KR100312388B1 - 트리펩티드항혈전제 - Google Patents

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피터 지. 스트링거
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Abstract

본 발명은 (1R, 4aR, 8aR)-1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카보닐-(L)-프롤리닐-(L)-아르기닌 알데하이드 및 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물, 이들 화합물을 포함하는 약제 및 트롬빈억제제, 응고 억제제 및 혈전색전증 치료제로서의 이들을 이용하는 방법에 관한 것이다.

Description

[발명의 명칭]
트리펩티드 항혈전제
[발명의 상세한 설명]
본 발명은 사람 및 동물의 유용한 항응고제인 트롬빈 억제제에 관한 것이다. 좀더 구체적으로 본 발명은 높은 항혈전 활성을 가지는 디펩티드 L-프롤린-L-아르기닌 알데하이드의 유도체에 관한 것이다.
트롬빈 억제는 최근에 헤파린 및 코우마린의 투여에 의하여 달성되고 있다. 이들 약물이 작용하는 기작은 많이 연구되었다. 헤파린은 오직 비경구 투여만이 가능하며 그 수준이 신중히 모니터되어야 한다. 코우마린은 프로트롬빈의 형성을 차단하거나 억제하는 작용을 하며 최대 효과를 나타내는데 일정 시간을 요한다.
헤파린 및 코우마린은 효과적인 항응고제이지만 혈병 형성을 신속하게 방지하는 작용을 하고 존재하는 혈병을 용해하는 플라스민 작용을 간섭하지 않는 항혈전제가 요망되고 있다.
본 발명은 본 발명 화합물이 트롬빈 억제제로서 대응 4aS, 8aS 거울상 이성질체보다 훨씬 강력하다는 예상밖의 발견에 관한 것이다.
따라서, 본 발명의 주 목적은 훨씬 강력한 트롬빈 억제제이고 항응고제 및 혈전색전증 치료제로서 유용한 (IR, 4aR, 8aR)-1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐-(L)-프롤리닐-(L)-아르기닌 알데하이드 및 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물을 제공하는 것이다.
본 발명에 의해 제공되는 트롬빈 억제 화합물은 하기 일반식 (1)로 표시되는 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 비독성 염 및 용매화물이다:
상기 식에서,
A는이다.
일반식 (1)로 표시되는 펩티드는 유용한 항혈전제이며 조직 플라스미노겐 활성제 (tPA), 스트렙토키나제 또는 유로키나제 요법의 보조제로서 사용될 수 있다.
상기 화합물은 유럽 특허 출원 제0 479 489 A2호, 미국 특허 제5,250,660호 및 동 제5,252,566호에 개시된 기존의 커플링 방법으로 제조한다. 예컨대 Cbz-1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로-1-이소퀴놀린카르복실산은 L-프롤린의 에스테르와 커플링되어 Cbz-1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐-Pro 에스테르를 형성한다. 에스테르기가 제거되고 Cbz-1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐-Pro는 L-아르기닌의 락탐 형과 커플링하여 아미노 보호된 형태의 Cbz-1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐-Pro-Arg 락탐을 형성한다. Arg 락탐 고리는 환원에 의해 개환되고 아르기닌 아미노 및 퍼하이드로이소퀴놀린 질소 보호기가 제거되어 1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐-Pro-Arg 알데하이드를 형성한다. 이 펩티드는 아세테이트 및 황산염과 같은 적당한 염 형태로 전환된다.
1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로-1-이소퀴놀린카르복실산은 온도 약 30 내지 약 80℃, 압력 약 500 내지 약 1000 psi에서 5% Rh/Al203또는 기타 적당한 촉매 상에서 5N 염산 또는 기타 적당한 무기 강산의 존재하에 에탄올 또는 기타 적합한 알콜중에서 1-이소퀴놀린카르복실산의 수소화 반응에 의하여 용이하게 제조된다.
상기 공정은 (IR, 4aS, 8aS)-1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로-1-이소퀴놀린카르복실산 및 (IS, 4aR, 8aR)-1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로-1-이소퀴놀린카르복실산을 라세미혼합물로서 생성한다. 개별적인 거울상 이성질체는 통상의 방법으로 라세메이트의 분해에 의하여 분리될 수 있다. 이와 같은 방법은 광학 활성 산과의 염 형성 및 또한 키랄 칼럼 상에서 라세메이트의 고압 액체 크로마토그래피를 포함한다.
열역학적 이성질체 (IR, 4aR, 8aR)-1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로-1-이소퀴놀린카르복실산 및 (IS, 4aS, 8aS)-1,2,3,4,5,6,7,8-퍼하이드로-1-이소퀴놀린카르복실산은 상기 공정에 의하여 생산되는 라세미 혼합물의 에스테르를 제조하고, 이들 에스테르를 에탄올 중에서 나트륨 에톡사이드와 반응시킨 다음 생성된 열역학적 이성질체의 라세미 혼합물을 탈에스테르화시킴으로써 제조된다.
다른 한편으로는 산으로서 이성질체의 라세미 혼합물 및 열역학적 이성질체의 라세미 혼합물은 아미노 보호되고 카르복시 보호된 프롤린과 커플링되어 디펩티드를 형성한다. 그 다음 L-프롤린과의 커플링으로부터 생성된 부분입체 이성질체는 결정화에 의하여 분해된다.
그 다음 디펩티드의 프롤린 잔기의 카르복시 보호 에스테르기가 제거되고 (탈보호 또는 탈에스테르화), 디펩티드의 유리 산 형은 아르기닌의 락탐 형과 커플링된다. 커플링된 아르기닌(아미노-보호된) 락탐 생성물을 불활성 용매 또는 용매의 혼합물 중에서 하이드라이드 환원제, 바람직하게는 리튬 알루미늄 하이드라이드 또는 리튬 트리-t-부톡시알루미노하이드라이드와 반응시켜 락탐 고리를 환원시키고 아르기닌 알데하이드 형의 트리펩티드를 제공한다. 그 다음 보호기는 금속 촉매상의 수소화 반응과 같은 당업자들에게 공지된 기술에 의하여 제거된다.
또한 본 발명은 포유동물에서 혈병의 형성을 예방하는 방법 및 이 방법에 유용한 약제를 제공한다.
일반식 (1)에 도시된 바와 같이, 프롤린 및 아르기닌 알데하이드 잔기의 비대칭 중심은 L이다.
