënt (K)

De verdelingscoëfficiënt K van glucosamine-SP bepaald bij 10 25°C in een mengsel van een fosfaatbuffer (pH 6,8) met n-octanol heeft een waarde, die tot oneindigheid neigt.

Smeltpunt: > 300°C (met partiële ontleding boven 200°C).

Specifieke rotatie: [α1β = + 52 - 0,1° (bij evenwicht in een 10-procents oplossing in water).

15 Gewichtsverlies bij drogen: ^ 0,5 % (bij ifO°C/2,13-2,39 kPa gedurende 8 uren bij aanwezigheid van zwaveltrioxide)«

Voorbeeld IX

Bereiding van glucosamine-SP onder toepassing van ethanol als pre-20 cipitatiemidde.1

De methode is zoals beschreven in voorbeeld I met het gebruik 'van absolute ethanol in plaats van aceton. 48,9 g (rendement 85,3$) glucosamine-SP worden verkregen met dezelfde eigenschappen als be-' schreven in voorbeeld I*

25 Voorbeeld III

Bereiding van glucosamine-SP onder toepassing van acetonitril als precipitatiemiddel.

De methode is zoals beschreven in voorbeeld I met de toepassing van acetonitril in plaats van aceton. 51,2 g (rendement 89,3$) 30 glucosamine-SP worden verkregen met de in voorbeeld I beschreven eigenschappen.

Voorbeeld IV

Bereiding van glucosamine-SP onder toepassing van tetrahydrofuran als precipitatiemiddel 35' De methode is zoals beschreven in voorbeeld I, onder toepassing van tetrahydrofuran in plaats van aceton. i+8,1 g (rendement 83,9 %) glucosamine-SP worden verkregen met de in voorbeeld I beschreven eigenschappen.

Voorbeeld V

k0 Bereiding van glucosamine-SP onder toepassing van dioxan als precipitatiemiddel 8201765

lit A

7

De methode is zoals beschreven in voorbeeld I onder toepassing van dioxan in plaats van aceton* 47»6 g (rendement 83,04 %) glucosamine-SP worden verkregen met de in voorbeeld I beschreven eigenschappen.

5 Teneinde het verschil in stabiliteit duidelijk te maken tussen het glucosamine-SP bereid volgens de hiervoor beschreven werkwijze en glucosaminesulfaat (bereid zoals beschreven in het Zwitserse octrooischrift 525*861) werden vergelijkende stabiliteitsproeven uitgevoerd onder variërende omstandigheden van temperatuur en re-10 latieve vochtigheid.

Twee parameters werden in aanmerking genomen voor de waardering, dat wil zeggen, het externe uiterlijk van de onderzochte stoffen en het percentage gehalte van glucosamine bepaald volgens de hiervoor vermelde Slson-Morgan colorimetrische methode.

15 Het externe uiterlijk van het glucosaminesulfaat werd gewaar deerd volgens een schaal van 1 tot 6 met de volgende betekenissen: 1 : microkristallijn poeder met witte-creme-kleur 2 : iets vergeling met vorming van enkele klonten 3 : opmerkelijke vergeling met talrijke donkere klonten 20 4 J lichtbruine verkleuring en pasteuze hoedanigheid 5 · bruingekleurde viskeuze pasta 6 : donkerbruine vloeistof

Een dergelijke schaal was voor het glucosamine-SP niet noodzakelijk, aangezien het uiterlijk ervan hetzelfde bleef in alle proe-25 ven en volgens de schaalwaardering steeds met 1 werd aangeduid.

De verkregen resultaten zijn in de tabellen A tot F gegeven.

Tabel A: Stabiliteit van glucosamine-SP en van glucosaminesulfaat bij 15°C en een relatieve vochtigheid van 30 % -» -

Tijd Glucosaminesulfaat Glucosamine-SP

(dagen) —-r--—·—:-=-;-:-

Uiterlijk Gehalte Uiterlijk Gehalte 0 1 98,7 % 1 101,2 % 7 1 99,3' % 1 100,7 % 15 1 98,4 % 1 101,5 % 30 1 99,3 % 1 101,1 % 60 1 98,1 % 1 100,4 % 120 2 97,2 % 1 101,9 % 360 2-3 84,1 % 1 100,7 % 8201765 8

Tabel B: Stabiliteit van glucosamine-SP en van glucosaminesulfaat bij 15°C en een relatieve vochtigheid van 45 #

Tijd

(dagen) Glucosaminesulfaat . Glucosamine-SP

Uiterlijk Gehalte Uiterlijk Gehalte 0 1 9915 # 1 100,7 # 7 1 98,3 # 1 99,1 # 15 1 100,2 # 1 99,8 # 30 1 99,4# 1 ioo;4# - 60 2 86,2 # 1,. 98,6 # 120 4 42,9# ' 1 99,1 # 360 6 niet bepaald 1 98,4 #

Tabel Cr Stabiliteit van glucosamine-SP en van glucosaminesulfaat bij 15°C en een relatieve vochtigheid van 60 #

Tijd Glucosaminesulfaat Gluco-samine-SP

(dagen) ----

Uiterlijk Gehalte Uiterlijk Gehalte 0 1 99,-5 # 1 101,2 # .3 1 98,4# 1 101,8# 6 3 78,2 # .1 100,5 # 12 5 31,4# 1 99,8# 24 6 niet bepaald .1 99,5 # 36 6 mm' 1 101,3 % 48 6 " " 1 100,7 #

