MXPA05001716A - Conjugados polimericos liberables basados en enlazantes biodegradables alifaticos. - Google Patents

Conjugados polimericos liberables basados en enlazantes biodegradables alifaticos.

Info

Publication number
MXPA05001716A
MXPA05001716A MXPA05001716A MXPA05001716A MXPA05001716A MX PA05001716 A MXPA05001716 A MX PA05001716A MX PA05001716 A MXPA05001716 A MX PA05001716A MX PA05001716 A MXPA05001716 A MX PA05001716A MX PA05001716 A MXPA05001716 A MX PA05001716A
Authority
MX
Mexico
Prior art keywords
carbon atoms
substituted
ch2ch20
group
further characterized
Prior art date
Application number
MXPA05001716A
Other languages
English (en)
Inventor
Richard B Greenwald
Original Assignee
Enzon Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Enzon Inc filed Critical Enzon Inc
Publication of MXPA05001716A publication Critical patent/MXPA05001716A/es

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D333/30—Hetero atoms other than halogen
    • C07D333/34—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
    • C08F8/44—Preparation of metal salts or ammonium salts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/16—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/20—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/22—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/26—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C317/28—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton with sulfone or sulfoxide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/444—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having two doubly-bound oxygen atoms directly attached in positions 2 and 5
    • C07D207/448—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having two doubly-bound oxygen atoms directly attached in positions 2 and 5 with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms, e.g. maleimide
    • C07D207/452—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having two doubly-bound oxygen atoms directly attached in positions 2 and 5 with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms, e.g. maleimide with hydrocarbon radicals, substituted by hetero atoms, directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/08—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D277/12—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/16—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
    • C07K14/43595—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from coelenteratae, e.g. medusae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
    • C08F8/30—Introducing nitrogen atoms or nitrogen-containing groups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

Se proporcionan derivados de bicina polimericos activados, asi como conjugados elaborados con los mismos; tambien se describe metodo para la elaboracion y uso de derivados de bicina.

