MXPA97009340A - Inhibidores de proteasa de serina derivados de imidazo (1,5a) piridina - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a un inhibidor de proteasa de serina derivado de imidazo[1,5a]piridina que comprende una unidad que tiene la fórmula general (I), en donde R1 es hidrógeno, alquilo menor o un grupo acilo;R2 es hidrógeno o alquilo menor;R3 y R4 son independientemente hidrógeno, alquilo menor o juntos forman=CH-NR5R6 siendo R5 y R6 alquilos menores. Los compuestos son inhibidores de proteasa de serina y pueden usarse para el tratamiento y profilaxis de trombosis y enfermedades asociadas a la trombina.

Description

INHIBIDORES DE PROTEASA DE SERINA DERIVADOS DE IMIDAZO[1 ,5a]PIRIDINA La invención se refiere a inhibidores de proteasa de serina de imidazo[1 ,5a]piridina, un proceso para la preparación de los mismos, una composición farmacéutica que contiene los mismos, así como también el uso de estos inhibidores de proteasa de serina de imidazo[1 ,5a]piridina para terapia médica, y en particular para tratar y evitar la trombosis u otras enfermedades asociadas a la trombina. Los derivados de imidazo[1 ,5a]piridina son conocidos, por ejemplo, el 3-amino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroximidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona es descrito por Klein et al. (Liebigs Ann. Chem. 1623-1637, 1983). No se divulga ninguna actividad farmacológica para este compuesto. Los derivados 8-substituidos de 3,8-diamino-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona de la presente invención son compuestos novedosos, los cuales son inhibidores reversibles selectivos de proteasas de serina que requieren un residuo de aminoácido básico en la posición Pi de sus substratos. La invención se relaciona con inhibidores de proteasa de serina derivados de ¡midazo[1 ,5a]piridina comprendiendo una unidad que tiene la fórmula general I en donde Ri es hidrógeno, alquilo menor o un grupo acilo; R2 es hidrógeno o alquilo menor; R3 y R4 son independientemente hidrógeno, alquilo menor o juntos forman =CH-NRsR6, siendo R5 y R6 alquilo menor; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En la definición de los compuestos de la fórmula I, el término alquilo menor significa un grupo alquilo ramificado o sin ramificar, que tiene de preferencia de 1 -6 átomos de carbono, como hexilo, isobutilo, propilo, isopropilo, etilo y el más preferido, metilo. El término grupo acilo significa un grupo 1 -oxoalquilo derivado de ácido carboxílico teniendo de 1 a 6 átomos de carbono, como hexanoilo, tert-butanoilo, propionilo, acetilo y formilo. El grupo acilo preferido es el grupo acetilo. Las proteasas de serina son una clase de enzimas proteolíticas que catalizan la hidrólisis de ligaduras de péptido específico en substratos de proteína. Schechter y Berger (Biochem . Biophys. Res. Commun. 27^ 157-162, 1967) han propuesto una nomenclatura ahora frecuentemente usada para la identificación de residuos de aminoácidos en los substratos de las proteasas de serina: Substrato: _= ligadura hendible .. Pn... P4 - P3 - P2 - Pi _ Pt' - Pi' - P2' - P3' . . P4' . . Enzima: ..Sn - S4 - S3 - S2 - S? _ Si' - Si' - S2' - S3'...S '..