Tabel D: Stabiliteit van glucosamine-SP en van glucosaminesulfaat bij 25°C en een relatieve vochtigheid van 30 #

Tijd Glucosaminesulfaat Glucosamine-SP

(dagen) -;-

Uiterlijk Gehalte üiterlijk Gehalte 0 1 99,6 # 1 99,1 # 7 1 ' 99,1 # 1 99,7 % 15 1 98,3 # 1 98,5 # 30 1 99,5 # 1 99,9 # 60 2 87,8 # 1 100,4 # 120 3 75,2 # 1 98,2 # 360 4 40,4 # 1 99,9 # 8201765 9

Tabel E: Stabiliteit van glucosaraine-SP en van glucosaminesulfaat bij 25°C en een relatieve vochtigheid van 45 %

Tijd Glucosaminesulfaat Glucosamine-SP

(dagen) - ' ..................... .......... ..............

Uiterlijk Gehalte Uiterlijk Gehalte 0 1 100,5 % 1 98,9 % 3 1 100,3 % 1 99,5 % 6 1 99,8 % 1 98,6 % 12 2 90,3 % 1 97,7 % 24 3 74,5 % 1 98,1 % 36 5 29,6 % 1 97,7 % if8 6 niet bepaald . 1 98,4 #

Tabel F: Stabiliteit van glucosamine-SP en glucosaminesulfaat - bij 25°C en een relatieve vochtigheid van 60 #

Tijd Glucosaminesulfaat Glucosamine-SP

(dagen) -

Uiterlijk Gehalte Uitérlijk Gehalte 0 1 99,3 % 1 100,7 % 2 1 niet bepaald 1 niet bepaald ^ Ί tt tt T tt » 8 2 95,8 % 1 101,2 # 16 3 73*8 # 1 niet bepaald 24 4 ‘ 44,6 % 1 ' 99,2 £ 36 6 - niet bepaald 1- 100,4 $

Uit de in de tabellen A tot F gegeven resultaten is duidelijk, dat glucosaminesulfaat een bijzonder instabiele stof is, aangezien het gemakkelijk geoxydeerd wordt en steiïk hygroscopisch is, De omstandigheden waaronder het wordt bewaard zijn duidelijk zeer be- 5 langrijk (in het bijzonder de relatieve vochtigheid van de omge-. en ving) en moet streng geregeld worden. Slechts bij temperaturen lager dan 15°C met een relatieve vochtigheid niet groter dan 30 % kan een stabiliteit van ongeveer 4 tot 5 maanden verkregen worden, terwijl bij 25°C onder dezelfde omstandigheden van relatieve voch-10 tigheid tekenen van afbraak gezien worden zelfs- na ongeveer 60 dagen. Wanneer voorts de omstandigheden van temperatuur en vochtigheid zodanig zijn als normaal wordt beschouwd (25°G en een relatieve vochtigheid van 60 %) verschijnen de eerste tekenen van afbraak zelfs na 4 nren en het glucosaminesulfaat is volledig na 8201765 10 nauwelijks 36 uren ontleed*

Glucosamine-SP laat daarentegen zien, dat het bijzonder stabiel is ten opzichte van temperatuur en vochtigheid en dientengevolge gemakkelijk houdbaar is en uitstekend bruikbaar in farmaceu-5 tische technieken. Uit de hiervoor beschreven proeven blijkt dat na 1 jaar bij 25°C en een relatieve vochtigheid van 60 % het uitstekend geconserveerd is en verdere proeven hebben aangetoond dat, slechts bij werken onder uiterst drastische omstandigheden, dat wil zeggen bij lfO°C en een relatieve vochtigheid van 85 % het mogelijk 10 is een geringe donker kleuring waar te nemen en een geringe verlaging van het glucosamine-gehalte (ongeveer 5 tot %) na ongeveer 12 maanden en dit blijft vervolgens constant onder dezelfde omstandigheden van conserveren gedurende de volgende 12 maanden. FARMACÖ-T0XICQL0GI5CHE gegevens 15 Hoewel er opmerkelijke verschillen zijn in de fysico-chemi- sche eigenschappen3de stabiliteit en de omstandigheden van conserveren van glucosaminesulfaat en glucosamine-SP, zijn hun farmaco-toxicologische eigenschappen nagenoeg identiek.

Om dit te bevestigen zijn methoden en resultaten- van onderzoek 20 van de twee stoffen tegelijkertijd "in vitro" en "in vivo" met betrekking tot hun farmacobiologische activiteiten, naast resultaten van acute toxiciteitsproeven uitgevoerd bij twee diersoorten volgens verschillende toedieningsmethoden hierna gegeven.

BIOLOGISCHS ACTIVITEIT "IN VITB0" 25 Stimulering van de synthese van glucosamino-glucanen (GAG) in muizen-embryo fibroblast kweken - waardering uitgevoerd door opname 35a van o.

Fibroblasten zijn embryo-achtige cellen die door achtereenvolgende differentiaties aanleiding geven tot verschillende typen van 30 het bindweefsel en dientengevolge van het osteo-cartilagineuze weefsel.

