NL8105744A - Nieuwe antiinflammatoire en immunoregulatoire pyridinen. - Google Patents

Description

* Λ '

Nieuwe antiinflammatoire en immunoregulatoire pyridinen.

De uitvinding heeft betrekking op pyridinen, die op de 4-plaats gesubstitueerd zijn met een thioether en carboxy, 5 (C^-G^)carboalkoxy of formylbevattende zijketen en de farmaceu- tisch aanvaardbare zouten daarvan, die men kan gebruiken ter bebandeling van arthritis alsmede als tussenprodukten voor de be-reiding van de overeenkomstige alkoholen met de zelfde toepas-singsmogelijkheid.

10 Er is in de techniek een aantal verbindingen bekend, die men kan gebruiken als antiinflammatoire middelen, bijvoor-beeld de corticosteroiden, fenylbutazon, indomethacine, pyroxy-cam en andere benzothiazinedioxyden(Amerikaans octrooischrift 3.591.584), 2-oxo-2,3-dihydrobenzofuran-3-carboxamiden (Amerikaans 15 octrooischrift 3.676.463) en gesubstitueerde diarylimidazolen (Amerikaans octrooischrift 3.707.475). Dienovereenkomstig hebben deze verbindingen therapeutische waarde bij de behandeling van arthritis en andere inflammatoire aandoeningen. Dergelijke aan-doeningen zijn ook behandeld door toediening van immunoregula-20 toire middelen, zoals levamisool als bijvoorbeeld beschreven in

Arthritis and Rheumatism, 20, 1445 (1977) en Lancet, J_, 393 (1976).

Bij pogingen tot het vinden van nieuwe en betere therapeutische middelen ter behandeling van deze aandoeningen werd nu gevonden, dat de nieuwe pyridinen van de onderhavige uitvinding hetzij 25 als antiinflammatoire middelen, hetzij als regulatoren van de immuumrespons in zoogdieren werkzaam zijn en in vele gevallen beide werkingstypen hebben. Omdat deze werkingen komplementair zijn, is het laatste van bijzondere betekenis bij de behandeling van rheumatoide arthritis en andere aandoeningen, waarbij ver-30 lichting van de ontsteking en regulering van immuumrespons ge-wenst is.

Niet alle verbindingen van de onderhavige uitvinding zijn nieuw. Zo zijn zuren en esters met de formule 1, waarin n 1 is en Z hydroxyl of (C^-C^)alkoxy voorstelt, beschreven als 35 waardevolle tussenprodukten voor de bereiding van cephalosporine- 8105744 « » 2 derivaten (Brits octrooischrift 1.434.271), waarbij 2-(4-pikolyl-thio)azijiizuur en methyl-2-(4-pikolylthio)acetaat met name be-schreven zijn. Isomeer 2-(3-carboxypropy lthiome thyl)'pyridine en de overeerikomstige alkylesterderivaten zijn ook beschreven (Brits 5 octrooischrift 1.213.049), welke laatste verbindingen worden ge-noemd voor de behandeling van ontsteking bij dieren, niet bij de mens, maar zij missen de gewenste immunoregulatoire werking van de onderhavige verbindingen, aangezien de afgeleide alkoholen een dergelijke werking missen, terwijl van de onderhavige verbindin-10 gen afgeleide alkoholen een sterke werking hebben.

Volgens de uitvinding werd onverwacht gevonden, dat bepaalde nieuwe pyridinederivaten alsmede hun farmaceutisch aan-vaardbare zouten therapeutisch hetzij als antiinflammatoire mid-delen, hetzij als regulatoren van de immuumrespons kunnen worden 15 gebruikt. Zij zijn bijzonder geschikt voor de behandeling van aandoeningen als rheumatoide arthritis, waarbij zowel antiinflammatoire als immunoregulatoire middelen afzonderlijk voor thera-peutische doeleindenzijn gebruikt.

De therapeutische middelen van de onderhavige uit-20 vinding hebben de formule 1 of 2, waarin n 1 of 2 is, W methyleen, dat al of niet met een methylgroep of een fenylgroep gesubstitueerd is, voorstelt, Z hydroxyl, (C^-C^)alkoxy of waterstof voorstelt en 25 R en R^ hetzij afzonderlijk dezelfde (C^-C^)alkyl- groep voorstellen, ^ hetzij samen ethyleen(-CH^CH^-) of propyleen(-CH2 CH2CH2-) voorstellen, met inbegrip van de farmaceutisch aanvaardbare 30 zuuradditiezouten daarvan en de farmaceutisch aanvaardbare kat- ionogene zouten daarvan, wanneer Z hydroxyl voorstelt.

De voorkeur gaat uit naar de pyridinen met de for-mules 1 en 2, waarin n 1 is, waarbij de meeste voorkeur uitgaat naar de verbindingen, .waarin W ongesubstitueerde methyleen voor-35 stelt.

8105744 # t 3

De antiinflammatoire werking weerspiegelt zich in de zogenaamde rattepootoedeem proef, waarin het vermogen van een orale dosis van de verbinding tot het inhibiteren van een inflammatoire reaktie wordt gemeten, terwijl immunoregulatoire 5 werking wordt vastgesteld door de zogenaamde muis E-rosetteproce-dure, waarbij het vermogen van de te beproeven verbinding tot herstel van de erythrocyterosettevorming in gethymectomiseerde muizen wordt gemeten. Deze proeven worden onder nader beschreven.

De uitvinding heeft ook betrekking op farmaceuti-10 sche preparaten van bovengenoemde pyridinederivaten, alsmede op hun gebruik als antiinflammatoire en immunoregulatoire middelen, in het bijzonder bij de therapie van arthritis.

Er staan handzame methoden ter beschikking voor de bereiding van de pyridinezuren, esters en aldehyden van de onder-15 havige uitvinding. Deze methoden kunnen als volgt worden opge-somd: 1. Reaktie van 4-pikolylmercaptan of 2-(4-pyridyl)~ ethylmercaptan met een alpha-halogeenzuur, ester, aldehyde of acetaal, desgewenst gevolgd door geschikte hydrolyse, verestering 20 of acetalisering. Voorbeelden van een dergelijke reaktie worden gegeven in reaktieschema's A^-A^.