Pro-Arg-H의 D-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-데카하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐(퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐 또는 1-Piq) 및 D-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-데카하이드로이소퀴놀린-3-카르보닐(퍼하이드로이소퀴놀린-3-카르보닐 또는 3-Piq) 유도체를 포함하는 퍼하이드로 유도체는 하기에 도시하는 바와 같다:
퍼하이드로 유도체는 시스 또는 트랜스 입체이성질체로 존재할 수 있다. 예컨대, 시스로서 구분된 하기 입체이성질체 쌍이 D-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐-L-프롤릴-L-아르기닌 알데하이드에 대해 형성될 수 있다:
본 발명 펩티드의 약학적으로 허용가능한 염은 무기산과 카르복실산으로 형성된 산 부가염을 포함한다. 염을 형성하는 무기산의 예로는 염산 및 브롬화수소산과 같은 할로겐화수소산; 인산 및 황산 등을 들 수 있다. 카르복실산 염은 아세트산, 프로피온산, 말론산, 말레산, 시트르산, 숙신산, 말산, 벤조산, 푸마르산 등의 카르복실산과 같은 산으로 형성된다. 산 부가염은 기존 방법, 예컨대 화합물 1의 유리염기 형을 산으로 중화시킴으로써 제조한다. 바람직한 산 부가염은 황산염 하이드로클로라이드염이다.
상기한 바와 같이, 본 발명은 본 발명 화합물의 용매화물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 본 발명의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염은 물 또는 통상적인 유기 용매와 용매화물을 형성할 수 있다. 이와 같은 용매화물은 본 발명의 범위에 포함된다.
일반식 (1)로 표시되는 화합물은 펩티드 커플링의 기존 방법에 의하여 제조된다. 하나의 상기 방법에 따라서, A가 일반식 (1)에서 정의한 바와 동일한 의미를 가지고 질소 원자가 적합한 아미노 보호기로 보호된 산 A-COOH는 카르복시 보호된 프롤린과 커플링되어 디펩티드를 형성한다. 생성물의 프롤린 잔기의 카르복시 보호 에스테르기가 제거되고 디펩티드의 유리 산 형은 아르기닌의 락탐 형과 커플링되어 아르기닌을 형성한다. 상기 반응 순서는 하기 반응식으로 예시된다:
상기 반응식에서, P는 아미노 보호기를 나타낸다.
커플링된 Arg(P) 락탐 생성물 (c)는 불활성 용매 중에서 리튬 알루미늄 하이드라이드로 환원되어 락탐 고리가 절단되며 일반식: A(C=O)-Pro-Arg(P)-H [여기서 Arg(P)-H는 아미노 보호된 아르기닌 알데하이드를 나타냄]로 표시되는 아르기닌 알데하이드 형의 트리펩티드를 생성한다.
아르기닌의 락탐 형은 아미노 보호된 아르기닌 [Arg-OH]의 분자내 커플링에 의하여 얻어진다. 예컨대, 하기 일반식:
으로 표시되는 Boc-Arg(Cbz)OH는 먼저 예컨대 에틸 클로로포르메이트 및 이소부틸 클로로포르메이트와 같은 클로로포르메이트 에스테르로 활성 혼합 무수물과 같은 활성 에스테르 형으로 전환시킨다. 에스테르 형성은 N-메틸모르폴린과 같은 3급 아민의 존재하에서 수행된다. 트리에틸아민과 같은 강한 3급 아민 염기의 첨가에 의해 내부 아실화가 수행되어 하기와 같은 디아미노 보호된 아르기닌의 락탐 형이 생성된다:
상기 반응식에 도시된 바와 같이 Boc 보호기는 A(C=O)-Pro-OH와의 커플링에 사용하기 전에 트리플루오로아세트산으로 선택적으로 제거되어 필수적인 유리 아미 노기를 형성한다.
프롤린 에스테르와 ACOOH 화합물의 커플링은 아미노산의 아미노기를 먼저 보호함으로써 수행된다. 아미노기의 차단 또는 일시적 보호에 흔히 사용되는 기존의 아미노 보호기가 사용된다. 이와 같은 보호기의 예로는 알콕시, 알케닐옥시, 사이클로알콕시, 및 에톡시카르보닐, t-부틸옥시카르보닐 (Boc), 사이클로헥실옥시카르보닐, 아다만틸옥시카르보닐, 트리클로로에톡시카르보닐, 벤질옥시카르보닐 (Cbz), 디페닐메톡시카르보닐 등과 같은 아릴옥시카르보닐기를 들 수 있다. 커플링 반응 동안 프롤린의 카르복시기를 보호하는데 사용되는 에스테르기는 t-부틸, 벤질 p-니트로벤질, p-메톡시벤질, 디페닐메틸, 트리클로로에틸, 펜아실 또는 트리알킬실릴 에스테르와 같은 흔히 사용되며 쉽게 제거가능한 에스테르기 중의 하나일 수 있다. 커플링 반응을 수행함에 있어서, 아미노 보호기가 온전하게 남아 있는 조건에 의하여 제거가능한 프롤린에 대한 에스테르기를 사용한다. 따라서 아실화 산 ACOOH의 아미노 보호기는 아르기닌 락탐 화합물과의 후속 커플링 반응 동안 아미노기의 보호를 위해 적절히 남아 (c)를 형성한다.
퍼하이드로 비사이클로 기는 기존 공정에 의해 부분적으로 환원되거나 불포화된 산의 수소화 반응에 의하여 제조된다. 예컨대 1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-1-카르복실산은 에탄올 또는 아세트산과 같은 용매 중 산화백금 상에서 수소화시켜 퍼하이드로(데카하이드로) 이소퀴놀린-1-카르복실산을 형성한다. 그 다음 퍼하이드로산은 상기한 바와 같이 프롤린 에르테르의 아실화에 사용한다. 일반식 (1)로 표시되는 상기 퍼하이드로 유도체의 예로는 N-(D-데카하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐)-L-프롤릴-L-아르기닌 알데하이드 및 N-(D-데카하이드로이소퀴놀린-3-카르보닐)-L-프롤릴-L-아르기닌 등을 들 수 있다.
상기 기재한 수소화 반응은 상기한 시스 및 트랜스 입체이성질체 혼합물을 형성하는데, 시스 입체이성질체가 훨씬 더 많은 양으로 존재한다. 예컨대 이들 화합물로는 D-1-(4aS,8aS)-Piq-(L)-Pro-(L)-Arg-H, D-1-(4aR,8aR)-Piq-(L)-Pro-(L)-Arg-H, D-1-(4aS,8aR)-Piq-(L)-Pro-(L)-Arg-H, D-1-(4aR,8aS)-Piq-(L)-Pro-(L)-Arg-H, D-3-(4aS,8aS)-Piq-(L)-Pro-(L)-Arg-H, D-3-(4aR,8aR)-Piq-(L)-Pro-(L)-Arg-H, D-3-(4aS,8aR)-Piq-(L)-Pro-(L)-Arg-H, 및 D-3-(4aR,8aS)-Piq-(L)-Pro-(L)-Arg-H가 있다.