Dergelijke cellen verschaffen dus een zeer geschikt experimenteel model voor de waardering van eventuele farmabiologische effecten (zowel positief als negatief) teweeg gebracht door stoffen on-35 der onderzoek op weefsels verkregen uit dit cellulaire substraat en in het bijzonder op articulair weefsel.

Methoden en resultaten van een proef met betrekking tot de 35 opname van door gesulfateerde mucopolysacchariden (GAG), in hoofdzaak chondroitine-sulfaat (zowel op het cellulaire als het 35

ZfO extra-cellulaire niveau, waarin de opname van S dientengevolge 8201765 11 evenredig is met de snelheidwaarmee de GAG worden gesynthetiseerd door de fibroblasten zullen nu gegeven worden. Tot dit doel werden primaire kweken van muizen-embryo fibroblasten (stam 057 BL/6 stCrl) bereid door mechanische en enzymatische dissociatie 5 (in trypsineverseen-mengsel — Microbiological Associates) van de embryos die bij de moeder op de 18de dag van de zwangerschap waren weggenomen. Het kweekmilieu is het Eagle milieu gemodificeerd door Dulbecco en gesupplementeerd met 15 % kalffoetusserum. De incuba-tie-atmosfeer bestaat uit 5 % koolstofdioxide in lucht bij 37°C.

10 24 uren na de inoculatie wordt het milieu vervangen door een nieuw milieu, dat het te onderzoeken geneesmiddel en het radio-actieve voorprodukt (Na^ ^SO^) voor de meting van de synthese zowel van oplosbaar als aan weefsel gebonden GAG bevat; de kweek wordt nog-eens 24 uren gefncubeerd- en daarna worden het kweekmilieu (dat het 15 oplosbare GAG bevat) en fibroblasten (dat het weefsel gebonden GAG. bevat) gescheiden.

De oplosbare GAG worden uit het kweekmilieu afgescheiden door precipitatie met een oplossing van 5 # trichloorazijnzuur in ijswater, terwijl de fibroblastresten, die het weefsel gebonden GAG 20 bevatten, na herhaalde wasbehandelingen met fysiologische oplossingen in DIMILUME of VERSENE worden opgelost.

35

De hoeveelheid J a opgenomen in zowel het oplosbare GAG als in het weefsel gebonden GAG worden gewaardeerd volgens de gebruikelijke scintillatiemethoden en uitgedrukt in cpm (tellingen per 25 minuut).

De proeven werden voor elk monster vijfmaal uitgevoerd teneinde de waardering van de resultaten statistisch mogelijk te maken.

De verkregen resultaten zijn in de tabellen G en H gegeven.

8201765 12 +» ϋ ΙΛ O (M CO ΙΛ ΓΛ »» ** «t * ** * G O -d- vo c- if\ ' co (Λ £?. 3 +3 CMONINr-T-r· > « r- ΤΟ O G +1 + + + + + + •

G

3 44 Φ =s 44 3 CM ...

H ή- CO CO CO

JS CM ...

o ft sas

G

X! Ή ft 0 CM Λ O Ό

t>5 w I t I I -3- 00 CM

G CM J* * & +3 O O r- 5 3 G ^ O B s"' N ft'" · cv · 3" 3"

•r) O —' I co O O· CO O O

2 p· | *► ft ^ ε c ft soosoo g - V v V v Ή CD CD „

<; <Jr- ' D- tr\ O ΙΛ -if O

CD CD'-' I- CM ΙΛ CJN CTt O r- «k «fr « ►· f> ► G G +3 r-^TCMOlA-G- ctJ (Ö cö 3

6 GJ

ara co o O * +f- ' tT\ CO v- 00 r- ΓΛ HH i—I 3 ΙΓνΟΟΟ-γ-ΟΓ"

Oft ft· vO O'. r- CM IN CM -=5* X20 O CQ r-T· T-r- 3 G G +1 +1. +1 +1 +1 +1 +1 +1 cö cö _

> >3 O O O O O O O

co t3 K\ CA Λ co ΙΛ K\ -4" o ir\ cd η co rvi ι>- ο- -G- •Η [Λ CQ 3 ΙΛ (Ν r- CD' M3 CM (Μ +3 0)* Ό γ* τ— C* X G Λ "β 3 CÖ +3 ·Η

Τ3 > G S

Ο >3 Ο

G CD CO SO

ft S

3 CD G ^ Ό ft ΙΛ r<"\ O *S v-/ /-s G * Η ΙΓ\ IA ΚΛ 3 *o O S * * ^ >·Η G\ I O O O CM CM ΙΛ

J2 0>n r- ΙΛ O <” ΚΩ CM

bO O w r- r- G 60

•H G

G -rl 05

(DG H

H 03 O .

3 Π G +5 +3 -P

S G +3333 •H 3 G 3 3 3

+33 O Ch CtH «H

CO 5 O ï—I r—I rH ft ft ft 3 3 3 02 co co

(D CQ CQ CO I I I

T3 O O 3 O O O

H G G G G G G

Ch 3 ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η ο 'oesHsse +3 GCÖ33333

CO 333WC03M

Λ Ο Ο Ο Ο Ο Ο φ ο ο υ ο υ ό

+2 3 G G G 3 G

G ι—I r+ rH fH rH γΗ Ο b0 ¢30 feO &0 b0 Μ ιι in ι| Γϋΐ'ι'ΊιΓΊ ItilhrtlWnÜtB—Μίηκιιι TjUtimnJIHTTT"^*11^^ 8201765 - * * 13 *

O IN VO IN rA CM CO

*» ^ *·«*·* **

^ . O CM IA -3" !N M3 !N

. -g?, φ +> rA IN CT\ t- VO iN

ö > · 0) <] O 3 +1+ + + + + +

Xi

<D

s X! +>

M

3 H ^ .

Xi CM . .

