MXPA06003088A

MXPA06003088A - Metodos para usar celulas regenerativas en el tratamiento de enfermedades vasculares perifericas y trastornos relacionados.

Info

Publication number: MXPA06003088A
Application number: MXPA06003088A
Authority: MX
Inventors: Marc H Hedrick
Original assignee: Macropore Biosurgery Inc
Priority date: 2003-09-17
Filing date: 2004-07-01
Publication date: 2006-06-20
Also published as: DK1670315T3; WO2005034843A2; EP1670315A4; EP1670315B1; JP2007505904A; JP5019511B2; CN1878470A; EP2348103B1; BRPI0414455A; SG146666A1; AU2004280149A1; ES2633604T3; EP2348103A3; EP2348103A2; EP1670315A2; DK2348103T3; WO2005034843A3; CA2539346A1

Abstract

La presente invencion se refiere a celulas presentes en tejido adiposo para tratar pacientes con EVP y enfermedades o trastornos relacionados. Metodos para tratar pacientes incluyen, procesamiento de tejido adiposo para liberar una cantidad concentrada de celulas troncales obtenidas del tejido adiposo para un paciente. Los metodos pueden ser practicados en un sistema cerrado para que las celulas troncales no se expongan a un ambiente externo antes de ser administradas al paciente. Por consiguiente, en un metodo preferido, las celulas presentes en tejido adiposo son colocadas directamente en un recipiente junto con tales aditivos necesarios para promover, engendrar o soportar beneficios terapeuticos.

Description

METODOS PARA USAR CELULAS REGENERATIVAS EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES VASCULARES PERIFERICAS Y TRASTORNOS RELACIONADOS CAMPO DE LA INVENCION Esta invención se refiere de manera general, a células derivadas de tejido adiposo, y más particularmente, a células regenerativas derivadas de tejido adiposo (por ejemplo, células troncales y/o progenitoras) , métodos para usar células regenerativas derivadas adiposas, composiciones que contienen células regenerativas derivadas adiposas, y sistemas para preparar y usar células regenerativas derivadas adiposas, las cuales son usadas para tratar enfermedad vascular periférica y condiciones, enfermedades o trastornos relacionados .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La enfermedad vascular periférica (EVP) y trastornos relacionados, son definidos como enfermedades de vasos sanguíneos fuera del sistema nervioso central y corazón, a menudo encontrados como estrechamiento de los vasos de las extremidades . Existen dos tipos principales de estos trastornos, enfermedades funcionales las cuales no involucran defectos en los vasos sanguíneos, pero preferentemente se originan de estímulos tales como frío, estrés, o tabaquismo, y enfermedades orgánicas, las cuales se REF . : 171466 originan a partir de defectos estructurales en la vasculatura tal como lesiones ateroscleróticas , inflamación local o lesión traumática. Esto puede conducir a oclusión de los vasos, flujo sanguíneo aberrante y finalmente, a isquemia de tejido. Una de las formas clínicamente más significantes de EVP es la enfermedad de la arteria periférica (EAP) , la cual tiene elementos en común con la Enfermedad de la Arteria Coronaria (EAC) . De manera similar a la EAC, la EAP es a menudo tratada por angioplastía e implantación de una espiral o por cirugía de derivación de arteria. La representación clínica depende de la ubicación de los vasos ocluidos. Por ejemplo, el estrechamiento de la arteria que suministra sangre al intestino (es decir, arteria mesentérica superior) , puede resultar en severo dolor postprandial en el abdomen inferior, resultando de la incapacidad de los vasos ocluidos para satisfacer la demanda de oxígeno incrementada originada de los procesos digestivos y absorptivos. Varias formas de isquemia pueden conducir a necrosis intestinal. De manera similar, la EAP en la pierna, puede conducir a dolor intermitente, usualmente en terneros, que viene y va con actividad. Este trastorno es conocido como claudicación intermitente (CI) y puede progresar a dolor persistente mientras está en reposo, ulceración isquémica y aún amputación. Las intervenciones terapéuticas actualmente disponibles para la EVP incluyen, fármacos trombolíticos y fármacos anti-trombóticos (heparina, aspirina, cumadina) , ejercicio (para CI) , fármacos anti-aterogénicos (por ejemplo, estatinas) y revascularización quirúrgica. Sin embargo, muchos pacientes tienen una forma de enfermedad que no es anatómicamente adecuada para intervención quirúrgica. La enfermedad vascular periférica es también manifestada en estenosis aterosclerotica de la arteria renal, la cual puede conducir a isquemia renal y disfunción renal . La revascularización biológica proporciona una alternativa potencial a los procedimientos quirúrgicos . Involucra el proceso de angiogénesis y arteriogénesis , los cuales se combinan para accionar el desarrollo de nuevas técnicas de flujo sanguíneo colateral, pasando el flujo sanguíneo alrededor de la oclusión. La revascularización biológica se puede lograr por terapia de fármaco y de gen proporcionando factores angiogénicos o por terapia celular suministrando células que contribuyen a la angiogénesis por liberación parácrina de factores angiogénicos y/o proporcionando una fuente de células que pueden formar el endotelio. Estudios de terapia celular se han basado en la detección de la presencia de células troncales no hemapotoyéticas y células precursoras endoteliales en la médula ósea (Prockop, Azizi et al., 2000) (Pittenger, Mackay et al. 1999) (Shi, Rafii et al., 1998; Carmeliet and Luttum 2001) . Estos estudios usan animales recipientes de transplante de médula ósea en los cuales, las células donadoras y hospederas podrán ser distinguidas por marcadores genéticos para mostrar que alguna fracción de los nuevos vasos sanguíneos desarrollada en los recipientes, se deriva de las células de la médula ósea (Carmeliet and Luttun 2001) (Takahashi, alka et al. 1999; Murayama, Tepper et al. 2002) . Mientras este trabajo demuestra definitivamente que la médula contiene tales células troncales mesenquimales , la frecuencia celular en la médula ósea se estima entre 1 en 100,000 y 1 en 1,000,000 células nucleadas (D'Ippolito et al., 1999; Banfi et al., 2001; Falla et al., 1993). De manera similar, la extracción de estas células a partir de la piel y otros tejidos, involucra una complicada serie de etapas de cultivos celulares durante varias semanas (Toma et al., 2001) y la aplicación clínica de células troncales derivadas del músculo esqueleto, requiere una fase de cultivo de dos a tres semanas (Hagege et al., 2003) . De este modo, cualquier aplicación clínica propuesta de células troncales a partir de tales tejidos, requiere incrementar el número celular, pureza y madurez por procesos de purificación celular y cultivo celular . Aunque las etapas de cultivo celular pueden proporcionar número celular incrementado, pureza y madurez, haciéndolas a un costo. Este costo puede incluir una o más de las siguientes dificultades técnicas : pérdida de la función celular debido a envejecimiento celular, pérdida de poblaciones celulares no troncales potencialmente útiles, retardos en la aplicación potencial de células a pacientes, costo monetario incrementado, y riesgo incrementado de contaminación de células con microorganismos ambientales durante el cultivo. Estudios recientes que examinan los efectos terapéuticos de los ASC derivados de la médula ósea, han usado esencialmente médula ósea completa para evitar los problemas asociados con el cultivo celular (Horwitz et al., 2001; Orlic et al., .2001; Stamm et al., 2003; Strauer et al., 2002) . Los beneficios clínicos, sin embargo, han sido subóptimos, un resultado casi ciertamente relacionado con la dosis ASC limitada y pureza inherentemente disponible en la médula ósea. Recientemente, el tejido adiposo ha sido mostrado por ser una fuente de células troncales (Zuk et al., 2001; Zuc et al., 2002). El tejido adiposo (distinto de la médula, piel, músculo, hígado y cerebro), es comparablemente fácil de colectar en cantidades relativamente grandes con baja morbidez (Commons et al., 2001; Katz et al., 2001b). Los métodos adecuados para colectar derivados adiposos de células troncales, sin embargo, son carentes en la técnica. Los métodos existentes sufren de un número de desventajas. Por ejemplo, los métodos existentes pueden carecer parcial o completamente de automatización, un sistema parcial o completamente cerrado, disponibilidad de componentes, etc. Dado el potencial terapéutico de células troncales derivadas adiposas para tratar la EVP, existe una necesidad en la técnica de un método para colectar células a partir de tejido adiposo que produce una población de células troncales adultas con rendimiento incrementado, consistencia y/o pureza, y rápidamente y confiablemente con una necesidad disminuida o no existente para la manipulación post-extracción.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a células regenerativas, por ejemplo, células progenitores y adultas troncales, que pueden ser usadas para tratar la EVP y enfermedades o trastornos relacionados . La presente invención también se refiere a sistemas y métodos para separar y concentrar células regenerativas a partir de tejido, por ejemplo, tejido adiposo. La presente invención además se refiere a composiciones de células regenerativas para tratar la EVP y enfermedades o trastornos relacionados . Por consiguiente, en una modalidad general, la presente invención se dirige a composiciones, métodos y sistemas para usar células regenerativas derivadas de tejido que son colocadas directamente en un recipiente junto con tales aditivos necesarios para promover, engendrar o soportar un beneficio terapéutico . En modalidades específicas, la presente invención se dirige a métodos para tratar la EVP y enfermedades y trastornos relacionados, defectos o trastornos de los vasos sanguíneos, trastornos del te ido extracoronario, enfermedades de la arteria periférica, arteriosclerosis y arteritidas inflamatorias, administrando, preferiblemente por inyección, una concentración de células regenerativas. Las células regenerativas pueden ser comprendidas de por ejemplo, células troncales, células progenitoras o combinaciones de las mismas. En ciertas modalidades, la administración de dosis múltiple de células regenerativas puede ser necesaria para accionar un beneficio terapéutico. Además, aditivos tales como uno o más factores de crecimiento, pueden ser administrados con las células regenerativas. En una modalidad preferida, las células regenerativas son administradas con factores de crecimiento angiogénico solos o en combinación con otros aditivos. Las células regenerativas pueden también ser administradas con uno o más fármacos inmunosupresivos . Las rutas de administración para las células regenerativas son bien conocidas en la técnica, e incluyen rutas de administración intravenosa, intra-muscular y subcutánea. Las células pueden ser administradas a, por ejemplo, la vasculatura del paciente. Las células pueden también ser administradas vía un andamiaje, por ejemplo, un andamiaje resorbable conocido en la técnica Previo a la administración a un paciente, las células regenerativas pueden hacerse crecer en un cultivo celular para, por ejemplo, promover la diferenciación hacia un fenotipo angiogénico y/o endotelial. El cultivo celular puede ser realizado en un material de andamiaje, por ejemplo, un andamiaje resorbable, para generar un constructo bi- o tri-dimensional que puede ser colocado en o dentro del paciente. Previo a la administración a un paciente, las células podrán ser modificadas por transferencia de gen, de manera tal que se altera la expresión de uno o más genes, por ejemplo, en un gen aniogénico o un gen apoptótico, en las células regenerativas modificadas . La presente invención también se refiere a sistemas altamente versátiles y métodos capaces de separar y concentrar células regenerativas, por ejemplo, células progenitoras y células troncales, de un tejido dado, que son adecuadas para re-infusión en un sujeto. En una modalidad preferida, el sistema es automatizado. El sistema de la presente invención incluye de manera general, una o más de una cámara de colección, una cámara de procesamiento, una cámara de desechos, una cámara de salida y una cámara de muestra. Las varias cámaras son acopladas en conjunto via uno o más conductos, de manera tal que los fluidos que contienen material biológico pueden pasar de una cámara a otra en una trayectoria cerrada de tej ido/fluido estéril. En ciertas modalidades, la cámara de desecho, la cámara de salida y la cámara de muestra, son opcionales. En una modalidad, el procedimiento completo de la extracción de tejido a través del procesamiento y colocación del dispositivo en el recipiente, podrá ser realizado en la misma instalación, de hecho, aún dentro de la misma sala del paciente que se somete al procedimiento. Por consiguiente, en una modalidad, un método para tratar un paciente con EVP o una enfermedad o trastorno relacionado incluye las etapas de: a) proporcionar un sistema de remoción de tejido; b) remover el tejido adiposo a partir de un paciente usando el sistema de remoción de tejido, el tej ido adiposo que tiene una concentración de células troncales; c) procesar al menos, una parte del tejido adiposo para obtener una concentración de células regenerativas distinta de la concentración de. células regenerativas del tejido adiposo antes del procesamiento; y d) administrar, preferiblemente por inyección, las células regenerativas a un paciente sin remover las células regenerativas a partir del sistema de remoción de tejido, antes de ser administrado al paciente . Cualquier característica o combinación de características descritas en este documento, están incluidas dentro del alcance de la presente invención, siempre que las características incluidas en cualquiera de tales combinaciones, no sean mutualmente inconsistentes, como será aparente a partir del contexto, esta especificación y el conocimiento de uno de habilidades ordinarias en la técnica. Ventajas y aspectos adicionales de la presente invención son aparentes en la siguiente descripción detallada.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 es una ilustración de un sistema para separar células regenerativas a partir de tejido, el cual incluye un montaje de filtro. La Figura 2 es una ilustración de un sistema similar a la Figura 1, que tiene una pluralidad de montajes de filtro en una configuración serial. La Figura 3 es una ilustración de un sistema similar a la Figura 1, que tiene una pluralidad de montajes de filtro en una configuración paralela. La Figura 4 es una ilustración de un sistema para separar células generativas a partir de tejido el cual incluye una cámara centrífuga. La Figura 5 es una vista seccional de una cámara de colección que incluye, un filtro prefijo utilizado en un sistema para separar , células regenerativas del tejido. La Figura S es una vista seccional de una cámara de procesamiento de un sistema para separar células regenerativas de tejido utilizando un sistema de filtración percolativo . La Figura 7 es una vista seccional de una cámara de procesamiento de un sistema para separar células regenerativas utilizando un dispositivo centrífugo para concentrar las células regenerativas . La Figura 8 es otra vista seccional de la cámara de procesamiento de la Figura 7. Las Figuras 9A, 9B, y 9C, ilustran un componente de decantación en uso con el sistema de la invención. La Figura 10 es una ilustración de un sistema para separar células regenerativas de tejido utilizando presión a vacío para mover fluidos a través del sistema. Un sistema a vacío puede ser construido aplicando una bomba de vacío o fuente de vacío a la salida del sistema, controlado a una velocidad predeterminada para jalar el tejido y fluido a través de este, usando un sistema de llave de paso, ventilación y sujetadores para controlar la dirección y cronometraje del flujo. La Figura 11 es una ilustración de un sistema para separar células regenerativas de tejido utilizando presión positiva para mover fluidos a través del sistema. Un sistema de presión positivo usa medios mecánicos tales como una bomba peristáltica para empujar o propulsar el fluido y tejido a través del sistema y a una velocidad determinada, usando válvulas, llaves de paso, ventilación y sujetadores, para controlar la dirección y cronometraje del flujo. La Figura 12A ilustra un proceso de filtración en el cual la corriente de alimentación del fluido fluye de manera tangencial a los poros del filtro. La Figura 12B ilustra un proceso de filtración en el cual la corriente de alimentación del fluido fluye perpendicular a los poros del filtro . La Figura 13 es una ilustración de una seria desechable ejemplar para un sistema de la invención. La Figura 14 es una ilustración de un componente re-utilizable ejemplar para un sistema de la invención. La Figura 15A es una ilustración de un dispositivo ejemplar de la invención, montado usando la serie desechable de la Figura 13 y un componente re-utilizable de la Figura 14. La Figura 15B es un diagrama de flujo que representa etapas pre-programadas ejemplares, implementadas a través de un programa de software, que controla modalidades automatizadas de un sistema de la presente invención. Se muestran dos parámetros de procesamiento alternativo indicando la versatilidad del sistema. Las Figura 16A y 16B que representa la expresión de la proteína VEGF (5A) y PIGF (5B) por células troncales derivadas adiposas cultivadas. La Figura 17 representa detección de células progenitoras endoteliales dentro de las poblaciones de células troncales derivadas adiposas . Las Figuras 18A y 18B representan el desarrollo in vi tro de estructuras vasculares en tanto ratones normales (7A) como tratados con estreptozotocina (7B) . La Figura 19 representa la restauración promedio incrementada del flujo sanguíneo en ratones isquémicos de la extremidad posterior tratados con células troncales derivadas adiposas, comparada con un control negativo. Las Figuras 20? y 20B muestran que incrementando la dosis de células troncales derivadas adiposas, se mejora la supervivencia al injerto y angiogénesis (20A) y representan la retención de la arquitectura de tejido adiposo en el espécimen histológico (20B) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona métodos para la EVP usando células regenerativas derivadas adiposas ("CDA"). La EVP generalmente se origina de un progreso aterotrombótico en el cual, el estrechamiento aterosclerótico de los vasos conduce en si mismo, a un grado de isquemia de tejido, mientras simultáneamente, incrementa la probabilidad de un déficit de perfusión clínicamente significante originado del hospedamiento de un coágulo u otro embolismo al punto de estrechamiento. La isquemia conduce a disfunción metabólica (inadecuado suministro de oxígeno para satisfacer la demanda) , dentro de los tej idos normalmente perfundidos por los vasos ahora ocluidos los cuales, en formas severas o progresivas, pueden conducir a procedimientos necróticos. La presente invención se basa en parte, al descubrimiento que las células regenerativas de la invención (1) expresan factores de crecimiento angiogenicos y citosinas que incluyen PIGF, VEGF, bFGF, IGF-II, Eotaxina, G-CSF, GM-CSF, IL-12 p40/p70, IL-12 p70, IL-13, IL-6, IL-9, Leptina, MCP-1, M-CSF, MIG, PF-4, TIMP-1, TIMP-2, TNF-oí y Trombopoyetina, (2) comprenden células progenitoras endoteliales (CPE) , las cuales tienen una función bien establecida en la formación de vasos sanguíneos, (3) desarrollo en vasos sanguíneos in vitro, y (4) soporte de supervivencia de tejido isquémico in vivo. Por consiguiente, las células regenerativas de la' presente invención son útiles para el tratamiento de EVP, por ejemplo, promoviendo la angiogénesis . La presente invención también se refiere a sistemas rápidos y confiables y métodos para separar y concentrar células regenerativas, por ejemplo, células troncales y/o células progenitoras, a partir de una amplia variedad de tejidos, que incluyen pero no se limitan a, adiposo, médula ósea, sangre, piel, músculo, hígado, tejido conectivo, fascia, cerebro y otros tejidos del sistema nervioso, vasos sanguíneos y otros tejidos suaves o líquidos, o componentes de tejidos o mezclas de tejidos (por ejemplo, una mezcla de tejidos que incluyen piel, vasos sanguíneos, tejido adiposo y conectivo) . En una modalidad preferida, el sistema separa y concentra células regenerativas a partir de tejido adiposo. En otra modalidad preferida, el sistema es automatizado de manera tal que el método completo puede ser realizado con mínima intervención de usuario o experto. En una modalidad particularmente preferida, las células regenerativas obtenidas usando los sistemas y métodos de la presente invención, son adecuados para la colocación directa en un recipiente que sufre de la EVP o una enfermedad o trastorno relacionado a partir de quién es extraído el tejido. Preferiblemente, el procedimiento completo a partir de la extracción del tejido a través de separación, concentración y colocación (por ejemplo, inyección) de las células regenerativas en el recipiente, podría ser todo realizado en las mismas instalaciones, de hecho, aún dentro de la misma sala del paciente que se somete al procedimiento. Las células regenerativas pueden ser usadas en un periodo de tiempo relativamente corto después de la extracción y concentración. Por ejemplo, las células regenerativas pueden estar listas para uso en aproximadamente una hora a partir de la colecta de tejido de un paciente, y en ciertas situaciones, pueden estar listas para uso en aproximadamente 10 a 40 minutos a partir de la colecta del tejido. En una modalidad preferida, las ' células regenerativas pueden estar listas para uso en aproximadamente 20 minutos a partir de la colecta del tejido. La longitud completa del procedimiento a partir de la extracción a través de separación y concentración puede variar, dependiendo de un número de factores, incluyendo perfil del paciente, tipo de tejido a ser colectado y la cantidad de células regenerativas requeridas para una aplicación terapéutica dada. Las células pueden también ser colocadas en el recipiente en combinación con otras células, tejidos, fragmentos de tejidos, andamiajes u otros estimuladores del crecimiento y/o diferenciación celular en el contexto de un procedimiento operativo único con la intención de derivar un beneficio terapéutico, estructural o cosmético al recipiente. Se entiende que cualquier manipulación adicional de las células regenerativas más allá de la fase de separación y concentración del sistema, requerirá tiempo adicional conmensurado con la manera de tal manipulación. Para que la ' presente invención pueda ser más fácilmente entendida, ciertos términos son definidos primero. Definiciones adicionales se exponen a través de la descripción detallada. Como se usa en este documento, "células regenera ivas" , se refiere a cualquiera de las células heterogéneas u homogéneas obtenidas usando los sistemas y métodos de la presente invención, los cuales causan o contribuyen a la regeneración, restauración o sustitución completa o parcial de la estructura o función de un órgano, tejido o unidad o sistema fisiológico para con ello, proporcionar un beneficio terapéutico, estructural o cosmético. Ejemplos de células regenerativas incluyen: ASC, células endoteliales , células precursoras endoteliales , células progenitoras endoteliales, macrófagos, fibroblastos, pericitos, células del músculo liso, preadipocitos, adipocitos diferenciados o des-diferenciados, queratinocitos , células precursoras y progenitoras unipotentes y multipotentes (y su progenie) y linfocitos. Otro mecanismo por el cual las células regenerativas pueden proporcionar un beneficio terapéutico, estructural o cosmético, es incorporándolas o a su progenie en componentes de tejidos o tejidos recientemente generados, existentes o reparados. Por ejemplo, ASC y/o su progenie, pueden incorporarse en hueso, músculo u otro tejido estructural o funcional recientemente generado y con ello, causar o contribuir a un mejoramiento terapéutico, estructural o cosmético. De manera similar, células endoteliales o precursores endoteliales o células progenitoras y su progenie, pueden incorporarse en los vasos sanguíneos existentes, recientemente generados, reparados o expandidos para con ello, causar o contribuir a un beneficio terapéutico, estructural o cosmético. Otro mecanismo por el cual las células regenerativas pueden proporcionar un beneficio terapéutico, estructural o cosmético, es expresando y/o secretando moléculas, por ejemplo, factores de crecimiento, que promueven la creación, retención, restauración y/o regeneración de la estructura o función de un tejido o componente de tejido dado. Por ejemplo, las células regenerativas pueden expresar y/o secretar moléculas, las cuales resultan en crecimiento mejorado de tejidos o células que después participan directamente o indirectamente en la estructura o función mejorada. Las células regenerativas pueden expresar y/o secretar factores de crecimiento, que incluyen, por ejemplo, Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF) , Factor de Crecimiento Placental (PIGF) , bFGF, IGF-II, Eotaxina, G-CSF, GM-CSF, IL-12 p40/p70, IL-12 p70, IL-13, IL-6, IL-9, Leptina, MCP-1, M-CSF, MIG, PF-4, TIMP-1, TIMP-2, TNF-a y Trombopoyetina, y sus isoformas, las cuales pueden realizar una o más de las siguientes funciones: estimular el desarrollo de nuevos vasos sanguíneos, es decir, promueven la angiogénesis; mejorar el suministro de oxígeno de vasos sanguíneos pequeños existentes (colaterales) , expandiendo su capacidad de transportar sangre; inducir inmovilización de células regenerativas de sitios distantes del sitio de la lesión para con ello, mejorar la orientación y migración de tales células al sitio de la lesión; estimular el crecimiento y/o promover la supervivencia de las células dentro de un sitio de lesión para con ello, promover la retención de la función o estructura; suministrar moléculas con propiedades anti-apoptóticas con ello reduciendo la velocidad o probabilidad de muerte celular y pérdida permanente de la función; e interactuar con células regenerativas endógenas y/o otros mecanismos fisiológicos. Las células regenerativas pueden ser usadas en su forma "nativa" como se presentan o separadas y concentradas a partir del tejido, usando los sistemas y métodos de la presente invención o pueden ser modificadas por estimulación o cebado con factores de crecimiento u otros modificadores de la respuesta biológica, por transferencia de gen (transferencia temporal o estable) , por sub-fraccionamiento adicional de la población resultante en las propiedades físicas o de base (por ejemplo, tamaño o densidad) , adherencia diferencial a un material de fase sólida, expresión de la superficie celular o moléculas intracelulares , cultivos celulares u otra manipulación, modificación o fraccionamiento ex vivo o in vivo, como se describe adicionalmente en este documento. Las células regenerativas pueden también ser usadas en combinación con otras células o dispositivos tales como andamiajes sintéticos o biológicos, materiales o dispositivos que suministran factores, fármacos, químicos u otros agentes que modifican o mejoran las características relevantes de las células como se describe adicionalmente en este documento. Como se usa en este documento, "composición celular regenerativa" , se refiere a la composición de células típicamente presentes en un volumen de líquido después que un tejido, por ejemplo, tejido adiposo, es lavado y al menos, parcialmente desagregado. Por ejemplo, una composición celular regenerativa de la invención, comprende tipos diferentes múltiples de células regenerativas , que incluyen ASC, células endoteliales, células precursoras endoteliales , células progenitoras endoteliales, macrófagos, fibroblastos, pericitos, células del músculo liso, preadipocitos , adipocitos diferenciados o des-diferenciados, queratinocitos , células precursoras y progenitoras unipotentes y multipotentes (y su progenie) y linfocitos. La composición celular regenerativa puede también contener uno o más contaminantes, tales como colágeno, el cual puede estar presente en los fragmentos de tejidos, o colagenasa residual u otra enzima u agente empleado en o que resulta del proceso de desagregación de tejido, descrito en este documento. Como se usa en este documento, "medicina regenerativa", se refiere a cualquier beneficio terapéutico, estructural o cosmético que se deriva de la colocación, ya sea directamente o indirectamente, de células regenerativas en un sujeto. Como se usa en este documento, "Enfermedad Vascular Periférica (EVP)", se refiere a enfermedades y trastornos de la circulación de vasos sanguíneos fuera del corazón y cerebro e incluyen, pero no se limitan a, EVP funcional, EVP orgánica, Enfermedad Arterial Periférica (EAP) , enfermedad oclusiva arteriosclerótica, arteriosclerosis , lesión traumática de vasos y arteritidas inflamatorias. Específicamente, la EVP es a menudo caracterizada por un estrechamiento de los vasos que transportan sangre a la pierna y músculos de los brazos . Por ejemplo, en la EAP, la cual es una condición similar a la enfermedad de la arteria coronaria y enfermedad de arteria carótida, depósitos de grasa se acumulan a lo largo de las paredes de las arterias y afectan la circulación sanguínea, principalmente en arterias que conducen a las piernas y pies . Personas con EAP tienen un riesgo superior de muerte a partir de ataques de cardíacos y apoplejías, debido al riesgo de los coágulos de sangre. Como se usa en este documento, el término "angiogénesis" , se refiere al proceso por el cual son generados nuevos vasos sanguíneos a partir del tejido y vasculatura existentes (Folkman, 1995) . La frase "reparar o remodelar")/ se refiere a la reformación de vasculatura existente. El alivio de la isquemia de tejido es criticamente dependiente de la angiogenesis . El crecimiento espontáneo de nuevos vasos sanguíneos proporciona circulación colateral en y cerca de un área isquémica, mejora el flujo sanguíneo, y alivia los síntomas causados por la isquemia. Los trastornos y enfermedades mediadas por la angiogenesis incluyen infarto al miocardio agudo, cardiomiopatía isquémica, enfermedad vascular periférica, apoplejía isquémica, necrosis tubular aguda, AFT que incluye heridas, sepsis, enfermedad de intestino isquémico, retinopatía diabética, neuropatía y nefropatía, vasculitidas, encefalopatía isquémica, disfunción eréctil fisiológica, lesiones de la médula espinal isquémicas o traumáticas, insuficiencia del sistema de órganos múltiples, enfermedad de goma isquémica e isquemia relacionada con transplante. Como se usa en este documento, "células troncales" se refiere a una célula regenerativa multipotente con el potencial para diferenciarse en una variedad de otros tipos de células, las cuales realizan una o más funciones específicas y tienen la capacidad para auto-renovarse. Algunas de las células troncales descritas en este documento pueden ser multipotentes . Como se usa en este documento, "células progenitoras" , se refiere a una célula regenerativa multipotente con el potencial para diferenciarse en más de un tipo celular y tiene limitada o ninguna capacidad para auto-renovarse. "Célula progenitora" , como se usa en este documento, también se refiere a una célula unipotente con el potencial para diferenciarse en solamente un tipo de célula única, la cual realiza una o más funciones específicas y tiene limitada o ninguna capacidad para auto-renovarse . En particular, como se usa en este documento, "célula progenitora endotelial" , se refiere a una célula multipotente o unipotente con el potencial para diferenciarse en células endoteliales vasculares. Como se usa en este documento, "célula precursora", se refiere a una célula regenerativa unipotente con el potencial para diferenciarse en un tipo de célula. Células precursoras y su progenie, pueden retener la capacidad proliferativa excesiva, por ejemplo, linfocitos y células endoteliales, las cuales pueden proliferar bajo condiciones apropiadas . Como se usa en este documento, el término "factor angiogénico" o "proteína angiogénica" , se refiere a cualquier proteína, péptido u otro agente conocido, capaz de promover el crecimiento de nuevos vasos a partir de la vasculatura existente ( "angiogénesis" ) . Los factores angiogénicos adecuados para uso en la invención incluyen, pero no se limitan a, Factor de Crecimiento de Placenta (Luttun et al., 2002) , Factor de Estimulación de la Colonia de Macrófagos (Aharinejad et al., 1995), Factor de Estimulación de la Colonia de Macrófagos del Granulocito (Buschmann et al . , 2003), Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF) -A, VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-F (Mints et al., 2002), neuropilina (Wang et al., 2003), factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) -1, FGF-2 (bFGF) , FGF-2, FGF-4, FGF-5 , FGF-6 (Botta et al., 2000), Angiopoyetina 1, Angiopoyetina 2 (Sundberg et al., 2002), eritropoyetina (Ribatti et al., 2003), BMP-2, BMP-4, BMP-7 (Carano and Filvaroff 2003), TGF-beta (Xiong et al., 2002), IGF-1 (Shigematsu et al., 1999), Osteopontina (Asou et al., 2001), Pleyotropina (Beecken et al., 2000), Activina (Lamouille et al., 2002), Endotelina-1 (Bagnato and Spinella, 2003) y combinaciones de los mismos. Factores angiogénicos pueden actuar independientemente, o en combinación entre sí. Cuando están en combinación, los factores angiogénicos pueden también actuar sinergisticamente , con ello, el efecto combinado de los factores es mayor que la suma de los efectos de los factores individuales tomados separadamente . El término "factor angiogénico" o "proteína angiogénica" , también abarca análogos funcionales de tales factores . Análogos funcionales incluyen, por ejemplo, porciones funcionales de los factores. Análogos funcionales también incluyen anticuerpos anti-idiotípicos los cuales se enlazan a los receptores de los factores y, de este modo, imitan la actividad de los factores promoviendo la angiogenesis y/o remodelación del tejido. Los métodos para generar tales anticuerpos anti-idiotípicos son bien conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, en el documento WO 97/23510, contenidos de la cual están incorporados en este documento para referencia. Los factores angiogénicos usados en la presente invención, pueden ser producidos u obtenidos de cualquier fuente adecuada. Por ejemplo, los factores pueden ser purificados de sus fuentes nativas, o producidos sintéticamente o por expresión recombinante . Los factores pueden ser administrados a pacientes como una composición de protelna. Alternativamente, los factores pueden ser administrados en la forma de una plásmido de expresión que codifica los factores. La construcción de plásmidos de expresión adecuados es bien conocida en la técnica. Los vectores adecuados para la construcción de plásmidos de expresión incluyen, por ejemplo, vectores adenovirales, vectores retrovirales, vectores virales adeno-asociados, vectores de ARN, liposomas, lípidos catiónicos, vectores lentivirales y transposons . Como se usa en este documento, el término "arteriogénesis" , se refiere al proceso para mejorar el crecimiento de arterias colaterales y/u otras arterias a partir de las conexiones arteriolares pre-existentes (Carmeliet, 2000; Scholz et al., 2001; Scholz et al., 2002).