Description

CONJUGADOS POLIMERICOS LIBERABLES BASADOS EN ENLAZANTES BIODEGRADABLES ALIFATICOS CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se relaciona con polímeros ramificados los cuales son útiles en la extensión de la vida circulante in vivo de materiales biológicamente activos. La invención también se relaciona con conjugados elaborados con los polímeros.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION Algunos de los conceptos iniciales de péptidos de acoplamiento o polipéptidos para poli(etilenglicol) PEG y poli(óxidos de alquileno) hidrosolubles similares se describen en el documento de E.U.A. No. 4,179,337, cuya descripción se incorpora en la presente como referencia. Los polipéptidos modificados con estos polímeros muestran inmunogenicidad/antigenicidad reducida y circular en la corriente sanguínea en los períodos más prolongados en comparación con sus versiones no modificadas. Para conjugar poli(óxidos de alquileno), uno de los grupos hidroxilo de extremo se convierte en un grupo funcional reactivo. Este procedimiento con frecuencia se denomina como "activación" y el producto se denomina como un "poli(óxido de alquileno) activado". Otros polímeros sustancialmente no antigénicos son "activados" o funcionaiizados de manera similar. Los polímeros activados se hacen reaccionar con un agente terapéutico que tiene grupos funcionales nucieofílicos que sirven como sitios de unión. Un grupo funcional nucleofílico comúnmente utilizado como un sitio de unión son los grupos e-amino de lisinas. Los grupos de ácido carboxílico libre, grupos carbonilo activados adecuadamente, porciones carbohidrato oxidadas y grupos mercapto también se han utilizado como sitios de unión. La insulina y la hemoglobina están entre los primeros agentes terapéuticos conjugados. Estos polipéptidos realtivamente grandes contienen varios sitios de unión e-amino. Se pueden unir un número suficiente de polímeros para reducir la inmunogenicidad e incrementar la vida circulante sin pérdida significativa de la actividad biológica. La conjugación excesiva de polímero o la conjugación que involucra un sitio activo de la porción terapéutica en donde se encuentran los grupos asociados con bioactividad, no obstante, con frecuencia resultan en pérdida de la actividad y por lo tanto inutilidad terapéutica. Este con frecuencia es el caso con péptidos de peso molecular menor los cuales tienen pocos sitios de unión que no se asocien con bioactividad. Muchas sustancias terapéuticas no peptídicas también carecen de un número suficiente de sitios de unión para obtener el beneficio de modificación polimérica.
Una sugerencia para resolver los problemas discutidos en lo anterior es utilizar polímeros de peso molecular superior, más grandes. No obstante, estos materiales son difíciles de preparar y costosos de usar. Además, proporcionan poca mejoría sobre los polímeros que se encuentran disponibles más fácilmente. Otra alternativa sugerida es unir dos cadenas de polímero por medio de un anillo triazina a grupos amino de una proteína. Véase, por ejemplo, Enzyme, 26, 49-53 (1981) y Proc. Soc. Exper. Biol. Med., 188, 364-9 (1988). No obstante, la triazina es una sustancia tóxica la cual es difícil de reducir a concentraciones aceptables después de su conjugación. Además, la triazina es un grupo plano y únicamente puede ser sustituida por un polímero doble. La estructura plana inmoviliza rígidamente a las dos cadenas poliméricas en su lugar. Esto limita los beneficios de la conjugación de polímero a aproximadamente lo mismo que lo obtenido al incrementar la longitud de la cadena polimérica. De esta manera, no existen polímeros activados basados en triazina que puedan ofrecer beneficios sustanciales a la técnica. No obstante, en los casos mencionados antes, los conjugados de polímero biológicamente activo se forman teniendo uniones sustancialmente resistentes a hidrólisis (enlaces) entre el polímero y la porción original biológicamente activa. De esta manera, se pueden preparar conjugados de larga duración los cuales se unen permanentemente en vez de los precursores por sí mismos (en donde la molécula original finalmente se libera in vivo). Las patentes de E.U.A. Nos. 5,643,575, 5,919,455 y 6,1 13,906, cedidas comúnmente, describen mejoras adicionales en relación a cadenas múltiples de PEG que comparten un punto de unión común con un nucleófilo vía un enlazante alifático. A diferencia de los conjugados poliméricos ramificados basados en triazina anteriores, los enlazantes alifáticos permiten a los familiarizados con la técnica evitar la toxicidad de la triazina así como proporcionar otras ventajas útiles. Además, durante los años, también se han sugerido diversos métodos de preparación de precursores. Los precursores incluyen derivados químicos de un compuesto original biológicamente activo el cual, cuando se administra, finalmente liberará el compuesto original activo in vivo. El uso de precursores permite al técnico modificar el inicio o duración de acción de un compuesto biológicamente activo in vivo. Los precursores con frecuencia son formas biológicamente inertes o sustancialmente inactivas del compuesto original o activo. La velocidad de liberación del medicamento activo es alterada por varios factores que incluyen la velocidad de hidrólisis del enlazante el cual se une al compuesto original biológicamente activo con el portador precursor. Se han reportado algunos precursores basados en enlaces éster o fosfato. En la mayor parte de los casos, el tipo particular de enlace éster utilizado para formar los precursores proporciona una t-j 2 para hidrólisis de hasta varios días en ambientes acuosos. Aunque uno esperaría que se hubiera formado precursor, la mayor parte del conjugado es eliminado antes de que se obtenga in vivo suficiente hidrólisis. Por lo tanto, sería preferible proporcionar precursores que tengan un enlace que permita una hidrólisis más rápida del enlace polímero-medicamento in vivo de manera que se genere más rápidamente el compuesto del medicamento original. Los precursores basados en enlaces amida o carbamato también han sido reportados. En general, se conocen enlaces amida los cuales son altamente resistentes a hidrólisis. No obstante, recientemente se ha encontrado que las amidas en la parte C terminal de los e-aminácidos se hidrolizan fácilmente a 25°C y pH 7 cuando la parte N terminal está N-hidroxietilado con uno o dos grupos hidroxietilo. La bis ?-2-hidroxietilglicina (bicina) es una molécula clave en tales reacciones de hidrólisis. No obstante, tales grupos bicina no se han utilizado en la síntesis de precursores, especialmente precursores basados en polímero. Aún existe la necesidad de mejorar los precursores basados en polímero. La presente invención resuelve tales necesidades.
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION En un aspecto de la invención, se proporcionan compuestos de fórmula (I): en donde: Ri y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de residuos de polímeros sustancialmente no antigénicos, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, aralquilos y grupos con ramificación terminal; Z se selecciona de entre las porciones transportadas activamente dentro de una célula objetivo, porciones hidrofóbicas, porciones enlazantes bifuncionales y combinaciones de las mismas; Yi-3 se selecciona independientemente de entre O, S o NRn; I_i y l_2 se seleccionan independientemente de enlaces bifuncionales; R3-R-11 , R24 y R25 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroaicoxi de 1 a 6 átomos de carbono; A se selecciona de entre grupos salientes, grupos funcionales y tresiduos de agentes que contienen amina y OH; a y c son cada uno independientemente 0 un número entero positivo; b, d y e son independientemente 0 ó 1 ; y m, n, o y p se seleccionan independientemente de enteros positivos. Otro aspecto de la invención incluye compuestos bifucionales que se forman con por lo menos uno de (R-i) y (R2) es un residuo polimérico el cual incluye un grupo enlazante terminal tanto a como O. En este aspecto de la invención, el técnico es capaz de unir dos equivalentes de un medicamento de un agente biológicamente activo, una proteína, un polipéptido, etc., al sistema bicina polimérico (preferiblemente PEG). Un ejemplo de tal conjugado polimérico bifuncional se ilustra a continuación como la fórmula (lia) y (llb): en donde todas las variables son como se describen en lo anterior e Y4 es O, o NRn y L3 es un enlazante bifuncional. También se proporcionan métodos de preparación de los compuestos de la presente invención y métodos de tratamiento utilizando los mismos. Para propósitos de la presente invención, el término "residuos" se entenderá que significa aquella porción de un compuesto, a la cual se refiere, que permanece después de que ha experimentado una reacción de sustitución en la cual se ha unido la porción portadora de precursor polimérico. Para propósitos de la presente invención, el término "residuo polimérico" o "residuo PEG" se entenderá que significa aquella porción del polímero o de PEG que permanece después de que ha experimentado una reacción con un compuesto biológicamente activo. Para propósitos de la presente invención, el término "alquilo" se entenderá que incluye la forma lineal, ramificada, sustituida, por ejemplo halo-, alcoxi-, nitro-alquilos de 1 a 12 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono o cicloalquilos sustituidos, etc. Para propósitos de la presente invención, el término "sustituido" se entenderá que incluye agregar o sustituir uno o más átomos contenidos dentro de un grupo funcional o un compuesto, con uno o más átomos diferentes. Para propósitos de la presente invención, los alquilos sustituidos incluyen carboxialquilos, aminoalquilos, dialquilaminos, hidroxialquilos y mercaptoalquilos; los alquenilos sustituidos incluyen carboxialquenilos, aminoalquenilos, dialquenilaminos, hidroxialquenilos y mercaptoalquenilos; los alquinilos sustituidos incluyen carboxialquinilos, aminoalquinilos, dialquinilaminos, hidroxialquinilos y mercaptoalquinilos; los cicloalquilos sustituidos incluyen porciones tales como 4-clorociclohexilo; los arilos incluyen porciones tales como naftilo; los arilos sustituidos incluyen porciones tales como 3-bromofenilo; los aralquilos incluyen porciones tales como toluilo; los heteroalquilos incluyen porciones tales como etiltiofeno; los heteroalquilos sustituidos incluyen porciones tales como 3-metoxitiofeno; alcoxi incluye porciones tales como metoxi; y fenoxi incluye porciones tales como 3-nitrofenoxi. También se entenderá que halo- incluye fluoro, cloro, yodo y bromo. El término "cantidades suficientes", para propósitos de la presente invención, significará una cantidad la cual obtiene efecto terapéutico y como tal efecto se entiende por aquellos habitualmente expertos en la técnica. Para propósitos de la presente invención, "eficazmente no antigénicos" y "sustancialmente no antigénicos" significará que incluye todos los materiales poliméricos entendidos en la técnica como aquellos que son sustancialmente no tóxicos o que no inducen una respuesta inmunológica apreciable en mamíferos. Para propósitos de la presente invención, un "número entero positivo" se entenderá que significa un número total o completo positivo, preferiblemente de aproximadamente 1 a 6 y de manera preferible 1 ó 2. Una ventaja principal de la presente invención es que el enlazante bicina permite la manipulación de la velocidad de hidrólisis del precursor y de esta manera se liberan las entidades nativas a diversas velocidades in vivo así como in vitro. Por ejemplo, las diversas porciones bifuncionales, que incluyen aminoácidos o residuos peptídicos cortos se pueden incluir como parte de cualquiera de Li_3 para modular la velocidad de hidrólisis de precursor o captación celular, etc. in vivo e in vitro. Otra ventaja de la invención es que los compuestos dirigidos suministrados vía el sistema de transporte polimérico con frecuencia demuestran un incremento mensurable en la solubilidad acuosa y vida circulante in vivo.
BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS Las figuras 1 -17 ilustran esquemáticamente métodos de formación de compuestos de la presente invención los cuales se describen en la descripción detallada y en los ejemplos.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION A. FORMULA (I) En una modalidad de la invención, se proporcionan compuestos de fórmula (I) en donde: R-i y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de residuos poliméricos sustancialmente no antigénicos, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, aralquilos y grupos ramificantes terminales; Y-i-3 se selecciona independientemente de entre O, S o NR-n; Li y L2 son independientemente enlazantes bifuncionales seleccionados; Z se selecciona de entre las porciones transportadas activamente dentro de una célula objetivo; porciones hidrofóbicas, porciones enlazantes bifuncionales y combinaciones de los mismos; R3-R11, R24 y R25 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos, de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, aritos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono; A se selecciona de entre grupos salientes, grupos funcionales, residuos de agentes que contienen amina tales como proteínas biológicamente activas, péptidos, sustancias quimoterapéuticas, etc. y OH, A y C son cada uno independientemente 0 o un número entero positivo; b, d y e son independientemente 0 ó 1 ; y m, n, o y p se seleccionan independientemente de números enteros positivos. En algunos aspectos preferidos de la invención, uno o más de R-i y R2 incluyen un residuo polimérico sustancialmente no antigénico tal como un grupo polietilenglicol (PEG). Opcionalmente, R1-2 incluye un grupo de remate (grupo de extremo o grupo terminal) designado en la presente como J. Los grupos J preferidos utilizados para remate de polímeros incluyen porciones tales como OH, NH2, SH, C02H, porciones alquilo de 1 a 6 átomos de carbono tal como CH3, y compuestos de fórmula (Illa) y (lllb): en donde todas las variables son como se definen previamente. Con respecto a las otras variables las cuales comprenden las fórmulas de la presente invención, lo siguiente es lo que prefiere en ciertos aspectos de la invención: en ciertos aspectos, R1 y R2 son residuos de óxido de polialquileno y de manera más preferible residuos de polietilenglicol; en otros aspectos, R1 y R2 son grupos ramificados terminales basados en bicina descritos con mayor detalle en lo siguiente, para permitir cargado de la cadena polimérica múltiple; R3-R10 y R24-25 son cada uno hidrógeno; a, b, c, d, m, n, o y p son preferiblemente cada uno 1 ; e es preferiblemente 0 ó 1 ; [_i y ?_2 son cada uno preferiblemente uno de NHCH(CH3)C(0)-, NHCH2C(0)-, NH(CH2CH20)2CH2C(0)-, o NH(CH)3OC(0)-; y Y4 Z es — L3— C — como se define en lo anterior, o alternativamente, Z comprende un residuo aminoácido, un residuo peptídico, un grupo el cual es transportado activamente a una célula objetivo, hidrofóbico o tiene combinaciones de tales propiedades, por ejemplo cuando se combina con grupos A biológicamente activos, se forman precursores los cuales se liberan de la porción polimérica bicina de fórmulasd (I), (II), etc. Véase también el documento de E.U.A., USSN 09/758,993, cedido comúnmente, cuyo contenido se incorpora en la presente como referencia.
B. POLIMEROS SUSTANCIALMENTE NO ANTIGENICOS Como se establece en lo anterior, Ri y R2 son cada uno, preferiblemente, residuos poliméricos hidrosolubles los cuales preferiblemente son sustancialmente no antigénicos tales como óxidos de polialquileno (PAO) y de manera más preferible polietilenglicoles tales como mPEG. Para propósitos de ilustración y sin limitación, la porción de residuo de polietilenglicol (PEG) de Ri se puede seleccionar de entre: J-O-(CH2CH2O)x- J-O-(CH2CH2O)x-CH2C(O)-O-, J-O-(CH2CH2O)x-CH2CH2NR12-, J-O-(CH2CH2O)x-CH2CH2SH-, -OC(0)CH2-0-(CH2CH20)x-CH2C(0)-0-, -NR12CH2CH2-0-(CH2CH20)x-CH2CH2NR12- -SHCH2CH2-0-(CH2CH20)x-CH2CH2SH-. De manera similar, para R2, el residuo PEG se puede seleccionar de entre: J-0-(CH2CH20)x- J-0-(CH2CH20)x-CH2C(0)-0-, J-0-(CH2CH20)x-CH2CH2NRi3-) J-0-(CH2CH20)x-CH2CH2SH-, -OC(0)CH2-0-(CH2CH20)x-CH2C(0)-0-, -NR13CH2CH2-0-(CH2CH20)x-CH2CH2NR13-, y -SHCH2CH2-0-(CH2CH20)x-CH2CH2SH-. En cada uno de los casos anteriores, x es el grado de polimerización, R23-24 se seleccionan individualmente de entre hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 12 átomos de carbono, cicloalquiios de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquiios sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono y J es un grupo de remate como se describe en lo anterior, con respecto a la fórmula II.