Los residuos de aminoácidos de los subsitios del substrato en la terminación N de la ligadura Pi -P hendible se designan P1 , P2 , etc. y como P?', P2' etc. en la terminación C. Estos subsitios del substrato corresponden a los posibles subsitios (Si , S2 , etc.) en la enzima con la cual las interacciones de ligadura tienen lugar. Los compuestos de la pre senté invención son inhibidores de las proteasas de serina que requieren un residuo de aminoácido básico, como arginina o lisina, en la posic ion Pi de sus substratos. Ejemplos representativos de estas protea isas de serina son tripsina, plasmina, activador de plasminógeno de uricinasa, calicreinas, calpaina, acrosina y trombina. La presente invención proporciona análogos de substratos de péptido, los cuales abarcan residuos de la región P de los substratos de solo las proteasas pertinentes, en los cuales el residuo de terminal P se reemplaza con la unidad de 3,8-qiamino-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona de la fórmula I. Es un objetivo principal de la presente invención, proporcionar inhibidores selectivos de ciertas proteasas de serina que forman parte de la cascada de coagulación sanguínea. En esta cascada enzimática, la forma activada de un factor de coagulación cataliza la activación del siguiente factor, conduciendo finalmente a la rápida generación de trombina de proteasa de serina de arginina dirigida (el residuo de substrato P? es una arginina) (factor lia) de su protrombina precursora (factor II). El último proceso es catalizado por el factor Xa, el cual también es una proteasa de serina de arginina dirigida. La trombina, la última enzima en el sistema de coagulación, romperá el fibrinógeno de proteína de plasma soluble para generar monómeros de fibrina, los cuales se encuentran entrelazados para formar un gel insoluble. Además de estar involucrada en la regulación de su propia producción y actividad, la trombina es un agonista de plaquetas potente, induciendo en consecuencia la agregación de plaquetas. Las plaquetas activadas forman junto con la matriz de polímero de fibrina y los eritrocitos atrapados el coágulo de sangre o trombo. La trombina juega un papel clave en el proceso de hemostasis, el proceso fisiológico que detiene el sangrado de un vaso sanguíneo lastimado. También juega un papel en la trombosis, la cual es la condición patológica por medio de la cual la actividad inapropiada del mecanismo hemostático resulta en la formación de trombina intravascular, lo que a su vez conduce a la interrupción del flujo sanguíneo. La trombosis puede ocurrir tanto en arterias como en venas. A la fecha dos tipos de anticoagulantes, es decir, antagonistas de vitamina K y heparinas, están en uso clínico para prevenir la trombosis. Ambas actúan indirectamente al reducir la actividad de la trombina. La heparina actúa principalmente acelerando la inactivación de la trombina mediante sus inhibidores fisiológicos como antitrombina lll y cofactor de heparina II. La heparina solo actúan cuando se proporciona parenteralmente. Los antagonistas de vitamina K, de los cuales la warfarina derivada de cumarina es un ejemplo bien conocido, son oralmente activos y actúan al inhibir la producción en la forma funcional de un número de factores de coagulación dependientes de vitamina K (II , Vil, IX y X). Debido a su mecanismo de acción estos últimos agentes tienen un lento ataque e inversión de acción. Los principales problemas clínicos asociados con el uso de heparina y cumarinas son sangrado y su pequeño e impredecible margen de seguridad terapéutica. Por lo tanto, existe una necesidad de desarrollar inhibidores de coagulación mejorados, los cuales, por ejemplo, inhiban la trombina o factor Xa directamente. Se encontró que los compuestos que comprenden la unidad 3,8-diamino-8a-hidroximidazo[1 ,5-a]piridina-1 (5H)-ona de la invención, son inhibidores de proteasas de serine, que requieren un residuo de aminoácido básico (es decir, arginina, lisina) en la posición Pi de sus substratos. Estos compuestos son presumiblemente capaces de interactuar en el sitio de especificidad primaria Si de la proteasa. La selectividad en su modo de acción se determina adicionalmente por el substituyente en el grupo 8-amino de la unidad 3,8-diamino-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5-a]piridina-1 (5H)-ona. El substituyente puede ser cualquier grupo que sea capaz de interactuar con los subsitios S„...S2, y de preferencia un grupo peptidilo que es homólogo a los subsitios Pn... P2 del substrato de la enzima pertinente o puede ser cualquier derivado o simulado de los sitios de substrato P„... P2 que liga los subsitios Sn ...S2 putativos del sitio activo de la enzima. Una modalidad preferida de la presente invención se refiere a inhibidores de proteasas de serina, como trombina y factor Xa, que están involucrados en el proceso de trombosis y hemostasis. Los inhibidores de acuerdo a la modalidad preferida comprenden la unidad que tiene la fórmula I y un substituyente en el grupo 8-amino que es un homólogo, un derivado o un simulado de los sitios P3-P2 del substrato de la proteasa de serina pertinente. Una variedad de tales derivados P3-P2 ya se conocen en la técnica, por ejemplo como se describió por Hauptmann y Marckwardt (Seminars in Thrombosis and Hemostasis, 18, 200-217, 1992), Jakubowski et al. (Annual Reports in Medicinal Chemistry, 27, 99-108, 1992) y Schuman et al. (J. Med. Chem. 36, 314-319, 1993), los cuales se incorporan en la presente por referencia. Los compuestos preferidos de acuerdo a la invención son los derivados 3,8-diamino-8a-hidroximidazo[1 ,5a]piridin-1 [5H]-ona de la fórmula I, en donde Ri, R2, R3 y R4 son hidrógeno. En una modalidad preferida, la presente invención se refiere a inhibidores de proteasa de serina que tienen la fórmula II, * X-_-»pP*3.x-_-pP2?f en donde R1 f R2, R3 y R son hidrógeno; X es hidrógeno, R7, R -0-C(O)-. R7-C(O)-, R -S02- -(CHR8)COOR8, o un grupo protector de N, en donde R7 es (1 -12C)alquilo o (2-12C)alquenilo, cuyos grupos pueden ser opcionalmente substituidos con (3-8C)cic!oalquilo, (1 ,6C)alcoxi, OH o halógeno, o R7 es (3.8C)cicloalquilo, (4-10C)heterociclilo, (4-14C)ari!o, (7-15C)aralquilo y (8-16C)aralquenilo, cuyos grupos pueden ser opcionalmente substituidos con (1 -6C)alquilo, (3-8C)cicloalquilo, (1 -6C)alcoxi, OH o halógeno, y los grupos arilo de los cuales pueden opcionalmente comprender un heteroátomo; cada grupo R8 es independientemente hidrógeno o tiene el mismo significado que R7; m es 1 , 2 o 3; P3 es una ligadura, un aminoácido de la fórmula -N H-CH[(CH2)PC(O)OH]-C(O)- o un éster derivado del mismo siendo p 0, 1 , 2 o 3, -N(bencil)-CH2-CO-, D-Tiq, Atc, 3-Piq, 1-Piq o un aminoácido D que tiene una cadena lateral hidrofóbica; P2 es Pro o Pee, sustituido opcionalmente con (1-4C)alquilo, halógeno, hidroxi u oxo, o un aminoácido seleccionado de Gly, Val, lie, 2,4-MePro, 3,3-Dmp, lie, Thz, Hyp, 2,2-Dmt. 5, 5-Dmt, Lac, Apy, Acsc, 1 -Nal y 2-Nal, o P2 es un aminoácido de la fórmula -N[3-8C)cicloalquil]-CH2-C(O)-, el anillo del cual puede substituirse opcionalmente con (1 -6C)alquilo, halógeno, hidroxi u oxo; o P2 es una ligadura en cuyo caso P3 también es una ligadura y X es R7-S02-; o P2 y P3 representan juntos una estructura que asemeja un dipéptido que tiene la fórmula lll que en las posiciones indicadas con un asterisco puede fusionarse con un anillo de benceno y en donde R6 es hidrógeno o alquilo menor. El grupo protector de N como se definió en la definición de porción X es un grupo protector de N como se usa comúnmente en la química de péptidos para la protección de un grupo a-amino, como el grupo tert-butiloxicarbonilo(Boc), el grupo benciloxicarbonilo (Z), el grupo 9-fluorenil-metiloxicarbonilo (Fmoc) o el grupo ftaloilo (Phth). Los grupos protectores de N pueden encontrarse adicionalmente en T.W. Green y P.G.M. Wuts: Protective Groups in Organic Synthesis, Segunda Edición (Wiley, NY, 1991) y en The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3 E. Gross and J. Meienhofer, Eds., (Academic Press, Nueva York, 1981). El término (1 -12C)alquilo se refiere a un grupo alquilo ramificado o no ramificado que tiene 1 a 12 átomos de carbono, tales como metilo, etilo, t-butilo, isopentilo, heptilo, dodecilo y similares. Los grupos alquilo preferidos son grupos (1 -6C)alquilo, que tienen 1-6 átomos de carbono. Los más preferidos son los grupos (1 -4C)alquilo, que tienen 1 -4 átomos de carbono, tales como metilo, etilo, isopropilo, n-butilo y t-butilo. Un grupo (2-12C)alquenilo es un grupo de hibrocarburo no saturado no ramificado o ramificado que tiene de 2 a 12 átomos de carbono. Los ejemplos son etenilo, propenilo, alilo, y similares. El término (1 -6C)alcoxi se refiere a un grupo alcoxi que tiene de 1 -6 átomos de carbono, la porción de alquilo del cual tiene el significado como se definió previamente. El término (3-8C)cicloalquilo se refiere a un grupo cicloalquilo que tiene de 3-8 átomos de carbono, siendo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo o ciclo-octilo. El ciclopentilo y ciclohexilo son los grupos cicloalquilo preferidos. El término (4-10C)heterciclilo significa un grupo de hidrocarburo ciclo no substituido o substituido, que tiene de 4 a 10 átomos de carbono, conteniendo también uno o dos heteroátomos seleccionados de N, O y S, como 3-metil-1 ,2,3,4-tetrahidro-8-quinolinilo. Los substituyentes en el grupo heterocíclico pueden seleccionarse de los grupos tales como (1-6C)alcoxi, hidroxi, halógeno, nitro, amino, dialquilamino o alquilo menor. El término dialquilamino significa un grupo dialquilamino en donde el alquilo tiene el significado de alquilo menor como se definió previamente. Un grupo (4-14C)arilo es una porción aromática de 4 a 14 átomos de carbono. El grupo arilo puede contener además uno o dos heteroátomos y puede ser substituido, por ejemplo con (1-6C)alquilo, (3-8C)cicloalquilo, (1-6C)alcoxi, hidroxi, nitro, amino, dialquilamino o halógeno. Ejemplos de grupos arilo son fenilo, dimetoxifenilo, naftilo, 4-bifenilo, imidazolilo, tienilo, bencetienilo, (iso)quinolilo, 3-metil-8-quinolinilo, indanilo, indolilo y similares. Los grupos arilo preferidos son fenilo y naftililo. Los grupos (7-15C)aralquilo y (8-16C)aralquenilo son grupos alquilo y alquenilo respectivamente, substituidos por uno o más grupos arilo, siendo el número total de átomos de carbono 7 a 15 y 8 a 16, respectivamente. El término halógeno se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo. El término derivado de éster significa cualquier derivado de éster apropiado, de preferencia (1 -4C)alquil-ésteres, tales como metil- etil- o t-butil-ésteres. El término cadena lateral hidrofóbica significa un (1-12C)alquilo, opcionalmente substituido con un grupo (3-8C)cicloalquilo o grupo aromático (el cual puede contener un heteroátomo, por ejemplo nitrógeno), tal como ciciohexilo, ciclo-octilo, fenilo, piridinilo, naftilo, tetrahidronaftilo, y similares, cuya cadena lateral hidrofóbica puede substituirse opcionalmente con substituyentes tales como halógeno, nitro, trifluorometilo, alquilo menor (por ejemplo metilo o etilo), (1 -6C)alcoxi (por ejemplo metoxi), feniloxi, benciloxi, y similares. En los compuestos de acuerdo con la fórmula lll, el significado de alquilo menor en la definición de R es como se definió previamente. Los inhibidores de proteasa de serina de la fórmula II son particularmente preferidos, en donde R R2, R3 y R son hidrógeno; X es hidrógeno, alquilo menor, un grupo acilo, R7-SO2-, en donde R7 es (4-10C)heterociclilo, (6-14C)arilo, cuyos grupos arilo pueden contener un heteroátomo, o X es un grupo protector de N; P3 es una ligadura en cuyo caso X es R7-SO2-, o P3 se selecciona de D-Phe, D-Nle, D-Dpa, D-MePhe, D-1-Tiq, D-Cyk, Dphg, D-Tic, D-Atc, D-2-Nal, D-2-Pal, D-Chg y D-2-Nag; P2 se selecciona de Pro, Pee, Gly, Val, lie, 2,4-MePro, 3,3-Dmp, He, Thz, Hyp, 2,2-Dmt, 5,5-Dmt, Lac, Apy y Ac5c; o P2 es una ligadura en cuyo caso P3 también es una ligadura y X es R7-SO2-; P2 y P3 representan juntos la estructura que asemeja un dipéptido que tiene la fórmula lll, fusionándose las posiciones indicadas con un asterisco con benceno. Los residuos de aminoácido aromático en la definición de P3 en la fórmula II en estos inhibidores de proteasa de serina preferidos, por ejemplo, Phe, Cpa, Tiq, Phg, Nal y Nag, pueden substituirse en el(los) anillo(s) aromático(s) pertinente(s) por (1-6C)alquilo, (1-6C)alcoxi, halógeno, hidroxi o nitro. Los derivados de fenilalanina (Phe) o fenilglicina (Phg) tienen un cloro o un substituyente nitro en las posiciones para del grupo fenilo.