상기한 커플링 반응은 저온, 바람직하게는 약 -20 내지 약 15℃ 범위의 온도에서 수행된다. 커플링 반응은 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 테트라하이드로퓨란, 염화메틸렌, 클로로포름 등의 통상적인 용매와 같은 불활성 유기 용매중에서 수행된다. 일반적으로 커플링 반응에서 아실화 산의 활성 에스테르를 사용할 경우 무수 조건을 사용한다.
본 발명의 화합물은 산 부가염의 형태로 최상으로 단리된다. 상기한 바와 같은 산으로 형성된 일반식 (1)의 화합물의 염은 항혈전제의 투여 및 이들 약물 제제의 제조를 위한 약학적으로 허용가능한 염으로서 유용하다. 기타 산 부가염이 제조되어 펩티드의 단리 및 정제에 사용될 수 있다. 예컨대 메탄술폰산, n-부탄술폰산, p-톨루엔술폰산 및 나프탈렌 술폰산과 같은 술폰산으로 형성된 염도 사용될 수 있다.
일반식 (1)로 표시되는 화합물을 단리 및 정제함과 동시에 원하는 안정한 염 형태를 제조하는 바람직한 방법은 미국 특허 제5,250,660호에 기술되어 있으며 정제 C18역상 크로마토그래피 상에서의 정제를 포함한다. 수성상은 약 0.01 % 내지 약 0.05 % 농도의 황산 또는 염산을 포함하고, 아세토니트릴, THF, 메탄올 또는 기타 적합한 용매는 유기 성분으로서 작용한다. 산성 용출액의 pH는 약 4 내지 약 6으로 조정하고, 정확한 pH는 예를 들면 하이드록실 형의 바이오-래드(Bio-Rad) AG-1X8 수지와 같은 염기성 수지와 특정 펩티드의 함수이다. pH 조정후 트리펩티드 염, 예컨대 황산염 또는 염산염 용액을 동결건조시켜 정제된 염 건조 분말 형태를 형성한다. 상기 공정의 실시예에서, 에피머 D-Arg-H 황산염이 섞인 조 1-(1R, 4aR, 8aR)-Piq-L-Pro-L-Arg-H 황산염을 물에 용해하고 상기 용액을 비닥(Vydac) C18RPHPLC 5 cm×50 cm 칼럼에 로딩한다. 10시간 동안 2 내지 20 % B의 A 구배(A=0.01 % H2S04; B=아세토니트릴)를 사용한다. 다중 분획물을 모으고 분석 RP-HPLC로 측정되는 바와 같이 목적하는 생성물을 함유하는 분획물을 수거한다. 수거된 분획물의 pH를 하이드록실 사이클에서 바이오-래드 AG-1X8 수지로 약 4.0 내지 약 4.5로 조정한다. 여과후 상기 용액을 동결건조하여 순수한 1-(1R, 4aR, 8aR)-Piq-L-Pro-L-Arg-H 황산염을 얻는다.
본 발명의 화합물은 인체의 천연적인 혈병 용해능을 현저하게 간섭하지 않으면서 혈액 응고에 관련되는 기타 프로테이나아제 및 비효소 단백질에 비해 트롬빈을 선택적으로 억제하는 것으로 여겨진다 (본 화합물은 섬유소용해에 낮은 억제 효과를 가짐). 또한 이와 같은 선택성은 섬유소용해 및 혈전용해를 실질적으로 간섭하지 않으면서 혈전용해제로 사용될 수 있게 하는 것으로 여겨진다.
본 발명에 의하여 제공되는 화합물 (일반식 1)은 사람 및 동물(포유동물)에서 트롬빈의 작용을 선택적으로 억제한다. 트롬빈의 억제는 트롬빈의 아미다제 활성의 생체내 억제 작용에 의하여 밝혀진다. 하기 표 1에서는 시험 화합물 (억제제 및 트롬본) 사이의 상호작용에 대한 겉보기 평형 상수 (Kass)를 나타낸다. 표의 데이터를 트롬빈이 색소성 기질, N-벤조일-D-페닐알라닐-L-발릴-L-아르기닐-p-니트로아닐라이드를 가수분해하는 분석에서 얻었다.
상기 분석은 용매 [50 % 수성 메탄올(v:v)] 중 시험 화합물 25 ㎕ 및 인간 트롬빈 용액 (정제된 인간 트롬빈, Enzyme Research Laboratories, South Bend, Indiana, 8 NIH 단위/㎖) 25 ㎕로 완충 용액(0.03M 트리스, 0.15M NaCl, pH 7.4) 50 ㎕ 중에서 수행하였다. 그 다음 색소성 기질의 수용액 150 ㎕ (0.25 mg/㎖)를 첨가하고 405 nm에서 p-니트로아닐린의 방출에 대한 반응을 모니터함으로써 기질의 가수분해 속도를 측정하였다. 가수분해 속도에 대한 유리 트롬빈 농도를 그래프화하여 표준 곡선을 얻었다. 그 다음 시험 화합물로 관찰된 가수분해 속도를 표준 곡선을 이용하여 각 분석에서의 "유리 트롬빈" 수치로 전환시켰다. 결합된 트롬빈 (시험 화합물에 결합됨)은 각 분석에서 관찰된 유리 트롬빈의 양을 각 분석에서 관찰된 트롬빈의 공지된 초기 양에서 공제함으로써 계산하였다. 각 분석에서 유리 억제제의 양은 결합 트롬빈의 몰 수를 첨가한 억제제 (시험 화합물)의 몰 수에서 공제함으로써 계산하였다.
Kass 수치는 트롬빈과 시험 화합물 (1) 간의 반응에 대한 이론적 평형 상수이다.
Kass는 시험 화합물의 농도 범위에 대해 계산하며 1몰 당 리터 단위로 나타낸 평균 수치이다.
실질적으로 인간 트롬빈에 대해 상기한 공정에 따르고 하기하는 적당한 색소성 기질과 함께, 섬유소용해 시스템 세린 프로테아제를 사용하고 기타 인간 혈액 응고 시스템 세린 프로테아제를 사용하여, 응고 인자 세린 프로테아제 및 섬유소용해 세린 프로테아제에 대한 본 발명 화합물의 선택성 뿐만 아니라 이들의 인간 혈장응괴 섬유소용해에 대한 간섭이 실질적으로 결여됨을 평가하였다.