2. De reaktie van 4-pikolylhalogenide of 2-(4-pyridyl)ethylhalogenide met een geschikte gesubstitueerde mercaptan (conform bovengenoemde methode 1) desgewenst gevolgd door 25 geschikte hydrolyse, verestering of acetalisering. Voorbeelden van deze reaktie worden gegeven in reaktieschemafs 3. Additie van mercaptoesters aan 4-vinylpyridine, desgewenst gevolgd door hydrolyse. Een voorbeeld van een dergelijke reaktie wordt gegeven in reaktieschema C.

30 De verdringingsmethoden 1 en 2 behelzen een reaktie, waarbij het halogeen van een organisch halogenide door een orga-nische thiorest wordt vervangen. De reaktie wordt vergemakkelijkt wanneer men een ekwivalent sterke base gebruikt teneinde het mercaptan om te zetten in een anionogeen zout, dat veel doeltref-35 fender is bij de omzetting van het organische halogeen in de thio- 8105744 • ψ s \ 4 ether. .Msattett.eeu zuurzout .van.de pyridinerest (bijvoorbeeld 4-pikolylchloridehydrochloride) of een'zuur .(bijvoorbeeld alpba-mercaptopropiorizuur) .als een van de reagentia gebruikt, voegt men een compenserende hoeveelheid base toe. Een .groot .aantal ver-5 schillende pplosmiddelen is voor deze reaktie geschikt, waaronder alkoholen, azijrizuurnitril, dimethylformamide, enzovoort, waarbij de enige eis is, dat bet oplosmiddel inert is-ten opzicht van re-agentia en prbdukt en dat de reagentia eniger mate oplosbaar zijn. Bij voorkeur is het oplosmiddel minder zuur'dan de mercaptan ten-10 einde vorming van het thioanion te bevorderen. De voor deze reaktie gebruikte temperatuur is niet kritisch (bijvoorbeeld 0-120°C). Zij moet ter verkrijging van een redelijke snelheid hoog genoeg zijn, maar niet zo hoog, dat zij tot ongewenste ontleding leidt. Zoals bekend varieert de reaktiesnelheid met de aard van het or-15 ganische halogenide (snelheid: I^Br^Cl), de struktuur van zowel het halogenide als het mercaptan en het oplosmiddel. De reaktie-tijd moet zodanig zijn, dat de reaktie nagenoeg voltooid is (bijvoorbeeld ^95% omzetting, wanneer ekwivalente hoeveelheden halogenide en mercaptan worden gebruikt) teneinde maximum opbrengsten 20 te verkrijgen (bijvoorbeeld 1 uur tot enkele dagen). Deze reakties kunnen gemakkelijk door dunne laag chromatagraf ie worden gevolgd onder gebruikmaking van een aantal verschillende in de handel ver-krijgbare silicagelplaten, die een ultravioletindicator bevatten. Geschikte elueermiddelen zijn chloroform/methanolmengsels, waarbij 25 de hoeveelheid van deze oplosmiddelen varieert met de polariteit van het reaktieprodukt, hetgeen algemeen bekend is. Voor de mees-te reakties van dit type is een elueermiddel, bestaande uit 9 de-len chloroform en 1 deel methanol goed geschikt. Voor de meer po-laire verbindingen wordt de hoeveelheid methanol opgevoerd (bij-30 voorbeeld 4 chloroform/1 methanol). Soms is het voordelig aan het elueermiddel tot 5% azijnzuur toe te voegen, vooral wanneer men met zuuradditiezouten omgaat. Ethylacetaat en andere alkoholen (bijvoorbeeld butanol) alsmede een hoeveelheid water, kunnen ook in het elueermiddel worden opgenomen. Wanneer de reaktie voort-35 schrijdt, wordt .er een ekwivalent sterk zuur geprbduceerd onder 8105744 5 neutralisatie van .het bij de reaktie gebruikte moj^ase. Om deze reden kan ook de pH als hulpmiddel bij het volgen van. deze reaktie worden gebruikt.

Methode 3, additie van mercaptanen aan 4-vinyl-5 pyridine wordt uitgevoerd onder gebruikmaking van dezelfde tempe-ratuur en oplosmiddelen als bij de verdringing van organisch halo-geen door organisch thioradikaal als boven besproken. In dit ge-val kan men geschikte reaktietijden ook bepalen onder gebruikmaking van dezelfde dunnelaagchromatografiesystemen.

10 Hydrolyse van de esters en acetalen van methoden 1-3 wordt onder in de techniek welbekende standaardomstandigheden uitgevoerd. Zo zijn bijvoorbeeld water, dat eventueel met een ver-mengbaar organisch oplosmiddel verdund is en een zure katalysa-tor (voor acetaal- of esterhydrolyse) of een basische katalysator 15 (slechts in geval van esterhydrolyse) bij kamertemperatuur gedu-rende enkele uren tot een dag of meer goede omstandigheden voor deze reakties.

Acetalisering en verestering van respektievelijk aldehyden en zuren worden ook onder in de techniek welbekende 20 standaardomstandigheden uitgevoerd. Daarbij gebruikt men met name overmaat watervrije alkohol of bisalkohol als oplosmiddel naast een zure katalysator als p-tolueensulfonzuur of een sterk zure ionenuitwisselende hars. In het algemeen gebruikt men kamertem- niet peratuur, aangezien de temperatuur kritiseh xs, gedurende 25 enkele uren tot een dag of meer teneinde de reaktie volledig te laten verlopen.

De voor methoden 1-3 benodigde uitgangsstoffen zijn heel algemeen uit de literatuur of handel te verkrijgen. Mercaptanen kunnen uit de overeenkomstige halogeniden worden bereid door 30 reaktie van het halogenide met thioureum onder vorming van het isothiuroniumzout gevolgd door basische hydrolyse (zie preparaten 1 en 2 onder), door reaktie van organische halogeniden met zwavel-waterstof of alkalihydrosulfide (bijv. Hromatka et al., Monatsh.