En una modalidad más preferida de la invención, el inhibidor de proteasa de serina está en la forma del acetato. Los compuestos de acuerdo a la fórmula general II pueden prepararse mediante condensación de X-P3-P2-OH con el derivado 3,8-diamino-8a-hidroximidazo-[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona que tiene la fórmula IV en la cual R, , R2, R3, R4, P2, P3 y X tienen los significados como se definió previamente. En aquellos casos donde X-P3-P2-OH representa un grupo dipeptidilo, o R7-SO2-P2-OH, o contiene la estructura que asemeja un dipéptido de la fórmula lll, la condensación puede realizarse mediante activación de la función de ácido carboxílico en ia estructura protegida adecuadamente de otra manera, por los métodos comúnmente usados para la condensación de fragmentos de péptido tales como el método de azida, el método de. anhídrido mezclado, el método de éster activado o, de preferencia, por el método de carbodiimida, especialmente con la adición de compuestos supresores de racemización y catalíticos como N-hidroxi-succinimida y N-hidroxi-benzotriazol. Una revisión de estos métodos de condensación , los cuales son comunes en la química de péptidos, está * dada en The Peptides, Analysis. Svnthesis, Biology. Vol 3, ibid., el cual se incluye por referencia. En aquellos casos donde X representa R7-SO2 y P2 y P3 son una ligadura, la condensación puede realizarse usando un derivado de sulfonilhaluro, tal como R7-SO2CI, en donde R7 tiene el significado como se definió previamente. Los compuestos de la fórmula IV pueden prepararse a partir de derivados de ácido 3-amino-6-guanidino-2-oxohexanoico de la fórmula general V en donde R2 tiene el significado como se definió por la fórmula I, en donde Río y Rn representa un grupo protector de N que es común en la química de péptidos y R12 representa un alquilo menor, como se definió previamente, mediante la remoción de grupos protectores de guanidino Río, después de lo cual, el compuesto VI obtenido en donde R2 y Rn tienen los significados como se definió por la fórmula V, es opcionalmente alquilado, acilado o convertido al derivado de 8-[(amino)metillen]-amino del compuesto VI por los métodos conocidos en la técnica, después de lo cual se retira Rn. Los derivados de ácido 3-amino-6-guanidino-2-oxohexanoico de la fórmula general V pueden prepararse introduciendo grupos protectores en el grupo a-amino y en el grupo guanidino del aminoácido arginina o de una arginina 2-alquil substituida, y una conversión subsecuente de la función de ácido carboxílico en una función de éster a-ceto por los métodos conocidos en la técnica. Los compuestos de la invención pueden usarse en la manufactura de medicamentos para el tratamiento y profilaxis de trombina mediada y enfermedades asociadas a la trombina. Tales enfermedades incluyen embolia pulmonar, reoclusión arterial durante o después de angioplastia o trombólisis, trombosis de vena profunda, restenosis siguiendo una lesión arterial o procedimientos cardiológicos invasivos, embolia o trombosis venosa postoperatoria, arteroesclerosis crónica o aguda, apoplejía, infarto al miocardio, cáncer y metástasis, y enfermedades neurodegenerativas. Los compuestos de la invención también pueden usarse como anticoagulantes in vitro. Los nuevos compuestos de la fórmula I o II, que pueden ocurrir en la forma de una base libre, pueden aislarse de la mezcla de reacción en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable. Las sales farmacéuticamente aceptables también pueden obtenerse tratando la base libre de la fórmula I o II con un ácido orgánico, tal como ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido maleico, ácido malónico, ácido metanesulfónico, ácido fumárico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico y ácido ascórbico. Los compuestos de esta invención pueden poseer uno o más átomos de carbono quiral, y por lo tanto pueden obtenerse como un enantiómero puro, o como una mezcla de enantiómeros, o como una mezcla que contiene diaestereoisómeros. Los métodos para obtener los enantiómeros puros son bien conocidos en la técnica, por ejemplo, la cristalización de sales, las cuales son obtenidas a partir de ácidos ópticamente activos y la mezcla racémica, o la cromatografía usando columnas quirales. Los compuestos de la invención pueden administrarse enteramente o parenteralmente, y para humanos preferiblemente en una dosis diaria de 0,001 -10 mg por kg de peso corporal. Mezclados con auxiliares farmacéuticamente adecuados, por ejemplo, como se describe en la referencia estándar, Gennaro et al. , Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed., Mack Publishing Company, 1990, ver especialmente la parte 8: Pharmaceutical Preparations and their Manufacture), los compuestos pueden ser comprimidos en unidades de dosis sólidas, tal como pildoras, tabletas, o procesarse en cápsulas o supositorios. Por medio de líquidos farmacéuticamente adecuados, los compuestos también pueden aplicarse como una preparación de inyección en la forma de una solución, suspensión, emulsión, o como un atomizador, por ejemplo un atomizador nasal. Para hacer unidades de dosis, por ejemplo tabletas, se contempla el uso de aditivos convencionales tales como rellenos, colorantes, aglutinantes poliméricos y similares. En general, puede usarse cualquier aditivo farmacéuticamente aceptable que no interfiera con la función de los compuestos activos. Los portadores adecuados con los cuales se pueden administrar las composiciones incluyen lactosa, almidón, derivados de celulosa y similares, o mezclas de los mismos, usados en cantidades adecuadas. La invención se ilustra adicionalmente mediante los siguientes ejemplos. Las siguientes abreviaturas de los aminoácidos han sido usadas a través de esta especificación y en las reivindicaciones: AÍC = ácido 2-aminoindan-2-carboxílico AcsC = ácido aminociclopentan-2-carboxílico Arp = aminopirrolidona Arg = arginina Atc = ácido 2-aminotetralin-2-carboxílico Cha = ciclohexilalanina Chg = ciclohexilglicina Cyk = ciclooctilalanina 3,3-Dmp = 3,3-dimetilprolina 2,2-Dmt = ácido 2,2-dimetiltiazolidin-4-carboxílico 5,5-Dmt = ácido 5,5-dimetiltiazolidin-4-carboxílico Dpa = 3, 3-difenilalanina Hyp = 4-hidroxiprolina lie = ácido (S)-indolin-2-carboxílico Lac = 3-amino-2-oxo- 1 -peperidina ('d-lactama') MePhe = a-metilfenilalanina 2-Nag= 2-naftilglicina 1-Nal = 1-naftilalanina 2-Nal = 2-naftilalanina Nle = norleucina 2-Pal = 2-piridilalanina Pee = ácido pipecólico Phg = fenilglicina 1-Piq = 1-carboxiperhidroisoquinolina 3-Piq = 3-carboxiperhidroisoquinolina Pro = prolina Thz = ácido tizolidin-4-carboxílico Tic = ácido 1 ,2,3, 4-tetrahidroisoquinolin-3-carboxílico 1 -Tic = 1 -carboxi-1 ,2,3,4-tetrahidroisoquinolina Otras abreviaturas usadas son: Ac = acetilo Pmc = 2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonilo Todas las secuencias de péptido mencionadas en la solicitud están escritas de acuerdo a la convención generalmente aceptadas, en donde el aminoácido de terminal N está a la izquierda y el aminoácido de terminal C está a la derecha. Si no se declara la configuración del aminoácido, todos los aminoácidos, tanto los aminoácidos que ocurren naturalmente y los "no proteicos", referidos en esta solicitud están en la forma L. 1 Se realizó una cromatografía de capa fina ascendente (TLC) usando placas de sílice precubiertas (Merck, F25 ) en los siguientes sistemas de solvente: Sistema A: diclorometano-acetato de etilo = 9: 1 (v/v) Sistema B: n-butanol-piridina-ácido acético-agua = 10:1 : 1 :2 (v/v/v/v) Sistema C: acetato de etilo-piridina-ácido acético-agua = 63:20:6:11 (v/v/v/v) Sistema D: n-butanol-piridina-ácido acético-agua = 6: 1 : 1 :2 (v/v/v/v) Sistema E: tolueno-etanol = 8:2 (v/v) Sistema F: acetato de etilo-piridina-ácido acético-agua = 63: 10:3:5.5 (v/v/v/v) Sistema G: diclorometano-acetato de etilo = 95:5 (v/v) Sistema H: acetato de etilo-piridina-ácido acético-agua = 6:2:2: 1 (v/v/v/v) Ejemplo 1. (esquema I) 3,8-diamino-6.7.8,8a-tetrahidro-8a-hidroximidazof1 ,5alPiridin-1 (5H)-ona (6) A: N°\ Nd,N-tri-benciloxicarbonil-L-Arginina metil éster (Z-Arg(Z2)-OMe; 1).

