MXPA04011086A - Polinucleotido aislados y metodos para promover una morfologia en un hongo. - Google Patents

Abstract

Esta invencion incluye moleculas de polinucleotidos aisladas, que se expresan diferencialmente en un hongo nativo, que exhibe una primera morfologia. La invencion incluye un metodo para aumentar un bioproceso, que utiliza un hongo., use produce un hongo transformado por la transformacion del hongo con una molecula de polinucleotido recombinante. Esta molecula de polinucleotido recombinante contiene una secuencia aislada de polinucleotidos enlazada operablemente a un promotor. Dicha secuencia de polinucleotidos se expresa para promover una primera morfologia. Esta primera morfologia del hongo transformado, aumenta un bioproceso, con relacion al bioproceso que utiliza una segunda morfologia.

Description

POLINUCLEÓTIDOS AISLADOS Y MÉTODOS PARA PROMOVER UNA MORFOLOGÍA EN UN HONGO CAMPO TÉCNICO La invención pertenece a las moléculas de polinucleótidos aisladas, constructores de polinucleótidos recombinantes, y métodos para promover una morfología en un hongo .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los hongos han llegado a ser utilizados crecientemente para la producción de numerosos productos útiles en el comercio. Un tipo de hongo, conocido como hongo wfilamentosó", se usa actualmente para la producción, a escala industrial, de metabolitos, tal como anticuerpos (penicilinas y cefalosporinas, por ejemplo) y ácidos orgánicos (ácidos i cítrico y fümárico, por ejemplo) . Los hongos filamentosos son útiles adicionalmente para la producción industrial de enzimas, tal como, por ejemplo, proteasas y lipasas . La utilización de una especie de hongos filamentosos para la producción de los compuestos deseados, a menudo implica cultivos en crecimiento sumergidos de los hongos. Los hongos filamentosos pueden exhibir numerosas morfologías en los cultivos sumergidos, una de los cuales es la morfología filamentosa. Cuando los hongos en los cultivos exhiben esta morfología .! filamentosa, el crecimiento filamentoso puede aumentar la viscosidad del medio de cultivo. La viscosidad aumentada puede afectar la transferencia de masa y las propiedades de aeración del cultivo, pueden causar problemas de mezcla en un biorreactor, que pueden, típicamente, ser acompañados por la productividad disminuida. Alternativamente, los hongos "filamentosos" pueden exhibir una morfología de tipo pellas. En contraste a los cultivos de los hongos que exhiben una morfología filamentosa, la viscosidad de los cultivos de los hongos que exhiben una morfología de pellas, puede ser relativamente baja y puede utilizar menos energía para la mezcla y aeración del cultivo. Para muchos productos, por ejemplo el ácido cítrico, ácido itacónico, . estatinas, penicilinas y varias enzimas, la productividad puede ser aumentada utilizando hongos que exhiben la morfología de pellas con relación a hongos que exhiben la morfología filamentosa. Sin embargo, al menos en ciertas especies de hongos, la producción de la enzima péptica o el ácido fumárico, por ejemplo, puede ser aumentada utilizando un hongo que exhiba la 'morfología filamentosa.

Sería conveniente desarrollar métodos para promover una morfología deseada en un hongo y también desarrollar métodos para la influencia o el control en la morfologías exhibidas por los hongos en un cultivo, y así optimizar la productividad.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la invención se dirige a una molécula de polinucleótido aislada, que se expresa diferencialmente en un hongo nativo, el cual exhibe la morfología de pellas con relación al hongo nativo, que exhibe la morfología filamentosa. En un aspecto, la invención se dirige a un método de ) aumentar un bioproceso por la utilización de un hongo. Un hongo transformado se produce por medio de la transformación del hongo con una molécula de un polinucleótido recombinante. Esta molécula de polinucleótido recombinante contiene una secuencia de polinucleótidos aislada, enlazada operablemente a un promotor. Un polinucleótido codificado por la secuencia de polinucleótidos se expresa para promover la morfología de pellas. Esta morfología de pellas del hongo transformado aumenta un bioproceso con relación al bioproceso que utiliza la morfología filamentosa de los hongos transformados.