Más particularmente, la arteriogénesis es el reclutamiento y expansión in si tu de arterias por proliferación de las células del músculo liso y endoteliales, a partir de conexiones arteriolares pre-existentes que suministran sangre al tejido isquémico, tumor o sitio de inflamación. Estos vasos crecen grandemente fuera del tejido afectado y son importantes para el suministro de nutrientes al territorio isquémico, el tumor o el sitio de inflamación. La arteriogénesis es parte de la respuesta normal a la isquemia miocardial (Mills et al., 2000; Monteiro et al., 2003). Además, la técnica quirúrgica común de un injerto de derivación de arteria coronaria (CABG) , es, en efecto, no más que la creación de un vaso colateral artificial (Sergeant et al., 1997) . De este modo, procesos los cuales mejoran la arteriogénesis después de un infarto, mejorarán el flujo sanguíneo a tej ido isquémico resultando en muerte celular disminuida y tamaño de infarto disminuido. Estos mejoramientos resultarán en función cardíaca mejorada y beneficio terapéutico. Como se usa en este documento, "número de célula troncal" o "frecuencia de célula troncal" , se refiere al número de colonias observadas en un ensayo clonogénico en el cual, células derivadas adiposas (CDA) , son colocadas en placas a baja densidad celular (<10,000 células/cavidad), y crecen en medio de crecimiento que soporta el crecimiento de MSC (por ejemplo, suplementado con medio DMEM/P12 con suero de ternero fetal a 10%, suero de caballo al 5%, y agentes antibióticos/antimicóticos) . Las células se hacen crecer por dos semanas después de las cuales los cultivos son teñidos con hematoxilina y se cuentan colonias por más de 50 células como CFU-F. La frecuencia de las células troncales se calcula como el número de CFU-F observadas por 100 células nucleadas colocadas en placas (por ejemplo; 15 colonias contadas en una placa iniciada con 1,000 células regenerativas nucleadas da una frecuencia de células troncales de 1.5%) . Se calcula el número de células troncales como la frecuencia de células troncales multiplicada por el número total de células CDA nucleadas obtenidas. También se expresa un alto porcentaje (~100%) de crecimiento de CFU-F a partir de células regenerativas que expresan la molécula de la superficie celular CD105, la cual es también expresada por células troncales derivadas de la médula (Barry et al., 1999). La CD50 también se expresa por células troncales derivadas del tejido adiposo (Zuk et al., 2002) . Como se usa en este documento, el término "tejido adiposo", se refiere a grasa que incluye el tejido conectivo que almacena grasa. El tejido adiposo contiene tipos celulares regeneratxvos múltiples, que incluyen CDA y células progenitoras y precursoras endoteliales . Como se usa en este documento, el término "unidad de tejido adiposo", se refiere a una cantidad discreta y medible de tejido adiposo. Una unidad de tejido adiposo puede ser medida determinando el peso y/o volumen de la unidad. Basados en los datos identificados anteriormente, una unidad de lipoaspirato procesado removida de un paciente, tiene un componente celular en el cual, al menos 0.1% del componente celular son células troncales; esto es, tiene una frecuencia de células troncales, determinado como se describe anteriormente, de al menos 0.1%. Con referencia a la descripción en este documento, una unidad de tejido adiposo puede referirse a la cantidad requerida de tejido adiposo removida de un paciente, o una cantidad que es menos que la cantidad total de tejido adiposo removido de un paciente. De este modo, una unidad de tejido adiposo puede ser combinada con otra unidad de tejido adiposo para formar una unidad de tejido adiposo que tiene un peso o volumen que es la suma de las unidades individuales . Como se usa en este documento, el término "porción" , se refiere a una cantidad de un material que es menor que uno completo. Una porción menor se refiere a una cantidad que es menor del 50%, y una porción mayor se refiere a una cantidad mayor del 50%. De este modo, una unidad de tejido adiposo que es menos que la cantidad total del tejido adiposo removido de un paciente, es una porción del tejido adiposo removido.

Como se usa en este documento, el término "lipoaspirato procesado", se refiere a un tejido adiposo que ha sido procesado para separar el componente celular activo (por ejemplo, el componente que contiene ·· regener tivo) , a partir de los adipocitos maduros y tejido conectivo. Esta fracción es referida en este documento como "células derivadas adiposas" o "CDA" . Típicamente, CDA se refiere a la pelotilla de células regenerativas obtenidas lavando y separando y concentrando las células a partir del tejido adiposo . La pelotilla se obtiene típicamente centrifugando una suspensión de células, de manera que las células se agregan en la parte inferior de una cámara centrífuga o concentrador celular. Como se usa en este documento, los términos "administrar", "introducir", "suministrar", "colocar" y "transplantar" , son usados intercambiablemente en este documento y se refieren a la colocación, tal como, por ejemplo, en cada caso por inyección, de las células regenerativas de la invención, en un sujeto por un método o ruta la cual resulta en al menos, localización parcial de las células regenerativas en un sitio deseado. Las células degenerativas pueden ser administradas por cualquier ruta apropiada, la cual resulta en el suministro a una ubicación deseada en el sujeto, en donde al menos, una porción de las células o componentes de las células permanecen viables . El periodo de viabilidad de las células después de la administración a un sujeto, puede ser tan corto como algunas horas, por ejemplo, veinticuatro horas, a unos cuantos días, tan pronto como varios días. Como se usa en este documento, el término "tratamiento", incluye reducir o aliviar al menos un efecto o síntoma adverso de una enfermedad o trastorno . Como se usa en este documento, "dosis terapéuticamente efectiva de células regenerativas" , se refiere a una cantidad de células regenerativas que son suficientes para llevar aproximadamente un efecto benéfico o clínico deseado. Dicha dosis podrá ser administrada en una o más administraciones. Sin embargo, la determinación precisa de que podría ser considerado una dosis efectiva, se puede basar en factores individuales en cada paciente, incluyendo, pero no limitado a, la edad del paciente, tamaño, tipo o extensión de la enfermedad, etapa de la enfermedad, ruta de administración de las células regenerativas, el tipo o extensión de terapia complementaria usada, progreso de los procesos de la enfermedad y tipo de tratamiento deseado (por ejemplo, tratamiento agresivo contra convencional) . Como se usa en este documento, el término "sujeto" incluye animales de sangre caliente, preferiblemente mamíferos, que incluyen humanos. En una modalidad preferida, el sujeto es un primate. En aún una modalidad más preferida, el sujeto es un humano. Como se expone previamente en este documento, células regenerativas , por ejemplo, células troncales y progenitoras, pueden ser colectadas de una amplia variedad de tejidos. El sistema de la presente invención puede ser usado para todos estos tejidos. El tejido adiposo, sin embargo, es una fuente especialmente rica de células regenerativas. Por consiguiente, el sistema de la presente invención es ilustrado en este documento usando tejido adiposo como una fuente de células regenerativas por medio del ejemplo únicamente y sin limitación. El tejido adiposo se puede obtener por cualquier método conocido para una persona experta en la técnica. Por ejemplo, el tejido adiposo puede ser removido de un paciente por liposucción (asistido por energía o jeringa) , o por lipectomía, por ejemplo, lipoplastía asistida por succión, lipoplastía asistida por ultrasonido, y lipectomía excisional o combinaciones de las mismas. El tejido adiposo es removido y colectado y puede ser procesado de conformidad con cualquiera de las modalidades de un sistema de la invención descrita en este documento. La cantidad de tejido colectado depende de numerosos factores, que incluye el índice de masa corporal y edad del donador, el tiempo disponible para colección, la biodisponibilidad de los sitios accesibles de colecta del tejido adiposo, medicaciones concomitantes y pre-existentes y condiciones (tales como terapia anticoagulante) , y el propósito clínico para el cual el tejido está siendo colectado. Por ejemplo, el porcentaje de células regenerativas de 100 mi de tejido adiposo extraído de un individuo delgado, es mayor que aquel extraído de un donador obeso (Tabla 1) . Esto probablemente refleja un efecto dilutivo del contenido incrementado de grasa en los individuos obesos. Por lo tanto, puede ser deseable, de conformidad con un aspecto de la invención, obtener cantidades más grandes de tejido a partir de donadores con sobre peso, comparadas con las cantidades que podrían ser retiradas de pacientes más delgados. Esta observación también indica que la utilidad de esta invención no está limitada a individuos con cantidades grandes de tejido adiposo.

Tabla 1. Efecto del índice de Masa Corporal en Rendimiento de Tejido -y Células Estado del índice Cantidad de tejido Rendimiento de de masa corporal obtenido (g) célula regenerativa total (xlO7) Normal 641 + 142 2.1 + 0.4 Obeso 1,225 + 173 2.4 + 0.5 Valor p 0.03 0.6 Después que el tejido adiposo es procesado, las células regenerativas resultantes están sustancialmente libres de adipocitos maduros y tejido conectivo. Por consiguiente, el sistema de la presente invención genera una pluralidad heterogénea de células regenerativas derivadas adiposas, las cuales pueden ser usadas para propósitos de investigación y/o terapéuticos. En una modalidad preferida, las células son adecuadas para colocación o re-infusión dentro del cuerpo de un paciente. En otras modalidades, las células pueden ser usadas para investigación, por ejemplo, pueden ser usadas para establecer lineas de células progenitoras o troncales, las cuales pueden sobrevivir por periodos de tiempo prolongados y ser usadas para estudios adicionales . Se hará referencia ahora en detalle a las modalidades actualmente preferidas de la invención, ejemplos de las cuales están ilustradas en los dibujos acompañantes. Si es posible, se usan los mismos o similares números de referencia en los dibujos y la descripción, para referirse a las mismas partes o similares. Se debe notar que los dibujos están en forma simplificada y no están a escala precisa. Con referencia a la descripción en este documento, para propósitos de conveniencia y claridad solamente, términos direccionales tales como, superior, inferior, izquierda, derecha, arriba, abajo, sobre, por arriba, por abajo, por detrás, atrás, enfrente, distal y próximo, son usados con respecto a los dibujos acompañantes. Tales términos direccionales no deben ser construidos para limitar el alcance de la invención de cualquier manera. Aunque la descripción en este documento de refiere a ciertas modalidades ilustradas, se entiende que estas modalidades están presentadas por medio del ejemplo y no por medio de limitación. El intento de la siguiente descripción detallada, aunque discutiendo modalidades ejemplares, está construido para cubrir todas las modificaciones, alternativas y equivalentes de las modalidades conforme pueden caer dentro del espíritu y alcance de la invención, como se define por las reivindicaciones adjuntas. La presente invención puede ser utilizada en conjunto con varios procedimientos médicos que son convencionalmente usados en la técnica. Con referencia ahora a' las Figuras, un sistema 10 de la presente invención, está comprendido de manera general, de uno o más de una cámara de colección de tejido 20, una cámara de procesamiento 30, una cámara de desechos 40, una cámara de salida 50 y una cámara de muestra 60. Las varias cámaras están acopladas en conjunto vía uno o más conductos 12, de manera tal que fluidos que contienen material biológico, pueden pasar de una cámara a otra mientras se mantiene una trayectoria cerrada, de tejido/fluido estéril. Los conductos pueden comprender cuerpos rígidos o flexibles referidos a intercambiablemente en este documento, como lúmenes y entubado, respectivamente." En ciertas modalidades, los conductos están en la forma de entubado flexible, tal como entubado de polietileno, convencionalmente usado en establecimientos clínicos, silicona u otro material conocido en la técnica. Los conductos 12 pueden variar en tamaño, dependiendo de si se desea el paso de fluido o tejido. Los conductos 12 pueden también variar en tamaño, dependiendo de la cantidad de tejido o fluido que es sometido a ciclos a través del sistema. Por ejemplo, para el paso de fluido, los conductos pueden tener un diámetro que varía desde aproximadamente 0.060 hasta aproximadamente 0.750 pulgadas (0.152 hasta aproximadamente 1.9 centímetros) y para el paso de tejido, los conductos pueden tener un diámetro que varía desde 0.312 hasta 750 pulgadas (0.792 hasta 1.9 centímetros). De manera general, el tamaño de los conductos se selecciona para balancear el volumen de conductos que pueden acomodarse y el tiempo requerido para transportar el tejido o fluidos a través de dichos conductos. En modalidades automatizadas del sistema, los parámetros mencionados anteriormente, es decir, el volumen y tiempo para transporte, debe ser idéntico de manera tal que las señales apropiadas pueden ser transmitidas al dispositivo de procesamiento del sistema. Esto permite al dispositivo, mover volúmenes exactos de líquido y tejido a partir de una cámara a otra. El entubado flexible usado, debe ser capaz de soportar presión negativa para reducir la probabilidad de colapsos. El entubado flexible usado, debe también ser capaz de soportar presión positiva, la cual es generada por ejemplo, por una bomba de desplazamiento positivo, la cual puede ser usada en el sistema. Todas las cámaras del sistema pueden estar comprendidas de uno o más puertos, por ejemplo, puertos de entrada 21 y salida 22, los cuales aceptan conexiones de entubado de succión y jeringa IV estándares. Los puertos pueden ser un puerto sellado, tal como un puerto de acceso para aguja de jeringa cerrado con un septo de caucho 51. Los puertos de entrada pueden ser acoplados a una o más cánulas (no mostradas), por medio de conductos. Por ejemplo, un puerto de entrada de tejido 21, puede estar acoplado a una cánula de liposucción de uso único integrada y el conducto puede ser un entubado flexible. Los conductos son posicionados de manera general, para proporcionar pasajes de una cámara del sistema a otra. Hacia este extremo, los conductos y puertos pueden ser acoplados a, por ejemplo, un dispositivo de succión (no mostrado) , el cual puede ser manualmente o automáticamente operado. El dispositivo de succión puede ser, por ejemplo, una bomba eléctrica o una jeringa. El dispositivo de succión debe ser capaz de proporcionar suficiente presión negativa para aspirar el tejido de un paciente. De manera general, cualquier dispositivo de succión adecuado conocido por uno de habilidades en la técnica, por ejemplo, un cirujano, puede ser usado.