Na,N8,N-tri-benciloxicarbonil-L-Arginina (40 g), preparada como se describe (Jetten et al. Tetrahedron Lett. 1991 , 32, 6025-6028), se disolvió en una mezcla de diclorometano (1080 ml) y metanol (120 ml).

Se añadió 2-(1 H-benzotriazol-1-il)-1 ,1 ,3,3-tetrametiluronio tetrafluoroborato (TBTU; 22.4 g) a la solución, en donde se añadió trietilamina a la solución hasta un pH aparente de 8. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, después de lo cual la solución se lavó sucesivamente con agua, una solución de bicarbonato de sodio y agua, se secó y evaporó para dar un residuo sólido, el cual se cristalizó de metanol. Rendimiento: 35 g. Rf0.60 (sistema G).

B: N ,Nd,N-tri-benciloxicarbonil-L-Arginal (Z-Arg(Z2)-H; 2) Una solución de hidruro de diisobutilaluminio en hexano (180 ml; 1 M) se añadió a gotas a -78°C a una solición agitada de Z-Arg(Z2)-OMe (90 g) en diclorometano seco (700 ml). La mezcla se agitó durante una hora a -78°C, después de lo cual una solución al 20% (v/v) de ácido clorhídrico concentrado en etanol se añadió hasta un pH 2. La mezcla se extrajo con diclorometano. Los extractos se lavaron con agua, una solución de bicarbonato de sodio y agua, se secó (sulfato de sodio) y evaporó para dar un producto crudo (25 g), el cual se procesó sin purificación adicional. Rf0.48 (sistema A) C: 2-acetoxi-3-(benciloxicarbonilamino)-6-(dibenciloxi-carbonil-guanidino)hexanenitrilo (3) Una solución de cianuro de sodio (28 g) y cloruro de trietilbencilamonio (35 g) en agua (700 ml) y anhídrido acético (14 ml) se añadieron simultáneamente con agitación a una solución preenfriada de Z-Arg(Z2)-H (30 g) en diclorometano (700 ml) La mezcla se agitó durante 30 minutos a 0-5°C. La capa orgánica se separó y subsecuentemente se lavó con agua y salmuera acuosa, se secó (sulfato de sodio) y evaporó para dar un residuo, el cual se sometió a cromatografía en sílice. La levigación con diclorometano/acetato de etilo (95:5, v/v) dió un porducto sólido (17 g). Rf0.76 (sistema A).

D: metiléster de ácido 3-(benciloxicarbonilamino)-6-(dibenciloxicarbonil guanidino)-2-hidroxihexanoico (4) Se disolvió 2-acetoxi-3-(benciloxicarbonilamino)-6-(dibenciloxi-carbonil-guanidino)hexanenitrilo (6.0 g) en una mezcla de dietiléter y metanol (3: 1 v/v; 140 ml). Se pasó gas de cloruro de hidrógeno a -78°C a través de la solución hasta que se obtuvo una solución 3 M. La mezcla se agitó durante 16 horas en 5°C, en donde la mezcla se extrajo con diclorometano. Los extractos combinados se lavaron con agua, una solución de bicarbonato de sodio y agua, se secaron (sulfato de sodio) y se evaporaron para dar una goma (6.1 g). Rf0.48 (sistema A).

E: metiléster de ácido 3-(benciloxicarbonilamino)-6-(dibenciloxicarbon?l guanidino)-2-oxo-hexanoico (5) El ácido crómico (1.3 ml de una solución 8N en ácido sulfúrico acuoso) se adicionó lentamente a una solución preenfriada de metiléster de ácido 3-(benciloxicarbonilamino)-6-(dibencil-oxicarbonil guanidino)-2-hidroxihexanoico (1.3 g) en acetona (130 ml). La mezcla se agitó durante 1 hora a 0°C y entonces se vació en agua helada. El precipitado se filtró, se lavó con agua y se secó a vacío para dar un sólido blanco (1.15 g). RfO.80 (sistema A).

F: 3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroximidazo [1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona (6) Se añadieron ácido clorhídrico (1.04 ml de una solución acuosa 1 M) y paladio en carbón activado (Pd/C 10%; 64 mg) a una solución de metiléster de ácido 3-(bencil-oxicarbonilamino)-6-(dibenciloxicarbonil guanidino)-2-oxo-hexanoico (644) en dimetilformamida (20 ml). Se pasó gas hidrógeno a través de la solución hasta completar la reacción según se supervisaba mediante cromatografía de capa fina. La mezcla de reacción se filtró para remover el catalizador. El filtrado se evaporó a vacío para dar un aceite (320 mg). Rf0.50 (sistema B).

Ejemplo 2. (esquema I) N8(D-fenilalanil-prolil)-3.8-diamino-6.7.8.8a-tetrahidro-8a-hidroximidazof1.5alpiridin-1 (5H)-ona (8) Se adicionaron sucesivamente 1-hidroxi-benzotriazol (233 mg) y diciclohexilcarbodiimida (261 mg) a una solución de Boc-D-Phe-Pro-OH (0.41 g) en dimetilformamida (10 ml), manteniendo la temperatura a 0-5 °C. La mezcla de reacción se agitó durante 15 minutos, después de lo cual se adicionó una solución de 3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroximidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona (192 mg) en dimetilformamida (10 ml), cuyo pH se había ajustado previamente a 7 mediante la adición de trietilamina. La solución se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente, después de lo cual se filtró la diciclohexilurea precipitada. El filtrado se evaporó a un pequeño volumen. Se añadió n-butano, en donde la solución se lavó con una solución de bicarbonato de sodio y agua, se secó (sulfato de sodio) y se evaporó para dar el compuesto protegido de Na-Boc 7 (0.89 g). Rf0.50 (sistema C). El producto crudo se disolvió a 0 °C en 90% de ácido trifluoroacético acuoso (15 ml), conteniendo también anisol (0.43 ml). La mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente y subsecuentemente se evaporó a vacío. El residuo se disolvió en tert-butanol-agua (1 : 1 v/v) y se adicionó Dowex-2 (X-8, forma de acetato), en porciones hasta que el pH de la solución se elevó a 5-6. La resina de intercambio de iones se filtró, después de lo cual el filtrado se liofilizó. El producto se sometió a cromatografía en sílice. La levigación con n-butanol-piridina-ácido acético-agua (8: 1 : 1 :2 v/v) dió el compuesto del título 8 (120 mg). Rf0.70 (sistema D). Los datos de espectro NMR están en acuerdo con la estructura que tiene la configuración 8S, 8aR.

Esquema I Ejemplo 3. N8(Na(metil)-D-fenilalanil-prolil)-3.8-diamino-6.7.8.8a-tetrahidro-8a-hidroximidiazof1.5alpiridin-1 (5H)-ona A: Z-N(Me)-D-Phe-OH Se adicionó carbobenzoxicloruro (6.4 mmoles) a una solución de H-N(Me)-D-Phe-OH (4.0 mmoles) e hidróxido de sodio (4.0 mmoles) en dioxano-agua (1 ; 1 , v/v). La solución se agitó durante 24 horas, mientras que se mantuvo el pH a 12 mediante la adición de hidróxido de sodio (solución 4N en agua). La mezcla de reacción se extrajo con dietiléter para remover el exceso de carbobenzoxicloruro. Se adicionó ácido clorhídrico acuoso a la solución hasta un pH 2. El producto precipitado se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se lavó con salmuera, se secó (sulfato de sodio) y evaporó a vacío para dar un jarabe (76%). Rf0.45 (sistema E).

B: Z-N(Me)-D-Phe-Pro-OMe Se disolvieron Z-N(Me)-D-Phe-OH (3 mmoles), H-Pro-OMe. HCI (3 mmoles) y N-hidroxibenzotriazol (6 mmoles) en dimetilformamida (20 ml). Se adicionó 4-etilmorfolina a la solución hasta un pH 6.5, después de los cual la solución se enfrió a 0 °C. Una solución de diciclohexilcarbodiimida (3.3 mmoles) en dimetilformamida (5 ml) se adicionó lentamente a la solución fría. La mezcla se agitó durante 1 hora a 0 °C y entonces durante 16 horas a temperatura ambiente. La diciclohexilurea precipitada se filtró y el filtrado se evaporó a vacío para dar un jarabe, que se disolvió en acetato de etilo. La solución se lavó subsecuentemente con una solución de bicarbonato de sodio, una solución de bisulfato de sodio y salmuera, se secó (sulfato de sodio) y evaporó en vacío para dar una espuma (96%). Rf0.47 (sistema E).