En una modalidad preferida particularmente, Ri-2 se selecciona de entre CH3-0-(CH2CH20)x-, CH3-0-(CH2CH20)x-CH2C(0)-0-, CH3-0-(CH2CH20)x-CH2CH2NH- y CH3-0-(CH2CH20)x-CH2CH2SH-, en donde x es un número entero positivo, que preferiblemente se selecciona de manera que el peso promedio de peso molecular sea de aproximadamente 2,000 a aproximadamente 25,000 Da. En aspectos alternativos de la invención, el peso molecular del polímero varía desde varios cientos hasta 40,000 o más, dependiendo de las necesidades del técnico. PEG generalmente se representa por la estructura: — 0-(cH2CH20^h y Ri y R2 preferiblemente comprenden residuos de esta fórmula. El grado de polimerización del polímero (x) puede ser de aproximadamente 10 a aproximadamente 2,300. Esto representa el número de unidades repetidas en la cadena polimérica y depende del peso molecular del polímero. La porción (J) es un grupo de remate como se define en la presente, es decir un grupo el cual se encuentra en la parte terminal del polímero y, en algunos aspectos, se puede seleccionar de cualquiera de NH2, OH, SH, C02H, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono u otros grupos activantes terminales PEG, como tales grupos se entienden por aquellos habituaimente expertos. También son útiles los polipropilenglicoles, derivados de PEG ramificados tales como los descritos en la patente de E.U.A. No. 5,643,575 (la patente '575), cedida comúnmente. Los "PEG de estrella" y los PEG de brazos múltiples tales como los descritos en Shearwater Corporation's 2001 catalog "Polyetylene Glycol and Derivatives for Biomedical Application". La descripción de cada uno de los documentos anteriores se incorpora en la presente como referencia. La ramificación que se proporciona por la patente '575 permite la ramificación secundaria o terciaria del grupo bicina coo una manera de incrementar la carga polimérica en una molécula biológicamente activa o una enzima a partir de un punto único de unión. Se comprenderá que el polímero hidrosoluble puede ser funcionalizado para unión a los grupos de enlace bifuncionales si se requiere de esta manera, sin experimentación indebida. Aunque los PAO y los PEG pueden variar sustancialmente en el peso promedio de peso molecular, preferiblemente, cada uno de R-i y R2 tienen un peso promedio de peso molecular desde aproximadamente 2,000 hasta aproximadamente 25,000 Da en la mayor parte de los aspectos de la invención. Las sustancias poliméricas incluidas en la presente preferiblemente son hidrosolubles a temperatura ambiente. Una lista no limitante de tales polímeros incluyen homopolímeros de óxido de polialquileno tales como polietilenglicol (PEG) o polipropilenglicoles, polioles polioxietilenados, copolímeros de los mismos y copolímeros de bloque de los mismos, con la condición de que se mantenga la hidrosolubilidad de los copolímeros de bloque.
En una modalidad adicional y como una alternativa a los polímeros basados en PAO, cada uno de Ri y R2 se seleccionan opcionalmente de entre uno o más materiales eficazmente no antigénicos tales como dextrano, alcoholes polivinílicos, polímeros basados en carbohidrato, hidroxipropilmet-acrilamida (HPMA), óxidos de polialquileno o copolímeros de los mismos. Véase también la patente de E.U.A. No. 6,153,655, cedida comúnmente, cuyo contenido se incorpora en la presente como referencia. Se comprenderá por aquellos habitualmente expertos en la técnica que se utiliza el mismo tipo de activación al descrito en la presente tanto para PAO como para PEG. Aquellos con habilidad habitual en la técnica se darán cuenta además de que la lista anterior es únicamente ilustrativa y que la totalidad de los materiales poliméricos que tienen las calidades que se describen en la presente se contemplan y que también se contemplan otros derivados de óxido de polialquileno tales como polipropilenglicoles, etc. Los polímeros de la presente invención también se pueden copolimerizar con materiales bifuncionales tales como poli(alquilenglicol)diam¡nas para formar redes poliméricas interpenetradas adecuadas para uso en lentes de contacto permeables, apositos para heridas, dispositivos de suministro de medicamentos y similares. Las limitaciones estéricas y la hidrosolubilidad de tal ramificación se reconocerán fácilmente por aquellos habitualmente expertos en la técnica. No obstante, de manera preferible, el peso molecular de los polímeros ramificados múltiples no debe exceder de 80,000 unidades daltons.
C. GRUPOS ENLAZANTES BIFUNCIONALES: y U En muchos aspectos de la invención, y en particular en la fórmula (I), l_i o L2, o ambos, son grupos enlazantes los cuales facilitan la unión del derivado bicina a las cadenas poliméricas, por ejemplo, Ri o R2 ambas. El enlace proporcionado puede ser directo o a través de grupos de acoplamiento adicionales conocidos por aquellos habitualmente expertos. Otros grupos Lx se mencionan en la especificación y se entiende que se seleccionan de entre los mismos grupos que L-i. En este aspecto de la invención, U preferiblemente se selecciona de entre: -NH(CH2CH20)2CH2C(O)- -NH(CH2)3OC(0)- -(CH2),C(O)-, -NH(CH2)tC(O)-, -NRi9(CH2MCH2CH20)qNHC(O)- -(CH2CH2O)tNHC(O)- -O(CR14R15)tNHC(O)- - RigtCRuR^qCÍOJNI-KCR^R^tCÍO)- -0(CH2),OC(O)- -NRi9(CH2)t(CH2CH20)qNHC(O)- -NRi9(CH2CH2O)rOC(O)- -0(CR14R15)tNHC(O)- -0(CR14R15)tOC(0)- -(CH2CH20)tNHC(0)- en donde Ri4-Ri7 y R19 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono; y R18 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloaiquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, aicoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, N02, haloalquilo y halógeno; y t y q se seleccionan individualmente de números enteros positivos, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 4. De manera similar, L2 se puede seleccionar de entre: -NH(CH2CH20)2CH2-C(0)- -NH(CH2)3OC(0)- -(CH2)vC(0)-, -C(0)(CH2)vNHC(0)-, -NH(CH2)vC(0)-, -NR25(CH2)v(CH2CH20)wNHC(0)- -(CH2CH20)vNHC(0)-, -O(CR20R2i)vNHC(O)-, -NR25(CR2oR2i)w(0)CNH(CR22C23)vC(0)- -0(CH2)vOC(0)- -NR25(CH2)v(CH2CH20)wNHC(0)- -NR25(CH2CH20)v-0-C(0) -O(CR20R2i)vNHC(O)- -O(CR20R2i)vOC(O)- -(CH2CH20)vNHC(0)- en donde R20-R23 y R25 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, y R24 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, N02, haloalquilo y halógeno, y v y w son individualmente números enteros positivos seleccionados, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 4. En otros aspectos de la invención, l_i o L2 pueden incluir un residuo aminoácido. El aminoácido se puede seleccionar de cualquiera de los L-aminoácidos que se presentan de manera natural, por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, glicina, serina, treonina, metionina, cisteína, fenilalanina, tirosina, triptofano, ácido aspártico, ácido glutámico, lisina, arginina, histidina, prolina y combinaciones de los mismos, por mencionar algunos. Cuando Li o L2 incluyen un péptido, el péptido varía en tamaño, por ejempo, de aproximadamente 2 a aproximadamente 10 residuos aminoácidos. En una modalidad preferida, el péptido es Gly-Phe-Leu-. De manera alternativa, se puede agregar glicina al tripéptido mencionado antes después de la leucina para formar un péptido de 4 residuos. Los residuos aminoácidos preferiblemente son de la fórmula: en donde X' es O, S o NR26, Ys es O, S o NR27, y F 6> R27 y R28 se seleccionan independientemente del mismo grupo que aquel el cual define a R3, pero cada uno es preferiblemente H o alquilo inferior; y si f es un número entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 10, y es preferiblemente 1. Los derivados y análogos de los aminoácidos que se presentan de manera natural, así como diversos aminoácidos (D o L) que no se presentan de manera natural, conocidos en la técnica, hidrofóbicos o no hidrofóbicos, también se contemplan dentro del alcance de la invención. Simplemente a modo de ejemplo, los análogos y derivados de aminoácidos incluyen: ácidos 2-aminoadípico, ácido 3-aminoadípico, ß-alanina, ácido ß-aminopropiónico, ácido 2-aminobutírico, ácido 4-aminobutírico, ácido piperidínico, ácido 6-aminocaproico, ácido 2-aminoheptanoico, ácido 2-aminoisobutírico y ácido 3-aminoisobutírico, ácido 2-aminopimélico, ácido 2,4-diaminobutírico, desmosina, ácido 2,2-diaminopimélico, ácido 2,3-diaminopropiónico, n-etilglicina, N-etilasparagina, 3-hidroxiprolina, 4-hidroxiprolina, isodesmosina, alo-isoleucina, N-metilglicina, sarcosina, N-metilisoleucina, 6-N-metil-lisina, N-metilvalina, norvalina, norleucina, ornitina y otros demasiado numerosos para mencionarlos, que se incluyen en 63 Fed. Reg., 29620, 29622, que se incorporan en la presente como referencia. Los péptidos cortos son, por ejemplo, péptidos que varían de 2 a aproximadamente 10 o más residuos aminoácidos, como se menciona en lo anterior.
D. PORCIONES Z Y SU FUNCION En un aspecto de la invención, Z es L3-C(=Y4) en donde L3 son enlazante bifuncional que se selecciona de entre el grupo el cual define l_i y l_2, e Y4 se selecciona de entre los mismos grupos a aquel que define a Y1-3. En este aspecto de la invención, el grupo Z sirve como el enlace entre los grupos A y el resto de la forma de transporte bic a. En otros aspectos de la invención, Z es una porción que es transportada activamente dentro de una célula objetivo, una porción hidrofóbica y combinaciones de los mismos. Aunque Z es preferiblemente monovalente, Z opcionalmente puede ser bivalente o multivalente de manera que permite la unión de más de un grupo A al polímero basado en bicina. Con el fin de obtener el transporte activo, Z puede incluir un aminoácido o un residuo peptídico, tal como cualquiera de los descritos en lo anterior con respecto a l_i y L2, un residuo azúcar, un residuo de ácido graso, un alquilo de 6 a 18 átomos de carbono, un arilo sustituido, un heteroarilo, — C(=0), — C(=S) o — C(=NR29), en donde R29 es H, alquilo inferior, etc. Este aspecto de la invención se basa ampliamente en el principio de que los materiales biológicamente activos adecuados para incorporación en los conjugados de precursor basados en bicina-polímero en sí mismos pueden ser sustancias/compuestos los cuales no son activos después de liberación hidrolítica de la composición unida a bicina, pero los cuales se volverán activos después de experimentar ciertos procesos/reacciones químicas. Dentro de esta modalidad, un agente, péptido, polipéptido, etc., terapéutico o de diagnóstico que se suministra a ia corriente sanguínea por el sistema polimérico basado en bicina permanecerá inactivo hasta que entre o que sea transportado activamente al interior de una célula objetivo de interés, por medio de la cual se activa mediante química intracelular, por ejemplo, mediante una enzima o un sistema enzimático presente en dicho tejido o célula. Los precursores de este aspecto de la invención se preparan de manera que la hidrólisis ¡n vivo del conjugado basado en bicina-polímero separe al conjugado de manera que libere el material biológico activo (denominado A en la presente), en el fluido extracelular, mientras que aún se encuentra unido a la porción Z. Los materiales biológicamente activos de la invención, a este respecto, de manera preferible aunque no exclusiva son agentes terapéuticos o de diagnóstico de moléculas pequeñas. Por ejemplo, una combinación potencial de Z-A es leucina-doxorrubicina, otro es camptotecina unida a aminoácido o paclitaxel y el tejido que se va a tratar es tejido tumoral. Sin intentar unirse a teoría o hipótesis alguna respecto a la manera en que la invención puede funcionar, se considera que, dependiendo de la porción adicional seleccionada como un mejorador de transporte, la velocidad de transporte de un material biológicamente activo al interior de las células tumorales es por el suministro de un material biológicamente activo al interior del paso de tejido extracelular, por ejemplo de un tejido que muestra un efecto de EPR, en una forma protegida o de transporte mejorado.
En una opción adicional, el mejorador de transporte (Z) se selecciona de entre sustratos conocidos para un sistema de transporte de membrana celular. Simplemente por medio de los ejemplos, se sabe que las células transportan activamente ciertos nutrientes y factores endocrinos y similares, tales como nutrientes o análogos de los mismos, que se utilizan fácilmente para mejorar el transporte activo de un material biológicamente eficaz al interior de las células objetivo. Los ejemplos de estos nutrientes incluyen residuos aminoácidos, péptidos, por ejemplo, péptidos cortos que varían en tamaño de aproximadamente 2 a aproximadamente 10 residuos o más, azúcares sencillos y ácidos grasos, factores endocrinos y similares. Los péptidos cortos son, por ejemplo, péptidos que varían de 2 a aproximadamente 10, o más residuos aminoácidos, como se menciona en lo anterior. En esta modalidad de la invención, se considera que tales mejoradores de transporte de péptidos no necesitan ser hidrofóbicos, pero se considera que funcionan de otras maneras para mejorar la captación o para proteger a los agentes de moléculas pequeñas enlazados de hidrólisis prematura en la corriente sanguínea general. Por ejemplo, los mejoradores de transporte peptídico, y otros mejoradores de transporte de intervalos de peso molecular similar, se considera que impiden estéricamente la separación del agente biológicamente activo por enzimas hidrolíticas basadas en plasma, pero que después se separan dentro de una célula objetivo por diversos péptidos o proteasas, tales como catepsinas.
En ciertos aspectos preferidos, Z es una porción hidrofóbica. Sin desear unirse a teoría o hipótesis alguna respecto a de qué manera la hidrofobicidad contribuye con la eficacia, se considera que una porción hidrofóbica inhibe la separación extracelular del mejorador de transporte alejándose del agente biológico activo, al inhibir el ataque de enzimas hidrolíticas, etc. presentes en el espacio de tejido extracelular, por ejemplo, en el plasma. De esta manera, algunos mejoradores de transporte preferidos incluyen, por ejemplo, aminoácidos hidrofóbicos tales como alanina, valina, leucina, isoleucina, metionina, prolina, fenilalanina, tirosina y triptofano, así como derivados que no se presentan de manera natural y análogos de los mismos, como se menciona en lo anterior. En una opinión adicional, el mejorador de transporte es una porción orgánica hidrofóbica. Simplemente a modo de ejemplo, la porción orgánica es de 6 a 18 átomos de carbono, o más grande de alquilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido. El mejorador de transporte de la porción orgánica también se contempla para que abarque e incluya grupos funcionales orgánicos que incluyen, por ejemplo — C(=S) o — C(=0).
E. GRUPOS DE FORMULA (I) 1. Grupos salientes En aquellos aspectos en donde A es un grupo saliente, I porciones adecuadas incluyen, sin limitación, grupos tales como hidroxibenzotriazolilo, halógeno, n-hidroxiftalimidilo, p-n¡trofenox¡, ¡midazolilo, N-h¡droxisuccin¡midilo; tiazolidiniltiona, O-acilureas o otros grupos salientes adecuados serán evidentes para aquellos habitualmente expertos en la técnica. Para propósitos de la presente invención, se entiende que los grupos salientes son aquellos grupos los cuales son capaces de reaccionar con un nucleófilo que se encuentra en el objetivo deseado, es decir una porción biológicamente activa, un separador bifuncional, un intermediario, etc. De esta manera, los objetivos contienen un grupo para desplazamiento, tales como ¡os grupos NH2 que se encuentran en proteínas, péptidos, enzimas, moléculas terapéuticas sintetizadas natural o químicamente tales como doxorrubicina, separadores tales como diaminas monoprotegidas tales como el compuesto 42. Los compuestos de la presente invención también incluyen un grupo separador entre el grupo bicina y el grupo saliente o el objetivo unido (medicamento) si así se desea. La porción separadora puede ser un heteroalquilo, alcoxi o alquilo que contiene hasta 18 átomos de carbono o incluso una cadena polimérica adicional. Las porciones separadores se pueden agregar utilizando técnicas de síntesis estándar. Debe entenderse que estas porciones seleccionadas para (A) también pueden reaccionar con otras porciones además de los nucleófilos biológicamente activos. 2. Grupos funcionales A también puede ser un grupo funcional. Los ejemplos no limitantes de tales grupos funcionales incluyen maleimidilo, vinilo, residuos de sulfona, hidroxi, amino, carboxi, mercapto, hidrazida, carbazato y similares, los cuales se pueden unir a la porción bicina a través de un separador que contiene amina. Una vez unido a la porción bicina, el grupo funcional (por ejemplo maleimida) se puede utilizar para unir la bicina-polímero a un objteivo tal como el residuo cisteína de un polipéptido, aminoácido o un separador peptídico, etc. 3. Residuos de compuestos que contienen amina En algunos aspectos de la invención, A es un residuo de un compuesto que contiene amina. Una lista no limitante de tales compuestos adecuados incluyen residuos de compuestos orgánicos, enzimas, proteínas, polipéptidos, etc. Los compuestos orgánicos incluyen, sin limitación, porciones tales como compuestos de antracicllna que incluyen daunorrubicina, doxorrubicina; mostaza de p-aminoanilina, melfalano, Ara-C (arabinósido de citosina) y compuestos antimetabólitos relacionados, por ejemplo gemcitabina, etc. De manera alternativa, A puede ser un residuo de un agente cardiovascular que contiene amina, un antineoplásico, un antiinfeccioso, un antimicótico tal como nistatina y anfotericina B, un ansiolítico, un agente gastrointestinal, un activador del sistema nervioso central, un analgésico, un agente para la fertilidad, un anticonceptivo, un antiinflamatorio, un agente esteroideo, agente, etc. Además de lo anterior, A también puede ser un residuo de una enzima, proteína, polipéptido, etc. Las proteínas, polipéptidos, enzimas, péptidos y similares adecuados que tienen por lo menos un grupo disponible para unión de polímero, por ejemplo, una e-amino, cisteína, tio, N-amino terminal incluyen materiales los cuales pueden tener actividades fisiológicas o farmacológicas así como aquellos los cuales son capaces de catalizar reacciones en solventes orgánicos. El único requerimiento adicional de los materiales que contienen amina es que mantengan por lo menos cierta porción de la actividad asociada con la proteína, enzima, péptido, etc. no modificados, ya sea después de unión al transporte polimérico o, si es pertinente, después de que el compuesto original ha sido hidrolizado y liberado. Las proteínas, polipéptidos y péptidos de interés incluyen, pero no se limitan a hemoglobina, proteínas séricas tales como factores sanguíneos que incluyen a los factores VII, VIII y IX; inmunoglobulinas, citocinas tales como interleucinas, es decir, IL-1 a IL- 3, etc., interferones a, ß y y, factores estimuladores de colonias que incluyen factores estimuladores de colonias de granulocitos, factores de crecimiento derivados de plaquetas y proteína activadora de fosfolipasa (PLAP). Otras proteínas de interés biológico o terapéutico general incluyen insulina, proteínas vegetales tales como lectinas y ricinas, factores de necrosis tumoral y proteínas relacionadas, factores de crecimiento tale como factores de crecimiento transformante tales como TGF a o TGF ß y factores de crecimiento epidérmicos, hormonas, somatomedinas, eritropoyetina, hormonas pigmentarias, factores de liberación hipotalámico, hormonas antidiuréticas, prolactina, gonadotropina coriónica, hormona estimulante del folículo, hormona estimulante de la tiroides, activador de plasminógeno tisular y similares. Las inmunoglobulinas de interés incluyen IgG, IgE, IgM, IgA, IgD y fragmentos de las mismas. Algunas proteínas tales como las interleucinas, interferones y factores estimulantes de colonias también existen en formas no glicosiladas, habitualmente como un resultado del uso de técnicas recombinantes. Las versiones no glicosiladas también están entre las proteínas de la presente invención. Las enzimas de interés incluyen enzimas específicas para carbohidratos, enzimas proteolíticas, óxidos reductasas, transferasas, hidrolasas, Nasas, isomerasas y ligasas. Sin limitarse a alguna enzima en particular, los ejemplos de enzimas de interés incluyen asparaginasa, arginasa, arginina desaminasa, adenosina desaminasa, superóxido dismutasa, endotoxinasas, catalasas, quimiotripsina, lipasas, uricasas, difosfatasa de adenosina, tirosinasa y bilirrubina oxidasa. Las enzimas específicas para carbohidratos de interés incluyen glucosaoxidasas, glucodasas, galactosidasas, glucocerebrosidasas, glucouronidasas, etc.