Los conductos 12 pueden además, comprender uno o más sujetadores (no mostrados), para controlar el flujo de material entre varios componentes del sistema. Los sujetadores son útiles para mantener la esterilidad del sistema sellando efectivamente regiones diferentes del sistema. Alternativamente, los conductos 12 pueden comprender una o más válvulas 14 que controlan el flujo del material a través del sistema. Las válvulas 14 están identificadas como círculos abiertos en las Figuras. En modalidades preferidas, las válvulas pueden ser válvulas de presión electromecánica. En otra modalidad, las válvulas pueden ser válvulas neumáticas. En aún otras modalidades, las válvulas pueden ser válvulas hidráulicas o válvulas mecánicas. Tales válvulas son preferiblemente activadas por un sistema de control, el cual puede ser acoplado a palancas . Las palancas pueden ser manualmente manipuladas, de manera tal que las palancas son activadas. En . modalidades automatizadas, el sistema de control puede ser acoplado a las palancas, así como también a un dispositivo de procesamiento el cual puede activar las válvulas a condiciones- de activación pre-determinadas . En ciertas modalidades automatizadas, la activación de las válvulas puede ser parcialmente automatizada y parcialmente sometida a la preferencia del usuario, de manera tal que el proceso puede ser optimizado. En aún otras modalidades, ciertas válvulas pueden ser activadas manualmente y otras automáticamente a través del dispositivo de procesamiento. Las válvulas 14 pueden también ser usadas en conjunto con una o más bombas, por ejemplo, bombas peristálticas 34 ó bombas de desplazamiento positivo (no mostradas) . Los conductos 12 y/o las válvulas 14, pueden también estar comprendidas de sensores 29, por ejemplo, sensores ópticos, sensores ultrasónicos, sensores de presión u otras formas de monitores conocidos en la técnica, que son capaces de distinguir entre los varios componentes de fluidos y los niveles de fluidos que fluyen a través del sistema. En una modalidad preferida, los sensores 29 pueden ser sensores ópticos. El sistema puede también incluir una pluralidad de filtros 36. En ciertas modalidades, los filtros pueden estar dentro de una cámara del sistema 28. Diferentes cámaras dentro del sistema pueden estar comprendidas de diferentes filtros . Los filtros son efectivos para separar las células regenerativas , por ejemplo, células troncales y/o células progenitoras , de células indeseables y agentes de desagregación que pueden ser usados de conformidad con el sistema. En una modalidad, un montaje de filtro 36 incluye un dispositivo de filtración de fibra hueca. En otra modalidad, un montaje de filtro 36 incluye un dispositivo de filtración percolativo, el cual puede o no puede ser usado con un proceso de sedimentación. En una modalidad adicional, el montaje de filtro 36 comprende un dispositivo de centrifugación, el cual puede o no puede ser usado con un proceso y dispositivo de decantación. En aún otra modalidad, el sistema comprende una combinación de estos dispositivos de filtración. Las funciones de filtración de la presente invención pueden ser de dos veces, con algunos filtros removiendo algo de la concentración final, tal como colágeno, lípido libre, adipocitos libres y colagenasa residual, y con otros filtros siendo usados para concentrar el producto final. Los filtros del sistema pueden estar comprendidos de una pluralidad de poros que varían en diámetros y/o longitud desde 20 hasta 800 µp?. En una modalidad preferida, la cámara de colección 20 tiene un filtro prefijo 28 con una pluralidad de poros que varían desde 80 hasta 400 µ??. En otra modalidad preferida, la cámara de colección 20 tiene un filtro prefijo 28 con una pluralidad de 265 µt? poros. En otras modalidades, los filtros pueden ser desprendibles y/o desechables . El sistema puede también ser comprendido de uno o más dispositivos de control de temperatura (no mostrado) , que están posicionados para ajustar la temperatura del material contenido dentro de una o más cámaras del sistema. El dispositivo de control de temperatura puede ser un calentador, un enfriador o ambos, es decir, pueden ser capaces de cambiar entre un calentador y un enfriador. El dispositivo de temperatura puede ajustar la temperatura de cualquier material que pasa a través del sistema, -incluyendo el tejido, los agentes de desagregación, los agentes de resuspensión, los agentes de enjuague, los agentes de lavado o los aditivos. Por ejemplo, el calentamiento de tejido adiposo facilita la desagregación, mientras el enfriamiento de la salida de células regenerativas es deseable para mantener la viabilidad. También, si son necesarios reactivos pre-calentados para procesamiento de tejido óptimo, el papel del dispositivo de temperatura podrá ser mantener la temperatura pre-determinada . en lugar de incrementar o disminuir la temperatura. Para mantener una trayectoria cerrada, de tejido/fluido estéril, todos los puertos y válvulas pueden comprender un cierre que mantiene la configuración sellada del sistema. El cierre puede ser una membrana que es impermeable al fluido, aire u otros contaminantes o puede ser cualquier otro cierre adecuado conocido en la técnica. Además, todos los puertos del sistema pueden ser diseñados de manera tal que pueden acomodar jeringas, agujas u otros dispositivos para retirar los materiales en las cámaras sin comprometer la esterilidad del sistema. Como se expone en este documento, el tejido puede ser extraído de un paciente via cualquier método reconocido en la técnica. El tejido aspirado puede ser extraído previo a ser colocado en el sistema para procesamiento. El tejido aspirado es típicamente transferido a la cámara de colección 20 a través de conductos 12 vía un puerto de entrada sellada, tal como un puerto de acceso para aguja de jeringa cerrado con septo de caucho (no mostrado en la cámara de colección) . Alternativamente, la etapa de extracción de tejido puede ser parte del sistema. Por ejemplo, la cámara de colección 20 puede estar comprendida de una línea de vacío 11, la cual facilita la remoción del tejido usando una cánula estándar insertada en el paciente. De este modo, en esta modalidad, el sistema completo está unido al paciente. El tejido puede ser introducido en la cámara de colección 20, a través de un puerto de entrada 21 vía un conducto tal como 12a, el cual es parte de una trayectoria estéril cerrada. La cámara de colección 20 puede estar comprendida de una pluralidad de receptáculos o cilindros rígidos o flexibles o combinaciones de los mismos. Por ejemplo, la cámara de colección 20 puede estar comprendida de uno o más receptáculos rígidos de tamaños variantes. La cámara de colección 20 puede también estar comprendida de una o más bolsas flexibles. En tales sistemas, la bolsa es preferiblemente proporcionada con un soporte, tal como una estructura interna o externa, que ayuda a reducir la probabilidad de que la bolsa colapsará después de la aplicación de succión a la bolsa. La cámara de colección 20 es ajustada para mantener la cantidad requisito de salina para lavar apropiadamente y desagregar el tejido, previo a la etapa de lavado y concentración del proceso realizado en la cámara de procesamiento 30. Preferiblemente, el volumen del tejido o fluido presente en la cámara de colección 20 es fácilmente averiguable a ojo desnudo. Por ejemplo, para obtener células regenerativas de tejido adiposo, una cámara de colección adecuada, tiene la capacidad para mantener 800 mi de lipoaspirato y 1200 mi de salina. Por consiguiente, en una modalidad, la cámara de colección 20 tiene la capacidad de al menos, 2 litros. En otra modalidad, para separar y concentrar células rojas de la sangre a partir de sangre, la cámara de colección 20 tiene la capacidad de al menos, 1.5 litros. De manera general, el tamaño de la cámara de colección 20 variará dependiendo del tipo y cantidad de tejido colectado a partir del paciente. La cámara de colección 20 puede ser ajustada para mantener tan poco como aproximadamente 5 mi hasta aproximadamente 2 litros de tejido. Para volúmenes más pequeños de tejido, por ejemplo, 5 mi hasta 100 mi, el tejido puede ser recolectado en una jeringa, previo a la transferencia a la cámara de colección 20. La cámara de colección 20, puede ser construida usando cualquier material biocompatible adecuado que puede ser esterilizado. En una modalidad preferida, la cámara de colección 20 es construida de material desechable que satisface los requerimientos de biocompatibilidad para contacto intravascular como se describe en el estándar 100 10993. Por ejemplo, puede ser usado policarbonato acrílico o ABS . La trayectoria de fluido de la cámara de colección 20 está preferiblemente libre de pirogeno, es decir, adecuada para uso sanguíneo sin peligro de transmisión de enfermedades. En una modalidad, la cámara de colección 20 está construida de un material que permite al usuario visualmente determinar el volumen aproximado de tejido presente en la cámara. En otras modalidades, el volumen del tejido y/o fluido en la cámara de colección 20 es determinado por sensores automatizados 29. La cámara de colección 20 es preferiblemente diseñada de manera tal que en una modalidad automatizada, el sistema puede determinar el volumen de tejido y/o fluido dentro de la cámara con un grado razonable de exactitud. En una modalidad preferida, el sistema percibe el volumen dentro de la cámara de colección con una exactitud de más o menos quince por ciento . En una modalidad particular proporcionada por medio de ejemplo solamente, la cámara de colección 20 está en la forma de una cámara rígida, por ejemplo, una cámara construida de un policarbonato de grado médico, que contiene un filtro prefijo cónicamente áspero 28 de poliéster de grado médico, con un tamaño de malla de 265 um (véase Figura 5) . El recipiente de colección de tej ido rígido puede tener un tamaño de aproximadamente 8 pulgadas (20.32 centímetros) de altura y aproximadamente cinco pulgadas (12.7 centímetros) de diámetro; el grosor de la pared puede ser de aproximadamente 0.125 pulgadas (0.317 centímetros). El interior del cilindro puede ser accesado a través de por ejemplo, uno o más puertos para entubado de succión, uno o más puertos con entubado para conexión a través de un septo de caucho. El filtro prefijo 28 en el interior de la cámara de colección 20, es preferiblemente estructurado para retener tejido adiposo y pasar tejido no adiposo como por ejemplo, los tejidos que son removidos del paciente. Más específicamente, el filtro 28 puede permitir el paso de lípido, sangre y salina libres, mientras retiene fragmentos de tejido adiposo durante, o en otra modalidad después de la colecta inicial del tejido adiposo. En tal sentido, el filtro 28 incluye una pluralidad de poros, de ya sea el mismo o diferentes tamaños, pero que varían en tamaño desde aproximadamente 20 µ?? hasta 5 mm. En una modalidad preferida, el filtro 28 incluye una pluralidad de poros de 400 µ??. En una modalidad preferida, el filtro 28 es una malla de poliéster de grado médico de aproximadamente 200 µt? de espesor con un tamaño de poro de aproximadamente 265 µ?? y aproximadamente 47% de área abierta. Este material mantiene al tejido durante el enjuague pero permite a las células pasar a través de la malla después de la desagregación del tejido. De este modo, cuando los tejidos son aspirados del paciente, puede ser separado tejido no adiposo del tejido adiposo. La misma funcionalidad podrá lograrse con diferentes materiales, tamaño de malla, y el número y tipo de puertos. Por ejemplo, tamaños de poros de malla menores de 100 t? o tan grandes como varios miles de micrones podrían lograr el mismo propósito de permitir el paso de salina y células sanguíneas mientras retienen fragmentos y agregados de tejido adiposo. De manera similar, el mismo propósito podrá lograrse por el uso de un material plástico rígido alternativo, o por muchas otras modificaciones que podrán ser conocidas por aquellos expertos en la técnica. El sistema 10 puede también estar comprendido de una o más fuentes de solución 22. La fuente de solución puede comprender una fuente de solución de lavado 23, y una fuente de agente de desagregación de tejido 24, tal como colagenasa. La cámara de colección 20 está comprendida de trayectorias de fluido cerrado que permiten a las soluciones o agentes de lavado y desagregado, ser agregadas al tejido de una manera aséptica . Los recipientes para la solución de lavado 23 y los agentes de desagregación 24 puede ser cualquier recipiente adecuado que puede mantener sus contenidos en una manera estéril, por ejemplo, una bolsa que se puede colapsar, tal como una bolsa IV, usada en establecimientos clínicos. Estos recipientes pueden tener conductos 12, tal como el conducto 12e, acoplados a la cámara de colección 20, de manera que la solución de lavado y el agente de desagregación, pueden ser suministrados al interior de la cámara de colección 20. La solución de lavado y el agente de desagregación pueden ser suministrados al interior de la cámara de colección 20 a través de cualquier manera reconocida en la técnica, incluyendo presión por gravedad simple aplicada al exterior de los recipientes para salina 23 y/o agentes de desagregación 24, o por colocación de una bomba de desplazamiento positivo en los conductos, por ejemplo, conducto 12d en la Figura 4. En modalidades automatizadas, el dispositivo de procesamiento del sistema calcula varios parámetros, por ejemplo, el volumen de salina y tiempo o número de ciclos requeridos para lavado, asi como también la concentración o cantidad de agente de desagregación y el tiempo requerido para desagregación basada en información inicialmente introducida por el usuario (por ejemplo, volumen de tejido a ser procesado) . Alternativamente, las cantidades, tiempos, etc., pueden ser manualmente manipulados por el usuario . El tejido y/o fluido dentro de la cámara de colección, debe ser mantenido a una temperatura que varía desde 30°C hasta 40°C. En una modalidad preferida, la temperatura de la suspensión dentro de la cámara de colección se mantiene a 37°C. En ciertas modalidades, si el procedimiento quirúrgico o aplicación terapéutica necesita ser retardada, el tejido seleccionado puede ser almacenado en la cámara de colección para uso posterior. El tejido puede ser almacenado a o aproximadamente la temperatura ambiente a o aproximadamente 4°C por hasta 96 horas. La solución de lavado puede ser cualquier solución conocida por uno de habilidades en la técnica, que incluye salina o cualquier otra solución de electrolito amortiguada o no amortiguada. Los tipos de tejido a ser procesados dictarán los tipos o combinaciones de soluciones de lavado usadas . Típicamente, la solución de lavado, tal como salina, entra a la cámara de colección 20 después que el tejido adiposo ha sido removido del paciente y colocado en la cámara de colección. Sin embargo, la solución de lavado puede ser suministrada a la cámara de colección 20, antes de que el tejido adiposo se extraiga, o pueda ser suministrado a la cámara de colección 20 concurrentemente con el tejido adiposo. En la cámara de colección 20, la solución de lavado y el tejido adiposo extraído, se pueden mezclar por cualquier medio que incluye los métodos descritos abajo. Por ejemplo, el tejido puede ser lavado por agitación (lo cual maximiza la viabilidad celular y minimiza la cantidad de lípido libre liberado) . En una modalidad, el tejido es agitado rotando la cámara de colección completa 20 a través de un arco de grados variantes (por ejemplo, a través de un arco de aproximadamente 45° hasta aproximadamente 90°) a velocidades variantes, por ejemplo, aproximadamente 30 rpm. En otra modalidad, el tejido es agitado rotando la cámara de colección completa 20, en donde la cámara de colección 20 está comprendida de una o más paletas o protrusiones rígidamente unidas a una superficie interior de la cámara de colección, a través de un arco de grados variantes (por ejemplo, a través de un arco de aproximadamente 45 grados hasta aproximadamente 90 grados) , a velocidades variantes, por ejemplo, aproximadamente 30 rpm. La rotación de la cámara de colección 20 descrita anteriormente, puede ser acompañada por un mecanismo de accionamiento adjunto a o en proximidad con la cámara de colección 20. El mecanismo de accionamiento puede ser una cinta simple o engrane u otro mecanismo de accionamiento conocido en la técnica. La velocidad de la rotación puede ser, por ejemplo, 30 revoluciones por minuto. De manera general, se han encontrado velocidades superiores por generar volúmenes más grandes de lipidos libres y no pueden ser óptimas . En otras modalidades, el tejido es agitado colocando un eje que puede rotar 25 dentro de la cámara de colección 20, en donde el eje rotable está comprendido de una o más paletas 25a o protrusiones rígidamente unidas al eje rotable 25 el cual pasa a través de la mezcla conforme el eje está siendo rotado. En ciertas modalidades, el eje rotable 25 con paletas 25a rígidamente unidas, puede estar descansando en la parte inferior de la cámara de colección 20. Esto puede ser realizado, por ejemplo, colocando el dispositivo similar a paletas en un campo magnético centrifugante (por ejemplo, agitador magnético) . Alternativamente, la agitación del tejido puede ser realizada usando un agitador simple conocido en la técnica, es decir, un dispositivo implementando sacudimiento arriba y abajo sin rotación. El tejido puede también ser lavado usando cualquier otro medio reconocido en la técnica que incluye, oscilación, agitación, inversión, etc . Después de una cantidad deseada de ciclos de lavado, se puede suministrar un agente de desagregación de tejido a la cámara de colección 20, para separar las células regenerativas de los componentes de tejido adiposo restantes. El agente de desagregación puede ser cualquier agente de desagregación conocido por uno de habilidades en la técnica. Los agentes de desagregación que pueden usados incluyen proteasas neutrales, colagenasas, tripsina, lipasa, hialuronidasa, desoxironucleasa, elementos de -la flamilla de mezclas de enzima Blendzima, por ejemplo, Liberasa Hl, pepsina, energía ultrasónica u otra física, láseres, microondas, otros dispositivos mecánicos y/o combinaciones de los mismos. Un agente de desagregación preferido de la invención es la colagenasa. Los agentes de desagregación pueden ser agregados con otras soluciones. Por ejemplo, salina, tal como salina suministrada de una fuente de salina 23, como se describe anteriormente, puede ser agregada al tejido adiposo junto con o inmediatamente seguido por la adición de colagenasa. En una modalidad, el tejido adiposo lavado es mezclado con una solución de enzima que contiene colagenasa en o aproximadamente 37°C por aproximadamente 20-60 minutos. En otras modalidades, puede ser agregada una concentración superior de colagenasa o agente similar, para disminuir el tiempo de digestión. El tejido adiposo lavado y el agente de desagregación de tejido, pueden entonces ser agitados en manera similares a los métodos de agitación descritos anteriormente, hasta que el tejido adiposo lavado es desagregado. Por ejemplo, el tejido adiposo lavado y el agente de desagregación te tejido, pueden ser agitados rotando la cámara de colección completa a través de un arco de aproximadamente 90°, teniendo un eje el cual contiene una o más paletas las cuales pasan a través de la solución conforme el eje es rotado, y/o rotando la cámara de colección completa la cual contiene paletas o protrusiones en la superficie interior de la cámara de colección. Dependiendo del propósito para el cual serán usadas las células derivadas adiposos, el tejido adiposo puede ser ya sea parcialmente o completamente desagregado. Por ejemplo, en modalidades en las cuales las células derivadas adiposas son combinadas con una unidad de tejido adiposo, puede ser deseable desagregar parcialmente el tejido adiposo colectado, para remover una porción del tejido adiposo parcialmente desagregado, y después continuar desagregando la porción restante del tejido adiposo que permanece en la cámara de colección. Alternativamente, una porción de tejido adiposo lavado puede ser removida y dejada a un lado en el recipiente de muestra, previo a cualquier digestión. En otra modalidad, el tejido adiposo colectado es parcialmente desagregado para concentrar células antes de ser reintroducido nuevamente en el paciente. En una modalidad, el tejido adiposo es mezclado con un agente de desagregación de tejido por un periodo de tiempo generalmente menos de aproximadamente 20 minutos. Una porción del tejido parcialmente desagregado puede entonces ser removida de la cámara de colección, y el tejido restante parcialmente desagregado puede ser además desagregado mezclando el tejido adiposo con un agente de desagregación de tejido por otros 40 minutos. Cuando las células derivadas adiposas son usadas como una población esencialmente pura de células regenerativas , el tejido adiposo puede ser completamente desagregado. Después de la digestión, la solución de agente de desagregación y tejido, se dejan reposar por un periodo de tiempo suficiente para permitir a los componentes flotantes y no flotantes de la solución, diferenciarse dentro de la cámara de colección. Típicamente, el tiempo varia desde aproximadamente 15 segundos hasta varios minutos, pero otros tiempos pueden ser implementados en modalidades modificadas. La capa flotante está comprendida de las células regenerativas que requieren lavado y concentración adicional . La capa no flotante comprende sangre, colágeno, lípidos y otros componentes celulares no regenerativos del tejido. La capa no flotante debe ser removida a la cámara de desechos . Por consiguiente, la cámara de colección 20 está comprendida preferiblemente, de un puerto de salida 22 en el punto más bajo de la cámara, de manera tal que la sangre y otros componentes no flotantes del tejido, pueden ser drenados a uno o más recipientes de desecho 40, vía uno o más conductos 12. La cámara de colección 20 está generalmente en (o puede ser colocada en) una posición recta, de manera tal que los puertos de salida 22 están localizados en la parte inferior de la cámara de colección. El drenado puede ser pasivo o activo. Por ejemplo, los componentes no flotantes descritos anteriormente, podrán ser drenados usando gravedad, aplicando presión positiva o negativa, por el uso de bombas 34 ó por el uso de ventilación 3 . En modalidades automatizadas, el dispositivo de procesamiento puede señalar ciertas válvulas y/o bombas para drenar la capa no flotante de la cámara de colección 20. Las modalidades automatizadas pueden también estar comprendidas de sensores 29, los cuales pueden detectar cuando la interfaz entre los líquidos flotantes y no flotantes se ha elevado. Las modalidades automatizadas pueden también estar comprendidas de un sensor 29, por ejemplo, un sensor óptico, el cual puede ser capaz de detectar un cambio en la refracción de luz del efluente el cual está fluyendo en el conducto que se deja fuera de la cámara de colección. El cambio apropiado en la refracción de luz puede señalar la presencia de la capa flotante en los conductos salientes lo cual indica que la capa no flotante ha sido drenada. El sensor 29 puede entonces señalar el dispositivo de procesamiento para proceder con la siguiente etapa . En ciertas modalidades, sin embargo, el tejido puede ser procesado para recuperar el componente celular no regenerativo del tejido. Por ejemplo, en ciertas aplicaciones terapéuticas o de investigación, se pueden desear componentes de colágeno, proteínas, matriz o estromales, lípidos, adipocitos u otros componentes del tejido. En tales modalidades, es la capa flotante la* que comprende células regenerativas que deben ser removidas como se describe anteriormente a la cámara de desecho. La capa no flotante es entonces retenida en el sistema para procesamiento adicional como sea necesario. Una vez que la capa no flotante se remueve, la capa flotante que comprende las células regenerativas, puede ser lavada una o más veces para remover contaminantes residuales . Por consiguiente, la cámara de colección 20 típicamente incluye uno o más puertos 21 para permitir a la solución de lavado, ser suministrada al interior de la cámara, y uno o más puertos 22 para permitir al desecho y otros materiales, ser dirigidos fuera de la cámara de colección 20. Por ejemplo, la cámara de colección puede incluir uno o más puertos de entrada sellada como se describe en este documento. La cámara de colección 20 puede también incluir una o más cubiertas (no mostradas) , tales como una cubierta superior y una cubierta inferior, para asegurar además que el sistema permanezca estéril mientras la solución de lavado es suministrada en la cámara de colección en una pared lateral de la cámara de colección. El proceso de lavado con solución de agua fresca puede ser repetido hasta que el contenido residual de contaminantes no flotantes en la solución, alcanza un nivel predeterminado. En otras palabras, el material restante en la cámara de colección 20, el cual comprende el material flotante de la mezcla descrita anteriormente, que incluye fragmentos de tejido adiposo, puede ser lavado una o más veces adicionales hasta que la cantidad de material indeseado se reduce a un nivel pre-determinado deseado. Un método para determinar el punto final del lavado, es medir la cantidad de células rojas de la sangre en la solución del tejido. Esto se puede realizar midiendo la luz absorbida en la longitud de onda 540 mm. En una modalidad preferida, un intervalo entre aproximadamente 0.546 y aproximadamente 0.842 es considerado aceptable . Durante el lavado y/o desagregación, pueden ser agregados uno o más aditivos a los varios recipientes como sean necesarios, para mejorar los resultados. Algunos ejemplos de aditivos incluyen agentes que optimizan el lavado y la desagregación, aditivos que mejoran la viabilidad de la población de células activas durante el procesamiento, agentes anti-microbianos (por ejemplo, antibióticos) , aditivos que lisan adipositos y/o células rojas de la sangre, o aditivos que enriquecen las poblaciones celulares de interés (por adherencia diferencial a porciones de fase sólida o de otro modo, promueven la reducción sustancial o enriquecimiento de poblaciones celulares) . Otros aditivos posibles incluyen aquellos que promueven la recuperación y viabilidad de células regenerativas (por ejemplo, inhibidores de caspasa) , o los cuales reducen la probabilidad de una reacción adversa en infusión o emplazamiento (por ejemplo, inhibidores de la reagregación de células o tej ido conectivo) . Después que ha transcurrido un tiempo suficiente de sedimentación, la fracción no flotante de la mezcla resultante de fragmentos de tejido adiposo lavado y agentes de desagregación de tejido, contendrá células regenerativas , por ejemplo, células troncales y otras células progenitoras derivadas adiposas. Como se discute en este documento, la fracción no flotante que contiene las células regenerativas será transferida a la cámara de procesamiento 30, en donde las células regenerativas de interés, tales como células troncales derivadas adiposas, serán separadas de otras células y materiales presentes en la fracción no flotante de la mezcla. Esta fracción no flotante es referida en este documento como la composición celular regenerativa y comprende tipos diferentes múltiples de células, que incluyen células troncales, células progenitoras, células precursoras endoteliales, adipocitos y otras células regenerativas descritas en este documento. La composición celular regenerativa puede también contener uno o más contaminantes, tales como colágeno y otras proteínas de tejido conectivo y fragmentos de las mismas, las cuales estuvieron presentes en los fragmentos de tejido adiposo, o colagenasa residual a partir del proceso de desagregación de tejido. La cámara de procesamiento 30 de la invención, está preferiblemente posicionada dentro del sistema, de manera tal que la composición celular regenerativa se mueve de la cámara de colección 20 a la cámara de procesamiento 30 por medio de entubado 12, válvulas 14 y bomba 34, de una manera estéril. La cámara de procesamiento es también ajustada para acomodar mezclas de tejido/fluido que varían desde 10 mL hasta 1.2 L. En una modalidad preferida, la cámara de procesamiento es ajustada para acomodar 800 mL. En ciertas modalidades, la composición celular regenerativa completa de la cámara de colección 20, está 'dirigida a la cámara de procesamiento 30. Sin embargo, en otras modalidades, una porción de la composición celular regenerativa se dirige a la cámara de procesamiento 30, y otra porción se dirige a una región diferente del sistema, por ejemplo, la cámara de muestra 60 a ser recombinada con células procesadas en la cámara de procesamiento 30 en un tiempo posterior. La cámara de procesamiento 30 puede ser construida usando cualquier material biocompatible adecuado que puede ser esterilizado. En una modalidad preferida, la cámara de procesamiento 30 está construida de material desechable que satisface los requerimientos de biocompatibilidad para contacto intravascular, como se describe en el estándar ISO 10993. Por ejemplo, se pueden usar policarbonato acrílico, ABS, acetato de etilen vinilo o copolímeros de estireno-butadieno (SBC) . En otra modalidad, la trayectoria de fluido de la cámara de procesamiento desechable está libre de pirógeno. La cámara de procesamiento puede estar en la forma de una bolsa de plástico, tal como aquella usada convencionalmente en procesamiento de sangre en bancos de sangre; o en otras modalidades, puede ser estructuralmente rígida (Figura 6) . En una modalidad, la cámara de procesamiento 30 puede ser similar a la cámara de procesamiento descrita en la Solicitud Estadounidense comúnmente propietaria No. 10/316,127, presentada el 7 de Diciembre de 2001 y Solicitud Estadounidense No. 10/325,728, presentada el 20 de Diciembre de 2002, contenidos de las cuales están en su totalidad con ello, incorporadas por referencia . La cámara de procesamiento 30 puede ser construida en cualquier manera adecuada para separar y concentrar células, que incluyen filtración y centrifugación y/o combinaciones de la misma. En ciertas modalidades, la composición celular regenerativa a partir de la cámara de colección 20, es introducida en la cámara de procesamiento 30 en donde la composición puede ser filtrada para separar y/o concentrar una población celular regenerativa particular. La filtración celular es un método para separar componentes particulares y células de otros componentes diferentes o tipos de células. Por ejemplo, la composición celular regenerativa de la invención comprende múltiples tipos diferentes de células, que incluyen células troncales, células progenitoras y adipocitos, así como también uno o más cont minantes, tales como colágeno, los cuales están presentes en los fragmentos de tejido adiposo, o colagenasa residual a partir del proceso de desagregación de tejido. Los filtros 36 presentes en la cámara de procesamiento 30, pueden permitir la separación y concentración de una subpoblación particular de células regenerativas , por ejemplo, células troncales o células progenitoras endoteliales, etc. Algunas variables las cuales están asociadas con la filtración de células a partir de un líquido incluyen, pero no se limitan a, tamaño de poro del medio de filtro, geométrica (forma) del poro, área de superficie del filtro, dirección de flujo de la solución a ser filtrada, presión de la trans-membrana, dilución de la población celular particular, tamaño y forma particulada, asi como también tamaño celular y viabilidad celular. De conformidad con la descripción de este documento, las células particulares que se desean separar o filtrar, son típicamente células troncales derivadas adiposas. Sin embargo, en ciertas modalidades, las células particulares pueden incluir células progenitoras derivadas adiposas, tales como células precursoras endoteliales, solas o en combinación con las células troncales. La composición celular regenerativa puede ser dirigida a través de un montaje de filtro, tal como un montaje de filtro 3S. En ciertas modalidades, el montaje de filtro 36 comprende una pluralidad de filtros los cuales están estructurados para realizar diferentes funciones y separar la composición celular regenerativa en distintas partes o componentes. Por ejemplo, uno de los litros puede ser configurado para separar el colágeno de la composición celular regenerativa, uno de los filtros puede ser configurado para separar adipocitos y/o componentes lípidos a partir de la composición celular regenerativa, y uno de los filtros puede ser configurado para separar enzimas residuales, tales como el agente de desagregación de tejido, a partir de la composición celular regenerativa. En ciertas modalidades, uno de los filtros es capaz de realizar dos funciones, tales como separación de colágeno y el agente de desagregación de tejido a partir de la composición. La pluralidad de filtros son típicamente colocadas de manera serial, al menos una porción de los filtros puede ser arreglada en paralelo también. Un arreglo serial de los filtros del montaje de filtro 36, se muestra en la Figura 2. Un arreglo paralelo de los filtros del montaje de filtro 36 se muestra en la Figura 3. En una modalidad, el montaje de filtro 36 comprende ün primer filtro, un segundo filtro, y un tercer filtro. El primer filtro está configurado para remover partículas de colágeno presentes en la composición celular regenerativa. Estas partículas de colágeno son típicamente de aproximadamente 0.1 micrones de diámetro y pueden ser de hasta 20 micrones de longitud. Las partículas de colágeno pueden ser de tamaños variantes dependiendo de la digestión.