C: Z-N(Me)-D-Phe-Pro-OH Se adicionó hidróxido de sodio (6 mmoles; solución acuosa 4N) a una solución de Z-N(Me)-D-Phe-Pro-OMe (3 mmoles) en dioxano-agua (1 : 1 , v/v) mientras se agitaba. La solución se mantuvo a temperatura ambiente durante 16 horas. La solución se diluyó con agua y se extrajo con dietiléter. Se adicionó ácido clorhídrico a la solución acuosa hasta un pH 2. El producto precipitado se extrajo con acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato de sodio) y evaporaron para dar una espuma (0.94 g; 77%). Rf0.22 (sistema E) .

D: El compuesto del título se preparó acoplando 3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroximidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona y Z-N(Me)-D-Phe-Pro-OH usando el método de acoplamiento como se describe en el Ejemplo 2, seguido por la remoción del grupo protector Na-benciloxicarbonilo mediante deshidrogenación catalítica. Rf0.60 (sistema C).

Ejemplo 4 N8(D-difenilalanil-prol¡n-3.8-diamino-6.7.8.8a-tetrahidro-8a-hidroximidazof 1 ,5a] piridin- 1 (5H)-ona A: Z-D-Dpa-OH Una solución de N-(benciloxicarboniloxi)succinimida (Z-ONSu; 2.0 mmoles) en dioxano (15 ml) se adicionó lentamente mientras se agitaba a una solución de D-difenilalanina (H-D-Dpa-OH; 2.0 mmoles) en una solución acuosa al 10% (peso/volumen) de bicarbonato de sodio. La mezcla se agitó durante 2 días, después de lo cual la mezcla se lavó con dietiléter. La solución acuosa se acidificó a un pH 1-2 mediante la adición de ácido clorhídrico. El producto precipitado se extrajo con acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato de sodio) y evaporaron para dar un aceite (0.74 g; 100%). Rf0.77 (sistema E).

B: Z-D-Dpa-OtBu Se disolvieron Z-D-Dpa-OH (2.0 mmoles), H-Pro-OtBu.HCI (2.0 mmoles) y N-hidroxibenzotriazol (4 mmoles) en dimetilformamida (15 ml). Se añadió 4-etilmorfolina a la solución agitada hasta un pH de 6.5, después de lo cual la solución se enfrió a 0°C. Una solución de diciclohexilcarbodiimida (2.2 mmoles) e dimetilformamida (4 ml) se adicionó lentamente a la mezcla de reacción fría, la cual se agitó entonces durante 1 hora a 0 °C y 16 horas adicionales a temperatura ambiente. La diciclohexilurea precipitada se filtró y el filtrado se evaporó a vacío para dar un jarabe, el cual se disolvió en acetato de etilo. La solución se lavó subsecuentemente con una solución de bicarbonato de sodio, una solución de bisulfato de sodio y salmuera, se secó (sulfato de sodio) y evaporó a vacío para dar un aceite (0.88 g; 83%). Rf0.69 (sistema E).

C: Z-D-Dpa-Pro-OH Se disolvió Z-D-Dpa-Pro-OtBu (1 .67 mmoles) a 0°C en 90% de ácido trifluoroacético acuoso (15 ml), conteniendo también anisol (0.43 ml). La mezcla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente y subsecuentemente se evaporó a vacío. El residuo se trituró con dietiléter para dar un sólido (0.33 g; 42%). Rf0.53 (sistema E). FAB-MS: mm 472 D: El compuesto del título se preparó acoplando 3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroximidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona y Z-D-Dpa-Pro-OH usando el método de acoplamiento como se describió en el Ejemplo 2 , seguido por la remoción del grupo protector Na-benciloxicarbonil por deshidrogenación catalítica. Rf0.40 (sistema C).

Ejemplo 5. N8(H-D-Phe-llcV3.8-diamino-6,7.8.8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazoH ,5alpiridin-1 (5H)-ona A: Z-D-Phe-llc-OH Se adicionó 4-etilmorfolina (1 mmol) a una solución de ácido (S)-indolin-2-carboxílico (1 mmol ; 163 mg) y el N-carboxianhídrido de Z-D-Phe-OH (4 mmoles; 1 .3 g) en tetrahidrofurano seco (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, después de lo cual se evaporó a vacío el solvente. El producto crudo se purificó mediante distribución a contracorriente en el sistema de solvente diclorometano-metanol-tolueno-agua (5:8:5:3; v/v/v/v) para dar Z-D-Phe-llc-OH en rendimiento cuantitativo. Rf0.60 (sistema F). FAB-MS: mm 444.

B: N8(Z-Phe-llc)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona Se adicionó 4-etilmorfolina (0.67 mmoles) a una solución de dimetilformamida (12 ml) de Z-D-Phe-llc-OH (0.67 mmoles; 300 mg) y 3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroximidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona (0.71 mmoles; 320 mg). Se añadieron sucesivamente N-hidroxibenzotriazol (1 .1 mmoles; 150 mg) y diciclohexilcarbodiimida (0.71 mmoles; 147 mg) a la solución, mientras que se mantuvo la temperatura a 0-2 °C. La mezcla se agitó a esta temperatura durante 1 hora, y 16 horas adicionales a temperatura ambiente. Se filtró la diciclohexilurea, después de lo cual el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se disolvió en n-butanol. La solución se lavó con una solución de bicarbonato de sodio y salmuera, se secó (sulfato de sodio) y evaporó a vacío para dar una espuma (322 mg; 70%). Rf0.37 (sistema C).

C: Se adicionó paladio en carbón activado (Pd/C 10%; 30 mg) a una solución del producto del Ejemplo 5B (0.43 mmoles; 300 mg) en metanol (10 ml). Se pasó gas hidrógeno a través de la solución, mientras se agitaba, durante 16 horas. El catalizador se removió mediante filtración, después de lo cual el filtrado se evaporó a vacío. El residuo se sometió a cromatografía en óxido de aluminio (Lichroprep AloxT; 25-30 µm). La levigación con acetato de etilo, piridina-ácido acético-agua (63:20:6:11 ; v/v/v/v) dió el compuesto del título (135 mg; 45%) Rf0.35 (sistema C).

