MXPA06010887A - Anticuerpos monoclonales especificos para ox4ol (cd 134l) humano. - Google Patents

Anticuerpos monoclonales especificos para ox4ol (cd 134l) humano.

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MXPA06010887A
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Sirid-Aimee Kellermann
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Abstract

Secuencias de nucleotidos que codifican para, y secuencias de aminoacidos que comprenden, cadenas pesada y ligera de anticuerpos monoclonales especificos para OX401 (CD 1341) humano.

Description

ANTICUERPOS MONOCLONALES ESPECÍFICOS PARA OX40 (CD 134L) HUMANO Campo de la invención La presente invención se refiere a anticuerpos reactivos con el ligando de 0X40 (OX 0L) , células que producen anticuerpos reactivos con 0X4OL, composiciones farmacéuticas que comprenden anticuerpos reactivos con OX40L, métodos de uso de los anticuerpos reactivos con 0X OL, y equipos que comprenden anticuerpos reactivos con OX40L.
Antecedentes de la invención La interacción entre OX40 y su ligando, ó OX40L, forma un papel en la activación y expansión de células T CD4, activadas por antígeno, durante una respuesta inmunitaria. Inicialmente, se activan las células T CD4 mediante la presentación de antígenos unidos al MHC-II y el receptor de células T (TCR) . Después de la presentación del antígeno, se favorece la expresión en superficie de células de 0X40 y 0X4OL con 0X4OL expresado en la superficie de células T CD4 y 0X OL expresado en la superficie de células que presentan el antígeno (APC) . Las señales combinadas en las interacciones antígeno-TCR y OX40L-OX40 facilitan la activación, expansión, migración y producción de citocinas de las células T CD4. Ver, en general, por ejemplo, Lañe, REF.: 175929 P., J. Exp. Med. 191: 201-05 (2000). El OX40L es un miembro de la familia de proteínas de factores de necrosis tumoral (TNF) . El OX40L se expresa típicamente en las APC tal como células dendríticas (DC) , macrófagos, microglios y células B. OX40 se expresa típicamente en tejido linfoide, por ejemplo, en células T CD4 activadas. Estas células T OX40+ se encuentran preferencialmente en sitios de inflamación en el cuerpo. Igualmente, en pacientes con una condición inflamatoria, el OX40L se expresa típicamente en tejidos en el sitio de inflamación y no en el tejido saludable. Los investigadores han demostrado que se pueden usar reactivos que inhiben la interacción OX40L-OX40 para modular enfermedades inflamatorias, experimentales, mediadas por células T. Ver en general, por ejemplo, Weinberg, A., Trends in immunol. 23: 102-09 (2002) . Breve descripción de la invención En ciertas modalidades, se proporciona un polipéptido aislado que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés) seleccionada de CDRla, CDR2a, ó CDR3a, en donde CDRla comprende la secuencia de aminoácidos a b c d e, en donde el aminoácido a se selecciona de asparagina, treonina, fenilalanina, o serina; el aminoácido b se selecciona de alanina o tirosina; el aminoácido c se selecciona de triptofano, tirosina o glicina; el aminoácido d se selecciona de metionina o triptofano; y el aminoácido e se selecciona de serina, asparagina, o histidina; en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t, en donde el aminoácido f se selecciona de arginina o valina; el aminoácido g es isoleucina; el aminoácido h se selecciona de lisina, tirosina, o triptofano; • el aminoácido i se selecciona de serina, isoleucina, tirosina, treonina, o arginina; el aminoácido j se selecciona de lisina, serina, o ácido aspártico; el aminoácido k se selecciona de treonina o glicina; el aminoácido 1 se selecciona de ácido aspártico, serina, o ácido glutámico; el aminoácido m se selecciona de glicina, treonina, o asparagina; el aminoácido n se selecciona de glicina, asparagina, lisina, o treonina; el aminoácido o' se selecciona de treonina- o tirosina; el aminoácido p se selecciona de treonina, isoleucina, asparagina o tirosina; el aminoácido q se selecciona de ácido aspártico, prolina o alanina; el aminoácido r se selecciona de tirosina, serina, o ácido aspártico; el aminoácido s se selecciona de glicina, alanina, leucina o serina; y el aminoácido t se selecciona de alanina, lisina o valina; en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z ' b' C d' e' f' , en donde el aminoácido u se selecciona de ácido aspártico, glicina, metionina o serina; el aminoácido v se selecciona de arginina, glicina, ácido aspártico, tirosina o fenilalanina; el aminoácido w se selecciona de tirosina, valina, glicina o leucina; el aminoácido x se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o triptofano; el aminoácido y se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o isoleucina; el aminoácido z se selecciona de glicina, tirosina, prolina, valina o fenilalanina; el aminoácido a' se selecciona de ácido glutámico, serina, tirosina, triptofano o alanina; el aminoácido b' se selecciona de fenilalanina, glicina, tirosina, treonina o serina; el aminoácido c ' se selecciona de prolina, tirosina, serina, lisina o glicina; el aminoácido d' se selecciona de fenilal'anina, tirosina o glicina; el aminoácido e' se selecciona de ácido aspártico, tirosina, arginina o histidina; el aminoácido f se selecciona de tirosina, valina, glicina, arginína o treonina; y en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, se proporciona un polipéptido aislado que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de al menos uno de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO: 2, de los aminoácidos 69 a 87 de SEQ ID NO: 2, de los aminoácidos 120 a 135 de SEQ ID NO : 2, de los aminoácido 50 a 54 de SEQ ID NO: 6, de los aminoácido 69 a 84 de SEQ ID NO: 6, de los aminoácido 117 a 134 de SEQ ID NO: 6, de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO: 10, de los aminoácido 69 a 85 de SEQ ID NO: 10, de los aminoácidos 118 a 135 de SEQ ID NO: 10, de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO: 14, de los aminoácidos 69 a 84 de SEQ ID NO: 14, de los aminoácidos 117 a 131 de SEQ ID NO: 14, de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO: 18, de los aminoácidos 69 a 87 de SEQ ID NO: 18, de los aminoácidos 120 a 133 de SEQ ID NO: 18, de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO: 22, de los aminoácidos 69 a 87 de SEQ ID NO: 22, o de los aminoácidos 120 a 131 de SEQ ID NO: 22, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L. En ciertas modalidades, se proporciona un polipéptido aislado que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b, ó CDR3b en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl, en donde el aminoácido al es arginina; el aminoácido bl se selecciona de alanina o serina; el aminoácido cl es serina; el aminoácido di es glutamina; el aminoácido el se selecciona de glicina o serina; el aminoácido fl se selecciona de isoleucina, valina o leucina; el aminoácido gl se selecciona de serina o valina; el aminoácido hl se selecciona de asparagina, serina o histidina; el aminoácido il se selecciona de histidina, asparagina, serina o tirosina; el aminoácido jl se selecciona de leucina, tirosina o ácido aspártico; y el aminoácido kl se selecciona de valina, leucina, glicina o asparagina; en donde CDR2b comprende la secuencia de aminoácidos 11 ml ni ol pl ql rl, en donde el aminoácido ll se selecciona de alanina, glicina o lisina; el aminoácido ml se selecciona de alanina o lisina; el aminoácido ni se selecciona de serina o fenilalanina; el aminoácido ol se selecciona de treonina, serina o asparagina; el aminoácido pl se selecciona de leucina o arginina; el aminoácido ql se selecciona de glutamina, alanina o fenilalanina; y el aminoácido rl se selecciona de serina o treonina; en donde CDR3b comprende la secuencia de aminoácidos si ti ul vi wl xl yl zl al', en donde el aminoácido si se selecciona de glutamina o metionina; y el aminoácido ti se selecciona de lisina o glutamina; el aminoácido ul se selecciona de tirosina, alanina, serina o fenilalanina; el aminoácido vi se selecciona de asparagína, glicina, treonina o tirosina; el aminoácido wl se selecciona de serina, glicina o glutamina; el aminoácido xl se selecciona de alanina, serina, isoleucina o treonina; el aminoácido yl se selecciona de prolina o leucina; el aminoácido zl se selecciona de leucina, triptofano o fenilalanina; y el aminoácido al' es treonina; y en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, se proporciona un polipéptido aislado que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de al menos uno de los aminoácidos 46 a 56 de SEQ ID NO: 4, de los aminoácidos 72 a 78 de SEQ ID NO: 4, de los aminoácidos 111 a 119 de SEQ ID NO: 4, de los aminoácidos 46 a 56 de SEQ ID NO: 8, de los aminoácido 72 a 78 de SEQ ID NO: 8, de los aminoácidos 111 a 119 de SEQ ID NO : 8, de los aminoácidos 44 a 59 de SEQ ID NO: 12, de los aminoácidos 75 a 81 de SEQ ID NO: 12, de los aminoácidos 114 a 122 de SEQ ID NO: 12, de los aminoácidos 44 a 55 de SEQ ID NO: 16, de los aminoácidos 71 a 77 de SEQ ID NO: 16, de los aminoácidos 110 a 118 de SEQ ID NO: 16, de los aminoácidos 46 a 56 de SEQ ID NO: 20, de los aminoácidos 72 a 78 de SEQ ID NO : 20, ó de los aminoácidos 111 a 119 de SEQ ID NO: 20, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L. En ciertas modalidades, se proporciona un polinucleótido aislado que comprende una secuencia que codifica para un polinucleótido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRla, CDR2a, ó CDR3a, en donde CDRla comprende la secuencia de aminoácidos a b c d e, en donde el aminoácido a se selecciona de asparagina, treonina, fenilalanina o serina; el aminoácido b se selecciona de alanina o tirosina; el aminoácido c se selecciona de triptofano, tirosina o glicina; el aminoácido d se selecciona de metionina o triptofano; y el aminoácido e se selecciona de serina, asparagina o histidina; en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t, en donde el aminoácido f se selecciona de arginina o valina; el aminoácido g es isoleucina; el aminoácido h se selecciona de lisina, tirosina o triptofano; el aminoácido i se selecciona de serina, isoleucina, tirosina, treonina o arginina; el aminoácido j se selecciona de lisina, serina o ácido aspártico; el aminoácido k se selecciona de treonina o glicina; el aminoácido 1 se selecciona de ácido aspártico, serina o ácido glutámico; el aminoácido m se selecciona de glicina, treonina o asparagina; el aminoácido n se selecciona de glicina, asparagina, lisina o treonina; el aminoácido o se selecciona de treonina o tirosina; el aminoácido p se selecciona de treonina, isoleucina, asparagina o tirosina; el aminoácido q se selecciona de ácido aspártico, prolina o alanina; el aminoácido r se selecciona de tirosina, serina o ácido aspártico; el aminoácido s se selecciona de glicina, alanina, leucina o serina; y el aminoácido t se selecciona de alanina, lisina o valina; en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f' , en donde el aminoácido u se selecciona de ácido aspártico, glicina, metionina o serina; el aminoácido v se selecciona de arginina, glicina, ácido aspártico, tirosina o fenilalanina; el aminoácido w se selecciona de tirosina, valina, glicina o leucina; el aminoácido x se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o triptofano; el aminoácido y se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o isoleucina; el aminoácido z se selecciona de glicina, tirosina, prolina, valina o fenilalanina; el aminoácido a' se selecciona de ácido glutámico, serina, tirosina, triptofano o alanina; el aminoácido b' se selecciona de fenilalanina, glicina, tirosina, treonina o serina; el aminoácido c' se selecciona de prolina, tirosina, serina, lisina o glicina; el aminoácido d' se selecciona de fenilalanina, tirosina o glicina; el aminoácido e' se selecciona de ácido aspártico, tirosina, arginina o histidina; y el aminoácido f se selecciona de tirosina, valina, glicina, arginina o treonina; y en donde el polipéptido en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X OL. En ciertas modalidades, se proporciona un polinucleótido aislado que comprende una secuencia que codifica para un polinucleótido que comprende al menos región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b Ó CDR3b en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl, en donde el aminoácido al es arginina; el aminoácido bl se selecciona de alanina o serina; el aminoácido cl es serina; el aminoácido di es glutamina; el aminoácido el se selecciona de glicina o serina; el aminoácido fl se selecciona de isoleucina, valina o leucina; el aminoácido gl se selecciona de serina o valina; el aminoácido hl se selecciona de asparagina, serina o histidina; el aminoácido il se selecciona de histidina, asparagina, serina o tirosina; el aminoácido jl se selecciona de leucina, tirosina o ácido aspártico; y el aminoácido kl se selecciona de valina, leucina, glicina o asparagina; en donde CDR2b comprende la secuencia de aminoácidos 11 ml ni ol pl ql rl, en donde el aminoácido 11 se selecciona de alanina, glicina o lisina; el aminoácido ml se selecciona de alanina o lisina; el aminoácido ni se selecciona de serina o fenilalanina; el aminoácido ol se selecciona de treonina, serina o asparagina; el aminoácido pl se selecciona de leucina o arginina; el aminoácido ql se selecciona de glutamina, alanina o fenilalanina; y el aminoácido rl se selecciona de serina o treonina; en donde CDR3b comprende la secuencia de aminoácidos si ti ul vi wl xl yl zl al', en donde el aminoácido si se selecciona de glutamina o metionina; y el aminoácido ti se selecciona de lisina o glutamina; el aminoácido ul se selecciona de tirosina, alanina, serina o fenilalanina; el aminoácido vi se selecciona de asparagina, glicina, treonina o tirosina; el aminoácido wl se selecciona de serina, glicina o glutamina; el aminoácido xl se selecciona de alanina, serina, isoleucina o treonina; el aminoácido yl se selecciona de prolina o leucina; el aminoácido zl se selecciona de leucina, triptofano o fenilalanina; y el aminoácido al' es treonina; y en donde el polinucleótido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, se proporciona un anticuerpo aislado anti-OX40L, en donde el anticuerpo comprende: (i) un primer polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRla,. CDR2a ó CDR3a; en donde CDRla comprende la secuencia de aminoácidos a b c d e, en donde el aminoácido a se selecciona de asparagina, treonina, fenilalanina, o serina; el aminoácido b se selecciona de alanina o tirosina; el aminoácido c se selecciona de triptofano, tirosina o glicina; el aminoácido d se selecciona de metionina o triptofano; y el aminoácido e se selecciona de serina, asparagina, o histidina; en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t, en donde el aminoácido f se selecciona de arginina o valina; el aminoácido g es isoleucina; el aminoácido h se selecciona de lisina, tirosina, o triptofano; el aminoácido i se selecciona de serina, isoleucina, tirosina, treonina, o arginina; el aminoácido j se selecciona de lisina, serina, o ácido aspártico; el aminoácido k se selecciona de treonina o glicina; el aminoácido 1 se selecciona de ácido aspártico, serina, o ácido glutámico; el aminoácido m se selecciona de glicina, treonina, o asparagina; el aminoácido n se selecciona de glicina, asparagina, lisina, o treonina; el aminoácido o se selecciona de treonina o tirosina; el aminoácido p se selecciona de treonina, isoleucina, asparagina o tirosina; el aminoácido q se selecciona de ácido aspártico, prolina o alanina; el aminoácido r se selecciona de tirosina, serina, o ácido aspártico; el aminoácido s se selecciona de glicina, alanina, leucina o serina; y el aminoácido t se selecciona de alanina, lisina o valina; en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f ' , en donde el aminoácido u se selecciona de ácido aspártico, glicina, metionina o serina; el aminoácido v se selecciona de arginina, glicina, ácido aspártico, tirosina o fenilalanina; el aminoácido w se selecciona de tirosina, valina, glicina o leucina; el aminoácido x se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o triptofano; el aminoácido y se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o isoleucina; el aminoácido z se selecciona de glicina, tirosina, prolina, valina o fenilalanina; el aminoácido a' se selecciona de ácido glutámico, serina, tirosina, triptofano o alanina; el aminoácido b' se selecciona de fenilalanina, glicina, tirosina, treonina o serina; el aminoácido c' se selecciona de prolina, tirosina, serina, lisina o glicina; el aminoácido d' se selecciona de fenilalanina, tirosina o glicina; el aminoácido e' se selecciona de ácido aspártico, tirosina, arginina o histidina; y el aminoácido f se selecciona de tirosina, valina, glicina, arginina o treonina; y en donde el primer polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL; y (ii) un segundo polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b ó CDR3b en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl, en donde el aminoácido al es arginina; el aminoácido bl se selecciona de alanina o serina; el aminoácido cl es serina; el aminoácido di es glutamina; el aminoácido el se selecciona de glicina o serina; el aminoácido fl se selecciona de isoleucina, valina o leucina; el aminoácido gl se selecciona de serina o valina; el aminoácido hl se selecciona de asparagina, serina o histidina; el aminoácido il se selecciona de histidina, asparagina, serina o tirosina; el aminoácido jl se selecciona de leucina, tirosina o ácido aspártico; y el aminoácido kl se selecciona de valina, leucina, glicina o asparagina; en donde CDR2b comprende la secuencia de aminoácidos ll ml ni ol pl ql rl, en donde el aminoácido 11 se selecciona de alanina, glicina o lisina; el aminoácido ml se selecciona de alanina o lisina; el aminoácido ni se selecciona de serina o fenilalanina; el aminoácido ol se selecciona de treonina, serina o asparagina; el aminoácido pl se selecciona de leucina o arginina; el aminoácido ql se selecciona de glutamina, alanina o fenilalanina; y el aminoácido rl se selecciona de serina o treonina; en donde CDR3b comprende la secuencia de aminoácidos si ti ul vi wl xl yl zl al' , en donde el aminoácido si se selecciona de glutamina o metionina; y el aminoácido ti se selecciona de lisina o glutamina; el aminoácido ul se selecciona de tirosina, alanina, serina o fenilalanina; el aminoácido vi se selecciona de asparagina, glicina, treonina o tirosina; el aminoácido wl se selecciona de serina, glicina o glutamina; el aminoácido xl se selecciona de alanina, serina, isoleucina o treonina; el aminoácido yl se selecciona de prolina o leucina; el aminoácido zl se selecciona de leucina, triptofano o fenilalanina; y el aminoácido al' es treonina; y en donde el segundo polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, se proporciona un anticuerpo aislado anti-OX40L en donde el anticuerpo comprende un primer polipéptido que comprende regiones de determinación de complementariedad (CDR) como se expone en SEQ ID NO: 2 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO: 4; un primer polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO: 6 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO : 8 ; un primer polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO: 10 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO: 12; un primer polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO: 14 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO: 16; o un prímer polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO: 18 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO : 20. En ciertas modalidades, se proporciona un método para detectar la presencia o ausencia de 0X40L en una . muestra. En ciertas modalidades, este método comprende (a) combinar un anticuerpo anti-0X4OL y la muestra; (b) separar los anticuerpos unidos a un antígeno de los anticuerpos no unidos; y (c) detectar la presencia o ausencia de anticuerpos unidos al antígeno. En ciertas modalidades, se proporciona un método para aislar 0X4OL. En ciertas modalidades, este método comprende (a) unir a un anticuerpo anti-OX40L a un sustrato; (b) exponer una muestra que contiene OX40L al anticuerpo de la parte (a) ; y (c) aislar OX40L. En ciertas modalidades, se proporciona un método para tratar una enfermedad inflamatoria en un paciente. En ciertas modalidades, este método comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo anti-0X4OL al paciente. En ciertas modalidades, se proporciona un método para elaborar un polipéptido. En ciertas modalidades, este método comprende producir un polipéptido en una célula que comprende un vector de expresión que comprende un polinucleótido que codifica para un polipéptido que comprende regiones de determinación de complementariedad (CDR) como se expone en SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 18 ó SEQ ID NO: 22, en donde las CDR comprenden una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-OX40L, en condiciones adecuadas para expresar el polinucleótido contenido en la misma para producir el polipéptido. En ciertas' modalidades, este método comprende producir un polipéptido en una célula que comprende un vector de expresión que comprende un polinucleótido que codifica para un polipéptido que comprende regiones de determinación de complementariedad (CDR) como se expone en SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 16 ó SEQ ID NO: 20, en donde las CDR comprenden una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-OX40L, en condiciones adecuadas para expresar el polinucleótido contenido en la misma para producir el polipéptido. En ciertas modalidades, se proporciona un método para elaborar un anticuerpo anti-0X4OL. En ciertas modalidades, este método comprende producir el anticuerpo en una célula que comprende un vector de expresión que comprende un polinucleótido que codifica para un polipéptido que comprende regiones de determinación de complementariedad (CDR) como se expone en SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 18 ó SEQ ID NO: 22, en donde las CDR comprenden una región variable de cadena pesada de anticuerpo anti-0X40L; y que comprende además un vector de expresión que comprende un polinucleótido que codifica para un polipéptido que comprende regiones de determinación de complementariedad (CDR) como se expone en SEQ ID NO: 4; SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 12; SEQ ID NO: 16 ó SEQ ID NO: 20, en donde las CDR comprenden una región variable de cadena ligera de anticuerpo anti-0X4OL, en condiciones adecuadas para expresar los polinucleótidos contenidos en la misma para producir el anticuerpo. En ciertas modalidades, se proporciona un equipo para detectar la presencia o ausencia de 0X OL en una muestra. En ciertas modalidades, este equipo comprende un anticuerpo anti-0X4OL y reactivos para detectar el anticuerpo. En ciertas modalidades, se .proporciona un equipo para aislar 0X4OL. En ciertas modalidades, este equipo comprende un anticuerpo anti-OX40L unido a un sustrato y reactivos para aislar 0X4OL. En ciertas modalidades, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-0X4OL y un portador farmacéuticamente aceptable. En ciertas modalidades, se proporciona un anticuerpo aislado, en donde el anticuerpo se une de manera especifica a un epítopo que se une de manera específica por al menos uno de Ab A, Ab B, Ab C, Ab D, Ab E, Ab F, Ab G, Ab H, Ab I ó Ab J.
Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 muestra la secuencia de nucleótidos de ADNc que codifica para la cadena pesada de Ab A (SEQ ID NO: 1) y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de Ab A (SEQ ID NO: 2) . Se ponen en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos de codificación. Los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes 'nucleótidos codificantes están en texto regular. Los aminoácidos y las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes están en negritas. Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 2 muestra la secuencia de nucleótidos de ADNc que codifican para la cadena ligera de Ab A (SEQ ID NO: 3) y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera de Ab A (SEQ ID NO: 4) . Están en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos codificantes . Están en texto regular los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en negritas los aminoácidos en las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 3 muestra la secuencia de nucleótidos de ADNc que codifica para la cadena pesada de Ab B (SEQ ID NO: 5) y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de Ab B (SEQ ID NO: 6) . Están en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en texto regular los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en negritas los aminoácidos en las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 4 muestra la secuencia de nucleótidos de ADNc que codifican para la cadena ligera de Ab B (SEQ ID NO: 7) y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera de Ab B (SEQ ID NO: 8) . Están en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos codificantes . Están en texto regular los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en negritas los aminoácidos en las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 5 muestra una secuencia de nucleótidos de ADNc que codifican para la cadena pesada de Ab C (SEQ ID NO: 9) y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de Ab C (SEQ ID NO: 10) . Están en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en texto regular los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en negritas los aminoácidos en las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 6 muestra la secuencia de nucleótidos de ADNc que codifica para la cadena ligera de Ab C (SEQ ID NO: 11) y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera de Ab C (SEQ ID NO: 12) . Están en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en texto regular los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en negritas los aminoácidos en las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 7 muestra la secuencia de nucleótidos de ADNc que codifica para la cadena pesada de Ab D (SEQ ID NO: 13) y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de Ab D (SEQ ID NO: 14) . Están en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en texto regular los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en negritas los aminoácidos en las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 8 muestra la secuencia de nucleótidos de ADNc que codifica para la cadena ligera de Ab D (SEQ ID NO: 15) y la secuencia de aminoácidos de lá cadena ligera de Ab D (SEQ ID NO: 16) . Están en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en texto regular los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en negritas los aminoácidos en las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 9 muestra la secuencia de nucleótidos de ADNc que codifica para la cadena pesada de Abs E y F (SEQ ID NO: 17) y la cadena de aminoácidos de la cadena pesada de Abs E y F (SEQ ID NO: 18) . Están en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en texto regular los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en negritas los aminoácidos en las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 10 muestra la secuencia de nucleótidos de ADNc que codifica para la cadena ligera de Abs E y F (SEQ ID NO: 19) y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera de Abs E y F (SEQ ID NO: 20) . Están en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos codificantes . Los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes están en texto regular. Están en negritas los aminoácidos en las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 11 muestra la secuencia de nucleótidos de ADNc que codifican para la cadena pesada de Ab G (SEQ ID NO: 21) y la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de Ab G (SEQ ID NO: 22) . Están en itálicas los aminoácidos en el péptido de señal y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en texto regular los aminoácidos en las regiones de encuadre de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes. Están en negritas los aminoácidos en las CDR de la región variable y sus correspondientes nucleótidos codificantes . Están subrayados los aminoácidos en la región constante y sus correspondientes nucleótidos codificantes. La Figura 12 muestra la relación, como se determina por el programa Vector NTI, de la secuencia de aminoácidos en ciertos anticuerpos monoclonales humanos diferentes anti-0X4OL. Los números a la derecha son el número de mutaciones somáticas (diferencias de aminoácidos de la secuencia de línea germinal más cercana) en cada región V. La Figura 13 muestra tres gráficas representativas que comparan la unión de Ab C, Ab D y Ab F a 0X OL humano (triángulos con el lado derecho hacia arriba) , 0X4OL de monos cynomolgus (triángulos invertidos) , receptor de IL-1 humana (cuadrado) , y OX40L de ratón (diamante) , de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 2. MFI indica intensidad media de fluorescencia. La Figura 14 muestra una gráfica representativa de datos de un análisis de unión en equilibrio. Los MAb se usaron a una concentración fija de 0.2 nM. Los resultados para Ab F (círculos) , Ab E (triángulos) , Ab C (triángulos invertidos) , y Ab D (diamante) , de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 3, se muestran. La Figura 15 muestra una gráfica representativa de datos de un ensayo de unión competitiva en el cual se expresa OX40L en las HUVECs . Los anticuerpos de prueba usados para competir por la unión por la proteína hFc-OX40R fueron Ab A (cuadro relleno) , Ab E (triángulo invertido relleno) , Ab I (círculo relleno) , Ab B (cuadrado abierto) , Ab H (triángulo abierto) , Ab C (triángulo invertido abierto) , Ab D (diamante abierto) , Ab G (círculo abierto) , y Ab F (símbolo X) , de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 3. La Figura 16 muestra una gráfica representativa de los datos de un ensayo de sangre entera que mide inhibición de producción de IL-2. Los reactivos de bloqueo fueron hFc-OX40R (símbolo X) , Ab E (triángulo volteado hacia abajo) , Ab D (triángulo de lado derecho hacia arriba) , y Ab C (círculos) , de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 4. La Figura 17 muestra una gráfica representativa de datos de un ensayo de co-estimulación que mide la capacidad de Ab C para bloquear la producción de IL-2 por células T humanas, de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 4. La Figura 18 muestra una gráfica representativa de datos de un ensayo de co-estimulación que mide la capacidad de Ab C para bloquear la producción de IL-2 por células T de mono cynomolgous, de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 5. Se probaron células T de 4 donadores de mono cynomolgus. Se usó el co-estimulador hFc-OX40L con una concentración final de 2.5 µg/ml. Los valores resultantes de OD de ELISA se convirtieron en porcentaje de valores de control (POC) para análisis gráfico. La Figura 19 muestra una gráfica representativa de datos de un ensayo de 'co-estimulación que mide la capacidad de Ab C para bloquear la producción de IL-2 por células T de mono cynomolgous, de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 1. Se probaron células T de 4 donadores de mono cynomolgus de la Figura 18. Se usó el co-estimulador hFc-OX40L a una concentración final de 1.25 µg/ml. Los valores resultantes de OD de ELISA se convirtieron en porcentaje de valores de control (POC) para análisis gráfico. La Figura 20 muestra una gráfica representativa de los datos de un ensayo de PBMC que mide la inhibición de la proliferación de células T. Los reactivos de bloqueo fueron Ab E (triángulo invertido relleno) , Ab D (triángulo abierto) , Ab C (círculo relleno claro) , hFc-OX40R (símbolo X), e IgG (círculo relleno oscuro), de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 6. El eje Y es el por ciento de inhibición de la incorporación de 3H (en la presencia de diferentes concentraciones de anticuerpos inhibidores, con relación a la incorporación de 3H con inductor solo (sin IgG) . También se probó el control de IgG de manera separada a diferentes concentraciones.
La Figura 21A-21B muestra una gráfica representativa de datos de un ensayo de unión directa que detecta la unión de Ab C ó cFc-OX40R a 0X4OL expresado en células CHO. Los reactivos de tinción son Ab C (triángulo) , IgG humana (círculo oscuro) , y cFc-OX40R (círculo claro) , de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 7. La Figura 21B muestra un análisis representativo de FACS que compara los tres grupos de tinción con 5 µg/ml de reactivo de tinción. La Figura 22A-22B muestra una gráfica representativa de los datos de un ensayo de neutralización que detecta la capacidad de Ab C obtenido de varias fuentes para neutralizar la unión de cFc-OX40R a OX40L expresado en células CHO. Los agentes neutralizados usados fueron varios lotes de Ab C expresado en células CHO (diamantes, cuadrados y triángulos) y Ab C expresado de células de hibridoma (símbolo X), de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 7.
La Figura 22B muestra el por ciento de inhibición de la unión de cFc-OX40R, de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 7. Los experimentos de ambas figuras usan cFc-OX40R a 5 µg/ml. La Figura 23 muestra un análisis de FACS de la actividad de neutralización de Ab C contra cFc-OX40R a varias concentraciones de Ab C, de acuerdo al trabajo descrito en el Ejemplo 7.
Descripción Detallada de la Invención Los encabezados de sección usados en la presente son para propósitos de organización únicamente y no se deben considerar como limitantes de la materia descrita. Todas las referencias o porciones de referencia citadas en esta solicitud se incorporan expresamente por referencia en la presente en su totalidad para cualquier propósito.