78, 32 (1948)), of door hydrolyse van thiolesters (bijv. Chapman 35 et al., J. Chem. Soc., 579 (1950); Sjoberg, Ber. T5, 13 (1942); 8105744 • if 6 von Wacek' et al'.,. Ber.‘75, 1353' (T94Z)). Als uitgangsstoffen beno-digde organische halogeniden zijn ook in het -algemeen uit de han-del of literatuu'r te verkrijgen. Werkwijzen voor het bereiden van de benodigde halogeniden zijn met name direkte halogenering of re-5 aktie van waterstof of fosfoshalogeniden met een alkohol.

De' farmaceutisch aanvaardbare zuuradditiezouten van de nieuwe pyridinen van de onderhavige ui'tvinding worden gemak-kelijk bereid door de vrije base in oplossing in water of in een geschikt organisch oplosmiddel in aanraking te brengen met het ge-10 schikte anorganische of organische zuur. Het zout'kan door preci-pitatie of afdamping van het oplosmiddel worden verkregen. De farmaceutisch aanvaardbare zuuradditiezouten van de onderhavige uit-vinding zijn bijvoorbeeld die, gevormd met zoutzuu'r, broomwater-stofzuur, salpeterzuur, fosforzuur, zwavelzuur, benzeensulfonzuur, 15 citroenzuur, laurylsulfonzuur, fumaarzuur, oxaalzuur, maleinezuur, methaansulfonzuur, wijnsteenzuur, p-tolueeiisulfonzuur en barnsteen-zuur. Bij veelbasische zuren kan het zout meer dan 1 mol base per mol zuur bevatten. De zuuradditiezouten, die mol bij mol zijn, ver-dienen echter de voorkeur. Desgewenst kunnen deze zouten recht-20 streeks uit reaktiemengsels worden gewonnen door geschikte modifi-katie van de winningsprocedure zonder winning van het tussentijds gevormde vrije zuur,

De farmaceutisch aanvaardbare kationogene zouten van de verbindingen van de onderhavige uitvinding worden gemakke-25 lijk bereid door de zure vormen te laten reageren met een geschikte base, gewoonlijk een ekwivalent, in een gezamenlijk oplosmiddel. Met de uitdrukking "farmaceutisch aanvaardbare kationogene zouten" worden zouten bedoeld ,als de alkalizouten, bijvoorbeeld natrium-en kaliumzouten, aardalkalizouten als calcium- en magnesiumzouten, 30 aluminiumzouten, ammoniumzouten en zouten met organische basen, bijvoorbeeld aminen als benzathine(NjN'-dibenzylethyleendiamine), choline, diethanolamine, ethyleendiamine, meglumine (N-methylglu-camine), benethamine(il-benzylfenethylamine), diethylamine, piperazine en tromethamine(2-iamino-2-hydrbxymethyl-1,3-propaandiol). Bij 35 de bereiding van deze kationogene zouten gebruikte basen zijn met 8105744 % % 7 name natriumhydrbxyde, natriummethanolaat, natriumethanolaat, natriumhydride,. kaliuminethanolaat, magnesxumhydroxyde, calcium-hydroxy de, benzothine, choline, diethanolamine, ethyleendiamine, meglumine, benethamine, diethylamine, piperazine en .tromethamine.

5 Het zout wordt gewonnen door concentratie tot droog of door toe- voeging van een niet-oplosmiddel. In sommige gevallen kunnen zouten worden bereid door vermenging van een oplossing van het zuur met een oplossing van een ander zout van het kation (bij-voorbeeld natriumethylhexanaat, magnesiumoleaat), onder gebruik-10 making van een oplosmiddel, waarin het gewenste kationogene zout precipiteert, of kunnen anders worden gewonnen door concentratie en/of toevoeging van een niet-oplosmiddel. Desgewenst worden de-ze zouten rechtstreeks uit de reaktiemengsels gewonnen door ge-schikte winningsprocedures zonder winning van het tussentijds 15 gevormde vrije zuur.

Het gebruik van de onderhavige verbindingen bij de synthese van immunoregulatoire, antiinflammatoire pyridinealkoho-len wordt weergegeven in het bovengenoemde Amerikaanse octrooi-schrift 4.246.263.

20 De immunoregulatoire werking van de verbindingen van de uitvinding is vastgesteld volgens de muis E-rosetteproce- 66Π dure. Bij de muis is de aanwezigheid van thymus vereist voor een volledig tot uiting komen van normale rosettevorming met schaap-erythrocyten / zie bijvoorbeeld Bach en Dardenne, Immunol. 25, 25 353 (1973)_/. Bij deze procedure onderzoekt men het vermogen van een geneesmiddel tot het herstel van voor azathioprine sensitieve, rosettevormende cellen bij volwassen gethymectomiseerde muizen tot het peil van normale dieren. Met name is rosettevorming on-derzocht aan CD-1 muizen, die op een leeftijd van 4 weken gethy-30 mectomiseerd waren en voor behandeling tenminste 14 dagen met rust waren gelaten (ATX muizen). De ATX muizen zijn oraal gedo-seerd met zoutdrager of geneesmiddel. 16 Uur later worden uit de verzamelde railten van drie muizen suspensies van enkelvoudige cellen bereid in "Hanks balanced salt solution" (HESS). Bij elke 35 buis voegt men 0,1 ml lymfocyten (6 x 10^/ml) in HBSS en hetzij 8105744 » ψ 8 0,1 ml BBSS, hetzij 0,t .ml· 40- yUg/ml azathioprine inHBSS. Na 90 minuten ixicubatie bij 37°C worden de cellen gewassen met 2 maal 5 ml HBSS, teruggebracht op 0,2 ml en wordt 0,2 ml rode Schape- g bloedcellen (erythrocyten) van 1,2 x 10 .cellen/ml toegevoegd.

5 Tien 'yul' worden op hemaggliitineerglaasjesgepipetteerd en het aan-tal rosetten wordt geteld. Het vermogen van de te beproeven ver-binding tot hersfel’.van het aantal voor azathioprine gevoelige rosettevormende cellen tot normaal of hoger wordt bepaald. Bij nor-male muizen wordt 42% ± 12% azathioprinegevoeligheid gevonden.