Ejemplo 6. En una manera similar como se describió en los Ejemplos 1-5 se prepararon: Nß(H-D-MePhe-Pro)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(H-D-1-Tiq-Pro)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(H-D-Nle-Pro)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(Pmc-Gly)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidrox¡-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(Phth-Gly)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(H-D-Atc-Pro)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidrox¡-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(Ac-D-Phe-Pro)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(H-D-2-Nag-Pro)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(H-D-Phe-3,3-Dmp)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(H-D-Phe-2,4-MePro)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(H-D-Phe-2,2-Dmt)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(H-D-Phe-5,5-Dmt)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(H-D-Phe-Thz)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona N8(H-D-Phe-Hyp)-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona Ejemplo 7. N8.2-(S)Í4(R)-(1.3-dihidro-1.3-dioxo-2H-isoindol-2-il)-1.3.4.5-tetrahidro-3-oxo-2H-2-benzazepin-2-ini-oxo-propin-3,8-diamino-6,7,8.8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazop .5alpiridin-1 (5H)-ona A: metil éster de N-ftaloil-D-penilalanil-L-alanina Una solución de hidrocloruro de L-alanina metil éster (1.5 g, 8.3 mmol) en diclorometano (20 ml) se adicionó trietilamina (1.15 ml, 8.3 mmol), seguido por N-ftaloil-D-fenilanina (2.44 g, 8.3 mmol) y N-hidroxibenzotriazol (1.27 g, 9.1 mmol). La mezcla se agitó hasta que se formó una solución amarillo claro. La solución se enfrió a 0°C, y se adicionó 1 -[3-(dimetilamino)-propil-3-etil] carbodiimida (1.74 g, 9.1 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 64 h, la solución se diluyó con diclorometano (50 ml). Se añadió ácido clorhídrico acuoso (1 N; 50 ml) y la suspensión resultante se filtró. Las capas se separaron y la fase orgánica se lavó con ácido clorhídrico acuoso (1 N; 15 ml), bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml), agua (50 ml) y salmuera (50 ml), sucesivamente. El extracto orgánico se secó (sulfato de sodio) y evaporó para dar 2.50 g (80%) de material cristalino. Una muestra analítica se cristalizó de acetato de etilo/heptano, p.f. 1 18-120 °C.

B: N-ftaloil-D-fenilalanil-L-alanina A una solución de metil estera de N-ftaloil-D-fenilalanil-L-alanina (1.46 g, 3.8 mmol) en acetona (20 ml) se adicionó agua (11 ml) y Hcl concentrado (6 ml). La mezcla se reflujo durante 3.5 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, 0.80 g (2.1 mmol) del compuesto del título se aislaron mediante filtración. El licor madre se concentró para remover la acetona, y la solución acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 x 20 ml). Las capas orgánicas se extrajeron con bicarbonato de sodio acuoso saturado (3 x 25 ml). Los extractos acuosos combinados se lavaron con acetato de etilo (25 ml), y se ajustó a un pH 1 con ácido clorhídrico concentrado. Se añadió acetato de etilo (50 ml), se separaron las capas, y el acuoso se extrajo con acetato de etilo (2 x 25 ml). Los extractos de acetato de etilo combinado se lavaron con salmuera (2 x 50 ml), secaron (sulfato de sodio) y evaporaron para dar 0.50 g del ácido del título. El rendimiento total 1.30 g (3.6 mmol, 92%). Cristales de metanol, p.f. 242-242 °C.

C: 3-[2(R)-(1 ,3-dihidro-1 ,3-dioxo-2H-isoindol-2-il)-4(S)-metil-l-oxo-3-fenilpropil]-5-oxoazolidinona A una solución de N-ftaloil-D-fenilalanil-L-alanina (0.50 g, 1.4 mmol) en diclorometano seco se adicionó, paraformaldehído en exceso (0.50 g) y mol. sieve 4 A (2.5 g). La suspensión se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Se adicionó ácido tríflico (120 µl, 1 .4 mmol) y se continuó la agitación durante 24 h. La solución se filtró, lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado (2 x 25 ml) y salmuera (25 ml). La fase orgánica se secó (sulfato de sodio) y evaporó hasta la sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna (sílice, acetato de etilo/heptano 1 :2) para dar 400 mg (1.1 mmol, 80%) del compuesto del título, Rf (acetato de etilo/heptano 2:1)0.45.

D: ácido 4(R)-(1-3-dihidro-1 ,3-diioxo-2H-isoindol-2-il)-a(S)-metil-1 , 3,4.5-tetrahidro-3-oxo-2H-2-benzazepin-2-acético La oxazolidninona (250 mg, 0.7 mmol), obtenida como se describió antes, se disolvió en diclorometano seco (1 ml) y se añadió ácido tríflico (1 ml). La mezcla se agitó vigorosamente durante 2 h. Después de la dilución de la mezcla de reacción con diclorometano (10 ml), se adicionó agua (15 ml) cautelosamente con agitación vigorosa continua. Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (25 ml), secaron (sulfato de sodio) y se evaporaron. El residuo se cristalizó de etanol/dietiléter para dar 150 mg (0.4 mmol, 60%) del compuesto del título, p.f. 209-210 °C E: N8[2-(S)[4(R)-(1 ,3-dihidro-1 ,3-dioxo-2Hisoindol-2-il)-1 ,3,4,5-tetrahidro-3-oxo-2H-2-benzazepin-2-il]1-oxo-propil]-3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroximidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona A una solución de 3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona.2HCI (90 mg, 57% puro, 0.19 mmol) en dimetilformamida seca (15 ml), se adicionó el ácido descrito bajo D (75 mg, 0.19 mmol). El pH se ajustó a 7.4 con 4-etilmorfolina, y se adicionó N-hidroxibenzotrazol (45 mg. 9.3 mmol). Después de enfriar a 0 °C, se adicionó diciclohexilcarbodiimida (42 mg, 0.2 mmol), y la ' solución resultante se agitó durante 3 h a 0 °C y 33 h adicionales a temperatura ambiente. La solución se evaporó parcialmente, y se añadieron una pocas gotas de agua. La solución se agitó durante 30 min., se filtró y evaporó hasta la sequedad. La purificación mediante cromatografía de columna (óxido de aluminio; levigación con acetato de etilo:piridina:ácido acético:agua = 6/2/2/1 , v/v/v/v) dió 75 mg del compuesto del título. Rf0.65 (sistema H) Ejemplo 8. 3-ff{dimet¡lamino)metilen1amino1-N8(2-naftilsulfonil)-8-amino-6,7,8.8a-tetrahidro-8a-hidrox¡-imidazop ,5alpiridin-1 (5H)-ona Se adicionó trietilamina a una solución 3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona (100 mg) en dimetilformamida (10 ml) hasta un pH aparente de 8. Se adicionaron sucesivamente 2-naftil-sulfonilcloruro (135.5 mg) y una cantidad equimolar de trietilamina a la solución mientras se agitaba. La mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente, después de lo cual se removieron los volátiles. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna (sílice, actetato de etilo-piridina-ácido acético-agua = 5:2:2: 1 ; v/v/v/v) para dar el compuesto del título (12.6 mg). Rf0.45 (sistema C).