O CO CO W

U CM I I I . * 2 ft S S 2

•H

ft 0

C CM ΙΛ IN O

H W IN ΓΛ ia S cm i 1 I - ' *

a <0 N ^

•H S

<3 ft r- · CM *“ » r- IA

g O'—·' COOOcOOO

3 3ft soosoo

•H fi V/ V

W v V V V

o <

C3 CD

< r- CA -3" CM O co O

3 O w -3- ' CA O CA rA lA

φ >·**··*·* ^ *

^ 3 +s τ- CM -3* O rA CM

K 3 3 O cö H X> Xi

φ Φ CO

X! hO O ♦

cö Η Η Φ -4" 0\ rA CA -3- CM CA

cp φ ft. VO IN O IN Ο CA

CQ OÏQ VO A- O «3 VO VO CM

tm V v-

φ 3 + I

φ CÖ +1 +1 +1 +1 +1 +1 +i S " > Φ

rs O OOOOOO

β © H cO r (\| r O' CO W

crt CQ Φ VO CM CM r- -3" A- rA

> Φ-ϋ -4" VO CO <A lA A- CQ

CO X! Ό

Φ LA ft -H

•h k\ as ft Φ xi a co &o a a Ό > O ^ ^

jCj φ rA rA

CL g V-- w ^-n

a « Η 1A LA rA

T3 ft a\ I Ο Ο O CM CM IA

ο O >v T- LA O «“ NO CM

a O --- r· a ·ο

> *H

jo o

bC pH

a bo o •h a a +> +> ft 3 ·η ft a a a φ !h a a a a φ ο ft +1 <+1 3 <3 UHrHHftft ft Ηβ a a a co co co

•na © ta co cq i t I

.paj Τ3ΦΦΦΦΦΦ co^ h a a a a a a Φ Ή ·Η Ή Ή Ή ·Η

ft TJSSSSSS

ο a a a a a a a

+3 cjcococoaaM

CO ,3 0 0 0 0 0 0 φ ü o o o o o 3 a 3 3 3 3 3

ö Η Η Η Η Η H

O bO b0 bQ bQ bQ

8201765 η

Opmerkingen bij de tabellen G en H

De statistische betekenis werd gewaardeerd volgens de Student "t” proef*

Derhalve zijn de Student "t" waarden* die betrekking hebben 5 op de vergelijking tussen groepen waarden onder beschouwing, . in de kolommen met de hoofden t^ en t^ aangegeven., terwijl de kolommen met de hoofden p^ en p2 statistische waarschijnlijkheden vermelden, dat de vergeleken groepen van waarden tot dezelfde populatie vehoren* 10 Daarom geeft de notatie N*S* aan* dat de vergeleken groepen van vaarden vanuit statistisch gezichtspunt niet duidelijk velschillend zijn*

Aangenomen wordt echter, dat twee vergeleken groepen waarden statistisch verschillend zijn wanneer p-, afhankelijk van de waarde 15 "tn en de vrijheidsgraden 0,05 is* (1) : t^ en p1 hebben betrekking op de vergelijking tussen behandelde groepen en niet-behandelde controles* (2) : t'2 en p2 hebben betrekking op de vergelijking tussen behandelde groepen met gelijke doses, dat wil zeggen: 20 Glucosaminesulfaat 10 //ml, glucosamine-SP 12,5 X/m1 enz.* (3) : 12,5,- 62,5 en 125 //ml glucosaminesulfaat.

Betekenissen van de afkortingen in de tabellen G en H cpm tellingen per minuut s.e* : standaardfout 25 n.t* ct : niet-behandelde controles

Uit de in de tabellen· G en H gegeven resultaten blijkt, dat glucosaminesulfaat en glucosamine-SP bij dezelfde concentraties dezelfde activiteit hebben bij het stimuleren van de synthese van zowel oplosbaar als weefsel gebonden GAG bij muizen-embryo fibro-30 blasten.

FARMACOLOGISCHE ACTIVITEIT "IN VIVO"

Anti-ontstekingsactiviteit bij proeyen over granuloma teweeg gebracht door katoenpropjes

De proef bestaat uit de waardering van de capaciteit van de 35 te onderzoeken stoffen, de vorming van granuloma te remmen na de subcutane implantering van vreemde lichamen (in.dit geval katoenpropjes).

kO vrouwelijke albino-ratten van de Sprague Dawley stam met een gewicht van ongeveer 130 gi willekeurig onderverdeeld in 5 kO groepen van 8 dieren werden gebruikt.

8201765 15

Een groep dieren werd als controle gebruikt. De andere if groepen werden oraal behandeld met 300 en 600 mg/kg doses glucosa-minesulfaat en 375 en 750 mg/kg doses van felucosamine-SP (respectievelijk overeenkomende met 300 en 600 mg/kg glucosaminesulfaat)* 5 Na de subcutane implantering van 2 katoenpropjes elk met een gewicht van 20 mg in het dorsale gebied ontvingen de dieren dagelijks if opeen volgende dagen de te onderzoeken stoffen in de hiervoor gegeven doses*

Aan het einde van de behandeling werden de granuloma uit de 10 dieren genomen, die gedood waren door voortgezette anesthesie met ether en werden in een oven bij een temperatuur van 6o°C gedurende 2if uren gedroogd en vervolgens gewogen.