Definiciones Se pueden usar técnicas normales para ADN recombinante, síntesis de oligonucleótidos, y cultivo y transección de tejidos (por ejemplo, electroporación, lipofección) . Las reacciones enzimáticas y técnicas de purificación se deben realizar de acuerdo a las especificaciones del fabricante o como se logra comúnmente en la técnica o como se describe en la presente. Los procedimientos y técnicas anteriores se pueden realizar en general de acuerdo a métodos convencionales bien conocidos en la técnica y como se describe en varias referencias generales y más específicas que se citan y analizan a todo lo largo de la presente especificación. Ver, por ejemplo, Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)). A menos que se proporcionen definiciones específicas, las nomenclaturas utilizadas con respecto a, y los procedimientos de laboratorio y técnicas de, química analítica, química orgánica de síntesis, y química medicinal y farmacéutica descrita en la presente son aquéllas bien conocidas y comúnmente usadas en la técnica. Se pueden usar técnicas normales para síntesis química, análisis químico, preparación farmacéutica, formulación, y distribución, y tratamiento de pacientes. Como se utiliza de acuerdo con la presente descripción, los siguientes términos, a menos que se indique de otro modo, se deben entender que tienen los siguientes significados : El término "polinucleótido aislado" como se usa en la presente debe significar un polinucleótido de origen genómico, sintético o de ADNc, o alguna combinación de los mismos, que por virtud de su origen, el "polinucleótido aislado" (1) no está asociado con nada o una porción de un polinucleótido en el cual se encuentra en naturaleza "polinucleótido aislado", (2) está enlazado a un polinucleótído que no está enlazado en la naturaleza, o (3) no se presenta en la naturaleza como parte de una secuencia más larga. El término "polinucleótido" como se refiere en la presente significa una forma polimérica de nucleótidos de al menos 10 bases de longitud. En ciertas modalidades, las bases pueden comprender al menos uno de ribonucleótidos, desoxirribonucleótidos, y una forma modificada de cualquier tipo de nucleótido. El término incluye formas de hebra individual y doble de ADN. El término "polinucleótido" también abarca secuencias que comprenden SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, y 21. En ciertas modalidades, los polinucleótidos tienen secuencias de nucleótidos que son aproximadamente 90 por ciento, o aproximadamente 95 por ciento, o aproximadamente 96 por ciento, o aproximadamente 97 por ciento, o aproximadamente 98 por ciento, o aproximadamente 99 por ciento idénticas a secuencias de nucleótidos mostradas en las Figuras 1-11. En ciertas modalidades, se proporcionan en la presente polinucleótidos complementarios a polinucleótidos específicos que codifican para ciertos polipéptidos descritos en la presente. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRla, CDR2a, ó CDR3a, en donde CDRla comprende la secuencia de aminoácidos a b c d e, en donde el aminoácido a se selecciona de se selecciona de asparagina, treonina, fenilalanina, o serina; el aminoácido b se selecciona de alanina o tirosina; el aminoácido c- se selecciona de triptofano, tirosina o glicina; el aminoácido d se selecciona de metionina o triptofano; y el aminoácido e se selecciona de serina, asparagina, o histidina; en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t, en donde el aminoácido f se selecciona de arginina o valina; el aminoácido g es isoleucina; el aminoácido h se selecciona de lisina, tirosina, o triptofano; el aminoácido i se selecciona de serina, isoleucina, tirosina, treonina, o arginina; el aminoácido j se selecciona de lisina, serina, o ácido aspártico; el aminoácido k se selecciona de treonina o glicina; el aminoácido 1 se selecciona de ácido aspártico, serina, o ácido glutámico; el aminoácido m se selecciona de glicina, treonina, o asparagina; el aminoácido n se selecciona de glicina, asparagina, lisina, o treonina; el aminoácido o se selecciona de treonina o tirosina; el aminoácido p se selecciona de treonina, isoleucina, asparagina o tirosina; el aminoácido q se selecciona de ácido aspártico, prolina o alanina; el aminoácido r se selecciona de tirosina, serina, o ácido aspártico; el aminoácido s se selecciona de glicina, alanina, leucina o serina; y el aminoácido t se selecciona de alanina, lisina o valina; en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f ' , en donde el aminoácido u se selecciona de ácido aspártico, glicina, metionina o serina; el aminoácido v se selecciona de arginina, glicina, ácido aspártico, tirosina o fenilalanina; el aminoácido w se selecciona de tirosina, valina, glicina o leucina; el aminoácido x se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o triptofano; el aminoácido y se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o isoleucina; el aminoácido z se selecciona de glicina, tirosina, prolina, valina- o fenilalanina; el aminoácido a' se selecciona de ácido glutámico, serina, tirosina, triptofano o alanina; el aminoácido b' se selecciona de fenilalanina, glicina, tirosina, treonina o serina; el aminoácido c' se selecciona de prolina, tirosina, serina, lisina o glicina; el aminoácido d' se selecciona de fenilalanina, tirosina o glicina; el aminoácido e' se selecciona de ácido aspártico, tirosina, arginina o histidina; y el aminoácido f se selecciona de tirosina, valina, glicina, arginina o treonina; y en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDR2a, que comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p r s t g', en donde f hasta t es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido g' se selecciona de prolina, lisina o serina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDR2á que comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t g' h', en donde f hasta g' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido h' se selecciona de valina o glicina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDR2a que comprende una secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p r s t g' h' i' en donde f hasta h' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido i' es lisina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDR2a que comprende la secuencia de aminoácidos f g h i k 1 m n o p q r s t g' h' i' j ' en donde f hasta i' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido j' es glicina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' en donde u hasta f es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido k' se selecciona de ácido aspártico, metionina, asparagina, tirosina o valina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' en donde u hasta k' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido 1' se selecciona de histidina, ácido aspártico, serina, tirosina o fenilalanina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDR3 que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' en donde u hasta 1' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido m' se selecciona de valina, ácido aspártico o glicina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' en donde u hasta m' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido n' se selecciona de fenilalanina, metionina o tirosina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' o' en donde u hasta n' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido o' es ácido aspártico. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' o' p' en donde u hasta o' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido p' se selecciona de valina o tirosina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos dos regiones de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRla, CDR2a ó CDR3a, en donde el polip.éptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende CDRla, CDR2a y CDR3a, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X OL. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región variable de cadena pesada de anticuerpo. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región variable de cadena pesada de anticuerpo humano. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región constante de cadena pesada. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptído que comprende una región constante de cadena pesada humana. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 6; SEQ ID NO: 10; SEQ ID NO: 14; SEQ ID NO: 18; ó SEQ ID NO: 22. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región constante de cadena pesada no humana . En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región constante de cadena pesada de una especie diferente a la humana . En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de al menos uno de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 2; de los aminoácidos 69 a 87 de SEQ-. ID. No.: 2; de los aminoácidos 120 a 135 de SEQ. ID. No.: 2; de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 6; de los aminoácidos 69 a 84 de SEQ. ID. No . : 6; de los aminoácidos 117 a 134 de SEQ. ID. No.: 6; de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 10; de los aminoácidos 69 a 85 de SEQ. ID. No.: 10; de los aminoácidos 118 a 135 de SEQ. ID. No.: 10; de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 14; de los aminoácidos 69 a 84 de SEQ. ID. No. : 14; de los aminoácidos 117 a 131 de SEQ. ID. No. : 14; de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No. : 18; de los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No. : 18; de los aminoácidos 120 a 133 de SEQ. ID. No.: 18; de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 22; de los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No.: 22; o de los aminoácidos 120 a 131 de SEQ. ID. No.: 22; en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpos, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos dos CDR de SEQ. ID. Nos.: 2, 6, 10, 14, 18 o 22. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende tres de la CDR de SEQ. ID. Nos.: 2, 6, 10, 14, 18 o 22. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No. : 2, los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No.: 2 y los aminoácidos 120 a 135 de SEQ. ID. No.: 2. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No. : 6, los aminoácidos 69 a 84 de SEQ. ID. No. : 6, y los aminoácidos 117 a 134 de SEQ. ID. No.: 6. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia, que codifica para un polipéptido que comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 10, aminoácidos 69 a 85 de SEQ. ID. No.: 10, y aminoácidos 118 a 135 de SEQ. ID. No.: 10. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 14, aminoácidos 69 a 84 de SEQ. ID. No . : 14, y aminoácidos 117 a 131 de SEQ. ID.
No.: 14. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 18, los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No.: 18, y los aminoácidos 120 a 133 de SEQ. ID. No.: 18. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ.. ID. No.: 22, los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No.: 22, y los aminoácidos 120 a 131 de SEQ. ID. No.: 22. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b ó CDR3b, en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl, en donde el aminoácido al es arginina; el aminoácido bl se selecciona de alanina o serina; el aminoácido cl es serina; el aminoácido di es glutamina; el aminoácido el se selecciona de glicina o serina; el aminoácido fl se selecciona de isoleucina, valina, o leucina; el aminoácido gl se selecciona de serina o valina; el aminoácido hl se selecciona de asparagina, serina o histidina; el aminoácido il se selecciona de histidina, asparagina, serina o tirosina; el aminoácido jl se selecciona de leucina, tirosina o ácido aspártico; y el aminoácido kl se selecciona de valina, leucina, glicina o asparagina; en donde CDR2b comprende la secuencia de aminoácidos 11 ml ni ol pl ql rl, en donde el aminoácido 11 se selecciona de alanina, glicina o lisina; el aminoácido ml se selecciona de alanina o lisina; el aminoácido ni se selecciona de serina o fenilalanina; el aminoácido ol se selecciona de treonina, serina o asparagina; el aminoácido pl se selecciona de leucina o arginina; el aminoácido ql se selecciona de glutamina, alanina o fenilalanina; y el aminoácido rl se selecciona de serina o treonina; en donde CDR3b comprende la secuencia de aminoácidos si ti ul vi wl xl yl zl al', en donde el aminoácido si se selecciona de glutamina o metionina; y el aminoácido ti se selecciona de lisina o glutamina; el aminoácido ul se selecciona de tirosina, alanina, serina o fenilalanina; el aminoácido vi se selecciona de asparagina, glicina, treonina o tirosina; el aminoácido wl se selecciona de serina, glicina o glutamina; el aminoácido xl se selecciona de alanina, serina, isoleucina o treonina; el aminoácido yl se selecciona de prolina o leucina; el aminoácido zl se selecciona de leucina, triptofano o fenilalanina; y el aminoácido al' es treonina; y en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una secuencia que codifica para CDRlb que comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl', en donde al hasta kl es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido bl' se selecciona de asparagina o alanina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDRlb que codifica la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' (SEQ ID NO. 23) en donde al hasta bl' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido cl' es treonina. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDRlb que comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl ' cl' di' (SEQ ID NO. 24), en donde al hasta cl' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido di' es tirosina. . En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para CDRlb que comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' di' el' (SEQ ID NO. 25), en donde al hasta di' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido el' es leucina. En ciertas modalidades, un polinucleótído comprende una secuencia que codifica para CDRlb que comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' di' el, fl (SEQ ID NO. 26), en donde al hasta el' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido fl' es serina.
En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos dos regiones de determinación de complementariedad (CDR) seleccionadas de CDRlb, CDR2b o CDR3b, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un . polipéptido que comprende CDRlb, CDR2b y CDR3b, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región variable de cadena ligera de anticuerpo. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región variable de cadena ligera de anticuerpo humano. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región constante de cadena ligera. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región constante de cadena ligera humana. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ . ID . No . : 4 ; SEQ . ID . No. : 8 ; SEQ . ID . No.: 12; SEQ. ID. No.: 16; o SEQ. ID. No.: 20. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región constante de cadena ligera no humana. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una región constante de cadena ligera de una especie diferente de la humana . En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de al menos uno de los aminoácidos 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 4; de los aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No . : 4; de los aminoácidos 111 a 119 de SEQ. ID. No. : 4; de los aminoácidos 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 8; de los aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No.: 8; de de los aminoácidos 111 a 119 de SEQ, ID. No.: 8; de los aminoácidos 44 a 59 de SEQ. ID. No.: 12; de los aminoácidos 75 a 81 de SEQ. ID. No.: 12; de los aminoácidos 114 a 122 de SEQ. ID. No.: 12; de los aminoácidos 44 a 55 de SEQ. ID. No. : 16; de los aminoácidos 71 a 77 de SEQ. ID. No. : 16; de los aminoácidos 110 a 118 de SEQ. ID. No . : 16; de los aminoácidos 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 20; de los aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No.: 20; o de los aminoácidos 111 a 119 de SEQ. ID. No.: 20, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos dos de las CDR de SEQ. ID. Nos.: 4, 8, 12, 16 o 20. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende tres de las CDR de SEQ. ID. Nos.: 4, 8, 12, 16 o 20. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende los aminoácidos 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 4, los aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No.: 4, y los aminoácidos 111 a 119 de SEQ.. ID. No.: 4. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende los aminoácidos 46 a 56 de S?Q. ID. No. : 8, los aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No. : 8 y los aminoácidos 111 a 119 de SEQ. ID. No.: 8. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptído que comprende los aminoácidos 44 a 59 de SEQ. ID. No.: 12, los aminoácidos 75 a 81 de SEQ. ID. No.: 12, y los aminoácidos 114 a 122 de SEQ. ID. No.: 12. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende los aminoácidos 44 a 55 de SEQ. ID. No.: 16, los aminoácidos 71 a 77 de SEQ. ID. No.: 16, y los aminoácidos 110 a 118 de SEQ. ID. No.: 16. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende los aminoácidos 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 20, los aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No.: 20 y los aminoácidos 111 a 119 de SEQ. ID. No.: 20. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para cadenas pesada y ligera de anticuerpo. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para una región variable de cadena pesada de anticuerpo. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para una región variable de ' cadena pesada de anticuerpo humano. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para regiones variables de cadena ligera de anticuerpo. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para una región variable de cadena ligera de anticuerpo humano. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para una región constante de cadena pesada de anticuerpo. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para una región constante de cadena pesada de anticuerpo humano. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polipéptidos que codifican para una región constante de cadena pesada de anticuerpo de una especie diferente de la humana. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para regiones constantes de cadena ligera de anticuerpo. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para una región constante de cadena ligera de anticuerpo humano. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para una región constante de cadena ligera de anticuerpo de una especie diferente de la humana. En ciertas modalidades, esta solicitud analiza ciertos polinucleótidos que codifican para un anticuerpo de cadena individual . En ciertas modalidades, estos polinucleótidos de cadena ligera y pesada de anticuerpo y polipéptidos son polinucleótidos y polipéptidos de cadena pesada y de anticuerpo humano. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ. D. Nos.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19 o 21, y secuencias que tienen supresiones, adiciones y/o sustituciones de uno o más nucleótidos de estas secuencias. En ciertas modalidades, un polinucleótido comprende una secuencia de nucleótidos que codifica para una secuencia de aminoácidos que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ. ID. Nos.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 o 22. En ciertas modalidades, las secuencias de región variable que comprenden regiones de determinación de complementariedad CDR) , por ejemplo CDR1 hasta CDR3 se proporcionan. En ciertas modalidades, los polinucleótidos y polipéptidos de región variable son polinucleótido y polipéptidos de región variable humana. El término "oligonucleótido" referida en la presente incluye oligonucleótidos que se presentan de forma natural y/o modificados enlazados conjuntamente por enlaces de oligonucleótidos que se presentan de forma natural y/o que no se presentan de forma natural. Los oligonucleótidos son un subconjunto de polinucleótidos que comprenden en general una longitud de 200 bases o menos. En ciertas modalidades, los oligonucleótidos son de 10 a 60 bases de longitud. En ciertas modalidades, los oligonucleótidos son de 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 a 40 bases de longitud. Los oligonucleótidos pueden ser de hebra individual o de doble hebra, por ejemplo, para el uso en la construcción de un mutante génico. Los oligonucleótidos de la invención pueden ser oligonucleótidos homosentido o antisentido. El término "nucleótidos que se presentan de forma natural" incluye desoxirribonucleótidos y ribonucleótidos. Los desoxirribonucleótidos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, adenosina, guanina, citosina, y timidina. Los ribonucleótidos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, adenosina, citosina, timidina y uricilo. El término "nucleótidos modificados" incluye nucleótidos con grupos azúcar modificados o no sustituidos y similares. El término "enlaces de olígonucleótido" incluye enlaces de oligonucleótidos tal como fosforotioato, fosforoditioato, fosforoselenoato, fosforodiselenoato, fosforoanilotioato, fosforaniladato, fosforoamidato, y similares. Ver, por ejemplo, La Planche et al. Nucí . Acids . Res . 14:9081 (1986); Stec et al., J". Am. Chem . Soc . 106:6077 (1984); Stein et al., Nucí . Acids . Res . 16:3209 (1988); Zon et al., Anti -Cáncer Drug Desing 6:539 (1991); Zon et al. Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, pp. 87-108 (F. Eckstein, Ed. , Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec et al., Patente de los Estados Unidos No. 5,151,510; Uhlmann y Peyman Chemical Reviews 90:543 (1990). En ciertos casos, un oligonucleótido puede incluir una marca para detección. El término "polipéptido aislado" referida en la presente significa un polipéptido codificado por ADNc, ARN recombinante u origen sintético o alguna combinación de los mismos, que (1) está libre de al menos algunas proteínas con las cuales normalmente se encontrará, (2) está esencialmente libre de otras proteínas de la misma fuente, por ejemplo, de la misma especie, (3) se expresa por una célula de una especie diferente, o (4) no se presenta en la naturaleza. El término "polipéptido" se usa en la presente como un término genérico para referirse a cualquier polipéptido que comprende dos o más aminoácidos unidos entre sí por enlaces de péptidos o enlaces de péptidos modificados, es decir, isosteres de péptido. "Polipéptido" se refiere a ambas cadenas cortas, referidas comúnmente como péptidos, oligopeptidos u oligómeros, y a cadenas más largas, referidas en general como proteínas. Los polipéptidos pueden contener aminoácidos diferentes de aquellos codificados normalmente por un codón. Los polipéptidos incluyen secuencias de aminoácidos modificadas ya sea por procesos naturales, tal como procesamiento pos-transduccional , o por técnicas de modificación química que son bien conocidas en la técnica. Estas modificaciones se describen bien en textos básicos y en monografías más detalladas, así como en una voluminosa literatura de investigación. Las modificaciones pueden presentarse en cualquier lugar de un polipéptido, incluyendo la estructura del péptido, y las cadenas laterales de aminoácidos y los términos amino y carboxi . Estas modificaciones pueden estar presentes al mismo grado o grado variable en varios sitios en un polipéptido dado. También, en ciertas modalidades, un polipéptido dado puede contener muchos tipos de modificaciones tal como supresiones, adiciones, y/o sustituciones de uno o más aminoácidos de una secuencia nativa. En ciertas modalidades, los polipéptidos se pueden ramificar como resultado de la ubiquitinación, y en ciertas modalidades, pueden ser cíclicos, con o sin ramificación. Los polipéptidos cíclicos, ramificados y cíclicos, ramificados pueden resultar de procesos naturales de pos-traducción o se pueden elaborar por métodos de síntesis. Las modificaciones incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, acetilación, acilación, ADP-ribosilación, amidación, biotinilación, unión covalente de flavina, unión covalente de una porción heme, unión covalente de nucleótido o derivado de nucleótido, unión covalente de un lípido derivado de un lípido, unión covalente de fosfotidilinositol , reticulación, ciclización, formación de enlaces de disulfuro, demetilación, formación de reticulaciones covalentes, formación de cistína, formación de piroglutamato, formilación, gamma-carboxilación, glicosilación, formación de ancla GPI, hidroxilación, yodinación, mutilación, miristoilación, oxidación, procesamiento proteolítico, fosforilación, prenilación, racemización, selenoilación, sulfatación, adición de aminoácidos mediada por ARN de transferencia a las proteínas tal como arginilación y ubiquitinación. El término "polipéptido" también abarca secuencias que comprenden las secuencias de aminoácidos de la cadena pesada y/o cadena ligera de Ab A, Ab B, Ab C, Ab D, Ab E, Ab F, Ab G, Ab H, Ab I o Ab J como se describe más adelante (ver SEQ. ID. Nos.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 y 22 para ciertas de estas secuencias) , y secuencias que tiene supresiones, adiciones y/o sustituciones de uno o más aminoácidos de estas secuencias. En ciertas modalidades, ciertas secuencias polipeptídicas comprenden al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) . En ciertas modalidades, un polipéptido comprende al menos una región de determinación de complementaridad (CDR) seleccionada de CDRla, CDR2a 0 CDR3a. en conde CDRla comprende la secuencia de aminoácidos a b c d e, en donde el aminoácido a se selecciona de asparagina, treonina, fenilalanina o serina; el aminoácido b se selecciona de alanina o tirosina; el aminoácido c se selecciona de triptofano, tirosina o glicina; el aminoácido d se selecciona de metionina o triptofano; y el aminoácido e se selecciona de serina, asparagina, o histidina; en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t, en donde el aminoácido f se selecciona de arginina o valina; el aminoácido g se selecciona.de isoleucína; el aminoácido h se selecciona de lisina, tirosina o triptofano; el -aminoácido i se selecciona de serina, isoleucina, tirosina, treonina o arginina; el aminoácido j se selecciona de lisina, serina o ácido aspártico; el aminoácido k se selecciona de treonina o glicina; el aminoácido 1 se selecciona de ácido aspártico, serina o ácido glutámico; el aminoácido m se selecciona de glicina, treonina o asparagina; el aminoácido n se selecciona de glicina, asparagina, lisina o treonina; el aminoácido o se selecciona de treonina o tirosina; el aminoácido p se selecciona de treonina, isoleucina, asparagina o tirosina; el aminoácido q se selecciona de ácido aspártico, prolina o alanina; el aminoácido r se selecciona de tirosina, serina o ácido aspártico; el aminoácido s se selecciona de glicina, alanina, leucina o serina; y el aminoácido t se selecciona de alanina, lisina o valina; en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f ' , en donde el aminoácido u se selecciona de ácido aspártico, glicina, metíonina, o serina; el aminoácido v se selecciona de arginina, glicina, ácido aspártico, tirosina o fenilalanina; el aminoácido w se selecciona de tirosina, valina, glicina o leucina; el aminoácido x se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o triptofano; el aminoácido y se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o isoleucina; el aminoácido z se selecciona de glicina, tirosina, prolina, valina o fenilalanina; el aminoácido a' se selecciona de ácido glutámico, serina, tirosina, triptofano, o alanina; el aminoácido b' se selecciona de fenilalanina, glicina, tirosina, treonina o serina; el aminoácido c' se selecciona de prolina, tirosina, serina, lisina o glicina; el aminoácido d' se selecciona de fenilalanina, tirosina, o glicina; el aminoácido e' se selecciona de ácido aspártico, tirosina, arginina, o histidina; y el aminoácido f se selecciona de tirosina, valina, glicina, arginina o treonina, y en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t g', en donde f hasta t es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido g' se selecciona de prolina, lisina o serina. En ciertas modalidades, CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t g' h' , en donde f hasta g' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido h' se selecciona de valina o glicina. En ciertas modalidades, CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t g' h' i' en donde f hasta h' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido i' es lisina. En ciertas modalidades, CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t g' h' i' j' en donde f hasta i' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido j ' es glicina. En ciertas modalidades, CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' en donde u hasta f es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido k' se selecciona de ácido aspártico, metionina, asparagina, tirosina o valina. En ciertas modalidades, CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' , en donde u hasta k' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido 1' se selecciona de histidina, ácido aspártico, serina, tirosina o fenilalanina. En ciertas modalidades, CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' , en donde u hasta 1' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido m' se selecciona de valina, ácido aspártico o glicina. En ciertas modalidades, CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' en donde u hasta m' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido n' se selecciona de fenilalanina, metionina, o tirosina. En ciertas modalidades, CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' o' en donde u hasta n' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido o' es ácido aspártico. En ciertas modalidades, CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' o' p' en donde u hasta o' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido p' se selecciona de valina o tirosina. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende al menos dos regiones de determinación de complementariedad (CDR) seleccionados de CDRla, CDR2a o CDR3a, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende CDRla, CDR2a y CDR3a, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región variable de cadena pesada de anticuerpo. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región variable de cadena pesada de anticuerpo humano. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región constante de cadena pesada. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región constante de cadena pesada humana. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una secuencia - de aminoácidos como se expone en SEQ. ID. No. : 2; SEQ. ID.
No.: 6; SEQ. ID. No.: 10; SEQ. ID. No.: 14; SEQ. ID. No.: 18 o SEQ. ID. No.: 22. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región constante de cadena pesada no humana. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región constante de cadena pesada de una especie diferente de la humana. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende al menos una de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de al menos uno de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 2; de los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No.: 2; de los aminoácidos 120 a 135 de SEQ. ID. No.: 2; de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No. : 6; de los aminoácidos 69 a 84 de SEQ. ID. No . : 6; de los aminoácidos 117 a 134 de SEQ. ID. No . : 6; de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 10; de los aminoácidos 69 a 85 de SEQ. ID. No.: 10; de los aminoácidos 118 a 135 de SEQ. ID. No.: 10; de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No. : 14; de los aminoácidos 69 a 84 de SEQ. ID. No.: 14; de los aminoácidos 117 a 131 de SEQ. ID. No. : 14; de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 18; de los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No.: 18; de los aminoácidos 120 a 133 de SEQ. ID. No.: 18; de los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 22; de los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No.: 22; o de los aminoácidos 120 a 131 de SEQ. ID. No. : 22, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X40L. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende al menos dos de las CDR de SEQ. ID. Nos.: 2, 6, 10, 14, 18 o 22. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende al menos tres de las CDR de SEQ. ID. Nos.: 2, 6, 10, 14, 18 o 22. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende los aminoácidos 50 y 54 de SEQ. ID. No.: 2, los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No.: 2, y los aminoácidos 120 a 135 de SEQ. ID. No.: 2. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 6, los aminoácidos 69 a 84 de SEQ. ID. No.: 6, y los aminoácidos 117 a 134 de SEQ. ID. No.: 6. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No. : 10, los aminoácidos 69 a 85 de SEQ. ID. No . : 10; y los aminoácidos 118 a 135 de SEQ. ID. No.: 10. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 14, los aminoácidos 69 a 84 de SEQ. ID. No.: 14, los aminoácido 117 a 131 de SEQ. ID. No.: 14. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No. : 18, los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No.: 18, los aminoácidos 120 a 133 de SEQ. ID. No.: 18. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ. ID. No.: 22, los aminoácidos 69 a 87 de SEQ. ID. No.: 22, los aminoácidos 120 a 131 de SEQ. ID. No.: 22. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b o CDR3b, en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl, en donde el aminoácido al es arginina; el aminoácido bl se selecciona de alanina o serina; el aminoácidocl es serina; el aminoácido di es glutamina; el aminoácido el se selecciona de glicina o serina; el aminoácido fl se selecciona de isoleucina, valina o leucina; el aminoácido gl se selecciona de serina o valina; el aminoácido hl se selecciona de asparagina, serina o histidina; el aminoácido il se selecciona de histidina, asparagina, serina o tirosina; el aminoácido jl se selecciona de leucina, tirosina o ácido aspártico; y el aminoácido kl se selecciona de valina, leucina, glicina o asparagína; en donde CDR2b comprende la secuencia de aminoácidos 11 ml ni ol pl ql rl, en donde el aminoácido 11 se selecciona de alanina, glicina o lisina; el aminoácidoml se selecciona de alinina o lisina; el aminoácido ni se selecciona de serina o fenílalanína; el aminoácido ol se selecciona de treonina, serina o asparagina; el aminoácido pl se selecciona de leucina o arginína; el aminoácido ql se selecciona de glutamina, alanina o fenilalanina; y el aminoácido rl se selecciona de serina o treonina; en donde CDR3b comprende la secuencia de aminoácidos si ti ul vi wl xl yl zl al', en donde el aminoácido si se selecciona de glutamina o metionina; y el aminoácido ti se selecciona de lisina o glutamina; el aminoácido ul se selecciona de tirosina, alanina, serina, o fenilalanina; el aminoácido vi se selecciona de asparagina, glicina, treonina, o tirosina; el aminoácido wl se selecciona de serina, glicina o glutamina; el aminoácido xl se selecciona de alanina, serina, isoleucina o treonina; el aminoácido yl se selecciona de prolina o léucina; el aminoácido zl se selecciona de leucina, triptofano o fenilalanina; y el aminoácido al' es treonina; y en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' (SEQ ID NO. 23) en donde al hasta kl es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido bl' se selecciona de asparagina o alanina. En ciertas modalidades, CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' (SEQ ID NO. 24) en donde al hasta bl ' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y el aminoácido cl' es treonina. En ciertas modalidades, CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' di' (SEQ ID NO. 25) en donde al hasta cl' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido di' es tirosina. En ciertas modalidades, CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' di' el' fl' (SEQ ID NO. 26) en donde al hasta el' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde aminoácido el' es leucina. En ciertas modalidades, CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl ' cl' di' el' en donde al hasta el' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido fl' es serina. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende al menos dos regiones de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b o CDR3b, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende CDRlb, CDR2b y CDR3b, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz a la unión de OX40L. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región variable de cadena variable de anticuerpo. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región variable de cadena ligera de anticuerpo humano. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región constante de cadena ligera. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región constante de cadena ligera humana. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ. ID. No.: 4, SEQ. ID. No.: 8, SEQ. ID. No.: 12, SEQ. ID. No.: 16 o SEQ. ID. No.: 20. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región constante de cadena ligera no humana. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende una región constante de cadena ligera de una especie diferente de l'a humana. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionado de al menos uno de los aminoácido 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 4; aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No.: 4; aminoácidos 111 a 119 de SEQ. ID. No. : 4; aminoácidos 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 8; aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No.: 8; aminoácidos 111 a 119 de SEQ. - ID. No.: 8; aminoácido 44 a 59 de SEQ. ID. No.: 12; aminoácidos 75 a 81 de SEQ. ID. No.: 12; aminoácidos 114 a 122 de SEQ. ID. No.: 12; aminoácidos^ 44 a 55 de SEQ. ID. No.: 16; aminoácidos 71 a 77 de SEQ. ID. No.: 16; aminoácidos 110 a 118 de SEQ. ID. No.: 16; aminoácidos 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 20; aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No.: 20; aminoácidos 111 a 119 de SEQ. ID. No . : 20, en donde el polipéptido, en asociación con una caderta pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X40L. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende al menos dos de las CDR de SEQ. ID. Nos.: 4, 8, 12, 16, o 20. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende al menos tres de las CDR de SEQ. ID. Nos. : 4, 8, 12, 16 o 20. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende os aminoácidos 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 4, los aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No.: 4, y los aminoácidos 111 a 119 de SEQ. ID. No.: 4. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende los aminoácidos 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 8, los aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No . : 8, y los aminoácidos 111 a 119 de SEQ. ID. No.: 8. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende los aminoácidos 44 a 59 de SEQ. ID. No-.: 12, los aminoácidos 75 a 81 de SEQ. ID. No.: 12, los aminoácidos 114 a 122 de SEQ. ID. No.: 12. En ciertas modalidades, un polipéptido comprende los aminoácidos 44 a 55 de SEQ. ID. No.: 16, los aminoácidos 71 a 77 de SEQ. ID. No. : 16, y los aminoácidos 110 a 118 de SEQ. ID. No. : 16. En ciertas modalidades, un polipéptído comprende los aminoácidos 46 a 56 de SEQ. ID. No.: 20, los aminoácidos 72 a 78 de SEQ. ID. No . : 20, y los aminoácidos 111 a 119 de SEQ. ID. No. : 20. El término "que se presenta de forma natural" como se usa en la presente como se aplica a un objeto se refiere al hecho que un objeto se puede encontrar en la naturaleza. Por ejemplo, una secuencia de polipéptido o polinucleótido que está presente en un - organismo (incluyendo virus) que se puede aislar de una fuente en la naturaleza y que no se ha modificado de manera intencional por el hombre en el laboratorio o de otra manera o que se presente de otra manera de forma natural . El término "operablemente enlazado" como se usa en la presente se refiere a componentes que están en una relación que les permite funcionar de su manera propuesta. Por ejemplo, una secuencia de control "operablemente enlazada" a una secuencia codificante se liga de una manera tal que la expresión de la secuencia codificante se logra bajo condiciones compatibles con las secuencias de control. El término "secuencia de control" como se usa en la presente se refiere a secuencias de polinucleótido que pueden efectuar la expresión y procesamiento de secuencias codificantes a las cuales se ligan. La naturaleza de estas secuencias de control puede diferir dependiendo del organismo hospedador. De acuerdo a ciertas modalidades, las secuencias de control para procariotas pueden incluir promotor, sitio de unión ribosómico, y secuencia de terminación de trascripción. De acuerdo a ciertas modalidades, las secuencias de control para eucariotas pueden incluir promotores, íntensificadores, y secuencia de terminación de trascripción. En ciertas modalidades, "secuencias de control" pueden incluir secuencias guía y/o secuencias de compañero de fusión. La identidad y similitud de polipéptidos relacionados se puede calcular fácilmente por métodos conocidos. Estos métodos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, aquellos descritos en Computacional Molecular Biology, Lesk, A.M. , ed. , Oxford University Press, New York (1988) ; Biocomputing; Informatics and Genome Projects, Smith, D.S., ed. , Academia Press, New York (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A.M. , y Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey (1994); Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G. , Academia Press (1987) ; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. y Devereux, J. , eds., M. Stockton Press, New York (1991); y Carrillo et al., SIAM J. Applied Math. , 48:1073 (1988). En ciertas modalidades, los polipéptidos tienen secuencia de aminoácidos que son de aproximadamente 90 por ciento, o aproximadamente 95 por ciento, o aproximadamente 96, por ciento, o aproximadamente 97 por ciento, o aproximadamente 98 por ciento, o aproximadamente 99 por ciento idénticas a las secuencias de aminoácidos mostradas en las Figuras 1-11- Ciertos métodos para determinar la identidad se diseñan para dar la correspondencia más grande entre las secuencias probadas. Ciertos métodos para determinar la identidad se describen en programas de computadora públicamente disponibles. Ciertos métodos de programas de computadora para determinar la identidad entre dos secuencias incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, el paquete de programa GCG, que incluye GAP (Devereux et al., Nucí . Acid. Res . , 12:387 (1984); Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wl , BLASTP, BLASTN, and FASTA (Altschul et al., J". Mol . Biol . , 215:403-410 (1990) ) . El programa BLASTX está públicamente disponible del National Center for Biotechnology Information (NCBI) y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, MD 20894; Altschul et al., supra. (1990)). También se puede usar el algoritmo de Smith-Waterman bien conocido para determinar la identidad. Ciertos esquemas de alineación para alinear dos secuencias de aminoácidos pueden dar por resultado la correspondencia de sólo una región corta de las dos secuencias, y esta pequeña región alineada puede tener muy alta identidad de secuencia aunque no haya relación significativa entre las dos secuencias de longitud completa. Por consiguiente, en ciertas modalidades, el método de alineación seleccionado (programa de GAP) dará por resultado una alineación que abarca al menos 50 aminoácidos contiguos del polipéptido objetivo. Por ejemplo, usando el algoritmo de computadora GAP (Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wl) , se alinean dos polipéptidos para los cuales se va a determinar el por ciento de identidad de secuencia, para la correspondencia óptima de sus respectivos aminoácidos (el "intervalo correspondido" como se determina por el algoritmo) . En ciertas modalidades, una penalidad de abertura de separación (que se calcula como 3X la diagonal promedio; la "diagonal promedio" es el promedio de la diagonal de la matriz de comparación que se usa; la "diagonal" es la clasificación a un número asignado a cada correspondencia perfecta de aminoácidos por la matriz de comparación particular) y una penalidad de extensión de separación (que usualmente es 1/10 veces la penalidad de abertura de separación) , así como una matriz de comparación tal como PAM 250 O BLOSUM 62 se usan en unión con el algoritmo. En ciertas modalidades, también se usa por el algoritmo una matriz de comparación normal (ver Dayhoff et al., Atlas of Protein Sequence and Structure, 5(3) (1978) para la matriz de comparación de PAM 250; Henikoff et al, Proc . Nati . Acad. Sci EUA, 89:10915-10919 (1992) para la matriz de comparación BLOSUM 62) . En ciertas modalidades, los parámetros para una comparación de secuencias de polipéptido incluyen lo siguiente : Algoritmo: Needleman et al., J. Mol . Biol . , 48:443-453 (1970) ; Matriz de comparación: BLOSUM 62 de Henikoff et al. , supra (1992) ; Penalidad de Separación: 12 Penalidad de Longitud de Separación: 4 Umbral de Similitud: 0 El programa GAP se puede usar con los parámetros anteriores. En ciertas modalidades, los parámetros mencionados anteriormente son los parámetros por defecto para comparaciones de polipéptidos (junto con ninguna penalidad para separaciones terminales) usando el algoritmo de GAP. Como se usa en la presente, los veinte aminoácidos convencionales y sus abreviaciones siguen el uso convencional. Ver Immunology-A Synthesis (2nd Edition, E. S. Golub y D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991)). Los estereoisómeros (por ejemplo, D-aminoácidos) de los veintidós aminoácidos convencionales, aminoácidos no naturales tal como aminoácidos a-, a-disustituidos, aminoácidos de N-alquilo, ácido láctico, y otros aminoácidos no convencionales también son componentes adecuados para los polipéptidos de la presente invención. Los 'ejemplos de aminoácidos no convencionales incluyen, de manera enunciativa y sin limitación: 4-hidroxipropolina, ?-hidroxiglutamato, e -N,N,N-trimetillsina, e -N-acetillisina, O-fosfoserina, N-acetilserina, N-formilmetionina, 3-metilhistidina, 5-hidroxilisina, s-N-metilarginina, y otros aminoácidos similares e aminoácidos (por ejemplo, 4-hidroxiprolina) . En la notación de polipéptidos usada en la presente, la dirección izquierda es la dirección aminoterminal y la dirección derecha es la dirección carboxi-terminal, de acuerdo con el uso normal y convencíó-normal .