También se incluye en la presente cualquier incursión de polímero biológico que demuestre bioactividad in vivo. Esto incluye secuencias de aminoácidos, ácidos nucleicos (ADN, ARN), ácidos nucleicos peptídicos (PNA), oligonucleótidos, fragmentos de anticuerpos, proteínas de unión de cadena única, véase, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 4,946,778, cuya descripción se incorpora en la presente como referencia, moléculas de unión que incluyen fusiones de anticuerpos o fragmentos, anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales y anticuerpos catalíticos. Las proteínas o porciones de las mismas se pueden preparar o aislar mediante la utilización de técnicas conocidas por aquellos habitualmente familiarizados en la técnica tales como cultivo de tejido, extracción de fuentes animales o por metodologías de ADN recombinante. Las fuentes transgénicas de las proteínas, polipéptidos, secuencias de aminoácidos y similares también se contemplan. Tales materiales se obtienen a partir de animales transgénicos, es decir, ratones, cerdos, vacas, etc., en donde las proteínas se expresan en leche, sangre o tejidos. Los insectos transgénicos y sistemas de expresión de baculovirus también se contemplan como fuentes. Además, también están dentro del alcance de la invención versiones mutantes de proteínas tales como interferones mutantes. Otras proteínas de interés son proteínas de alérgenos tales como ambrosía, antígeno E, veneno de abeja, alérgeno de ácaro y similares. Lo anterior es ilustrativo de las proteínas las cuales son adecuadas para la presente invención. Debe entenderse que estas proteínas, como se definen en la presente, no se mencionan específicamente sino que tienen un grupo amino disponible y también están diseñadas y están dentro del alcance de la presente invención. En un aspecto preferido de la invención, el compuesto que contiene amino es un compuesto biológicamente activo que es adecuado para uso medicinal o de diagnóstico en el tratamiento de animales, por ejemplo mamíferos que incluye a humanos, para condiciones para las cuales se desea dicho tratamiento. La lista anterior se indica como ilustrativa y no limitante para los compuestos los cuales pueden ser modificados. Aquellos con habilidad habitual se darán cuenta que otros compuestos/composiciones pueden ser modificados de manera similar sin experimentación indebida. Debe entenderse que aquellos materiales biológicamente activos no mencionados específicamente pero que tengan grupos de unión adecuados también se considera que están dentro del alcance de la presente invención.
F. SINTESIS DE POLIMEROS UNIDOS A BICINA La síntesis de compuestos poliméricos basados en bicina específicos se establece en los ejemplos. Regresando ahora a la figura 1 para propósito de ilustración, un método preferido incluye: 1) sintetizar una bicina protegida con ácido tal como: en donde tBu es un grupo protector y todas las demás variables son iguales a lo establecido previamente para la fórmula (I) 2) unir un separador bifuncional bloqueado a cada hidroxilo de la molécula de bicina, 3) desproteger el intermediario resultante y hacerlo reaccionar con un polímero activado tal como PNP-PEG o SC-PEG bajo condiciones de acoplamiento básicas, 4) desproteger el ácido bloqueado y posteriormente activar el ácido con un grupo activador adecuado tal como tiazolidiniltiona, bajo condiciones de acoplamiento. Se comprenderá que se pueden utilizar otros grupos protectores reconocidos en la técnica en lugar de terbutilo. El PEG o el derivado de bicina y polímero activado de esta manera ahora es capaz de reaccionar y de conjugarse a un medicamento, péptido, separador, etc. Una lista no limitante de agentes de acoplamiento adecuados incluyen 1 ,3-diisopropilcarbodiimida (DIPC), cualquier dialquilcarbodiimida adecuada, haluros de 2-halo-1-alqu¡lpiridinio (reactivos de Mukaiyama), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC), anhídrido cíclico de ácido propanfosfónico (PPACA) y diclorofosfatos de fenilo, etc., los cuales están disponibles, por ejemplo, de fuentes comerciales tales como Sigma-Aldrich Chemical o se sintetizan utilizando técnicas conocidas. Preferiblemente, los sustituyentes se hacen reaccionar en un solvente inerte tal como tetrahidrofurano (THF), acetonitrilo (CH3CN), cloruro de metileno (DCM), cloroformo (CHCI3), dimetilformamida (DMF) o mezclas de los mismos. Las bases adecuadas incluyen dimetilaminopiridina (DMAP), düsopropiletilamina, piridina, trietilamina, KOH, terbutóxido de potasio y NaOH, etc. Las reacciones habitualmente se llevan a cabo a una temperatura de aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 22°C (temperatura ambiente). De manera más específica, un método para formar los derivados de bicina activados incluye: 1 ) formar bis ?-2-hidroxietilglicina con terbutiléster para proporcionar el intermediario: 2) conjugar los grupos N-hidroxietilo con aminoácidos protegidos u otros enlazantes (L-i) protegidos para proporcionar intermediarios adicionales: 3) posteriormente, los separadores bifuncionales se desprotegen y el intermediario experimenta PEGilación (adición de grupos PEG), y 4) el grupo bloqueador remanente se desprotege y se activa el derivado de bicina. Sin importar la ruta seleccionada, algunos de los compuestos preferidos los cuales resultan de las técnicas de síntesis descritas en la presente incluyen: en donde Ai es un grupo saliente tal como u otros grupos salientes tales como los descritos en lo anterior en la sección E 1. La reacción de los polímeros activados por bicina, con objetivos adecuados resulta en la transformación del polímero activado en conjugados, transformación de Ai en A2, en donde A2 es un residuo de un porción biológicamente activa, un separador, etc.
G. CARGA DE POLIMERO MULTIPLE En un aspecto adicional de la invención se proporcionan compuestos poliméricos ramificados múltiples basados en bicina. En particular, el derivado de bicina base se modifica adicionalmente para incluir uno o más grupos de ramificación terminal. Preferiblemente, los grupos de ramificación terminal son de la fórmula: en donde: Y5 es O, S o NR46; l_4 es un enlazante bifuncional que se selecciona del mismo grupo que aquel que define a L-i ; R4o-R46 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono; j y k son cada uno independientemente 0 o un número entero positivo; q es 0 ó 1 ; g, h, v y w se seleccionan independientemente de números enteros positivos; R50 se selecciona del grupo que consiste de residuos poliméricos sustancialmente no antigénicos, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, aralquilos de 1 a 6 átomos de carbono, y en donde: L-5 es un enlazante bifuncional que se selecciona del mismo grupo que aquel que define a y R6o se selecciona del grupo que consiste de residuos poliméricos sustancialmente no antigénicos, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono y aralquilos de 1 a 6 átomos de carbono. Los derivados de bicina ramificados resultantes son de la estructura de fórmula: en donde todas las variables son como se definen previamente en lo anterior. Como se demuestra en lo siguiente y en los ejemplos, el intermediario de derivado de bicina que contiene la amina primaria bloqueada se hace reaccionar con dos equivalentes de un polímero de bicina activado para formar un sistema de polímero de bicina que contiene hasta cuatro cadenas de polímero las cuales están unidas en un punto único de unión sobre la molécula biológicamente activa, enzima, objetivo, etc. El procedimiento se puede repetir para formar un derivado con ocho cadenas al hacer reaccionar dos equivalentes del derivado de bicina polimérico de cuatro cadenas descrito antes, con un equivalente del derivado de bicina de amina primaria bloqueado.
H. . SISTEMAS ENLAZANTES MIXTOS En otro aspecto de la invención, se proporcionan sistemas de transporte poliméricos basados en bicina que contienen un segundo tipo, diferente, de sistema polimérico unido a la porción biológicamente activa denominada en la presente como A. El enlazante mixto de sistemas híbridos se puede preparar por lo menos dos métodos. Por ejemplo, el sistema basado en bicina se puede sintetizar primero como se discute en lo anterior y después la porción biológicamente activa unida a bicina es pegilada utilizando cualquier polímero activado reconocido en la técnica tal como tiazolidiniltiona-, succinimidilcarbonato- o maleimida activada por PEG. De manera alternativa, es que el material biológicamente activo puede pegilar primero y después se hace reaccionar con un sistema basado en bicina activada descrito en lo anterior. Se comprenderá que el enlazante mixto o los sistemas híbridos serán más adecuados para proteínas, enzimas y similares en donde existen grupos amino múltiples (por ejemplo grupos amino e de lisina o grupos N-terminales), están disponibles grupos cisteina o tio para unión de los diversos enlazantes poliméricos. Para propósitos de la presente invención, los "polímeros activados" se entiende que incluyen polímeros que contienen uno o más grupos terminales los cuales son capaces de reaccionar con uno o más grupos amino, nitrógeno de histidina, grupos carboxilo, grupos sulfhidrilo, etc., que se encuentran sobre enzimas, proteínas, etc., así como tales grupos que se encuentran sobre compuestos orgánicos preparados sintéticamente. Se apreciará además que los grupos activantes también se pueden utilizar para formar los sistemas de bisina activados descritos en lo anterior. El grupo terminal activante por lo tanto es cualquier grupo el cual facilita la conjugación de los polímeros con el material biológicamente activo, es decir, la proteína, enzima, etc., ya sea antes o después de que el sistema de transporte de precursor doble de la presente invención haya sido sintetizado. Véase, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 4,179,337 y la patente de E.U.A. No. 6,113, 906, cedida comúnmente, la descripción de cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia.
I. DIAGNOSTICO IN VIVO Un aspecto adicional de la invención proporciona los conjugados de la invención opcionalmente preparados con una etiqueta de diagnóstico unida al mejorador de transporte descrito en lo anterior, en donde la etiqueta se selecciona para propósitos de diagnóstico o de formación de imagen. Por lo tanto, se prepara una etiqueta adecuda al unir cualquier porción adecuada, por ejemplo, un residuo aminoácido, a cualquier isótopo emisor estándar de la técnica, etiqueta radio opaca, etiqueta de resonancia magnética o alguna otra etiqueta isotópica no radioactiva adecuada para formación de imágenes por resonancia magnética, marcas de tipo de fluorescencia, marcas que muestran colores visibles b capaces de fluorescencia bajo estimulación ultravioleta, infrarroja o electroquímica, para permitir la formación de tejido de tumor durante procedimientos quirúrgicos, etc. Opcionalmente, la etiqueta de diagnóstico se incorpora dentro, y se enlaza a una porción terapéutica conjugada, lo que permite el monitoreo para la distribución del material terapéutico biológicamente activo dentro del paciente animal o humano. En un aspecto adicional de la invención, los conjugados etiquetados de la invención se preparan fácilmente, por métodos conocidos en la técnica, con cualquier marca adecuada que incluya, por ejemplo marcas de radioisótopos. Simplemente a modo de ejemplo, estos incluyen i31Yodo, 25Yodo, 99mTecnecio o 11 Indio para producir agentes radioinmunoscintigráficos para captación selectiva en células tumorales in vivo. Por ejemplo, existen muchos métodos conocidos en la técnica de enlazar el péptido Tc-99m que incluyen, simplemente a modo de ejemplo, aquellos mutados por las patentes de E.U.A. Nos. 5,328,679; 5,888,474; 5,997,844 y 5,997,845, incorporadas como referencia en la presente. Ampliamente, para localización anatómica del tejido de tumor en un paciente, la etiqueta conjugada se administra a un paciente o animal sospechoso de tener un tumor. Después de permitir tiempo suficiente para permitir que la inmunoglobulina marcada se localice en uno o varios sitios con tumor, se detecta la señal generada por la marca, por ejemplo, visualmente, por radiografía de rayos X, tomografía transaxial computarizada, MRI, por detección instrumental de una etiqueta luminiscente por un dispositivo de exploración fotográfico tal como una cámara para rayos ? o cualquier otro método o instrumento apropiado para la naturaleza de la etiqueta seleccionada. La señal detectada después se convierte a una imagen o una determinación anatómica o fisiológica del sitio de tumor. La imagen vuelve posible localizar el tumor ¡n vivo y diseñar una estrategia terapéutica apropiada. En aquellas modalidades en donde la porción etiquetada en sí misma son agentes terapéuticos, la señal detectada proporciona evidencia de localización anatómica durante el tratamiento, lo que proporciona el resultado inicial para el diagnóstico de seguimiento y las intervenciones terapéuticas.
J. METODOS DE TRATAMIENTO Otro aspecto de la presente invención proporciona métodos de tratamiento para diversas condiciones médicas en mamíferos. Los métodos incluyen administrar al mamífero en necesidad de dicho tratamiento, una cantidad eficaz de un precursor, tal como un conjugado de PEG unido a doxorrubicina-bicina, el cual ha sido preparado como se describe en la presente. Las composiciones son útiles, entre otras cosas, para tratar enfermedades neoplásicas, reducir la carga de tumor, evitar metástasis de neoplasmas y evitar recurrencias de tumor/crecimientos neoplásicos en mamíferos. La cantidad del precursor administrado dependerá de la molecular original, por ejemplo péptido, polipéptido, proteína, enzima, etcétera incluida en la presente. Generalmente, la cantidad de precursor utilizado en los métodos de tratamiento es aquella cantidad la cual obtiene eficazmente el resultado terapéutico deseado en mamíferos. Naturalmente, las dosificaciones de ios diversos compuestos precursores variarán en cierta medida dependiendo del compuesto original, la velocidad de hidrólisis in vivo, el peso molecular del polímero, etcétera. Aquellos expertos en la técnica determinarán la dosificación óptima del precursor seleccionado en base en la experiencia clínica y la indicación de tratamiento. Las dosificaciones reales serán evidentes para los técnicos sin experimentación indebida. Las composiciones de la presente invención se pueden incluir en una o más composiciones farmacéuticas adecuadas para administración a mamíferos. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una solución, suspensión, tableta, cápsula o similar, preparada de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica. También se contempla que la administración de tales composiciones puede ser por vía oral o parenteral, en base en las necesidades del técnico. Se puede utilizar una solución o suspensión de la composición, por ejemplo, como un vehículo portador para inyección o infiltración de la composición por cualquiera de los métodos conocidos en la técnica, por ejemplo por inyección intravenosa, intramuscular, subdérmica y similares. Tal administración también puede ser por infusión dentro de un espacio o cavidad corporales, así como por inhalación o por vía intranasal. No obstante, en aspectos preferidos de la invención, los precursores se administran parenteralmente a mamíferos en necesidad de los mismos.
EJEMPLOS Los siguientes ejemplos sirven para proporcionar una apreciación adicional de la invención pero de ninguna manera significa que limitan el alcance eficaz de la invención. Los números subrayados y en negrillas mencionados en los ejemplos corresponden a los que se muestran en las figuras 1 a 17.