De verkregen resultaten zijn in tabel I gegeven.

8201765 16 -p ! cö tö ft

iH

bO fi

fi «J

•H ® e ON r- £N O Ö

g O · » ·* ·· *H

<D o -ï- 00 CO '· S

(4 s +t n- a a a ss ra o ra o fi o

> Φ O

fi

ft O H

0) /Λ bQ

o c\j » ♦ fi

fi w «1 03 ® bQ

ft CNJ lil»* H .¾ ft SS H \

Φ Φ bO

ts & S

cö

fi '-n +> O

•H CM CM MO O

w Μ ΙΛ Φ MO

ft CM i l I ► ~ *Ö CO ft O O fi « fi ®

φ O

a o o •π ~ > o

g c- c- r- r- r- IA

cö w O O O O C

CQ r- ! ►»,«.*, ¢+3 O ft O O O O > ®

§ V V V V ω S

Η Φ S

bo bO ® r- (Μ -ί Λ IN Φ β w ON0oc^-ii* min Ο τ— I ^ -Η Φ Α Α Α Α Ό Ό > +> , Ο CÖ « Φ Η Ai ft φ -ο

Η A

φ φ φ Η φ g Ό Φ φ Ο ft > Ö I Η Η φ rt Φ fi « Φ ·Η

S bO fi Φ 5 A

tö * cö * φ ο ra s bo fi co τι φ .

ΟΦ ObOONCOCAIN-O ft ü+3 ο + r *~ *· * * *" fi ra fi ft f4® r- O CN O θ'- ·η®

HtÖ T φ © t" γ· τ~ *Η fi

bO ί4 Ό bJ

Φ Ö Η +1 +1 +1 -R Ή , Ü Ö fi Η CÖ Φ _ . ^ ®

φ·Η ®>TJ(MCMINnOCO CMS

> *Ό π3 <►****«* ·* 'w' Ο tQ Ό ft Η -4- r- ο Π" Η* Λ! +>Φ •h+SS AAC'-OnnQ '-ν •ri ·<~3 So® r- r- ft

Φ ft Φ ·Η bO ^ CQ

-PO O S'-' J

H U Λ1 Φ > ft ft· Ö

A fi ^ A' *H

+3 φ AA ·· S

O O W ww CM tö <ö ft o _ ft rara tö ra \ O O A O o ha X -HbO l· O O O- A **ü fi CO fti AMOAIN- v fi

H ft O \ ft H

X Α P bo . ; bo φ 3 g

+3 w ·· r* bO

ra tö ® H ft X

ft S A \

fi O O H Ö bQ

OH fi ft ft ®tÖS

13 ft tö tö O >

A CS Ö tÖ Φ tÖ O

+9 (ö O A ft ft fi A

dm o η h ft ft ®tN

< bO fi fi CO CO "T tQ

φ ra ra i i h ra a μ τιφφφφ ο·ηφ C! Hfififi.fi fi

•Η Φ ·Η ·Η ft ·Η bC Φ A

H OSSSS fi fiS IN

H φ CS tö tö tö tö ·Η Φ A

τι törararara ϋ-ρ Η fi +30000 fi φ ·· φ to φοοοο φ ft Ο ft ft fi 3 fi S Η ^

tö Φ fi Η Η Η Η ft Φ A

g-t pq OhObObObO OP'-' 8201765 17

Uit de in tabel I gegeven resultaten blijkt, dat glucosamine-sulfaat en glucosaraine-SP ook dezelfde farmacologische activiteit nin vivo” hebben.

Meer in het bijzonder zijn voor dezelfde dosering de twee 5 stoffen equivalent vanuit farmacologisch gezichtspunt.

ACUTE TOXICITEIT A. Bij muizen:

Zwitserse· ΜΜΒΓ muizen met een gemiddeld gewicht van 20 - 2 g, onderverdeeld in groepen van 10 dieren (5 vrouwelijke en 3 manne-10 lijke) werden voor elke dosering en voor elke toedieningswijze gebruikt.

De toedieningswijzen waren: oraal door middel van een maag-sonde, intramusculair en endoveneus in de staartader.

De waarnemingstijd na toediening wa-s 10 dagen*

15 De gebruikte doses en de verkregen resultaten zijn tabel J

gegeven.