De manera similar, a menos que se especifique de otro modo, el extremo izquierdo de las secuencias de polinucleótido de hebra individual es el extremo 5'; la dirección derecha de las secuencias de polinucleótido de doble hebra se refiere como la dirección 5' . La dirección de 5' a 3' de adición de los transcriptos de ARN nacientes se refiere como la dirección de trascripción. Las regiones de secuencia en la hebra de ADN que tienen la misma secuencia como el ARN y que están 5' al extremo 5' del trascripto de ARN se refieren como "secuencias en la dirección 5'"; las regiones de secuencia en la hebra de ADN que tienen la misma secuencia como el ARN y que están 3' en la dirección 3 ' del trascripto de ARN se refieren como "secuencias en dirección 3'". Las sustituciones conservadoras de aminoácidos pueden abarcar residuos de aminoácidos que no se presentan de forma natural, que se incorporan típicamente por síntesis química de péptidos en lugar de por síntesis en sistemas biológicos . Estos incluyen peptidomiméticos y otras formas invertidas o volteadas de porciones de aminoácidos. Los residuos que se presentan . de forma natural se pueden dividir en clases en base a las propiedades comunes de la cadena lateral : 1) hidrófobos; norleucina, Met, Ala, val, Leu, He,- 2) hidrófobos, neutrales: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; 3) ácidos: Asp, Glu; 4) básicos: His, Lys, Arg; 5) residuos que tienen influencia en la orientación de la cadena: Gly, Pro; y 6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe. Por ejemplo, las sustituciones no conservadoras pueden comprender el intercambio de un miembro de una de estas clases por un miembro de otra clase. Al hacer estos cambios, de acuerdo a ciertas modalidades, se puede considerar el índice hidropático de los aminoácidos. A cada aminoácido se le ha asignado un índice hidropático en base a su hidrofobicidad y características de carga. Estos son: isoleucina (+ 4.5); valina (+ 4.2); leucina (+ 3.8); fenilalanina (+ 2.8); cisteína/cistina (+ 2.5); metionina (+ 1.9); alanina (+ 1.8); glicina (- 0.4); treonina (- 0.7); serina (- 0.8); triptofano (- 0.9); tirosina (- 1.3); prolina (- 1.6); histidina (- 3.2); glutamato (- 3.5); glutamina (- 3.5); aspartato (- 3.5); asparagina (- 3.5); lisina (- 3.9); y arginina (- 4.5) . La importancia del índice hidropático de los aminoácidos al conferir función biológica interactiva en una proteína se entiende en la técnica. Kyte et al., J. Mol .
Biol . , 157:105-131 (1982). Se conoce que ciertos aminoácidos se pueden sustituir por otros aminoácidos que tienen una puntuación o índice hidropático similar y aún retener una actividad biológica similar. Al hacer cambios al índice hidropático, en ciertas modalidades, se incluye la substitución de aminoácidos cuyos índices hidropáticos están dentro del ± 2. En ciertas modalidades, se incluyen aquellos que están dentro de ± 1, y en ciertas modalidades, se incluyen aquellos dentro del ± 0.5. También se entiende en la técnica que la substitución de aminoácidos similares se puede hacer de manera efectiva en base a la hidrofilicidad, particularmente donde la proteína o péptido biológicamente funcional, creado de este modo, se propone para el uso en modalidades inmunológicas, como en el presente caso. En ciertas modalidades, la hidrofilicidad promedio local más grande de una proteína, como se gobierna por la hidrofilicidad de sus aminoácidos adyacentes, correlaciona con su inmunogenicidad y antigenicidad, es decir, con una propiedad biológica de la proteína. Los siguientes valores de hidrofilicidad se han asignado a estos residuos de aminoácido: arginina (+ 3.0); lisina (+ 3.0); aspartato (+ 3.0 ± 1); glutamato (+ 3.0 ± 1); serina (+ 0.3); asparagina (+ 0.2); glutamina (+ 0.2); glicina (0); treonina (- 0.4); prolina (- 0.5 ± 1); alanina (- 0.5); histidina (- 0.5); cisteína (- 1.0); metionina (- 1.3); valina (- 1.5); leucina (- 1.8); isoleucina (- 1.8); tirosina (- 2.3); fenilalanina (- 2.5) y triptofano (- 3.4) . Al hacer cambios en base a los valores de hidrofilicidad similares, en ciertas modalidades, se incluye la substitución de aminoácidos cuyos valores de hidrofilicidad están dentro de ± 2 , en ciertas modalidades, se incluyen aquellos que están dentro de + 1 y en ciertas modalidades, se incluyen aquellos dentro de + 0.5. También se pueden identificar epítopos de secuencias primarias de aminoácidos en base a la hidrofilicidad. Estas regiones también se refieren como "regiones núcleo, epitópicas" . Las sustituciones de ejemplo de aminoácidos se exponen en la Tabla 1.
Tabla 1 Sustituciones de Aminoácidos Un experto en la técnica será capaz de determinar variantes adecuadas del polipéptido como se expone en la presente usando técnicas bien conocidas. En ciertas modalidades, un experto en la técnica puede identificar áreas adecuadas de la molécula que se pueden cambiar sin destruir la actividad al dirigir regiones que no se cree que son importantes para la actividad. En ciertas modalidades, se pueden identificar residuos y porciones de las moléculas que se conservan entre polipéptidos similares. En ciertas modalidades, aún áreas que pueden ser importantes para la actividad biológica, incluyendo de manera enunciativa y sin limitación las CDR de un anticuerpo, o que pueden ser importantes para la es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente, se pueden someter a sustituciones conservadoras de aminoácidos sin destruir la actividad biológica o sin afectar de manera adversa la estructura del polipéptido . Adicionalmente, un experto en la técnica puede revisar los estudios de estructura-función que identifican residuos en polipéptidos similares que son importantes para la actividad o estructura. En vista de esta comparación, se puede predecir la importancia de los residuos de aminoácidos en una proteína que correspondan a residuos de aminoácidos que son importantes para la actividad o estructura en proteínas similares. Un experto en la técnica puede optar por sustituciones de aminoácidos químicamente similares para residuos de aminoácidos, importantes, previstos. Un experto en la técnica también puede analizar la estructura tridimensional y la secuencia de aminoácidos con relación a esa estructura en polipéptidos similares. En vista de esta información, un experto en la técnica puede predecir la alineación de los residuos de aminoácidos de un anticuerpo con respecto a su estructura tridimensional . En ciertas modalidades, un experto en la técnica puede elegir no hacer cambios radicales a los residuos de aminoácido gue se prevé que estén en la superficie de la proteína, puesto que estos residuos pueden estar comprendidos en interacciones importantes con otras moléculas. Además, un experto en la técnica puede generar variantes de prueba que contienen una substitución individual de aminoácido en cada residuo deseado de aminoácido. Las variantes entonces se pueden detectar ensayos de actividad conocidos por aquellos expertos en la técnica. Por ejemplo, el experto puede detectar variantes de prueba para su capacidad para unirse a 0X4OL. Estas variantes se pueden usar para obtener información acerca de variantes adecuadas. Por ejemplo, si se descubre que un cambio a un residuo particular de aminoácido da por resultado actividad destruida, indeseablemente reducida, o inadecuada, se pueden evitar las variantes con este cambio. En otras palabras, en base a la información obtenida de los experimentos de rutina, un experto en la técnica puede determinar fácilmente los aminoácidos donde se deben evitar sustituciones adicionales ya sea solas o en combinación con otras mutaciones. Se han dedicado varias publicaciones científicas a la predicción de la estructura secundaria ver, Moult J. , Curr. Op. In Biotech., 7(4):422-427 (1996), Chou et al., Biochemistry, 13 (2) : 222-245 (1974); Chou et al., Biochesmi try, 113 (2) : 221-222 (1974); Chou et al., Adv. Enzymol . Relat . Áreas Mol . Biol . , 47:45-148 (1978); Chou et al., Ann . Rev. Biochem . , 47 :251-276 y Chou et al., Biophys, J. , 26:367-384 (1979). Además, actualmente están disponibles programas de computadora para ayudar con la predicción de la estructura secundaria. Un método para predecir la estructura secundaria se basa en el modelado por homología. Por ejemplo, dos polipéptidos o proteínas que tienen una identidad de secuencia de más de 30 %, o similitud de más de 40 % frecuentemente tienen topologías estructurales similares. El reciente crecimiento de la base de datos estructural de proteínas (PBD) ha proporcionado predictibilidad mejorada de la estructura secundaria, incluyendo el número potencial de pliegues dentro de la estructura de un polipéptido o proteína. Ver Hom et al., Nucí . Acid. Res . , 27 (1) : 244-247 (1999). Se ha sugerido (Brenner et al., Curr. Op . Struct . Biol . , 7(3):369-376 (1997) ) que hay un número limitado de pliegues en un polipéptido o proteína dada y que una vez que se han resuelto un número crítico de estructuras, la predicción estructural llegará a ser dramáticamente más exacta. Los métodos adicionales para predecir la estructura secundaria incluyen: "engarce" (Jones, D., Curr. Opin . Struct . Biol . , 7(3):377-87 (1997); Sippl et al., Structure, 4(1): 15-19 (1996)), "análisis de perfil" (Bowie et al., Science, 253:164-170 (1991); Gribskov et al., Meth . Enzym. , 183:146-159 (1990); Gribskov et al., Proc. Nat . Acad. Sci . , 84 (13) :4355-4358 (1987)), y "enlace evolutivo" (Ver Hom, Supra (1999) , y Brenner, supra (1997) ) . En ciertas modalidades, las variantes de anticuerpo incluyen variantes de glicosilación en donde el número y/o tipo de sitio de glicosilación se ha alterado en comparación a las secuencias de aminoácidos del polipéptido de origen. En ciertas modalidades, las variantes de proteína comprenden un mayor o menor número de sitios de glicosilación N-enlazados que la proteína nativa. Un sitio de glicosilación N-enlazado se caracteriza por la secuencia: Asn-X-Ser o Asn-X-Thr, en donde el residuo de aminoácido designado como X puede ser cualquier residuo de aminoácido excepto prolina. La substitución de residuos de aminoácido para crear esta secuencia proporciona un nuevo sitio potencial para la edición de una cadena de carbohidrato N- enlazada. De manera alternativa, las sustituciones que eliminan esta secuencia removerán una secuencia de carbohidrato N-enlazada, existente. También se proporciona un re-arreglo de las cadenas de carbohidrato N-enlazadas en donde uno o más sitios de glicosilación N-enlazados (típicamente aquellos que se presentan de forma natural) se eliminan y se crean uno o más nuevos sitios N-enlazados. En ciertas modalidades, las variantes de anticuerpo incluyen variantes de cisteína. En ciertas modalidades, las variantes de cisteína tienen uno o más residuos de cisteína que se suprimen de o que se reemplazan por otro aminoácido (por ejemplo, serina) en comparación a la secuencia de aminoácidos de origen. En ciertas modalidades, las variantes de cisteína tienen uno o más residuos de cisteína que se adicionan o que reemplazan otro aminoácido (por ejemplo, serina) en comparación a la secuencia de aminoácidos de origen. En ciertas modalidades, las variantes de cisteína pueden ser útiles cuando los anticuerpos se pliegan en una conformación biológicamente activa tal como después del aislamiento de cuerpos de inclusión insolubles. En ciertas modalidades, las variantes de cisteína tienen menos residuos de cisteína que la proteína nativa. En ciertas modalidades, las variantes de cisteína tienen más residuos de cisteína que la proteína nativa. En ciertas modalidades, las variantes de cisteína tienen un número uniforme de residuos de cisteína para reducir al mínimo las interacciones que resultan de cisteínas no apareadas. De acuerdo a ciertas modalidades, las sustituciones de aminoácido son aquellas que: (1) reducen la susceptibilidad a proteólisis, (2) reducen la susceptibilidad a la oxidación, (3) alteran la afinidad de unión para formar complejos de proteína, (4) alteran las afinidades de unión, y/o (4) confieren o modifican otras propiedades fisicoquímicas funcionales en estos polipéptidos. De acuerdo a ciertas modalidades, las sustituciones de aminoácido individuales o múltiples (en ciertas modalidades, sustituciones conservadoras de aminoácido) se pueden hacer en la secuencia que se presenta de forma natural (en ciertas modalidades, en la porción del polipéptido fuera de los dominios que forman contactos intermoleculares) . En ciertas modalidades, una substitución conservadora de aminoácido no cambia típicamente de forma sustancial las características estructurales de la secuencia de origen (por ejemplo, un aminoácido de reemplazo -no debe tender a romper una hélice que se presenta en la secuencia de origen, o perturbar otros tipos de la estructura secundaria que caracterizan la secuencia de origen) . Los ejemplos de estructuras secundarias y terciarias de polipéptido, reconocidas en la técnica, se describen en Proteins, Structures and Molecular Principies (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden y J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N. Y. (1991)); y Thomton et al., Nature 354:105 (1991). i El término "fragmento de polipéptido" como se usa en la presente se refiere a un polipéptido que tiene una supresión amino-terminal y/o carboxi-terminal . En ciertas modalidades, los fragmentos son de al menos 5 a 467 aminoácidos de largo. Se apreciará que en ciertas modalidades, los fragmentos son de al menos 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, o 450 aminoácidos de largo. Los análogos de péptidos se usan comúnmente en la industria farmacéutica como fármacos no peptídicos con propiedades análogas a aquellas del péptido de plantilla. Estos tipos de compuestos no peptídicos se llaman "imitadores de péptidos" o "peptidomiméticos" . Fauchere, J". Adv. Drug. Res . 15:29 (1986); Veber y Freidinger TINS p. 392 (1985); y Evans et al., J. Med. Chem. 30:1229 (1987). Estos compuestos frecuentemente se desarrollan con la ayuda de modelado molecular computarizado. Los imitadores de péptidos que son estructuralmente similares a péptidos terapéuticamente útiles se pueden usar para producir un efecto terapéutico o profiláctico similar. En general, los peptidomiméticos son estructuralmente similares a un polipéptido de paradigma (es decir, un polipéptido que tiene una propiedad bioquímica o actividad farmacológica) , tal como anticuerpo humano, pero tienen uno o más enlaces de péptidos opcionalmente reemplazados por un enlace seleccionado de: --CH2 NC--, --CH2 S--, --CH2-CH2--, --CH=CH- (cis y trans), --COCH2--, --CH(OH) CH2--, y --CH2 S0--, por métodos bien conocidos en la técnica. La distribución sistemática de uno o más aminoácidos de una secuencia de consenso con un D-aminoácido del mismo tipo (por ejemplo, D-lisina en lugar d L-lisina) se puede usar en ciertas modalidades para generar péptidos más estables. Además, los péptidos restringidos que comprenden una secuencia de consenso o una variación de secuencia de consenso sustancialmente idéntica se puede generar por métodos conocidos en la técnica (Rizo y Gierash Ann . Rev. Biochem . 61:387 (1992)); por ejemplo, al adicionar residuos internos de cisteína capaces de formar fuentes de disulfuro intramoleculares que ciclizan al péptido. El término "anticuerpo aislado" como se usa en la presente significa un anticuerpo que (1) está libre de al menos algunas proteínas con las cuales se encontrarán normalmente, (2) está esencialmente libre de otras proteínas en la misma fuente, por ejemplo, de la misma especie, (3) se expresa por una célula ' de una especie diferente, o (4) no se presenta en la naturaleza. "Anticuerpo" o "péptido (s) de anticuerpo" se refieren ambos a un anticuerpo intacto, o un fragmento del mismo. En ciertas modalidades, el fragmento de anticuerpo puede ser un fragmento de unión que compite con el anticuerpo intacto para la unión específica. El término "anticuerpo" también abarca anticuerpos policlonales y anticuerpo monoclonales. En ciertas modalidades, los fragmentos de unión se producen por técnicas de ADN recombinante. En ciertas modalidades, los fragmentos de unión se producen por escisión enzimática o química de anticuerpos intactos. En ciertas modalidades, los fragmentos de unión se producen por técnicas de ADN recombinante. Los fragmentos de unión incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Facb, y anticuerpos de cadena individual . Los fragmentos no de unión a antígeno, incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, fragmentos Fe. En ciertas modalidades, un anticuerpo se une de forma específica a un epítopo que se une de forma específica a al menos uno de Ab, A, Ab, B, Ab C, Ab D, Ab E, Ab F, Ab G, Ab H, Ab I , o Ab J. El término "anticuerpo" también abarca anticuerpos anti-idiotípicos que se unen de manera específica a la región variable de otro anticuerpo. En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-idiotípico se une de manera específica a la región variable de un anticuerpo anti -0X4OL. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-idiotípicos para detectar la presencia de un anticuerpo anti-0X4OL particular en una muestra o para bloquear la actividad de un anticuerpo anti-OX40L. El término "anticuerpo anti-0X4OL" como se usa en la presente significa un anticuerpo que se une de manera específica a OX40L. En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-OX40L se une a un epítopo de OX40L al cual se une al menos uno de Abs A-J. En varias modalidades, OX40L puede ser el 0X4OL de cualquier especie, incluyendo de manera enunciativa y sin limitación, humano, monos cynomolgus, ratones y conejos. Ciertos ensayos para determinar la especificidad de un anticuerpo son bien conocidos por aquellos expertos en la técnica e incluyen de manera enunciativa y sin limitación ELISA, ELISP0T, transferencias western, ensayo BIAcore, ensayos de unión de afinidad en solución, ensayos de co-estimulación de células T, y ensayos de migración en células T. En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-OX40L comprende : (i) un primer polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionado de CDRla, CDR2a o CDR3a, en donde CDRla comprende la secuencia de aminoácidos a b c d e, en donde el aminoácido a se selecciona de asparagina, treonina, fenilalanina, o serina; el aminoácido b se selecciona de alanina o tirosina; el aminoácido c se selecciona de triptofano, tirosina, o glicina; el aminoácido d se selecciona de metionina o triptofano; y el aminoácido e se selecciona de serína, asparagina, o histidina; en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t, en donde el aminoácido f se selecciona de arginina o valina; el aminoácido g es isoleucina; el aminoácido h se selecciona de lisina, tirosina o triptofano; el aminoácido i se selecciona de serina, ísoleucina, tirosina, treonina o arginina; el aminoácido j se selecciona de lisina, serina, o ácido aspártico, el aminoácido k se selecciona de treonina o glicina; el aminoácido 1 se selecciona de ácido aspártico, serina o ácido glutámico; el aminoácido m se selecciona de glicina, treonina o asparagina; el aminoácido n se selecciona de glicina, asparagina, lisina o treonina; el aminoácido o se selecciona de treonina o tirosina; el aminoácido p se selecciona de treonina, isoleucina, asparagina o tirosina; el aminoácido q se selecciona de ácido aspártico, prolina o alanina; el aminoácido r se selecciona de tirosina, serina o ácido aspártico; el aminoácido s se selecciona de glicina, alanina, leucina o serina; y el aminoácido t se selecciona de alanina, lisina o valina; en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f, en donde el aminoácido u se selecciona de ácido aspártico, glicina, metionina o serina; el aminoácido v se selecciona de arginina, glicina, ácido aspártico, tirosina o fenilalanina; el aminoácido w se selecciona de tirosina, valina, glicina o leucina; el aminoácido x se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o triptofano; el aminoácido y se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o isoleucina; el aminoácido z se selecciona de glicina, tirosina, prolina, valina o fenilalanina; el aminoácido a' se selecciona de ácido glutámico, serina, tirosina, triptofano o alanina; el aminoácido b' se selecciona de fenilalanina, glicina, tirosina, treonina o serina; el aminoácido c' se selecciona de prolina, tirosina, serina, lisina o glicina; el aminoácido d' se selecciona de fenilalanina, tirosina, o glicina; el aminoácido e' se selecciona de ácido aspártico, tirosina, arginina, o histidina; y • el aminoácido f' se selecciona de tirosina, valina, glicina, arginina, o treonina; y en donde el primer polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL; y (ii) un segundo polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b o CDR3b, en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl, en donde el aminoácido al es arginina; el aminoácido bl se selecciona de alanina o serina; el aminoácido cl es serina; el aminoácido di es glutamina; el aminoácido el se selecciona de glicina o serina; el aminoácido fl se selecciona de isoleucina, valina o leucina; el aminoácido gl se selecciona de serina o valina; el aminoácido hl se selecciona de asparagina, serina o histidina; el aminoácido ll se selecciona de histidina, asparagina, serina o tirosina; el aminoácido jl se selecciona de leucina, tirosina o ácido aspártico; y el aminoácido kl se selecciona de valina, leucina, glicina o asparagina; en donde CDR2b comprende la secuencia de aminoácidos 11 ml ni ol pl ql rl, en dónde el aminoácido 11 se selecciona de alanina, glicina o lisina; el aminoácido ml se selecciona de alanina o lisina; el aminoácido ni se selecciona de serina o fenilalanina; el aminoácido ol se selecciona de treonina, serina o asparagina; el aminoácido pl se selecciona de leucina o arginina; el aminoácido ql se selecciona de glutamina, alanina o fenilalanina; y el aminoácido rl se selecciona de serina o treonina; donde CDR3b comprende la secuencia de aminoácidos si ti ul vi wl xl yl zl al', en donde el aminoácido si- se selecciona de glutamina o metionina; y el aminoácido ti se selecciona de lisina o glutamina; . el aminoácido ul se selecciona de tirosina, alanina, serina o fenilalanina; el aminoácido vi se selecciona de asparagina, glicina, treonina o tirosina; el aminoácido wl se selecciona de serina, glicina o glutamina; el aminoácido xl se selecciona de alanina, serina, isoleucina o treonina; el aminoácido yl se selecciona de prolina o leucina; el aminoácido zl se selecciona de leucina, triptofano o fenilalanina; y el aminoácido al' es treonina; y en donde el segundo polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-OX40L comprende : un primer polipéptido que comprende regiones de determinación de complementariedad (CDR) como se expone en SEQ ID No: 2 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID No: 4; un primer polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID No : 6 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID No: 8; un primer polipéptido que comprende CDR como se exponen en SEQ ID No: 10 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID No: 12; un primer polipéptido que comprende CDR como se exponen en SEQ ID No : 14 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se exponen en SEQ ID No: 16; o un primer polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID No: 18 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID No: 20. En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-0X4OL comprende un primer polipéptido como se expone en el párrafo [070] anterior y un segundo polipéptido como se expone en el párrafo [075] anterior. En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-OX40L comprende un primer polipéptido como se expone en el párrafo [071) anterior y un segundo polipéptido como se expone en el párrafo [076] anterior, (con referencia al texto en inglés) . En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-OX40L es un anticuerpo humano. En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-0X40L comprende una marca detectable, En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-0X4OL es un anticuerpo quimérico. "Anticuerpo quimérico" se refiere a un anticuerpo que tiene una región variable de anticuerpo de una primera especie fusionada a otra molécula, por ejemplo, una región causante de anticuerpo de otra segunda especie. En ciertas modalidades, la primera especie puede ser diferente de la segunda especie. En ciertas modalidades, la primera especie puede ser la misma como la segunda especie. En ciertas modalidades, los anticuerpos quiméricos se pueden elaborar a través de mutagénesis o injerto de CDR para hacer corresponder una porción de la secuencia conocida de regiones variables de anticuerpo anti-0X4OL. El injerto de CDR comprende típicamente injertar las CDR de un anticuerpo con especificidad deseada en las regiones de encuadre (FR) de otro anticuerpo. Un anticuerpo bivalente diferente de un anticuerpo "multiespecífico" o "multifuncional" , en ciertas modalidades, se entiende típicamente que tiene cada uno de sus sitios de unión idénticos . Un anticuerpo inhibe de manera sustancial la adhesión de un ligando a un receptor cuando un exceso del anticuerpo reduce la cantidad de receptor unido a ligando por al menos 20 %, 40 %, 60 %, 80 %, 85 % o más (como se mide en un ensayo de unión competitiva in vi tro) . El término "epítopo" incluye cualquier determinante de polipéptido capaz de unión específica a una inmunoglobulina o receptor de células T. En ciertas modalidades, los determinantes de epítopos incluyen agrupaciones superficiales químicamente activas en moléculas tal como aminoácidos, cadenas laterales de azúcar, fosforilo o sulfonilo, y en ciertas modalidades, puede tener características estructurales tridimensionales específicas, y/o características de carga específicas. Un epítopo es una región de un antígeno que se une por un anticuerpo. Un anticuerpo se une de manera específica a un antígeno cuando reconoce de manera preferente su antígeno objetivo en una mezcla compleja de proteínas y/o macromoléculas. En ciertas modalidades, un anticuerpo se une de manera específica a un antígeno cuando la constante de disociación es 1 µM, en ciertas modalidades, cuando la constante de disociación es = 100 nM, y en ciertas modalidades, cuando la constante de disociación, es = 10 nM. En ciertas modalidades, un anticuerpo se une de manera específica a 0X4OL. El término "agente" se usa en la presente para denotar un compuesto químico, una mezcla de compuestos químicos, una macromolécula biológica, o un extracto elaborado de materiales biológicos. Como se usa en la presente, el término "marca" se refiere a cualquier molécula que se puede detectar. En una cierta modalidad, se puede marcar un anticuerpo por incorporación de un aminoácido radiomarcado. En una cierta modalidad, las porciones de biotina que se pueden detectar -por avidina marcada (por ejemplo, estreptavidina que contiene un marcador fluorescente o actividad enzimática que se puede detectar por métodos ópticos o colorimétricos) se pueden unir al anticuerpo. En ciertas modalidades, se puede incorporar una marca en o unir a otro reactivo que a su vez se une al anticuerpo de interés. Por ejemplo, se puede incorporar una marca en o unir a un anticuerpo que a su vez se une de manera específica al anticuerpo de interés. En ciertas modalidades, la marca o marcador también puede ser terapéutico. Se conocen en la técnica y se pueden usar varios métodos para marcar polipéptidos y glicoproteínas. Ciertas clases generales de marcas incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, marcas enzimáticas, fluorescentes, quimioluminiscentes y radioactivas. Los ejemplos de marcas para polipéptidos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, lo siguiente: radioisótopos o radionucleóides (por ejemplo 3H, 14C, 15N, 3?S, 90Y, 99Tc, luIn, 12SI, 131I) , marcas fluorescentes (por ejemplo, isotocianato de fluoresceína (FITC) , rodamina, fósforos de lantánidos, ficoeritrina (PE)), marcas enzimáticas (por ejemplo, peroxidasa de rábano, ß-galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina, glucosa-oxidasa, glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa, alcohol-deshidrogenasa, malato-deshidrogenasa, penicilinasa, luciferasa) , • quimioluminiscente, grupos de biotinilo, epítopos predeterminados de polipéptidos reconocidos por un indicador secundario (por ejemplo, secuencias de pares de cremallera de leucina, sitios de unión para anticuerpos secundarios, dominios de unión metálicos, marcas de epítopos) . En ciertas modalidades, se unen marcas por brazos separadores de varias longitudes para reducir el impedimento estérico potencial.