En otro aspecto, la invención se refiere a un método de promover una morfología de un hongo y aumentar la productividad de un bioproceso. Un hongo es transformado con una secuencia de polinucleótidos orientada en contrasentido, complementaria a la secuencia de gene. Un producto de trascripción de la secuencia de polinucleótidos hibridiza a un mAKN y asi reprime la expresión del gene. Dicha expresión de gene promueve una morfología y aumenta un bioproceso relativo al bioproceso en una morfología de hongos alternativa.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Modalidades preferidas de la invención se describen abajo con referencia a los dibujos acompañantes, La Figura 1 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern del nivel de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia de cADN del Balu-4 señalada en la SEC ID NO: 1. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de ' trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4), '40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6), después de inducir dicha morfología filamentosa .

La Figura 2 muestra el alineamiento y comparación de la secuencia de aminoácidos pronosticada de A. níger Balu-4, SEC ID NO: 2 (secuencia superior) y la secuencia de aminoácidos de la subunidad beta de la proteína G, Emericella nidulans, SEC ID NO: 3 (secuencia del fondo) . La Figura 3 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia del cADN Balu-42 señalada en la SEC ID NO: 4, Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4), 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa. La Figura 4 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia de cADN Brsa-25 señalada en la SEC ID NO: 6. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de. trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4) , 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa.' La Figura 5 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia de cADN Brsa-43 señalada en, la SEC ID NO: 8. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4) , 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa. La Figura 6 muestra el alineamiento y comparación de la secuencia de aminoácidos pronosticada de A. níger Brsa-43, SEC ID NO: 10 (secuencia superior) y la secuencia de aminoácidos del proteasa insensitiva de pepstatina lisosomal del Homo sapiens, SEC. ID NO: 11 (secuencia de fondo) . La Figura 7 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia de cADN Brsa-47 señalada en la SEC ID NO: 12. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4) , 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa..

La Figura 8 muestra el alineamiento y comparación de la secuencia de aminoácidos pronosticada de A. niger Brsa-47, SEC ID N0:14 (secuencia superior), y la secuencia de aminoácidos de la sintasa de 1-fosfato del mio-inositol Sesamum indicum, SEC. ID NO: 15 (secuencia de fondo) . La Figura 9 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia de cADN Brsa-109, señalada en la SEC ID NO: 16. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los nivele de trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4) , 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa. La Figura 10 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. niger, que corresponde a la secuencia de cADN Brsa-118, señalada en la SEC ID NO: 18. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa, se muestran en 20 minutos (pista 4) , 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa.

La Figura 11 muestra el alineamiento y comparación de la secuencia de aminoácidos predicha de A. níger Brsa-118, SEC ID N0:20 (secuencia superior), y la sintasa de hidroximetilglutaril-CoA probable, Neurospora crassa, SEC ID NO: 21 (secuencia de fondo) . La Figura 12 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia de cADN Arsa-7, señalada en la SEC ID NO: 22. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4) , 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa. La Figura 13 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia de cADN Arsa-118, señalada en la SEC ID NO: 24. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4) , 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa.