Ejemplo 9. N8(2-naftilsulfon¡n-3.8-diamino-6.7.8.8a-tetrahidro-8a-hidroxi-¡midazof1.5a]piridin-1 (5H)-ona Se adicionó trietilamina a una solución de 3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona (257 mg) en dimetilformamida (10 ml) hasta un pH aparente de 8. Se adicionaron sucesivamente 2-naftil-sulfonilcloruro (227 mg) y una cantidad equimolar de trietilamina a la solución mientras se agitaba. La mezcla se agitó durante 16 horas a temperatura ambiente, después de lo cual se removieron los volátiles. El residuo se purificó mediante cromatografía de columna (sílice, acetato de etilo-piridina-ácido acético-agua = 5:2:2: 1 ; v/v/v/v) para dar el compuesto del título (26 mg). Rf0.30 (sistema C).

Ejemplo 10. N8(N a(2-naftilsulfonil)Qlicin-3.8-diamino-6.7.8.8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazof 1 ,5alpiridin-1 (5H)-ona Se disolvieron Na(2-naftilsulfonil)glicina (2-Nas-Gly-OH; 1.0 mmol) -preparada mediante condensación de 2-naftilsulfonilcloruro y metilglicinato, seguido de saponificación del metiléster en hidróxido de sodio acuoso -, 3,8-diamino-6,7,8,8a-tetrahidro-8a-hidroxi-imidazo[1 ,5a]piridin-1 (5H)-ona.2HCI (1.0 mmol) y N-hidroxibenzotrizol (2.0 mmoles) en dimetilformamida (15 ml). El pH de la solución se ajustó a 6.5 mediante la adición de 4-etilmorfolina, en donde la solución se enfrió a 0 °C y se adicionó diciclohexilcarbodiimida (1.1 mmoles). La mezcla se agitó durante 1 hora a 0°C y 17 horas adicionales a temperatura ambiente. La diciclohexilurea precipitada se filtró y el filtrado se evaporó para dejar un residuo, el cual se disolvió en butanol. La solución orgánica se lavó con una solución de bicarbonato de sodio al 5% (peso/volumen) y con salmuera, en donde el butanol se removió a vacío. El producto crudo se purificó subsecuentemente mediante cromatografía en óxido de aluminio (Alox T; 25-40 µm) para dar el compuesto del título (70 mg). Rf0.40 (sistema H).

Claims (8)

Reivindicaciones

1. Un inhibidor de proteasa de serina derivado de imidazo[1 ,5a]piridina comprendiendo una unidad que tiene la fórmula general I en donde Ri es hidrógeno, alquilo menor o un grupo aciío; R2 es hidrógeno o alquilo menor; R3 y R4 son hidrógeno independientes, alquilo menor o forman juntos =CH-NR5 Rß, siendo Rs y R6 alquilos menores; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

2. El inhibidor de proteasa de serina de la reivindicación 1 , en donde R1 ; R2, R3 y R4 son hidrógeno.

3. El inhibidor de proteasa de serina de la reivindicación 2, que tiene la fórmula II en donde Ri, R2, R3 y R son hidrógeno; X es hidrógeno, R7, R7-O-C(O)-, R7-SO2-, -(CHRß)mCOORß, o un grupo protector de N, en donde R7 es (1-12C)alquilo o (2-12C)alquenilo, cuyos grupos pueden ser opcionalmente substituidos con (3-87C)cicloalquilo, (1-6C)alcoxi, OH o halógeno, o R7 es (3-8C)cicloalquilo, (4-10C)heterociclilo, (4-14C)ariloo, (7-15C)aralquilo y (8-16C)aralquenilo, cuyos grupos pueden ser opcionalmente substituidos con (1 -6C)alquilo, (3-8C)cicloalquilo, (1-6C)alcoxi, OH o halógeno y los grupos arilo de los cuales pueden comprender opcionalmente un heteroátomo; cada grupo R8 es independientemente hidrógeno o tiene el mismo significado que R7; m es 1 , 2 o 3; P3 es una ligadura, un aminoácido de la fórmula -NH-CH[(CH2)PC(O)OH]-C(O)- o un éster derivado del mismo y siendo p 0, 1 , 2 o 3, -N(bencil)-CH2-CO-, D-Tiq, Atc, 3-Piq, 1-Piq o un aminoácido D que tiene una cadena lateral hidrofóbica; P2 es Pro o Pee, substituidas opcionalmente con (1-4C)alquilo, halógeno, hidroxi u oxo, o un aminoácido seleccionado de Gly, Val, He, 2,4-MePro, 3,3-Dmp, He, Thz, Hyp, 2,2-Dmt, 5,5-Dmt, Lac, Apy, Ac5c, 1-Nal y 2-Nal, o P2 es un aminoácido de la fórmula -N[(3-8C)cicloalquil]-CH -C(O)-, el anillo del cual puede substituirse opcionalmente con (1-6C)alquilo, halógeno, hidroxi u oxo; o P2 es una ligadura en cuyo caso P3 también es una ligadura y X es R7-SO2-; o P2 y P3 juntos representan una estructura que asemeja un dipéptido que tiene la fórmula lll que en las posiciones indicadas con un asterisco puede fusionarse con un anillo de benceno y en donde R9 es hidrógeno o alquilo menor.

4. El inhibidor de la proteasa de serina de la reivindicación 3, en donde X es hidrógeno, alquilo menor, un grupo acilo, R7-SO2-, en donde R es (44-10C)heterociclilo, (6-14C)ap!o, cuyos grupos arilo pueden contener un heteroátomo, o X es un grupo protector de N; P3 es una ligadura en cuyo caso X es R7-SO2-, o P3 se selecciona de D- Phe, D-Nle, D-Dpa, D-MePhe, D-1 -Tiq, D-Cyk, D-Phg, D-Tic, D-Atc, D-2- Nal, D-2-Pal. D-Chg y D-2-Nag; P2 se selecciona de Pro, Pee, Gly, Val, He, 2,4-MePro, 3,3-Dmp, He, Thz, Hyp, 2,2-Dmt, 5, 5-Dmt, Lac, Apy y Ac5c o P2 es una ligadura en cuyo caso P3 también es una ligadura y X es R7-SO2-; o P2 y P3 juntos representan la estructura que asemeja un dipéptido que tiene la fórmula lll , fusionándose las posiciones indicadas con un asterisco con benceno.

5. El inhibidor de proteasa de serina de cualquiera de las reivindicaciones 1 -4 en donde el inhibidor está en la forma del acetato.

6 Una composición farmacéutica que comprende el inhibidor de proteasa de serina de cualquiera de las reivindicaciones 1 -5 en mezcla con auxiliares farmacéuticamente aceptables.

7. El inhibidor de proteasa de serina de cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para usarse en terapia.

8. Un uso del inhibidor de proteasa de serina de cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir trombosis u otras enfermedades asociadas a la trombina.