El término "muestra" como se usa en la presente, incluye, de manera enunciativa y sin limitación, cualquier cantidad de una sustancia de una cosa viva o una cosa anteriormente viva. Estas cosas vivas incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, humanos, ratones, monos, ratas, conejos y otros animales. Estas sustancias incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, sangre, suero, orina, células, órganos, tejidos, hueso, médula ósea, nodulos linfáticos y piel. En ciertas modalidades, una muestra puede ser de una reacción química, incluyendo de manera enunciativa y sin limitación, una reacción de síntesis de proteínas. El término "agente farmacéutico o fármaco" como se usa en la presente se refiere a un compuesto químico, o composición capaz de inducir un efecto terapéutico deseado cuando se administra de manera apropiada a un paciente. El término "modulador" como se usa en la presente, es un compuesto que altera o cambia la actividad o función de una molécula. Por ejemplo, un modulador puede provocar un incremento o disminución de la magnitud de una cierta actividad o función de una molécula en comparación a la magnitud de la actividad o función observada en la ausencia del modulador. En ciertas modalidades, un modulador es un inhibidor, que disminuye la magnitud de al menos una actividad o función de una molécula. Ciertas actividades y funciones de ejemplo de una molécula incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, la afinidad de unión, actividad enzimática y transducción de señales. Ciertos inhibidores de ejemplo incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, proteínas, péptidos, anticuerpos, pepticuerpos, carbohidratos o moléculas orgánicas pequeñas. Los pepticuerpos se describen por ejemplo en la WO 01/83525. Como se usa en la presente, "sustancialmente puro" significa una especie objeto que es la especie predominante presente (es decir, en una base molar, es más abundante que cualquier otra especie individual en la composición) . En ciertas modalidades, una fracción sustancialmente purificada es una composición en donde la especie objeto comprende al menos aproximadamente 50 % (en una base molar) de todas las especies macromoleculares presentes. En ciertas modalidades, una composición sustancialmente pura comprende más que aproximadamente 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o 99 % de todas las especies macromolares presentes en la composición. En ciertas modalidades, la especie objeto se purifica a homogeneidad esencial (la especie contaminante no se puede detectar en la composición por métodos convencionales de detección) en donde la composición consiste esencialmente de una especie macromolecular individual . El término "paciente" incluye sujetos humanos y de animales.
En esta solicitud, el uso de lo singular incluye lo pluralidad a menos que se indique de otro modo de forma específica. En esta solicitud, el uso de "o" significa "y/o" a menos que se señale de otro modo. Adicionalmente, el uso del término "que incluye", así como otras formas, tal como "incluye" e "incluido" no es limitante. También, los términos tal como "elemento" o "componente" abarcan tanto elementos como componentes que comprenden una unidad y elementos y componentes que comprenden más de una sub-unidad a menos que se señale específicamente lo contrario. De acuerdo a ciertas modalidades, se proporciona una línea de células que expresa anticuerpos anti-OX40L. En ciertas modalidades, se proporcionan anticuerpos quiméricos que comprenden al menos una porción de una secuencia humana y una secuencia de otra especie. En ciertas modalidades, este anticuerpo quimérico puede dar por resultado respuesta inmunitaria reducida en un hospedador que un anticuerpo sin las secuencias de anticuerpo del hospedador. Por ejemplo, en ciertos casos, se puede usar un animal de interés como un modelo para una enfermedad humana particular. Para estudiar el efecto de un anticuerpo en esta enfermedad en el animal hospedador, se puede usar un anticuerpo de una especie diferente. Pero, en ciertos casos, estos anticuerpos de otra especie, pueden producir una respuesta inmunitaria a los anticuerpos mismos en el animal hospedador, impidiendo de esta manera la evaluación de estos anticuerpos. En ciertas modalidades, el reemplazar parte de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo anti-OX40L con la secuencia de aminoácidos del anticuerpo del animal hospedador puede disminuir la magnitud de la respuesta antianticuerpo el animal hospedador. En ciertas modalidades, un anticuerpo guimérico comprende una cadena pesada y una cadena ligera, en donde las regiones variables de la cadena ligera y la cadena pesada son de una primera especie y las regiones constantes de la cadena ligera y la cadena pesada son de una segunda especie. En ciertas modalidades, la región constante de cadena pesada de anticuerpo es una región constante de cadena pesada de anticuerpo de una especie diferente de la humana. En ciertas modalidades, la región constante de cadena ligera de anticuerpo es una región constante de cadena ligera de anticuerpo de una especie diferente de la humana. Las regiones constantes de anticuerpo de ejemplo incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, una región constante de anticuerpo de mono cynomolgus, una región constante de anticuerpo de ratón y una región constante de anticuerpo de conejo. Las regiones variables de anticuerpo de ejemplo incluyen de manera enunciativa y sin limitación, una región variable de anticuerpo humano, una región variable de anticuerpo de ratón, una región variable de anticuerpo de cerdo, una región variable de anticuerpo de anticuerpo de cobayo, una región variable de anticuerpo de mono cynomolgus, y una región variable de anticuerpo de conejo. En ciertas modalidades, las regiones de encuadre de la región variable en la cadena pesada y cadena ligera se pueden reemplazar con regiones de encuadre derivadas de otras secuencias de anticuerpo. Se pueden producir anticuerpos quiméricos por métodos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. En ciertas modalidades, se puede combinar el polinucleótido de la primera especie que codifica para la región variable de cadena pesada y el polinucleótido de la segunda especie que codifica para la región constante de cadena pesada. En ciertas modalidades, se pueden fusionar o combinar el polinucleótido de la primera especie que codifica para la región variable de cadena ligera y la secuencia de nucleótidos de la segunda especie que codifica para la región constante de cadena ligera. En ciertas modalidades, estas secuencias de nucleóti'dos fusionadas se pueden introducir en una célula ya sea en un vector de expresión individual (por ejemplo, un plásmido), o en múltiples vectores de expresión. En ciertas modalidades, una célula que comprende al menos un vector de expresión se puede usar para elaborar el polipéptido. En ciertas modalidades, estas secuencias de polipéptidos fusionadas se pueden introducir en una célula ya sea en vectores de expresión separados o en un vector de expresión individual . En ciertas modalidades, la célula hospedadora expresa tanto la cadena pesada como la cadena ligera, que se combinan para producir un anticuerpo. En ciertas modalidades, se puede usar para elaborar un anticuerpo en la célula que comprende al menos un vector de expresión. Los métodos de ejemplo para producir y expresar anticuerpos se analizan más adelante . En ciertas modalidades, los dominios funcionales CH1, CH2 , CH3 , y las secuencias interventoras pueden reordenar para crear una diferente región constante de anticuerpo. Por ejemplo, si estas modalidades, estas regiones constantes híbridas se pueden optimizar para la vida media suero, para el montaje y pliegue del tetrámero de anticuerpo, y para función efectora mejorada. En ciertas modalidades, también se pueden producir regiones constantes modificadas de anticuerpo al introducir mutaciones de puntos individuales en la secuencia de aminoácidos de la región constante y al probar el anticuerpo resultante para cualidades mejoradas, por ejemplo, agüellas listadas anteriormente. En ciertas modalidades, las modificaciones conservadoras a las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo 0X4OL (y modificaciones correspondientes a los nucleótidos codificantes) producen anticuerpos que tienen características funcionales y químicas similares a aquellas del anticuerpo original. En contraste, se pueden lograr modificaciones sustanciales en las características funcionales y/o guímicas de un anticuerpo anti-0X4OL al seleccionar sustituciones en la secuencia de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera que difieren de manera significativa en su efecto al mantener (a) la estructura de la estructura molecular en el área de la substitución, por ejemplo, como una conformación de hoja o helicoidal, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio objetivo, o (c) el volumen de la cadena lateral. Por ejemplo, una "substitución conservadora de aminoácido" puede comprender una substitución de un residuo de aminoácido nativo con un residuo no nativo tal que haya poco o ningún efecto en la polaridad o carga del residuo de aminoácido en esa posición. Adicionalmente, también se puede sustituir con alanina cualquier residuo nativo en el polipéptido, como se ha descrito anteriormente para "mutagénesis de exploración de alanina" . Las sustituciones deseadas de aminoácidos (ya sea conservadoras o no conservadoras) se pueden determinar por aquellos expertos en la técnica en el momento en que se deseen estas sustituciones. En ciertas modalidades, se pueden usar sustituciones de aminoácido para identificar residuos importantes de los anticuerpos anti-OX40L, tal como aquellos que pueden incrementar o disminuir la afinidad de anticuerpo a 0X4OL a la función efectora de los anticuerpos . En ciertas modalidades, los efectos de un anticuerpo OX40L se pueden evaluar al medir una reducción en la cantidad de síntomas de la enfermedad. En ciertas modalidades, la enfermedad de interés se puede provocar por un patógeno. En ciertas modalidades, una enfermedad se puede establecer en un animal hospedador por otros métodos incluyendo la introducción de una sustancia (tal como un carcinógeno) y manipulación genética. En ciertas modalidades, se pueden evaluar los efectos al suprimir uno o más eventos adversos en el animal hospedador. El término "evento adverso" incluye, de manera enunciativa y sin limitación, una reacción adversa en un animal hospedador que recibe un anticuerpo que no está presente en un animal hospedador que no recibe el anticuerpo. En ciertas modalidades, los eventos adversos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, fiebre, respuesta inmunitaria a un anticuerpo, inflamación, o muerte del animal hospedador. Los anticuerpos específicos a un antígeno se pueden producir -de varias maneras. En una modalidad, se pueden introducir en un animal hospedador (por ejemplo un ratón) un antígeno que contiene un epítopo de interés, produciendo de esta manera anticuerpos específicos a ese epítopo. En ciertos casos, se pueden obtener anticuerpos específicos a un epítopo a partir de muestras biológicas tomadas de hospedadores que se expusieron de manera natural al epítopo. En ciertos casos, la introducción de locus de inmunoglobulina humana (Ig) en ratones en los cuales se han inactivado los genes endógenos de Ig ofrece la oportunidad de obtener anticuerpos monoclonales completamente humanos (Mab, por sus siglas en inglés) .
Estructura de Anticuerpo que se Presenta de Forma Natural. Las unidades estructurales de anticuerpo que se presenta de forma natural comprenden típicamente un tetrámero. Cada tetrámero está compuesto típicamente de dos pares idénticos de cadenas de polipéptido, cada parte que tiene una cadena "ligera" de longitud completa (en ciertas modalidades, de aproximadamente 25 kDa) y una cadena "pesada" de longitud completa (en ciertas modalidades, aproximadamente 50-70 kDa) . El término "cadena pesada" incluye cualquier polipéptido que tenga una secuencia de región variable suficiente para conferir especificidad para un antígeno particular. Una cadena pesada de longitud completa incluye un dominio de región variable, VH, y tres dominios de región constante CH1, CH2 , CH3. El dominio VH está en el amino-término del polipéptido, y el dominio CH3 está en el carboxi-término . El término "cadena pesada" como se usa en la presente, abarca una cadena pesada de anticuerpo de longitud completa y fragmentos de la misma. El término "cadena ligera" incluye cualquier polipéptido que tiene secuencia de región variable suficiente para conferir especificidad para un epítopo particular. Una cadena ligera de longitud completa incluye un dominio de región variable VL, y un dominio de región constante, CL. Igual que la cadena pesada, el dominio de región variable de la cadena ligera está en el amino-término el polipéptido. El término "cadena ligera", como se usa en la presente, abarca una cadena ligera de longitud completa y fragmentos de la misma. La porción amino-terminal de cada cadena incluye típicamente una región variable (VH en la cadena pesada y VL en la cadena ligera) de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos que típicamente son responsables del reconocimiento del antígeno. La porción carboxi-terminal de cada cadena define típicamente una región constante (dominio CH en la cadena pesada y V^ en la cadena ligera) , que son responsables en la función efectora. Las funciones efectoras del anticuerpo incluyen activación de complemento y estimulación de opsonofagocitosis . Las cadenas ligeras humanas se clasifican típicamente como cadenas ligeras kappa y lambda. Las cadenas pesadas se clasifican típicamente como mu, delta, gamma, alfa o epsilon, y definen el isotipo del anticuerpo como IgMl, IgD, IgG, IgA e IgE, respectivamente, IgG tiene varias subclases, incluyendo de manera enunciativa y sin limitación IgGl, IgG2, IgG3 e IgG4. IgM tiene sub-clases que incluyen de manera enunciativa y sin limitación IgMl e IgM2. IgA se subdivide de manera similar en sub-clases que incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, IgAl e IgA2. Dentro de las cadenas ligera y pesada de longitud completa, típicamente, las regiones variable y constante se unen por una región "J" de aproximadamente 12 o más aminoácido, con la cadena pesada que incluye también una región "D" de aproximadamente 10 aminoácidos más. Ver, por ejemplo Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul. W. , ed. , 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)). Las regiones variables de cada par de cadena ligera/pesada forman típicamente el sitio de unión a antígeno. Las regiones variables exhiben típicamente la misma estructura general de regiones de encuadre (FR, por sus siglas en inglés) relativamente conservadas unidas por tres regiones hipervariables, también llamadas regiones de determinación de complementariedad o CDR. Las CDR de las cadenas pesada y ligera de cada par se alinean típicamente por las regiones de encuadre, que pueden permitir la unión a un epítopo específico. Desde N-terminal a C-terminal, ambas regiones variables de cadenas ligera y pesada comprenden típicamente los dominios FR1, CDR1, FR2 , CDR2 , FR3 , CDR3 , y FR4. La asignación de aminoácidos a cada dominio típicamente está de acuerdo con las definiciones de Secuencias Rabat de Proteínas de Interés Inmunológico (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 y 1991)), o Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989) . Como se analiza anteriormente, hay varios tipos de fragmentos de anticuerpo. Un fragmento Fab está comprendido de una cadena ligera y el CH1 y regiones variables de una cadena pesada. La cadena pesada de una molécula Fab no puede formar un enlacé de disulfuro con otra molécula de cadena pesada. Un fragmento Fab' contiene una cadena ligera y una cadena pesada que contiene más de la región constante, entre los dominios CH1 y CH2 , tal que se puede formar un enlace de disulfuro inter-cadena entre dos cadenas pesadas para formar una molécula de F(ab')2. Un fragmento Facb es similar a una molécula F(ab')2, excepto gue la región constante en las cadenas pesadas de la molécula se extiende al extremo del dominio CH2. La región Fv comprende las regiones variables tanto de las cadenas pesadas como ligera, pero carece de las regiones constantes . Los anticuerpos de cadena individual son moléculas Fv en las cuales las regiones variables de cadena pesada y ligera se han conectado por un ligador flexible para formar una cadena individual de polipéptido que forma una región de unión a antígeno. Los anticuerpos de cadena individual se analizan en detalle, por ejemplo, en WO 88/01649 y las patentes de los Estados Unidos Número 4,946,778 y 5,260,203. Un fragmento Fe contiene los dominios CH2 y CH3 de la cadena pesada y contiene más de la región constante, entre los dominios CH1 y CH2 , tal que se puede formar un enlace de disulfuro inter-cadena entre dos cadenas pesadas.
Anticuerpos Biespecíficos o Bifuncionales Un anticuerpo biespecífico o bifuncional es un anticuerpo híbrido artificial que tiene dos diferentes pares de cadena pesada/ligera y dos diferentes sitios de unión. Se pueden producir anticuerpos biespecíficos por una variedad de métodos incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, fusión de hibridomas o enlace de fragmentos Fab' . Ver, por ejemplo, Songsivilai & Lachmann Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321 (1990), Kostelny et al. J. Immunol . 148: 1547-1553 (1992).
Cierta Preparación de Anticuerpos En ciertas modalidades, se pueden expresar los anticuerpos en líneas celulares diferentes de las líneas celulares de hibridoma. En ciertas modalidades, se pueden usar secuencias que codifican para anticuerpos particulares, incluyendo anticuerpos quiméricos para la transformación en la célula hospedadora adecuada de mamífero. De acuerdo a ciertas modalidades, la transformación puede ser por cualquier método conocido para introducir polinucleótidos en una célula hospedadora, incluyendo, por ejemplo el empaque del polinucleótido en un virus (o en un vector viral) y la transducción de una célula hospedadora con el virus o al transfectar un vector usando procedimientos conocidos en la técnica, como se ejemplifica por las patentes de los Estados Unidos números 4,399,216; 4,912,040; 4,740,461; y 4,959,455. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende cualquiera de las secuencias de polinucleótido analizadas en la presente. En ciertas modalidades, se proporciona un método para elaborar un polipéptido que comprende producir el polipéptido en una célula que comprende cualquiera de los vectores de expresión anteriores en condiciones adecuadas para expresar el polinucleótido contenido en la misma. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRla, CDR2a, ó CDR3a, en donde CDRla comprende la secuencia de aminoácidos a b c d e, en donde el aminoácido a se selecciona de asparagina, treonina, fenilalanina, o serina; el aminoácido b se selecciona de alanina o tirosina; el aminoácido c se selecciona de triptofano, tirosina o glicina; el aminoácido d se selecciona de metionina o triptofano; y el aminoácido e se selecciona de serina, asparagina, o histidina; en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k i m n o p q r s t, en donde el aminoácido f se selecciona de arginina o valina; el aminoácido g es isoleucina; el aminoácido h se selecciona de lisina, .tirosina, o triptofano; el aminoácido i se selecciona de serina, isoleucina, tirosina, treonina, o arginina; el aminoácido j se selecciona de lisina, serina, o ácido aspártico; el aminoácido k se selecciona de treonina o glicina; el aminoácido 1 se selecciona de ácido aspártico, serina, o ácido glutámico; el aminoácido m se selecciona de glicina, treonina, o asparagina; el aminoácido n se selecciona de glicina, asparagina, usina, o treonina; el aminoácido o se selecciona de treonina o tirosina; el aminoácido p se selecciona de treonina, isoleucina, asparagina o tirosina; el aminoácido q se selecciona de ácido aspártico, prolina o alanina; el aminoácido r se selecciona de tirosina, serina, o ácido aspártico; el aminoácido s se selecciona de glicina, alanina, leucina o serina; y el aminoácido t se selecciona de alanina, lisina o valina; en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f' , en donde el aminoácido u se selecciona de ácido aspártico, glicina, metionina o serina; el aminoácido v se selecciona de arginina, glicina, ácido aspártico, tirosina o fénilalanina; el aminoácido w se selecciona de tirosina, valina, glicina o leucina; el aminoácido x se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o triptofano; el aminoácido y se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o isoleucina; el aminoácido z se selecciona de glicina, tirosina, prolina, valina o fenilalanina; el aminoácido a' se selecciona de ácido glutámico, serina, tirosina, triptofano o alanina; el aminoácido b' se selecciona de fenilalanina, glicina, tirosina, treonina o serina; el aminoácido c' se selecciona de prolina, tirosina, serina, lisina o glicina; el aminoácido d' se selecciona de fenilalanina, tirosina o glicina; el aminoácido e' se selecciona de ácido aspártico, tirosina, arginina o histidina; y el aminoácido f se selecciona de tirosina, valina, glicina, arginina o treonina; y en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDR2a que comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k I m n o p q r s t g', en donde f hasta t es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido g' se selecciona de prolina, lisina o serina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende -un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDR2a que comprende la secuencia de aminoácidos f g i j k I m n o p q r s t g' h', en donde f hasta g' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido h' se selecciona de valina o glicina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDR2a que comprende una secuencia de aminoácidos f g h i j k I m n o p r s t g' h' i', en donde f hasta h' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido i' es lisina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDR2a que comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t g' h' i' j' en donde f hasta i' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido j' es glicina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k', en donde u hasta f es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido k' se selecciona de ácido aspártico, metionina, asparagina, tirosina o valina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido gue comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1', en donde u hasta k' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido 1' se selecciona de histidina, ácido aspártico, serina, tirosina o fenilalanina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' , en donde u hasta 1' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido m' se selecciona de valina, ácido aspártico o glicina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' en donde u hasta m' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido n' se selecciona de fenilalanina, metionina o tirosina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' o' en donde u hasta n' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido o' es ácido aspártico. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDR3a que comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' o' p' en donde u hasta o' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido p' se selecciona de valina o tirosina. En ciertas modalidades, se proporciona un método para elaborar un polipéptido que comprende producir el polipéptido en una célula que comprende el vector de expresión anterior en condiciones adecuadas para expresar el polinucleótido contenido en la misma para producir el polipéptido. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b, ó CDR3b, en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl, en donde el aminoácido al es arginina; el aminoácido bl se selecciona de alanina o serina; el aminoácido cl es serina; el aminoácido di es glutamina; el aminoácido el se selecciona de glicina o serina; el aminoácido fl se selecciona de isoleucina, valina o leucina; el aminoácido gl se selecciona de serina o valina; el aminoácido hl se selecciona de asparagina,. serina o histidina; el aminoácido il se selecciona de histidina, asparagina, serina o tirosina; el aminoácido jl se selecciona de leucina, tirosina o ácido aspártico; y el aminoácido kl se selecciona de valina, leucina, glicina o asparagina; en donde. CDR2b comprende la secuencia de aminoácidos 11 ml ni ol pl ql rl, en donde el aminoácido ll se selecciona de alanina, glicina o lisina; el aminoácido mi se selecciona de alanina o lisina; el aminoácido ni se selecciona de serina o fenilalanina; el aminoácido ol se selecciona de treonina, serina o asparagina; el aminoácido pl se selecciona de leucina o arginina; el aminoácido ql se selecciona de glutamina, alanina o fenilalanina; y el aminoácido rl se selecciona de serina o treonina; en donde CDR3b comprende la secuencia de aminoácidos si ti ul vi wl xl yl zl al', en donde el aminoácido si se selecciona de glutamina o metionina; y el aminoácido ti se selecciona de lisina o glutamina; el aminoácido ul se selecciona de tirosina, alanina, serina o fenilalanina; el aminoácido vi se selecciona de asparagina, glicina, treonina o tirosina; el aminoácido wl se selecciona de serina, glicina o glutamina; el aminoácido xl se selecciona de alanina, serina, isoleucina o treonina; el aminoácido yl se selecciona de prolina o leucina; el aminoácido zl se selecciona de leucina, triptofano o fenilalanina; y el aminoácido al' es treonina; y en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDRlb que comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' en donde al hasta kl es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido bl' se selecciona de asparagina o alanina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDRlb que comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' (SEQ ID NO. 23) en donde al hasta bl es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido cl' es treonina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido gue comprende una secuencia gue codifica para CDRlb gue comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' di' (SEQ ID NO. 24), en donde al hasta cl' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y el aminoácido di' es tirosina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótído gue comprende una secuencia que codifica para CDRlb que comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' di' el' (SEQ ID NO. 25), en donde al hasta di' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde el aminoácido el' es leucina. En ciertas modalidades, un vector de expresión comprende un polinucleótido que comprende una secuencia que codifica para CDRlb que comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' di' el' fl' (SEQ ID NO. 26), en donde al hasta el' es una secuencia de aminoácidos como se define anteriormente y en donde aminoácido fl' es serina. En ciertas modalidades, se proporciona un método para elaborar un polipéptido que comprende producir el polipéptido en una célula que comprende el vector de expresión anterior en condiciones adecuadas para expresar el polinucleótido contenido en la misma. En ciertas modalidades, se proporciona una célula que comprende al menos uno de los vectores de expresión anteriores. En ciertas modalidades, se proporciona un método para elaborar un polípéptido que comprende producir el polipéptido en una célula que comprende el vector de expresión anterior en condiciones adecuadas para expresar el polinucleótido contenido en la misma para producir el polipéptido. En ciertas modalidades, un vector de expresión expresa una cadena pesada de anticuerpo anti-0X4OL. En ciertas modalidades, un vector de expresión expresa una cadena ligera de anticuerpo anti-OX40L. En ciertas modalidades, un vector de expresión expresa tanto una cadena pesada de anticuerpo anti-OX40L y una cadena ligera de anticuerpo anti-0X4OL. En ciertas modalidades, se proporciona un método para elaborar un anticuerpo anti-OX4.0L que comprende producir un anticuerpo en una célula que comprende al menos uno de los vectores de expresión descritos en la presente en condiciones adecuadas para expresar los polinucleótidos contenidos en la misma para producir el anticuerpo. En ciertas modalidades, el procedimiento de transfección usado puede depender del hospedador que se va a transformar. Ciertos métodos para la introducción de polinucleótidos heterólogos en células de mamífero se conocen en la técnica e incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, transfección mediada por dextrano, precipitación con fosfato de calcio, transfección mediada por polibreno, fusión de protoplasto, electroporación, encapsulación de los polinucleótidos en liposomas, y microinyección directa del ADN en los núcleos. Ciertas líneas de células de mamífero disponibles como hospedadores para la expresión se conocen en la técnica e incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, muchas líneas de células inmortalizadas disponibles de la American Type Culture Collection (ATCC) , que incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, células de ovario de hámster Chino (CHO) , células E5, células HeLa, células de riñon de hámster de neonato (BHK) , células de riñon de mono (COS) , células de carcinoma hepatocelular humano (por ejemplo Hep G2) , células NSO, células SP20, células Per C6, células 293 y varias líneas celulares diferentes. En ciertas modalidades, se pueden seleccionar líneas celulares a través de la determinación de qué líneas celulares tienen altos niveles de expresión y producen anticuerpos con propiedades constitutivas de unión a antígeno . En ciertas modalidades, los vectores que se pueden transfectar en una célula hospedadora comprenden secuencias de - control que se enlazan de forma operable a un polinucleótido que codifica para un anticuerpo anti-OX40L. En ciertas modalidades, las secuencias de control facilitan la expresión del polínucleótido enlazado, dando por resultado de esta manera la producción del polipéptido codificado por el polinucleótido enlazado. En ciertas modalidades, el vector también comprende secuencias de polinucleótido que permiten la replicación independiente de cromosoma en la célula hospedadora. Los vectores de ejemplo incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, plásmidos (por ejemplo, BlueScript, puc, etc.), cósmidos e YACS .
Ciertos Usos de Anticuerpos De acuerdo a ciertas modalidades, los anticuerpos son útiles para detectar un antígeno particular en una muestra. En ciertas modalidades, esto permite la identificación de células o tejidos que producen la proteína. Por ejemplo, en ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para detectar la presencia de 0X4OL en una muestra. En ciertas modalidades, un método para detectar la presencia o ausencia de 0X4OL en una muestra comprende (a) combinar un anticuerpo anti-OX40L y la muestra; (b) separar los anticuerpos unidos a un antígeno de los anticuerpos no unidos; y (c) detectar la presencia o ausencia de anticuerpos unidos al antígeno. Los ensayos en los cuales se puede usar un anticuerpo para detectar la presencia o ausencia de un antígeno incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, un ELISA o una transferencia western. En ciertas modalidades, se puede marcar un anticuerpo anti-0X4OL. En ciertas modalidades, se puede detectar un anticuerpo anti-0X4OL por un anticuerpo marcado que se une al anticuerpo anti-OX40L. En ciertas modalidades, se proporciona un equipo para detectar la presencia o ausencia de 0X4OL en una muestra. En ciertas modalidades, el equipo comprende un anticuerpo anti-0X4OL y reactivos para detectar el anticuerpo. En ciertas modalidades, el equipo comprende un anticuerpo anti-OX40L, como se describe en el párrafo [0109] anterior (del texto en inglés) y reactivos para detectar el anticuerpo. En ciertas modalidades, el equipo comprende un anticuerpo anti-OX40L como se describe en el párrafo [0110] anterior (del texto en inglés) y reactivos para detectar el anticuerpo. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos para aislar sustancialmente una porción química tal como, de manera enunciativa y sin limitación, una proteína. En ciertas modalidades, el anticuerpo se une a un "sustrato" que es un material de soporte usado para inmovilizar el anticuerpo. Los sustratos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, tubos, placas (es decir, placas de múltiple cavidades), cuentas tal como microcuentas, filtros, bolas y membranas. En ciertas modalidades, se puede elaborar un sustrato de materiales insolubles en agua tal como, de manera enunciativa y sin limitación, resina de policarbonato, resina de silicón, o resina de nylon. Los sustratos de ejemplo para el uso en cromatografía de afinidad incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, celulosa, agarosa, poliacrilamida, dextrano, poliestíreno, alcohol polivinílico, y sílice porosa. Hay muchos sustratos de cromatografía comercialmente disponibles que incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, Sefarosa 2B, Sefarosa 4B, Sefarosa 6B y otras formas de Sefarosa ( (farmacia) ; Bio- Gel (y varias formas de Bio-Gel tal como Biogel A, P, ó CM) , Cellex (y varias formas de Cellex tal como Cellex AE ó Cellex-CM) , Cromagel A, Cromagel P y Enzafix (Wako Chemical Indus . ) . El uso de columnas de afinidad de anticuerpo se conoce por una persona experta en la técnica. En ciertas modalidades, un método para aislar 0X4OL comprende (a) unir un anticuerpo de 0X4OL a un sustrato; (b) exponer una muestra que contiene 0X OL a un anticuerpo de la parte (a) ; y (c) aislar OX40L. En ciertas modalidades, un método para aislar OX40L comprende (a) unir un anticuerpo de OX40L como se describe en el párrafo [0109] anterior (del texto en inglés) al sustrato; (b) exponer una muestra que contiene OX40L al anticuerpo de la parte (a) ; y (c) aislar OX40L. En ciertas modalidades, un método para aislar 0X4OL comprende (a) unir un anticuerpo de 0X4OL como se describe en el párrafo [0110] anterior (del texto en inglés) a un sustrato; (b) exponer una muestra que contiene 0X4OL al anticuerpo de la parte (a) ; y (c) aislar 0X4OL. En ciertas modalidades, se proporciona un quipo para aislar 0X4OL. En ciertas modalidades, el equipo contiene un anticuerpo anti-0X4OL unido a un sustrato y reactivos para aislar OX40L. En ciertas modalidades, el equipo comprende un anticuerpo anti-OX40L como se describe en el párrafo [0109] anterior (del texto en inglés) unido a un sustrato y reactivos para aislar 0X4OL. En ciertas modalidades, el equipo comprende un anticuerpo anti-OX40L como se describe en el párrafo [0110] anterior (del texto en inglés) unido a un sustrato y reactivos para aislar 0X OL. El término "cromatografía de afinidad" como se usa en la presente significa un método para separar o purificar los materiales de interés en una muestra al utilizar la interacción (por ejemplo la afinidad) entre un par de materiales, tal como un antígeno y un anticuerpo, una enzima y un sustrato, o un receptor y un ligando. En ciertas modalidades, los anticuerpos gue se unen a una proteína particular y bloquean interacción con otros compuestos de unión pueden tener uso terapéutico. En esta solicitud, cuando se analiza el uso de anticuerpos anti-0X4OL para tratar enfermedades o condiciones, este uso puede incluir el uso de los anticuerpos anti-0X4OL mismos; composiciones que comprende anticuerpos anti-0X4OL; y/o terapia de combinación que comprende anticuerpos anti-OX40L y uno o más ingredientes activos adicionales . Cuando se usan anticuerpos anti-OX40L para "tratar" una enfermedad o condición, este tratamiento puede incluir o no puede incluir prevención de la enfermedad o condición. Por ejemplo, los anticuerpos anti-OX40L, como se muestra en los ejemplos más adelante, pueden bloquear la interacción de 0X40L con su receptor, 0X4OR. Debido a que 0X4OL está asociado con respuestas inmunitarias inflamatorias, en ciertas modalidades,' los anticuerpos anti-0X4OL pueden tener uso terapéutico en el tratamiento de una variedad de enfermedades que incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, aquellas enfermedades asociadas con inflamación. Estas enfermedades incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad de injerto versus hospedador, enfermedad inflamatoria de intestino, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, esclerosis múltiple, psoriasis, y lupus nefritis proliferativo. En ciertas modalidades, los anticuerpos anti-OX40L se pueden usar para tratar infecciones bacterianas, virales o protozoarias y complicaciones que resulten de las mismas. Las enfermedades bacterianas incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, Micoplasma pneumonia . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L, por ejemplo, en combinación con ENBRELMR, para tratar infección por VIH y su enfermedad asociada, SIDA, y condiciones asociadas con SIDA y/o relacionadas a SIDA, tal como complejo de demencia por SIDA, enflaquecimiento asociado con SIDA, lipidistrofia debida a terapia antirretroviral; CMV (citomegalovirus) y sarcoma de Kaposi. En ciertas modalidades, los anticuerpos anti-OX40L se pueden usar para tratar enfermedades protozoarias, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, malaria y esquistosomiasis .