La Figura 14 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia de cADN A37, señalada en la SEC ID NO: 26. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4) r 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6} después de inducir la morfología filamentosa. La Figura 15 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia de cADN ?-90, señalada en la SEC ID NO: 28. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de- trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4), 40 minutos (pista 5} y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa. La Figura 16 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia de cADN Arsa-43, señalada en la SEC ID NO: 33. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4), 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa.' La Figura 17 muestra el alineamiento y comparación de la secuencia de aminoácidos predicha de A. niger Arsa-43, SEC ID NO: 34 (secuencia superior), y la proteína de la poliubiquitina Aspergillus nidulans, SEC. ID NO: 35 (secuencia de fondo) . La Figura 18 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. níger, que corresponde a la secuencia parcial de cADN Arsa-10, señalada en la SEC ID NO: 36. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa - se muestran en 20 minutos (pista 4) , 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa. La Figura 19 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción del gene nativo A. niger, que corresponde " a la secuencia parcial de cADN Arsa-27, señalada en la SEC -ID NO: 37. Las pistas 1, 2 y 3 reflejan los niveles de trascripción en la morfología de pellas. Los niveles de trascripción en la morfología filamentosa se muestran en 20 minutos (pista 4) , 40 minutos (pista 5) y 120 minutos (pista 6) después de inducir la morfología filamentosa. La Figura 20 muestra una comparación de los niveles de expresión aumentados en la morfología filamentosa (derecha) relativa a la morfología de pellas (izquierda) del A. nlger nativo para cada gene de Balu-4, Brsa-25, Brsa-43, Brsa-47, Brsa-109 y Brsa-118. La Figura 21 muestra una comparación de los niveles de expresión aumentados en la morfología de pellas (izquierda) con relación a la morfología filamentosa (derecha) del A. niger nativo para cada uno de los genes Arsa-7, Arsa-10, Arsa-27, Arsa-43 y A-90. La Figura 22 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles de trascripción de los genes A. niger nativos, que corresponden a las secuencias del cADN Balu-4, Balu-42, Brsa-25, Brsa-47, Brsa-109 y Brsa-118, señaladas en las SEC ID Nos: 1, 4, 6, 12, 16 y 18, respectivamente. El panel (A) muestra los niveles de trascripción en el A. niger nativo que crece en 10 ppb (partes por mil millones) de Mn2+ (morfología de pellas) durante 14 horas (pista 1), 24 horas (pista 2), 48 horas (pista 3), 72 horas (pista 4), 96 horas (pista 5) y 120 horas (pista 6). El panel B muestra los niveles de trascripción en el A. niger nativo el cual crece en 1000 ppb de Mn2+ (morfología filamentosa) para 1 hora (pista 1), 2 horas (pista 2), 24 horas (pista 3), 36 hors (pista 4) , 72 horas (pista 5) y 108 horas (pista 6) „ La Figura 23 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de los niveles ' de trascripción de los genes A. niger nativos, que corresponden a las secuencias del cADN Arsa-7, A-37, Arsa-48 y A-90 señaladas en las SEC ID NOs: 22, 24, 26 y 28 respectivamente. El panel (A) muestra los niveles de trascripción en el A. Niger nativo que crece en 10 ppb de Mn2+ (morfología de pellas) durante 14 horas (pista 1), 24 horas (pista 2), 48 horas (pista 3), 72 horas (pista 4), 96 horas (pista 5) y 120 horas (pista 6) . El panel B muestra los niveles de trascripción en el A. niger nativo que crece en 1000 ppb de Mn2+ (morfología filamentosa) para 1 hora (pista 1) , 2 horas (pista 2), 24 horas (pista 3), 36 hors (pista 4), 72 horas (pista 5) y 108 horas (pista 6) . La Figura 24 es un diagrama de flujo que ilustra un aspecto particular de la presente invención. La. Figura 25 muestra los resultados de la supresión para A. niger transformado con secuencias de polinucleótidos orientados en contrasentido complementarias a Balu-42 (Panel A) , Brsa-25 (Panel B) y Brsa-118 (Panel C) . Cada panel compara las morfologías del control de A. niger (a la izquierda) y A. Níger transformado (a la derecha) que contiene el constructor del ADN contrasentido correspondiente crecido en 15 ppb del medio Mn2+. La Figura 26 muestra los resultados de la supresión para A. Níger transformado con secuencias de polinucleótidos orientados en contrasentido complementarias a los cADNs que corresponden a Arsa-7 (Panel A) , Arsa-37 (Panel B) y A-90 (Panel C) . Cada panel compara las morfologías del control de A. niger (a la izquierda) y A. Níger transformado (a la derecha) que crece en 12 ppb del medio Mn2+. La Figura 27 muestra la producción del ácido cítrico del A. Níger de control y el A. Níger transformado, que contiene la secuencia de polinucleótidos en contrasentido,, complementaria a Balu-42 (cepa2805) o complementaria a Brsa-118 (cepa 2808) . El Panel (A) muestra la producción medida del ácido cítrico para experimentos de transformación individuales. El Panel (B) muestra los valores promediados de los datos ilustrados en el Panel (A) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS La invención se refiere a polinucleótidos que pueden tener una expresión diferencial en un hongo nativo. Para fines de la presente descripción, el término de "expresión"' de una secuencia de polinucleótidos se puede referir a procesos combinados de la trascripción y la traslación o pueden referirse a una porción del proceso combinado de la trascripción y la traslación. El término de "expresión diferencial" se puede referir a dos o más niveles diferentes de expresión, o se puede referir a una ausencia en la expresión en un primer caso relativo a una presencia de la expresión en un segundo caso. La invención incluye moléculas de polinucleótidos aisladas, que pueden incluir una secuencia de polinucleótidos que se expresa diferencialmente en las diferentes morfologías exhibidas por un hongo nativo. Para los fines de la presente descripción, El término de "nativo" puede referirse a un organismo que no se ha manipulado genéticamente. El término de "aislado" se puede referir a una molécula que ocurre naturalmente, tal como, por ejemplo, un polinucleótido o un polipéptido, que se ha recuperado de un organismo el cual lo produjo, o, alternativamente, puede referirse a una molécula sintética.