8 2 <T1 7 6 5 -.- 18 /—N 60

X OOOOOif\ G

Ο \ ΟΟΟΙΑΙΛ1Ν <0

IP\ 60 O O IA C\J IN CO

QS ΙΛ ΓΛ r- VO ΙΆ r- O

^ w ,/s Λ A A A A §

IA

O

ΙΛ

-P

ι~3 ·Η -P

*H <0 ® 0 +> a

G ^ H OOOOOO X

Φ ® n

N -P 'H

•H G H

G O ® S E > Φ G -n •rl +>

O

1¾ to ® to -π a 1 CQ to φ o ®

G T3 G

•H

s Ή ® M Ö m ca /-. ®

OS'*' r— V G

U 60 ^-/ .—/ Φ 3 Φ Λί ΟΟΟΟΟΙΛ Π

H TJ\OOOtfNli\tNG

60 g 6o ootnnjo-co o, Φ g A K\ r- Ό ΙΆ a β •H'-' 5 φ >o Φ

Φ G

+>60 G

Π5 Φ O

Φ ο o «Η Eh H ¾ 3 to to · Φ «. ®

G G G

•rl Φ Φ -H

ε « n ε φ η ·η G G ® ® ·Η ·Η *H ·Η ® O St S ® Φ O · O CQ ÏQ H H 0+5 360 60 3® 3® 3® H G ‘ G 03 O G <rj, « 60 ·Η ·Η ®Φ CQ Φ M Ή

G S 3 G 3 G H

ü φ Φ S® S® 60 3 Φ *H ·γΙ H ® iH Bj ^ .M ® >Τ3 Ό CÖ G O Φ G O N ®

φ φ φ -P TS Φ -P Ό 60 G

+>o o shGcgcg' a ·η

Η -P Eh Ο ·γ) ® Ο -Η ® S

Φ Ο Φ +> φ LTS ö Η Ό Ν ° Ο G 2 •Η Φ „3 Κ Η Si1/, OH +>+>+> Φ 60 +5 -Η Φ Φ Φ _ +Ö φ φ Φ Ο 60 φ Ο tH <η <η ΙΛ Λί +>CQ HHHfUfta 0s- 'N.

3 G 3 G G CO CO CO A 60 Ο Φ CQ CQ CQ 1 I 1 a <d> φφφφφφ <"

GGGGGG AO

• Η -H -rl -Η -Η -Η -H IN O

o asEass =°¾

1-3 -P ΦΦΦΦΦΦ τ- A

to CQ CQ CQ (Q ® M

H OOOOOO

φ OOOOOO

O 33GGGG ^

φ Η Η Η Η Η H

Eh 60 60 60 6Q 60 60 w 8201765 19 B« Bij ratten

Sprague Dawley ratten van het albinotype met een gemiddeld gewicht van ongeveer 1f?0 gr onderverdeeld in groepen van 10 dieren (5 mannelijke en 5 vrouwelijke) werden voor elke dosis en voor 5 elke toedieningswijze gebruikt.

De toedieningswijzen waren: oraal door middel van een maag-sonde* intrarausculair en endoveneus in de staarteder.

De waarnemingstijd na toediening was 10 dagen.

De gebruikte doses en de verkregen resultaten zijn in tabel K 10 gegeven.

/ 8201765 20 ω 60 s ο Ο ω ο X Ο Ο Ο Ο Ο ΙΛ Λ Ο \ Ο Ο Ο Λ Λ ΙΝ

1Λ Μ Ο Ο Λ oj Ν CO C

QS ΙΛ Λ r \β Λ r- Φ ^ W Λ Λ Λ Α Λ Α ο Ο ο • Λ ·*· Ο ο ΙΛ •Ρ t- Φ +> S ·Η +| φ Φ

C 4» S

Φ .«a

Ρ ^ Η· ΟΟΟΟΟΟ X

ρ Φ ^ Φ Ρ ·Η ft ft Η Ο Φ •η S > •ft Φ fit Ή Ρ Ο, Ο W Φ I 05 ft Φ -ft <0 C- Φ Φ •Η Ο ft g Ό ν,

Φ C

φ · φ Ο X ^ '"ν -"> ft Ο φ r- r* r~ Φ φ g 60 ν-/ w w Ό

Η X Ο Ο Ο Ο Ο Λ C

60 Φ\ Ο Ο Ο Λ ΙΑ CN Ο •Π 60 Ο Ο Λ (Μ IN CO ft C c ε λ λ t- vc fΛτ- ω φ φ w φ •Η ft ρ Ό ft φ Φ ο φ 60 Ο Ρ Φ Η , Ο ft φ επ «5

05 I

φ · Φ cc ö •ρ φ *ft Ë N s φ *n φ Φ 05’ ·Η N ft ft to

O S' Ό -ft ‘ft O

o to >ft Φ ® o 3 60 5 Η H 3 H fi 05 3 05 3 05 Η 60 -ft 60 03 03 60 CC CO φ 05 Φ C Φ -ft 3 3 S3 Μ φ -ft C S Φ S Φ Λί ><0 Φ Η Φ > Η Φ > Ν φ «ft φ ft Ο φ ft Ο 60 ρ Ο Ό φ ρ Ό Φ Ρ Ό η •ft-p φ ft c c ft c c Λ · φ ο ΟΉΦΟί+Φ ο ρ ρ Φ Εη ΙΛ Φ •ft Π CM Φ Ο C VD «Η •ft Φ _ Η !»! Η C 3 Ο Η ® «5 +3 .ft +3 -Ρ -Ρ ®

Λ Φ Φ Φ Ο C

φ Ο Φ Φ Φ Λ ·Η +3 Μ «ft *Η » *Η IN ε φ ft ι—I r-Ι Η ft ft ft· Λ Φ ϋΦ φ φ 3 C0 Μ! <02 05 «jJ > CO C0 05 1 t I ·» Ο φφφφφφ Λ Ο CCCCCC (Ν 3 VI ·ιΗ -ft ·γΓ -ft ιΗ ·γ! °0 Η ·. ο εεεεεε r-&o fed Ρ ΦΦΦΦΦΦ co CO 0! CO 05 CQ 05

H O O O O O O

φ O O O O O O

p 3 Φ 3 3 3 3 ^ Φ rftpftffttftrftrft g-l M 60 M 60 60 60 ^ 8201765 21

Zoals blijkt uit de tabellen J en K worden zelfs op het niveaus van acute toxiciteit geen verschillen gevonden tussen glucosa-minesulfaat en glucosamine-SP. Voor alle toedieningswijzen en voor alle onderzochte diersoorten hebben beide een zo geringe', toxici-5 teit, dat er geen mortaliteit is zelfs bij zeer. hoge doses, zodat het moeilijk is precies een juiste· LD^ vast te stellen.