En ciertas modalidades, los anticuerpos anti-0X4OL se pueden usar para tratar eritema nodoso leproso; meningitis bacteriana o viral; tuberculosis, incluyendo tuberculosis pulmonar; y pneumonitis secundaria a una infección bacteriana o viral. En ciertas modalidades, se pueden usar los anticuerpos anti-OX40L para tratar fiebres de recaídas transportadas por piojos, tal como aquellas provocadas por Borrelia recurrentis . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar condiciones causadas por virus de Herpes, tal como queratitis estromal herpética, lesiones corneales; y trastornos corneales inducidos por virus. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar infecciones de papilomavirus humano. En ciertas modalidades, los anticuerpos anti-OX40L se pueden usar para tratar infección por influenza y mononucleosis infecciosa. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar condiciones de dolor crónico, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, dolor pélvico crónico, incluyendo síndrome de dolor pélvico/prostatitis crónica. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar dolor post-herpético. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar varios trastornos del sistema endocrino. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar diabetes de comienzo juvenil (incluyendo diabetes mellitus autoinmunitaria y tipos de diabetes dependientes de insulina) y/o diabetes de comienzo en madurez (incluyendo diabetes no dependientes de insulina y mediada por obesidad) . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L con inhibidores de TNF tal como ENBREL1111 u otros agentes activos descritos en la presente para tratar diabetes de comienzo juvenil (incluye diabetes mellitus autoinmunitaria y tipos de diabetes dependientes de insulina) y/o diabetes de comienzo en madurez (incluyendo diabetes no dependiente de insulina y mediada por obesidad) . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar condiciones secundarias asociadas con diabetes, tal como retinopatía diabética, rechazo de trasplante de riñon en pacientes diabéticos, resistencia a insulina mediada por obesidad, y insuficiencia renal, que por sí mismas se pueden asociar con proteinurea e hipertensión. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar otros trastornos endógenos, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, enfermedad de ovario policístico, adrenoleucodistrofia X-enlazada, hipotiroidismo y tiroiditis, incluyendo tiroiditis de Hashimoto (es decir, tiroiditis autoinmunitaria). En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar condiciones médicas asociadas con disfunción de célula tiroides, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, síndrome de enfermo de eutiroides . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar condiciones del sistema gastrointestinal que incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, enfermedad celiaca. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L con inhibidores de TNF tal como ENBRELMR u otros agentes activos descritos en la presente son adecuados para tratar enfermedad celiaca. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar enfermedades gastrointestinales incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, enfermedad de Crohn; colitis ulcerativa; gastroparesis idopática; pancreatitis, incluyendo pancreatitis crónica; pancreatitis aguda, enfermedad inflamatoria de intestino y úlceras, incluyendo úlceras gástricas y duodenales. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar trastornos de sistema genitourinario.
En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar glomerulonefritis', incluyendo glomerulonefritis autoinmunitaria, glomerulonefritis debida a exposición a toxinas o glomerulonefritis secundaria a infecciones con estreptococus hemolítico u otros agentes infecciosos. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar enfermedades genitourinarias incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, síndrome urémico y sus complicaciones clínicas (por ejemplo, insuficiencia renal, anemia, y cardiomiopatía hipertrófica) , incluyendo síndrome urémico asociado con exposición a toxinas ambientales, drogas u otras causas. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar complicaciones que surgen de la inflamación de la vesícula biliar que conducen a alteración en la función absorbente. Estas complicaciones incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, colelitiasis (cálculos biliares) y coliedocolitiasis (cálculos del conducto biliar) y la recurrencia de colelitiasis y coliedocolitiasis. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar complicaciones de hemodiálisis; condiciones prostéticas, incluyendo hipertrofia prostética benigna, prostatitis no bacteriana y prostatitis crónica; y complicaciones de hemodiálisis. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar varios trastornos hematológicos y oncológicos. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar varias formas de cáncer, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, carcinoma nasofaringeal positivo a virus de Epstein-Barr, glioma, cánceres de colon, estómago, próstata, células renales, cervical y ovárico, cáncer de pulmón (SCLC y NSCLC) , incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, caquexia asociada a cáncer, fatiga, astenia, síndrome paraneoplástico de caquexia e hipercalcemia. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar tumores sólidos, incluyendo sarcoma, osteosarco a, y carcinoma, tal como adenocarcinoma (por ejemplo, cáncer de mama) y carcinoma de células escamosas. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar cáncer esofágico, cáncer gástrico, cáncer de vesícula biliar, leucemia, incluyendo leucemia mielógena aguda, leucemia mielógena crónica, leucemia mielógena, leucemia linfoblástica crónica o aguda y leucemia de células pilosas. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar otras malignidades con potencial metastático invasor, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, mieloma múltiple. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar anemias y trastornos hematológicos, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, neutropenia idiopática crónica, anemia de enfermedad crónica, anemia aplástica, incluyendo anemia aplástica de- Fanconi; púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) ; púrpura trombocitopénica trombótica; síndromes mielodisplásticas (incluyendo anemia refractaria, anemia refractaria con sideroblastos anillados, anemia refractaria con blastos en exceso, anemia refractaria con blastos en exceso en transformación) ; metaplasia mieloide/mielofibrosis; y crisis vaso-oclusiva de células falsiformes . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar varios trastornos linfoproliferativos. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar síndrome linfoproliferativo autoinmunitario (ALPS) , leucemia linfoblástica crónica, leucemia de células pilosas, leucemia linfática crónica, linfoma de células T periféricas, ' linfoma linfocítica pequeña, linfoma de células de manto, linfoma folicular, linfoma de Burkitt, linfoma de células T positiva a virus de Epstein-Barr, linfoma histiocítica, enfermedad de Hodgkin, linfoma agresiva difusa, leucemias linfáticas agudas, - enfermedad linfoproliferativa T-gamma, linfoma de células B cutáneas, linfoma de células T cutáneas (es decir, fungoídes de micosis) y síndrome de Sézary. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar condiciones hereditarias. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar enfermedades que incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, enfermedad de . Gaucher, enfermedad de Huntington, enfermedad IgA lineal, y distrofia muscular. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar lesiones a la cabeza o médula espinal incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, hematoma subdural debido a trauma en la cabeza. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar lesiones de cabeza y lesiones de médula espinal. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar daño neurológico craneal y/o cefalea cérvico-génica. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar efectos secundarios neurológicos asociados con irritación del cerebro. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar condiciones del hígado. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar hepatitis, incluyendo hepatitis alcohólica aguda, hepatitis aguda viral o inducida por drogas, y hepatitis A, B y C, colangitis esclerosante e inflamación del hígado debido a causas desconocidas. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar epitelio sinusoide hepático. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar varios trastornos que comprenden pérdida auditiva que incluye, de manera enunciativa y sin limitación, pérdida auditiva asociada al nervio cócleo que se piensa que resulta de un proceso autoinmunitario, es decir, pérdida auditiva autoinmunitaria. Esta condición se trata actualmente con esteroides, metotrexato y/o ciclofosfamida. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar el síndrome de Meniere y colesteatorna, trastorno del oído medio frecuentemente asociado con pérdida auditiva. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar condiciones médicas no artríticas de huesos y articulaciones, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, trastornos de osteoclastos que conducen a pérdida ósea, tal como, de manera enunciativa y sin limitación, osteoporosis, incluyendo osteoporosis post-menopáusica, osteoartritis, periodontitis que resulta de aflojamiento o pérdida de dientes, y aflojamiento de prostesis después de reemplazo de articulaciones (en general asociado con una respuesta inflamatoria de desechos por desgaste) . Esta última condición también se llama "osteólisis de implante ortopédico" . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar disfunción temporal de articulación mandibular (TMJ) . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar enfermedades pulmonares gue incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, síndrome de esfuerzo respiratorio en -adulto (ARDS) , síndrome de esfuerzo respiratorio agudo y lesión pulmonar aguda provocando por una variedad de condiciones, que incluyen exposición a productos químicos tóxicos, pancreatitis, trauma u otras causas de inflamación. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar displacía bronco-pulmonar (BPD) ; enfermedades pulmonares obstructivas crónicas (por ejemplo, enfisema y bronquitis crónica), y enfermedad pulmonar fibrótíca crónica de infantes pretérmino. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar enfermedades pulmonares ocupacionales, incluyendo asbestosís, pneurnoconiosis de trabajadores carboneros, silicosis o condiciones similares asociadas con exposición a largo plazo a partículas finas. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar pneumonía organizadora de bronquíolos, fibrosis pulmonar, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, fibrosis pulmonar idiopática y fibrosis pulmonar inducida por radiación; sarcoídosis pulmonar; y alergias, incluyendo rinitis alérgica, dermatitis por contacto, dermatitis atópica y asma. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4 OL para tratar una variedad de trastornos reumáticos, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, artritis reumatoide en adultos y jóvenes; escleroderma; lupus eritematoso sistémico; gota; osteoartritis; polimialgia reumática; espondilartropatías seronegativas, incluyendo espondilitis anguilosante y enfermedad de Reiter. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar artritis psoriática y artritis crónica de Lyme . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar enfermedad Still y uveitis asociada con artritis reumatoide. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-?X40L para tratar trastornos que dan por resultado inflamación del músculo voluntario y otros músculos, incluyendo dermatomiositis, miositis de cuerpos de inclusión, polimiositis y linfangioleimiomatosis . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar amiloidosis primaria. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar amiloidosis secundaria que es característica de varias condiciones.' Estas condiciones incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, enfermedad de Aizheimer, amiloidosis reactiva secundaria; síndrome de Down; y amiloidosis asociada a diálisis. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar síndromes heredados de fiebre periódica, incluyendo fiebre mediterránea familiar, síndrome de fiebre periódica e hiperinmunoglobulina D y síndromes periódicos asociados al receptor de TNF (TRAPS) .
En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti -0X4OL para tratar trastornos que comprenden la piel o membranas mucosas. Estos trastornos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, enfermedades acantolíticas, incluyendo enfermedad de Darier, queratosis folicularis y penfigo vulgaris. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar acné; acné rosáceo; alopecia areata; estomatitis aftosa; bolo penfigoide; zumbidos; eccema, eritema, incluyendo eritema multiforme y eritema multiforme bulosa (síndrome de Stevens-Johnson) ; enfermedad inflamatoria de piel; liquen plano; enfermedad bulosa de IgA lineal (dermatosis bulosa crónica de infancia); pérdida de elasticidad de la piel; úlceras de superficie mucosa, incluyendo úlceras gástricas; dermatitis de neutrófila (síndrome de Sweet) ; dermatomiositis, pitiriasis rubra pilaris; psoriasis; pioderma gangrenosa; reticulohistiocitosis multicéntrica; y necrólisis epidérmica tóxica. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar dermatitis herpetiforme . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar trastornos asociados con trasplante. Estos trastornos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, enfermedad de injerto versus hospedador, y complicaciones que resultan de trasplante de órganos sólidos, tal como corazón, hígado, piel, riñon, pulmón (aniquilación de líneas aéreas de trasplante de pulmón) u otros trasplantes, incluyendo trasplantes de médula ósea. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para- tratar trastornos oculares, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, desprendimiento retinal regmatogenoso, y enfermedad inflamatoria de ojo, incluyendo enfermedad inflamatoria de ojo asociada con humo y degeneración macular. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar trastornos que afectan el sistema reproductor de hembras. Los ejemplos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, falla/infertilidad de implante múltiple; síndrome de pérdida fetal o pérdida embrionaria IV (aborto espontáneo) ; preñeces preeclámptica o eclampsia; endometriosis, cervicitis crónica, y labor pre-término. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar obesidad, incluyendo provocar una disminución en la formación de leptina. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti~OX40L para tratar ciática, síntomas de envejecimiento, reacciones severas a fármacos (por ejemplo, toxicidad 11-2 ó pneumopatía inducida por bleomicina, y fibrosis) , o para suprimir la respuesta inflamatoria antes, durante o después de la transfusión de células sanguíneas rojas alogeneicas en cirugía cardiaca u otra. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar una lesión traumática en una extremidad o articulación, tal como lesión traumática de rodilla. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar enfermedades que incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, esclerosis múltiple; síndrome de Behcet; síndrome de Sjogren; anemia hemolítica autoinmunitaria; beta-talassemia; esclerosis lateral amiotrópica (enfermedad de Lou Gehrig) ; enfermedad de Parkinson; y tenosinovitis de causa desconocida, así como varios trastornos a enfermedades autoinmunitarias asociadas con deficiencias hereditarias, incluyendo retraso mental x-enlazado . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar lesiones del sistema nervioso central (SNC) , incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, los efectos de neurotransmisores neurotóxicos descargados durante la excitación de inflamación en el sistema nervioso central y para inhibir o prevenir el desarrollo de cicatrices gliales en sitios de lesión en el sistema nervioso central. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar epilepsia lobulal temporal . Con respecto a la epilepsia y tratamiento de ataques, reducir la severidad y el número de ataques recurrentes, y reducir la severidad de los efectos perjudiciales de los ataques. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar pérdida neuronal, degeneración neuronal, y gliosis asociada con ataques . En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar polineuropatía de enfermedad crítica y polineuropatía aguda de miopatía (CIPNM) ; anorexia nerviosa; parálisis de Bell; síndrome de fatiga crónica; demencia transmisible, incluyendo enfermedad de Creutzfeld-Jacob; neuropatía desmielinante; síndrome de Guillain-Barre; enfermedad de discos vertebrales; síndrome de la guerra del Golfo; polineuropatía desmielinante inflamatoria crónica, miastenia gravis; isquemia cerebral ausente; trastornos de sueño, incluyendo narcolepsia y apnea de sueño; degeneración neuronal crónica; y ataque, incluyendo enfermedades isquémicas cerebrales. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar anorexia y/o condiciones anoréxicas, peritonitis, endotoxemia y choque séptico, formación de granuloma, ataque térmico, síndrome de Churg-Strauss, inflamación crónica después de infecciones agudas tal como tuberculosis y lepra, esclerosis sistémica y cicatrización hipertrófica. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar la toxicidad asociada con terapias de anticuerpo, quimioterapia, terapia de radiación y los efectos de otros agentes inductores de apoptosis, por ejemplo, TRAEL y TRADE, y terapias que seleccionan como objetivo células productoras de IL-1, células productoras de 0X4OL, o seleccionan como cultivo la respuesta inflamatoria. Las terapias de anticuerpos monoclonales, quimioterapias y otras terapias inductoras de apoptosis que seleccionan como objetivo células de 0X4OL inducen la producción y/o liberación de 0X4OL. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar al administrar las terapias que inhiben los efectos de 0X4OL al interferir con su interacción con su receptor y/o receptor auxiliar, se pueden reducir o eliminar los efectos proinflamatorios y condiciones médicas asociadas con 0X4OL. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar animales no humanos, tal como mascotas (perros, gatos, aves, primates, etc.), animales de granja domésticos (caballos, ganado, ovejas, cerdos, aves, etc . ) , o cualquier animal que sufra de una condición artrítica o inflamatoria de OX40/OX40L. En ciertos casos por el estilo, se puede determinar una dosis apropiada de acuerdo al peso corporal del animal. Por ejemplo, en ciertas modalidades, se puede usar una dosis de 0.2-1 mg/kg. En ciertas modalidades, la dosis se puede determinar de acuerdo al área superficial del animal, una dosis de ejemplo que varía desde 0.1 a 20 mg/pulg2, o de 5 a 12 mg/m2. Para animales pequeños, tal como perros o gatos, en ciertas modalidades, una dosis adecuada es de 0.4 mg/kg. En ciertas modalidades, se administra anticuerpos anti-OX40L por inyección u otra ruta adecuada una o más veces por semana hasta que se mejore la condición del animal, o se pueden administra de manera indefinida. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar lesiones psoriáticas. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar lesiones psoriáticos que resultan en pacientes quienes tienen psoriasis ordinaria o artritis psoriática. En ciertas modalidades, los pacientes se definen como que tienen psoriasis ordinaria si carecen de los síntomas más serios de artritis psoriática (por ejemplo, implicación de DIP de articulación interf langeal distal, entesopatía, espondilitis y dactilitis) , pero exhiben uno de los siguientes: 1) lesiones de piel hinchadas o inflamadas cubiertas con escamas blancas plateadas (psoriasis en placa o psoriasis vulgaris); 2) puntos rojos pequeños que aparecen en el tronco, brazos o piernas (psoriasis de gota) ; 3) lesiones inflamadas lisas sin escamas en las superficies de flexión de la piel (psoriasis invertida) ; 4) enrojecimiento extendido y exfoliación de escamas finas, con o sin picazón e hinchamiento (psoriasis eritrodérmica) ; 5) lesiones tipo ampolla (psoriasis pustular) ; 6) lesiones del cuerpo cabelludo, inflamado, elevado, cubiertas por escamas blancas plateadas (psoriasis de cuero cabelludo; 7) uñas picadas, con o sin descoloramiento amarillo, uñas rompibles, o inflamación y desprendimiento de la uña de la matriz de la uña (psoriasis de uña) . Al tratar psoriasis ordinaria, en ciertas modalidades, se pueden administrar anticuerpos anti-0X4OL en una cantidad y durante un tiempo suficiente para inducir una mejora en la condición del paciente como se mide de acuerdo a cualquier indicador que refleja la severidad de las lesiones psoriáticas del paciente. En ciertas modalidades, se pueden valorar uno o más indicadores para determinar si la cantidad de anticuerpo anti-0X4OL y la duración del tratamiento es suficiente. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-OX40L se administra en una cantidad y durante un tiempo suficiente para inducir una mejora sobre la línea base en ya sea el área de psoriasis y el índice de severidad (PASI) de la Puntuación de Valoración de Lesión Objetivo. En ciertas modalidades, se usan ambos indicadores. En ciertas modalidades, cuando se usa puntuación de PASI como en indicador, el tratamiento se considera como suficiente cuando el paciente exhibe una mejora de al menos 50% en su puntuación de PASI, o de manera alternativa, cuando el paciente exhibe una mejora de al menos 75% en la puntuación de PASI . En ciertas modalidades, el uso de la Puntuación de Valoración de Lesión Objetivo de Psoriasis para medir la suficiencia del tratamiento comprende determinar para una lesión psoriática individual si se ha presentado la mejora en uno o más de lo siguiente, cada uno de los cuales se clasifica de manera separada: elevación de las placas; cantidad y grado de escamas o grado de eritema; y respuesta de lesión objetivo al tratamiento. En ciertas modalidades, la Puntuación de Valoración de Lesión Objetivo de Psoriasis se determina al adicionar conjuntamente las puntuaciones separadas para los cuatro indicios mencionados anteriormente, y determinar el grado de mejora al comparar la puntuación de línea base a la puntuación después que se haya administrado el tratamiento. En ciertas modalidades, se obtiene un grado satisfactorio de mejora en pacientes con psoriasis al administrar los anticuerpos anti-OX40L una o más veces por semana. En ciertas modalidades, los anticuerpos anti-OX40L se pueden administrar una vez, dos veces o tres o más veces por semana. En ciertas modalidades, el tratamiento se puede continuar durante un periodo de al menos una semana, dos semanas, tres semanas, cuatro semanas o más tiempo. En ciertas modalidades, el tratamiento se puede descontinuar después que mejora el paciente, luego reasumir si regresan los síntomas, de manera alternativa, el tratamiento se puede administrar de manera continua durante un periodo indefinido. En ciertas modalidades, la ruta de administración es inyección subcutánea. En ciertas modalidades, se administran anticuerpo anti-OX40L por inyección a una dosis de 5-12 mg/m2, o una dosis lineal de ya sea 25 mg ó 50 mg. En ciertas modalidades, se inyecta una dosis de 25 mg dos veces por semana, y en ciertas modalidades, se inyecta una dosis de 50 mg una vez por semana. En ciertas modalidades, se administran anticuerpos anti-OX40L una vez cada 6 meses. En ciertas modalidades, se administran anticuerpos anti-OX40L una vez cada tres meses. En ciertas modalidades, se administran anticuerpos anti-OX40L una vez al mes. En ciertas modalidades del tratamiento de pacientes pediátricos con psoriasis, la dosis administrada por inyección es 0.1 mg/kg, hasta una dosis máxima de 25 mg. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar psoriasis ordinaria en combinación con uno, dos, tres o más medicamentos que son efectivos contra psoriasis. Estos medicamentos adicionales se pueden administrar antes, de manera simultánea con, o de manera secuencial con anticuerpos anti-0X40L. Los fármacos adecuados para terapias de combinación de psoriasis incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, medicamentos para el dolor (analgésicos) , que incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, acetaminofen, codeína, propoxifeno-napsilato, clorhidrato de oxicodona, bitartrato de hidrocodona 24 y tramadol . En ciertas modalidades, se puede administrar un anticuerpo anti-OX40L con o sin ENBRELMR, en combinación con metotrexato, sulfasalazina, •sales de oro, azatioprina, ciclosporina,' antimalarios, esteroides orales (por ejemplo, prednisona) o colquicina. Los antiinflamatorios no esteroidales también se pueden coadministrar con un anticuerpo anti-0X4OL e imitadores de TNFR, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación ácido salicílico (aspirina) ; ibuprofeno; indometacina celecoxib; rofecoxíb; quetorolac; nambumetona; piroxicam naproxeno; oxaprozina; sulindac; quetoprofeno,- dielofenaco y otros inhibidores de C0X-1 y C0X-2, derivados de ácido salicílico, derivados de ácido propiónico, derivados de ácido acético, derivados de ácido fumárico, derivados de ácido carboxílico, derivados de ácido butírico, oxicam, pirazoles y pirazolonas, incluyendo anti-inflamatoríos reción desarrollados. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos antí-OX40L para tratar psoriasis en combinación con uno o más de los siguientes: esteroides tópicos, esteroides sistémicos, antagonistas de citocinas inflamatorias, anticuerpos contra proteínas de superficie de células T, antralina, alquitrán mineral, vitamina D3 y sus análogos (incluyendo vitamina D3 de 1, 25-dihidroxi y calcipotrieno) , retinoides tópicos, retinoides orales (incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, etretinato, acitretina e isotretinoine) , ácido salicílico tópico, metotrexato, ciclosporina, hidroxiurea, y/o sulfasalazina. En ciertas modalidades, se pueden administrar anticuerpos anti-0X4OL en combinación con uno o más de los siguientes compuestos: minociclina; misoprostol; colágeno oral; penicilamina; 6-mercaptopurina; mostaza de nitrógeno; gabapentina; bromocriptina; somatostatina; péptido T; anticuerpo monoclonal anti-CD4; ácido fumárico; lípidos de éster etílico poliinsaturados; zinc; y/u otros fármacos que se pueden usar para tratar psoriasis. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar psoriasis al administrar anticuerpos anti-OX40L en combinación con uno o más de los siguientes compuestos aplicados de forma tópica: aceites, incluyendo aceites de pescado, aceites de nuez y aceites vegetales; aloe vera; jojoba; sales del Mar Muerto; capsaicina; cardo láctico; ungüento medicinal; humectante; y/o sales de Epsom. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar psoriasis al administrar anticuerpos anti-OX40L en combinación con una o más de las siguientes terapias de ejemplo: plasmaferesis; fototerapie con luz ultravioleta B; psoraleno combinado con luz ultravioleta A (PUVA) ; y/o baños de sol. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar trastornos pulmonares que incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, proteinosis alveolar pulmonar, pneumopatía inducida por bleomicína y fibrosis, fibrosis pulmonar inducida por radiación, fibrosis cística, acumulación de colágeno en los pulmones, y ARDS . En ciertas modalidades, estas enfermedades se pueden tratar con combinaciones de anticuerpos anti-0X4OL y un inhibidor de IL-4. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-0X4OL para tratar varios trastornos de la piel, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, dermatitis herpetiforme (enfermedad de Duhring) , dermatitis atópíca, dermatitis por contacto, urticaria (incluyendo urticario idiopática crónica) , y enfermedades autoinmunitarias de ampollas, que incluyen penfigo vulgaris y bolo penfigoide. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar miestenia gravis, sarcoidosis, incluyendo sarcoidosis pulmonar, escleroderma, artritis reactiva, síndrome híper-IgE, esclerosis múltiple y síndrome de hipereosinófilo idiopático. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar reacciones alérgicas al medicamento y como un adyuvante a inmunoterapia de alergia. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L para tratar trastornos o lesiones cardiovasculares que incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, aneurismos aórticos; incluyendo aneurismos aórticos abdominales, síndrome coronario agudo, arteritis; oclusión vascular, incluyendo oclusión de arteria cerebral; complicaciones de cirugía de derivación coronaria; lesión por repercusión isquémica; enfermedad de corazón, incluyendo enfermedad cardiaca aterosclerótica, miocarditis, incluyendo miocarditis autoinmunitaria crónica y miocarditis viral; falla cardiaca, incluyendo falla cardiaca crónica, falla cardiaca congestiva, caquexia de falla cardiaca; infarto al miocardio; restenosis y/o aterosclerosis después de cirugía al corazón o después de procedimientos de angioplastía de globo de arteria carótida; isquemia miocardial ausente; disfunción de bomba ventricular izquierda, complicaciones post-implantación de dispositivos auxiliares venticulares izquierdos; fenómeno de Raynaud; tromboflebitis; vasculitis, incluyendo vasculitis de Kawasaki; enfermedad veno-oclusiva, arteritis de células gigantes, granulomatosis de Wegener; confusión mental después de cirugía de derivación cardio pulmonar, y púrpura de Schoenlein-Henoch. En ciertas modalidades, se pueden usar combinaciones de anticuerpos anti-OX40L, inhibidores de TNF e inhibidores de angiogénesis (por ejemplo anti-VEGR) para tratar ciertas enfermedades cardiovasculares tal como aneurismos aórticos y tumores. Se entiende que la respuesta por pacientes individuales a los medicamentos mencionados anteriormente o terapias de combinación pueden variar, y se puede determinar por su facultativo una combinación eficaz apropiada de los fármacos para cada paciente. El modo cinomolgus proporciona un modelo útil para ciertas enfermedades. Las enfermedades de ejemplo incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, síndrome de rechazo de trasplante y enfermedad inflamatoria de intestino, como la enfermedad. Cuando se prueba la eficacia de un anticuerpo humano en un modelo de enfermedad humana en mono cinomolgus, en ciertas modalidades, es útil determinar si el anticuerpo anti-0X4OL se une a 0X4OL en humanos y monos cinomolgus a un nivel comparable. En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-OX40L puede ser parte de una molécula conjugada que comprende todo o parte del anticuerpo anti-0X4OL y un agente citotóxico. El término "agente citotóxico" se refiere a una sustancia que inhibe o previene la función de células y/o provoca la muerte o destrucción de las células. El término incluye, de manera enunciativa y sin limitación, isótopos radioactivos (por ejemplo, I131, I125, Y90 y Re186), agentes quimioterapéuticos, y toxinas tal como toxinas enzimáticamente activas de origen bacteriano, fungal, vegetal o animal, o fragmentos de las mismas. Los agentes citotóxicos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, adriamicina, doxorrubicina, 5-fluorouracilo, citosina-arabinósido ("Ara-C"), ciclofosfamida, tiotepa, taxotero (docetaxel), busulfan, citoxina, taxol, metotrexato, cisplatina, melfalan, vinblastina, bleomicina, etopósido, ifosfamida, mitomicina C, mitoxantrona, vincreistina, vinorrelbina, carboplatina, tenipósido, daunomicina, carminomicína, aminopterina, dactinomicina, mitomicinas, esperamicinas, melfalan y otras mostazas de nitrógeno relacionadas. En ciertas modalidades, un anticuerpo anti-OX40L puede ser parte de una molécula conjugada que comprende todo o parte del anticuerpo anti-OX40L y un profármaco. En ciertas modalidades, el término "profármaco" se refiere a un precursor o forma derivada de una sustancia farmacéuticamente activa. En ciertas modalidades, un profármaco es menos citotóxico a células en comparación al fármaco de origen y es capaz de ser activado enzimáticamente o convertido en la forma de origen citotóxica más activa. Los profármacos de ejemplo de esta invención incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, profármacos que contienen fosfato, profármacos que contienen tiofosfato, profármacos que contienen sulfato, profármacos que contienen péptido, profármacos modificados con D-aminoácido, profármacos glicosilados, profármacos que contienen beta-lactama, profármacos que contienen fenoxiacetamida opcionalmente sustituidos y profármacos que contienen fenilacetamida opcíonalmente sustituidos, profármacos de 5-fluorocitosina y otros profármacos de 5-fluorouridina que se pueden convertir a un fármaco libre citotóxico más activo. Los ejemplos de fármacos citotóxicos que se pueden derivar en una forma de profármaco incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, aquellos agentes citotóxicos descritos anteriormente. Ver, por ejemplo, patente de los Estados Unidos número 6,702,705. En ciertas modalidades, los conjugados de anticuerpo funcionan al hacer que la porción de anticuerpo de la molécula dirija la porción citotóxica o porción de profármaco de la molécula a una población específica de células en el paciente. En el caso de anticuerpos anti-OX4ÓL, estas moléculas conjugadas se pueden usar, por ejemplo, en ciertas modalidades, para destruir las APC que expresan 0X4OL en sitios de respuestas inflamatorias anormales o destructivas. En ciertas modalidades, se proporcionan métodos para tratar un paciente que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo antí-0X40L. En ciertas modalidades, se proporcionan métodos para tratar un paciente que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un conjugado de anticuerpo. En ciertas modalidades, se usa un anticuerpo en unión con una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un agente terapéutica adicional . Los agentes terapéuticos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, factores morfogénicos óseos designados BMP-1 hasta BMP-12; factor-ß de crecimiento de transformación (TGF-ß) y miembros de la familia de TGF-ß; inhibidores de interleucina-1 (IL-1) , incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, IL-lra y derivados de los mismos y KineretMR; inhibidores de TNFa, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, receptores solubles de TNFa, ENBRELMR, anticuerpo anti-TNFa, RemicadeMR, y anticuerpo D2E7; hormona paratiroides y análogos de la misma; proteína relacionada a paratiroides y análogos de la misma; prostaglandinas de la serie E; bisfosfonatos (tal como alendronato y otros) ; minerales de mejora ósea tal como fluoruro y calcio; fármacos antiinflamatorios no esteroidales (NSAID) , incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, inhibidores de COX-2, tal como CelebrexMR y VioxxMR; inmunosupresores, tal como metotrexato o leflunomida; inhibidores de serina-proteasa, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, inhibidor de leucocito-proteasa secretor (SLPI) ; inhibidores de IL-6 (incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, anticuerpos a IL-6) , inhibidores de IL-8 (incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, anticuerpos a IL-8) ; inhibidores de IL-18 (incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, proteína de unión a IL-18 y anticuerpos IL- 18) ; moduladores de enzima de conversión de interleucina-1 (ICE) ; factores de crecimiento de fibroglastos FGF-1 a FGF-10 y moduladores de FGF; antagonistas de PAF; factor de crecimiento de queratinocito (KGF) , moléculas relacionadas a KGF, y moduladores de KGF; moduladores de petaloproteinasa de matriz (MMP) moduladores de óxido nítrico-sintasa (NOS) , incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, moduladores de NOS inducible; moduladores de receptor de glucocorticoide; moduladores de receptor de glutamato; moduladores de niveles de lipopolisacáridos (LPS) ; y noradrenalina y moduladores e imitadores de los mismos. Ver, por ejemplo, solicitud PPCT publicada número WO 03/0002713 para detall,es de ejemplo de agentes terapéuticos adicionales. Como se analiza anteriormente, en ciertas modalidades, se pueden administrar anticuerpo anti-OX40L de manera concurrente con uno o más fármacos diferentes que se administran al mismo paciente, cada fármaco que se administra de acuerdo a un régimen adecuado para ese medicamento. Este tratamiento abarca el pre-tratamiento, tratamiento simultáneo, tratamiento secuencial y regímenes alternantes. Los ejemplos adicionales de estos fármacos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, antivirales, antibióticos, analgésicos, corticosteroides, antagonistas de citocinas inflamatorias, DMARD, y antiinflamatorios no esteroidales . Adicionalmente, en ciertas modalidades, se administran anticuerpos anti-OX40L en combinación con pentoxifílina o talidomida. En ciertas modalidades, se tratan varios trastornos médicos con anticuerpos anti-OX40L en combinación con otra citocina o inhibidor de citocina. Por ejemplo, en ciertas modalidades, se pueden administrar anticuerpos anti-0X4OL en una composición que también contiene el compuesto que inhibe la interacción de otras citocinas inflamatorias con sus receptores. En ciertas modalidades, el anticuerpo anti-0X4OL y los inhibidores de citocinas se pueden administrar como composiciones separadas, y estos se pueden administrar por la misma o diferentes rutas. Los ejemplos de inhibidores de citocina usados en combinación con anticuerpos anti-OX40L incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, aquellos que antagonizan, por ejemplo, TGFß, IFN?, receptor de IL-1 tipo II, IL-6 ó IL-8 y TNF. En ciertas modalidades, la combinación de un anticuerpo anti-0X4OL y un inhibidor de IL-1, por ejemplo, receptor de IL-1 tipo II ó IL-6 se pueden usar para tratar la recurrencia de ataques, incluyendo ataques inducidos por el antagonismo del receptor de GABAA, ataques asociados con episodios ictales de EEG y ataques límbicos motrices que se presentan durante el estado epiléptico. En ciertas modalidades, la combinación de anticuerpos anti-0X4OL e IFN?