10 Bij volwassen, gethymectomiseerde muizen wordt 3 ± 3% azathioprinegevoeligheid gevonden. Kenmerkend voor het vermogen van de verbin-dingen van de onderhavige uitvinding tot het herstel van voor aza-thioprinegevoelige rosettevormende cellen tot normaal of daarboven bij verschillende oraal doses (mg/kg, dat wil zeggen mg genees- 15 middel/kg lichaamsgewicht van de muxs) is de immunoregulatoire werking van 2-(4-pikolylthio)azijrizuur, dat getoond wordt in tabel A. Naar mate het percentage hoger en de effektieve dosis lager is, is de verbinding als immunoregulatoir middel aktiever.

20 Tabel A

Immunoregulatoire werking Werking van 2-(4-pikolylthio)azijiizuur bij de muis E-rosetteprocedure...........'

OraaldoSis % rosettevormende cellen 25 0,1 15 d,3 15 1.0 ' 35, 40 3.0 - 40 1 8105744

De antiinflammatoire werking van de verbindingen van de onderhavige uitvinding is bepaald volgens de standaardproef op het door carrageenine geinduceerde rattepooteudeem / beschreven door C.A. Winter et al., Proc. Soc. Exp. Bioll 111, biz. 544 (1962) /. Bij deze .proef wordt de antiinflammatoire werking be-Q^y 35 paald als de inhibitie van ^ddeemvorming aan de achterpoot van «f 9 mannelijke albinoratten (gewicht 150-190 -g) als reaktie op sub-plantaire injektie van carrageenine. De' carrageenine wordt als een 1Z-suspensie in. water (0,05 ml) T uur na orale toediening van het geneesmiddel geinjekteerd. 3 Uur na de .carrageenineinjektie wordt 5 eudeemvorming vastgesteld door meting van het volume van de gein-jekteerde poot, zowel aan het begin als op het 3 uur tijdstip.

De volume-toeneming 3 uur na carrageenineinjektie vormt de indi-viduele reaktie. Verbindingen worden als aktief beschouwd, indien de reaktie van de met geneesmiddel behandelde dieren (6 ratten/ 10 groep) ten opzichte van de bianco groep (dat wil zeggen, dieren die alleen de drager ontvangen hebben) wordt geacht signifikant te zijn in vergelijking met resultaten, die verkregen zijn met standaardverbindingen als acetylsalicylzuur bij 100 mg/kg of fe-nylbutazon bij 33 mg/kg, beide bij orale toediening. De werking 15 van de te beproeven verbinding wordt uitgedrukt als Z oedeeminhi-bitie bij een gegeven oraaldosis.

De nieuwe pyridinen van de onderhavige uitvinding en hun farmaceutisch aanvaardbare zouten zijn therapeutisch waar-devol als antiinflammatoire middelen of als regelaars van de im-20 muunrespons bij warmbloedige dieren. De kombinatie van antiinflammatoire werking en immuunregelende werking is van bijzondere waarde bij de behandeling van aandoeningen als rheumatoidearthri-tis en andere ziekten, die gepaard gaan met immuundeficientie en vergezeld gaan van ontsteking. Aldus verlichten verbindingen van 25 de onderhavige uitvinding de pijn en zwelling, die met dergelijke aandoeningen gepaard gaan, terwijl ze ook de immuunrespons van de patient regelen, en daardoor de daar aan ten grondslag liggende immuunstoring opheffen door handhaving van de immuunkompetentie. aldus heeft de uitvinding betrekking op een werkwijze voor het 30 inhibiteren van inflammatoire reakties of het regelen van de immuunrespons bij een warmbloedig dier door toediening aan de patient van een pyridine van de onderhavige uitvinding of een farmaceutisch aanvaardbaar zuuradditiezout daarvan, in een hoeveel-heid, die ter inhibitie van de inflammatoire reakties of ter rege-35 ling van de immuunrespons voldoende is. Volgens deze werkwijze 8105744 m 10 worden de verbindingen van de onderhavige .uitvinding'.na behoefte aan de .patient toegediend langs de gebruikelijke routes, bijvoor-beeld oraal·.parenteraah in doses van 0,25 tot 100 mg/kg lichaams-gewicht van de .patient per dag, bij voorkeur :van. 0,25 tot 50 mg/kg 5 lichaamsgewicht per dag, welke ineens of yerdeeld over de dag worden toegediend. De optimum dosis voor de individuele patient wordt echter bepaald door de persoon, die voor de behandeling verant-woordelijk is, waarbij in het algemeen aanvankelijk kleinere doses worden toegediend en later langzainerhand grotere doses worden ge-10 bruikt teneinde de geschiktste dosis vast te stellen. Dit wisselt met de bepaalde verbinding, die men geb'ruikt en met de te behan- delen patient.

De verbindingen kunnen worden gebruikt in farma-ceutische preparaten, die de verbinding, of een farmaceutisch 15 aanvaardbaar zout daarvan, bevatten in kombinatie met een farmaceutisch aanvaardbare drager of verdunningsmiddel. Geschikte farmaceutisch aanvaardbare dragers zijn inert vaste vulmiddelen of verdunningsmiddelen en steriele waterige of organische oplossingen. De aktieve verbinding is in dergelijke farmaceutische preparaten 20 aanwezig in hoeveelheden, die voor het leveren van de gewenste dosis hoeveelheid binnen het boven besehreven trajekt voldoende zijn. Aldus kunnen de verbindingen voor orale toediening worden gekombineerd met een geschikte vaste of vloeibare drager of een verdunningsmiddel onder vorming van kapsules, tabletten, poeders, 25 siropen, oplossingen, suspensies, enzovoort. De farmaceutische preparaten kunnen desgewenst extra bestanddelen bevatten als aro-„ ma gevende stoffen, zoete stoffen, excipienten, enzovoort. Voor parenterale toediening kunnen de verbindingen met steriele waterige of organische media worden gekombineerd onder vorming van in-30 jekteerbare oplossing of suspensies. Zo kan men bijvoorbeeld oplossingen in sesam- of pindaolie, waterige propyleenglycol, enzovoort gebruiken, alsmede oplossingen in water van farmaceutisch aanvaardbare zuuradditiezouten van de verbindingen. De op deze wijze bereide injekteerbare oplossingen worden intraverieus, intra-35 peritoneaal, subcutaan of intramusculair toegediend, waarbij intra- 8105744 ίϊ veneuze of intramusculaire toediening de voorkeur verdienen. Voor gelokaliseerde behandeling van ontsteking kuxmen de verbindingen ook plaatselijk worden toegediend in de vorm van zalven, cremes, pasta’s, enzovoort in overeenstemming met de gebruikelijke far-5 maceutische praktijk.