Het feit dat glucosamine-SP dezelfde farmacotoxicologische en farmacokinetische eigenschappen heeft als glucosaminesulfaat, maakt duidelijk* dat de eerstgenoemde dankzij de stabiliteitseigenschap-10 pen en het bereidingsgemak ervan een duidelijke vooruitgang in de stand der techniek betekent. Dienovereenkomstig zal een aantal voorbeelden van formuleringen van farmaceutische preparaten, die glucosamine-SP bevatten, hierna gegeven worden. Opgemerkt wordt dat zij verschillen van de in het Amerikaanse octrooischrift 3.863.076 15 beschreven formuleringen voor farmaceutische vormen, die glucosaminesulfaat bevatten, doordat zij geen stabiliserende of conserverende- bestanddelen of anti-oxydatiemiddelen bevatten, aangezien zij geen problemen geven met betrekking tot de bereiding, conservering of stabiliteit ervan.

20 Preparaten van farmaceutische vormen voor orale toediening 1. Capsulesi glucosamine-SP 314 mg maïszetmeel , 60 mg lactose- 28,5 mg 25 magnesiumstearaat 5 mg talk '· 2,5 mg

De componenten worden gemengd tot een homogeen- mengsel wordt verkregen, worden door een zeef van 30-mesh gezeefd en in een gelatine-capsule afgevuld.

30 Elke capsule bevat 4-10 mg poeder overeenkomend met 3Ή mg glucosamine-SP.

2. Tabletten glucosamine-SP 314 mg lactose 42 mg 35 polyvinylpyrrolidon 20 mg carboxymethylcellulose natriurazout '10 mg sïliciumdioxide 5 mg magnesiumstearaat 5 mg 40 talk 4 mg 8201765 22

Het glucosamine-SP» het. polyvinylpyrrolidon en de lactosa worden met 95 % ethanol tot een pasta gevormd» de pasta-wordt bij 45°C gedroogd», gegranuleerd en gezeefd door een zeef van 20-mesh. De andere bestanddelen worden aan het verkregen granulaat toege-5 voegd en gemengd tot het mengsel homogeen, is..

Het mengsel wordt vervolgens onder druk gevormd tot tabletten met een gewicht van ifOO mg, die 3-1-4 mg glucosamine-SP bevatten.

3· Dragées: glucosamine-SP mg 1Q maïszetmeel 50,4 mg polyvinylpyrrolidon 6,4 mg glycerylmonostearaat 12,8 mg methylcellulose 3»6 mg stearinezuur 4 mg 15 siliciumdioxide 0,8 mg- saccharose '65,3 mg talk * 90,9 mg calciumcarbonaat . 25 mg arabische- gom 4,3 mg' 20 magnesiumstearaat 5,6 mg schellak 16,7 mg ricinusolie 0,35 mg titaandioxide 3*8 mg witte bijenwas 0*05 mg 25 Het glucosamine-SP,. zetmeel* polyvinylpyrrolidon, glyceryl monostearaat.» methylcellulose* stearinezuur en titaandioxide worden tot homogeen gemengd.» door een zeef van 30-mesh gezeefd en onder druk gevormd tot kernen van 392 mg. De vervaardigde kernen worden in een bekledingsinrichting bekleed met een suspensie van 30 talk, magnesiumstearaat, schellak en ricinusolie in 95-procents ethanol en vervolgens 12 uren bij 35°0 gedroogd.

Primaire dragêes van 415,7 mg worden verkregen, die verder bekleed worden met een vooraf bereide suspensie in water, die de saccharose, talk* calciumcarbonaat* arabische gom en het titaan-35 dioxide bevat. Na drogen bij 30 tot 35°0 gedurende 12 uren worden dragees van 603,95 mg verkregen, die tenslotte met de bijenwas gepolijst worden.

Het eindgewicht van de dragees is 604 mg en het glucosamine-SP gehalte is 314 mg.

8201765 23

Bereiding van' farmaceutische -vormen voor rectale toediening glucosamine-SP 314 mg semi-syhtbetische glyceriden 1586 mg polysorbitanmonostearaat 80 mg 5 gedestilleerd- wa-ter 20 mg

De semi-synthetische glyceriden worden onder constant roeren bij 45°C gesmolten; steeds onder roeren wordt een vooraf bereid • - mengsel van water en polysorbitanmonostearaat toegevoegd en ten- -* slotte· wordt het glucosamine-SP,. dat vooraf fijngemaakt is tot 10 een korrelgrootte van 5 tot 20 micrometer, toegevoegd*

Het mengsel wordt gedurende 30 minuten geroerd, dat wil zeggen tot volledige dispersie is bereikt, vervolgens wordt het mengsel in polyvinylchloride-omhulsels geïnjecteerd, die na koeling worden afgedicht.