También pueden ser' fibrilos, significando que tienen torceduras y vueltas . Cualquiera de los filtros descritos en este documento, puede ser elaborado de poliétersulfona, poliéster, PTFE, polipropileno, PVDF, o posiblemente celulosa. Existen dos posibilidades para filtrar el colágeno. Una es intentando remover las primeras partículas más grandes, dejando las células ir a través, lo cual podría requerir por ejemplo, un filtro probablemente en el intervalo de 10 micrones. El segundo método es usar un filtro de malla más pequeña, tal como 4.5 micrones, con el intento que el colágeno podría ser bien digerido, para atrapar las células, y dejar pasar el colágeno a través de este. Esto podría requerir un medio para flotar las células nuevamente del filtro. Existe también una posibilidad de implementar un filtro el cual podría atacar y mantener las fibras de colágeno . El segundo filtro está configurado para remover adipocitos inmaduros libres, los cuales no son flotantes en la composición celular regenerativa. En una modalidad, el segundo filtro puede ser construido de poliéster y tener un tamaño de poro entre aproximadamente 30 y aproximadamente 50 micrones con un tamaño de poro preferido siendo aproximadamente 40 micrones. Aunque se refiere como un segundo filtro, la colocación de tal dispositivo puede estar en primera, preferentemente segunda posición, para facilitar una remoción inicial de las células y partículas más grandes. El tercer filtro está configurado para remover la colagenasa no usada o residual u otro agente de desagregación de tejido presente en la composición. En una implementación preferida, la colagenasa puede degenerarse con el tiempo. En una modalidad, el tercer filtro comprende una pluralidad de poros que tienen un diámetro, o longitud de menos de 1 µ??. En ciertas modalidades, los poros pueden tener diámetros que son más pequeños de 1 µt?. En otras modalidades, los poros tienen diámetros entre 10 kD y 5 micrones. En ciertas modalidades, el tercer filtro puede estar configurado para concentrar la población de células regenerativas en un volumen pequeño de salina u otra solución de lavado, como se discute en este documento. Como se prefiere actualmente, solamente el filtro final es la unidad de fibra hueca. No es necesario para cualquiera de los filtros, ser del tipo de fibra hueca. La unidad de fibra hueca es usada para el filtro final en una implementación preferida, debido a que es la más eficiente en la remoción de colagenasa con el efecto perjudicial más pequeño a las células regenerativas . En una modalidad en donde el dispositivo es una colección de los géneros mismos, los tres filtros están en alojamientos separados. Es factible tener el primero y segundo filtro combinados en un alojamiento si se usa una unidad de fibra hueca para el tercer filtro. Si el filtro final no es una fibra hueca establecida, entonces los tres filtros pueden estar contenidos en un alojamiento. Los filtros del montaje de filtro 36 pueden ser localizados en la cámara de procesamiento 30 ó pueden ser proporcionados como componentes separados de la cámara de procesamiento 30. Además, los filtros del montaje de filtro 36 pueden ser proporcionados en cámaras de procesamiento múltiples o en una forma en línea. En ciertas modalidades, los conductos o entubado, pueden actuar como una cámara de procesamiento o cámaras. La cámara de procesamiento puede ser reducida en tamaño, de manera tal que llega a ser el interior del volumen de los conductos, el cual conecta los filtros. Este tipo de sistema funcionará correctamente si el volumen de la solución de tejido está ajustado apropiadamente. De este modo, los conductos pueden actuar como la cámara de procesamiento, conteniendo el fluido con las células conforme están corriendo a través de los filtros . Se debe tomar cuidado para minimizar el volumen de los conductos de manera que la célula/tejido no son innecesariamente perdidos en el proceso .de cebado y de corrida del sistema. Con referencia a la modalidad descrita anteriormente, la composición celular regenerativa que contiene las células lavadas y colágeno residual, adipocitos y/o agente de desagregación de tejido no digerido, puede ser dirigida a través del primer filtro para remover al menos, una porción de y preferiblemente sustancialmente todas las partículas de colágeno a partir de la composición, para que algunas, y preferiblemente ninguna de las partículas de colágeno estén presentes en la solución filtrada. La composición de células regenerativas filtradas que contienen los adipocitos y/o agente de desagregación de tejido no diferido, pueden entonces ser digeridas a través del segundo filtro para remover al menos, una porción de, y preferiblemente sustancialmente los adipocitos libres de la composición celular regenerativa filtrada. Subsecuentemente, la composición celular regenerativa dos veces filtrada, que contiene el agente de desagregación de tejido no digerido, puede ser dirigida a través del tercer filtro, tal como un dispositivo de filtración de fibra hueca, como se discute en este documento, para remover o reducir el agente de desagregación de tejido no digerido a partir de la composición celular regenerativa. La composición celular regenerativa filtrada tres veces (es decir, la composición que permanece después de ser pasada a través del primero, segundo y tercer filtro) , puede entonces ser dirigida a salidas múltiples, las cuales pueden incluir una porción de la cámara de procesamiento 30, que comprende salidas múltiples. Estas salidas pueden servir para mantener la presión necesaria, así como también proporcionar conexiones vía conductos a otros recipientes, los cuales pueden incluir la cámara de colección 20, la cámara de salida 50, y/o el recipiente de desecho 40. En una modalidad, un filtro del montaje de filtro 36 comprende un elemento de filtración de fibra hueca. 0, en otras palabras, el filtro comprende una colección de tubos huecos formados con el medio de filtro. Ejemplos del medio de filtro los cuales pueden ser usados con el sistema descrito 10, incluyen polisulfona, poliétersulfona o un material de áster mezclado y similares . Estas fibras huecas o tubos huecos del medio de filtro, pueden ser contenidos en un cartucho cilindrico del montaje de filtro 36. Los tubos o filtros individuales del medio de filtro, típicamente tienen un diámetro interior el cual varía desde aproximadamente 0.1 mm hasta aproximadamente 1 mm, con un valor preferido siendo aproximadamente 0.5 mm. El diámetro y longitud de un cartucho cilindrico adecuado, determinará el número de tubos individuales de medio de filtro, el cual puede ser colocado dentro del cartucho. Un ejemplo de un cartucho de filtro de fibra hueca es el Filtro de Flujo Tangencial FiberFlo®, catálogo #M-C-050-K (Minntech, Minneapolis, Minnesota) . Tamaños de poros del medio de filtro pueden variar entre aproximadamente 10 kiloDaltons y aproximadamente 5 micrones con un tamaño de poro preferido siendo de aproximadamente 0.5 micrones . En el filtro de fibra hueca, cada tubo hueco tiene un cuerpo con un primer extremo, un segundo extremo, y un lúmen localizado en el cuerpo y que se extiende entre el primero y segundo extremo. El cuerpo de cada tubo hueco incluye una pluralidad de poros . Los poros están orientados de manera general en el cuerpo, de manera que una composición celular regenerativa es filtrada fluyendo a través del lúmen del cuerpo, y los productos a ser filtrados tangencialmente, pasan a través de los poros como se muestra en la Figura 12A. En otras palabras, las partículas más pequeñas en el líquido pasan tangencialmente a través de los poros con relación al flujo del fluido a través del lúmen del cuerpo. La composición con las células regenerativas pasa a través del lúmen de cada tubo hueco cuando la composición está siendo filtrada. Preferiblemente, el flujo de la composición es tangencial a los poros del cuerpo de cada tubo hueco . Usando un flujo tangencial de fluido, la eficiencia de filtración de las células troncales puede ser mejorada con relación a otras técnicas de filtración. Por ejemplo, de conformidad con algunas técnicas de filtración, los poros del medio de filtro son colocados en una manera tal que el filtro es orientado perpendicular al flujo del fluido de manera que el medio de filtro bloquea la trayectoria del fluido a ser filtrado, como se ilustra en la Figura 12B. En este tipo de filtración, las partículas las cuales están siendo filtradas de la composición celular regenerativa, por ejemplo, las células troncales, tienden a acumularse en un lado del filtro y bloquear el flujo del fluido a través de los poros. Este bloqueo puede reducir la eficiencia del filtro. Además, las células son constantemente comprimidas por la presión del flujo del fluido, asi como también el peso de las células que se acumula en el lado corriente arriba del filtro. Esto puede conducir a lisis incrementada de células troncales. De este modo, en tales técnicas de filtración, en donde el flujo del fluido es paralelo a la orientación de los poros en el filtro, tanto células grandes como partículas pequeñas, pueden ser indeseablemente dirigidas contra el medio del filtro conforme el fluido pasa a través de los poros. Consecuentemente, productos más grandes en el líquido tales como células, pueden bloquear los poros, con ellos, disminuyendo el efecto de filtración e incrementando la incidencia de ruptura o lesión celular. Por el contrario, en la configuración de fibra hueca del presente sistema 10, el fluido el cual está siendo filtrado, fluye dentro del lúmen al tubo hueco. La porción del fluido la cual tiene la capacidad para pasar a través de los poros del cuerpo del filtro lo hace con la ayuda de la presión positiva del fluido en el interior del cuerpo, así como también una presión negativa la cual se aplica al exterior del cuerpo. En esta modalidad, las células típicamente no son sometidas a la presión del flujo del fluido o al peso de otras células, y por lo tanto, las fuerzas de corte en las células troncales se reducen. De este modo, la eficiencia y efectividad de la filtración, puede ser mejorada por la reducción en la velocidad de coagulación, y la reducción en la lisis celular regenerativa. Debido al tamaño de las moléculas de proteínas indeseadas y salina, durante la filtración, estas moléculas y otros componentes pequeños pasan a través de los poros de los cuerpos de los tubos huecos fuera de los tubos huecos y se dirigen al recipiente de desecho 40. En una modalidad, la filtración es mejorada generando un vacío en el exterior del medio de filtro de tubo hueco. Debido al tamaño de las células regenerativas , por ejemplo, células troncales o células progenitoras, estas células típicamente no pueden pasar a través de los poros del cuerpo y por lo tanto, permanecen dentro del filtro de tubo hueco (por ejemplo, en los lúmenes de los tubos) y se dirigen nuevamente a la cámara de procesamiento 30 vía un conducto entre el filtro y la cámara de procesamiento, o a la cámara de salida 50. En una modalidad específica, el filtro de fibra hueca tiene aproximadamente un tamaño de poro de 0.05 micrones, y contiene aproximadamente un área de superficie de 550 cm2 del medio de filtro. Un tubo de medio individual típicamente tiene un diámetro de aproximadamente 0.5 mm. Procesando 130 mi de la composición celular regenerativa, aproximadamente 120 mi de salina adicional pueden ser agregadas a la composición. El tiempo de filtrado o procesamiento puede ser de aproximadamente 8 minutos. La diferencial de presiones en cualquier lado del cuerpo del tubo de fibra hueco (por ejemplo, la presión dentro del lúmen del cuerpo, y fuera del cuerpo) , es considerada la presión de la trans-membrana . La presión de la trans-membrana puede variar desde aproximadamente 1 mmHg hasta aproximadamente 500 mmHg con una presión preferida siendo aproximadamente de 200 mmHg. El promedio de recuperación de células nucleadas y viabilidad usando filtración de fibras huecas, puede ser aproximadamente 80% de células viables. La cantidad de colagenasa la cual es típicamente removida en tal sistema, iguala a un tercio de reducción log. Por ejemplo, si la concentración inicial de colagenasa en la composición celular regenerativa en la cual es trasferida de la cámara de colección a la cámara de procesamiento es 0.078 U/ml, la concentración de colagenasa de la composición celular regenerativa podrá ser 0.00078 U/ml. La colagenasa es removida en el filtro de fibra hueca, y el filtro de fibra hueca corresponde con el tercer filtro discutido anteriormente . Las cámaras de procesamiento, que ilustran uno o más métodos de filtración descritos anteriormente, se muestran en las Figuras, particularmente Figuras 1-3. Con referencia a las Figuras 1-3, entre la cámara de procesamiento 30 y la cámara de filtración del montaje de filtro 36, se puede proporcionar una bomba, tal como una bomba 34. Además, sensores de ventilación y presión, tal como sensor de- ventilación 32 y presión 39, pueden ser proporcionados en la linea con la cámara de procesamiento 30 y el montaje de filtro 36. También se pueden proporcionar ajustes para la cámara de salida 50. Estos componentes opcionales (por ejemplo, la bomba 34, la ventilación 32, el sensor de presión 39 y los ajustes para la cámara de salida 50) , pueden ser proporcionados entre la cámara de procesamiento 30 y el montaje de filtro 36, de manera que el líquido contenido en la cámara de procesamiento 30 puede fluir a uno o más de estos componentes opcionales, antes de fluir a través del montaje de filtro 36. Por ejemplo, el líquido puede fluir a través de la bomba 34 antes de que pase al montaje de filtro 36. O, el líquido puede pasar a través del sensor de presión 39 antes de pasar al montaje de filtro para obtener una presión líquida pre-filtración en el sistema. En ciertas situaciones, uno o más de estos componentes puede también ser proporcionado como un elemento de la cámara de procesamiento 30, tal como la ventilación 32 como se ilustra en la Figura 6. En la modalidad ilustrada, el sensor de presión 39 está en línea para determinar la presión de la composición celular regenerativa, la cual es generada por la bomba 34 conforme entra a la cámara de filtración del montaje de filtro 36. Esta construcción puede facilitar el monitoreo de la presión de trans-membrana a través de la membrana del filtro. Se pueden agregar salina adicional u otro amortiguador y solución de lavado, a la composición celular regenerativa para asistir en la remoción de las proteínas no deseadas conforme la composición está siendo filtrada a través del montaje de filtro 36. Este lavado repetido puede ser realizado múltiples veces para mejorar la pureza de células regenerativas . En ciertas modalidades, la salina puede ser agregada en cualquier etapa como parezca necesaria para mejorar la filtración. En una modalidad especxfica, la cual se proporciona por medio del ejemplo y sin limitación, las proteínas no deseadas y salina u otra solución de lavado, se remueven de la siguiente manera. La composición con las células regenerativas, así como también colágeno y partículas de tejido conectivo o fragmentos, adipocitos y colagenasa, son sometidos a ciclos a través de una serie de filtros hasta que se alcanza un volumen mínimo. El volumen mínimo es una función del volumen total mantenido del sistema y algunas constantes predeterminadas . El mantenimiento del volumen es él volumen del líquido el cual está contenido en el entubado y conductos si todas las cámaras de procesamiento están vacías. En una modalidad, el volumen mínimo es 15 mi. Cuando se alcanza el volumen mínimo, un volumen predeterminado de solución de lavado se introduce en el sistema para ser mezclado con la composición celular regenerativa. Esta mezcla de solución de lavado y composición celular regenerativa, es entonces sometida a ciclos a través de los filtros hasta que se alcanza nuevamente el volumen mínimo. Este ciclo puede ser repetido múltiples veces para mejorar la pureza de las células regenerativas, o en otras palabras, para incrementar la proporción de células regenerativas en la composición a los otros materiales en la composición. Véase Figuras 10 y 11. Después que se ha determinado que la composición celular regenerativa ha sido limpiada de proteínas indeseadas y concentrada suficientemente (en modalidades ejemplares, se pueden usar concentraciones mínimas con un intervalo de aproximadamente 1 x 105 hasta aproximadamente 1 x 107 células/ml y, en una modalidad preferida, la concentración mínima puede ser aproximadamente 1 x 107 células/ml) , una cámara de salida 50, tal como una bolsa de salida, puede ser conectada a un puerto de salida de la cámara de procesamiento 30 y/o el montaje de filtro 36, dependiendo de la modalidad específica. Una ventilación, tal como la ventilación 32, puede entonces ser abierta para facilitar la salida de las células regenerativas concentradas . En una implementación, esta determinación de cuando una concentración mínima ha sido alcanzada, se hace empíricamente después que se han corrido y programado experimentos en los controles electrónicos del dispositivo. La terminación puede ser una salida dentro del proceso que es deseado proporcionar, es decir, cuando se desean células troncales/progenitoras, o varían de la concentración celular. Basados en datos científicos, una cantidad predefinida de tejido adiposo necesita obtenerse y colocarse en placas en el sistema, para lograr la salida deseada. Con la ventilación 32 abierta, una bomba, tal como la bomba 34, puede funcionar para transferir las células regenerativas concentradas en la bolsa de salida. En una modalidad, la bolsa de salida 50 es similar a una bolsa de sangre vacía, la cual tiene un tubo con un ajuste en un extremo. En una forma estéril, el ajuste en la bolsa de salida se puede unir al puerto de salida, y las células regenerativas concentradas pueden ser transferidas a la bolsa de salida. Como se ilustra en las Figuras 1-3, la bomba de vacío 26 se puede proporcionar en el sistema 10 para cambiar la presión en el sistema, entre otras cosas. Por ejemplo, la bomba a vacío 26 puede ser acoplada a la cámara de colección 20 vía un conducto, tal como un conducto 12b, para cuasar un decremento en la presión dentro de la cámara de colección 20. La bomba a vacío 26 puede también ser acoplada a la cámara de procesamiento 30 por medio de un conducto, tal como un conducto 12g. Con respecto a la operación de la bomba de vacio 26 en conjunto con la bomba 34, dos bombas o fuentes de vacío separadas pueden ser implementadas , o una sola puede ser implementada usando válvulas las cu-ales dirigen el vacio empujado a los diferentes conductos que lo necesitan a puntos específicos en el proceso. Además, la bomba a vacío 26 puede ser acoplada al recipiente de desecho 40 vía un conducto, tal como un conducto 12f. Con referencia a las Figuras 10 y 11, la presión generada por la bomba a vacío 26 puede ser usada para dirigir el flujo de fluidos, que incluyen las células regenerativas , a través de los conductos 12. Esta presión puede ser suministrada en múltiples direcciones, por ejemplo, controlando automáticamente o manualmente la posición de una o más válvulas 14 en el sistema 10. El sistema 10 puede ser elaborado para funcionar apropiadamente con el uso de presión positiva o a través del uso de presión negativa, o combinaciones de la misma. Por ejemplo, las células regenerativas pueden ser empujadas a través del primero y segundo filtros descritos anteriormente en un recipiente de lados lisos, el cual está conectado al tercer filtro. El recipiente de lados lisos puede estar en línea (serial) , conectado al principio del tercer filtro. La cámara de salida final puede ser un recipiente de lados lisos, el cual está en él otro lado (por ejemplo, lado corriente abajo) del tercer filtro. En esta modalidad, la presión es usada para mover las células regenerativas de un recipiente de lados lisos a un segundo recipiente de lados lisos a través del filtro. En otra modalidad del sistema 10, la filtración de las células troncales y/o células progenitoras derivadas adiposas, puede ser realizada usando una combinación de filtración percolativa y sedimentación. Por ejemplo, tal sistema usa salina que se pasa a través de una composición de células regenerativas de tejido (por ejemplo, la composición contiene las células troncales y/o células progenitoras derivadas adiposas) y después a través de un filtro. Algunas de las variables las cuales están asociadas con la filtración percolativa de células a partir de una composición celular regenerativa incluyen, pero no se limitan a, tamaño de poro del medio de filtro, geometría o forma del poro, área de superficie del filtro, dirección de flujo de la composición celular regenerativa a ser filtrada, velocidad de flujo de la salina infusionada, presión de la transmembrana, dilución de la población celular, tamaño y viabilidad celular. En una modalidad el sistema 10, la cámara de procesamiento 30 usa un montaje de filtro 36, el cual implementa filtración percolativa y sedimentación para separar y concentrar las células regenerativas. Por medio del ejemplo, y no por medio de limitación, la cámara de procesamiento 30 está definida como un cuerpo generalmente cilindrico que tiene una pared lateral 30a, una superficie superior 30b y una superficie inferior 30c, como se muestra en la Figura 6. Una ventilación estéril 32 se proporciona en la superficie superior 30b. En la modalidad de la Figura 6, la cámara de procesamiento 30 es ilustrada por incluir un montaje de filtro 36, el cual incluye dos filtros, tal como filtro de poro grande 36a, y filtro de poro pequeño 36b. Los tamaños de poros de los filtros 36a y 36b, típicamente están en un intervalo entre aproximadamente 0.05 micrones y aproximadamente 10 micrones. El filtro de poro grande 36a puede comprender poros con un diámetro de aproximadamente 5 µt?, y el filtro de poro pequeño 36b puede comprender poros con un diámetro de aproximadamente 1-3 um. En una modalidad, los filtros tienen un área de superficie de aproximadamente 785 mm2. Los filtros 36a y 36b dividen un interior de la cámara de procesamiento 30 para incluir una primera cámara 37a, una segunda cámara 37b, y una tercera cámara 37c. Como se muestra en la Figura 6, la primera cámara 37a está localizada entre la segunda cámara 37b y la tercera cámara 37c-. Además, la primera cámara 37a es mostrada por ser la región de la cámara de procesamiento 30 que tiene un puerto de entrada 31a y un puerto de salida 31b. La cámara de procesamiento ilustrada 30 incluye una pluralidad de puertos que proporcionan trayectorias de comunicación de un exterior de la cámara de procesamiento 30 al interior de la cámara de procesamiento 30, tal como puertos 31a, 31b y 31c. Los puertos 31a, 31b y 31c son ilustrados por estar dispuestos en la pared lateral 30a de un cuerpo de la cámara de procesamiento 30. Sin embargo, los puertos 31a, 31b y 31c, podrán ser posicionados en otras regiones también. El puerto 31a es ilustrado como un puerto de entrada de muestra, el cual está construido para ser acoplado a un conducto, de manera que una composición que contiene células regenerativas , puede ser pasada en el interior de la cámara de procesamiento 30. El puerto 31b es ilustrado como un puerto de salida construido para estar acoplado a un conducto de manera que las células concentradas y separadas pueden ser removidas del interior de la cámara de procesamiento 30. El puerto 31c es ilustrado como un puerto de entrada construido para estar acoplado a un conducto para suministro de una solución de lavado fresca, tal como salina en el interior de la cámara de procesamiento 30. En uso, las .células regenerativas pueden ser introducidas en la cámara central 37a vía el puerto de entrada 31a. La salina u otro amortiguador son introducidos en la cámara inferior 37b a través de un puerto de entrada 31c. La salina puede ser dirigida a través de la composición celular regenerativa en la cámara 37a a una velocidad de aproximadamente 10 ml/min. La velocidad de flujo de la salina es tal que contrarresta la fuerza de gravedad. El flujo de la salina da a la célula en la cámara, la capacidad para separarse, basada en la densidad de las células. Típicamente, conforme la salina es forzada a través de la composición, las células más grandes en la composición se sedimentarán en la parte inferior de la cámara central 37a, y las células más pequeñas y proteínas, serán llevadas separadas a través del segundo filtro 36b en la cámara superior 37c. Esta filtración es realizada ajustando la velocidad de flujo de la salina, de manera tal que las células más grandes son enrolladas en su lugar, lo cual permite a las partículas más pequeñas, ser liberadas y transportadas con la salina. La ventilación estéril 32 está incluida en la cámara 30 para asegurar que el gradiente de presión correcto se mantenga en las tres cámaras dentro de la unidad de procesamiento. La cámara superior 37c puede comprender un medio absorbente 33. El propósito del medio absorbente es atrapar las proteínas indeseadas en la solución, para asegurar que no crucen el medio de filtro nuevamente en la solución de procesamiento si, por ejemplo, la velocidad de flujo de la salina disminuye. Un medio absorbente puede ser un tipo de material de filtro que es absorbente, o ataca materiales o componentes a ser filtrados. Un puerto de descarga se puede agregar arriba del filtro superior para ayudar a retirar el desecho. Otra modalidad de esta puede ser aplicar un vacío suave de la parte superior para ayudar a empujar el desecho. El medio absorbente puede ser implementado cuando, como en la modalidad ilustrada, las velocidades de flujo son relativamente pequeñas. El exceso de salina y proteínas son entonces transportadas lejos a un recipiente de desecho. Cuando las células más grandes (por ejemplo, las células troncales derivadas adiposas y/o células progenitoras) , han sido suficientemente separadas de las células y proteínas más pequeñas, la composición que contiene las células separadas puede ser concentrada como se discute en este documento. La composición puede ser además concentrada después que ha sido removida de la cámara 37a a través del puerto de salida 31b, o mientras está en la cámara 37a. En una modalidad, la concentración de células en la composición es incrementada en la siguiente manera. Después que las células han sido suficientemente separadas de los filtros, tales como los filtros 36a y 36b, pueden ser movidos entre sí . Este movimiento tiene el efecto de reducir el volumen entre los dos filtros (por ejemplo, el volumen de la cámara 37a) . Un elemento de vibración puede también ser proporcionado en conjunto con la cámara de procesamiento 30 para facilitar la concentración de las células en la composición. En una modalidad, el elemento de vibración puede ser acoplado al filtro 36b (por ejemplo, el filtro de poro pequeño) . La vibración puede reducir una incidencia de células que llegan a ser atrapadas en los filtros . La reducción en el volumen de la composición permite al exceso de salina ser removida como desecho y a las células ser concentradas en un volumen más pequeño . En otra modalidad, la concentración de células regenerativas se realiza en la siguiente manera. Después que las células han sido suficientemente separadas, la composición de células regenerativas puede ser transferida a otra cámara (no mostrada) , la cual usa gravedad para filtrar el exceso de salina. En una modalidad preferida, la sedimentación puede ocurrir al mismo tiempo como la percolación. Esta sedimentación puede ser realizada introduciendo la composición en la parte superior de un filtro, el cual tiene un tamaño de poro que varía desde aproximadamente 10 kD hasta aproximadamente 2 micrones . En una modalidad, un filtro adecuado tiene un tamaño de poro de aproximadamente 2 micrones. En una modalidad, un filtro adecuado tiene un tamaño de poro de aproximadamente 1 micrón. La fuerza de gravedad permitirá a la salina y partículas más pequeñas, ser pasadas a través del filtro mientras se previene a las células en la composición de fluir a través del filtro. Después que la concentración deseada de células se ha obtenido, y después que las partículas más pequeñas filtradas han sido removidas por debajo del filtro, la composición celular regenerativa puede ser agitada para remover las células del filtro y, subsecuentemente, las células regenerativas concentradas pueden ser transferidas a la bolsa de salida. Las partículas más pequeñas pueden ser retiradas como desecho a través de una salida. En una modalidad particular, la composición celular regenerativa de la cámara de colección 20, es transportada a la cámara de procesamiento 30 en donde la composición puede ser centrifugada para separar y concentrar células regenerativas. Los principios de centrifugación son bien conocidos en la técnica y no serán repetidos en este documento con el interés de brevedad. Dispositivos, componentes y parámetros de centrifugación reconocidos en la técnica, estándares, son utilizados en este documento. Una cámara de procesamiento ejemplar para usarse como parte de un dispositivo centrífugo, se muestra en las Figuras 7 y 8. Típicamente, un dispositivo centrífugo causa que una cámara centrífuga (tal como una mostrada en la figura 7) , gire alrededor de un eje, para con ello incrementar la fuerza en las células en la solución para ser mayor que la gravedad. Los materiales más densos o más pesados en la solución, típicamente se sedimentan en un extremo de la cámara centrífuga, es decir, una cámara de salida 50 de la figura 7, para formar una pelotilla celular regenerativa. La pelotilla puede entonces ser re-suspendida para obtener una solución con una concentración deseada de células y/o un volumen deseado de células y medio. La cámara de procesamiento mostrada en la Figura 7 es construida para separar y concentrar células usando fuerzas tanto centrífugas como gravitacionales. Específicamente, durante la centrifugación, fuerzas centrífugas dirigen los componentes más densos de la composición celular regenerativa, por ejemplo, las células degenerativas, hacia los extremos más externos de la cámara centrífuga. Como la cámara centrífuga disminuye y eventualmente se detiene, las fuerzas gravitacionales ayudan a las células regenerativas a permanecer en los extremos más externos de la cámara centrífuga y formar una pelotilla celular. Por consiguiente, los componentes no deseados de la composición celular regenerativa, es decir, el desecho, pueden ser removidos sin alterar la pelotilla celular. En aún otra modalidad de la invención, la cámara de procesamiento puede estar comprendida de un concentrador celular en la forma de un filtro de membrana giratoria. En una modalidad adicional del proceso de centrifugación, la decantación centrífuga puede también ser aplicada. En esta modalidad, las células pueden ser separadas basadas en la velocidad de sedimentación individual, de manera tal que la fuerza direccional (por ejemplo, externa) aplicada por centrif gación, causa que las células y solutos sedimenten a diferentes velocidades. En la decantación, la velocidad de sedimentación de la población celular objetiva es opuesta por una velocidad de flujo opuesta (por ejemplo, interna) , aplicada bombeando la solución en la dirección opuesta a la fuerza centrifuga. La contra corriente es ajustada de manera que las células y partículas dentro de la solución son separadas. La decantación ha sido aplicada en muchos casos de separación celular (Inoue, Carsten et al. 1981; Hayner, Braun et al. 1984; Noga 1999) y los principios y prácticas usados para optimizar el flujo y parámetros centrífugos, se pueden aplicar en este documento, en vista de la presente descripción por uno de habilidades en la técnica. La Figura 9 ilustra principios asociados con una implementación de decantación de conformidad con la presente invención. La modalidad de decantación puede ser similar a una implementación de centrifugación en la extensión que se aplica una fuerza a la solución usando un rotor giratorio. Algunas de las variables las cuales están asociadas con la separación por decantación incluida actualmente, incluyen pero no se limitan a, el tamaño y forma de la cámara giratoria, el diámetro del rotor, la velocidad del rotor, el diámetro del entubado a contra corriente, la velocidad de flujo contracorriente, así como también el tamaño y densidad de las partículas y células las cuales son removidas de la solución. Como en la centrifugación, las células regenerativas pueden ser separadas basadas en densidades celulares individuales.