De volgende voorbeelden lichten de uitvinding toe, maar beperken haar niet.

Voorbeeld I

Methyl-2-(4-pikolyXthio)acetaat.

10 Men lost 2,16 g of 40 mmol natriummethanolaat onder roeren onder stikstof op in 24 ml methanol en koelt de oplossing in een ijsbad. Men voegt druppelsgewijs in 15 minuten 3,38 g of 20 mmol fijn verdeeld in 20 ml methanol gesuspendeerd 4-pikolyl-chloridehydrochloride toe. Daama voegt men in 5 minuten een op-15 lossing van 2,12 g of 20 mmol methyl-2-mercaptoacetaat in 4 ml methanol toe. Men laat het reaktiemengsel langzaam opwarmen en laat het 14 uur onder roeren onder stikstof bij kamertemperatuur staan. Men filtreert het met diatomeenaarde. Vaste stoffen worden verpulpt met nog 75 ml methanol. De methanolfiltraten worden ge-20 kombineerd en geconcentreerd onder verkrijging van het in de ti-tel genoemde produkt.

Eventueel kan men het in de titel genoemde produkt ook als het hydrochloride bereiden en winnen volgens de werkwij-ze van het Britse octrooischrift 1.434.271.

• 25 . Voorts wordt 4-pikolylchloridehydrochloride of 4- pikolylbromidehydrobromide in de vrije base omgezet door het zout in ethanol basisch te maken en het daama met 1,05 ekwivalent natrium- of kaliumcyanide te laten reageren onder vorming van het overeenkomstige nitril. Het nitril wordt in ethanol gesolvoliseerd 30 met waterig zoutzuur onder vorming van 4-pikolylacetaat / cf.

Rising jet al., J.Am.Chem.Soc. 50, 1211 (1928)-_7. Het laatste wordt met Red-al in benzeen-tetrahydrofuran gereduceerd en gewonnen volgens een methode van voorbeelden IX en X onder verkrijging van 2-(4-pyridyl)ethanol. De alkohol wordt in het overeenkomstige 35 chloride omgezet door reaktie met thionylchloride in aan een te- 8105744 12 . rugvloeikoeler verwaEmd methyleenchloride / cf. Qilmanet al., Rec. trav. chim.. 5ί,93· (i932)_7. Het 2-(4-pyridyl)ethylchloridehydro-chloride, dat zich vormt, wordt door afdamping .gewonnen.

. Volgens bovenstaande werkwijze laat men 2-(4-5 pyridyl)ethylqhloride met methyl-2-mercaptoacetaat reageren onder verkrij ging van methyl-2-/ 2-(4-pyridyl)ethylthio_/acetaat.

. Voorbeeld II

Ethyl-2-(4-pikblylthio)acetaat.

Men verwarmde 120 ml absolute ethanol onder stik- 10 stof op tot 40°C. Men voegde portiesgewijze' 5,18 g of 0,225 mol metalliek natrium met zodanige snelheid toe, dat een .zachte terug-vloeiing in stand bleef. Ha t uur koelde men de resulterende hel-dere ethanolaatoplossing in een ijsbad af. Men vermengde 16,4 g of 0,10 mol 4-pikolylchloridehydrochloride met 60 ml ethanol en 15 13,2 g of 0,11 mol ethylmercaptoacetaat met 30 ml ethanol tot brij en bracht deze twee brijen in aparte toevoegtrechters. Nadat 10% van het organische chloride was toegevoegd, werden resterend chloride en de mercaptan druppelsgewijze tegelijkertijd toegevoegd. Het reaktiemengsel werd tot kamertemperatuur opgewarmd, 16 uur ge-20 roerd en gefiltreerd .over diatomeenaarde onder wassing met ethanol. De kombinatie van filtraat en wassing werd afgedampt tot 26 g olie. De olie werd gechromatografeerd over 500 g Silicagel onder eluering met chloroform en waarneming met dunne laag chromatografie. De schone frakties werden gekombineerd en afgedampt onder verkrijging 25 van de in de titel genoemde verbinding als 16,6 g olie. (9:1 chloroform:methanol) 0,75; ir (film) 3390, 2976, 1730, 1600, 1410, 1280, 1160, 1120, 1030, 813, 750 cm"1.

Voorbeeld III

''Natfium-2-(4-pik0lylthi0)acetaat.

30 Men loste 8,0 g of 0,038 mol in de titel van het vooraf gaande voorbeeld genoemde ester op in 77 ml ethanol. Men voegde 38 ml 1 M natriumhydroxyde toe en roerde het mengsel 48 uur bij kamertemperatuur. Het mengsel werd in:vacuum drooggedampt en het residu met verse ethanol afgedampt en onder hoog vacuum 35 afgezogen onder verkrijging van 6,8 g in de titel genoemde verbin- 8105744 13 ding met smeltpunt .158—1-60°C. R^ (90:5:5 chloroformrmethanol: azijnzuur) 0,25.

Men verkrijgt hetzelfde produkt door -een ekwivalent van de methylester te gebruiken in plaats van de ethylester. De 5 zure vorm, 2-(4-pikolyl)azijnzuur, wordt verkregen door hydrolyse van hetzij methyl-, hetzij ethylester volgens het Britse octrooi-schrift 1.434.271.

Voorbeeld IV

ffafcfium-2- (4-pikolylthio) propidiiaat.