인간 인자 Xa는 효소 연구소 [Enzyme research Laboratories, South Bend, Indiana]로부터 입수하였다. 인자 Xa에 대한 색소성 기질: N-벤조일-Ile-Glu-Gly-Arg-p-니트로아닐라이드는 카비비트럼 [KabiVitrum, Stockholm, Sweden] 또는 미드웨스트 바이오텍 [Midwest Biotech, Fishers, Indiana]로부터 입수하였다. 소 트립신은 와싱톤 바이오케미칼스 [Worthington Biochemicals, Freehold, New Jersey]로부터 입수하였다. 색소성 기질, N-벤조일-Phe-Val-Arg-p-니트로아닐라이드, 즉 인간 트롬빈 및 트립신에 대한 기질은 시판되고 있는 반응물 또는 미드웨스트 바이오텍 [Midwest Biotech, Fishers, Indiana]로 부터 입수한 반응물로부터 펩티드 커플링의 공지 방법을 사용하여, 본 발명 화합물에 대해 상기한 바와 같은 공정에 따라 합성하였다.
인간 플라스민은 보에링거 만하임 [Boehringer Mannheim, Indianapolis, Indiana]으로부터 입수하였으며, nt-PA는 아메리칸 다이아그노스티카 [American Diagnostica, Greewich, Connecticut]로부터 단일쇄 활성 기준으로서 입수하였다. 플라스민 색소성 기질 H-D-Val-Leu-Lys-p-니트로아닐라이드 및 조직 플라스미노겐 활성자 (t-PA) 기질 H-D-Ile-Pro-Arg-p-니트로아닐라이드는 카비비트럼(KabiVitrum, Stockholm, Sweden)으로부터 입수하였다.
상기한 색소성 기질에서, 세글자 기호 Ile, Glu, Gly, Pro, Arg, Phe, Val, Leu 및 Lys는 각각 상응하는 아미노산기인 이소류신, 글루탐산, 글라이신, 프롤린, 아르기닌, 페닐알라닌, 발린, 류신 및 라이신을 나타내는데 사용된다.
하기 표 1은 표시된 화합물에서 얻어진 Kass 수치(x106)를 나타낸다.
본 발명의 화합물은 신체의 천연적인 혈병 용해능을 현저하게 간섭하지 않으면서 혈병 형성을 선택적으로 억제한다. 예를 들면 본 화합물은 섬유소용해에 낮은 억제 효과를 가진다.
하나의 일면에서 본 발명은 일반식 (1)로 표시되는 화합물의 혈병 억제 비독성 유효 투여량을 사람 또는 동물(포유동물)에 투여함을 포함하는, 상기 사람 및 동물에서 혈병의 형성을 억제하는 방법을 제공한다. 항응고 화합물은 경구 및 정맥내 주입 (iv), 근육내 주사 (im) 또는 피하 투여 (sc)와 같이 비경구적으로 투여된다.
혈병 억제 유효 투여량은 약 5 mg 내지 약 1000 mg 범위이다. 투여 요법은 다양하다. 에컨대 예방적 용도로는 1일 1회 투여하거나 또는 1일 수차례, 예먼대 3 회 또는 5회 투여할 수 있다. 심각한 치료 상태의 경우에는 약 0.1 mg/kg/h 내지 약 1.0 mg/kg/h의 속도로 정맥내 주입에 의해 투여된다.
경구 투여용으로는 약 0.1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg의 범위에서 본 발명의 화합물을 24시간 당 1회 이상으로 투여할 수 있다. 약 0.5 mg/kg 내지 약 5 mg/kg 범위의 투여량이 바람직하며 24시간 당 4회 이하로 투여된다. 본 발명의 화합물은 하기하는 바와 같은 정제, 캡슐 등과 같은 표준 제형으로 경구 투여할 수 있다.
또한, 본 발명의 방법은 혈병 용해제, 예컨대, 조직 플라스미노겐 활성자(tPa), 개질 tPA, 스트렙토키나제 또는 유로키나제 등과 함께 수행된다. 혈병이 형성되어 동맥 또는 정맥 혈관이 부분적 또는 전체적으로 차단될 경우 일반적으로 혈병 용해제가 사용된다. 본 발명의 화합물은 용해제와 함께 또는 그 후에 투여되어 혈병 형성의 재발을 방지할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 치료 방법에 사용하기 위한 약학적 제제를 제공한다. 본 발명의 약학적 제제는 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제와 함께 일반식 (1) 화합물의 트로빈 억제 유효량을 포함한다. 경구 투여용으로서, 황혈전 화합물은 결합제, 윤활제, 붕해제 등과 같은 부형제를 함유할 수도 있는 젤라틴 캡슐 또는 정제로 제형화될 수 있다. 비경구 투여용으로 항혈전제는 예컨대 생리 식염수 (0.9 %), 5 % 덱스트로스, 링거 용액 등과 같은 약학적으로 허용가능한 희석제에 제형화될 수 있다.
본 발명의 화합물은 약 0.1 mg 내지 약 1000 mg 범위의 투여량을 포함하는 단위 투여량 제형으로 제형화될 수 있다. 바람직하게는 화합물은 예컨대 황산염, 아세트산염 또는 인산염 등과 같은 약학적으로 허용가능한 염 형태이다. 단위 투여량 제형의 예는 10 ㎖ 멸균 유리 앰플에 약학적으로 허용가능한 염으로서 본 발명의 화합물 5 mg을 포함한다. 단위 투여량 제형의 다른 예는 멸균 앰플에 함유된 등장 식염수 20 ㎖ 중의 약학적으로 허용가능한 염으로서 본 발명의 화합물 약 10 mg 을 포함한다.
화합물은 경구, 직장, 경피, 피하, 정맥내, 근육내 및 비강내 등의 다양한 투여 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 투여전에 제형화하는 것이 바람직하다. 본 발명의 또다른 실시태양은 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 일반식 (1)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을 유효량으로 포함하는 약학 제제이다.
이와 같은 제제 중 활성 성분은 제제 중량의 0.1 중량% 내지 99.9 중량%를 포함한다. "약학적으로 허용가능한"이란 담체, 희석제 또는 부형제가 제제의 기타 성분과 화합될 수 있고 수용체에 해롭지 않아야 함을 의미한다.
본 발명의 약학 제제는 용이하게 입수가능한 공지의 성분을 사용하여 공지 방법에 따라 제조한다. 본 발명의 조성물은 당업계에 공지된 방법을 사용함으로써, 환자에게 투여된 후 활성 성분의 방출을 지연, 유지 또는 가속시키도록 제형화할 수 있다. 본 발명의 조성물을 제조함에 있어서, 활성 성분은 일반적으로 캡슐, 사셋, 종이 또는 기타 용기의 형태일 수 있는 담체 내에 담지되거나 담체로 희석되거나 담체와 혼합될 수 있다. 담체가 희석제로서 작용할 경우, 활성 성분을 위한 비히클, 부형제 또는 매질로서 작용하는 고체, 반 고체 또는 액체 물질일 수 있다. 따라서, 조성물은 정제, 환제, 분제, 로젠지, 사셋, 카셋, 엘릭시르, 현탁액, 유화액, 용액, 시럽, 에어로졸 (고체 또는 액체 매질로서), 연질 및 경질 젤라틴 캡슐, 좌약, 멸균 주사액, 멸균 밀봉 분말 등의 형태일 수 있다.