15 Suppositoria met een gewicht van 2000 mg* die 314 mg glucosa- mine-SP bevatten,'worden verkregen* -

Bereidingen van farmceutische vormen die gebruikt kunnen worden voor intramusculaire, intraveneuze, intra-articulaire injecties 1. Flesjes: 20 Flesje- A: ' glucosamine-SP 502,5 mg lidocaine-hydrochloride 10 mg H^O voor injectie tot 2 ml

Flesje B: 25 diethanolamine 24 mg H^O voor* injectie tot 1 ml

Bereiding van flesje A:

Het glucosamine-SP en het lidocaine-hydrochloride worden in water opgelost in de aangegeven hoeveelheden onder roeren, ge-30 filtreerd onder een afdekking van inert gas door een membraan- ~ filter met een poreusheid van 0,45 en in flesjes van 3 ml gebracht, die tenslotte gedurende 30 minuten in een autoclaaf met een stoom-stroom bij 115 tot 120°C gesteriliseerd worden.

Bereiding van flesje B: 35 Het diethanolamine wordt in water onder roeren in de aangege ven hoeveelheid opgelost, onder een afdekking van een inert gas gefiltreerd door een membraanfilter met een poreusheid van 0,45, in flesjes van 1 ml gebracht, die tenslotte gedurende 30 minuten in een autoclaaf met een stoomstroom bij 115 tot 120°C gesterili-40 seerd worden.

8201765 24

Paren van flesjes van 3 ml en 1 ral worden verkregen, waarvan de inhouden onmiddellijk voor gebruik gemengd worden* Deze toevlucht is toe te schrijven aan het feit dat de natuurlijke pH van glucosamine-SP, bij de gebruikte concentraties„ ongeveer 3 is en 5 daarom fysiologisch onaanvaardbaar is*

Om een fysiologisch toelaatbare pH te bereiken, is het noodzakelijk een base (zoals diethanolamine) toe te voegen met daaropvolgende- vrijmaking van de aminogroep van het glucosamine, dat zoals hiervoor vermeld gemakkelijk ontleedbaar is* Derhalve wordt 10 vanwege stabiliteitsredenen gebruik gemaakt van paren flesjes, waarvan de inhoud onmiddellijk voor gebruik wordt gemengd, met het dubbele- voordeel een produkt te hebben dat stabiel is in de tijd (flesje A), en dat door de toevoeging van de base (flesje B) een fysiologische en^derhalve toelaatbare pH bereikt.

15 2. Door vriesdrogen verkregen preparaat glucosamine-SP 502,5 mg lidocaïne-hydrochloride 10 mg diethanolamine· 20 mg

De- componenten worden in het voor injecties gewenste volume 20 steriel water opgelost, onder een afdekking van een inert gas gefiltreerd door een membraanfilter met een poreusheid van 0,45/u® en in kleine flessen aan een vriesdroogbehandeling onderworpen.

Een wit vast residu wordt verkregen dat voor gebruik wordt- opgelost in 2 ml steriel water voor injecties binnen een tijd van niet 25 meer dan 30 seconden (pH 6,8).

8201765

Claims

1. Gemengd zout van glucosaminesulfaat en natriumchloride met de formule van het formuleblad»

2. Werkwijze ter bereiding van het gemengde zout van glucosa-5 minesulfaat en natriumchloride volgens conclusie 1, met het k e n m e r k, dat men (a) droog natriumchloride in 5,5 tot 7».5 gew.dln gedestilleerd water voor elk deel natriumchloride bij een temperatuur van 50 tot 70°C onder roeren oplost,. 10 (b) in de bij trap (a) verkregen oplossing de stoechiometrische hoeveelheid glucosaminesulfaat bij een temperatuur van 35 tot 45°C onder roeren oplost». (c) het gemengde zout neerslaat door de toevoeging van een vloei-baar precipitatiemiddel., dat met water mengbaar is en waarin het 15 gemengde zout een oplosbaarheid heeft die niet groter is dan 0,1 gew./vol*#» terwijl onder roeren te werk wordt gegaan bij een temperatuur van ifO°G tot 50°C». (d) de precipitatie voltooit door de temperatuur van het mengsel te verlagen en 20 (e·) het geprecipiteerde gemengde zout wint,.

3, Werkwijze volgens conclusie 2, met het kenmerk, dat men als vloeibaar precipitatiemiddel ace ton,, ethanol, acetonitril*. tetrahydrofuran of dioxan toepast»

4» Werkwijze volgens conclusie 2 of 3» o e t het k e n-25 merk* dat men het vloeibare precipitatiemiddel toevoegt in een hoeveelheid, van 5 tot 7 vol.dln met betrekking tot het bij trap (a) gebruikte water gedurende een tijjdsperiode van'2,5 tot 3,5 uren»

5» Werkwijze volgens conclusies 2 tot 4-, met he t kenmerk», dat men het . gewonnen gemengde zout in een oven met 30 circulerende lucht bij 45 - 6-5°C droogt*

6. Farmaceutische samenstelling met bij-voorbeeld een anti-reumatische, anti-artrose en anti-artritis-activiteit, die het gemengde zout van glucosaminesulfaat en natriumchloride volgens conclusie 1 als werkzame component bevat, + + + + + + + 8201765