Procedimientos Generales. Todas las reacciones se llevan a cabo bajo una atmósfera de nitrógeno seco o argón. Se utilizan reactivos comerciales sin purificación adiciona. Todos los compuestos PEG se secan al vacío o por destilación azeotropica a partir de tolueno antes de su uso. Los espectros de RMN se obtienen utilizando un espectrómetro de RMN Varían MercuryMR300 y cloroformo deuterado como el solvente, a menos que se especifique de otra manera. Los desplazamientos químicos (d) se reportan en partes por millón (ppm) de campo descendente a partir de tetrametilsilano (TMS).
Método de CLAR. Las mezclas de reacción y la pureza de los intermediarios y los productos finales se monitorean por un instrumento de CLAR Beckman Coulter System GoldMR utilizando una columna en fase inversa ZOBAXMR300 SB C-8 (150 x 4.6 mm) o una columna en fase inversa Phenomenex Jupiter^OOA C18 (150 x 4.6 mm) con un detector de radiación UV de longitud de onda múltiple, utilizando un gradiente de 30-90% de acetonitrilo en ácido trifluoroacético (TFA) 0.5% a una velocidad de flujo de 1 ml/min.
EJEMPLO 1 Síntesis del Compuesto (3) Una solución de 1 (24.0 g, 0.228 moles) y 2 (12.0 g, 0.061 moles) en cloruro de metileno anhidro (DC , 400 mi) se agita a temperatura ambiente durante 18 h. La mezcla de reacción se lava con agua (4 x 150 mi) y la capa orgánica se seca sobre sulfato de sodio anhidro, seguido por filtración y separación del solvente al vacío para proporcionar 3 (6.1 g, 0.0279 mmoles, 46%). RMN 3C (67.8 MHz, CDCI3) d 172.1 , 81.4, 59.5, 57.0, 56.3, 27.8.
EJEMPLO 2 Síntesis del Compuesto (4) Una solución del compuesto 3 (0.50 g, 2.28 mmoles), /V-tritilglicina (4.26 g, 13.4 mmoles), 4,4'-dimetilaminopiridina (DMAP, 2.18 g, 17.8 mmoles) y triflato de escandio (0.65 g, 1.32 mmoles) en 25 mi de DCM anhidro se enfría a -8°C en un baño de hielo-sal durante 30 min. Se agrega clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 3.0 g, 15.6 mmoles) y la mezcla de reacción se agita a -8°C durante 30 min y después a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción se filtra y el filtrado se lava con HCI 0.1 N (3 x 20 mi), 20 mi de agua destilada, se seca con MgS04 y el solvente se evapora al vacío. El producto se purifica adicionalmente por cromatografía en columna de gel de sílice para proporcionar 4 (1.40 g, 1.71 mmoles, 75%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 172.38, 170.67, 145,46, 128.71 , 128.03, 126.61 , 81.14, 70.67, 63.08, 56.18, 52.70, 45.79, 28.02.
EJEMPLO 3 Síntesis del Compuesto (5) Se disuelve el compuesto 4 (0.240 g, 0.292 mmoles) en una solución 1 % de ácido trifluoroacético (TFA) en 10 mi de DCM y se agita a temperatura ambiente durante 30 min. El solvente se separa parcialmente bajo presión reducida y se agregan 50 mi de etiléter para precipitar el producto. Después de decantar el éter, el residuo se disuelve nuevamente en DCM y se evapora al vacío para proporcionar 5 (0.148 g, 0.263 mmoles, 90%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3/CD3OD) d 167.85, 166.81 , 83.40, 61.81 , 55.11 , 52.78, 39,79, 27.47.
EJEMPLO 4 Síntesis del Compuesto (6) A una solución de carbonato de monometoxipoli (etilenglicol) 4-nitrofenilo (mPEG-PNP, 12 kDa, 6.0 g, 0.49 mmoles) y DMAP (0.12 g, 0.98 mmoles) en 35 mi de DCM anhidro se agrega a gotas la solución del compuesto 5 (0.17 g, 0.30 mmoles) en DCM/dimetilformamida (DMF) (32 ml/3 mi) durante un período de tiempo de 30 min. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante otras 12 h. El solvente se separa parcialmente bajo presión reducida, seguido por precipitación del derivado de PEG con etiléter. La filtración proporciona el producto PEG crudo el cual cristaliza a partir de DC /etiléter (24 ml/96 mí) y después a partir de isopropanol (IPA, 120 mi) respectivamente, para proporcionar 6 (5.6 g, 0.23 mmoles). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 170.16, 169.68, 156.10, 80.76, 63.11 , 58.67, 58.52, 52.46, 42.23, 27.82.
EJEMPLO 5 Síntesis del Compuesto (7) Se disuelve el derivado 6 del PEG (5.6 g, 0.23 mmoles) en TFA/DCM (30 ml/60 mi) y se agita a temperatura ambiente durante 12 h. El solvente se evapora bajo presión reducida. El residuo se vuelve a disolver en 10 mi de DCM y se precipita con etiléter, se filtra y se lava con varias porciones de éter para proporcionar 7 (5.1 g, 0.21 mmoles, 91 %). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 171.25, 169.68, 156.21 , 62.46, 58.66, 58.49, 52.82, 42.24.
EJEMPLO 6 Síntesis del Compuesto (8) Una solución de 7 (5.1 g, 9,21 mmoles), DMAP (0.076 g, 0.63 mmoles), y 2-mercaptotiazolina (2-MT, 0.075 g, 0.63 mmoles) en 70 mi de DCM anhidro se enfría a 0°C en un baño con hielo durante 30 min y se agrega, en una porción, EDC (0.12 g, 0.63 mmoles). Se permite que la mezcla se caliente hasta la temperatura ambiente lentamente y se agita durante 12 h. El solvente se separa parcialmente bajo presión reducida y el enlazante de PEG precipita con 200 mi de etiléter. El producto crudo se obtiene por filtración y se cristaliza a partir de DCM/etiléter (20 ml/80 mi) y después a partir de isopropanol (IPA, 100 mi), respectivamente, para proporcionar e (4.5 g, 0.18 mmoles, 80%). MN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 201.11 , 172.70, 169.59, 156.03, 63.20, 58.44, 55.18, 52.37, 42.09, 28.53.
EJEMPLO 7 Síntesis del Compuesto (9) Una solución de 8 (2.0 g, 0.082 mmoles), clorhidrato de doxorrubicina (0.095 g, 0.16 mmoles), y DMAP (0.040, 0.33 mmoles) en DMF anhidro/DCM (20 ml/20 mi) se agita a temperatura ambiente durante 12 h. Los solventes se separan parcialmente bajo presión reducida y el producto final se precipita con 80 mi de etiléter. El sólido se filtra y se recristaliza a partir de DMF/metanol (35 ml/25 mi) para proporcionar 9 (1.75 g, 0.070 mmoles, 86%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 212.93, 186.13, 169.95, 169.46, 160.68, 155.95, 155.36, 135.73, 135.36, 133.80, 133.56, 1 19.78, 118.69, 1 1 1.46, 101.09, 75.63, 69.40-74.00 (PEG), 68.29, 65.53, 64.93, 63.16, 61.87, 60.25, 59.58, 57.35, 55.36, 45.46, 43.32, 36.51 , 34.71 , 30.74, 7.91.
EJEMPLO 8 Síntesis del Compuesto (11) Una solución del compuesto 3 (0.60 g, 2.74 mmoles), benciloxicarbonilalanina (3.61 g, 16.3 mmoles), DMAP (2.64 g, 21-6 mmoles), y triflato de escandio (0.96 g, 1.95 mmoles) en 72 mi de DCM anhidro se enfría a -8°C en un baño de hielo-sal durante 30 min. Después se agrega 1 ,3-diisopropilcarbodiimida (DIPC, 2.42 g, 19.2 mmoles), y la mezcla de reacción se agita a -8°C durante 30 min y después a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción se filtra, el filtrado se lava con HCI 0.1 N (3 x 20 mi), 20 mi de agua destilada, se seca con MgSC y el solvente se evapora al vacío. El producto se purifica adicionalmente por una columna de gel de sílice para proporcionar el compuesto puro 11 (1.08 g, 1.71 mmoles, 75%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 172.98, 170.64, 155.68, 136.25, 128.44, 128.04, 81.11 , 66.62, 63.54, 56.06, 52.67, 49.43, 27.93, 18.19.
EJEMPLO 9 Síntesis del Compuesto (12) Una suspensión de 11 (0.60 g, 0.95 mmoles) y 0.60 g de hidróxido de paladio/carbón en 150 mi de etanol se agita a temperatura ambiente bajo una presión de hidrógeno de 345 kPa (50 psi) en un recipiente cerrado, durante 24 h. La mezcla se filtra y el solvente se separa al vacío para proporcionar 12 (0.29 g, 0.81 mmoles, 85%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 170.38, 81.70, 64.26, 56.43, 52.99, 49.40, 28.06, 15.92.
EJEMPLO 10 Síntesis del Compuesto ( 3) Una solución de carbonato de monometoxipoli(etilenglicol)succinimidilo (SC-mPEG, 12 kDa, 2.0 g, 0.164 mmoles), compuesto 12 (0.030 g, 0.083 mmoles) y DMAP (0.022 g, 0.183 mmoles) en 20 mi de cloroformo anhidro se somete a reflujo durante 12 h. El solvente se separa parcialmente bajo presión reducida, seguido por precipitación del derivado PEG con etiléter. La filtración proporciona el producto PEG crudo, el cual cristaliza a partir de 40 mi de IPA para proporcionar 13 (1.5 g, 0.061 mmoles, 74%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 172.46, 170.13, 155.22, 80.78, 63.28, 58.59, 55.82, 52.48, 49.16, 27.77, 18.03.
EJEMPLO 11 Síntesis del Compuesto (14) Se disuelve el compuesto 13 (1.5 g, 0.061 mmoles) en TFA/DCM (6.5 ml/13.5 mi) y se agita a temperatura ambiente durante 24 h. Los solventes se evaporan bajo vacío reducido. El residuo se disuelve en 5 mi de DCM y se precipita con 80 mi de etiléter y se filtra para proporcionar 14 (1.2 g, 0.049 mmoles, 80%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 172.31 , 168.23, 155.16, 63.18, 58.49, 55.82, 52.44, 49.15, 27.79, 17.92.
EJEMPLO 12 Síntesis del Compuesto (15) Una solución de 14 (0.80 g, 0.033 mmoles), DMAP (0.016 g, 0.13 mmoles), y 2-MT (0.016, 0.13 mmoles) en 10 mi de DCM anhidro se enfría a 0°C en un baño con hielo durante 30 min, y después se agrega EDC (0.025 g, 0.13 mmoles). Se permite que la mezcla se caliente hasta la temperatura ambiente con lentitud, y se agita durante 12 h. El solvente se separa parcialmente y el enlazante de PEG se precipita con 20 mi de etiléter. El producto crudo se filtra, se cristaliza a partir de DCM/etiléter (4 ml/16 mi) y finalmente recristaliza a partir de 20 mi de IPA para proporcionar 15 (0.50 g, 0.020 mmoles, 62%). Se confirma la estructura del producto por RMN.
EJEMPLO 13 Síntesis del Compuesto ( 6) Una solución de 15 (0.5 g, 0.020 mmoles), clorhidrato de daunorrubicina (0.023 g, 0.41 mmoles) y DMAP (0.005, 0.041 mmoles) en DMF anhidro/DCM (10 ml/10 mi) se agita a temperatura ambiente durante 12 h. Los solventes se separan parcialmente bajo presión reducida y el producto final se precipita con 30 mi de etiléter. El sólido se filtra y se recristaliza a partir de 20 mi de IPA para proporcionar 16 (0.4 g, 0.016 mmoles, 80%). Se confirma la estructura del producto por RMN.
EJEMPLO 14 Síntesis del Compuesto (17) Una solución de carbonato de diterbutilo (10.27 g, 47.2 mmoles) en 40 mi de cloroformo se agrega a una solución de 2-(2-aminoetoxi)-etanol (5.0 g, 47.62 mmoles) en 40 mi de cloroformo y la mezcla se agita a temperatura ambiente durante 1.5 h. La solución se lava con 30 mi de agua, la capa orgánica se seca con MgS04 y se concentra al vacío para proporcionar 2-(2-Boc-aminoetoxi)-etanol (9.6 g, 99%). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 5.43 (s, 1 H), 3.43 (s, 1 H), 3.56 (m, 4H), 3.73 (t, 2H, J=5.4 Hz), 3.32 (m, 2H), 1.45 (s, 9H); RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 156.06, 79.06, 77.18, 72.14, 70.08, 61.31 , 40.21 , 28.21. A una solución de 2-(2-Boc-aminoetoxi)-etanol (4.5 g, 24.39 mmoles) en 100 mi de tolueno se agrega terbutóxido de potasio 1.0 M en terbutanol (36.6 pl, 36.6 mmoles) entre -10 a -20°C durante 1.5 h, y es seguido por la adición de bromoacetato de etilo (8.15 g, 48.78 mmoles). La mezcla resultante se agita durante 3 h a una temperatura entre -10 a -20°C, seguido por la adición de 50 mi de HCI 0.25 N. La capa orgánica se separa y se seca sobre MgS04 anhidro. El solvente se separa y el residuo se purifica utilizando cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo 30 a 50% en hexano) para proporcionar éster etílico del ácido [2-(2-Boc-aminoetox¡)-etoxi]-acético (4.0 g, 15.36 mmoles, 63%). RMN 1H (300 MHz, CDCI3) d 5.20 (s, 1 H), 4.22 (c, 2H, J = 7.29 Hz), 4.14 (s, 2H), 3.66-3.75 (m, 4H), 3.55 (m, 2H), 3.31 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.29 (t, 3H, J = 7.29 Hz); RMN 13C (67.8 MHz, CDCI35170.02, 155.72, 78.68, 70.52.69.94, 68.29, 60.44, 40.04, 28.06, 13.85. A una solución de NaOH (5.0 g, 0.125 moles) en 5 mi de H20 se agregan 50 mi de etanol y una solución de éster etílico del ácido [2-(2-Boc-aminoetoxi)-etoxi]-acético (4.0 g, 15.36 mmoles) en 40 mi de etanol, en un baño con hielo y después se agrega a gotas. Durante la adición la temperatura se mantiene a <20°C. La mezcla se agita durante 2 h, seguido por acidificación a pH 2.5 con HCI 6N. La mezcla se filtra, la torta de filtro se lava con etanol y el filtrado se concentra al vacío. El residuo se extrae con DCM/H20 para proporcionar 17 (2.55 g, 11.52 mmoles, 75%). RMN H (300 MHz, CDCI3) d 6.25 (s amplio, 1 H), 5.31 (s, 1 H), 5.20 y 3.31 (m, 2H), 4.20 (s, 2H), 3.66-3.75 (m, 4H), 3.55 (m, 2H), 1.45 (s, 9H); RMN 3C (67.8 MHz, CDCI3) d 173.38, 156.12, 80.05, 79.55, 70.77, 70.12, 68.20, 53.32, 40.15, 28.21.
EJEMPLO 15 Síntesis del Compuesto (18) Una solución de 3 (0.10 g, 0.45 mmoles), 17 (0.70 g, 2.66 mmoles), DMAP (0.90 g, 7.38 mmoles) y triflato de escandio (0.022 g, 0.045 mmoles) en 35 mi de DCM anhidro se enfría a -8°C en un baño de hielo-sal durante 30 min, se agrega EDC (0.67 g, 3.49 mmoles) y la mezcla de reacción se agita a -8°C durante otros 30 min y después a temperatura ambiente durante 4.5 h. La mezcla de reacción se lava con HCI 0.1 N (3 x 30 mi), NaHC03 0.1 N (3 x 30 mi), 30 mi de agua destilada, se seca con Na2S04 y el solvente se evapora para proporcionar el compuesto 18 (0.33 g, 0.45 mmoles, 100%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 170.28, 170.05, 155.73, 81.13, 78.99, 70.77, 70.18, 68.42, 62.96, 56.15, 52.87, 40.31 , 28.37, 28.15.
EJEMPLO 16 Síntesis del Compuesto (19) Se disuelve el compuesto 18 (0.33 g, 0.45 mmoles) en una solución 20% de TFA en 10 mi de DCM y se agita a temperatura ambiente durante 15 min. Se separa el solvente al vacío, el residuo se disuelve en DCM y después se evaporan bajo presión reducida varias veces para remover las trazas de TFA para proporcionar 19 (0.33 g, 0.45 mmoles, 100%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3/CD3OD) d 170.08, 164.91 , 84.56, 70.50, 69.60, 67.58, 66.33, 59.21 , 52.99, 39.17, 27.42.
EJEMPLO 17 Síntesis del Compuesto (20) Una solución de 12kDa SC-mPEG (2.0 g, 0. 64 mmoles) en 10 mi de DCM anhidro se agrega a gotas durante un período de tiempo de 1 h una solución del compuesto 19 (0.15 g, 0.20 mmoles) y DMAP (0.040 g, 0.327 mmoles) en 10 mi de DCM. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante 12 h adicionales y el solvente se separa parcialmente bajo presión reducida, seguido por precipitación del derivado de PEG con etiléter. La filtración proporciona el producto de PEG crudo el cual después cristaliza a partir de 40 mi de IPA para proporcionar 20 (1.8 g, 0.073 mmoles, 89%), RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 169.89, 169.65, 155.83, 63.42, 62.61 , 58.53, 55.86, 52.55, 49.99, 27.84 EJEMPL0 18 Síntesis del Compuesto (21) Una solución de 20 (2.0 g, 0.081 mmoles) en DCM TFA (20 ml/10 mi) se agita a temperatura ambiente durante 8 h, seguido por separación parcial del solvente bajo presión reducida. El producto se separa por precipitación con etiléter, se recolecta por filtración y se lava con etiléter para proporcionar 21 (1.8 g, 0.073 mmoles, 90%). RMN 1 C (67.8 MHz, CDCI3) d 40.32, 52.78, 55.28, 58.52, 62.29, 63.35, 66.58, 67.64, 68.02-71.41 (PEG), 155.82, 169.62.
EJEMPLO 19 Síntesis del Compuesto (22) Una solución de 21 (1.8 g, 0.073 mmoles), 2-MT (0.018 g, 0.147 mmoles) y DMAP (0.054 g, 0.443 mmoles) en 20 mi de DCM anhidro se enfría a 0°C seguido por la adición de EDC (0.028 g, 0.147 moles). Se permite que la mezcla se caliente a temperatura ambiente y se agita durante 12 h, seguido por separación parcial del solvente bajo presión reducida. El producto se precipita con etiléter, se recolecta por filtración y cristaliza a partir de 40 mi de IPA para proporcionar 22 (1.5 g, 0.061 mmoles, 83%). RMN 3C (67.8 MHz, CDCI3) d 28.65, 40.34, 52.47, 53.63, 55.25, 58.50, 62.84, 63.37, 68.03, 69.06, 69-58-73.03(PEG), 155.79, 169.60, 172.55 y 200.90 pp.
EJEMPLO 20 Síntesis del Compuesto (23) A una solución de 22 (1.0 g, 0.041 mmoles) y clorhidrato de doxorrubicina (0.047, 0.081 mmoles) en una mezcla de DCM/DMF (10 ml/10 mi) se agrega DMAP (0.020 g, 0.162 mmoles). Esta mezcla se agrega bajo nitrógeno durante 18 h, seguido por separación parcial del solvente bajo presión reducida. El derivado de PEG se precipita con etiléter, se recolecta por filtración y se cristaliza dos veces a partir de DMF/IPA (4 ml/16 mi) para proporcionar 23 (0.44 g, 0.018 mmoles, 44%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 16.80, 29.77, 33.83, 35.59, 38.49, 40.66, 44.57, 54.20, 55.33, 56.53, 58.82, 63.71 , 67.20, 67.34, 68.27, 69.40, 69.69-73.22(PEG), 100.72, 11 1.34, 118.27, 1 19,56, 133.35, 133.49, 135.25, 135,48, 155,39, 155.93, 156.14, 160.75, 169.92, 170.14, 186.36, 186.73 y 213.35.
EJEMPLO 21 Síntesis del Compuesto (24) A una solución de terbutil-N-(3-hidroxipropil)-carbamato (3.00 g, 17.14 mmoles) en 60 mi de cloroformo anhidro se agrega carbonato de ?,?'-disuccinimidilo (DSC, 5.48 g, 21.43 mmoles) y piridina anhidra (1.73 mi, 21.43 mmoles). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 12 h. La solución se filtra, se lava con una solución de HCI 0.5 M (4 x 60 mi) se seca con MgS04, se filtra y el solvente se separa al vacío para proporcionar 24 (4.88 g, 15.43 mmoles, 90%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 25.37, 28.27, 28.80, 36.71 , 68.89, 79.29, 151.48, 155.85, 168.69.
EJEMPLO 22 Síntesis del Compuesto (25) Una solución de 3 (0.30 g, 1.37 mmoles), 24 (1.30 g, 4.1 mmoles) y triflato de escandio (0.067 g, 0.137 mmoles) en 45 mi de DCM anhidro se enfría a 0°C en un baño con hielo durante 30 min. Después se agrega DMAP (0.52 g, 4.26 mmoles) y se permite que la mezcla de reacción se caliente hasta la temperatura ambiente y se agita durante 12 h. La mezcla de reacción se lava con HCI 0.1 N (3 x 30 mi), NaHC03 0.1 N (3 x 30 mi) se seca con Na2S04 y el solvente se evapora, y el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice para proporcionar 25 (0.275 g, 0.44 mmoles, 32%). RMN 3C (67.8 MHz, CDCI3) d 170.41 , 155.77, 155.05, 81.13, 79.14, 66.18, 65.40, 56.24, 53.00, 37.14, 28.40, 28.18.