En una modalidad, la composición celular regenerativa, por ejemplo, la solución que contiene las células regenerativas y la colagenasa, es introducida en una cámara de un rotor giratorio, como se muestra en la Figura 9.1. Después que la solución se agrega a la cámara adiciona, se agrega salina a la cámara a una velocidad de flujo predeterminada. La velocidad de flujo de la salina puede ser determinada como una función de la velocidad del rotor, el diámetro de la célula y la constante de cámara la cual ha sido establecida empíricamente. La velocidad de flujo será controlada por ejemplo, con un dispositivo similar a una bomba IV. Un propósito de la salina adicional es proporcionar una condición dentro de la cámara de rotor, en donde partículas más grandes se moverán a un lado de la cámara y las partículas más pequeñas se moverán al otro, como se ilustra en la Figura 9.2. El flujo se ajusta de manera que, en esta aplicación, las partículas más pequeñas saldrán de la cámara y se moverán a un recipiente de desecho, como se muestra en la Figura 9.3. Este movimiento resulta en la solución en la cámara del rotor que tienen una población sustancialmente homogénea de células, tales como células troncales, Después que se ha determinado que las células troncales han sido separadas del resto de los géneros en solución (con proteínas indeseadas y lípidos libres que han sido removidos de la cámara) , la contracorriente se detiene.

Las células dentro de la cámara entonces formarán una pelotilla concentrada en las paredes externas de la cámara. La contracorriente es invertida y la pelotilla celular es transferida a la bolsa de salida. Como se expone previamente en este documento, la cámara de procesamiento 30 o la cámara de salida 50 puede incluir uno o más puertos, por ejemplo, puertos 51 6 52. Uno o más de estos puertos pueden ser diseñados para transportar las células regenerativas obtenidas usando cualquier combinación de métodos descritos anteriormente, o una porción de la misma, vía conductos a otros dispositivos quirúrgicos, dispositivos de cultivo celular, dispositivos de marinación celular, dispositivos de terapia de gen o dispositivos de purificación. Estos puertos pueden también ser diseñados para transportar las células regenerativas vía conductos a cámaras adicionales o recipientes dentro del sistema o como parte de otro sistema, para los mismos propósitos descritos anteriormente . Los puertos y conductos pueden también ser usados para agregar uno o más aditivos, por ejemplo, factores de crecimiento, fluidos de re-suspensión, reactivos de cultivo celular, reactivos de expansión celular, reactivos de preservación celular o reactivos de modificación celular que incluyen agentes que transfieren genes a las células . Los puertos y conductos pueden también ser usados para transportar las células regenerativas a otras células objetivo tales como materiales de implante (por ejemplo, fragmentos óseos o andamiaje) , asi como también otros implantes y dispositivos quirúrgicos. El procesamiento adicional de las células puede también ser iniciado reconfigurando las interconexiones de las series desechables del sistema existente, reprogramación del dispositivo de procesamiento del sistema existente, proporcionando recipientes y/o cámaras diferentes o adicionales para el sistema existente, transportando las células a uno o más sistemas o dispositivos adicionales y/o cualquier combinación de los mismos. Por ejemplo, el sistema puede ser reconfigurado por cualquiera de los medios descritos anteriormente, de manera tal que las células regenerativas obtenidas usando el sistema, pueden ser sometidas a uno o más de lo siguiente: expansión celular (de uno o más tipos celulares regenerativos) y mantenimiento celular (que incluye enjuague de lámina celular y cambio de medio) ; sub-cultivo; sembrado celular; transfección temporal (que incluye sembrado de células transfectadas a partir de suministro de volumen) ; colecta (que incluye colecta enzimática, no enzimática y colecta por raspado mecánico) ; medición de viabilidad celular; colocación en placas de células (por ejemplo, placas microtituladoras, que incluyen células escogidas de cavidades individuales por expansión, expansión de células en cavidades frescas) : selección de alto rendimiento; aplicaciones de terapia de célula; aplicaciones de terapia de gen; aplicaciones de diseño por ingeniería de tejidos; aplicaciones de proteínas terapéuticas; aplicaciones de vacunas virales; colecta de células regenerativas o sobrenadante para bancos o selecciones, medición del crecimiento celular, lisis, inoculación, infección o inducción; generación de líneas celulares (que incluyen células de hibridoma) ; cultivo de células para estudios de permeabilidad; células para AR i y estudios de resistencia viral, células para estudios de animales transgénicos y agénicos; estudios para purificación de afinidad; aplicaciones de biología estructural ; desarrollo de ensayos y aplicaciones de diseño por ingeniería de proteína. Por ejemplo, si la expansión de una población celular regenerativa se requiere para una aplicación particular, podría ser usado un procedimiento que usa condiciones de cultivo para expandir preferencialmente la población mientras otras poblaciones son ya sea mantenidas (y con ello reducidas por dilución con las células seleccionadas en " crecimiento) , o perdidas debido a la ausencia de condiciones de crecimiento requeridas . Sekiya et al . , ha descrito condiciones las cuales podrían ser empleadas en este sentido para células troncales derivadas de médula ósea (Sekiya et al., 2002). Este procedimiento (con o sin adherencia diferencial al plástico de cultivo de tejido) , podría ser aplicado a una modalidad adicional de esta invención. En esta modalidad, la pelotilla celular regenerativa final es removida de la cámara de salida y colocada en un segundo sistema proporcionando el componente de cultivo celular. Este podría estar en la forma de una incubadora de cultivo de tej ido en laboratorio o un dispositivo estilo Bioreactor, tal como aquel descrito por Tsao et al., Patente Estadounidense No. 6,0001, 642, o por Armstrong et al., Patente Estadounidense No. 6,238,908. En una modalidad alternativa, la expansión celular o componente de cultivo celular, podrá ser agregada al sistema existente, por ejemplo, en la cámara de salida, permitiendo la adherencia de término corto y/o cultivo celular de las poblaciones celulares derivadas adiposas. Esta modalidad alterna podrá permitir la integración del componente de cultivo celular y/o expansión celular al sistema y elimina la necesidad de remover células de este sistema y colocarlas con otro . Durante el procesamiento, pueden ser agregados uno o más aditivos o proporcionados con las varias cámaras o recipientes como sean necesarios, para mejorar los resultados . Estos aditivos pueden también ser proporcionados como parte de otro sistema asociado con el sistema existente o separados del sistema existente. Por ejemplo, en ciertas modalidades, pueden ser agregados aditivos o proporcionados sin la necesidad de remover las células regenerativas del sistema. En otras modalidades, los aditivos son agregados o proporcionados conectando un nuevo recipiente o cámara que comprende los aditivos en un puerto no usado del sistema en una manera estéril. En aún otras modalidades, los aditivos son agregados o proporcionados en un segundo sistema o dispositivo que no está conectado al sistema de la presente invención. Algunos ejemplos de aditivos incluyen agentes capaces de' optimizar el lavado y agregación, aditivos que mejoran la viabilidad de la población celular activa durante le procesamiento, agentes anti-microbianos (por ejemplo, antibióticos) , aditivos que someten a lisis a adipocitos y/o células rojas de la sangre, o aditivos que enricen a poblaciones celulares de interés (por adherencia diferencial a porciones de fase sólida o para promover de otro modo, la reducción sustancial o enriquecimiento de las poblaciones celulares) como se describe en este documento. Por ejemplo, para obtener una población celular regenerativa homogénea, cualquier método adecuado para separar y concentrar el tipo celular regenerativo puede ser empleado, tal como el uso de anticuerpos específicos de la célula, que reconocen y enlazan antxgenos presentes en, por ejemplo, células troncales o células progenitoras, por ejemplo, células precursoras endoteliales . Estas incluyen tanto selección positiva (selección de células objetivo) , selección negativa (remoción selectiva de células indeseadas) , o combinaciones de las mismas. Marcadores intracelulares tales como enzimas, pueden también ser usados en la selección usando moléculas las cuales son fluorescentes cuando actúan después por enzimas específicas . Además, un material de fase sólida con propiedades adhesivas seleccionadas para permitir adherencia diferencial y/o elución de una población particular de células regenerativas dentro de la pelotilla celular final, podrá ser insertado en la cámara de salida del sistema. Una modalidad alterna de este procedimiento de adherencia diferenciar podrá incluir uso de anticuerpos y/o combinaciones de anticuerpos que reconocen moléculas de la superficie diferencialmente expresadas en células regenerativas objetivo y células indeseada. La selección en base a la expresión de marcadores de la superficie de células específicas (o combinaciones de las mismas) , es otra técnica comúnmente aplicada en la cual los anticuerpos son unidos (directamente o indirectamente) a una estructura de soporte de fase sólida (Geiselhart et al., 1996; Formanek et al., 1998; Graepler et al., 1998; Kobari et al., 2001; Mohr et al . , 2001) . En otra modalidad, la pelotilla celular podrá ser resuspendida, en capas sobre (o bajo) un material fluido formado en un gradiente de densidad continuo o discontinuo y colocado en una centrífuga para separación de poblaciones celulares en base de la densidad celular. En una modalidad celular, se pueden también emplear procedimientos de flujo continuo tales como aféresis (Smith, 1997) , y decantación (con o sin contracorriente) (Lasch et al., 2000) (Ito y Shinomiya, 2001) . Otros ejemplos de aditivos pueden incluir componentes estructurales o biológicos adicionales, tales como factores de diferenciación celular, promotores de crecimiento, agentes inmunosupresivos , dispositivos médicos, o cualquier combinación de los mismos, como se discute en este documento. Por ejemplo, se pueden agregar otras células, tejidos, fragmentos de tejidos, factores de crecimiento tales como VEGF y otros factores de crecimiento angiogénico o angiogénicos conocidos, compuestos biológicamente activos o inertes, andamiajes resorbables, u otros aditivos propuestos para mejorar el suministro, eficacia, tolerabilidad o función de la población de células regenerativas . La población celular regenerativa puede también ser modificada por inserción del ADN o por colocación en un sistema de cultivo celular (como se describe en este documento o conocido en la técnica) , en tal forma para cambiar, mejorar o suplementar la función de las células regenerativas para derivación de un propósito estructural o terapéutico. Por ejemplo, las técnicas para transferencia del gen para células troncales son bien conocidas por personas de habilidad ordinaria en la técnica, como se describe en (Morizono et al., 2003; Mosca et al., 2000) y pueden incluir, técnicas de transfección viral, y más específicamente, técnicas de transferencia de gen de virus adeno-asociados, como se describe en (Walther and Stein, 2000) y (Athanasopoulos et al., 2000). Técnicas de base no viral pueden también ser realizadas como se describe en (Muramatsu et al., 1998) . Un ge que codifica uno o más factores de diferenciación celular, por ejemplo, un (os) factor (es) de crecimiento (s) o una(s) citosina(s), podrán también ser agregados. Ejemplos de varios agentes de diferenciación celular se describen en (Gimble et al., 1995; Lennon et al., 1995; Majumdar et al., 1998; Caplan and Goldberg, 1999; Ohgushi and Caplan, 1999; Pittenger et al., 1999; Caplan and Bruder, 2001; Fukuda, 2001; Worster et al., 2001; Zuk et al., 2001). Genes que codifican agentes o factores anti-apoptóticos , podrán también ser usados. La adición del gen (o combinación de genes) , podría ser por cualquier tecnología conocida en la técnica que incluye pero no se limita a transducción adenoviral, "disparos de genes", "transducción mediada por liposomas y retrovirus o transducción mediada por lentivirus, plásmido, virus adenoasociados . Estas células regenerativas podrán entonces ser implantadas junto con un material portador que porta un vehículo de suministro de gen capaz de liberar y/o presentar genes a las células con el tiempo, de manera tal que la transducción puede continuar o ser iniciada in situ. Cuando la células y/o tejidos que contienen las células son administrados (por ejemplo, inyectados) en un paciente distinto del paciente de quién se obtuvieron las células y/o tejidos, uno o más agentes inmunosupresivos pueden ser administrados al paciente que recibe las células y/o tejido para reducir, y preferiblemente prevenir el rechazo del transplante. Como se usa en este documento, el término "fármaco o agente inmunosupresivo" , está propuesto para incluir agentes farmacéuticos los cuales inhiben o interfieren con la función inmune normal. Ejemplos de agentes inmunosupresivos adecuados con los métodos descritos en este documento incluyen, agentes que inhiben las trayectorias de coestimulación de células T/células B, tales como agentes que interfieren con el acoplamiento de células T y células B via las trayectorias CTLA4 y B7, como se describe en la Publicación de Patente Estadounidense No. 20020182211. Un agente inmunosupresivo preferido es la ciclosporina A. Otros ejemplos incluyen mofetil miofenilato, rapamicina, y globulina anti-timocito . En una modalidad, el fármaco inmunosupresivo es administrado con al menos otro agente terapéutico. El fármaco inmunosupresivo es administrado en una formulación la cual es compatible con la ruta de administración y es administrado a un sujeto a una dosificación suficiente para lograr el efecto terapéutico deseado. En otra modalidad, el fármaco inmunosupresivo es administrado temporalmente por un tiempo suficiente para inducir tolerancia a las células regenerativas de la invención. En estas modalidades, las células regenerativas pueden ser contactadas, combinadas, mezcladas o agregadas a los aditivos a través de cualquier manera reconocida en la técnica, que incluyen dispositivos tales como los dispositivos de agitación y métodos asociados descritos en este documento. Por ejemplo, pueden ser usados oscilación, inversión, compresión pulsada o rodillos de movimiento. En otro aspecto, la población de células podrá ser colocada en el recipiente y rodeada por una cubierta de plástico resorbable u otros materiales y componentes seleccionados tales como aquellos manufacturados por MacroPore Biosurgery, Inc. (véase por ejemplo, Patentes Estadounidenses Nos. 6,269,716; 5,919,234; 6,673,362; 6,635,064; 6,653,146; 6,391,059; 6,6343,531; 6,280,473). En todas las modalidades mencionadas anteriormente, al menos una porción de las células regenerativas concentradas y separadas puede ser criopreservada, como se describe en la Solicitud de Patente Estadounidense No. 10/242,094, titulada PRESERVACIÓN DE NUEVAS CÉLULAS EMBRIÓNICAS A PARTIR DE TEJIDOS NO HEMATOPOYETICOS, presentada el 12 de septiembre de 2002, la cual reivindica el beneficio de la Solicitud de Patente Provisional Estadounidense No. 60/322,070, presentada el 14 de septiembre de 2001, la cual es comúnmente asignada y los contenidos de la cual es su totalidad, están expresamente incorporados en este documento por referencia. Al término del procesamiento, las células regenerativas pueden ser manualmente recuperadas de la cámara de salida. Las células pueden ser cargadas en un dispositivo de suministro, tal como una jeringa, para colocación en el recipiente por ya sea, técnica subcutánea, intramuscular o cualquier otra que permite el suministro de las células al sitio objetivo dentro del paciente. En otras palabras, la célula puede ser colocada en el paciente por cualquiera de los medios conocidos para personas de habilidad ordinaria en la técnica. Modalidades preferidas incluyen colocación por aguja o catéter, y modalidades modificadas incluyen colocación por implantación quirúrgica directa. En otras modalidades, las células pueden ser automáticamente transportadas a una cámara de salida, la cual puede estar en la forma de un recipiente, jeringa o catéter, etc., la cual puede ser usada para colocar las células en el paciente. El recipiente puede también ser usado para almacenar las células para uso tardío o para criopreservacion. Todos los métodos de recuperación se realizan en una manera estéril. En la modalidad de implantación quirúrgica, las células podrán ser aplicadas en asociación con aditivos tales como una matriz o andamiaje preformados como se describe en este documento. En modalidades preferidas de la invención (por ejemplo, la modalidad mostrada en la Figura 4), el sistema es automatizado. En otra modalidad, el sistema tiene componentes tanto automatizados como manuales. El sistema puede estar comprendido de uno o más componentes desechables conectados a o montados en un componente o módulo de hardware reutilizable . Los sistemas automatizados de la invención proporcionan pantallas de selección (Figura 16) , que proponen operación apropiada del sistema. Los sistemas automatizados pueden también proporcionar una pantalla que proporciona estado del procedimiento y/o instrucciones etapa por etapa para el establecimiento apropiado de los componentes desechables del sistema. La pantalla puede también indicar problemas o fallas en el sistema si ocurren, y proporcionar guía de "localización de fallas" si es apropiado. En una modalidad, la pantalla es una pantalla de interfaz de usuario que permite al usuario parámetros de entrada en el sistema a través de por ejemplo, una pantalla de toque. Los sistemas parciales y completamente automatizados pueden incluir un dispositivo de procesamiento (por ejemplo, microprocesador o computadora personal), y programas de software asociados que proporcionan el control lógico para que el sistema opere y automatice una o más etapas del proceso, basadas en la entrada del usuario. En ciertas modalidades, uno o más aspectos del sistema pueden ser programables por el usuario vía software residente en el dispositivo de procesamiento. El dispositivo de procesamiento puede tener uno o más programas de software pre-programados en la Memoria Solo de Lectura (ROM) . Por ejemplo, el dispositivo de procesamiento puede tener software pre-programado adecuado para procesamiento de sangre, otro programa para procesamiento de tejido adiposo para obtener pequeños volúmenes de células regenerativas y otro programa para procesamiento de tejido adiposo para obtener grandes volúmenes de células regenerativas. El dispositivo de procesamiento puede también tener software pre-programado el cual proporciona al usuario con parámetros apropiados para optimizar el proceso basado en la entrada del usuario de información relevante, tal como la cantidad de células regenerativas requeridas, el tipo de tejido a ser procesado, el tipo de manipulación post-procesamiento requerida, el tipo de aplicación terapéutica, etc. El software puede también permitir la automatización de etapas tales como controlar el ingreso y egreso de fluidos y tejidos junto con trayectorias de entubado particular controlando bombas y válvulas del sistema; controlar la secuencia apropiada y/o dirección de activación; detectar bloqueos con sensores de presión-mecanismos de mezclado, medición de la cantidad de tejido y/o fluido a ser movidos junto a una trayectoria particular usando mecanismos volumétricos; mantener temperaturas de los varios componentes usando los dispositivos de control de calor; e integrar los procesos de separación y concentración con mecanismos de sincronización y software. El dispositivo de procesamiento puede también controlar velocidades centrífugas basadas en el tipo de tejido a ser procesado y/o la población celular o subpoblación a ser colectada, y los tipos de procedimientos a ser realizados (por ejemplo, mejoramiento de tejido usando tejido adiposo aumentado con células regenerativas o procesamiento de células para aplicaciones de reparación ósea usando injertos óseos revestidos con células regenerativas) . El dispositivo de procesamiento también puede incluir puertos seriales o paralelos u otros medios de comunicación con otras computadoras o redes. Por consiguiente, el dispositivo de procesamiento puede ser una unidad de permanencia sola o estar asociado con uno o más dispositivos adicionales para los métodos de procesamiento adicionales descritos en este documento . El software puede permitir la colección automatizada de "datos de corridas" , que incluyen, por ejemplo, el número de lotes de componentes desechables. mediciones de temperatura y volumen, volumen de tejido y parámetros de número de células, dosis de enzima aplicada, tiempo de incubación, identidad de operador, fecha y tiempo, identidad del paciente, etc. En una modalidad preferida del dispositivo, un carácter de sistema de reconocimiento, tal como un sistema lector de código de barras, podrá ser integrado para permitir entrada de datos de estas variables (por ejemplo, número de lote de serie desechable y fecha de expiración, número de lote y fecha de expiración de la Colagenasa, identificadores de paciente/muestra, etc.), en el dispositivo de procesamiento como parte de la documentación de procesamiento. Esto podría reducir la oportunidad para errores en la entrada de datos . Tal sistema lector de código de barras podrá ser fácilmente incorporado en el dispositivo de procesamiento usando un puerto USB u otra interfaz y sistema conocido en la técnica. De esta forma, el dispositivo podría proporcionar control integrado de la entrada de datos y documentación del proceso. Un reporte impreso de estos parámetros podría ser parte de los parámetros definidos por el usuario de una operación programada del sistema. Naturalmente, esto podría requerir integración de un componente de impresión (hardware y accionador) o accionador de impresión en el software más un conector de salida de interfaz para una impresora (por ejemplo, un puerto USB) en el hardware del dispositivo.