-lb se puede usar para tratar fibrosis pulmonar idiopática y fibrosis cística. Otras combinaciones de ejemplo para tratar enfermedades, tal como aquéllas descritas en la presente, incluyen el uso de anticuerpos anti-OX40L con compuestos que interfieren con la unión de RANK y RANK-ligando, tal como inhibidores de RANK-ligando, 8 ó formas solubles de RANK, incluyendo RANK:Fc. En ciertas modalidades, la combinación de anticuerpos anti-OX40L y RANK:Fc se puede usar para inhibir o prevenir la destrucción ósea en varios ambientes incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, varios trastornos reumáticos, osteoporosis, mieloma múltiple u otras malignidades que provocan degeneración ósea, o terapia anti-tumor tendente a inhibir o prevenir metástasis de hueso, o destrucción ósea asociada con desechos de desgaste de próstesis o con periodonititis . En ciertas modalidades, se pueden administrar anticuerpos anti-0X4OL en combinación con uno o más de los siguientes: G-CSF, GM-CSF, IL-2 y/o inhibidores de proteína cinasa A tipo 1 o para mejorar la proliferación de células T en pacientes infectados con MV quienes están recibiendo terapia antirretroviral . En ciertas modalidades, se pueden administrar anticuerpos anti-0X4OL en combinación con uno o más de los siguientes: formas solubles de un receptor de IL-17 (tal como IL-17R:Fc) , proteína de unión a IL-18, formas solubles de receptores de IL-18, y anticuerpo de IL-18, anticuerpos contra receptores de IL-18 o anticuerpos contra CD30-ligando y/o contra CD4. En ciertas modalidades, se pueden tratar trastornos médicos con una combinación de anticuerpos anti- 0X4OL, un inhibidor de TNF (por ejemplo, TNFR:Fc (ENBRELMR comercializado para usos clínicos por Immunex Corp) ) y cualquier combinación de las citocinas descritas anteriormente o inhibidores de citocina que son agentes activos en terapias de combinación. En ciertas modalidades, los métodos de terapia de combinación para tratar artritis reumatoide, atague y falla cardiaca congestiva, incluyen administrar anticuerpos anti-0X4OL y ENBRELMR. En ciertas modalidades, se pueden usar anticuerpos anti-OX40L e inhibidores de TNF en terapias de combinación para el uso en medicina y en particular en terapias terapéuticas y preventivas para trastornos médicos tal como aquellos descritos en la presente. En ciertas modalidades, el uso en medicina puede comprender el tratamiento de cualquiera de los trastornos médicos como se describe en la presente con una terapia de combinación que incluye administrar una combinación de - anticuerpos anti-OX40L y ENBRELMR. En ciertas modalidades, los anticuerpos anti-OX40L y el inhibidor de TNF (ENBRELMR) pueden estar en la forma de compuestos, composiciones o terapias de combinación. Donde los compuestos se usan conjuntamente con uno o más componentes diferentes, el compuesto y los uno o más componentes diferentes se pueden administrar de manera simultánea, separada o secuencial (por ejemplo, en un formato farmacéutico) . Los antagonistas de TNF de ejemplo gue se pueden usar con anticuerpos anti-OX40L incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, fragmentos peptídicos de oligonucleótidos antisentido de TNF, o ribozimas que inhibe la producción de TNFa, anticuerpos dirigidos contra TNFa (es decir, REMICADE) , y proteínas recombinantes que comprenden todos o porciones de receptores de TNFa o variantes modificadas de los mismos, incluyendo, de manera enunciativa y sin limitación, muteínas genéticamente modificadas, formas multiméricas y formulaciones de liberación sostenida. Los inhibidores de TNFa de ejemplo se describen en las patentes de los Estados Unidos números 5,641,751 y 5,519,000, y péptidos que contienen D-aminoácidos se describen en la patente de los Estados Unidos número 5,753,628. Los compuestos de ejemplo que son inhibidores de TNF que se pueden usar en terapias de combinación incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, moléculas pequeñas tal como talidomida o análogos de talidomida, pentoxifilina o inhibidores de metaloproteinasa de matriz (MMP) y otras moléculas pequeñas. Los inhibidores de MMP de ejemplo incluyen, por ejemplo, aquellos descritos en las patentes de los Estados Unidos números 5,883,131; 5,863,949; y 5,861,510, así como compuestos de mercapto-alquil-peptidilo descritos en la patente de los Estados Unidos número 5,872,146. Otras moléculas pequeñas capaces de reducir la producción de TNFa, incluyen, por ejemplo, las moléculas descritas en la patentes de los Estados Unidos números 5,508,300; 5,596,013; y 5,563,143, cualquiera de las cuales se puede administrar en combinación con inhibidores de TNFa tal como TNFR solubles o anticuerpos contra TNFa. Las moléculas pequeñas de ejemplo adicionales útiles para tratar enfermedades mediadas por TNFa descritas en la presente incluyen los inhibidores de MMP que se describen en las patentes de los Estados Unidos números 5,747,514 y 5,691,382, así como los derivados de ácido hidroxámico descritos en la patente de los Estados Unidos número 5,821,262. Las enfermedades descritas en la presente también se pueden tratar con moléculas pequeñas que inhiben fosfodiesterasa IV y producción de TNFa, tal como derivados de oxima sustituidos (WO 96/00215) , quinolina-sulfonamidas (patente de los Estados Unidos número 5,834,485), derivados de aril-furano (WO 99/18095) y derivados heterobicíclicos (WO 96/01825; GB 2,291,422 A). En ciertas modalidades, los derivados de tiazol que suprimen TNFae IFNy (WO 99/15524) , así como derivados de xantina que suprimen TNFa y citocinas proinflamatorias diferentes (por ejemplo, ver patentes de los Estados Unidos números 5,118,500; 5 , 096 , 906 ; y 5,196,430) también pueden ser útiles para el tratamiento de las enfermedades descritas en la presente. Las moléculas pequeñas de ejemplo adicionales para tratar las condiciones descritas en la presente incluyen aquéllas descritas en la patente de los Estados Unidos número 5,547,979. En ciertas modalidades, los oligonucleótidos antisentido adecuados para tratar enfermedades en condiciones terapéuticas incluyen, por ejemplo, los oligonucleótidos anti-TNFa descritos en la patente de los Estados Unidos número 6,080,580, que propone el uso de estos oligonucleótidos como candidatos para probar en modelos de animales de diabetes mellitus, artritis reumatoide, sensibilidad por contacto, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, pancreatitis, hepatitis y trasplante de corazón. En ciertas modalidades, la terapia de combinación utiliza TNFR solubles como un antagonista de TNFa. Las formas solubles de TNFR pueden incluir monómeros, proteínas de fusión (también llamadas "proteínas quiméricas"), dímeros, trímeros o multímeros de mayor orden. En ciertas modalidades, el derivado de TNFR soluble es uno que imita el TNFR de 75 kDa ó el TNFR de 55 kDa y que se une a TNFa en el cuerpo del paciente. En ciertas modalidades, estos imitadores solubles de TNFR se pueden derivar de los TNFR p55 ó p75 o fragmentos de los mismos.
En ciertas modalidades, los TNFR diferentes de p55 y p75 se pueden usar para derivar compuestos solubles para tratar los varios trastornos médicos descritos en la presente, por ejemplo, el TNFR que se describe en la WO 99/04001. Las moléculas de TNFR solubles de ejemplo usadas para construir imitadores de TNFR incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, análogos o fragmentos de TNFR nativos que tienen al menos 20 aminoácidos, que carecen de la región transmembrana del TNFR nativo, y que son capaces de la unión a TNFa. En ciertas modalidades, los antagonistas derivados de los TNFR compiten por TNFa con los receptores en la superficie celular, inhibiendo de este modo TNFa de la unión a las células, previniéndolas de este modo que manifiesten sus actividades biológicas. La unión de TNFR soluble a TNFa o LTa se puede valorar usando ELISA o cualguier otro ensayo conveniente. En ciertas modalidades, los receptores solubles de TNFa se usan en la elaboración de medicamentos para el tratamiento de numerosas enfermedades. En ciertas modalidades, se pueden administrar anticuerpos anti-0X40L a un paciente en una cantidad terapéuticamente efectiva junto con cantidades terapéuticamente efectivas de un inhibidor de IL-4, y opcionalmente, un inhibidor de TNFa, por ejemplo, ENBRELMR, en cualquiera de las terapias de combinación mencionadas anteriormente. Los antagonistas de IL-4 que se pueden emplear de acuerdo a ciertas modalidades incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, receptores de IL-4 (IL-4R) y otras moléculas de unión de IL-4, muteínas de IL-4 y anticuerpos que se unen de manera específica con IL-4 ó receptores de IL-4 que bloquean de este modo la transducción de señales, así como los oligonucleótidos antisentido o ribozimas dirigidas a IL-4 ó IL-4R. Anticuerpos específicos para IL-4 ó receptor de IL-4 se pueden preparar usando procedimientos normales. En ciertas modalidades, los receptores de IL-4 adecuados para el uso como se describe en la presente son fragmentos solubles de IL-4R humano que retienen la capacidad de IL-4. En ciertas modalidades, estos fragmentos son capaces de unirse a IL-4, y retener toda o parte de la región extracelular de IL-4R. Los antagonistas de IL-4 de ejemplo que pueden ser útiles en terapias de combinación incluyen moléculas que bloquean de manera selectiva la síntesis de IL-4 endógena o IL-4R. Los receptores de IL-4 de ejemplo se describen en la patente de los Estados Unidos número 5,599,905; Idzerda et al., J. Exp. Med. 171:861-873, Marzo de 1990 (human IIL-4R) ; y Mosley et al., Cell 59:335-348, 1989 (IL-4R murino). La proteína descrita en estas tres referencias se refiere algunas veces en la literatura científica como IL-4Ra.
En ciertas modalidades, en vista de la enfermedad que se va a tratar y el nivel deseado de tratamiento, se pueden administrar dos, tres o más agentes. En ciertas modalidades, estos agentes se pueden proporcionar conjuntamente por inclusión en la misma formulación. En ciertas modalidades, estos agentes y un anticuerpo se pueden proporcionar conjuntamente por inclusión en la misma formulación. En ciertas modalidades, estos agentes se pueden proporcionar conjuntamente por inclusión en un equipo de tratamiento. En ciertas modalidades, estos agentes se pueden proporcionar de manera separada. En ciertas modalidades, cuando se administran por terapia génica, los agentes que codifican para agentes proteicos y/o un anticuerpo se pueden incluir en el mismo vector. En ciertas modalidades, los genes que codifican para agentes proteicos y /o un anticuerpo pueden estar bajo el control de la misma región promotora. En ciertas modalidades, los genes que codifican para agentes proteicos y/o un anticuerpo pueden estar en vectores separados. En ciertas modalidades, la invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo junto con un diluyente farmacéuticamente aceptable, portador, solubilizador, emulsionador, conservador y/o adyuvante. En ciertas modalidades, la invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo y una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un agente terapéutico adicional, junto con un diluyente, portador, solubilizador, emulsionador, conservador y/o adyuvante farmacéuticamente aceptable . En ciertas modalidades, los materiales de formulación aceptables son preferentemente no tóxicos a los receptores a las dosis y concentraciones empleadas. En ciertas modalidades, la composición farmacéutica puede contener materiales de formulación para modificar, mantener o conservar, por ejemplo, el pH, osmolaridad, viscosidad, claridad, color, isotonicidad, olor, esterilidad, estabilidad, velocidad de disolución o liberación, adsorción o penetración de la composición. En ciertas modalidades, los materiales adecuados de formulación incluyen de manera enunciativa y sin limitación, aminoácidos (tal como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina) ,- antimicrobianos; antioxidantes (tal como ácido ascórbico, sulfito de sodio o sulfito ácido de sodio) ; amortiguadores (tal como borato, bicarbonato, Tris-HCl, citratos, fosfatos u otros ácidos orgánicos) , agentes de volumen (tal como mannitol ó glicina) ; agentes quelantes (tal como ácido etilendiamina-tetracético (EDTA) ) ,- agentes de formación de complejos (tal como cafeína, polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina o hidroxipropil- beta-ciclodextrina) ; agentes de relleno; monosacáridos; disacáridos; y otros carbohidratos (tal como glucosa, mannosa o dextrinas) ; proteínas (tal como albúmina de suero, gelatina o inmunoglobulina); agentes colorantes, saborizantes y diluyentes; agentes emulsionadores; polímeros hidrófilos (tal como polivinilpirrolidona) ; polipéptidos de bajo peso molecular; contraiones formadores de sal (tal como sodio) ; conservadores (tal como cloruro de benzalconio, ácido benzoico, ácido salicílico, trimerosal, alcohol fenetílico, metilparabeno, propilparabeno, clorohexidina, ácido sórbico ó peróxido de hidrógeno) ; solventes (tal como glicerina, propilenglicol o polietilenglicol) ; alcoholes de azúcar (tal como mannitol o sorbitol) ,- agentes de suspensión; agentes tensioactivos o agentes humectantes (tal como pluronics, PEG, esteres de sorbitan, polisorbatos tal como polisorbato 20, polisorbato 80, tritón, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal) ; agentes mejoradores de estabilidad tal como sacarosa, o sorbitol) ; agentes mejoradores de tonicidad (tal como haluros de metales alcalinos, de manera preferente cloruro de sodio o potasio, mannitol, sorbitol); vehículos de distribución; diluyentes; excipientes y/o adyuvantes farmacéuticos (Remington Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, ed. , Mack Publishing Company (1990) .
En ciertas modalidades, un anticuerpo y/o una molécula terapéutica adicional se enlaza a un vehículo que extiende la vida media, conocido en la técnica. Estos vehículos incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, el dominio Fe, polietilenglicol y dextrano. Estos vehículos se describen por ejemplo en la solicitud de Patente de los Estados Unidos No. de Serie 09/428,082 y solicitud PCT publicada No. WO 99/25044. En ciertas modalidades, la composición farmacéutica se determinará por un experto en la técnica dependiendo de, por ejemplo, la ruta propuesta de administración, formato de distribución y dosis deseada. Ver, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, supra. En ciertas modalidades, estas composiciones pueden tener influencia en el estado físico, estabilidad, velocidad de liberación in vivo y velocidad de depuración in vivo de los anticuerpos. En ciertas modalidades, el vehículo o portador primario en una composición farmacéutica puede ser de naturaleza ya sea acuosa o no acuosa. Por ejemplo, en ciertas modalidades, un vehículo o portador adecuado puede ser agua para inyección, solución salina fisiológica o fluido cerebroespinal artificial, posiblemente complementado con otros materiales comunes en composiciones para administración parenteral. En ciertas modalidades, solución salina amortiguada neutral o solución salina mezclada con albúmina de suero son vehículos de ejemplo adicionales. En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas comprenden amortiguador Tris de aproximadamente 7.0 - 8.5, o amortiguador de acetato de aproximadamente pH 4.0-5.5, que pueden incluir adicionalmente sorbitol o un sustituto adecuado para el mismo. En ciertas modalidades, una composición farmacéutica es una formulación acuosa o líquida que comprende un amortiguador de acetato de aproximadamente pH 4.0-5.5 un poliol (polialcohol) , y opcionalmente, un agente tensioactívo, en donde la composición no comprende una sal, por ejemplo, cloruro de sodio, y en donde la composición es isotónica para el paciente. Los polioles de ejemplo incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, sacarosa, glucosa, sorbitol y mannitol. Un agente tensioactivo de ejemplo incluye, de manera enunciativa y sin limitación, polisorbato. En ciertas modalidades, una composición farmacéutica es una formulación acuosa o líquida que comprende un amortiguador de acetato de aproximadamente pH 5.0, sorbitol, y un polisorbato, en donde la composición no comprende una sal, por ejemplo, cloruro de sodio, y en donde la composición es isotónica para el paciente. Se encuentran ciertas composiciones de ejemplo, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 6.171,586. Los portadores farmacéuticos adicionales incluyen, de manera enunciativa y sin limitación, aceites, incluyendo aceite de petróleo, aceite animal, aceite vegetal, aceite de cacahuate, aceite de soya, aceite mineral, aceite de ajonjolí, y similares. También se pueden emplear soluciones acuosas de dextrosa y glicerol como portadores líquidos, particularmente para soluciones inyectables. En ciertas modalidades, una composición que comprende un anticuerpo, con o sin al menos un agente terapéutico adicional, se puede preparar para almacenamiento al mezclar la composición seleccionada que tiene el grado deseado de pureza con agentes opcionales de formulación (Remington's Pharmaceutical Sciences, supra) en la forma de una torta liofilizada o una solución acuosa. Adicionalmente en ciertas modalidades, una composición que comprende un anticuerpo, con o sin al menos un agente terapéutico adicional, se puede formular con un liofilizado usando soluciones de excipiente apropiadas, (por ejemplo sacarosa) como diluyente. En ciertas modalidades, se administran anticuerpos, anti-OX40L en la forma de una composición fisiológicamente aceptable que comprende proteína recombinante purificada en unión con portadores, excipientes o diluyentes fisiológicamente aceptables. En ciertas modalidades, estos portadores son no tóxicos a los receptores a las dosis de concentraciones empleadas. En ciertas modalidades, la preparación de estas composiciones puede comprender combinar los anticuerpos anti-OX40L' con amortiguadores, antioxidantes tal como ácido ascórbico, polipéptidos de bajo peso molecular, (tal como aquellos que tienen menos de 10 aminoácidos, proteínas, aminoácidos, carbohidratos tal como glucosa, sacarosa o dextrinas, agentes quelantes tal como EDTA, glutationa y/o otros estabilizadores y excipientes. En ciertas modalidades, se determinan dosis apropiadas en ensayos normales de dosificación, y pueden variar de acuerdo a la ruta elegida de administración. En ciertas modalidades, de acuerdo con las normas industriales apropiadas, también se pueden adicionar conservadores, que incluyen de 'manera enunciativa y sin limitación, alcohol bencílico. En ciertas modalidades, la calidad y frecuencia de la administración se puede determinar en base a factores tal como la naturaleza y severidad de la enfermedad que se trate, la respuesta deseada, la edad y condición del paciente, y demás . En ciertas modalidades, se pueden seleccionar composiciones farmacéuticas para distribución parenteral. La preparación de estas composiciones farmacéuticamente aceptables está dentro de la habilidad de la técnica. En ciertas modalidades, los componentes de la información están presentes en concentraciones que son aceptables al sitio de administración. En ciertas modalidades, se usan amortiguadores para mantener la composición á pH fisiológico o un pH ligeramente menor, típicamente dentro de un intervalo de pH de aproximadamente 5 a aproximadamente 8. En ciertas modalidades, cuando se contempla administración parenteral, una composición terapéutica puede estar en la forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable, libre de pirógenos que comprende el anticuerpo deseado, con o sin agentes terapéuticos adicionales, en un vehículo farmacéuticamente aceptable. En ciertas modalidades, un vehículo para inyección parenteral es agua destilada estéril en el cual el anticuerpo, con o sin al menos un agente terapéutico adicional, se formula como una solución isotónica estéril, apropiadamente conservada. En ciertas modalidades, la preparación puede comprender la formulación de la molécula deseada con un agente tal como microesferas inyectables, partículas biocomestibles, compuestos poliméricos, tal como ácido poliláctico o ácido poliglicólico) , cuentas o liposomas, que pueden proporcionar la liberación controlada o sostenida del producto que entonces se puede distribuir mediante una inyección de depósito. En ciertas modalidades también se puede usar ácido hialurónico, y puede tener el efecto de promover duración sostenida en la circulación. En ciertas modalidades, se puede usar dispositivos de distribución de fármaco implantables para introducir la molécula deseada. En ciertas modalidades, se puede formular para inhalación una composición farmacéutica. En ciertas modalidades, se puede formular un anticuerpo, con o si al. menos un agente terapéutico adicional como un polvo seco para inhalación. En ciertas modalidades, una solución de inhalación que comprende un anticuerpo, con o sin al menos un agente terapéutico adicional, se puede formular como un propulsor para distribución en aerosol. En ciertas modalidades, se pueden nebulizar soluciones. La administración pulmonar se describe adicionlmente en la solicitud PCT no . PCT/US94/001875, que describe distribución pulmonar de proteínas químicamente modificadas . En ciertas modalidades, se contempla que las formulaciones se puedan administrar de manera oral. En ciertas modalidades un anticuerpo, con o si al menos un agente terapéutico adicional, que se administra de esta manera y se puede formular con o sin aquellos portadores habitualmente usados en la combinación de formas de dosis sólidas tal como tabletas y cápsulas. En ciertas modalidades, se puede diseñar una cápsula para liberar la porción activa de la formulación en el punto en el tracto gastrointestinal cuando se aumenta al máximo la biodisponibilidad y se reduzca al mínimo la degradación pre-sistémica. En ciertas modalidades, se puede incluir al menos un agente adicional para facilitar la absorción del cuerpo y/o cualquiera agente terapéutico adicional . En ciertas modalidades, también se pueden emplear diluyentes, sabores, ceras de bajo punto de fusión, aceites vegetales, lubricantes, agentes de suspensión, agentes desintegradores de tableta, y aglutinantes. En ciertas modalidades, una composición farmacéutica puede comprender una cantidad efectiva de anticuerpos, con o sin al menos un agente terapéutico adicional, en una mezcla con excipientes no tóxicos que son adecuados para la elaboración de tabletas . En ciertas modalidades, al disolver las tabletas en agua estéril, u otro vehículo apropiado, se pueden preparar soluciones en forma de dosis unitaria. En ciertas modalidades, los excipientes adecuados incluyen de manera enunciativa y sub limitación, diluyentes inertes, tal como carbonato de calcio, carbonato de sodio o bicarbonato, lactosa o fosfato de calcio; o agentes de unión, tal como almidón, gelatina o acacia; o agentes lubricantes tal como estearato de magnesio, ácido esteárico, o talco. Las composiciones farmacéuticas adicionales serán evidentes por aquellos expertos en la técnica, que incluyen formulaciones que comprenden anticuerpos, con o sin al menos un agente terapéutico adicional, en formulaciones de distribución controlada o sostenida. Se conocen por aquellos expertos en la técnica, las técnicas para formular una variedad de medios de distribución sostenida o controlada, tal como liposoma, micropartículas bio-comestibles o cuentas porosas e inyecciones de depósito. Ver por ejemplo solicitud PCT No. PCT/US93/00829 que describe la liberación controlada de micropartículas poliméricas porosas para la distribución de composiciones farmacéuticas. En ciertas modalidades, las preparaciones de liberación sostenida pueden incluir matrices poliméricas semipermeables en la forma de artículos formados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Las matrices de liberación sostenida pueden incluir poliésteres, hidrogeles, poliláctidos (Patente de los Estados Unidos No. 3,773,919 y EP 058,481), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma-etil-L-glutamato (Sidman et al., Biopolymers, 22:547-556 (1983)), poli- (2-hidroxietil-metacrilato) (Langer et al., J. Bio ed. Mater. Res., 15:167-277 (1981) y Langer, Chem. Tech., 12:98-105 (1982)), etileno-acetato de vinilo (Langer et al., supra) o ácido poli-D- (-) -3-hidroxibutírico (EP 133,988) . En ciertas modalidades, las composiciones de liberación sostenida pueden incluir también liposomas, que se pueden preparar por cualquiera de varios métodos conocidos en la técnica. Ver por ejemplo Eppstein et tal., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 82:3688-3692 (1985); EP 036,676; EP 088,046 y EP 143,949. En ciertas modalidades, la composición farmacéutica que se va a usar para la administración in vivo es estéril. En ciertas modalidades, estas se pueden lograr por filtración a través de membranas estériles de filtración. En ciertas modalidades, donde se liofiliza la composición, la esterilización usando este método se puede llevar a cabo ya sea antes o después de la liofilización y reconstitución. En ciertas modalidades, la composición para la administración parenteral se puede almacenar en forma liofilizada o en una solución. En ciertas modalidades, se colocan en general composiciones parenterales en un recipiente que tiene un orificio de acceso estéril, por ejemplo, en una bolsa o frasco de solución intravenosa que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica . En ciertas modalidades, después de que se ha formulado la composición farmacéutica, se puede almacenar en frascos estériles como una solución, suspensión, gel, emulsión, sólido o como un polvo deshidratado o liofilizado. En ciertas modalidades, estas formulaciones se pueden almacenar ya sea en una forma lista para el uso o en una forma (por ejemplo, liofilizada) que se reconstituye antes de la liofilización. En ciertas modalidades, la presente invención se refiere a equipos para producir una unidad de administración de dosis individual. En ciertas modalidades, los equipos pueden contener cada uno tanto un primer recipiente que tiene una proteína seca como un segundo recipiente que tiene una formulación acuosa. En ciertas modalidades de esta invención, los equipos que contiene jeringas pre-rellenas de múltiples cámaras y cámaras individuales (por ejemplo, jeringas de líquidos y liojeringas) se incluyen. En ciertas modalidades, la cantidad efectiva de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo, con o sin al menos un agente terapéutico adicional, que se va a emplear terapéuticamente dependerá, por ejemplo, del contexto terapéutico y de los objetivos terapéuticos. Un experto en la técnica apreciará que los niveles apropiados de dosis para tratamiento, de acuerdo a ciertas modalidades, variarán de esta manera dependiendo, en parte, de la molécula distribuida, la indicación para lo cual se está usando un anticuerpo, con o sin al menos un agente terapéutico adicional, la ruta de administración y el tamaño (peso corporal, superficie de cuerpo o tamaño de órganos) y/o condición (la edad y salud general) del paciente. En ciertas modalidades, el facultativo puede titular la dosis y modificar la ruta de administración para obtener el efecto terapéutico óptimo. En ciertas modalidades, una dosis típica puede variar desde aproximadamente 0.1 µg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg o más, dependiendo de los factores mencionados anteriormente, En ciertas modalidades, la dosis puede variar desde 0.1 µg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg; ó de 1 µg/kg a aproximadamente 100 mg/kg; ó de 5 µg/kg hasta aproximadamente 100 mg/kg. En ciertas modalidades, la frecuencia de dosificación tomará en cuenta los parámetros farmacocinéticos del anticuerpo y/o cualquier agente terapéutico adicional en la formulación usada. En ciertas modalidades, un facultativo administrará la composición hasta que se alcance una dosis que logre el efecto deseado. En ciertas modalidades, la composición por lo tanto se puede administrar como una dosis individual, o como dos o más dosis (que puede contener o no la misma cantidad de la molécula deseada) durante el tiempo, o como una infusión continua mediante un dispositivo de implantación o catéter. Se hace rutinariamente refinamiento adicional de la dosis apropiada por aquellos expertos en la técnica y estar dentro del ámbito de las tareas realizadas rutinariamente por los mismos. En ciertas modalidades, se pueden determinar dosis-apropiadas a través del uso de datos apropiados de respuesta de dosis. En ciertas modalidades, la ruta de administración de la composición farmacéutica está de acuerdo con métodos conocidos, por ejemplo, de forma oral, a través de inyección por frutas intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intra-parenquimal) , intracerebroventricular, intramuscular, intra-ocular, intra-arterial, intraportal o intralesional; por sistemas de liberación sostenida o por dispositivos de implantación. En ciertas modalidades, las composiciones se pueden administrar por inyección de bolo o continuamente 'por difusión, o por dispositivo de implantación. Como se analiza anteriormente, en varias modalidades, se puede usar cualquier ruta eficaz de administración para administrar anticuerpos anti-OX40L. Si se inyecta, en ciertas modalidades, los anticuerpos anti-0X OL se pueden administrar, por ejemplo, vía rutas intraarticular, intravelosa, intralesional, intraperitoneal, intracraneal, inhalación o subcutánea o por inyección de bolo o por infusión continua. En ciertas modalidades, las enfermedades pulmonares pueden contener métodos intranasales o de inhalación y distribución. Los métodos de ejemplo de administración incluyen de manera enunciativa y sin limitación, liberación sostenida de implantes, inhalación de aerosol, gotas para ojos, preparaciones orales, incluyendo pildoras, jarabes, pastillas o goma de mascar, y preparaciones tópicas tal como lociones, geles, aspersiones, ungüentos u otras técnicas adecuadas. En ciertas modalidades, la administración por inhalación es benéfica cuando se trata de enfermedades asociadas con trastornos pulmonares. En ciertas modalidades, se pueden .administrar anticuerpos anti-OX40L al implantar células cultivadas que expresan los anticuerpos. En ciertas modalidades, las células propias del paciente se inducen a producir por transfección in vivo o ex vivo con uno o más vectores que codifican para un anticuerpo anti-0X4OL. En ciertas modalidades, este vector se puede introducir en las células del paciente, por ejemplo, al inyectar ADN desnudo o ADN encapsulado a liposima que codifica por un anticuerpo anti-OX40L, o por otros métodos de transfección. Cuando se administran anticuerpos anti-OX40L en combinación o uno o más compuestos biológicamente activos, diferentes, en ciertas modalidades, estos se pueden administrar por la misma o diferente ruta, y se pueden administrar de manera simultánea, separada o secuencíal . En ciertas modalidades, la composición se puede administrar de manera local mediante implantación de una membrana, esponja u otro material apropiado en el cual se ha absorbido o encapsulado la molécula deseada. En ciertas modalidades, donde se usa un dispositivo de implantación, el dispositivo se puede implantar en cualquier tejido u órgano adecuado, y la distribución de la molécula deseada puede ser mediante difusión, bolo liberado con el tiempo, o administración continua. En ciertas modalidades, puede ser deseable usar una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo, con o sin un agente terapéutico adicional, o de una manera ex vivo. En estos casos, las células, tejidos y/o órganos que se han removido del paciente se exponen a una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo, con o sin al menos un agente terapéutico adicional, después de lo cual las células, tejidos y/o órganos se implantan de manera subsiguiente de regreso al paciente. En ciertas modalidades, un anticuerpo y/o cualquier agente terapéutico adicional se puede distribuir al implantar ciertas células que se han manejado genéticamente, usando métodos tal como aquellos descritos en la presente, para expresar y segregar los polipéptidos. En ciertas modalidades, estas células pueden ser células humanas o de animal, y pueden ser autólogas, heterólogas ó xenogeneicas . En ciertas modalidades, las células se pueden inmortalizar. En ciertas modalidades, a fin de disminuir la oportunidad de una respuesta inmunológica, las células se pueden encapsular para evitar infiltración de tejidos circundantes. En ciertas modalidades, los materiales de encapsulación son típicamente biocompatibles, encierros o membranas poliméricas semi-permeables permiten la liberación de los productos proteicos pero que impiden la destrucción de las células por el sistema inmunitario del paciente o por otros factores perjudiciales de los tejidos circundantes .