EJEMPLO 23 Síntesis del Compuesto (26) Se disuelve el compuesto 25 (0.388 g, 0.624 mmoles) en una solución 20% de TFA en 15 mi de DCM y se agita a temperatura ambiente durante 15 min. El solvente se separa por evaporación giratoria y el residuo se disuelve en cloroformo y después se evapora bajo vacío varias veces para proporcionar 26 (0.388 g, 0.624 mmoles, 100%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3/CD3OD) d 164.93, 153.73, 84.39, 65.02, 62.26, 53.72, 53.20, 36.46, 27.31 , 26.02.
EJEMPLO 24 Síntesis del Compuesto (27) Una solución de m12 kDa PEG-PNP (10.0 g, 0.822 mmoles) en DCM anhidro/DMF (24 ml/16 mi) se agrega a gotas de una porción de 11 mi de la solución del compuesto 26 (0.400 g, 0.617 mmoles) y DMAP (0.152 g, 0.1 .24 mmoles) en 15 mi de DCM durante un período de tiempo de 1 h. La mezcla resultante se agita a temperatura ambiente durante otras 3 h, y después se agregan otros 2 mi de la solución anterior de 26. Los últimos 2 mi de la solución se agregan después de otras 3 h junto con DMAP (0.076 g, 0.62 mmoles) y la mezcla de reacción se agita durante 12 h adicionales. El solvente se separa parcialmente por evaporación giratoria, seguido por precipitación del derivado PEG con etiléter. La filtración proporciona el producto PEG crudo el cual después cristaliza a partir de 200 mi de IPA para proporcionar 27 (9.6 g, 0.789 mmoles, 96%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 170.00, 155.91 , 154.62, 80.71 , 65.80, 64.91 , 63.43, 58.64, 55.83, 52.62, 37.15, 28.71 , 27.87.
EJEMPLO 25 Síntesis del Compuesto (28) Una solución de 27 (4.6 g, 0.188 mmoles) en DCM/TFA (50 ml/25 mi) se agita a temperatura ambiente durante 12 h, seguido por separación parcial del solvente por evaporación giratoria. El producto se precipita con etiléter, se recolecta por filtración y se lava con etiléter para proporcionar 28 (4.0 g, 0.163 mmoies, 87%). RMN 3C (67.8 MHz, CDCI3) d 171.47, 156.00, 154.51 , 65.51 , 64.96, 63.48, 58.61 , 55.27, 52.82, 37.14, 28.66. EJEMPLO 26 Síntesis del Compuesto (29) Una solución de 28 (4.0 g, 0.163 mmoies), 2-MT (0.058 g, 0.491 mmoies) y D AP (0.080 g, 0.654 mmoies) en 60 mi de DCM anhidro se enfría a 0°C seguido por la adición de EDC (0.094 g, 0.491 mmoies). Se permite que la mezcla se caliente a temperatura ambiente y se agita durante 12 h, seguido por separación parcial del solvente al vacío. El producto se precipita con etiléter, se recolecta por filtración y cristaliza a partir de 80 mi de IPA para proporcionar 29 (3.6 g, 0.147 mmoies, 90%). RMN 3C (67.8 MHz, CDCI3) d 200.97, 172.86, 155.97, 154.66, 66.07, 65.00, 63.54, 60.39, 58.73, 55.39, 52.67, 37.22, 28.78.
EJEMPLO 27 Síntesis del Compuesto (30) A una solución de 29 (2.0 g, 0.082 mmoies) y clorhidrato de doxorrubicina (0.094 g, 0.163 mmoies) en 20 mi de DMF se agrega DMAP (0.040 g, 0.326 mmoles). Esta mezcla se agita bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 12 h. El derivado de PEG se separa por precipitación con etiléter, se filtra, se recristaliza dos veces a partir de DMF/IPA (8 ml/32 mi) para proporcionar 30 (1.50 g, 0.0615 mmoles, 75%). RMN 13C (67.8 MHz, CDCI3) d 213.24, 186.61 , 186.17, 169.25, 160.57, 156.11 , 155.82, 155.24, 154.57, 135.42, 135.03, 133.29, 120.37, 119.39, 118.15, 111.10, 1 10.90, 100.63, 73.50-69.20 (PEG), 68.53, 67.12, 65.32, 65.17, 64.98, 63.57, 58.70, 56.41 , 53.66, 44.70, 37.16, 35.43, 33.59, 28.75, 26.73, 16.71.
EJEMPLO 28 Síntesis del Compuesto (32) Una solución de 3 (0.30 g, 1.37 mmoles), 31 (1.75 g, 4.11 mmoles) y triflato de escandio (0.067 g, 0.137 mmoles) en 45 mi de DC anhidro se enfría a 0°C en un baño con hielo durante 30 min. Después se agrega DMAP (0.52 g, 4.26 mmoles) y se permite que la mezcla de reacción se caliente hasta la temperatura ambiente y se agita durante 12 h. La mezcla de reacción se lava con HCI 0.1 N (3 x 30 mi) NaHC03 0.1 N (3 x 30 mi), se seca con Na2S04 y el solvente se evapora y el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice para proporcionar 32. La estructura de 32 se confirma por RMN.
EJEMPLO 29 Síntesis del Compuesto (33) Una solución de 32 (0.30 g, 0.36 mmoles), y piperidina (0.062 g, 0.72 mmoles) en 25 mi de DCM anhidro se agita a temperatura ambiente durante 2 h. El solvente se evapora bajo presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice para proporcionar 33. Se confirma la estructura de 33 por RMN.
EJEMPLO 30 Síntesis del Compuesto (34) Una solución de 3 (1.00 g, 4.57 mmoles) y anhídrido acético (0.466 g, 4.57 mmoles) y 45 mi de DCM anhidro se enfría a 0°C en un baño con hielo durante 15 min y se permite que la mezcla de reacción se caliente hasta la temperatura ambiente y se agita durante 2 h. La mezcla de reacción se lava con NaHC03 0.1 N (3 x 30 mi), se seca con Na2S04 y el solvente se evapora, y el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice para proporcionar 34. Se confirma la estructura de 34 por RMN.
EJEMPLO 31 Síntesis del Compuesto (35) Una solución de 34 (1.04 g, 4.00 mmoles), 17 (2.83 g, 12.00 mmoles) y triflato de escandio (1.77 g, 3.60 mmoles) en 70 mi de DCM anhidro se enfría a 0°C en un baño con hielo durante 30 min. Después se agrega DMAP (1 .46 g, 12.00 mmoles) y se permite que la mezcla de reacción se caliente a temperatura ambiente y se agita durante 12 h. La mezcla de reacción se lava con HCI 0.1 N (3 x 30 mi), NaHC03 0.1 N (3 x 30 mi), se seca con Na2S04 y el solvente se evapora, y el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice para proporcionar 35. Se confirma la estructura de 35 por RMN.
EJEMPLO 32 Síntesis del Compuesto (36) Se disuelve el compuesto 35 (1.52 g, 3.00 mmoles) en una solución 20% de TFA en 45 mi de DCM y se agita a temperatura ambiente durante 15 min. El solvente se separa bajo presión reducida y el residuo se disuelve en cloroformo y después se evapora al vacío varias veces para separar el TFA para proporcionar 36. La estructura de 36 se confirma por RMN.
EJEMPLO 33 Síntesis del Compuesto (37) Una solución de diácido con PEG de 40 kDa (20.0 g, 0.500 mmoles), 36 (1 .01 g, 2.00 mmoles) y DMAP (0.976 g, 8.00 mmoles) en 400 mi de DCM anhidro se agrega EDC (0.769 g, 4.00 mmoles) y la mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 2 h. El solvente se separa bajo presión reducida, el residuo se cristaliza a partir de 400 mi de IPA para proporcionar 37. La estructura de 37 se confirma por RMN.
EJEMPLO 34 Síntesis del Compuesto (38) El compuesto 38 se elabora bajo las mismas condiciones Se confirma la estructura de 38 por RMN.
EJEMPLO 35 Síntesis del Compuesto (39) El compuesto 39 se elabora bajo las mismas condiciones de 29. Se confirma la estructura de 39 por RMN.
EJEMPLO 36 Síntesis del Compuesto (40) El compuesto 40 se elabora bajo las mismas condiciones de 30. Se confirma la estructura de 40 por RMN.
EJEMPLO 37 Síntesis del Compuesto (42) Una solución de anhídrido maleico (0.196 g, 2.00 mmoles), DMAP (0.244 g, 2.00 mmoles) y 41 (0.496 g, 2.00 mmoles) en 40 mi de DCM se agita a temperatura ambiente durante 2 h. El solvente se separa bajo presión reducida para proporcionar 42. Se confirma la estructura de 42 por RMN.
EJEMPLO 38 Síntesis del Compuesto (43) Una solución de 42 (0.496 g, 2.00 mmoles) y acetato de sodio (0.82 g, 10.0 mmoles) en 40 mi de acetonitrilo se somete a reflujo durante 45 min. El solvente se separa bajo presión reducida para proporcionar 43. Se confirma la estructura de 43 por RMN.
EJEMPLO 39 Síntesis del Compuesto (44) Se disuelve el compuesto 43 (0.496 g, 2.00 mmoles) en una solución 20% de TFA en 45 mi de DCM y se agita a temperatura ambiente durante 15 min. El solvente se separa al vacío y el residuo se disuelve en cloroformo y después se evapora bajo presión reducida varias veces para separar el TFA para proporcionar 44. La estructura de 44 se confirma por RMN.
EJEMPLO 40 Síntesis del Compuesto (45) A una solución de 22 (6.10 g, 0.25 mmoles) y 44 (0.328 g, 1.00 mmoles) en 120 mi de DCM se agrega DMAP (0.122 g, 1.00 mmoles). Esta mezcla se agita bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 12 h. El derivado de PEG se separa por precipitación con etiléter, se filtra, se cristaliza a partir de 120 mi de IPA para proporcionar 45. Se confirma la estructura de 45 por RMN.
EJEMPLO 41 Síntesis del Compuesto (47) A una solución de 22 (6.10 g, 0.25 mmoles) y 46 (0.12 g, 1.00 mmoles) en 120 mi de DCM se agrega DMAP (0.122 g, 1.00 mmoles). Esta mezcla se agita bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 12 h. El derivado de PEG se separa por precipitación con etiléter, se filtra, se cristaliza a partir de 120 mi de IPA para proporcionar 47. Se confirma la estructura de 47 por RMN.
EJEMPLO 42 Síntesis del Compuesto (49) A una solución de 22 (6.10 g, 0.25 mmoles) y 48 (0.536 g, 1.00 mmoles) en 120 mi de DCM se agrega DMAP (0.122 g, 1.00 mmoles). Esta mezcla se agita bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 12 h. El derivado de PEG se separa por precipitación con etiléter, se filtra, se cristaliza a partir de 120 mi de IPA para proporcionar 49. Se confirma la estructura de 49 por RMN.
EJEMPLO 43 Síntesis del Compuesto (52) A una solución de 8 (6.10 g, 0.25 mmoles) y 5 (0.0701 g, 0.125 mmoles) en 120 mi de DCM se agrega DMAP (0.122 g, 1.00 mmoles). Esta mezcla se agita bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 12 h. El derivado de PEG se separa por precipitación con etiléter, se filtra, se cristaliza a partir de 120 mi de IPA para proporcionar 50. Se confirma la estructura de 50 por RMN. El compuesto 50 se trata con TFA bajo las mismas condiciones de elaboración del compuesto 7 para proporcionar 51. Se confirma la estructura de 51 por RMN. El compuesto 51 después se activa bajo las mismas condiciones de elaboración del compuesto 8 para proporcionar 52. Se confirma la estructura de 52 por RMN. Se hace reaccionar 52 con Dox-HCI bajo las mismas condiciones de elaboración de 9 para producir 52a.
EJEMPLO 44 Síntesis del Compuesto (53) Se elabora el compuesto 53 bajo las mismas condiciones que en el Ejemplo 43, excepto que se utilizan los compuestos 15 y 12 en vez de los compuestos 8 y 5, respectivamente. Se confirma la estructura de 53 por RMN.
EJEMPLO 45 Síntesis del Compuesto (54) Se elabora el compuesto 54 bajo las mismas condiciones que en el Ejemplo 43, excepto que se utilizan los compuestos 22 y 19 en vez de los compuestos 8 y 5, respectivamente. Se confirma la estructura de 54 por RMN.
EJEMPLO 46 Síntesis del Compuesto (55) Se elabora el compuestol 55 bajo las mismas condiciones que en el Ejemplo 43, excepto que se utilizan los compuestos 29 y 26 en vez de los compuestos 8 y 5, respectivamente. Se confirma la estructura de 55 por RMN.
EJEMPLO 47 Síntesis del Compuesto (56) Se elabora el compuesto 56 bajo las mismas condiciones que en el Ejemplo 43, excepto que se utiliza el compuesto 58 en vez del compuesto 8. Se confirma la estructura de 56 por RMN.
EJEMPLO 48 Síntesis del Compuesto (57) Se elabora el compuesto 57 bajo las mismas condiciones que en el Ejemplo 43, excepto que el compuesto 53 se convierte en un derivado de tiazolidinationa y se hace reaccionar con 12 en vez del compuesto 8 y 5, respectivamente. Se confirma la estructura de 57 por R N.
EJEMPLO 49 Síntesis del Compuesto (58) Se elabora el compuesto 58 bajo las mismas condiciones que en el Ejemplo 43, excepto que el compuesto 54 se convierte en un derivado de tiazolidinationa y se hace reaccionar con 19 y se utiliza en vez del compuesto 8 y 5, respectivamente. Se confirma la estructura de 58 por RMN.
EJEMPLO 50 Síntesis del Compuesto (59) Se elabora el compuesto 59 bajo las mismas condiciones que en el Ejemplo 43, excepto que el compuesto 55 se convierte en un derivado de tiazolidinationa y se hace reaccionar con 26 y se utiliza en vez del compuesto 8 y 5, respectivamente. Se confirma la estructura de 59 por RMN.
EJEMPLO 51 SINTESIS DE CONJUGADO DE BICINA-PROTEINA DE FLUORESCENCIA VERDE (GFP) Materiales. Se utiliza en el estudio enlazante de PEG liberable, compuesto 8. Se adquiere PBS (fosfato 10 mM, pH 7.4, NaCI 138 mM y KCI 2.7 mM) de Sigma Inc. (St. Louis, MO). El gel de electroforesis de SDS Tris-glicina 10% prevaciado y el gel de amortiguador de corrimiento se obtienen de Invitrogen (Carlsbad, CA). El plasma de rata en EDTA se recibe en hielo seco el mismo día en que se mata al animal.
Métodos I. Preparación y purificación de proteína de fluorescencia verde. La GFP utilizada en los experimentos es una versión mejorada, EGFP, con una longitud de onda de excitación máxima de 488 nm y una emisión máxima de longitud de onda de 507-509 nm. La secuencia de EGFP (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA) se subclona en el vector pET22b que contiene una etiqueta histidina en la parte carboxilo terminal y se expresa en la cepa BL21 de E. coli (Novagen, Inc., Madison, Wl) con inducción por IPTG. La EGFP citosólica soluble se purifica casi hasta homogeneidad a partir del sobrenadante bacteriano utilizando una columna Ni (Novagen, Inc., adison, Wl), seguido por cromatografía de intercambio aniónico DEAE (Pharmacia Biotech Products, Piscataway, NJ). Se mide la intensidad de fluorescencia en un espectrofotómetro de fluorescencia HITACHI F-2000. Se utiliza una curva estándar lineal de la concentración de proteína (1-140 ng/ml en amortiguador Tris 15 mM, pH 7.4) versus intensidad de fluorescencia, para cuantificación de la concentración de proteína.
II. Conjugado de PEG a GFP v purificación de los compuestos PEG-PEG. Con agitación rápida, se agrega el compuesto 8 a 2 mg/ml de una solución GFP en NaHC03 0.05 M, pH 8.1 , en una proporción molar de 30:1 (8:GFP). La solución se agita bajo N2 a 25°C en la oscuridad durante 45 min. Después de 45 min, el pH de la solución se disminuye al agregar amortiguador de fosfato de sodio, pH 6.4 hasta una concentración final de 77 mM (el pH final es de 6.8). El PEG libre se separa en una columna Superdex 200 Hiload 16/60 (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) utilizando un equipo Biocard Perfusión Chromatography Wordkstation. El amortiguador de elución está constituido de fosfato de sodio 10 mM y NaCI 140 mM a pH 6.8. Las fracciones que muestran tanto absorbancia a 280 nm como fluorescencia se acumulan y concentran utilizando un dispositivo de filtro centrífugo ultrafree-15 con una membrana NMWL 30k (Millipore Corp., Bedford, MA). El rendimiento del conjugado purificado es de aproximadamente 59%. Se determina la concentración de PEG-GFP utilizando el reactivo de ensayo de proteína BCA (Pierce, Rockford, IL) y la cuantificación de intensidad de fluorescencia.
III. Farmacocinética de GFP y conjugados de PEG-GFP en ratas. Se inmoviliza a ratas conscientes y se les inyecta por vía intravenosa por medio de la vena de la cola ya sea con GFP o PEG-GFP a una dosis de 5 mg/kg. Después de la administración del compuesto, el muestreado de la sangre comienza como se ha programado. Se anestesia ligeramente a las ratas con una mezcla de oxígeno 30%/dióxido de carbono 70% y se realiza una extracción de 0.5 mi de sangre completa por medio del seno retroorbital. Se recolecta la sangre completa dentro de un microtubo con EDTA y se procesa de inmediato para la obtención del plasma. El plasma se congela de inmediato sobre hielo seco y se almacena a -20°C hasta análisis posterior.
IV Análisis de GFP y conjugado de PEG-GFP en plasma y procedimiento de liberación. Las muestras de plasma se calienta de -20°C a 4°C. Se diluye una alícuota de 10 µ? de plasma que contiene GFP o PEG-GFP con 1 mi de Tris 15 mM a pH 7.4. Después de mezclado perfecto, se mide la intensidad de fluorescencia utilizando un espectrofotómetro de fluorescencia HITACHI F-2000. Se resta la autofluorescencia generada por el plasma solo, de todas las muestras de plasma, utilizando amortiguador Tris 15 mM a pH 7.4 como un blanco. Para el procedimiento de liberación, las muestras de plasma recolectadas en puntos de tiempo diferentes se recalientan de -20°C a 4°C, se diluyen con PBS y se analizan en una columna Superdex 75 HR 10/30 (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) utilizando el cromatograma Biocard Perfusión. GFP tiene 21 aminas libres, 20 de las cadenas laterales de lisina y una de la parte N terminal. Todos los conjugados PEG-GFP purificados tienen un peso molecular aparente superior a 200,000 Da en gel de electroforesis SDS 10% cuando la reacción se lleva a cabo en una proporción molar 30:1 (PEG:GFP). El número de pegilación calculado en el gel es de 10-14 moléculas de PEG por GFP.
Resultados Farmacocinética v parámetros farmacocinéticos de GFP y conjugado de PEG-GFP en ratas. Se calcularon los parámetros farmacocinéticos tales como la vida media { /2), el área bajo la curva (AVC), la depuración (CL), y el tiempo de residencia medio (MRT) de GFP y de los conjugados de PEG-GFP utilizando métodos sin compartimiento (Cuadro 1 ). Los datos muestran que la vida media de GFP se puede incrementar hasta 156 veces y que la depuración puede disminuir hasta 167 veces después de que es pegilado. Se utiliza un modelo de un compartimiento para predecir las curvas de la concentración plasmática de la dosis versus el desarrollo en el tiempo después de una administración de una sola dosis intravenosa. Los resultados muestran una relación entre las curvas predlcha y observada la cual es superior de 93% para GFP nativa y 96% para PEG-GFP. Los datos de pK muestran que los conjugados de PEG-GFP utilizando este sistema de bicina pueden liberar GFP natural durante un período de tiempo prolongado.
CUADRO 1 Parámetros farmacocinéticos de GFP y PEG-GFP en ratas El cuadro 2 muestra diversos tiempos de liberación del precursor que corresponden a conjugados de bicina y PEG.
CUADRO 2 Propiedades de los conjugados de BICINA-Doxorrubicina (o Daunorrubicina) compuesto 9 16 23 30 mw 24855 24894 25031 25072 tía (h) en 10 15 5.5 12.5 plasma de rata