10 5,1 g of 94 mmol Natriummethanolaat werd in 50 ml absolute ethanol opgelost en in een ijsbad gekoeld. Men voegde een brij van 5,0 g of 30,4 mmol 4-pikolylchloridehydrochloride in 45 ml ethanol toe en roerde het gekoelde reaktiemengsel 10 mi-nuten. Tenslotte voegde men in een tijd van 10 minuten 3,23 g 15 of 30,4 mmol 2-mercaptopropionzuur, opgelost in 5 ml ethanol toe. · Men liet het mengsel tot kamertemperatuur opwarmen en roerde het een nacht (16 uur). Het reaktiemengsel werd ter verwijdering van zouten door filterhulp gefiltreerd, behandeld met kool en gecon-centreerd onder verkrijging van ruw natrium-2-(4-pikolylthio)-20 propionaat (7 g olie, die men rechtstreeks bij de volgende trap gebruikte).

Voorbeeld V

Natriumfenyl(4-pikolylthio)acetaat.

Men loste 6,8 g of 0,124 mol natriummethanolaat op 25 in 150 ml ethanol en koelde tot 0°C af. Men voegde in een tijd van 5 minuten bij de koude methanolaatoplossing een oplossing van 7,0 g of 0,042 mol alpha-mercaptofenylazijnzuur in 50 ml ethanol. Na 5 minuten voegde men vervolgens in 5 minuten een brij toe van 6,83 g of 0,042 mol 4-pikolylchloridehydrochloride in 50 30 ml ethanol. Men verwijderde het reaktiemengsel uit het ijsbad en liet het 60 uur onder roeren staan. Het reaktiemengsel werd daar-na gefiltreerd en ingedampt tot natriumfenyl(4-pikolylthio)acetaat. Opbrengst 11,8 g wasachtige vaste stof. IR: 3,0, 6,1, 6,25, 7,3, 13,6 ^u. Het produkt werd rechtstreeks bij de volgende trap ge-35 bruikt.

8105744 -14 •Men:laat volgens de werkwijze:van vaorbeelden IV en . V- 4-pikolylchloridehydrochloride met mercaptoazijiizuur reageren tot natrium-2-(4-pikolylthio)acetaat.

• Voorbedld VI

5 ' Ethyl-2-:(4-pikolylthi0)pfopioiiaat.

7 g Ruw .natrium-2-(4-pikolylthio).propionaat werd opgelost in 100 ml'absolute ethanol en er werd 5 ml’ 3A moleculaire zeven toegevoegd. Men liet droge chloorwaterstof borrelen in het reaktiemengsel, dat 75 minuten aan een terugvloeikoeler werd ver-10 warmd onder voortgezette verzadigihg met chloorwaterstof gedurende de eerste vijftien minuten. Men koelde het mengsel tot kamertem-peratuur af en liet het een nacht onder roeren staan. (ongeveer 16 uur). Het mengsel werd door diatomeenaarde gefiltreerd en tot een half vast mengsel geconcentreerd. De veresteringstrap werd op 15 dit mengsel herhaald met dien verstande, dat de verzadiging met chloorwaterstof 1 uur onder verwarming aan een terugvloeikoeler werd voortgezet en het verwarmen aan de terugvloeikoeler gedurende de nacht werd voortgezet. Het reaktiemengsel werd tot kamertem-peratuur afgekoeld, door diatomeenaarde gefiltreerd en afgedampt 20 tot een olie. De olie werd met chloroform geextraheerd onder ach-terlating van filtreerbare zouten en de chloroform werd afgestript onder verkrijging van ethyl-2-(4-pikolylthio)propionaat als was-achtige vaste stof. IR (KBr) 3,0, 3,5,5,75, 6,15, 6,30, 6,70, 8,6, 12,25 jUi massaspectrum: m/e berekend: 225, gevonden: 225, 152, 25 124, 102, 92, .45.

Onder gebruikmaking van dezelfde werkwijze met etha-nolische chloorwaterstof wordt natrium-2-(4-pikolylthio)acetaat omgezet in ethyl-2-(4-pikolylthio)acetaat.

Voorbeeld VII

30 Methyl-2-feny1-2-(4-pikolylthio)acetaat.

Men loste natrium-2-feny1-2-(4-pikolylthio)acetaat op in methanol en voegde droge chloorwaterstof zodanig langzaam toe, dat zachte terugvloeiing gedurende 1 uur in stand bleef. Na afkoeling en 16 uur roeren werd het reaktiemengsel gefiltreerd en 35 geconcentreerd tot het in de titel genoemde produkt.. Opbrengst 8105744 15 11,6 g olie. Massaspectrum: berekend: in/e 273, gevonden: 273, 214, 150, 136, 124, 121, 105, 77, 65.

De overeenkomstige ethyl- err. propyl ester worden vol-gens dezelfde werkwijze bereid onder vervanging .van. methanol door 5 respectievelijk ethanol en propanol.

Volgeris dezelfde werkwijze wordt natrium-2-(4-piko-lylthio)acetaat omgezet in methyl-2-(4-pikolylthio)acetaat.

' Voorbeeld VIII

4-(2,2-diethoxyethylthiomethyl)pyridine♦ 10 Onder een stikstofatmosfeer lost men onder roeren 0,60 g of 11 mmol natriuminethano laat op in 15 ml ethanol en koelt in een ijsbad. Men voegt in 5 minuten 1,4 g of 11 mmol 4-pikolyl-mercaptan in 3 ml absolute ethanol toe en roert het mengsel 15 minuten. Vervolgens voegt men in 15 minuten 2,4 g of 11 mmol broom-15 aceetaldehydediethylacetaal in 15 ml absolute ethanol toe. Men warmt het reaktiemengsel tot kamertemperatuur op en roert 16 uur. Het reaktiemengsel wordt gefiltreerd en het filtraat afgedampt onder verkrijging van het in de titel genoemde produkt, dat des-gewenst verder kan worden gezuiverd door chromatografie over si-20 licagel.

Het in de titel genoemde acetaal wordt ook bereid uit ethanol en 2-(4-pikolylthio)aceetaldehyde van het volgende voorbeeld onder gebruikmaking van de werkwijze van voorbeeld VI.