En ciertas modalidades, el sistema es un sistema completamente automatizado. Por ejemplo, el usuario puede inicialmente , seleccionar la cantidad de tejido a ser procesado, uniendo el sistema al paciente y el sistema puede automáticamente, aspirar el tejido requerido y separar y concentrar las células regenerativas en una secuencia ininterrumpida sin entrada adicional del usuario. El usuario puede también ingresar la cantidad de células regenerativas requeridas y permitir al sistema, aspirar la cantidad requisito de tejido y procesar el tejido. Un sistema completamente automatizado también incluye un sistema el cual es capaz de ser reconfigurado, basado en un número de (por ejemplo, dos o más) parámetros de entrada de usuario, por ejemplo, número de ciclos de lavado, velocidad de centrifugación, etc. El sistema puede también ser corrido en modo semi-automático durante el cual, el sistema va a través de ciertas etapas sin intervención del usuario, pero requiere intervención del usuario antes de que puedan ocurrir ciertos procesos. En otras modalidades, el sistema es un sistema único integrado que exhibe instrucciones para guiar al usuario a realizar operaciones predeterminadas a tiempos predeterminados. Por ejemplo, el dispositivo de procesamiento puede avisar al usuario a través de las etapas necesarias para inserción apropiada de entubado, cámaras y otros componentes del sistema. Por consiguiente, el usuario puede asegurar que la secuencia apropiada de operaciones está siendo realizada. Tal sistema puede adicionalmente, requerir confirmación de cada etapa operacional por el usuario, para prevenir la inactivación inadvertida o terminación de etapas en el proceso. En una modalidad adicional, el sistema puede iniciar pruebas automatizadas para confirmar la inserción correcta del entubado, cámaras, ausencia de bloqueos, etc. En aún otra modalidad, el sistema de la presente invención es capaz de ser programado para realizar procesos de concentración y separación múltiples, a través del control automatizado de flujo de tejido a través del sistema. Esta característica puede ser importante, por ejemplo, durante la cirugía en un paciente en donde el tejido que podría de otro modo estar perdido, es colectado en el sistema y las células regenerativas del tejido son separadas y concentradas y regresadas al paciente. Como se expone anteriormente, componentes del sistema pueden ser desechables (referidos en este documento como "serie (s) desechable (s) " ) , de manera tal que proporciones del sistema pueden ser desechadas después de un uso único. Esta implementación puede ayudar a asegurar que cualquier superficie la cual entra en contacto con el tejido del paciente, será desechada apropiadamente después de ser usada. Una serie desechable ejemplar es ilustrada en la Figura 13. En una modalidad preferida, los componentes desechables del sistema son pre-esterilizados y empaquetados de manera que son usables "fuera del anaquel" que son fácilmente usados y fácilmente cargados y que eliminan la necesidad de muchas conexiones de entubado y complejos de rutina de conexiones de entubados . Tales componentes desechables son relativamente baratos de manufacturar y por lo tanto, no crean un costo sustancial debido a su desecho. En una modalidad, el sistema desechable (referido intercambiablemente como "serie (s) desechable (s) ") , comprende, consiste esencialmente de, o consiste de, la cámara de colección 20, la cámara de procesamiento 30, la cámara de desecho 40, la cámara de salida 50, el montaje de filtro 36, la bolsa de muestra 60 y los conductos asociados 12 o entubado. En modalidades preferidas de las series desechables del sistema,' la cámara de colección 20 y la cámara de procesamiento 30 están conectadas por medio de conductos 12 que están alojados en una estructura rígida. La red de sello de rotación (Figuras 7 y 8) de una cámara de procesamiento 30, puede también estar alojada en la misma estructura rígida. En otra modalidad preferida, las varias cámaras y recipientes de la serie desechable, están comprendidos de las interfaces necesarias que son capaces de comunicar con el dispositivo de procesamiento del sistema tal como las bombas, válvulas, sensores y otros dispositivos que automatizan el sistema, son apropiadamente activadas o desactivadas como se necesario sin intervención de usuario. La interfaz también reduce el tiempo y experiencia requerida para establecer el sistema y también reduce errores indicando como establecer apropiadamente el sistema y alertar al usuario en el caso de un establecimiento erróneo. La mayoría de las series desechables de la invención tendrán muchos elementos comunes. Sin embargo, el experto de habilidad ordinaria reconocerá que diferentes aplicaciones del sistema pueden requerir componentes adicionales los cuales pueden ser parte de la serie desechable. Por consiguiente, la serie desechable puede además, comprender de una o más agujas o jeringas adecuadas para obtener tej ido adiposo u otro a partir del paciente y regresar células regenerativas al paciente. El número de tipo y variedad de las agujas y jeringas incluidas, dependerá del tipo y cantidad de tejido a ser procesado. Las series desechables pueden además comprender uno o más recipientes rígidos o flexibles para mantener los fluidos de lavado y otros reactivos de procesamiento usados en el sistema. Por ejemplo, la serie desechable puede comprender recipientes para mantener salina, enzimas y cualquier otro tratamiento o recolocación de fluidos requeridos para el procedimiento. Además, soluciones de lavado adecuadas, fluidos de re-suspensión, aditivos, agentes o materiales de transplante, pueden ser proporcionados con la serie desechable para uso en conjunto con los sistemas y métodos de la invención. Cualquier combinación de componentes, equipos o suministros del sistema descrito en este documento, o de otro modo, requerido para practicar la invención, pueden ser proporcionados en la forma de un kit . Por ejemplo, un kit de la invención puede incluir, por ejemplo, la longitud óptima y calibre de la aguja para liposucción a base de jeringa y jeringas estériles, las cuales contienen el medio de filtro preferido, el cual permite el procesamiento de volúmenes pequeños de tejido. Otro equipo y suministro ejemplar el cual puede ser usado con la invención y puede también ser incluido con los kits de la invención, se lista en las Tablas II y III La Tabla II abajo identifica ejemplos de suministros que pueden ser usados para obtener células regenerativas derivadas adiposas, de conformidad con los sistemas y métodos de la presente invención: Tabla II Descripción Vendedor Cantidad Nota Jeringa de 10 Becton- La Opcional , usada mi Dickinson requerida para liposucción Aguja de punta La Opcional , usada roma 14GA requerida para liposucción Paquete de Baxter Fenwal 1 Bolsa de sangre único procesamiento (600 mi) celular principal; la bolsa tiene un adaptador en espiga en línea y dos puertos en espiga libres Tabla II (continuación) Descripción Vendedor Cantidad Nota Paquete de Baxter Fenwal Serie de bolsa transferencia cuad. con acoplador (150 mi) Paquete de Baxter Fenwal Bolsa de desecho transferencia con acoplador (1L) Acoplador de Baxter Fenwal sitio de muestra Salina al 0.9% Baxter Fenwal (para inyección) Aguja aguda Monoject La Para adición de 14GA requerida tejido de liposucción a la bolsa Agu a aguda Monoj ect Para adición de 20GA . colagenasa y remoción de células PLA 0.2 µta de Millipore Para filtrar filtro colagenasa Sterflip Seguros de Terumo ME*ACS121 para sello de sellado temporal aluminio de del tubo Teruflex Coj ín prep . de Triadine La 10-3201 yoduro de requerida povidona Colagenasa Roche Véase nota de Liberasa Hl procedimiento 1 disco TSCD Terumo 1SC/WO017 para uso con Soldadura de entubado Estéril TSCD La Tabla III abajo, identifica equipo que puede s usado con los sistemas y métodos descritos en este documento Tabla III Descripción Vendedor Cantidad Nota Centrifuga Fisher 75-004-367 Serie Legen T Scientific Easy de Sorvall Rotor Kendro/Sorvall 1 Rotor TTH-750 Rotor Kendro/Sorvall 4 Oscilantes oscilante redondos 75006441 Adaptador para Kendro/Sorvall 00511 bolsas de 150 mi Exprésor de Baxter Fenwal 1 4R4414 plasma Sellador de Sebra 1 Modelo 1060 tubo Soldador de Terumo 1 3ME*SC201AD Entubado Estéril TSCD Arco Térmico LabLine 1 4637 LabLine Mordaza de Davron 3 estilo hemostática plástica "Desechable" Serie de Bolsas llenas de bolsas de agua usadas para balance balance de centrífuga Cámara de formas biopeligrosas Cámara de desechos biopeligrosos El componente reutilizable del sistema comprende, consiste esencialmente de, o consiste del mecanismo de agitación para la cámara de colección, la bomba y los sensores asociados los cuales activan los controles de válvulas y bombas, el motor centrifugo, la estructura de rotación del motor centrifugo, la pantalla de interfaz de usuario y puertos USB, un dispositivo de cierre o acoplamiento o configuración para conectar la serie desechable de manera tal que la serie desechable es aseguradamente unida a la interfaz con el componente de hardware reutilizable y otros dispositivos asociados. Un componente reutilizable ejemplar es ilustrado en la Figura 14. En modalidades preferidas, el componente reutilizable incluye un medio para separar y concentrar las células regenerativas a partir de la composición celular regenerativa, por ejemplo, un centrifugo de rotación. En esta modalidad, el componente reutilizable es diseñado para contactarse a y con la interfaz con una porción de la cámara de procesamiento (que comprende una cámara centrífuga) de la serie desechable como se muestra en la Figura 15A. Se entiende que los medios para separar y concentrar células regenerativas en el componente re-utilizable no están limitados a una centrífuga de rotación, pero pueden también incluir cualquier otra configuración descrita en este documento, que incluye un filtro de membrana giratoria. El componente reutilizable puede también alojar el dispositivo de procesamiento descrito en este documento, el cual contiene software pre-programado para llevar a cabo varios procedimientos de procesamiento de tejido diferentes y por consiguiente, selectivamente activar las varias bombas y válvulas del sistema. El procesador puede también incluir capacidad de almacenamiento de datos para almacenar información del donador/paciente, procesamiento o información de colección y otros datos para posterior descarga o compilación. El componente re-utilizable puede ser usado con una variedad de series desechables . La serie desechable está conectada a 1 componente re-utilizable a través por ejemplo, de un dispositivo de cierre o configuración para conectar la serie desechable, de manera tal que la serie desechable es aseguradamente unida a la interfaz con el componente de hardware re-utilizable de una manera tal que el dispositivo de procesamiento presente en el componente reutilizable puede controlar, es decir, enviar y recibir señales desde los varios componentes de la serie desechable, así como también de los varios componentes del componente re-utilizable y otros dispositivos y sistemas asociados. En una modalidad, una serie desechable para uso en el sistema, está comprendida de una cámara de colección 20, la cual puede acomodar aproximadamente 800 mL de tejido; una cámara de procesamiento 30 la cual puede procesar la composición celular regenerativa generada por aproximadamente 800 mL de tejido lavado y digerido en la cámara de colección 20; una cámara de salida 50, la cual puede acomodar al menos 0.5 mL de células regenerativas ; y un recipiente de desecho 40, el cual puede acomodar aproximadamente 10 L de desecho. En esta modalidad, el dispositivo de hardv/are no es mayor de 24"L X 18"W X 3S"H. Dimensiones alternativas de los varios componentes de las series desechables así como también el dispositivo de hardware, pueden ser construidas como sen necesarias y estén propuestas para ser abarcadas por la presente invención sin limitación. Los componentes desechables del sistema son fáciles de colocar en el dispositivo. Una ilustración de una serie desechable utilizada montada junto con un componente re-utilizable correspondiente, se ilustra en la Figura 15A. El sistema es preferiblemente diseñado de manera tal que puede detectar un componente desechable inapropiadamente cargado. Por ejemplo, los componentes de cada serie desechable pueden tener marcadores guía a color, para alinear e insertar apropiadamente el entubado, cámaras, etc., en lugares apropiados en el sistema. En modalidades adicionales, el sistema descrito en este documento es una unidad portátil. Por ejemplo, la unidad portátil puede ser capaz de ser movida de una ubicación en donde ha ocurrido la colecta de tejido adiposo, a otra ubicación para la colecta del tejido adiposo.

En ciertas implementaciones, la unidad portátil es adecuada para colecta y procesamiento de tejido adiposo por un lado de la cama del paciente. De este modo, una unidad portátil puede ser parte de un sistema, el cual puede ser movido de paciente a paciente. Por consiguiente, la unidad portátil puede estar en ruedas, la cual se cierra en su lugar y de este modo, puede ser fácilmente colocada y usada en una ubicación conveniente en una posición estable y segura a través del procedimiento. En otras modalidades, la unidad portátil está diseñada para el establecimiento y operación en una superficie plana, tal como la superficie de una mesa. La unidad portátil puede también ser adjuntada en una unidad de alojamiento. La unidad portátil puede además, estar comprendida de colgantes, ganchos, etiquetas, escamas, y otros dispositivos para asistir en el procedimiento. Todos los componentes reutilizables del sistema descritos en este documento, tal como centrífugas, dispositivos de procesamientos, pantallas de selección, pueden ser montados en la unidad portátil del sistema. Modalidades manuales alternas para obtener células regenerativas están también dentro del alcance de esta invención. Por ejemplo, en una modalidad, el tejido adiposo puede ser procesado usando cualquier combinación de los componentes del sistema, equipo y/o suministros descritos en este documento.

Una modalidad manual del sistema de la invención puede ser practicada de conformidad con las siguientes etapas e información, las cuales se proporcionan por medio del ejemplo y no por medio de limitación. Primero, el tejido adiposo se colecta de un paciente. Una línea de recuperación de tejido, o acoplador de sitio de muestreo, se abren y se inserta una espiga en un puerto lateral de la bolsa de sangre de 600 mi. Aproximadamente 10 mi del tejido adiposo se colecta en una jeringa de 10 mi a través de la cánula roma. La cánula roma es reemplazada con una aguja relativamente muy delgada (14G) . El sitio de muestreo es limpiado con un limpiador de yodo. El tejido adiposo es inyectado en la bolsa de 600 mi a través del sitio de muestreo. La jeringa y la aguja son entonces descargadas en una cámara estrecha. Estas etapas son repetidas para colocar suficiente tejido en la bolsa. El tejido suficiente se determina en una base caso por caso, basada en las especificidades clínicas del paciente y la aplicación. Segundo, el tejido adiposo aspirado es lavado. Se engancha una bolsa de salina pre-calentada (37°C) arriba de la superficie de trabajo. Un sujetador hemostático azul es colocado en el entubado entre la bolsa de 600 mi y la espiga. El sujetador es cerrado para sellar el entubado. La espiga en la bolsa de 600 mi es usada para introducir la bolsa salina (en este establecimiento, se usa la aguja en la bolsa de 600 mi para introducir la bolsa de salina a través del septo de caucho, se limpia el septo con yodo previo a la inserción de la aguja) . El sujetador azul es liberado y aproximadamente 150 mi de salina se dejan introducir a la bolsa de 600 ral. El sujetador azul es cerrado cuando el volumen deseado de salina ha entrado a la bolsa de 600 mi. La bolsa de 600 mi es invertida 10-50 veces durante aproximadamente 15 segundos. Un segundo sujetador azul es aplicado al entubado conduciendo desde la bolsa de desechos de 3L hasta la espiga. La espiga en la bolsa de 3L, es usada para introducir la bolsa de 600 mL. La bolsa de 600 mL es invertida sobre la superficie de trabajo y se deja reposar por aproximadamente 1 minuto. El sujetador azul que conduce a la bolsa de 3L es liberado. El fluido de desecho se deja fluir en la bolsa de 3L. El sujetador azul es aplicado para detener el flujo antes de que el tejido entre al entubado. La bolsa de 600 mi es bajada a la superficie de trabajo. Estas etapas son repetidas más de dos veces. Si el desecho salino todavía parece notablemente rojo, se indica un tercer ciclo adicional. Se usa un sellador de calor para sellar el entubado entre la bolsa de desecho de 3L y la bolsa de 600 mi. El sello se hace a aproximadamente el punto de trayectoria media en el entubado. La bolsa de desecho de 3L es removida y descargada. La bolsa de 600 mi de regresa a la superficie de trabajo. Tercero, se digiere el tejido adiposo lavado. El sujetador azul en el entubado entre la salina y la bolsa de 600 mi, se libera para permitir que aproximadamente 150 mi de la salina entre a la bolsa de 600 mi. El sitio de muestreo en la bolsa de 600 mi es limpiado con un limpiador de yodo. La colagenasa se inyecta a través del sitio de muestreo en la bolsa de 600 mi. La colagenasa se prepara descongelando un vial de colagenasa en un baño maria a 37°C o equivalente, distinto del microondas . Se inserta en el vial una jeringa con 1 mi con una aguja de 22G. La colagenasa se retira en la aguja. La aguja es removida y colocada con un filtro de 0.2 µt? y la segunda aguja de 226. La colagenasa es entonces expelida de la jeringa a través de un filtro de 0.2 [im y aguja. La digestión del tejido adiposo se realiza a una concentración final de colagenasa de 0.1-0,2 unidades/ml Wünsch. La almohadilla de calentamiento se coloca en el oscilador. Durante este tiempo, la bolsa salina, mientras está todavía unida, se fija al lado del oscilador. Se toma cuidado para asegurar que el entubado en la bolsa de se alinea se posición en tal forma que no se caiga en el oscilador cuando está en movimiento. El controlador de almohadilla de calentamiento se establece a 37°C. La bolsa de 600 mg es colocada en el oscilador. El oscilador se establece al máximo. La bolsa se observa para asegurar que sea estable, se deja oscilar por aproximadamente 1 hora (55 + 10 minutos) . Cuarto, se recupera la composición celular regenerativa . La bolsa se remueve del oscilador. Se aplica un sujetador azul al entubado cerrado anteriormente, conduciendo a la bolsa de desecho. El dispositivo de conexión estéril es usado para unir la serie de bolsa cuádruple, (pre-preparada de conformidad con las siguientes instrucciones) , al entubado que fue anteriormente unido a la bolsa de desecho. El paquete cuádruple puede ser visto como dos paquetes cuádruples ligados. Se identifica el entubado dividiéndolo en dos paquetes, doblando el entubado hacia atrás en sí mismo, y deslizando un lazo de metal sobre el entubado doblado (sobre ambas piezas de entubado) . Deslizando el lazo hacia abajo aproximadamente 0.5 pulgadas (1.27 centímetros). El sujetador formado en el doblez, actúa para sellar el entubado. Se usa un hemostato para parcialmente engarzar el lazo cerrado. El lazo no es engarzado estrechamente debido a que el lazo necesitará ser removido durante el procesamiento. La bolsa de .600 mi es colgada invertida sobre la superficie de trabajo y se deja reposar por aproximadamente 32 minutos. El sujetador azul en el entubado que conduce a la serie cuádruple es liberado para drenar la fracción celular (la capa bajo la capa de grasa amarilla/naranja) en la serie cuádruple Se toma cuidado para prevenir a la capa de grasa entrar al entubado. Durante este proceso, el entubado puede ser engarzado manualmente para disminuir el flujo conforme la capa de grasa para conseguir cerrar el entubado. El entubado que conduce a la serie de bolsa cuádruple es entonces cerrado con un sujetador azul, la bolsa de 600 mi es regresada a la superficie de trabajo, y la bola de salina es colgada. El sujetador azul en el entubado entre la salina y la bolsa de 600 mi es liberado para dejar aproximadamente 150 mi de salina para introducir la bolsa de 600 mi. La bolsa de 600 mi es invertida aproximadamente 10-15 minutos durante aproximadamente 15 segundos. La bolsa de 600 mi es entonces colgada invertida sobre la superficie de trabajo y se deja agitar por aproximadamente 3-5 minutos. El sujetador azul en el entubado conduce a que la serie cuádruple sea liberada, y la fracción celular (la capa bajo la capa de grasa amarilla/naranja) se drenada en la serie cuádruple. Se toma cuidado para prevenir que la capa de grasa entre al entubado. Por ejemplo, el flujo puede se retardado conforme la capa de grasa llega cerca del entubado para engarzar el entubado manualmente. El entubado conduce a la serie de bolsa cuádruple con un suj etador azul . El entubado que conduce de la serie cuádruple a la bolsa de 600 mi es entonces sellado. La bolsa de 600 mi es entonces removida y desechada. Quinto, se lavó la composición celular regenerativa . Se colocó un sujetador de metal en el entubado entre las dos bolsas llenas para sellar el entubado. La serie cuádruple se colocó en una balanza. Se agregó agua a una segunda serie cuádruple "simulada" para balancear la serie cuádruple. La serie cuádruple y la serie balanceada son colocadas en cubos opuestos de la centrífuga. Para el filtro hueco, las células se lavaron y colocaron en la bolsa, y el entubado se selló entre la bolsa y el ensamble del filtro de fibra hueca como se describe anteriormente. Usando una bomba peristáltica, el fluido se corre a través del ensamble del filtro y se colecta el concentrado celular en una bolsa en el extremo corriente arriba. Se toma cuidado para asegurar que las bolsas de serie cuádruple no se compriman y estén verticales. La centrífuga es operada a 400xg por 10 minutos. La serie cuádruple se remueve de la centrífuga y se coloca en el expresor de plasma. Se toma cuidado para colocar la bolsa en el expresor de tal manera que el entubado duro en la parte superior de la bolsa esté solo en la parte superior de la placa posterior. Si la bolsa es también alta, también mucha salina debe ser retenida, si el entubado es también bajo podrá interferir con la capacidad de la placa para cerrase y nuevamente también mucha salina será retenida. Se aplica un sujetador azul a cada una de las líneas que conducen de la serie cuádruple a una vacía. Los lazos de metal y el sujetador azul se remueven para permitir al sobrenadante fluir en la serie cuádruple vacía. Se expresa tanta salina como sea posible, pero se toma cuidado para no arrastrar la pelotilla celular. El entubado corre en cada una de las bolsas que contiene sobrenadante y se sella con calor. Se remueven las bolsas de desecho que contienen el sobrenadante. Se aplican los sujetadores azules al entubado que conduce a cada una de las bolsas en serie cuádruple que contienen células. Las bolsas se llevan fuera del expresor de plasma. Se usa un dispositivo de conexión estéril para conectar el entubado que conduce al paquete cuádruple a la bolsa de salina. El sujetador azul conduce a una de las bolsas de serie cuádruple para dejar aproximadamente 150 mi de salina fluir en la bolsa, y entonces se aplica nuevamente el sujetador para detener el flujo de salina. La bolsa de serie cuádruple llena es entonces invertida aproximadamente 10-15 veces por aproximadamente 15 segundos. El sujetador azul conduce a que la bolsa de serie cuádruple vacía sea entonces removida y todos los contenidos de la bolsa llena se drenen en la bolsa vacía. El sujetador de lazo de metal es aplicado nuevamente para sellar el entubado entre dos bolsas de serie cuádruple. El entubado es entonces sellado por calor y se remueve la bolsa de salina. La bolsa de serie cuádruple llena es entonces invertida aproximadamente 10-15 veces durante aproximadamente 15 segundos. Otra serie cuádruple simulada es colocada en una balanza y es balanceada nuevamente a la serie cuádruple celular. Las bolsas en serie cuádruple (una llena, una vacía) son entonces colocadas en la centrífuga de manera que las bolsas en serie cuádruple no se compriman y se coloquen verticalmente .