Claims (1)

  1. NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1.- Un compuesto que comprende la fórmula (I): en donde: y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de residuos de polímeros sustancialmente no antigénlcos, grupos alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, aralquilos y grupos con ramificación terminal; Y-i-3 se selecciona independientemente de entre O, S o NR-n; l_i y L2 son independientemente de enlaces bifuncionales seleccionados; Z se selecciona de entre las porciones transportadas activamente dentro de una célula objetivo, porciones hidrofóbicas, porciones enlazantes bifuncionales y combinaciones de las mismas; R3-R-11 , R24 y R25 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono; A se selecciona de entre grupos salientes, grupos funcionales, residuos de agentes que contienen amina y OH; a y c son cada uno independientemente 0 un número entero positivo; b, d y e son independientemente 0 ó 1 ; y m, n, o y p se seleccionan independientemente de enteros positivos. 2. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R3-R10 y R24-25 son cada uno hidrógeno. 3. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque a, b, c, d, m, n, o y p son cada uno 1 y e es 0 ó 1. 4 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R-i comprende un óxido de polialquileno. 5. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 comprende un óxido de polialquileno. 6. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1 comprende un polietilenglicol. 7. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 comprende un polietilenglicol. 8.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R-? o R2 incluyen adicionalmente un grupo de remate J que se selecciona del grupo que consiste de OH, NH2, SH, C02H, porciones alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, 9.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque se selecciona del grupo que consiste de: en donde L3 es un enlazante bifuncional e Y4 es O, S o NRn. 10.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R-i se selecciona del grupo que consiste de: J- 0-(CH2CH20)x-; J-0-(CH2CH20)x-CH2C(0)-0-; J-0-(CH2CH20)x-CH2CH2NR12-; J-0-(CH2CH20)x-CH2CH2SH-; -OC(0)CH2-0-(CH2CH20)x-CH2C(0)-0-; -NR12CH2CH2-0-(CH2CH20)x-CH2CH2NR12- y -SHCH2CH2-0-(CH2CH20)x-CH2CH2SH- en donde: x es el grado de polimerización; R12 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, aiquilos de 1 a 6 átomos de carbono, aiquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, aiquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, aritos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono; y J es un grupo de remate. 11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Ri-2 se selecciona individualmente del grupo que consiste de: CH3-0-(CH2CH20)x-, CH3-0-(CH2CH20)x-CH2C(0)-0-, CH3-0-(CH2CH20)x-CH2CH2NH- y CH3-0-(CH2CH20)x-CH2CH2SH-, en donde x es el grado de polimerización. 12. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque R2 se selecciona del grupo que consiste de: J-0-(CH2CH20)x-; J-0-(CH2CH20)x-CH2C(0)-0-; J-0-(CH2CH20)x-CH2CH2NR13-; J-0-(CH2CH20)x-CH2CH2SH-; -OC(0)CH2-0-(CH2CH20)x-CH2C(0)-0-; -NR13CH2CH2-0-(CH2CH20)x-CH2CH2NR13-, y -SHCH2CH2-0-(CH2CH20)x-CH2CH2SH-; en donde: x es el grado de polimerización; R13 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, aiquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, aicoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono y J es un grupo de remate. 13 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R-i y R2 comprenden cada uno un residuo polimérico de la fórmula -0-(CH2CH20)x.- 14.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque Ri y R2 tienen cada uno un peso promedio de peso molecular aproximadamente de 2,000 Da a 25,000 Da. 15.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque l_i se selecciona del grupo que consiste de: -NH(CH2CH20)2CH2C(0)-; -NH(CH2)3OC(0)-; -(CH2)tC(0)-; C(0)NH(CH2)tC(0)-; -NH(CH2)tC(0)-; -NR19(CH2)t(CH2CH20)qNHC(0)-; -(CH2CH20)tNHC(0)-; -0(CRuRi5)tNHC(0)-; NR19(CR14R15)qC(0)NH(CR16Ri7)tC(0)-; -0(CH2)tOC(0)-; NR19(CR14R15)tC(0)-; -NR19(CH2)t(CH2CH20)qNHC(0)-; -NR19(CH2CH20)t-OC(O)-; -0(CR14R15)tNHC(0)-; -0(CR14Ri5)tOC(0)-; -(CH2CH20)tNHC(0)-; 6R17)tNHC(0)- 0(CRi4R-i 5)q (CR16R17)tC(0) en donde Ri4-Ri7 y R19 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono; R18 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, N02, haloalquilo y halógeno; y t y q se seleccionan individualmente de números enteros positivos. 16.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque L2 se selecciona del grupo que consiste de: -NH(CH2CH20)2CH2-C(0)-; -NH(CH2)3OC(0)-; -(CH2)vC(0)-; C(0)(CH2)vNHC(0)-; -NH(CH2)vC(0)-; -NR25(CH2)v(CH2CH20)wNHC(0)-; -(CH2CH20)vNHC(0)-; -O(CR20R2i)vNHC(O)-; NR25(CR2oR21)w(0)CNH(CR22C23)vC(0)-; -0(CH2)vOC(0)-; NR25(CR2oR2i)vC(0)-; -NR25(CH2)v(CH2CH20)wNHC(0)-; -NR25(CH2CH20)v-0-C(O); -0(CR2oR2i)vNHC(0)-; -O(CR20R2i)vOC(O)-; -(CH2CH20)vNHC(0)-; en donde R20-R23 y R25 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, aiquilos de 1 a 6 átomos de carbono, aiquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroaiquiios de 1 a 6 átomos de carbono, heteroaiquiios de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, y F¾4 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroaiquiios de 1 a 6 átomos de carbono, heteroaiquiios de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, N02, haloalquilo y halógeno, y v y w son individualmente números enteros positivos seleccionados. 17.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque comprende la fórmula: 18.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque se selecciona del grupo que consiste de: en donde Ai es un grupo saliente. 19.- El compuesto de conformidad con la reivindicación .1 , caracterizado además porque Ai es un grupo saliente que se selecciona del grupo que consiste de 20. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque A se selecciona del grupo que consiste de maleimidilo, vinilo, residuos de sulfona, hidroxi, ammo, carboxi, mercapto, hidrazida y grupos funcionales carbazato. 21. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque A es: 22.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el grupo de ramificación terminal comprende la fórmula: en donde: Y5 es O, S o NR46; L4 es un enlazante bifuncional; R4o- 46 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, álquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono, cicloalquilos sustituidos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono; j y k son cada uno independientemente 0 o un número entero positivo; q es 0 ó 1 ; g, h, v y w se seleccionan independientemente de números enteros positivos; R5o se selecciona del grupo que consiste de residuos poliméricos sustancialmente no antigénicos, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, aralquilos de 1 a 6 átomos de carbono, y en donde: L5 es un enlazante bifuncional; y R60 se selecciona del grupo que consiste de residuos poliméricos sustancialmente no antigénicos, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono y aralquilos de 1 a 6 átomos de carbono. El compuesto de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado además porque comprende la estructura: 24.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado además porque comprende la estructura: 25 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque se selecciona del grupo que consiste de: 26.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque se selecciona del grupo que consiste de: 27.- Un método para preparar un conjugado polimérico, caracterizado además porque comprende hacer reaccionar un compuesto de la fórmula: Ai es un grupo saliente; Ri y R2 se selecciona independientemente del grupo que consiste de residuos poliméricos sustancialmente no antigénicos, grupos alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, aralquilos y con ramificación terminal; Y-i. 3 son independientemente O, S o NR-n; l_i y L2 son independientemente enlazantes bifuncionales seleccionados; Z se selecciona de entre porciones transportadas activamente dentro de una célula objetivo, porciones hidrofóbicas, porciones enlazantes bifuncionales y combinaciones de los mismos; R3-R-11 , R24 y R25 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de 1 a 6 átomos de carbono, alquilos ramificados de 3 a 19 átomos de carbono, cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, alquilos sustituidos de 1 a 6 átomos de carbono; cicloalquilos de 3 a 8 átomos de carbono, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono, heteroalquilos de 1 a 6 átomos de carbono sustituidos, alcoxi de 1 a 6 átomos de carbono, fenoxi y heteroalcoxi de 1 a 6 átomos de carbono; con un agente biológicamente activo que contiene amina, bajo condiciones suficientes para formar: en donde A2 es un residuo de una amina que contiene un agente biológicamente activo. 28. - Un método de preparación de un sistema de transporte polimérico basado en bicina que comprende: a) sintetizar una bicina protegida con ácido; b) unir un separador bifuncional bloqueado a cada hidroxilo de la bicina protegida con ácido; c) desproteger el intermediario resultante y hacerlo reaccionar en un polímero activado bajo condiciones de acoplamiento básicas; y d) desproteger y activar el ácido bloqueado de la bicina protegida con ácido, bajo condiciones de acoplamiento. 29. - El uso de un compuesto de la reivindicación 1 , en donde A es un residuo de un agente biológicamente activo que contiene amina, para preparar un medicamento.
MXPA05001716A 2002-08-13 2003-08-13 Conjugados polimericos liberables basados en enlazantes biodegradables alifaticos. MXPA05001716A (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10/218,167 US7122189B2 (en) 2002-08-13 2002-08-13 Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
PCT/US2003/025252 WO2004014424A1 (en) 2002-08-13 2003-08-13 Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MXPA05001716A true MXPA05001716A (es) 2005-07-22