Ejemplos Ejemplo 1 Producción de Ciertos Anticuerpos Monoclonales Humanos Ciertos anticuerpos monoclonales anti-OX40L humanos se producen en ratones transgénicos que expresan genes de inmunoglobulina humana. A los ratones se les da 8 inyecciones en total. En el día 0, se inyectan 107 células CHO que expresan 0X4OL humano en las almohadillas plantares de los ratones transgénicos. En los días 3, 7, 10 y 14, a los ratones se les da inyecciones de refuerzo, cada inyección que contiene 107 células CHO que expresan 0X4OL humano más 10 µg de un polinucleótido CpG. En los días 17, 21 y 27, a los ratones se les da inyecciones adicionales de refuerzo que contienen la proteína de fusión Flag-OX40L. La sangre entera de los ratones transgénicos inmunizados se recolecta en el día 31 y se preparan hibridomas mediante técnicas normales. Los sobrenadantes resultantes del hibridoma se detectan por FMAT y ELISA para la unión del anticuerpo a 0X4OL. En el ensayo de FMAT, las placas se revisten con células que expresan OX40L, se adiciona sobrenadante de hibridoma y entonces se adiciona un anticuerpo secundario anti-Ig humana para la detección mediante técnicas normales de ELISA. Los controles negativos son las correspondientes células no transfectadas que no expresan 0X4OL. El ensayo de ELISA se realiza de una manera similar, excepto que las placas se revisten directamente con 0X4OK. Se usan proteínas de fusión Fe en un método BIACore para detectar los anticuerpos resultantes. Fc-OX40L humano es una proteína de fusión comprendida del dominio Fe de IgG humana fusionada a OX40L humano y hOX40R-Fc está comprendida del dominio Fe de IgG humana fusionado al receptor de 0X40 humano. Estas proteínas de fusión se elaboran al transfectar de manera transciente células adherentes 293T ó COS PKB cultivadas y mantenidas en DMEM complementado con FBS al 5 % + Aminoácidos No Esenciales IX + Pen Strep Glut IX + Piruvato de Sodio IX. Aproximadamente se siembran 4-5 X 107 células 293T (es decir ATCC CRL-11268) en una botella rodante de 850 cm2 durante la noche. Las células anteriormente sembradas entonces se transfectan el siguiente día usando el reactivo de transfección FuGene6. Se prepara una mezcla de ADN-FuGene6 en aproximadamente 6.75 mL de DMEM libre de suero, al adicionar primer 675 µl de reactivo de transfección FuGene6 a DMEM seguido por la adición de 112.5 µg de ADN de plásmido que codifica para la proteína de fusión Fe. La mezcla se incuba a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla entera entonces se adiciona a una botella rodante. La botella rodante se gasifica con una mezcla de gas de C0 al 5 %, se tapa herméticamente y se coloca en un incubador a 37°C en un bastidor rodante que gira a 0.35 RPM. La transfección se realiza durante 24 horas después de lo cual el medio se reemplaza con 100 mL de DMEM + Complemento de Insulina-Transferrina-Selenio IX + Pen Strep Glu IX + Aminoácidos No Esenciales IX + Piruvato de Sodio IX y da por resultado células que expresan de forma constitutiva las proteínas de fusión Fe. Dos recolecciones de 100 ml de 5 días se obtienen de cada botella rodante. El medio acondicionado libre de suero recolectado se mezcla conjuntamente y se centrifuga a 4000 RPM durante 30 minutos a 4°C antes de la purificación de las proteínas de fusión Fe. Se siembran aproximadamente 2 x 107 células COS (es decir, ATCC CRL-1650) en botellas rodantes de 850 cm2 durante la noche. Las células anteriormente sembradas entonces se transfectan el siguiente día usando el reactivo de transfección FuGened . Se prepara una mezcla de ADN-FuGene6 en aproximadamente 7.25 mL de DMEM libre de suero, al adicionar primero 241.5 µl de reactivo de transfección FuGened al DMEM, seguido por la adición de 120.75 µg de ADN de plásmido que codifica para la proteína de fusión Fe. La mezcla se incuba a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla completa entonces se adiciona a una botella rodante. La botella rodante se gasifica con una mezcla de gas de C02 al 5 %, se tapa herméticamente y se coloca en un incubador a 37°C en un bastidor rodante que gira a 0.35 RPM. La transfección se realiza durante 24 horas después de lo cual el medio se reemplaza con 100 mL de DMEM + Complemento de Insulina - Transferrina-Selenio IX + Pen Strep Glu IX + Aminoácidos no Esenciales IX + Piruvato de Sodio IX. Se obtienen dos recolecciones de 250 ml de 5 días de cada botella rodante. El medio acondicionado libre de suero, recolectado, se mezcla conjuntamente y se centrifuga a 4,000 RPM durante 30 minutos a 4°C antes de la purificación de las proteínas de fusión Fe. Los anticuerpos analizados anteriormente se detectan para su capacidad para unirse a O=X40L humano usando un análisis por microchip BIACore. Específicamente, se usa un analizador BIACore 2000 en unión con un chip sensor CM5 (BIACore; Piscataway, NJ) . La proteína de fusión HFc-OX40L se inmoviliza a la superficie del chip sensor de acuerdo a las instrucciones del fabricante, usando un flujo continuo de amortiguador de HBS-EP (HEPES lOmM, NaCl 0.15M, EDTA 3.4 mM, P-20 al 0.005 %, pH 7.4). Los grupos carboxilo en las superficies del chip sensor se activan al inyectar 60 µL de una mezcla que contiene N-etil-N'- (dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) 0.2 M y N-hidroxisuccinimida (NHS) . Se obtienen superficies específicas al inyectar hFc-OX40L recombinante diluido en acetato lO M, pH 4.5 (BIACore, Inc.; Piscataway, NJ) a una concentración de 10 µg/mL para obtener una densidad superficial moderada de 2,000 unidades de resonancia (RU) . En ciertas modalidades, también se pueden usar otras concentraciones de hFc-OX40L. Los grupos reactivos en exceso en las superficies del chip se desactivan al inyectar 60 µL de etanolamina 1 M. También se prepara una superficie de referencia acoplada en falso, en blanco, en cada chip sensor. Para el acoplamiento en falso, se llevan a cabo sin proteína los pasos de activación e inactivación. Los candidatos de anticuerpos monoclonales se diluyen en el amortiguador de muestra (PBS IX + P-20 al 0.005 % - 0.1 mg/mL de BSA (fracción V, libre de IgG; Sigma, Inc.) filtrado y desgasificado) a una concentración de 25nM y se inyecta sobre la superficie de hFc-OX40L durante 2 minutos a una velocidad de 80 µL/min. Se diluye un control separado de hFc-OX40L en el amortiguador de muestra (filtrado y desgasificado) a una concentración de 50nM y se inyecta sobre la superficie de hFc-OX40L durante dos minutos a una velocidad de flujo de 80 µL/min. Para todos los análisis, el amortiguador de corrida de instrumento es PBS IX (sin cloruro de calcio, sin cloruro de magnesio; Gibco Inc.) + P-20 al 0.005 % (filtrado y desgasificado) y la temperatura se ajusta a 25 °C. Después de un tiempo de disociación de 5 minutos, la superficie se regenera - al inyectar glicina 8 mM, pH 3.0 (BIACore, Inc.; Piscataway, NJ) , NaCl 1M durante 30 segundos. Las curvas de unión se comparan de forma cualitativa para la intensidad de señal de unión, así como para velocidades de disociación. Los anticuerpos que demuestran una señal de unión positiva se eligen para estudio adicional. Se identifican cientos de clones positivos de acuerdo al método anterior de detección. Se seleccionan 10 anticuerpos monoclonales humanos de ejemplo para estudio adicional (Ab A hasta Ab J) . La Tabla 2 proporciona los valores EC50 para ocho de estos anticuerpos .
Tabla 2 Actividad de Unión de Anticuerpo a hFc-OX40L Inmovilizado 1 EC5o es la concentración de anticuerpo que se requiere, a una concentración dada de ligando, para obtener una señal de unión que es 50 % de la señal de unión para el anticuerpo solo . 2 Ab E tiene la misma secuencia de aminoácidos como Ab F. Las secuencias de aminoácidos en las regiones variables de cadena pesada de algunos de estos anticuerpos se comparan para similitud de secuencia. Como se muestra en la Figura 12, estas secuencias caen entre grupos principales, con Ab A y Ab G en un grupo; Ab E y F en un segundo grupo; y Ab B Ab D, Ab H y Ab C en un tercer grupo. Son idénticas las secuencias de aminoácido para Ab E y Ab F. Igualmente, las secuencias de aminoácidos de región variable de cadena ligera en algunos de estos anticuerpos también se comparan. Estas secuencias también se dividen en tres grupos con Ab A, Ab E y F y Ab l en un primer grupo; Ab H, Ab B, Ab J, y Ab D en un segundo grupo; y Ab G en un tercer grupo. La secuencia de nucleótidos de ADNc y las secuencias de aminoácidos de las cadenas ligeras y pesadas de Ab A-F se proporcionan en las Figuras 1-10 y se identifican como SEQ ID NOS. 1-20 como se indica en estas figuras . La figura 11 proporciona la secuencia de nucleótidos de ADNc y la secuencia de aminoácidos en la cadena pesada en Ab G, que corresponde a SEQ ID NO. 21 y 22, respectivamente. Como se detalla en los ejemplos posteriores, se prueban ciertos de estos anticuerpos monoclonales en una variedad de ensayos que afrontan la actividad de unión de 0X4OL, la capacidad para bloquear la producción de IL-2, y la capacidad para bloquear la estimulación de 0X4OL de las células T.
Ejemplo 2 Afinidad de Unión Relativa de Ciertos anticuerpos monoclonales humanos anti-0X4OL a 0X4OL humano y 0X4OL de mono cynomolgus Las afinidades de unión relativa de ciertos MAb anti-0X4OL se compararon para la unión a 0X4OL humano y OX40L de mono cynomolgus. Se cargaron tres conjuntos de cuentas individuales al combinar 270 µl de cuentas (Equipo de Cuentas Beadlyte Multí-Bíotin (lOplex) , 20X (2000 cuentas/µl= (Upstate Biotech. Cat# 41-012) con 20 ng de avidina-hulL-lRFLAG (control) , 20 ng de la fusión avidina-hOX40L, ó 20 ng de fusión de avidina-cOX40L en tubos de centrífuga de 15 ml (Corning cat #430052) . Los volúmenes se ajustaron a 7.2 con PBAT/ BSA al 1 % (PBS con Tween 20 al 0.1 %/BSA al 1 %) para normalizar la concentración de proteína. Las reacciones de carga se incubaron a temperatura ambiente con mezclado durante 1 hora en la oscuridad. Durante esta incubación, se preparó un material concentrado de 200 nm de cada anticuerpo anti-OX40L. Ocho diluciones de 5 veces de cada material concentrado de anticuerpos se prepararon en duplicado, dando por resultado preparaciones de anticuerpo gue varían desde 200 nm a 0.000512 nm. Todas las diluciones se realizaron en PBST/BSA al 1 %. Cada reacción de carga de cuentas se transfirió a un tubo superior de filtro de 50 ml separado (0.45 µM; Corning cat#430320) , prehumectando la membrana del tubo con PBST/BSA al 1 %, y las muestras se aspiraron suavemente. Las cuentas se lavaron 3 veces con 15 ml de PBST (Tween al 0.1 % en PBS) después del último lavado, cada conjunto de cuentas se suspendió en 9 ml de PBST (180 cavidades X 50 µl/cavidad) al lavar completamente los filtros de tubo. Cada conjunto de cuentas se mezcló de manera separada y se tomaron en alícuota 200 µl de cada conjunto de cuentas mezclado (50 µl de cada conjunto de cuentas/cavidad X 4 conjuntos de cuentas) a cavidades separadas en 2 placas de fondo de filtro (Millipore cat # MABVN1210) . Se- aplicó un vacío, usando un sistema de vacío Millipore a la placa y las cuentas entonces se suspendieron en 50 µl de PBST/cavidad. Se adicionaron cincuenta µl de cada dilución de anticuerpo 2X a las cavidades apropiadas, de modo que cada conjunto de cuentas se probó con cada serie de diluciones para cada anticuerpo. La concentración final más alta resultante del anticuerpo anti-OX40L fue de 100 nM, en tanto que la concentración final más baja fue de 0.000256 nm. Las placas se incubaron durante 1.5 horas con mezclado, se protegieron de la luz. El sistema de vacío Millipore se usó para lavar las cuentas tres veces con 250 µl de PBST/cavidad. A cada cavidad, se adicionaron 100 µl de 2 µg/ml anti-hulgG-PE (Rockland Immunochemicals) ó anti-cabra-PE (Rockland Immunochemicals cat # 705-708-125) diluido en PBST/BSA al 1 %. Se usó anti-cabra-PE como un anticuerpo secundario de control negativo. Las placas se incubaron durante 1 hora con mezclado, se protegieron de la luz, y luego se lavaron tres veces usando un sistema de vacío Millipore y 250 µl de PBST/cavidad. Las cuentas se resuspendieron en 100 µl PBST/cavidad antes del análisis en una máquinas Luminex. Las muestras se leyeron al ajustar la máquina Luminex para aspirar 75 µl de los 100 µl para cada muestra. Las compuertas se ajustaron a 7109 y 18628. La unión al receptor de IL-1 (IL-1R) unido a las cuentas y a 0X40L de ratón unido a las cuentas se incluyó como antígenos de control negativo para el ensayo. Entonces se calcularon los valores de EC50 de los datos resultantes. La Tabla 2 enlista los valores de EC50 de anticuerpo. La Figura 13 proporciona datos de unión al natural para tres de los anticuerpos (Ab C, Ab D y Ab F) .
Tabla 3 Afinidades de Unión Relativa 1 Los valores se expresan como EC50, que es la concentración de anticuerpo que se requiere, a una concentración dada de ligando, para obtener una señal de unión que es 50 % de la señal de unión para el anticuerpo solo.
Como se expone en la Tabla 3 y Figura 13, estos anticuerpos unidos a 0X40L (hOX40L) y 0X40L de mono cynomolgus (cOX40L) a niveles comparables.
Ejemplo 3 Equilibrio de Unión de Ciertos Anticuerpos Anti-OX40L y Competición para Unión para Ciertos Anticuerpos Anti-OX40L y 0X4OR El equilibrio de unión de cuatro de los anticuerpos se valoró en un chip BIACore como se describe anteriormente en el Ejemplo 1 con las siguientes modificaciones. Se inmovilizó HFC-OX40L al chip sensor a una densidad de 8,000 RU. Se prepararon diluciones en serie de 2.5 veces de hFc-OX40L en el amortiguador de muestra de modo que la concentración final de hFc-OX40L, una vez que se mezcla con un anticuerpo anti-0X4OL, varío entre 20 nM a 0.005 nM. Los candidatos de anticuerpos monoclonales anti-0X4OL se mezclaron con cada dilución de hFc-OX40L en un total de 400 µl de modo que la concentración final del anticuerpo monoclonal fue de 0.2 nM. Las muestras se incubaron a temperatura ambiente durante al menos cinco horas para permitir que las muestras alcanzaran el equilibrio. Entonces las muestras se inyectaron sobre la superficie inmovilizada de hFc-OX40L durante 30 minutos a 10 µl/min. Después de la inyección de la muestra, las muestras se dejaron disociar durante 3 minutos, y luego la superficie se regeneró al inyectar glicina 8 mM, pH 3.0, NaCl 1M durante 30 segundos. Las señales de unión obtenidas fueron proporcionales al anticuerpo libre en solución en equilibrio para una concentración dada de ligando. El graficar la señal de unión versus la concentración de ligando, y usando el programa de graficación científica GraphPad Prizm, se calcularon los valores de EC50 para cada anticuerpo a una concentración dada en la presencia de concentraciones variables de hFc-OX40L. La Figura 14 proporciona una gráfica representativa que muestra los datos de la señal de unión y la Tabla 4 a continuación proporciona los valores resultantes de EC50.
Tabla 4 Análisis de Unión en Equilibrio 1 La EC50 es la concentración de anticuerpo que se requiere, a una concentración dada de anticuerpo, para reducir la señal de unión por 50 % en comparación a la señal de unión para el ligando solo.
Algunos de los anticuerpos anti-0X40L se compararon a 0X40R para sus afinidades de unión a OX40L inmovilizado a chips BIAcore o' expresados en células HUVEC.
Específicamente, se prepararon chips BIACore como se describe anteriormente en el Ejemplo 1, con las siguientes modificaciones. Se inmovilizó HFC-OX40L al chip sensor a una alta densidad de 8,000 RU. Los candidatos de anticuerpo monoclonal a dos diferentes concentraciones, 0.2 nM y 0.6 nM, ó hOX40R a concentraciones finales de 0.2 nM y 0.6 nM se incubaron con concentraciones finales variables de 20 nM a 0.005 nM de hFc-OX40L, como se describe anteriormente. Las muestras se incubaron a temperatura ambiente durante al menos cinco horas para permitir que las muestras alcancen el equilibrio. Las muestras entonces se inyectaron sobre la superficie inmovilizada de hFc-OX40L durante 30 minutos a 10 µl/min. Después de la inyección de la muestra, las muestras se dejaron disociar durante 3 minutos, y luego la superficie se regeneró al inyectar glicina 8 mM, pH 3.0, NaCl 1M ' durante 30 segundos. Las señales de unión, medidas en RU, obtenidas fueron proporcionales al anticuerpo libre en solución en^ equilibrio para una concentración dada de ligando. La constante de equilibrio de disociación (KD) se obtuvo de análisis de regresión no lineal de las curvas de competición usando un modelo de unión homogéneo en el sitio de curva dual (programa KinExa v. 2.3, Sapidyne Instruments Inc., Boise ID) .
Tabla 5 Afinidades de Unión de Anticuerpos anti-OX40L en Comparación a 0X4OR Como se muestra en la Tabla 5, los anticuerpos anti-OX40L tienen afinidades superiores de unión en comparación a 0X 0R. Se realizaron estudios con células endoteliales de vena embriónica humana (HUVEC; Clonetics CC-2571, lote # 0F0611) . Células HUVEC, que expresan de forma natural 0X40L, se cultivaron a confluencia y se pasaron 4 a 6 veces antes del uso. Las células se removieron del matraz de cultivo de tejido con tripsina y se lavaron 2X con PBS al centrifugar las células a 400-500 x g y al descartar el primer medio y PBS segundo. Se prepararon muestras al suspender 300,000 células en 100 µl de amortiguador FACS (BSA al 0.1 %, azida sódica al 0.01 % en PBS) . Las células entonces se pretrataron con 20 µg/ml (concentración final) de ig humana durante 5 minutos a temperatura ambiente. Luego, el reactivo de prueba de anticuerpo anti-OX40L, a una concentración final de 15, 3, 0.6, 0.12, 0.024, ó 0.0048 µg/ml, a las células . Las células se incubaron con estos- anticuerpos durante aproximadamente 10 minutos en hielo. Luego, se adicionó a todas las muestras hFc-OX40R biotinilado a una concentración final de 3 µg/ml. Se usó HFc-OX40R solo como un control positivo, en tanto que hFc solo, HUVEC solo y PESA (PE-estreptavidina) solo se usaron como controles negativos. Estas muestras se dejaron incubar durante 20 minutos adicionales, las células se lavaron y se resuspendieron en amortiguador de FACS que contiene PE-SA (1:100) durante 20 minutos en hielo. Las células se lavaron nuevamente en PBS enfriado con hielo y se re-suspendieron en 0.5 ml en formaldehído al 1 % en hielo y PBS enfriado con hielo e inmediatamente se leyeron por citometría de flujo. La Figura 15 muestra los resultados de cada uno de los anticuerpos anti-OX40L probados en comparación a la proteína hFc-OS40R.
Ejemplo 4 Evaluación de Inhibición de Producción de IL-2 por Células T Humanas Se valoraron ciertos anticuerpos anti -0X40L para su capacidad para bloquear la producción de IL-2 por células T humanas usando un ensayo de sangre entera. De manera específica, se desarrolló un ensayo de sangre entera humana en base al conocimiento que la co-estimulación de OX40L conduce un incremento en la producción de IL-2 por células T. La sangre entera humana se diluyó 50 % al adicionar un volumen igual de medio Iscoves (Gibco) . Las placas (96 cavidades; Falcon Inc.) se revistieron con una solución de 10 µg/ml de anti-CD3 (R&D system) , se diluyó en PBS, al adicionar 100 µl de la solución anti-CD3 a cada cavidad y al incubar a 4°C durante la noche. Las placas revestidas se lavaron usando 200 µl de PBS. Las sangre entera diluida se adicionó a cada cavidad y hFc-OX40L (soluble) , diluido en el medio Iscoves (Gibco) , se adicionó a una concentración final de 1.5 nM. La sangre se cultivó durante 48 horas a 37°C y las células se sedimentaron al centrifugar a 400 xg. Los sobrenadantes se removieron y valoraron por ELISA para la proteína IL-2 usando el equipo de ELISA de IL-2 de R&D System de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Se probaron anticuerpos al adicionar concentraciones crecientes de anticuerpo a las reacciones de co-estimulación y se determinó el efecto en la producción de IL-2 (IC50) . Se calcularon IC50 como la concentración del anticuerpo que reduce la cantidad de IL-2 por 50 %. Se determinó que el nivel de hFc-OX40L usado dio una relación de señal-ruido, reproducible, fuerte. Sin embargo, debido a la cantidad de hFc-OX40L usada, el ensayo se limita en su capacidad para diferenciar el potencial de los anticuerpos una potencia de sub nM debido a la necesidad de cantidades estequiométricas del anticuerpo para neutralizar esta cantidad de ligando. Se diferenciaron fácilmente por el ensayo anticuerpos menos potentes. Se usó Fc-OX40R como un control positivo en tanto que se usó IgG humana como un control negativo para el ensayo. Como se muestra en la Tabla 6, los anticuerpos anti-0X4OL inhibieron la producción de IL-2 en la sangre entra mejor gue 0X4OR. La Figura 16 proporciona la gráfica representativa de datos de un ensayo de inhibición de producción de IL-2.
Tabla 6 Inhibición de Producción de IL-2 1 No realizado. Se realizó un ensayo similar para medir la capacidad del AbC para bloquear la producción de IL-2. Este ensayo de sangre entera se realizó como se describe anteriormente excepto que se usaron células CHO que expresan hOX40L en lugar de hFc-OX40L soluble. La línea de células CHO de origen se usó como un control negativo . Los resultados de este ensayo modificado se muestran en la Figura 17.
Ejemplo 5 Evaluación de Inhibición de Producción de IL-2 por Células T de Monos Cynomolgus Se valoró Ab C para su capacidad para bloquear la producción de 11-2 por células T de mono cynomolgus. Las placas (96 cavidades; Falcon Inc.) se revistieron por una solución de 1 µg/ml de anti-CD3 (R&D system) , se diluyeron en PBS, al adicionar 100 µl de la solución CD3 a cada cavidad y al incubar a 4°C durante la noche. Las placas revestidas se lavaron usando 200 µl de PBS. Las placas entonces se revistieron con una solución de ya sea 2.5 µg/ml (Figura 18) ó 1.25 µl/ml (Figura 19) de hFc-OX400L (soluble) diluido en PBS, al adicionar 100 µl de la solución de hFc- OX40L de cada cavidad y al incubar a 37°C durante 4 horas. Las placas se lavaron nuevamente usando 200 µl de PBS antes de que se adicionaran las células T. Las células T de 4 donadores sanguíneos de mono cynomolgus se purificaron usando un equipo Miltyni Biotec (catalog # 130-091-156) para purificar células T humanas usando selección negativa al seguir las instrucciones del fabricante con la siguiente excepción. Después de incubar las muestras con los anticuerpos biotinilados proporcionados en el equipo, se adicionaron cuentas magnéticas revestidas con estreptavidina (para la unión a los anticuerpos biotinilados) y cuentas magnéticas anti-CD20 de mono (Miltynl Biotec catalog # 130-091-105) a las muestras y se incubaron de acuerdo a las instrucciones del equipo de células T antes de cargar las muestras en una columna magnética para purificación final de células T. Las cuentas magnéticas anti-CD20 de mono se usaron para remover completamente las células B. Se resuspendieron células T de mono cynomolgus en el medio de ensayo (RPMI 1640, FBS 10 %, PSG (penicilina, estreptomicina y glutinina) , NEAA (aminoácidos no esenciales) , y ß-mercaptoetanol) y 100000 T en 100 µl se adicionaron a cada cavidad. Se probaron concentraciones variables de Ab C ó IgG de control al adicionar 100 µl de soluciones de anticuerpo por cavidad para lograr concentraciones finales que varían desde 2.5 µg/ml al 0.01 µg/ml. Las células T se cultivaron durante 48 horas a 37°C, C02 al 5 % y las células se sedimentaron al centrifugar a 400 x g. Se removió un volumen de 100 µl del sobrenadante y se valoró por ELISA para la proteína IL-2 usando un eguipo ELISA de IL-2 BD Pharmingen (catálogo #551494) de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Los valores de OD de ELISA se convirtieron a valores de POC (por ciento de control) para análisis gráfico. Como se muestra en las Figuras 18 a 19, Ab C inhibió la producción de IL-2 por células T co-estimuladas de mono cynomolgus.
Ejemplo 6 Evaluación de Inhibición de Proliferación de Células T Mediada por 0X40L Se probaron ciertos anticuerpos anti-OX40L para su capacidad para bloquear co-estimulación de células T mediada por OX40L y CD3. Placas de 96 cavidades de fondo redondo se revistieron con anti-CD3 (Pharmingen #555336) durante la noche a 4°C. Debido a que las células T se recolectaron recientemente de donadores individuales, cada preparación de células T requirió una determinación empírica de la concentración óptima de anti-CD3 necesaria para dar por resultado estimulación óptima. De esta manera, se usaron soluciones de anti-CD3 que varían desde 0.25 µg/ml a 4.0 µg/ml para determinar la concentración apropiada para el uso con una preparación de células T particular. Las placas se lavaron con 200 µl de PBS. Las placas revestidas anti- CD3 entonces se revistieron con una solución 11 nm de hFc- OX40L durante 4 horas a 37°C. Las placas entonces se lavaron con 200 µl de PBS, como se describe anteriormente . Las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aislaron de paquetes de leucoferesis usando gradientes de densidad de Ficoll -Paque (Pharmacia) . Se aislaron células T de las PBMC usando equipo de aislamiento de células T Pan de Militenyl Biotec (cat# 130-050-001) , usando las instrucciones del fabricante. Se diluyeron células T aisladas a 1 x 106 en RPMI más suero de becerro fetal al 10 % (FCS) y 100 µl de estas células diluidas se adicionaron a las placas revestidas con anti-CD3/hFc-OX40L. Los anticuerpos anti-0X40L que se probaron se diluyeron individualmente a 6 µg/ml y luego se diluyeron adícionalmente en diluciones en serie de tres veces que abarcaron concentraciones finales de 19 nM a 0.078 nM. Se adicionaron 100 µl de cada dilución de anticuerpo a 100 µl de las células T en cavidades separadas. IgG humana reemplazo los anticuerpos anti-OX40L como un control negativo para este ensayo (es decir, sin bloqueo) . Se usó OX40R-Fc en lugar de los anticuerpos para un control positivo (es decir, con bloqueo) . Las placas se incubaron durante 48 horas a 37°C, C0 al 5 % . Entonces se adicionó 1 µCi/de cavidad 3H-timidina (ICN, Cat # 2404205) . Las placas se incubaron durante 16 horas a 37°C, C02 al 5 %. Las células se recolectaron usando un recolector Tomtec. Se midió la captación de 3H-timidina usando un contador de Escintilación Líquida Microbeta Trilux (Perkín Elmer) . Como se analiza anteriormente, para determinaciones de IC50, se probaron anticuerpos de 19 nM a 0.078 nM, en diluciones de tres veces y triplicados. Dependiendo del donador de células T, se usaron varias cantidades de anti-CD3, y 11 nM de hFc-OX40L para estimular las células T. Se expresaron los valores promedio de incorporación de 3H-timidina (de los triplicados) como por ciento de control. Se graficaron rutas de inhibición (incorporación de 3H-timidina (POC) versus concentración logarítmica de anticuerpo) y valores de IC5o determinados por regresión no lineal (respuesta de dosis sigmoidal con pendiente variable) usando el programa GraphPad (PRISMmr) . Todos los resultados se expresaron como media ± barra media de error estándar (SEM) . La Tabla 7 y Figura 20, muestran los resultados del ensayo de inhibición de proliferación de células T.
Tabla 7 Inhibición de Proliferación de Células T 1 La IC50 es la concentración de anticuerpo que se requiere, a una concentración dada de anticuerpo para reducir la señal de proliferación por 50 % en comparación a la señal de proliferación para el ligando solo.