La centrifuga es colocada a aproximadamente 400xg por 10 minutos. La serie cuádruple es entonces removida de la centrífuga y se coloca cuidadosamente en el expresor de plasma de tal manera que el entubado firme en la parte superior de la bolsa está solo en la parte superior de la placa posterior. Si la bolsa está también alta también mucha salina debe ser retenida, si también el entubado está bajo interferirá con la capacidad de la placa delantero para cerrarse y nuevamente mucha salina será retenida. El lazo de metal es removido para expresar todo el sobrenadante de la bolsa llena en la bolsa vacía teniendo cuidado para no arrastrar la pelotilla celular regenerativa . El entubado entre las bolsa se sella, y la bolsa llena (desecho) se remueve y desecha. Entonces se inserta un nuevo acoplador del sitio de muestreo en la bolsa restante. Las células de la pelotilla celular son entonces suspendidas nuevamente en la salina residual (si hay alguna) para obtener una concentración de células regenerativas . La suspensión puede ser realizada por manipulación suave de la bolsa (por ejemplo, exprimir y frotar) . Un ejemplo particular del sistema que incorpora la presente invención se muestra en la Figura 4. La figura 4 ilustra un sistema y método automatizado para separar y concentrar células regenerativas del tejido, por ejemplo, tejido adiposo, adecuado para re-infusión dentro de un paciente. En ciertas modalidades del sistema mostrado en la Figura 4, el sistema además incluye una etapa automatizada para aspirar una cantidad dada de te ido del paciente. El sistema mostrado en la Figura 4 comprende la serie desechable mostrada en la Figura 13 la cual se conecta al componente re-utilizable del sistema mostrado en la Figura 14, para llegar a una modalidad automatizada del sistema mostrado en la Figura 15A. La serie desechable está conectada al componente re-utilizable a través de, por ejemplo, un dispositivo o configuración de interacoplamiento o ensamblaje, el cual conecta la serie desechable al componente re-utilizable de manera tal que la serie desechable está seguramente unida a y asociada con el componente de hardware re-utilizable en una manera que el dispositivo de procesamiento presente en el componente re-utilizable puede controlar e interccnectar con, es decir, enviar y recibir señales a y de varios componentes de la serie desechable así como de varios componentes del componente re-utilizable y otros dispositivos y sistemas asociados. El usuario pude conectar la serie desechable al componente re-utilizable, dentro de ciertos parámetros usando la interconexión de usuario, por ejemplo, el volumen del tejido será colectado, unido al sistema para el paciente, y el sistema automáticamente realiza todas las etapas mostradas en la Figura 4 en una secuencia ininterrumpida usando parámetros metidos por el usuario y/o pre-programados . Una secuencia es ilustrada en la Figura 15B. De forma alternativa, el tejido puede ser manualmente aspirado del paciente por el usuario y transportado al sistema para procesamiento, es decir, separación y concentración de células regenerativas . Específicamente, como se muestra en la Figura 4, el tejido, por ejemplo, puede ser retirado del paciente usando el conducto 12 e introducido en la cámara de colección 20. Una ilustración detallada de la cámara de colección de la Figura 4 se muestra en la Figura 5. Como se ilustra en la figura 5, la cámara de colección 20 puede estar comprendida de una línea de vacío 11 la cual facilita remoción del tejido usando una cánula estándar. El usuario puede introducir el volumen estimado del tejido dirigido a la cámara de colección 20 en este punto. El tejido se introduce en la cámara de colección 20 a través de un puerto de entrada 21 el cual es parte de una trayectoria de fluido cerrado que permite que el tejido, salina y otros agentes puedan ser agregados al tejido en una manera séptica. Un sensor óptico del sistema, por ejemplo, sensor 29, puede detectar cuando el usuario introduce el volumen del tej ido si está presente en la cámara de colección 20. En ciertas modalidades, si menos tej ido está presente en la cámara de colección que en la entrada de usuario, el usuario tendrá la opción para iniciar el procesamiento del volumen del tejido el cual está presente en la cámara de colección 20. En ciertas modalidades, una porción del tejido removido del paciente puede ser dirigida a la cámara de muestra 60 a través del uso de una bomba, por ejemplo, una bomba peristáltica, vía un conducto, el cual puede ser activado vía entrada del usuario utilizando la interconexión del usuario. Un sensor 29 puede señalar si el dispositivo de procesamiento está presente en el componente re-utilizable para activar las etapas necesarias para lavar y desengrasar el tejido. Por ejemplo, el dispositivo de procesamiento pude introducir un volumen de pre-fijo de agente de lavado basado en el volumen del tej ido colectado usando válvulas y bombas automatizadas. Este ciclo puede ser repetido en la cámara de colección hasta que el sensor óptico determine que el líquido efluente es suficientemente claro y desprovisto de material indeseado. Por ejemplo, un sensor óptico 29 a lo largo del conducto que conduce a la cámara de colección 12b ó 12d puede detectar que los materiales indeseados se han removido y puede señalar al dispositivo de procesamiento para cerrar las válvulas requeridas e iniciar la siguiente etapa. Después, el dispositivo de procesamiento puede ser introducir una cantidad pre-programada de agente de desagregación basado en el volumen del tejido colectado. El dispositivo de procesamiento puede también activar la ? agitación del tejido en la cámara de colección para un periodo presente de tiempo basado en el volumen inicial del tejido colectado o basado en la entrada del usuario. En la modalidad mostrada de la figura 4, una vez que el agente de desagregación, por ejemplo, colagenasa, se agrega a la cámara de colección 20 a través de la fuente de colagenasa 24 el motor en la cámara de colección 20 es activado vía el dispositivo de procesamiento. El motor activa el eje giratorio 25 el cual está comprendido de un agitador magnético y un dispositivo como paleta en donde una o más paletas 25a están rígidamente unidas a la jaula del filtro 27 de un filtro prefijado a la cámara de colección 28. Las paletas se agitan en la presencia del agente de desagregación de manera tal que las células regenerativas se separan del tejido. La solución en la cámara de colección 20 se deja sedimentar por un periodo preestablecido de tiempo. La porción flotante de la solución se deja enjuagar en la superficie de la solución. Una vez que el periodo preestablecido de tiempo ha transcurrido, las válvulas y bombas necesarias se activan por el dispositivo- de procesamiento para remover la porción no flotante a la cámara de desecho 40. La transferencia en la cámara de lavado 40 continúa hasta que un sensor 29 a lo largo del conducto que conduce a la cámara de colección 12b ó 12b, puede detectar que la fracción flotante de la solución está cerca de ser transferida a la cámara de desecho 30. Por ejemplo, un sensor 29 a lo largo del conducto que conduce a la cámara de colección 12b ó 12d, puede detectar que los materiales indeseados se han removido y puede señalar al dispositivo de procesamiento para cerrar las válvulas requeridas. Al mismo tiempo, la fracción no flotante de la solución, es decir, la composición celular regenerativa, se remueve a la cámara de procesamiento 30. Esto se logra a través del uso de válvulas necesarias y bombas peristálticas. En ciertas modalidades, antes de la transferencia de la composición celular regenerativa a la cámara de procesamiento 30, un volumen adicional de salina puede ser agregado a la fracción flotante de la solución que permanece en la cámara de colección 20. Se repite otro ciclo de lavado. Después de este ciclo, la solución se deja sedimentar y las fracciones no flotantes (las cuales contienen las células regenerativas) se transportan a la cámara de procesamiento 30 y las fracciones flotantes se drenan a la cámara de desecho 40. Se usa el ciclo de lavado adicional para optimizar la transferencia de todas las células regenerativas separadas a la cámara de procesamiento 30. Una vez que la composición celular regenerativa es transportada a la cámara de procesamiento 30 por medido de conductos 12, la composición puede ser sometida a una o más etapas de lavado adicional antes de iniciar la fase de concentración. Esto asegura remover los contaminantes de desecho y residuales de la cámara de colección 20. De forma similar, la etapa de concentración subsecuente, la composición celular regenerativa puede ser sometida a una o más etapas de lavado adicionales para remover contaminantes residuales . Los materiales no deseados se pueden remover de la cámara de procesamiento 30 a la cámara de desecho 40 en la misma manera, es decir, el control de las válvulas y bombas vía señales del dispositivo de procesamiento como se describe anteriormente . Las varias modalidades de la cámara de procesamiento 30 mostradas en la Figura 4, son descritas en detalle abajo. La cámara de procesamiento 30 mostrada en la Figura 4, está en la forma de una cámara centrífuga. Una ilustración detallada de la cámara de procesamiento de la Figura 4 se muestra en las Figuras 7 y 8. Tal cámara de procesamiento está comprendida de manera general, de una red de sello de rotación 30.1, que comprende un alojamiento externo 30.2, uno o más sellos 30.3, uno o más cojinetes 30.4 y un punto de unión 30.6, para conectar la cámara de procesamiento al dispositivo de centrífuga presente en el componente re-utilizable del sistema; una o más trayectorias de fluido 30.5 en la forma de conductos que se extienden desde el sello de rotación y terminan en la cámara centrífuga en cada extremo el cual está en la forma de una cámara de salida 50 alojada en una estructura 53, en donde la estructura está comprendida de uno o más puertos 52 y una o más asas para re-posicionar manualmente la cámara externa 50. La red de sello de rotación 30.1, está incluida para asegurar que las trayectorias de fluido de la cámara de procesamiento, se puedan mantener en una condición estéril. Además, las trayectorias de fluido de la cámara de procesamiento puede ser accesadas de una manera estéril (por ejemplo, agregar agentes o solución de lavado), en cualquier tiempo, aún mientras la cámara centrífuga de la cámara de procesamiento está girando. La red de sello de rotación 30.1 mostrada en las Figuras 7 y 8, incluyen un eje de rotación comprendido de dos o más cojinetes 30.4, tres o más sellos de pestaña 30.3 y un alojamiento exterior 30.2. En esta modalidad, los cojinetes 30.4 además comprenden un eje externo e inerte (no mostrado) referido en este documento como canaletas. Estas canaletas pueden ser separadas por esferas de molido de precisión. Las canaletas y esferas que comprenden los cojinetes son preferiblemente fabricadas con materiales adecuados para contacto con fluidos corporales, o son revestidas con materiales adecuados para contacto con fluido corporal . En una modalidad preferida, las canaletas y esferas se fabrican usando, por ejemplo nitruro de silicona o zirconio. Además, en esta modalidad, los tres sellos de pestaña están comprendidos de un canal en forma de "U" circular (no mostrado) asi como un resorte circular (no mostrado) . El canal en forma de "U" circular es preferiblemente fabricado usando material flexible de manera tal que se forma una unión de prueba de filtración con el eje de rotación de la red de sello de rotación 30.1. De forma adicional, los sellos de pestaña son preferiblemente orientados en una manera tal que la presión de la composición de células generativas fluye a través de la cámara de procesamiento causando el montaje del sello apriete su unión con el eje rotatorio por medio de una tensión incrementada. Los sellos pueden ser asegurados en posición por medio de una o más grapas circulares (no mostradas) las cuales son capaces de expandirse y/o contraerse como sea necesario para encajar una ranura en el alojamiento exterior 30.2 de la red de sello de rotación 30.1. El calor generado por o próximo a la red de sello de rotación 30.1 debe ser controlado para prevenir lisis en las células en la solución la cual se mueve a través del pasaje. Esto se puede lograr mediante, por ejemplo, seleccionar un material fuerte para construir un eje de rotación, pulir el área del eje de rotación el cual llega a estar en contacto con los sellos y minimizar el contacto entre el eje de rotación y el sello. En otra modalidad la red de sello de rotación 30.1 está comprendida de un sello de caucho sencillo 30.3 y una junta de aire (no mostrada) . Este sello y la junta proporcionan una trayectoria tortuosa para cualquier material biológico el cual debe comprender la esterilidad del sistema. En otra modalidad la red del sello de rotación 30.1 está comprendida de múltiples sellos montados en un resorte múltiple 30.3, el cual aisla las trayectorias de fluido individual. Los sellos 30.3 se fabrican de un material el cual debe ser esterilizado para sellar el eje de rotación sin lubricante. En otra modalidad la red de sello de rotación 30.1 está comprendida de un par de discos de cerámica (no mostrados) los cuales crean las trayectorias de fluido diferente y pueden resistir la rotación del sistema y no causar lisis celular. En otra modalidad la trayectoria de fluido es flexible y se deja envolver o desenvolver con respecto a la cámara de procesamiento. Esto se logra teniendo la trayectoria de fluido flexible girando en una revolución para cada dos revoluciones de la cámara de procesamiento 30. Esto elimina la necesidad de un sello de rotación completamente. La composición celular regenerativa es bombeada de la cámara de colección 20 a lo largo de una trayectoria de fluido a través del eje de rotación de la red de sello de rotación 30.1 y después dividida en un mínimo de dos trayectorias de fluido 30.5 cada una de las cuales se emite al exterior del eje central de la cámara de procesamiento 30 y termina próxima a los extremos exteriores de la cámara de procesamiento 30, es decir, dentro de las cámaras centrífugas las cuales alojan las cámaras de salida 50 (Figura 7 y 8) . Por consiguiente, en una modalidad preferida, la cámara de procesamiento 30 está comprendida de dos o más cámaras de salida 50 como se muestra en las Figuras 7 y 8. Estas cámaras de salida 50 están colocadas de manera tal que están en orientación durante el procesamiento 30.7 y en otra orientación para recuperación de células regenerativas concentradas 30.8. Por ejemplo, los cambios de salida son titulados en un ángulo durante el procesamiento y en otro ángulo para recuperación celular. El ángulo de recuperación celular es más vertical que el ángulo de procesamiento . Las dos posiciones de la cámara de salida 50 pueden ser manualmente manipuladas a través de un mango 53 el cual sobresale fuera de la cámara de procesamiento 30. Las células regenerativas pueden ser manualmente recuperadas de las cámaras de salida 50 cuando están en orientación de recuperación 30.8 usando una jeringa. En otra modalidad, la trayectoria del fluido 30.5 es construida de manera tal que divide la cámara de procesamiento y entonces conecta a los extremos exteriores de la cámara de procesamiento 30, es decir, dentro de las cámaras centrífugas las cuales alojan las cámaras de salida 50 (no mostradas) . Es esta modalidad, grandes volúmenes de composición celular regenerativa y/o aditivos, soluciones, etc., pueden ser transportadas directamente a la cámara centrífuga y/o cámaras de salida. Con referencia a las Figuras 4 y 7-9, entre la cámara de colección 20 y la cámara de procesamiento 30, una bomba 34 y una o más válvulas 14 pueden ser proporcionadas. En una modalidad preferida, las válvulas 14 son válvulas electromecánicas. Además, sensores, tal como sensor de presión 29, puede ser proporcionado en línea con la cámara de procesamiento 30 y la cámara de colección 20. Las válvulas, bombas y sensores actúan en conjunto con el dispositivo de procesamiento presente en el componente re-utilizable (Figura 4) para automatizar las etapas de concentración del sistema. Los sensores detectan la presencia de la composición celular regenerativa en las cámaras centrífugas y activan el dispositivo de centrifugación a través de la comunicación con el dispositivo de procesamiento del sistema. La composición celular regenerativa es entonces sometida a una carga pre-programada por tiempo pre-programado basado en la cantidad de tejido originalmente colectado y/o entrada del usuario. En ciertas modalidades, esta etapa puede ser repetida ya sea automáticamente o a través de la entrada del usuario. Por ejemplo, la composición es sometida a una carga de aproximadamente 400 veces la fuerza de gravedad por un periodo de aproximadamente 5 minutos. La cámara de salida 50 es construida de forma tal que los extremos exteriores de la cámara forman un reservorio pequeño para las partículas y células densas. La cámara de salida 50 retiene las partículas densas en lo que es llamada una "pelotilla celular" , mientras se deja al sobrenadante ligero removido a través de una trayectoria de fluido, por ejemplo, una trayectoria de fluido la cual está a lo largo del eje de rotación de la red de sello de rotación 30.1 y viaja del punto bajo en el centro de la cámara de procesamiento 30 a través de la red de sello de rotación 30.1 hasta el contenedor de desecho 40. Las válvulas 14 y las bombas 34 señalan al dispositivo de procesamiento para activar las etapas de remoción de sobrenadante hasta los contenedores de desecho 40 sin perturbar la presencia de pelotillas celulares en la cámara de salida 50. Las pelotillas celulares se obtienen usando el sistema mostrado en la Figura 4, que comprende las células regenerativas concentradas de la invención. En algunas modalidades, después que el sobrenadante es removido y conducido a la cámara de desecho 40, puede ser usada una trayectoria de fluido 30.5 para re-suspender las pelotillas celulares que se forman después de la centrifugación con soluciones adicionales y/o otros aditivos. La re-suspensión de la pelotilla celular en esta manera permite además, lavado de las células regenerativas para remover proteínas no deseadas y compuestos químicos así como incrementar el flujo de oxígeno a las células. La suspensión resultante puede ser sometida a otra carga de aproximadamente 400 veces la fuerza de gravedad por otro periodo de aproximadamente 5 minutos . Después que una segunda pelotilla se forma, y lo sobrenadante resultante se remueve a la cámara de desecho 40, se realiza un lavado final en una manera como se describe anteriormente con salina o algún otra solución amortiguadora apropiada. Este lavado repetido puede ser realizado muchas veces para mejorar la pureza de la solución celular regenerativa. En ciertas modalidades, la salina puede ser agregada en cualquier etapa como se juzgue necesario para mejorar el procesamiento. Las concentraciones de células regenerativas obtenidas usando el sistema mostrado en la Figura 4, pueden variar dependiendo de la cantidad de tejido colectado, edad del paciente, perfil del paciente, etc. Se proporcionan rendimientos ejemplares en la Tabla 1. La pelotilla final presente en la cámara de salida 50 entonces puede ser recuperada en una manera aséptica usando una jeringa apropiada después que la cámara de salida 50 está colocada en la orientación apropiada para remover células. En otras modalidades, la pelotilla final puede ser automáticamente movida por un contenedor en la cámara de salida 50, la cual puede ser removida y almacenada o usada como se necesite . Este contenedor puede ser en cualquier forma o tamaño apropiado. Por ejemplo, el contenedor puede ser una jeringa. En ciertas modalidades, el contenedor de salida 50 puede ser sellado por calor (ya sea automáticamente o manualmente) y asilado de los otros componentes de la cámara de procesamiento para recuperación y uso subsecuente de las células regenerativas en aplicaciones terapéuticas como se describe en este documento que incluye la re-infusión en el paciente. Las células también pueden ser sometidas a procesamiento adicional como se describe en este documento ya sea antes de la recuperación de la cámara de salida o después de transferirse a un segundo sistema o dispositivo. El componente re-utilizable mostrado en la Figura 14 es construido tal que puede ser conectado a uno o más sistemas o dispositivos adicionales para procesamiento adicional como se necesite . Como se describe en este documento, las células regenerativas obtenidas usando el sistema y métodos de la presente invención pueden ser usadas para tratar DVP y enfermedades relacionadas y trastornos basados en sus propiedades como se describe en los Ejemplos. Por ejemplo, las células regenerativas tienen la capacidad para sintetizar y secretar factores de crecimiento que estimulan la formación de nuevos vasos sanguíneos, la capacidad para sintetizar y secretar factores de crecimiento que estimulan la supervivencia y proliferación celular y la capacidad para proliferar y diferenciar en células directamente que participan en la formación de nuevos vasos sanguíneos . Por consiguiente, en un aspecto de la presente invención, las células regenerativas se extraen de tejido adiposo de un donador usando los sistemas y métodos de la presente invención y se usan para sacar un beneficio terapéutico para ocluir vasos sanguíneos a través de uno o más de los mecanismos demostrados en este documento. En una modalidad preferida, las células se extraen del tejido adiposo de la persona en quien se va a administrar/implantar, con ello se reducen las complicaciones potenciales asociadas con respuestas antigénicas y/o inmunogénicas para el transplante. Los pacientes son típicamente evaluados para valorar. DVP por uno o más de los siguientes procedimientos realizados por un médico u otro proveedor clínico: historia de salud del paciente, examen físico y datos objetivos. En una modalidad, el procedimiento de colecta se realiza antes que el paciente reciba cualquier producto designado para reducir el coagulado sanguíneo en conexión con el tratamiento de DVP o trastorno relacionado. Sin embargo, en ciertas modalidades, los pacientes pueden haber recibido aspirina antes del procedimiento de colecta. Además, un método preferido incluye colección de tejido adiposo antes de intentar cualquier procedimiento. Sin embargo, como se entenderá por la persona experta en la técnica, la sincronización de colección se espera variar y dependerá de varios factores que incluyen, entre otras cosas, estabilidad del paciente, perfil de coagulación de paciente, disponibilidad del proveedor y estándares de cuidado de calidad. Finalmente, la sincronización de colección será determinada por el responsable practicante para administrar cuidado al paciente afectado. El volumen de tejido adiposo colectado del paciente puede variar de aproximadamente 0 ce hasta aproximadamente 2000 ce y en algunas modalidades hasta aproximadamente 3000 ce. El volumen de grasa removida variará de paciente a paciente y dependerá en un número de factores que incluyen pero no se limitan a: edad, hábitos corporales, perfil de coagulación, estabilidad hemodinámica, severidad de enfermedad, co-morbosidad y preferencia del médico. Las células pueden ser administradas, tal como por inyección, a un paciente en cualquier situación en la cual se origine DVP. Las células pueden ser extraídas por adelantado y almacenadas en una forma criopreservadas o pueden ser extraídas a o alrededor del tiempo de necesidad definido. Como se describe en este documento, las células pueden ser administradas al paciente, tal como, por ejemplo, por inyección, o aplicadas directamente al tejido lesionado, tal como, por ejemplo, por inyección, o en proximidad del tejido lesionado, tal como, por ejemplo, por inyección, sin procesamiento adicional o siguiendo procedimientos adicionales para purificación adicional, modificación, estimular u por otro lado cambio de células. Por ejemplo, las células obtenidas de un paciente pueden ser administradas (por ejemplo, inyectadas) a un paciente en necesidad del mismo sin cultivar las células antes de administrarlas al paciente. En una modalidad, la colección de tejido adiposo será realizada a un lado de la cama del paciente. Puede ser usado el monitoreo hemodinámico para monitorear el estado clínico del paciente. De conformidad con la invención, las células regenerativas pueden ser suministradas al paciente poco después de colectar el tejido adiposo del paciente. Por ejemplo, las células pueden ser administradas inmediatamente después del procesamiento del tejido adiposo para obtener una composición de células regenerativas. En otra modalidad, la sincronización para el suministro puede ser relativamente más prolongada si las células a ser re-infundidas al paciente se someten a modificación adicional, purificación, estimulación u otra manipulación, como se describe en este documento. Además, las células regenerativas pueden ser administradas en tiempos múltiples. Por ejemplo, las células pueden ser administradas continuamente durante un periodo prolongado de tiempo (por ejemplo, horas) , o pueden ser administradas en inyecciones de bolo múltiple durante un tiempo prolongado de tiempo. En ciertas modalidades, una administración adicional de células será administrada dentro de aproximadamente 12 horas, tal como 6 horas, y una o más dosis de células será administrada a intervalos de 12 horas. El número de células administradas a un paciente pueden ser relacionado a, por ejemplo, el rendimiento celular después del procesamiento de tejido adiposo. Una porción del número total de células puede ser guardada para uso posterior o criopreservada . Además, la dosis suministrada dependerá de la ruta de suministro de las células al paciente. En una modalidad de la invención, el número de células regenerativas a ser suministrado al paciente se espera sea aproximadamente 5.5 x 105 células. Sin embargo, este número puede ser ajustado por orden de magnitud para lograr el efecto terapéutico deseado . Las células pueden también ser aplicadas con aditivos para mejorar, el control, o por otro lado dirigir el efecto terapéutico proyectado. Por ejemplo, en una modalidad, y como se describe en este documento, las células pueden ser purificadas adicionalmente por uso de selección celular negativa y/ positiva mediada por anticuerpo para enriquecer la población celular para incrementar la eficacia, reducir la morbosidad, o para facilitar la comodidad del procedimiento. De forma similar, las células pueden ser aplicadas sin una matriz biocompatible la cual facilita in vivo el tejido diseñado por ingeniería soportando y/o dirigiendo el destino de las células implantadas. En la misma ruta, las células pueden ser administradas después de manipulación genética tal como aquellas que expresan productos del gen que se suministran a o se proyectan para promover respuesta (s) terapéutica (s) proporcionada (s) por las células. Ejemplos de manipulación incluyen manipulaciones para expresión de control (incremento o disminución) de factores que promueven la angiogénesis o vasculogénesis (por ejemplo "VEGF. Las células también pueden ser sometidas a cultivo celular en un material de andamiaje ante de ser implantadas como se describe en este documento. En una modalidad, se prefiere la administración indirecta de células al sitio de beneficio proyectado. Esto puede ser logrado a través de una inyección intravenosa periférica. Las rutas de administración conocidas por un experto ordinario en la técnica, incluyen pero no se limitan a, intravenosa, intra-arterial y puede o puede no incluir un catéter endo-vascular basado mecanismo de suministro. Las células pueden ser inyectadas en un bolo sencillo, a través de una infusión lenta, o a través de series sugeridas de aplicaciones separadas por varias horas o, células proporcionadas son apropiadamente almacenadas, varios días o semanas. Como se mencionó anteriormente, las células pueden ser aplicadas usando caterizaciones de manera tal que las células son suministradas directamente a la región isquémica, tejido afectado. Como con acceso venoso periférico, las células pueden ser inyectadas a través de catéteres en un bolo sencillo o en alícuotas pequeñas múltiples. Las células pueden también ser aplicadas directamente al tejido afectado al tiempo de abertura, cirugía de derivación periférica. En una modalidad, la ruta de suministro puede incluir suministro intravenoso a través de un catéter intravenoso periférico estándar, o un catéter venoso central. El flujo de células puede ser controlado por inflación/deflación serial de balones distales y proximales localizados dentro de la vasculatura de pacientes, con ello crear zonas sin flujo temporales las cuales promueven injerto celular o acción terapéutica. Además, las células deben ser suministradas a través de las siguientes rutas, solas o en combinación con uno o más de los procedimientos identificados anteriormente: subcutáneo, intramuscular y sublingual. La dosis celular administrada al paciente dependerá en la cantidad de tejido adiposo colectado y el índice de masa corporal del donador (como una medición de la cantidad de tejido adiposo disponible) . La cantidad de tejido colectado también será determinada por la distribución isquémica o tejido afectado. Múltiples tratamientos usando múltiples tejidos colectados o usando una colecta sencilla con almacenaje apropiado de células entre aplicaciones están dentro del alcance de esta invención. Porciones del lipoaspirato procesado pueden ser almacenadas antes de ser administrado a un paciente. Para almacenaje de término corto (menos de 6 horas) las células pueden ser almacenadas a o debajo de temperatura ambiente en un contenedor sellado con o sin complementación con una solución nutriente. Almacenaje de medio término (menos de 48 horas) es preferiblemente realizado a 2-8°C en una solución amortiguada, osmótica (por ejemplo, Plasmalyte®) en un contenedor compuesto o revestido con un material que previene la adhesión celular. El almacenaje de término largo es preferiblemente realizado por criopreservación apropiada y almacenaje de células bajo condiciones que promueven la retención de función celular, tal como se describe comúnmente en la solicitud PCT con propiedad y asignada, número PCT/US02/29207 , presentada el 13 de Septiembre de 2002 y solicitud Provisional Estadounidense número 60/322,070, presentada el 14 de Septiembre de 2001, los contenidos de ambas las cuales se incorporan en este "documento por referencia. De conformidad con un aspecto de la invención, las células derivadas de tejido adiposo que se administra a un paciente pueden actuar como vehículos que suministran factor de crecimiento. Por ejemplo, por diseño de ingeniería las células expresan uno o más factores de crecimiento adecuado para aliviar síntomas asociados con la enfermedad vascular periférica, las células pueden ser administradas a un paciente, y diseñadas por ingeniería para liberar uno o más factores del crecimiento. La liberación puede ser proporcionada en una forma controlada por periodos prolongados de tiempo. Por ejemplo, la liberación puede ser controlada de manera tal que el (los) factor (es) de crecimiento se suministra en una manera periódica o pulsada de manera tal que son elevaciones locales en el factor de crecimiento, y/o recesiones locales en la cantidad del factor de crecimiento en proximidad a un área afectada de tejido. •Las células que se administran al paciente no únicamente ayudan a restaurar la función a tejidos dañados o de otro modo no saludables, sino también facilita la remodelación de tejidos dañados. El suministro celular puede tomar lugar pero no se limita a las siguientes locaciones: clínica, oficina clínica, centro de diálisis, departamento de emergencia, ala de hospital, unidad de cuidado intensivo, cuarto de operación, cuartos de caterización y cuartos radiológicos. En una modalidad, los efectos de terapia de suministro celular serán demostrados por, pero no se limita a, uno de las siguientes mediciones clínicas: flujo de sangre mejorado medido por: ultrasonografía doble, angiografía y angiografía de resonancia magnética; reducción en síntomas (claudicación); curación de ulceraciones isquémicas; contenido de oxígeno incrementado de tej ido medido por pletismografía corporal; mejoramiento en el índice tobillo-branquial (ABI) . Los efectos de terapia celular pueden ser evidentes durante el curso de días a semanas después del procedimiento. Sin embargo, los efectos benéficos pueden ser observados ya en varias horas después del procedimiento, y puede persistir por varios años . Los pacientes son típicamente monitoreados antes y durante el suministro de las células. Los procedimientos de monitores pueden incluir, y no se limitan a: estudios de coagulación, saturación de oxígeno y monitoreo hemodinámico . Se proporcionan los siguientes ejemplos para demostrar las situaciones y ambientes particulares en las cuales esta tecnología puede ser aplicada y no se pretende restringir el alcance de la invención y las reivindicaciones incluidas en esta descripción.