하기 제제 예는 단지 예시의 수단이며 어떠한 의미에서도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. "활성 성분"은 물론 일반식 (1)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을 의미한다.
[제제 1]
하기 성분을 이용하여 경질 젤라틴 캡슐을 제조하였다.
함량(mg/캡슐)
활성 성분 250
건조 전분 200
스테아르산 마그네슘 10
총계 460 mg
[제제 2]
하기 성분을 사용하여 정제를 제조하였다.
함량(mg/정제)
활성 성분 250
미세결정질 셀룰로스 400
훈증 이산화실리콘 10
스테아르산 5
총계 655 mg
성분들을 혼합하고 압축하여 각각 중량 665 mg의 정제를 형성하였다.
[제제 3]
하기 성분을 함유하는 에어로졸 용액을 제조하였다.
중량
활성 성분 0.25
에탄올 25.75
분사제 22(클로로디플루오로메탄) 70.00
총계 100.00
활성 화합물을 에탄올과 혼합하고 상기 혼합물을 분사제 22의 일부에 첨가하고 -30 ℃로 냉각하고 충전 장치로 이동시켰다. 그 다음 필요량을 스테인레스 스틸 용기에 공급하고 나머지 분사제로 희석하였다. 그 다음 밸브 유닛을 용기에 고정시켰다.
[제제 4]
활성 성분 60 mg을 각각 함유하는 정제를 하기와 같이 제조하였다.
활성 성분 60 mg
전분 45 mg
미세결정질 셀룰로스 35 mg
폴리비닐피롤리돈 (10 % 수용액) 4 mg
나트륨 카르복시메틸 전분 4.5 mg
스테아르산마그네슘 0.5 mg
활석 1 mg
총계 150 mg
활성 성분, 전분 및 셀룰로스를 45번 메쉬 U.S. 체에 통과시키고 철저하게 혼합하였다. 폴리비닐-피롤리돈 함유 수용액을 얻어진 분말과 혼합한 후 혼합물을 14번 메쉬 U.S. 체에 통과시켰다. 생성된 과립을 50 ℃에서 건조시키고 18번 메쉬 U.S. 체에 통과시켰다. 60번 메쉬 U.S. 체에 미리 통과시킨 나트륨 카르복시메틸 전분, 스테아르산마그네슘 및 활석을 과립에 첨가하고 혼합한 다음 타정기에서 압축하여 중량 150 20
mg의 정제를 제조하였다.
[제제 5]
활성 성분 80 mg을 각각 함유하는 캡슐을 하기와 같이 제조 하였다.
활성 성분 80 mg
전분 59mg
미세결정질 셀룰로스 59mg
스테아르산마그네슘 2 mg
총계 200 mg
활성 성분, 셀룰로스, 전분 및 스테아르산마그네슘을 혼합하고 45번 메쉬 U.S. 체에 통과시키고 200 mg 용량의 경질 젤라틴 캡슐에 충전하였다.
[제제 6]
활성 성분 225 mg을 각각 함유하는 좌약을 하기와 같이 제조하였다.
활성 성분 225 mg
포화 지방산 글리세라이드 2,000 mg
총계 2,250 mg
활성 성분을 60번 메쉬 U.S. 체에 통과시키고 최소한의 필요한 열을 사용하여 미리 용융시킨 포화 지방산 글리세라이드 중에서 현탁하였다. 이어서 혼합물을 명목상 2 g 용량의 좌약 주형에 충전하고 냉각시켰다.
[제제 7]
5 ㎖ 투여량 당 각각 활성 성분 50 mg을 함유하는 현탁액을 하기와 같이 제조하였다.
활성 성분 50 mg
나트륨 카르복시메틸 셀룰로스 50 mg
시럽 1.25 ㎖
벤조산 용액 0.10 ㎖
향미제 적당량
착색제 적당량
정제수 전체 5 ㎖가 되는 양
활성 성분을 45번 메쉬 U.S. 체에 통과시키고 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스 및 시럽과 혼합하여 부드러운 페이스트를 형성하였다. 벤조산 용액, 향미제 및 착색제를 물 적당량으로 희석하고, 교반하면서 첨가하였다. 그 다음 충분한 물을 첨가하여 원하는 부피를 얻었다.
[제제 8]
정맥투여 제제를 하기와 같이 제조하였다.
활성 성분 100 mg
등장 식염수 1,000 ㎖
상기 성분의 용액은 일반적으로 1분 당 1 ㎖의 속도로 정맥내 투여된다.
단위 투여량 제제의 예는 10 ㎖ 멸균 유리 앰플 중에 (IR, 4aR, 8aR)-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐-L-프롤릴-L-아르기닌 알데하이드 황산염 5 mg을 포함한다. 다른 단위 투여량 제제의 또다른 예는 멸균 앰플에 함유된 등장 식염수 20 ㎖ 중에 (IR, 4aR, 8aR)-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐-L-프롤릴-L-아르기닌 알데하이드 황산염 약 10 mg을 포함한다.
바람직한 제제는 멸균 앰플 중에 (IR, 4aR, 8aR)-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐-L-프롤릴-L-아르기닌 알데하이드 황산염 5 mg 내지 50 mg을 포함하는 단위 투여형이다.
하기 실시예를 통하여 본 발명을 좀더 구체적으로 예시하고자 하며, 이들 실시예에 의해 본 발명의 범위가 한정되는 것은 아니다.
하기 실시예에서 Rf 수치는 하기 용매계에서 키에젤겔 60F-254 (Kieselgel, Merck, Darmstradt)를 사용하여 실리카 겔 박층 크로마토그래피로 측정하였다:
(A) 클로로포름-메탄올-아세트산, 135:51:1, v:v:v
(B) 에틸 아세테이트-아세트산-무수 에탄올, 90:10:10, v:v:v
(C) 클로로포름-메탄올-아세트산, 90:30:5, v:v:v
(D) 에틸 아세테이트-헥산, 30:70, v:v
실시예에서 사용된 분석 HPLC 방법은 하기와 같다:
방법 1: 0.46 cm x 10 cm의 비닥(Vydac) C18 역상 칼럼을 사용한 워터스 600 E (Waters 600E). 크로마토그램은 A = 0.O1M 암모늄 아세테이트 및 B = 아세토니트릴의 구배를 사용하여 220 nM에서 LDC상에서 모니터하였다.
방법 2: 0.5 cm x 5.0 cm의 PepRPC을 사용한 파마시아 (Pharmacia) FPLC. A = 0.O1M 암모늄 아세테이트 또는 B = 아세토니트릴의 구배를 사용하여 214 nM에서 파마시아 UV-M 상에서 모니터하였다.