Un molécula de polinucleótido aislada, de acuerdo con la presente invención, puede comprender una secuencia de polinucleótidos que tiene una expresión aumentada en un hongo, que exhibe una morfología de pella con relación a un nivel inferior o una ausencia de expresión en la morfología filamentosa del hongo. Alternativamente, una molécula de polinucleótido, de acuerdo con la invención, puede comprender una secuencia de polinucleótidos que tiene un nivel de expresión aumentado en una morfología filamentosa de un hongo nativo con relación a un nivel inferior o la ausencia de la expresión en la morfología de las pellas. Lo polinucleótidos aislados abarcados por la presente invención, pueden ser aislados de cualquier fuente de hongos que sea capaz de exhibir la morfología filamentosa y la morfología de pellas. Una fuente de hongos no se limita a un grupo específico de hongos y puede ser un miembro cualquiera de los tres grupos de hongos mayores. Un miembro ejemplar del grupo de Basidiomicetos es el Phanerochaete chrysosporium. Miembros ejemplares del grupo de Ascomicetos y Hongos Imperfectos incluyen el Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus terreus, Emericella nidulans, Neurospora crassa, Fusarium oxysporum, Penícillium chrysogenum y Trichoderma reesel . Miembros ejemplares del grupo de Zigomicetes incluyen el Rhizomucor miehei y Rhizopus oryzae. Una molécula de polinucleótido aislada ejemplar, abarcada por la presente invención, puede comprender una secuencia de polinucleótidos aislada de A. niger que se expresa diferencialmente en la morfología filamentosa del A. niger nativo, con relación a la morfología de pellas del A. niger nativo. La secuencia de polinucleótidos, expresada diferencialmente, puede comprender, por ejemplo, una secuencia como se señala en cualquiera de las SEC ID NOs: 1, 4, 6, 8, 12, 16, 18/ 22, 24, 26, 28, 33, ' 36 y 37, o puede comprender una secuencia complementaria a cualquiera de esas secuencias. Cada una de las secuencias de polinucleótidos señaladas en las SEC ID Nos: 1, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 22, 24, 26, 28, 33, 36 y 37 corresponde a la secuencia determinada desde una molécula del cADN de longitud completa, preparada de acuerdo con los métodos discutidos abajo, con las SEC ID Nos: 36 y 37 siendo secuencias parciales, determinadas del cADN de longitud completa. Se entenderá que los métodos y técnicas de aislamiento, discutidos aquí, son ejemplares y que numerosas técnicas convencionales se pueden utilizar para producir las moléculas de polinucleótidos aisladas de la presente invención.