EJEMPLOS El ADC o células regenerativas que se usan a través de los ejemplos mostrados abajo pueden se pueden obtener por método (s) descrito (s) en la descripción inmediata y/o lo(s) método (s) descrito (s) en la Solicitud Estadounidense No. de serie 10/316,127, titulada SYSTEMS AND METHODS FOR TREATING PATIENTS WITH PROCESSED LIPOASPIRATE CELLS, presentada el 9 de Diciembre de 2002, la cual reivindica la prioridad para la Solicitud Provisional Estadounidense No. de serie 60/338,856, presentada el 7 de Diciembre de 2001, asi como los métodos descrito en la Solicitud Estadounidense No. , titulada SYSTEMS AMD METHODS FOR SEPARATING AND CONCENTRATING REGENERATIVE CELLS FROM TISSUE, presentada el 25 de Junio de 2004, la cual reivindica la prioridad para la Solicitud Estadounidense No. de serie 10/316,127, titulada SYSTEMS AND METHODS FOR TREATING PATIENTS WITH PROCESSED LIPOASPIRATE CELLS, presentada el 9 de Diciembre de 2002, las cuales son todas comúnmente asignadas y los contenidos de todas las cuales son expresamente incorporadas en este documento por referencia .

Ejemplo 1: Expresión del Factor de Crecimiento Angiogénico, VEGP por Células Regenerativas. El Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF) es uno de los reguladores clave de la angiogénesis (Hagy, et al., 2003; Folkman, 1995). El Factor de Crecimiento de Placenta, otro elemento de la familia VEGF, juega un papel similar tanto en angiogénesis como en arterogénesis . Específicamente, el transplante de células (PIGF +/+) de tipo nativo en un ratón PIGF agénico resta la capacidad para inducir recuperación rápida de isquemia del miembro posterior (Scholz et al., 2003). Se da la importancia de angiogénesis y arterogénesis al proceso de revascularización, se examina la expresión PIGP y VEGF por las células regenerativas de la presente invención usando un ensayo ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN) usando las células regenerativas derivadas del adiposo de tres donadores . Un donador tiene una historia de hiperglicemia y diabetes Tipo 2 (una condición altamente asociada con la enfermedad microvascular y macrovascular) . Las células regenerativas de cada donador se colocaron a 1,000 células/cm2 en medio DMEM/F-12 suplementado con FCS al 10% y HS al 5% y se hicieron crecer hasta confluencia. Las muestras del sobrenadante se tomaron y ensayaron para expresión de proteina PIGF y VEGF. Como se muestra en las Figuras 16A y 16B, los resultados demuestran expresión robusta de tanto VEGF (Figura 16A) como PIGF (Figura 16B) por las células regenerativas derivadas del adiposo de la invención. En un estudio separado, se midió la cantidad relativa de angiogénico relacionado a citosinas secretadas por células regenerativas cultivadas de los ratones adultos normales. Las células regenerativas se cultivaron en alfa-MEM con FEBS al 10% a cinco días más allá de la confluencia celular, tiempo en el cual el medio de cultivo celular se colectó y evaluó por análisis de series de anticuerpo (Serie II de Anticuerpo de Citosina de Ratón RayBio® (RayBiotech, Inc.). Se detectaron angiogénicos siguientes relacionados a factores de crecimiento: Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF) , bFGF, IGF-II, Eotaxina, G-CSF, GM-CSF, IL-12 p40/p70, IL-12 p70, IL-13, IL-6, IL-9, Leptina, MCP-1, M-CSF, MIG, PF-4, TIMP-1, TIMP-2, TNF- OÍ y Tromhopoyetina . Se evaluó el siguiente angiogénico relacionado a factores de crecimiento y citosinas al menos dos veces comparados al medio de control de blanco con FBS al 10%: Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF) , Eotaxina, G-CSF, IL-6, MCP-1 y PF-4. Estos datos demuestran que las células regenerativas de la presente invención expresan una serie amplia de factores de crecimiento angiogénicos y arteriogénicos . Sin embargo, el descubrimiento que el VEGF y PIGF expresado por un paciente diabético a niveles equivalentes por aquellos pacientes normales, sugiere que los pacientes diabéticos pueden ser candidatos para terapia de angiogenesis por células regenerativas derivadas adiposas autólogas .

Ejemplo 2: Poblaciones Celulares que Contienen Células Regenerativas que Participan en Angiogenesis. Se conocen células endoteliales y sus precursores, células progenitoras endoteliales (CPE) por participar en angiogenesis . Para determinar si los CPE están presentes en células regenerativas derivadas adiposas, células regenerativas derivadas adiposas humanas se evalúan por marcadores de superficie celular EPC, por ejemplo CD-34. Se aislaron CDA por digestión enzimática de tejido adiposo subcutáneo humano. Se incubaron CDA (100 ul) en amortiguado salina de fosfato (PBS) que contiene suero de bovino fetal (FBS) al 0.2%, y se incubaron por 20 a 30 minutos a 4°C con anticuerpos fluorescentemente etiquetados dirigidos hacia los marcadores endoteliales humanos CD-31 (marcadores celulares endoteliales diferenciados) y CD-34 (marcador CPE) , así como ABCG2 humano (ATP que enlaza al cásete transportador) , el cual es selectivamente expresado en células multipotentes . Después del lavado, las células se analizaron en un Clasificador FACSAria (Beckton Dickenson -Immunocytometry) . Entonces se realizaron los datos de adquisición y análisis por el software FACSDiva (BD-Immunocytometry, CA) . Los resultados (no mostrados) muestran que las células regenerativas derivadas adiposas de un adulto saludable expresa el marcador CD-34 CPE y ABCG2 , pero no el marcador CD-31 de célula endotelial . Las células que expresan el marcador CD-34 CPE y ABCG2 se detectaron en frecuencia similar en células regenerativas derivadas de un donador con una historia de diabetes. Para determinar la frecuencia de CPE en células regenerativas derivadas adiposas humano después de su cultivo en medio de diferenciación celular endotelial, las células regenerativas se colocaron en placas revestidas de fibronectina y se cultivaron en medio celular endotelial por tres dias para remover las células endoteliales maduras. Las células no adherentes se removieron y se re-plantaron. Después de 14 días, las colonias se identificaron por teñido con Aglutinina-1 Ulex Europea conjugada con FITC (Vector Labs, Burlingame, CA) y LDL acetilado etiquetado con Dil (Molecular Probes, Eugene, OR) . Como se muestra en la Figura 17, los resultados indican una frecuencia CPE de aproximadamente 500 CPE/106 CDA células. La presencia de CPE dentro de células regenerativas derivadas de tej ido adiposo indica que estas células pueden participar directamente en el desarrollo de vasos sanguíneos nuevos y mejorar la angiogénesis y reperfusión.

EJEMPLO 3: Desarrollo in vitro de Estructuras Vasculares en Células Regenerativas Un ensayo reconocido en la técnica para angiogénesis es un en el cual las células endoteliales crecen en una capa alimentadora de fibroblastos que desarrolla una red compleja de tubos CD31 positivos reminiscente de una red capilar naciente (Donovan et al., 2001) . Puesto que las células regenerativas derivadas adiposas contienen células endoteliales, CPE y otros precursores celulares estromales, se probó la capacidad de estas células regenerativas para formar estructuras como capilares en la ausencia, de una capa alimentadora. Las células regenerativas obtenidas de almohadillas de grasa inguinal de redes capilares desarrolladas en ratones normales dos semanas después del cultivo (Figura 18A) . De forma notable, las células regenerativas de ratones hiperglicémicos con diabetes Tipo 1 inducida por estreptozoticina (STZ) ocho semanas después de la administración de STZ formó redes capilares equivalente como aquellas formadas por células de ratones normales (Figura 18B) . En un estudio subsecuente, las células regenerativas derivadas adiposas en medio de cultivo completo ( -ME suplementado con FCD al 10%) y sin factores de crecimiento adicionales . Estas células regenerativas también formar redes capilares. Además, las estructuras vasculares forman teñido positivo para marcadores celulares endoteliales CD31, CD34 VE-caderin y factor von Willebrand/Factor VIII, pero no el marcador pan-linfocito, CD45. Para comparar la capacidad de células regenerativas de ratones jóvenes contra ancianos para formar redes capilares, las células regenerativas de ratones jóvenes y ancianos normales (edad 1, 12 ó 18 meses) se cultivaron por 2 semanas en medio de cultivo completo (OÍ-MEM suplementado con FCS al 10%) y sin factores de crecimiento adicionales. Se observaron redes como capilares equivalentes en cultivos de células regenerativas de todos los donadores (no mostrados) . Los datos anteriores demuestran que las células regenerativas derivadas adiposas de pacientes normales y diabéticos, así como jóvenes y ancianos, pueden formar estructuras vasculares consistentes con la formación de redes capilares nacientes. Por tanto, las células regenerativas de la invención pueden ser usadas para tratar insuficiencias angiogénicas .

EJEMPLO 4: Desarrollo in vivo de Estructuras Vasculares en Células Regenerativas. El potencial angiogénico in vi tro, aún cuando promete, es de poco valor si las células no ejercen ectividad angiogénica in vivo. La cirugía que induce isquemia de miembro posterior es un modelo in vivo capaz de identificar el potencial angiogénico de una terapia dada. Este modelo se desarrolló en ratones inmunodeficientes (NOD-SCID) el cual tiene la capacidad de células humanas para dirigir la reperfusión que pueda ser observada. Se determinaron los valores de flujo sanguíneo preoperatorio para ambos miembros trasero como se describe anteriormente . La vasculatura de ratones anestesiados se ató con una ligadura de seda 4-0 en los siguientes sitios: 1) artería ilíaca próxima a su bifurcación, 2) solo distal al origen de la artería femoral profunda, 3) solo próxima al ramificado de la artería femoral superficial. Después de la atadura, la vasculatura se removió en bloque. Antes de cerrar la herida, también se ataron colaterales próximamente observables ramificados de las arterias femorales ligadas . Veinticuatro horas después, se inyectaron ratones 129S con células regenerativas derivadas adiposas de ratones sinérgicos 5x10S y se inyectaron ratones NOD y SCID con células regenerativas derivadas adiposas humanas a través de •la vena de la cola. El flujo formó imagen inmediatamente después de la cirugía y a intervalos después del tratamiento usando un Generador de Imágenes de Flujo Doppler Láser (Moor Instruments Inc., Wilmington, DE). Las mediciones se tomaron tres veces por semana por 24 días, se normalizaron al valor pre-operatorio para la extremidad y presentado relativo para la extremidad control (sin operar) . El modelo de isquemia de la extremidad posterior es extremadamente sensible a la cepa de ratón usada. Los ratones NOD SCID son animales inmunodeficientes, que carecen de capacidad para iniciar una respuesta inflamatoria aguda. Para estos ratones, este procedimiento quirúrgico genera severas isquemias de manera tal que dos tercios de animales pierden las estructuras de la extremidad posterior debajo del sitio de la supresión femoral. Animales no tratados con célula pierde cualquier estructura encima del dedo del pie. Aún, para ratones 129S inmunocompetentes, animales no tratados pierden cualquier estructura encima de las falanges y despliegan una capacidad endógena para parcialmente regenerar la reperfusión. Esto puede ser debido a la angiogenesis intrínseca asociada con una respuesta inflamatoria aguda. Esto puede explicar porqué la reperfusión puede ser menos extrema cuando se comparan los animales tratados contra animales de control de cepas diferentes. Sin embargo, los resultados muestran que los ratones tratados con células regenerativas derivadas adiposas muestran perfusión significantemente mejorada comparada a ratones sin tratar de ambas cepas. Para el día 12, el flujo de sangre se reestableció a 50 +11% en ratones NOD-SCID tratados con células regenerativas humanas, comparado a 10±10% de ratones sin tratar (p<0.05) . De forma similar, ratones 129S inmunocompetentes exhiben 80+12% de restablecimiento del flujo al día 14, comparado a 56+4% de ratones sin tratar. Además, la totalidad de la disección de ratones revela la apariencia de vasos colaterales en las extremidades posteriores de ratones tratados con células regenerativas, pero no en aquellas de ratones sin tratar o en las extremidades saludables de cualquiera de los ratones .

EJEMPLO 5. Dosis de CDA incrementada es Asociada con Supervivencia del Injerto Mejorado y Angiogenesis El transplante de tejido adiposo autólogo es un procedimiento relativamente común en cirugía plástica y reconstructiva {Fulton, 1998; Shiffman, 2001}. Sin embargo, este procedimiento es limitado por el hecho que los fragmentos del tejido adiposo se transfiere sin un suministro vascular y, como un resultado, la supervivencia del injerto depende de la neovascularización (Coleman, 1995; Eppley et al., 1990) .Así, en una ruta limitada, el tejido transplantado representa un tejido isquémico. Se realizó un estudio en ratas Fisher en el cual los fragmentos de tejido adiposo se transplantaron en especias subcutáneos sobre el músculo del muslo exterior. La pierna derecha se transplantó con 0.2 g de fragmentos de tejido adiposo solos, la pierna izquierda con 0,2 g de fragmentos de tej ido adiposo suplementado por adición de células troncales derivadas adiposas en tres diferentes dosis (1.7xl05 - 1.3xl06 células/injerto; tres animales por dosis); en esta ruta la pierna contralateral actúa como un control. En un procedimiento, una o más de las dosis pueden ser aplicadas por inyección. Los animales entonces se mantuvieron por un mes después del cual los animales se sacrificaron y los injertos se recuperaron, se pesaron, fijaron en formalina y empaparon en parafina para análisis histológico. Como se muestra en la Figura 9A, los resultados muestran retención mínima de tejido injertado en la pierna control y un incremento en la retención dependiente de la ¦dosis de injerto peso en la pierna tratada. Además, análisis inmunohistoquimicos de los injertos muestran angiogénesis considerable y perfusión en los injertos tratados con células troncales derivadas adiposas (Figura 20B, flechas) . Esto también es asociado con la retención de morfología de tej ido adiposo (Figura 20B) . Por tanto, los Ejemplos 1-5 demuestran que las células regenerativas derivadas adiposas de la invención secretan factores de crecimiento angiogenico y arteriogénico; forman redes capilares nacientes in vi tro; supervivencia mejorada de injertos de grasa; y reperfusión isquémica mejorada. Así, las células regenerativas de la invención son capaces de promover angiogénesis y arteriogénesis , y pueden ser funcionales en tratamiento de múltiples enfermedades con insuficiencias circulatorias subyacentes. Se ha citado en este documento anteriormente un número de publicaciones y patentes. Cada una de las publicaciones y patentes citadas son incorporadas por referencia en su totalidad.

EQUIVALENTES Aquellos expertos en la técnica reconocerán, o serán capaces de determinar el uso no más que la experimentación de rutina, se describen en este documento muchas equivalentes para las modalidades específicas de la invención. Tales equivalentes pretenden ser abarcados por las siguientes reivindicaciones .

Se hace constar que con la relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES
Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Método para tratar una enfermedad vascular periférica (EVP) en un paciente, caracterizado porque comprende administrar al paciente por inyección una concentración de células regenerativas . 2. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el sujeto es humano.
3. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células regenerativas están comprendidas de células troncales.
4. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células regenerativas están comprendidas de células progenitoras .
5. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células regenerativas están comprendidas de una combinación de células troncales y células progenitoras.
6. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células regenerativas se administran para tratar un defecto o trastorno de un vaso sanguíneo.
7. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células regenerativas se administran para tratar la Enfermedad Arterial Periférica (EAP) .
8. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células regenerativas se administran para tratar al menos una de arterieesclerosis, lesión traumática de vasos y arteritidas inflamatorias .
9. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células regenerativas se administran para tratar un defecto o trastorno de tejido extracononario del paciente.
10. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue el método comprende administrar un bolo de las células regenerativas.
11. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende administrar dosis múltiples de células regenerativas.
12. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el método además comprende administrar uno o más factores angiogénicos .
13. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el método además comprende administrar uno o más fármacos inmunosupresivos .
14. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células regenerativas se administran vía al menos una ruta de administración intravenosa, intra-muscular o subcutánea.
15. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue el método además comprende administrar las células regenerativas a la vasculatura del paciente.
16. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células regenerativas se hacen crecer en cultivo celular antes de ser administradas al paciente .
17. Método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porgue las células regenerativas se hacen crecer en condiciones de cultivo que promueven la diferenciación hacia un fenotipo angiogénico.
18. Método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque las condiciones de cultivo celular promueven la diferenciación hacia un fenotipo endotelial.
19. Método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porgue el cultivo celular se realiza en un material de andamiaje para generar dos o tres constructos dimensionales que pueden ser colocados en o dentro del paciente .
20. Método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque el material de andamiaje está caso in vivo.
21. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las células regenerativas se modifican por transferencia de gen de manera tal que la expresión de uno o más genes en las células regenerativas modificadas es alterada .
22. Método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porgue la modificación resulta en alteración del nivel de angiogenesis en el sujeto.
23. Método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la modificación resulta en mejoramiento de suministro de oxígeno de vasos sanguíneos pequeños pre-existentes en el sujeto.
24. Método de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque la modificación resulta en alteración las propiedades de orientación de las células regenerativas .
25. Método para tratar EVP en un paciente, caracterizado porque comprende administrar al paciente por inyección una concentración de células regenerativas derivadas del tejido adiposo, en donde la composición es administrada al mismo sujeto del cual el tejido adiposo se colectó originalmente.
26. Método para promover el crecimiento de vasos sanguíneos en un paciente, caracterizado porque comprende poner en contacto por inyección un área localizada de tejido con una concentración de células regenerativas de manera tal que se induce el crecimiento de vasos sanguíneos dentro del área de tejido.