본 명세서에서 사용된 약어는 하기와 같다.
아미노산: Arg= 아르기닌, Pro= 프롤린, Phg= 페닐글리신
Boc= t-부틸옥시카르보닐
Bzl= 벤질
Cbz (또는 z)= 벤질옥시카르보닐
DCC= 디사이클로헥실카르보디이미드
DMF= 디메틸포름아미드
DMSO= 디메틸설폭사이드
FAB-MS= 고속 원자 충격 질량 스펙트럼
FD-MS= 장 방출 질량 스펙트럼
THF= 테트라하이드로퓨란
TLC= 박층 크로마토그래피
[실시예 1]
(1R, 4aR, 8aR)-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르보닐-L-프롤릴-L-아르기닌 알데하이드의 제조
THF (50 ㎖)중에 용해된 메틸 클로로포르메이트 (46.2 ㎖, 0.6 mol)을 THF (500 ㎖) 중 펜에틸아민 (75.2 ㎖, 0.6 mol) 및 트리에틸아민 (83 ㎖, 0.6 mol)의 교반 용액에 천천히 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 추가로 교반한 다음 디에틸 에테르 (2ℓ) 및 1N HCl (800 ㎖)을 첨가하였다. 유기층을 물로 세척하고 건조하고(MgS04), 여과시키고 여액을 진공에서 농축시켜 순수한 표제 화합물의 투명 오일을 얻었다 (102 g, 95 %)
메틸카르바메이트-DL-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-1-카르복실산 (2)
트리플루오로아세트산 (300 ㎖) 중 메틸카르바메이트-펜에틸아민 (1) (102 g, 0.57 mol)의 용액에 글리옥실산 (63 g, 0.68 mol)을 첨가하고 환류 온도로 가열하였다. 환류하에 4시간 후 반응물을 실온으로 냉각하고 진공에서 용매를 제거하고 디에틸 에테르 (800 ㎖)/ 물 (100 ㎖)을 잔류물에 첨가하였다. 반응 혼합물의 pH를 5N NaOH를 사용하여 12로 상승시키고 수성층을 분리하였다. 수성층에 디에틸 에테르 (500 ㎖)를 첨가하고 이 용액을 5N NaOH로 pH 2.5로 산성화하였다. 유기층을 분리하고 건조시키고(MgS04), 여과하고, 여액을 진공에서 농축하여 순수한 표제 화합물의 오일을 얻었다(107 g, 80 %); FAB-MS 236 (MH+).
메틸카르바메이트-DL-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-1-카르복실-t-부틸 에스테르 (3)
CH2Cl2(200 ㎖) 중 메틸카르바메이트-DL-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-1-카르복실산 (2) (105 g, 0.45 mol)의 교반 냉각 (0℃) 용액에 t-부탄올 (52 ㎖, 0.54 mol), 4-디메틸 아미노 피리딘 (10 g, 0.08 mol) 및 DCC (92 g, 0.45 mol)를 첨가하였다. 0℃에서 2시간, 실온에서 24시간 후, 용매를 진공에서 제거하고, 에틸 아세테이트 (800 ㎖)/ 1N NaHC03(300 ㎖)을 잔류물에 첨가하였다. 유기층을 분리하고 물, 1.5N 시트르산 및 물로 차례대로 세척하였다. 유기층을 건조시키고(MgS04), 여과시키고, 여액을 진공에서 농축시켜 순수한 표제 화합물의 오일 (106 g, 81 %)을 얻었다.
FAB-MS 292 (MH+); TLC Rf(A) 0.61;
C16H21N04에 대한 원소 분석:
계산치: C, 65.96; H, 7.27; N, 4.81.
실측치: C, 66.24, H, 7.28, N, 4.73.
메틸카르바메이트-DL-1,2,3,4,6,7,8-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르복실-t-부틸 에스테르 (4)
t-부탄올 (800 ㎖) 중 메틸카르바메이트-DL-1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-1-카르복실-t-부틸 에스테르 (3) (105 g, 0,36 mol)의 용액을 50 ℃ 고압 장치의 800 psi 수소 압력에서 5% Rh/Al203(52.5 g)과 24시간 동안 반응시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 (Celite(R)) 패드를 통하여 여과하고 여액을 진공에서 농축하였다. 생성 오일을 건조시켜 순수한 표제 화합물을 얻었다 (96.5 g, 90 %). FD-MS 298 (MH+): TLC Rf(C) 0.63
메틸카르바메이트-1,2,3,4,4aS,6,7,8,8aS-퍼하이드로이소퀴놀린-S-1-카르복실 에틸 에스테르 +
메틸카르바메이트-1,2,3,4,4aR,6,7,8,8aR-퍼하이드로이소퀴놀린-R-1-카르복실 에틸 에스테르 (5)
EtOH (500 ㎖) 중 메틸카르바메이트-DL-1,2,3,4,6,7,8-퍼하이드로이소퀴놀린-1-카르복실-t-부틸 에스테르 (4) (81.2 g, 273 mmol)의 용액에 나트륨 에톡사이드 (에탄올 중 21 %) (88.4 ㎖, 273 mmol)를 첨가하고 반응물을 24시간 동안 환류시켰다. 유기 용매를 진공에서 증발시키고 잔류물에 에틸아세테이트 (400 ㎖) 및 물 (100 ㎖)을 첨가하였다. 유기층을 분리하고 물로 2회 세척하고 건조시키고(MgSO4), 여과하고 여액을 진공에서 농축하여 순수한 표제 화합물의 오일 (70 g, 95 %)을 얻었다. FAB-MS 270 (MH+); TLC Rf(A) 0.61.
메틸카르바메이트-1,2,3,4,4aS,6,7,8,8aS-퍼하이드로이소퀴놀린-S-1-카르복실산 +
메틸카르바메이트-1,2,3,4,4aR,6,7,8,8aR-퍼하이드로이소퀴놀린-R-1-카르복실산 (6)
THF (250 ㎖) 중 화합물 (5) (70 g, 260 mmol) 용액에 2N NaOH (156 ㎖, 312 mmol)를 첨가하고 반응물을 실온에서 30시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 진공에서 증발시키고 디에틸 에테르 (400 ㎖) 및 물 (100 ㎖)을 잔류물에 첨가하였다. 수성층을 분리하고 에틸 아세테이트 (400 ㎖)를 첨가하였다. 용액의 pH를 5N HCl로 2.0으로 조정하였다. 유기층을 건조시키고(MgS04), 여과하고, 여액을 진공에서 농축시켜 투명 오일을 얻었다. 오일을 헥산 (200 ㎖)으로부터 결정화하여 순수한 표제 화합물을 얻었다 (46.4 g, 74 %). FAB-MS 242 (MH+); TLC Rf(A) 0.36. C12H19N04에 대한 원소 분석:
계산치: C, 59.74; H, 7.94; N, 5.81.