Volgens dezelfde werkwijze laat men het ethyleen-25 glycolacetaal van broomaceetaldehyde met 4-pikolylmercaptan rea- geren tot het overeenkomstige ethyleenglycol acetaal van 2-(4-pikolylthio)aeeetaldehyde.

Voorbeeld IX

2-(4-pikolylthio)-aeeetaldehyde.

30 Volgens de werkwijze van het voorafgaande voorbeeld laat men chlooraceetaldehyde met 4-pikolylmercaptan reageren tot het in de titel genoemde produkt.

Eventueel wordt hetzelfde in de titel genoemde produkt verkregen door hydrolyse van een van beide acetalen van het 35 voorafgaande voorbeeld onder gebruikmaking van de werkwijze van 8105744 •x 16 . voorbeeld III.

. Voorbeeld X

' MetIiyl-2-/ 2- (4-pyridyl)e£hylthi0:y7acetaat.

Men lost onder een stikstofatmosfeer 1,62 g of 5 0,03 mol .natriummethanolaat onder roeren op in 36 ,ml methanol en koelt de oplossing .in een ijsbad. Men voegt in 5 minuten 3,18 g of 0,03 mol methyl-2-mercaptoacetaat in 6 ml methanol toe. Ten-slotte voegt men. in .15 ininut'en 3,22 g of 0,03 mol 4-vinylpyridine in 20 ml absolute ethanol toe. Men laat het reaktiemengsel tot 10 kamertemperatuur opwarmen en roert 23 uur. Het reaktiemengsel wordt in vacuum geconcentreerd tot droog. Het residu wordt lang-zaam onder roeren toegevoegd aan een mengsel van water en chloroform. De qhloroformfase wordt afgescheiden en de .waterfase verder met chloroform geextraheerd. De gecombineerde chloroformfasen 15 worden met verzadigd natriumchloride geextraheerd, op watervrij natriumsulfaat gedroogd en afgestript tot het in de titel genoem-de produkt.

Voorbeeld XI ' Capsules.

20 Men bereidt een vast farmaceutisch preparaat door vermenging .van de volgende bestanddelen in de onder gegeven ge-wichtshoeveelheden: methyl-2-(4-pikolylthio)acetaathydrochloride 12 calciumcarbonaat 20 25 polyethyleenglycol, gemiddeld molecuulge- wicht 4000 72

Het aldus bereide droge vaste mengsel wordt daama grondig tot een gelijkmatig poeder geroerd. Zachte elastisch gelatine capsules, die dit farmaceutische preparaat bevatten, worden 30 daama vervaardigd in potenties (ekwivalent met gewichtsvrije base) van 12,5 mg, 25 mg en 50 mg door veiling met een geschikte hoeveelheid van het gelijkmatige poeder.

Voor capsules van hogere potentie, bijvoorbeeld 100 mg capsules, wordt een kleinere hoeveelheid inerte bestand-35 delen gebruikt bij de bereiding van het gelijkmatige in te kapse- 8105744 17 len poeder.

Ter vervaardiging van harde gevulde gelatinecapsules stelt men de hoeveelheid inerte bestanddelen zodanig in, dat men gelatinecapsules van standaardmaat gemakkelijk kan afvullen met 5 de gewenste geneesmiddelpotentie.

Men bereidt ook andere mengsels ter inkapseling uit lactose en maiszetmeel in een verhouding 33:1 tot 10:1 met des-gewenst een kleine hoeveelheid talk, in combinatie met voldoende aktief bestanddeel voor het verkrijgen van afgevulde capsules 10 van bovengenoemde potentie.

Voorbeeld XII Tabletten.

Men bereidt een droog vast farmaceutisch preparaat door vermenging van de volgende bestanddelen in de onder aange-15 geven gewichtshoeveelheden: methyl-2-(4-pikolyIthio)acetaathydrochloride 30 natriumcitraat 37,5 alginezuur 15 polyvinylpyrrolidon 15 20 magnesiums tearaat 7,5

Na grondige vermenging ponst men tabletten uit het resulterende mengsel, welke tabletten 25 of 50 mg (als gewichts-ekwivalent met de vrije base) aktief bestanddeel bevatten. Op soort gelijke wijze met desgewenst variatie in de hoeveelheid in-25 erte bestanddelen vervaardigt men ook tabletten van 5 mg, 10 mg, 75 mg en 100 mg potentie.

Een eventuele andere tabletbasis wordt bereid door vermenging van de volgende bestanddelen: methyl-2-(4-pikolylthio)acetaathydrochloride 30 30 saccharose, U.S.P. 55 tapioca zetmeel 15 magnesiumstearaat 6,5

Uit dit mengsel worden vervolgens tabletten van de gewenste potentie geponst.

35 8105744 ψ 18

Ereparaat' I.

’4-Pik0lylisothiourohiumchldridehydf0chl0ride.

Men suspendeerde 11,42 g of 0,15 mol thioureum onder roeren in 45 ml .absolute ethanol. Men verwarmde de suspensie onder 5 stikstof aan een terugvloeikoeler en voegde in 15 minuten een suspensie van 25,37 g of 0,15 mol fijnverdeeld 4-pik0lylchloridehydro-chloride in 100 ml absolute ethanol toe, waarbij men voor zover nodig de uitwendige verwarming verwijderde teneinde overmatig hevige terugvloeiing te vermijden. Na nog 6 uur verwarmenaan.de terug-10 vloeikoeler werd het reaktiemengsel tot kamertemperatuur afgekoeld en gefiltreerd en met koude ethanol gewassen onder verkrijging van 35,8 g 4-pikolylisothiouroniumchloridehydrochloride met smeltpunt 226-227°C onder ontleding. IR (KBr): 3,40, 6,05, 6,14, 6,27, 6,71 en 12,34 ^u.

15 Analyse: berekend voor CyH^N^S^HCl: C 35,01 H 4,62 N 17,50 gevonden C 35,04 H 4,61 N 17,55.

Men gebruikt dezelfde werkwijze voor het het omzet-ten van 2-(4-pyridyl)ethylchloride in 2-(4-pyridyl)ethylisothio-20 uroniumchloride.

Preparaat II.

4-Pikolylmercaptan.