Family

ID=31714506

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MXPA05001716A MXPA05001716A (es) 2002-08-13 2003-08-13 Conjugados polimericos liberables basados en enlazantes biodegradables alifaticos.

Country Status (9)

Country Link
US (2) US7122189B2 (es)
EP (2) EP1534334B1 (es)
JP (1) JP4308764B2 (es)
KR (1) KR20050047096A (es)
AU (1) AU2003262622B2 (es)
CA (1) CA2493329C (es)
MX (1) MXPA05001716A (es)
NZ (1) NZ537956A (es)
WO (1) WO2004014424A1 (es)

Families Citing this family (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7087229B2 (en) * 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
US7413738B2 (en) * 2002-08-13 2008-08-19 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on biodegradable linkers
US7122189B2 (en) * 2002-08-13 2006-10-17 Enzon, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
US7332164B2 (en) * 2003-03-21 2008-02-19 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Heterobifunctional polymeric bioconjugates
AU2004230927B9 (en) * 2003-04-13 2011-12-01 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric oligonucleotide prodrugs
MXPA05012313A (es) 2003-05-12 2006-04-18 Affymax Inc Peptidos que se unen al receptor de eritropoyetina.
US7919118B2 (en) 2003-05-12 2011-04-05 Affymax, Inc. Spacer moiety for poly (ethylene glycol) modified peptide based compounds
KR101163683B1 (ko) 2003-05-12 2012-07-10 아피맥스, 인크. 에리스로포이에틴 수용체에 결합하는 신규의 펩티드
CZ294996B6 (cs) * 2003-07-16 2005-04-13 Ústav Makromolekulární Chemie Av Čr Reaktivní polymery a kopolymery na bázi N-(2-hydroxypropyl)methakrylamidu, způsob jejich přípravy a jejich použití pro syntézu polymerních léčiv, pro modifikaci biologicky aktivních proteinů a přípravu systémů pro dopravu genů
US8394365B2 (en) 2003-09-17 2013-03-12 Nektar Therapeutics Multi-arm polymer prodrugs
CN1852740B (zh) * 2003-09-17 2011-05-11 耐科塔医药公司 多支链聚合物的药物前体
CA2786794C (en) * 2004-03-23 2017-09-12 Complex Biosystems Gmbh Aromatic polymeric cascade prodrug linker reagent
US7365127B2 (en) * 2005-02-04 2008-04-29 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Process for the preparation of polymer conjugates
US7550433B2 (en) 2005-06-03 2009-06-23 Affymax, Inc. Erythropoietin receptor peptide formulations and uses
GB2427360A (en) * 2005-06-22 2006-12-27 Complex Biosystems Gmbh Aliphatic prodrug linker
US20090285780A1 (en) * 2006-05-24 2009-11-19 Chyi Lee Peg linker compounds and biologically active conjugates thereof
CN101495536B (zh) * 2006-05-26 2012-03-07 益普生制药股份有限公司 位点特异性聚乙二醇化的方法
JP2009539879A (ja) * 2006-06-09 2009-11-19 エンゾン ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド インデノイソキノリン放出性ポリマー複合体
WO2008011234A2 (en) * 2006-06-30 2008-01-24 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Recombinant host for producing l-asparaginase ii
CA2662973A1 (en) * 2006-09-15 2008-03-20 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Lysine-based polymeric linkers
RU2009114154A (ru) * 2006-09-15 2010-10-20 Энзон Фармасьютикалз, Инк. (Us) Полимерные пролекарства с направленной доставкой, содержащие полифункциональные линкеры
US20100279408A1 (en) * 2006-11-27 2010-11-04 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric short interfering rna conjugates
KR101441709B1 (ko) 2006-11-30 2014-09-18 넥타르 테라퓨틱스 중합체 컨쥬게이트의 제조 방법
CA2670618C (en) 2006-12-15 2016-10-04 Baxter International Inc. Factor viia- (poly) sialic acid conjugate having prolonged in vivo half-life
US20080159964A1 (en) * 2006-12-29 2008-07-03 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Use of adenosine deaminase for treating pulmonary disease
JP2010520855A (ja) * 2007-01-31 2010-06-17 アフィーマックス・インコーポレイテッド 修飾基をポリペプチドおよびその他の高分子に結合するための窒素ベースのリンカー
HUE027603T2 (en) * 2007-04-20 2016-10-28 Sigma-Tau Rare Disease Ltd Stable, recombinant adenosine deaminase
EP2147122B1 (en) * 2007-04-20 2014-07-16 Sigma-Tau Rare Diseases S.A. Enzymatic anticancer therapy
CA2690553C (en) * 2007-06-26 2016-11-08 Baxter International Inc. Method for preparing fmoc - based hydrolysable linkers
BRPI0721948A2 (pt) * 2007-08-20 2014-04-08 Enzon Pharmaceuticals Inc Ligantes poliméricos contendo frações dissulfeto de piridila
CA2732508C (en) 2008-08-11 2016-03-15 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric alkanoate conjugates
PT2349346T (pt) 2008-09-23 2019-10-24 Nektar Therapeutics Método de dosagem metronómica com profármacos de camptotecina (e.g. peg-irinotecano).
EP2431741B1 (en) 2008-10-21 2013-08-21 Baxter International Inc Methods for determining active ingredients in pro-drug PEG protein conjugates with releasable PEG reagents (in vitro de-pegylation)
ES2597954T3 (es) 2009-07-27 2017-01-24 Baxalta GmbH Conjugados de proteína de la coagulación sanguínea
US8809501B2 (en) 2009-07-27 2014-08-19 Baxter International Inc. Nucleophilic catalysts for oxime linkage
US8642737B2 (en) 2010-07-26 2014-02-04 Baxter International Inc. Nucleophilic catalysts for oxime linkage
NZ623810A (en) 2009-07-27 2015-10-30 Lipoxen Technologies Ltd Glycopolysialylation of non-blood coagulation proteins
KR101912335B1 (ko) 2009-07-27 2018-10-26 리폭센 테크놀로지즈 리미티드 비혈액 응고 단백질의 글리코폴리시알화
CN104698749B (zh) * 2010-01-25 2019-11-19 罗门哈斯电子材料有限公司 包含含氮化合物的光致抗蚀剂
BR112013015898A2 (pt) 2010-12-22 2018-06-26 Baxter International Inc. derivado de ácido graxo solúvel em água, e, métodos para preparar um derivado de ácido graxo e uma proteína terapêutica conjugada.
US10894087B2 (en) 2010-12-22 2021-01-19 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of cabazitaxel-based compounds
US20130331443A1 (en) 2010-12-22 2013-12-12 Nektar Therapeutics Multi-arm polymeric prodrug conjugates of taxane-based compounds
US9353172B2 (en) 2011-07-18 2016-05-31 Arts Biologics A/S Long acting biologically active luteinizing hormone (LH) compound
EA032552B1 (ru) * 2012-03-16 2019-06-28 Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити Препараты с контролируемым высвобождением для доставки ингибиторов hif-1
EA030318B1 (ru) * 2012-03-16 2018-07-31 Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити Конъюгаты нелинейного мультиблочного сополимера с лекарственным средством для доставки активных агентов
US20150133383A1 (en) 2012-05-11 2015-05-14 Prorec Bio Ab Method for diagnosis and treatment of prolactin associated disorders
CN103881083A (zh) * 2012-12-21 2014-06-25 张雅珍 含有蒽环类抗生素结构的新化合物以及制备方法和用途
CN103897178A (zh) * 2012-12-24 2014-07-02 张雅珍 含有蒽环类抗生素结构的新化合物以及制备方法和用途
CN103897176B (zh) * 2012-12-24 2018-08-17 张雅珍 蒽环类抗生素偶联非线性多嵌段共聚物及其制备方法和应用
CN103910870B (zh) * 2012-12-28 2018-08-17 张雅珍 蒽环类抗生素偶联非线性多嵌段共聚物及其制备方法和应用
CN103910871A (zh) * 2012-12-28 2014-07-09 张雅珍 蒽环类抗生素偶联非线性多嵌段共聚物及其制备方法和应用
CN103910866B (zh) * 2012-12-31 2018-08-17 张雅珍 含有蒽环类抗生素结构的新化合物以及制备方法和用途
PT2968440T (pt) 2013-03-15 2019-07-31 Zymeworks Inc Compostos citotóxicos e antimitóticos e métodos de utilização dos mesmos
ES2916722T3 (es) 2013-12-27 2022-07-05 Zymeworks Inc Sistemas de enlace que contienen sulfonamida para conjugados de fármacos
US10946096B2 (en) 2014-02-26 2021-03-16 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Nitrobenzaldehyde proton release for manipulation of cellular acidosis
IL287645B2 (en) 2014-09-17 2024-04-01 Zymeworks Bc Inc Cytotoxic and anti-mitotic compounds and methods for their use
PL3207130T3 (pl) 2014-10-14 2020-02-28 Halozyme, Inc. Kompozycje deaminazy adenozyny 2 (ada2), jej warianty i sposoby ich zastosowania
ES2713251T3 (es) 2015-04-24 2019-05-20 Univ Duke Complejos metálicos con bifosfonato útiles como agentes de formación de imágenes
WO2017118700A1 (en) 2016-01-08 2017-07-13 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Controlled-release cnp agonists with increased nep stability
SG11201805026SA (en) 2016-01-08 2018-07-30 Ascendis Pharma Growth Disorders As Controlled-release cnp agonists with low npr-c binding
NZ743488A (en) 2016-01-08 2023-02-24 Ascendis Pharma Growth Disorders As Controlled-release cnp agonists with low initial npr-b activity
EP3400020A1 (en) 2016-01-08 2018-11-14 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Cnp prodrugs with large carrier moieties
AU2017205273C1 (en) 2016-01-08 2022-12-01 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Controlled-release CNP agonists with reduced side-effects
PL3400019T3 (pl) 2016-01-08 2023-01-23 Ascendis Pharma Growth Disorders A/S Proleki cnp z przyłączeniem nośnika w ugrupowaniu pierścieniowy
EP3423103A1 (en) 2016-03-01 2019-01-09 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Pth prodrugs
CN117257922A (zh) 2016-09-29 2023-12-22 阿森迪斯药物骨疾病股份有限公司 具有低峰-谷比的pth化合物
CN109843295B (zh) 2016-09-29 2022-04-05 阿森迪斯药物生长障碍股份有限公司 控释cnp激动剂的组合疗法
CN109789189B (zh) 2016-09-29 2024-01-23 阿森迪斯药物骨疾病股份有限公司 控释pth化合物的剂量方案
CN108530637B (zh) * 2017-03-05 2021-03-30 厦门赛诺邦格生物科技股份有限公司 一种单一功能化支化聚乙二醇的制备方法
JP7338873B2 (ja) 2017-07-19 2023-09-05 ユニケリス・リミテッド 強皮症関連血管障害を治療または改善するための組成物および方法
EP4161956A1 (en) 2020-06-03 2023-04-12 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Il-2 sequences and uses thereof

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3888797A (en) * 1970-08-04 1975-06-10 Carapus Company Limited Detergent composition
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5328679A (en) 1988-04-01 1994-07-12 Immunomedics, Inc. Methods for technetium/rhenium labeling of proteins
US5645815A (en) 1991-02-08 1997-07-08 Diatide, Inc. Radiolabled compounds for thrombus imaging
US5997844A (en) 1991-02-08 1999-12-07 Diatide, Inc. Technetium-99m labeled peptides for imaging
KR930703024A (ko) 1991-02-08 1993-11-29 리챠드 티. 딘 영상용 테크네튬-99m표지폴리펩티드
DE4135115A1 (de) 1991-10-24 1993-04-29 Trigon Chemie Gmbh Kationaktive tenside
JP2502252B2 (ja) * 1993-02-18 1996-05-29 アイセロ化学株式会社 ポリビニルアルコ―ル系フィルム
US5679711A (en) * 1993-10-08 1997-10-21 Fhj Scientific, Inc. Hydroxyl ions as novel therapeutic agents and compounds that modulate these ions, compositions employing these agents, therapeutic methods for using such agents
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US6153655A (en) 1998-04-17 2000-11-28 Enzon, Inc. Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same
DE10044373A1 (de) 2000-09-08 2002-03-21 Roche Diagnostics Gmbh Neues Reagenz zur Markierung von Nukleinsäuren
DK1485377T5 (da) * 2002-02-25 2010-12-06 Kudos Pharm Ltd Pyranoner egnede som ATM-inhibitorer
US7087229B2 (en) 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
US7413738B2 (en) * 2002-08-13 2008-08-19 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on biodegradable linkers
US7122189B2 (en) 2002-08-13 2006-10-17 Enzon, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
WO2004044222A2 (en) 2002-11-12 2004-05-27 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric prodrugs of vancomycin
US7332164B2 (en) 2003-03-21 2008-02-19 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Heterobifunctional polymeric bioconjugates
AU2004230927B9 (en) 2003-04-13 2011-12-01 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric oligonucleotide prodrugs

Also Published As

Publication number Publication date
US20060286065A1 (en) 2006-12-21
JP4308764B2 (ja) 2009-08-05
NZ537956A (en) 2007-08-31
AU2003262622B2 (en) 2008-09-11
EP2338513A2 (en) 2011-06-29
EP1534334A4 (en) 2008-04-16
CA2493329A1 (en) 2004-02-19
US7897647B2 (en) 2011-03-01
EP1534334A1 (en) 2005-06-01
JP2006505634A (ja) 2006-02-16
WO2004014424A1 (en) 2004-02-19
US20040037802A1 (en) 2004-02-26
KR20050047096A (ko) 2005-05-19
AU2003262622A1 (en) 2004-02-25
EP2338513A3 (en) 2012-09-26
EP1534334B1 (en) 2014-06-25
CA2493329C (en) 2012-04-03
US7122189B2 (en) 2006-10-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1534334B1 (en) Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
JP4824404B2 (ja) 脂肪族生物分解性リンカーに基づく放出可能なポリマー複合体
US8192743B2 (en) Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
RU2401283C2 (ru) Способ получения полимерных конъюгатов
KR20050109595A (ko) 헤테로 2작용성 중합체 바이오컨쥬게이트

Legal Events

Date Code Title Description
FG Grant or registration