Ejemplo 7 Evaluación de la Unión de Ciertos Anticuerpos Anti-OX40L a OX40L de Células CHO, y Evaluación de la Neutralización de Cierta Unión de 0X4OR a 0X40L de Células CHO Células de ovario de hámster (CHO) (es decir, ATCC CCL-61) se transfectaron para permitir la expresión en superficie celular de OX40L. Estas células se preparan al transfectar de manera estable las células CHO con un plásmido Fc-cOX40L, linealizado con Pvul , Las células CHO se colocan en placa a 1.5 X 10s de modo que las células son 80- 90 % confluentes cuando se realiza la transfección. El reactivo de transfección FuGene™6 (Roche, Cat. No. 1 814 443) se usa para transfección estable. Se diluyen veinticuatro de µl de FuGeneMR6 en 800 µl de medio libre de suero MEM y se adiciona 8 µg del plásmido linealizado por una incubación a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se adiciona la mezcla de FuGeneMR6/DNA a células CHO en una placa de 100 mm seguido por una incubación durante 48 horas en un incubador a 37°C, C02 al 5 %. Las células CHO se cultivan en el complemento DMEM de alto contenido de glucosa (Gibco) ; FBS al 5 %, pen/estrep lx; glutamina, aminoácidos no esenciales lx; Piruvato de sodio lx; y HT Ix. Después de 48 horas de incubación, las células se dividen 1:10 en HT menos medio de selección (DMEM alto contenido de glucosa (Gibco); FBS díalizado al 5 %; pen/estrep lx, glutamina; Aminoácidos No Esenciales Ix Piruvato de sodio Ix Na) . Las células entonces se cultivan en un incubador a 37°C, C02 al 5 %, cambiando el medio de selección dos veces por semana. Las colonias aparecen después de dos semanas de selección y se aislan en placas de 6 cavidades por disco de clonación y se cultivan en C02 al 5 % a 37°C. Cuando las células están confluentes en las placas de 6 cavidades, se detecta la expresión de huOX40L por FACS con hFc-OX40R. Se usan células CHO que expresan cOX40L para comparar los anticuerpos anti-OX40 a cFc-OX40R (región Fe humana y OH40R de mono cynomolgus) para la unión a cOX40L asociado de membrana. De manera específica, células CHO transfectoras se cultivan a confluencia en el medio RPMI y se recolectan usando Verseno. Las células se lavan en amortiguador FACS suero bovino fetal al 2 % (inactivado con calor), azida sódica al 0.1 % en amortiguador de PBS) con centrifugación a 400 x g. Entonces las células CHO se resuspenden en amortiguador de FACS y de este modo se introducen 5 x 105 células en cada tubo de muestra. Los anticuerpos anti-OX40L que se prueban, cFc-0X OR, e IgG humano (control negativo) reactivos de tinción, se diluyen de manera separada en amortiguador de FACS enfriado con hielo para dar concentración final de tinción de 45, 15, 5, 1.7, 0.6 y 0.2 µg/ml para cada reactivo de tinción. Las células se tiñen con uno de los anticuerpos anti-OX40L, cFc-OX40R, ó hlgG en 100 µl de reactivo de tinción. Entonces las células se incuban en hielo durante 1 hora, seguido por tres lavados en amortiguador de FACS. Fc- FITC anti-IgG humana de cabra se diluye 1:1000 en amortiguador de FACS frío y se adicionan 100 µl a las células lavadas a la muestra, las células se incuban en hielo durante 30 minutos y luego se lavan 3 veces. Después del lavado final, las células teñidas se resuspenden en 500 µl de amortiguador frío de FACS y se mantienen en hielo a este análisis en un FACSCalibur (Becton Dickinson) . La Figura 21A proporciona los resultados del análisis de FACS. Ab C, un anticuerpo representativo del grupo identificado de anticuerpos anti-OX40L, también se prueba para su capacidad para neutralizar la unión de cOX40R-Fc a 0X4OL expresado en células CHO. Células CHO transfectadas se preparan como se describe anteriormente y se incuban con 100 µl de AbC ó hlgG a las concentraciones finales de tinción listadas anteriormente y bajo las condiciones descritas anteriormente. Después del lavado por tres veces de las células, entonces se incuban con 100 µl de cFc-OX40R biotinilado (equipo de biotinilacíón de Pierce) (a 5 µg/ml diluido en amortiguador de FAC frío) en hielo durante 1 hora. Las células se lavaron tres veces como se describe anteriormente. Se diluye 1:500 de Estreptavidina-PE en amortiguador frío de FACS (4°C) y se adicionan 100 µl a las células lavadas, que entonces se incuban durante 30 minutos en hielo. Las células se lavan tres veces y se resuspenden en 500 µl de amortiguador frío de FACS de amortiguador para análisis como se describe anteriormente. Como se muestra en la Figura 22, Ab C reduce la capacidad de cFc 0X4OR de unirse a 0X4OL asociado a membrana en células CHO. Además, Ab C obtenido de diferentes fuentes muestra variación mínima en la actividad, indicando que Ab C se puede producir mediante varios sistemas de expresión. La Figura 23 proporciona un análisis de FACS de ejemplo que compara la actividad de Ab C a varias concentraciones. Otras modalidades de la invención serán evidentes para aquellos expertos en la técnica a partir de la consideración de la especificación y de la práctica de la invención descrita en la presente. Se propone que la especificación y los ejemplos se consideren como ejemplos únicamente, con un alcance verdadero y espíritu verdadero de la invención como se indica en las siguientes reivindicaciones . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descrípción de la invención.

Claims (74)

  1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Polipéptido aislado que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRla, CDR2a ó CDR3a, caracterizado porque CDRla comprende la secuencia de aminoácidos a b c d e, en donde el aminoácido a se selecciona de asparagina, treonina, fenilalanina, o serina; el aminoácido b se selecciona de alanina o tirosina; el aminoácido c se selecciona de triptofano, tirosina ó glicina; el aminoácido d se selecciona de metionina o triptofano; y el aminoácido e se selecciona de serina, asparagina o histidina; en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j.k l m n o p q r s t, en donde el aminoácido f se selecciona de arginina o valina; el aminoácido g es isoleucina; el aminoácido h se selecciona de lisina, tirosina ó triptofano; el aminoácido i se selecciona de serina, isoleucina, tirosina, treonina o arginina; el aminoácido j se selecciona de lisina, serina o ácido aspártico; el aminoácido k se selecciona de treonina o glicina; el aminoácido 1 se selecciona de ácido aspártico, serina o ácido glutámico; el aminoácido se selecciona de glicina, treonina, o asparagina; el aminoácido n se selecciona de glicina, asparagina, lisina o treonina; el aminoácido o se selecciona de treonina o tirosina; el aminoácido p se selecciona de treonina, isoleucina, asparagina o tirosina; el aminoácido q se selecciona de ácido aspártico, prolina o alanina; el aminoácido r se selecciona de tirosina, serina o ácido aspártico; el aminoácido s se selecciona de glicina, alanina, leucina o serina; y el aminoácido t se selecciona de alanina, lisina o valina; en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f' , en donde el aminoácido u se selecciona de ácido aspártico, glicina, metionina, o serina; el aminoácido v se selecciona de arginina, glicina, ácido aspártico, tirosina, o fenilalanina; el aminoácido w se selecciona de tirosina, valina, glicina o leucina; el aminoácido x se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o triptofano; el aminoácido y se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o isoleucina; el aminoácido z se selecciona de glicina, tirosina, prolina, valina o fenilalanina; el aminoácido a' se selecciona de ácido glutámico, serina, tirosina, triptofano, o alanina; el aminoácido b' se selecciona de fenilalanina, glicina, tirosina, treonina, o serina; el aminoácido c' selecciona de prolina, tirosina, serina, lisina o glicina; el aminoácido d' se selecciona de fenilalanina, tirosina, o glicina; el aminoácido e' se selecciona de ácido aspártico, tirosina, arginina o histidina; y el aminoácido f se selecciona de tirosina, valina, glicina, arginina o treonina; y en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo es capaz de la unión a OX40L.
  2. 2. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el polipéptido comprende una región variable de cadena pesada de anticuerpo.
  3. 3. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque además comprende una región constante de cadena pesada de anticuerpo.
  4. 4. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la región variable de cadena pesada de anticuerpo y la región constante de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO. 2; SEQ ID NO. 6; SEQ ID NO. 10; SEQ ID NO. 14; SEQ ID NO. 18; ó SEQ ID NO. 22.
  5. 5. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende CDR2a en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t g' y en donde el aminoácido g' se selecciona de prolina, usina o serina.
  6. 6. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque comprende CDR2a, en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i k l n o p q r s t g' h' y en donde el aminoácido h' se selecciona de valina o glicina.
  7. 7. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque comprende CDR2a, en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l n o p q r s t g' h' i' y en donde el aminoácido i' es lisina.
  8. 8. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque comprende CDR2a, en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l n o p q r s t g' h' i' j' y en donde el aminoácido j' es glisina.
  9. 9. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende CDR3a, en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v x y z a' b' C d' e' f k' y en donde el aminoácido k' se selecciona de ácido aspártico, metionina, asparagina, tirosina o valina.
  10. 10. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque comprende CDR3a, en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v x y z a' b' c' d' e' f k' 1' y en donde el aminoácido 1' se selecciona de histidina, ácido aspártico, serina, tirosina, o fenilalanina.
  11. 11. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque comprende CDR3a, en donde CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' y en donde el aminoácido m' se selecciona de valina, ácido aspártico o glicina.
  12. 12. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque comprende CDR3a, en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' y en donde el aminoácido n' se selecciona de fenilalanina, metionina o tirosina.
  13. 13. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque comprende CDR3a, en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z ' b' c' d' e' f k' 1' m' n' o' y en donde el aminoácido o' es ácido aspártico.
  14. 14. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque comprende CDR3a, en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f k' 1' m' n' o' p' y en donde el aminoácido p' se selecciona de valina o tirosina.
  15. 15. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende al menos dos regiones de determinación de complementariedad (CDR) seleccionadas de CDRla, CDR2a ó CDR3a de la reivindicación 1, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L.
  16. 16. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende la CDRla, CDR2a y CDR3a de la reivindicación 1, en donde el polipéptido en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L.
  17. 17. Fragmento de anticuerpo seleccionado de un Fab, un Fab', un F(ab')2, un Fv, un Facb, y un anticuerpo de cadena individual, caracterizado porque el fragmento de anticuerpo comprende un polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 1.
  18. 18. Polipéptido aislado, caracterizado porque comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de al menos uno de aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 2; aminoácidos 69 a 87 de SEQ ID NO. 2; aminoácidos 120 a 135 de SEQ ID NO. 2; aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 6; aminoácidos 69 a 84 de SEQ ID NO. 6; aminoácidos 117 a 134 de SEQ ID NO. 6; aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 10; aminoácidos 69 a 85 de SEQ ID NO. 10; aminoácidos 118 a 135 de SEQ ID NO. 10; aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 14; aminoácidos 69 a 84 de SEQ ID NO. 14; aminoácidos 117 a 131 de SEQ ID NO. 14; aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 18; aminoácidos 69 a 87 de SEQ ID NO. 18; aminoácidos 120 a 133 de SEQ ID NO. 18; aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 22; aminoácidos 69 a 87 de SEQ ID NO. 22; ó aminoácidos 120 a 131 de SEQ ID NO. 22 en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L.
  19. 19. Polipéptido aislado que comprende al menos dos de las regiones de determinación de complementariedad (CDR) de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X40L.
  20. 20. Polipéptido aislado que comprende al menos tres de las regiones de determinación de complementariedad (CDR) de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X40L.
  21. 21. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 2, aminoácidos 69 a 87 de SEQ ID NO. 2 y aminoácidos 120 a 135 de SEQ ID NO. 2.
  22. 22. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 6, aminoácidos 69 a 84 de SEQ ID NO. 6 y aminoácidos 117 a 134 de SEQ ID NO. 6.
  23. 23. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 10, aminoácidos 69 a 85 de SEQ ID NO. 10 y aminoácidos 118 a 135 de SEQ ID NO. 10.
  24. 24. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 14, aminoácidos 69 a 84 de SEQ ID NO. 14 y aminoácidos 117 a 131 de SEQ ID NO. 14.
  25. 25. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 18, aminoácidos 69 a 87 de SEQ ID NO. 18 y aminoácidos 120 a 133 de SEQ ID NO. 18.
  26. 26. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 50 a 54 de SEQ ID NO. 22, aminoácidos 69 a 87 de SEQ ID NO. 22 y aminoácidos 120 a 131 de SEQ ID NO. 22.
  27. 27. Polipéptido aislado que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b, o CDR3b, caracterizado porque CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl, kl, en donde el aminoácido al es arginina; el aminoácido bl se selecciona de la amina o serina; el aminoácido cl es serina; el aminoácido di es glutamina; el aminoácido el se selecciona de glicina o serina; el aminoácido fl se selecciona de isoleucina, valina o leucina; el aminoácido gl se selecciona de serina o valina; el aminoácido hl se selecciona de asparagina, serina o histidina; el aminoácido il se selecciona de histidina, asparagina, serina ó tirosina; el aminoácido jl se selecciona de leucina, tirosina, ácido aspártico; y el aminoácido kl se selecciona de valina, leucina, glicina o asparagina; en donde CDR2b comprende la secuencia de aminoácidos 11 ml ni ol pl ql rl, en donde el aminoácido 11 se selecciona de alanina, glicina o lisina; el aminoácido ml se selecciona de alanina o lisina; el aminoácido ni se selecciona de serina o fenilalanina; el aminoácido ol se selecciona de treonina, serina o asparagina; el aminoácido pl se selecciona de leucina o arginina; el aminoácido ql se selecciona de glutamina, alanina, o fenilalanina; y el aminoácido rl se selecciona de serina o treonina; en donde CDR3b comprende la secuencia de aminoácidos si ti ul vi wl xl yl zl al' ; en donde el aminoácido se selecciona de glutamina o metionina; y el aminoácido ti se selecciona de lisina o glutamina; el aminoácido ul se selecciona de tirosina, alanina, serina o fenilalanina; el aminoácido vi se selecciona de asparagina, glicina, treonina o tirosina; el aminoácido wl se selecciona de serina, glicina, glutamina; el aminoácido xl se selecciona de alanina, serina, isoleucina, o treonina; el aminoácido yl se selecciona de prolina o leucina; el aminoácido zl se selecciona de leucina, triptofano, o fenilalanina; y el aminoácido al' es treonina; y en donde el polipéptido en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL.
  28. 28. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque el polipéptido comprende una región variable de cadena ligera de anticuerpo.
  29. 29. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado porque además comprende una región constante de cadena ligera de anticuerpo.
  30. 30. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque la región variable de cadena ligera de anticuerpo y la región constante de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos como se dispone en SEQ ID NO. 4; SEQ ID NO. 8; SEQ ID NO. 12; SEQ ID NO. 16; ó SEQ ID NO. 20.
  31. 31. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque comprende CDRlb en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl ' y en donde el aminoácido bl' se selecciona de asparagina o alanina.
  32. 32. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque comprende CDRlb en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' y en donde el aminoácido cl' es treonina.
  33. 33. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque comprende CDRlb en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl' cl' di' y en donde el aminoácido di' es tirosina.
  34. 34. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque comprende CDRlb en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl ' cl' di' el' y en donde el aminoácido el' es leucina.
  35. 35. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado porque comprende CDRlb en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl kl bl ' cl ' di' el' fl' y en donde el aminoácido fl' es serina.
  36. 36. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque además comprende al menos dos regiones de determinación de complementariedad (CDR) seleccionadas de CDRlb, CDR2b ó CDR3b de la reivindicación 27, en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L.
  37. 37. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque comprende la CDRlb, CDR2b y CDR3b de la reivindicación 27, en donde el polipéptido en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L.
  38. 38. Fragmento de anticuerpo seleccionado de un Fab, un Fab', un F(ab')2, un Fv, un Facb, y un anticuerpo de cadena individual, caracterizado porque el fragmento de anticuerpo comprende polipéptido aislado de la reivindicación 27.
  39. 39. Polipéptido aislado, caracterizado porque comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de al menos uno de aminoácidos 46 a 56 de SEQ ID NO. 4; aminoácidos 72 a 78 de SEQ ID NO. 4; aminoácidos 111 a 119 de SEQ ID NO. 4; aminoácidos 46 a 56 de SEQ ID NO. 8; aminoácidos 72 a 78 de SEQ ID NO. 8; aminoácidos 111 a 119 de SEQ ID NO. 8; aminoácidos 44 a 59 de SEQ ID NO. 12; aminoácidos 75 a 81 de SEQ ID NO. 12; aminoácidos 114 a 122 de SEQ ID NO. 12; aminoácidos 44 a 55 de SEQ ID NO. 16; aminoácidos 71 a 77 de SEQ ID NO. 16; aminoácidos 110 a 118 de SEQ ID NO. 16; aminoácidos 46 a 56 de SEQ ID NO . 20; aminoácidos 72 a 78 de SEQ ID NO. 20; ó aminoácidos 111 a 119 de SEQ ID NO. 20; en donde el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L.
  40. 40. Polipéptido aislado que comprende al menos dos de las regiones de determinación de complementariedad (CDR) de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a OX40L.
  41. 41. Polipéptido aislado que comprende al menos tres de las regiones de determinación de complementariedad (CDR) de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X40L.
  42. 42. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 46 a 56 de SEQ ID NO. 4, aminoácidos 72 a 78 de SEQ ID NO. 4 y aminoácidos 111 a 119 de SEQ ID NO. 4.
  43. 43. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 46 a 56 de SEQ ID NO. 8, aminoácidos 72 a 78 de SEQ ID NO. 8 y aminoácidos 111 a 119 de SEQ ID NO. 8.
  44. 44. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 44 a 59 de SEQ ID NO. 12, aminoácidos 75 a 81 de SEQ ID NO. 12 y aminoácidos 114 a 122 de SEQ ID NO. 12.
  45. 45. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 44 a 55 de SEQ ID NO. 16, aminoácidos 71 a 77 de SEQ ID NO. 16 y aminoácidos 110 a 118 de SEQ ID NO. 16.
  46. 46. Polipéptido aislado de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el polipéptido aislado comprende los aminoácidos 46 a 56 de SEQ ID NO. 20, aminoácidos 72 a 78 de SEQ ID NO. 20 los aminoácidos 111 a H de SEQ ID NO. 20.
  47. 47. Polinucleótido aislado, que comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRla, CDR2a, y CDR3a caracterizado porque CDRla comprende la secuencia de aminoácidos a b c d e, en donde el aminoácido a se selecciona de asparagina, treonina, fenilalanina, o serina; el aminoácido b se selecciona de alanina o tirosina; el aminoácido c se selecciona de triptofano, tirosina ó glicina; el aminoácido d se selecciona de metionina o triptofano; y el aminoácido e se selecciona de serina, asparagina o histidina; en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t, en donde el aminoácido f se selecciona de arginina o valina; el aminoácido g es isoleucina; el aminoácido h se selecciona de lisina, tirosina ó triptofano; el aminoácido i se selecciona de serina, isoleucina, tirosina, treonina o arginina; el aminoácido j se selecciona de lisina, serina o ácido aspártico; el aminoácido k se selecciona de treonina o glicina; el aminoácido 1 se selecciona de ácido aspártico, serina o ácido glutámico; el aminoácido m se selecciona de glicina, treonina, o asparagina; el aminoácido n se selecciona de glicina, asparagina, lisina o treonina; el aminoácido o se selecciona de treonina o tirosina; el aminoácido p se selecciona de treonina, isoleucina, asparagina o tirosina; el aminoácido q se selecciona de ácido aspártico, prolina o alanina; el aminoácido r se selecciona de tirosina, serina o ácido aspártico; el aminoácido s se selecciona de glicina, alanina, leucina o serina; y el aminoácido t se selecciona de alanina, lisina o valina; en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f' , en donde el aminoácido u se selecciona de ácido aspártico, glicina, metionina, o serina; el aminoácido v se selecciona de arginina, glicina, ácido aspártico, tirosina, o fenilalanina; el aminoácido w se selecciona de tirosina, valina, glicina o leucina; el aminoácido x se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o triptofano; el aminoácido y se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o isoleucina; el aminoácido z se selecciona de glicina, tirosina, prolina, valina o fenilalanina; el aminoácido a' se selecciona de ácido glutámico, serina, tirosina, triptofano, o alanina; el aminoácido b' se selecciona de fenilalanina, glicina, tirosina, treonina, o serina; el aminoácido se selecciona de prolina, tirosina, serina, lisina o glicina; el aminoácido d' se selecciona de fenilalanina, tirosina, o glicina; el aminoácido e' se selecciona de ácido aspártico, tirosína, arginina o histidina; y el aminoácido f se selecciona de tirosina, valina, glicina, arginina o treonina; y en donde el polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo es capaz de la unión a 0X4OL.
  48. 48. Polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque la secuencia que codifica para un polipéptido es una secuencia que codifica para una región variable de cadena pesada de anticuerpo.
  49. 49. Polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque el polinucleótido aislado codifica para un anticuerpo de cadena individual.
  50. 50. Polínucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque además comprende una secuencia de polinucleótido que codifica para una región constante de cadena pesada de anticuerpo.
  51. 51. Polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 50, caracterizado porque el polinucleótido aislado comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO. 2; SEQ ID NO. 6; SEQ ID NO. 10; SEQ ID NO. 14; ó SEQ ID NO. 18; ó SEQ ID NO. 22.
  52. 52. Polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 50, caracterizado porque el polinucleótido aislado comprende una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO. 1; SEQ ID NO. 5; SEQ ID NO. 9; SEQ ID NO. 13; SEQ ID NO. 17; ó SEQ ID NO. 21
  53. 53. Polinucleótido aislado, caracterizado porque comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b, o CDR3b en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl, kl, en donde el aminoácido al es arginina; el aminoácido bl se selecciona de la amina o serina; el aminoácido cl es serina; el aminoácido di es glutamina; el aminoácido el se selecciona de glicina o serina; el aminoácido fl se selecciona de isoleucina, valina o leucina; el aminoácido gl se selecciona de serina o valina; el aminoácido hl se selecciona de asparagina, serina o histidina; el aminoácido il se selecciona de histidina, asparagina, serina ó tirosina; el aminoácido jl se selecciona de leucina, tirosina y ácido aspártico; y el aminoácido kl se selecciona de valina, leucina, glicina o asparagina; en donde CDR2b comprende la secuencia de aminoácidos 11 ml ni ol pl ql rl, en donde el aminoácido 11 se selecciona de alanina, glicina o lisina; el aminoácido ml se selecciona de alanina o lisina; el aminoácido ni se selecciona de serina o fenilalanina; el aminoácido ol se selecciona de treonina, serina o asparagina; el aminoácido pl se selecciona de leucina o arginina; el aminoácido ql se selecciona de glutamina, alanina, o fenilalanina; y el aminoácido rl se selecciona de serina o treonina; en donde CDR3b comprende la secuencia de aminoácidos si ti ul vi wl xl yl zl al' ; en donde el aminoácido de glutamina o metionina; y el aminoácido ti se selecciona de lisina o glutamina; el aminoácido ul se selecciona de tirosina, alanina, serina o fenilalanina; el aminoácido vi se selecciona de asparagina, glicina, treonina o tirosina; el aminoácido wl se selecciona de serina, glicina, glutamina; el aminoácido xl se selecciona de alanina, serina, isoleucina, o treonina; el aminoácido yl se selecciona de prolina o leucina; el aminoácido zl se selecciona de leucina, triptofano, o fenilalanina; y el aminoácido al' es treonina; y en donde el polipéptido en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL.
  54. 54. Polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque la secuencia que codifica para un polipéptido es una secuencia que codifica para una región variable de cadena ligera de anticuerpo.
  55. 55. Polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado porque el polinucleótido aislado codifica para un anticuerpo de cadena individual.
  56. 56. Polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque además comprende una secuencia de polinucleótido que codifica para una región constante de cadena ligera de anticuerpo.
  57. 57. Polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado porque el polinucleótido aislado comprende una secuencia que codifica para un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID NO. 4; SEQ ID NO. 8; SEQ ID NO. 12; SEQ ID NO. 16; Ó SEQ ID NO. 20.
  58. 58. Polinucleótido aislado de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado porque el polinucleótido aislado comprende una secuencia de nucleótidos como se expone en SEQ ID NO. 3; SEQ ID NO. 7; SEQ ID NO. 11; SEQ ID NO. 15; ó SEQ ID NO. 19.
  59. 59. Anticuerpo aislado anti-OX40L, que comprende una región variable y una región constante, caracterizado porque el anticuerpo comprende: (i) un primer polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionado de CDRla, CDR2a ó CDR3a en donde CDRla comprende la secuencia de aminoácidos a b c d e, en donde el aminoácido a se selecciona de asparagina, treonina, fenilalanina, o serina; el aminoácido b se selecciona de alanina o tirosina; el aminoácido c se selecciona de triptofano, tirosina ó glicina; el aminoácido d se selecciona de metionina o triptofano; y el aminoácido e se selecciona de serina, asparagina o histidina; en donde CDR2a comprende la secuencia de aminoácidos f g h i j k l m n o p q r s t, en donde el aminoácido f se selecciona de arginina o valina; el aminoácido g es isoleucina; el aminoácido h se selecciona de lisina, tirosina ó triptofano; el aminoácido i se selecciona de serina, isoleucina, tirosina, treonina o arginina; el aminoácido j se selecciona de lisina, serina o ácido aspártico; el aminoácido k se selecciona de treonina o glicina; el aminoácido 1 se selecciona de ácido aspártico, serina o ácido glutámico; el aminoácido m se selecciona de glicina, treonina, o asparagina; el aminoácido n se selecciona de glicina, asparagina, lisina o treonina; el aminoácido o se selecciona de treonina o tirosina; el aminoácido p se selecciona de treonina, isoleucina, asparagina o tirosina; el aminoácido q se selecciona de ácido aspártico, prolina o alanina; el aminoácido r se selecciona de tirosina, serina o ácido aspártico; el aminoácido s se selecciona de glicina, alanina, leucina o serina; y el aminoácido t se selecciona de alanina, lisina o valina; en donde CDR3a comprende la secuencia de aminoácidos u v w x y z a' b' c' d' e' f, en donde el aminoácido o se selecciona de ácido aspártico, glicina, metionina, o serina; el aminoácido v se selecciona de arginina, glicina, ácido aspártico, tirosina, o fenilalanina; el aminoácido w se selecciona de tirosina, valina, glicina o leucina; el aminoácido x se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o triptofano; el aminoácido y se selecciona de fenilalanina, ácido aspártico, tirosina o isoleucina; el aminoácido z se selecciona de glicina, tirosina, prolina, valina o fenilalanina; el aminoácido a' se selecciona de ácido glutámico, serina, tirosina, triptofano, o alanina; el aminoácido b' se selecciona de fenilalanina, glicina, tirosina, treonina, o serina; el aminoácido se selecciona de prolina, tirosina, serina, lisina o glicina; el aminoácido d' se selecciona de fenilalanina, tirosina, o glicina; el aminoácido e' se selecciona de ácido aspártico, tirosina, arginina o histidina; y el aminoácido f se selecciona de tirosina, valina, glicina, arginina o treonina; y en donde el primer polipéptido, en asociación con una cadena ligera de anticuerpo es capaz de la unión a 0X4OL; y (ii) un segundo polipéptido que comprende al menos una región de determinación de complementariedad (CDR) seleccionada de CDRlb, CDR2b, o CDR3b, en donde CDRlb comprende la secuencia de aminoácidos al bl cl di el fl gl hl il jl, kl, en donde el aminoácido al es arginina; el aminoácido bl se selecciona de la amina o serina; el aminoácido cl es serina; el aminoácido di es glutamina; el aminoácido el se selecciona de glicina o serina; el aminoácido fl se selecciona de isoleucina, valina o leucina; el aminoácido gl se selecciona de serina o valina; el aminoácido hl se selecciona de asparagina, serina o histidina; el aminoácido il se selecciona de histidina, asparagina, serína ó tirosina; el aminoácido jl se selecciona de leucina, tirosina o ácido aspártico; y el aminoácido kl se selecciona de valina, leucina, glicina o asparagina; en donde CDR2b comprende la secuencia de aminoácidos 11 ml ni ol pl ql rl, en donde el aminoácido 11 se selecciona de alanina, glicina o lisina; el aminoácido ml se selecciona de alanina o lisina; el aminoácido ni se selecciona de serina o fenilalanina; el aminoácido ol se selecciona de treonina, serina o asparagina; el aminoácido pl se selecciona de leucina o arginina; el aminoácido ql se selecciona de glutamina, alanina, o fenilalanina; y el aminoácido rl se selecciona de serina o treonina; en donde CDR3b comprende la secuencia de aminoácidos si ti ul vi wl xl yl zl al'; en donde el aminoácido de glutamina o metionina; y el aminoácido ti se selecciona de lisina o glutamina; el aminoácido ul se selecciona de tirosina, alanina, serina o fenilalanina; el aminoácido vi se selecciona de asparagina, glicina, treonina o tirosina; el aminoácido wl se selecciona de serina, glicina, glutamina; el aminoácido xl se selecciona de alanina, serina, isoleucina, o treonina; el aminoácido yl se selecciona de prolina o leucina; el aminoácido zl se selecciona de leucina, triptofano, o fenilalanina; y el aminoácido al' es treonina; y en donde el segundo polipéptido, en asociación con una cadena pesada de anticuerpo, es capaz de la unión a 0X4OL.
  60. 60. Anticuerpo aislado de conformidad con la reivindicación 59, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo humano.
  61. 61. Anticuerpo aislado de conformidad con la reivindicación 59, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo quimérico.
  62. 62. Anticuerpo aislado anti-OX40L que comprende una región variable y una región constante, caracterizado porque el anticuerpo comprende: un primer polipéptido que comprende regiones de determinación de complementariedad (CDR) como se expone en SEQ ID NO. 2 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO. 4; un primer polipéptido que comprende (CDR) como se expone en SEQ ID NO. 6 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO . 8 ; un primer polipéptido que comprende (CDR) como se expone en SEQ ID NO. 10 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO . 12 ; un primer polipéptido que comprende (CDR) como se expone en SEQ ID NO. 14 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO. 16; ó un primer polipéptido que comprende (CDR) como se expone en SEQ ID NO. 18 y un segundo polipéptido que comprende CDR como se expone en SEQ ID NO . 20.
  63. 63. Método para detectar la presencia o ausencia de 0X4OL en una muestra, caracterizado porque comprende: a) combinar el anticuerpo de la reivindicación 59 y la muestra; b) separar los anticuerpos unidos a un antígeno de los anticuerpos no unidos; y c) detectar la presencia o ausencia de anticuerpos unidos al antígeno .
  64. 64. Método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado porque el método usa un ensayo inmunosorbente enlazado a enzimas (ELISA) .
  65. 65. Método para tratar una enfermedad inflamatoria en un paciente, caracterizado porque comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva del anticuerpo de la reivindicación 59 al paciente.
  66. 66. Método de conformidad con la reivindicación 65, caracterizado porque la enfermedad inflamatoria se selecciona de al menos una de artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad de injerto-versus-hospedador, enfermedad de intestino inflamatorio, Enfermedad de Crohn, Colitis ulcerativa, esclerosis múltiple, psoriasis, o lupus nefritis proliferativo.
  67. 67. Vector de expresión, caracterizado porque comprende un polinucleótido de conformidad con la reivindicación 47.
  68. 68. Vector de expresión, caracterizado porque comprende un polinucleótido de conformidad con la reivindicación 53.
  69. 69. Célula, caracterizada porque comprende al menos uno de los vectores de expresión de conformidad con la reivindicación 67 a la reivindicación 68.
  70. 70. Método para elaborar un polipéptido, caracterizado porque comprende producir el polipéptido en una célula que comprende el vector de expresión de conformidad con la reivindicación 67 en condiciones adecuadas para expresar el polinucleótido contenido en la misma para producir el polipéptido .
  71. 71. Método para elaborar un polipéptido caracterizado porque comprende producir el polipéptido una célula que comprende el vector de expresión de conformidad con la reivindicación 68 en condiciones adecuadas para expresar el polinucleótido contenido en el misma para producir el polipéptido.
  72. 72. Método para elaborar un anticuerpo anti- 0X4OL, caracterizado porque comprende producir el anticuerpo en una célula que comprende el vector de expresión de conformidad con la reivindicación 67 y que comprende además el vector de expresión de la reivindicación 68 en condiciones adecuadas para expresar los polinucleótidos contenidos en la misma para producir el anticuerpo.
  73. 73. Composición farmacéutica, caracterizada porque comprende el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 59 y un portador farmacéuticamente aceptable.
  74. 74. Anticuerpo aislado, caracterizado porque se une de manera específica a un epítopo que se une de manera específica por al menos uno de Ab A, Ab B, Ab C, Ab D, Ab E, Ab F, Ab G, Ab H, Ab I, ó Ab J.
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