Men loste 32,4 g of 0,135 mol 4-pikolylisothiouro-niumchloridehydrochloride onder roeren op in 45 ml water en voegde 25 druppelsgewijze in 10 minuten een warme oplossing van 11,02 g of 0,27 mol natriumhydroxyde in 18 ml water toe, waarbij zich olie-druppels begonnen te vormen. Men1 cle zacht exotherme reaktie 30 minuten onder roeren staan, in welke tijd de pH door de toevoeging van natrium van 7 tot 8 steeg. Daarna werd de pH tot 6 verlaagd door 30 langzame toevoeging van 6 N zoutzuur. Het olieachtige produkt werd geextraheerd in ether (3 porties van 125 ml). De gecombineerde etherextracten werden op watervrij natriumsul'faat gedroogd en afge-dampt tot een vaste stoffen bevattende olie met een krachtige mer-captangeur (11,18 g). Gefraktioneerde destillatie leverde 4,47 g 35 gezuiverde 4-pikolylmercaptan op met kookpunt 109-104°C/15 mm. Dunne 8105744 19 laag chromatografie op silicagel: Rf 0,65-0,7 bij eluering met ^HCl^/lCH^OH). Deze mercaptan vormt bij .aanraking met lucht gemak-kelijk een vast disulfide.

Men gebruikt dezelfde werkwijze voor het omzetten 5 van 2-(4-pyridyl)-ethylisothiouroniumchloride in 2-(4-pyridyl)-ethylmercap tan.

Preparaat III.

4-Pikolylacetaat.

Men loste 250 g 4-pikoline-N-oxyde op in een mengsel 10 van 2,5 1 azijnzuur en 425 ml azijnzuuranhydride. Men warmde de oplossing langzaam op en verwarmde haar 22 uur aan een terugvloei-koeler. Daama stripte men azijnzuur en azijnzuuranhydride uit bet reaktiemengsel af en destilleerde de resterende olie in vacuum on-der gebruikmaking van een fraktioneerkolom van 15 cm. Het materiaal, 15 dat kookte bij een vattemperatuur van 100°C en een opzettemperatuur van 82°C bij 1,2 mm werd gecombineerd onder verkrijging van 305,9 g van een 87:13 mengsel van 4-pikolylacetaat en 3-acetoxy-4-piko-line.

Preparaat IV.

20 4-Pikolylbromidehydrobromide.

300 g 87% Zuiver 4-pikolylacetaat werd gecombineerd met 3,0 1 48% broomwaterstofzuur. Er trad een spontane exotherme reaktie op, waarbij de temperatuur van 26 tot 42°C steeg. Het mengsel werd opgewarmd en 1 uur aan een terugvloeikoeler verwarmd (vat-25 temperatuur 124°C). Het reaktiemengsel werd daama in vacuum gecon-centreerd tot een gomachtige vaste stof, die in 1500 ml absolute alkohol werd opgelost. Bij afkoeling kristalliseerde er 379 g ruw hydrobromide uit, dat men affiltreerde. Door herkristallisatie van 50 g ruwe stof uit absolute alkohol verkreeg men 33,1 g gezuiverd 30 -pikolylbromidehydrobromide met smeltpunt 187,5~189°C. 1 8105744

Claims (17)

1. 2. Verbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat n 1 is.
2. 3. Verbinding volgens conclusie 2 met het kenmerk, dat W ongesubstitueerde methyleen is.
3. 4. Verbinding volgens conclusie 3 met het kenmerk, 15 dat zij de formule 4 heeft.
4. 5. Verbinding volgens conlcusie 3 met het kenmerk, dat zij de formule 5 heeft.
5. 6. Verbinding volgens conclusie 3 met het kenmerk, dat zij de formule 6 heeft.
6. 7. Werkwijze voor het behandelen van rheumatoidear- thritis bij een zoogdier met het kenmerk, dat men aan dit zoogdier een rheumatoidearthritis bestrijdende hoeveelheid toedient van een verbinding met de formule 1 of 2, waarin n 1 of 2 is, 25. al of niet met een methyl- of fenylgroep gesubsti- tueerde methyleen voorstelt, Z hydroxyl, (C^-C^)alkoxy of waterstof voorstelt en R en R,j of elk dezelfde (C^-C^)alkylgroep voorstellen, of samen ethyleen of propyleen voorstellen, of 30 een farmaceutisch aanvaardbaar zuuradditiezout daar- van, of een farmaceutisch aanvaardbaar kationogeen zout daar-van, wanneer Z hydroxyl voorstelt. 8105744
7. 8. Werkwijze volgens conclusie 7 met -het kenmerk, dat Z waterstof voorstelt.
8. 9. Werkwijze volgens conclusie 7 met het kenmerk, dat n 1 is.
9. 10. Werkwijze volgens conclusie 9 met het kenmerk, dat W niet gesubstitueerde methyleen voorstelt.
10. 11. Werkwijze volgens conclusie 10 met het kenmerk, dat de verbinding de formule 7 heeft.
11. 12. Werkwijze volgens conclusie 11 met het kenmerk, 10 dat Z hydroxyl voorstelt.
12. 13. Werkwijze volgens conclusie 11 met het kenmerk, dat Z methoxy voorstelt.
13. 14. Werkwijze volgens conclusie 11 met het kenmerk, dat Z ethoxy voorstelt.
14. 15. Werkwijze volgens conclusie 10 met het kenmerk, dat de verbinding de formule 8 heeft.
15. 16. Werkwijze volgens conclusie 15, met het kenmerk, dat de verbinding de formule 5 heeft.
16. 17. Werkwijze volgens conclusie 15 met het kenmerk, 20 dat de verbinding de formule 6 heeft.
17. 18. Farmaceutiseh preparaat met antiinflammatoire en immunoregulatoire werking met het kenmerk, dat het als aktieve stof een verbinding bevat met de formule 1 of 2 als gedefinieerd in conclusie 7, of een farmaceutiseh aanvaardbaar zuur additiezout 25 daarvan, of een farmaceutiseh aanvaardbaar kationogeen zout daarvan, wanneer Z hydroxyl voorstelt. 1 8105744