실측치: C, 59.95; H, 7.88; N, 5.54.
Cbz-1,2,3,4,4aS,6,7,8,8aS-퍼하이드로이소퀴놀린-S-1-카르복실산 +
Cbz-1,2,3,4,4aR,6,7,8,8aR-퍼하이드로이소퀴놀린-R-1-카르복실산 (7)
불활성 분위기하에 무수 CH3CN (200 ㎖) 중 화합물 6 (46 g, 191 mmol)의 교반 용액에 CH3CN (60 ㎖) 중 요오도트리메틸 실란 (62.4 ㎖, 440 mmol)의 용액을 실온에서 첨가하였다. 반응물을 55 ℃에서 30분 동안 교반하고 실온으로 냉각하였다. 반응물을 물 (100 ㎖)에 이어 나트륨 메타비설파이트 (1 g)으로 켄칭시켰다. 반응물의 pH를 5N NaOH로 10.0으로 상승시키고 2N NaOH로 pH를 10에 유지하면서 벤질 클로로포르메이트 (27.3 ㎖, 191 mmol)를 적가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 추가로 교반한 다음 유기 용매를 진공에서 증발시키고, 디에틸 에테르 (200 ㎖)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 방치한 다음 에틸 아세테이트 (200 ㎖)를 첨가하였다. 수용액을 5N HCl로 pH 2.5로 산성화시키고, 유기층을 분리하고 건조시키고(MgS04) 여과하고, 여액을 진공에서 농축시켜 순수한 표제 화합물을 오일로서 얻었다 (39.5 g, 65 %). FAB-MS 318 (MH+).
C18H23N04에 대한 원소 분석:
계산치: C, 68.12; H, 7.30; N, 4.41.
실측치: C, 66.37; H, 7.52; N, 4.37.
Cbz-1,2,3,4,4aS,6,7,8,8aS-퍼하이드로이소퀴놀린-S-1-카르보닐-Pro-t-Bu +
Cbz-1,2,3,4,4aR,6,7,8,8aR-퍼하이드로이소퀴놀린-R-1-카르보닐-Pro-t-Bu (8)
DMF (200 ㎖) 중 화합물 (7) (39 g, 123 mmol)의 냉각된 (0 ℃) 교반 용액에 프롤린-t-부틸에스테르 (21.1 g, 123 mmol), 1-하이드록시벤조트리아졸 (16.6 g, 123 mmol) 및 DCC (25.3 g, 123 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 0 ℃에서 2시간 동안 교반한 다음 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 침전물을 여과하고, 여액을 진공하에서 농축하여 오일을 얻었다. 이 오일을 EtOAc (200 ㎖) 및 물 (100 ㎖)에 용해하였다. 유기층을 1N NaHC03, 물, 1.5N 시트르산 및 물로 계속해서 세척하였다. 유기층을 건조하고(MgS04), 여과하고, 여액을 증발시켜 표제 화합물의 무정형 고체를 얻었다 (52.7 g, 91 %). FAB-MS 471 (MH+).
Cbz-1,2,3,4,4aR,6,7,8,8aR-퍼하이드로이소퀴놀린-(1R)-카르보닐-Pro-OH (9)
CH2Cl2(20 ㎖) 중 화합물 8 (52.4 g, 111 mmol)의 교반 용액에 트리플루오로아세트산 (70 ㎖) 및 아니졸 (5 ㎖)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음 가열하지 않으며 진공에서 농축하였다. 반응물을 디에틸 에테르 (400 ㎖) 및 물 (100 ㎖)로 희석하고 용액의 pH를 5N NaOH를 사용하여 10.0으로 조정하였다. 수성층을 분리하고 에틸 아세테이트 (300 ㎖)를 첨가하였다. 용액의 pH를 5N HCl을 사용하여 2.5로 조정하였다. 유기층을 분리하고 건조시키고(MgSO4), 여과하고 여액을 진공에서 농축하여 투명 오일을 얻었다. 오일을 디에틸에테르 (500 ㎖)에 용해하고 L(-) 알파-메틸벤질아민을 용액에 첨가하였다. 이 용액을 실온에서 24시간 동안 방치하였다. 얻어진 고체를 여과시키고 디에틸 에테르로 세척하고 건조시켰다. 고체를 에틸 아세테이트에 현탁하고 1.5N 시트르산 및 물로 세척하였다. 유기층을 건조시키고(MgSO4) 여과하고, 여액을 증발시켜 표제 화합물을 오일로서 얻었다. (20.2 g, 44 %). FAB-MS 415 (MH+); [α]D= 3.2°(C, 0.5 MeOH).
C23H30N205에 대한 원소 분석:
계산치: C, 66.65; H, 7.30; N, 6.76.
실측치: C, 66.38; H, 7.36; N, 6.63.
(A) Boc-L-Arg(Cbz)-OH
3구 환저 플라스크 내에서 5N NaOH 240 ㎖ 중에 N-Boc-아르기닌 하이드로클로라이드 (Boc-Arg-OH ㆍ HCl) (82.1 g, 250 mmol)를 용해하였다. 이 용액을 -5 ℃로 냉각하고 5N NaOH (250 ㎖)로 혼합물의 pH를 13.2 내지 13.5로 유지하면서 벤질 클로로포르메이트 (143 ㎖, 1.0 mol, 4 당량)을 55 분간에 걸쳐 적가하였다. 클로로포르메이트의 첨가가 종료된 후 반응 혼합물을 -5 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 100 ㎖ 및 디에틸 에테르 500 ㎖로 희석하고 수성층을 분리하고 디에틸 에테르 40 ㎖ 씩으로 2회 추출하였다. 3N H2S04(560 ㎖)로 수성층의 pH를 3.0으로 산성화하고 에틸 아세테이트 550 ㎖로 추출하였다. 분리된 수성층을 에틸 아세테이트로 1회 추출한 다음 추출물을 이전의 에틸 아세테이트 추출물과 한데 합하였다. 한데 합한 추출물을 물로 세척하고 MgS04상에서 건조하고 진공하에서 증발 건조시켰다. 잔류물은 에테르로 분쇄하고 침전된 생성물을 여과하고 건조하였다. 화합물 (3) Boc-Arg(Cbz)-OH 66.1 g을 얻었다 (이론치의 65 %).
TLC Rf(C) 0.43; FD-MS 408 (M+).
1H NMR(CDCl3), δ1.42 (s, 9H), 1.61-1.91 (m, 4H), 3.23-3.41 (m, 2H), 4.17 (d, 1H), 5.21 (s, 2H), 5.62 (d, 1H), 7.30-7.42 (m, 6H), 8.37 (m, 1H).
(B) Boc-Arg(Cbz)-락탐
건조 THF 230 ㎖ 중 상기 기재한 바와 같이 제조한 화합물 Boc-Arg(Cbz)-0H (A) (66.0 g, 0.162 mol)의 용액을 얼음-아세톤 욕에서 -10 ℃로 냉각하였다. 저온 용액에 N-메틸모르폴린 (18.7 ㎖, 1.05 당량)에 이어 이소부틸 클로로포르메이트 (22.5 ㎖, 1.05 당량)를 첨가하고 이 혼합물을 -10 ℃에서 5분 동안 교반하였다. 그 다음 트리에틸아민 (23.5 ㎖, 1.05 당량)을 첨가하고 혼합물을 -10 ℃에서 1시간, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 얼음-물 혼합물 1 ℓ에 상기 반응 혼합물을 넣고 표제 화합물을 침전시켰다. 침전물을 여과하고, 냉수로 세척하고 진공하에서 건조시키고 에틸 아세테이트로부터 결정화하였다. 표제 화합물인 Boc-Arg(Cbz)-락탐 38.05 g (이론치의 60 %)을 얻었다.
TLC Rf(A) 0.77; FD-MS 291(MH+).
1H NMR (CDCl3), δ1.48 (s, 9H), 1.78-1.98 (m, 2H), 2.50 (m, 1H), 3.41 (m, 1H), 4.43 (m, 1H), 4.90 (m, 1H), 4.16 (s, 2H), 5.27 (m, 1H), 7.28-7.45 (m, 6H), 9.41 (m, 1H), 9.68 (m, 1H).
Cbz-1,2,3,4,4aR,6,7,8,8aR-퍼하이드로이소퀴놀린-R-1-카르보닐-Pro-Arg(Cbz) 락탐 (11)
플라스크 1에서, 화합물 9 (13.9 g, 33.5 mmol)를 DMF (50 ㎖)에 용해하고 -15 ℃로 냉각하고 N-메틸모르폴린 (3.7 ㎖, 33.5 mmol)을 첨가한 후 이소부틸클로로포르메이트 (4.4 ㎖, 33.5 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 -15 ℃에서 1분간 교반하였다. 플라스크 2에서, HCl ㆍ Arg(Cbz)-락탐 (10.9 g, 33.5 mmol)을 DMF (50 ㎖)에 용해하고 0 ℃로. 냉각하고, 이 용액에 디이소프로필에틸아민 (14.6 ㎖, 83.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1분간 교반하였다. 플라스크 2의 내용물을 플라스크 1에 첨가하고 반응 혼합물을 -15 ℃에서 2시간 동안에 이어 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물에 1N NaHC03(10 ㎖)을 첨가하고, 반응 용매를 진공에서 제거하여 오일을 얻었다. 잔류물을 EtOAc (200 ㎖)에 용해하고 1.5N 시트르산, 물, 1N NaHC03(100 ㎖) 및 물로 차례대로 세척하였다. 유기 용액을 건조시키고(MgS04) 여과하고 진공에서 농축 건조시켜 조 고체를 얻었다. 조 고체를 단계적 구배 용출 (헥산 100에서 헥산-EtOAc 30:70)을 사용한 실리카겔 상의 크로마토그래피로 정제하여 순수한 화합물 (10)을 얻었다. (9.0 g, 39 %). FAB-MS 687 (MH+).
C37H46N607에 대한 원소 분석:
계산치: C, 64.71; H, 6.75; N, 12.24.
실측치: C, 64.23; H, 6.69; N, 11.88.
Cbz-1,2,3,4,4aR,6,7,8,8aR-퍼하이드로이소퀴놀린-R-1-카르보닐-Pro-Arg(Cbz)-H (12)
질소 분위기하에서 무수 THF (100 ㎖) 중 화합물 11 (9.0 g, 13.1 mmol)의 냉각된(-70 ℃) 교반 용액에 THF 중 1M 리튬 알루미늄 하이드라이드 (13.1 ㎖, 13.1 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 -70 ℃에서 30분간 교반하였다. THF 5 ㎖ 및 0.5 N H2S045 ㎖의 용액을 반응물에 적가하였다. 반응물을 EtOAc (175 ㎖) 및 물 (100 ㎖)로 희석하였다. 유기층을 분리하고 건조시키고(MgS04) 여과하였다. 유기 용매를 진공하에서 제거하여 표제 화합물의 무정형 고체를 얻었다 (8.2 g, 91 %). FAB-MS 689 (MH+)
1,2,3,4,4aR,6,7,8,8aR-퍼하이드로이소퀴놀린-R-1-카르보닐-Pro-Arg-HㆍH2S04(12)
에탄올 (50 ㎖), 물 (10 ㎖) 및 1N H2S04(30 ㎖, 29.7 mmol) 중에 용해된 화합물 12 (8.2 g 11.9 mmol)를 주위 온도 및 압력하에서 5 % Pd/C 촉매 (4.0 g)의 존재하에 수소화하였다. 반응이 종결된 후 여과하여 촉매를 제거하였다. 여액을 진공에서 40 ㎖ 정도로 농축하고 물 (50 ㎖)을 첨가하였다. 용액의 pH를 바이오래드 AGI-X8 수지(하이드록사이드 형태로 4.2로 조정하였다. 여과하여 수지를 제거하고 용액을 동결건조시켜 조 표제 화합물 (5.46 g)를 얻었다. 고체 (5.46 g)를 0.01% H2S04중에 용해하고 5 X 25 cm 칼럼 비닥 C18수지에 적용하였다. CH3CN의 증가하는 농도 구배 (1 %에서 5 %)를 사용하여 칼럼으로부터 펩티드를 용출시켰다. 분석 RP-HPLC 프로필을 기초로 하여 분획물을 수거하였다. 하이드록사이드 형태의 AGI-X8 수지 (바이로래드 분석 음이온 교환 수지 50 내지 100 메쉬)를 사용하여 한데 합한 분획물의 pH를 4.2로 조정하였다. 상기 용액을 여과하고 여액을 동결건조하여 순수한 표제 화합물을 얻었다 (2.4 g, 39 %). FAM-MS 421 (MH+); [α]D= -102.8°(C, 0.5/0.01 N H2S04).
C21H36N603ㆍ H2S04ㆍ 2H20에 대한 원소 분석:
계산치: C, 45.47; H, 7.63; N, 15.16.
실측치: C, 45.05; H, 7.44; N, 15.02.

Claims (3)

  1. 하기 일반식의 화합물 및 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 용매화물:
    상기 식에서,
    A는이다.
  2. 제1항 기재의 화합물의 황산염.
  3. 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제와 함께 제1항 또는 제2항 기재의 화합물을 활성 성분으로 포함하는 항혈전제.
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