Las moléculas del cADN de longitud completa, que comprenden las secuencias de polinucleótidos señaladas en las SEC ID NOs: 1, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 22, 24, 26, 28, 33, 36 y 37, se obtienen de la cepa A. níger, ATCC11414 las cuales utilizan las técnicas de hibridización substractiva de supresión (Diatchenko et al., Proceedings national Academy of Science U.S. A. (Procedimientos de la Academia Nacional de Ciencias de' EE.UU.) Vol. 93, pp. 6025-6030, 1996), en conjunto con el equipo de substracción de cADN PCR-SELECT™ (CLONTECH, Palo Alto, California) . Las colecciones del cADM substractivas de supresión se construyen. Una primera colección de cADN se construye utilizando el cADN obtenido de A. niger, que exhibe la morfología de tipo pella, como el probador y el cADN obtenido de A. Niger, que exhibe la morfología filamentosa como un impulsor. La relación del impulsor / probador es aumentada tres veces sobre la relación sugerida por el manual el equipo de substracción. Una segunda colección del cADN substractiva de supresión se crea utilizando el cADN obtenido de A. niger que exhibe la morfología filamentosa como probador y la cual utiliza el cADN obtenido de A. níger, que exhibe la morfología de pellas como el impulsor. Un primer conjunto de ADN se genera desde la primera colección y un segundo conjunto de cADN se genera de la segunda colección. Los cADN expresados diferencialmente, que se presentan específicamente o aumentan en la morfología de pellas, son aislados de la primera colección del cADN por hibridización, la cual utiliza el primer conjunto del cADN e hibridiza independientemente utilizando el segundo conjunto de cADN como sondas. El aislamiento del cADN que se aumenta o específico a la morfología filamentosa de A. níger, se logra por medio de la hibridización, independientemente de la segunda colección del cADN, que utiliza el primer conjunto del cADN y el segundo conjunto de cADN como sondas. Los segmentos de los cADN expresados diferencialmente, que son aislados por la hibridización substractiva de expresión,, se seleccionan para la secuencia del ADN. La secuencia de los segmentos se ejecuta utilizando una sola pasada de la secuencia con el apresto T7-2. Los fragmentos del ADN aislados por la hibridización substractiva de supresión se usan para diseñar parejas de aprestos específicos del gene para la utilización en el aislamiento de los cADN de longitud completa. Se logra el aislamiento del cADN de longitud completa, utilizando el equipo de amplificación del cADN de tipo maratón" y la polimerasa del cADN ADVANTAGE® (CLONTCH, Palo Alto, CA) .Los aprestos específicos de genes diseñados de la clonas de hibridización substractiva de supresión, se utilizan para ejecutar la amplificación rápida de la PCR de extremos del cADN (RACE-PCR) . La secuencia de los cADN de longitud completa, se determinan usando los métodos de secuencia del ADN automáticos convencionales. Doce clonas del cADN de longitud completa y dos clonas del cADN de longitud parcial se produjeron y formaron secuencias de acuerdo con los métodos discutidos anteriormente. Las secuencias resultantes se presentan como sigue. La secuencia de Balu-4 cADN se señala en la SEC ID NO: 1: la secuencia de Balu-42 cADN se señala en la SEC ID NO:4; la secuencia de Brsa-25 cADN se señala en la SEC ID NO: 8; la secuencia de Brsa~43 cADN se señala en la SEC ID NO: 8; la secuencia de Brsa-47 cADN se señala en la SEC ID No: 12; la secuencia de Brsa-109 cADN se señala en SEC ID NO: 16; la secuencia de Brsa-18 cADN se señala en la SEC ID NO: 18; la secuencia de Arsa-7 cADN se señala en la SEC ID NO: 22; la secuencia de Arsa-48 cADN se señala en la SEC ID NO: 24; la secuencia de A-37 cADN se señala en la SEC ID NO: 26; la secuencia de A-90 cADN se señala en la SEC ID NO: 28; la secuencia de Arsa-43 cADN se señala en la SEC ID NO: 33; la secuencia parcial de Are-20 cADN se señala en la SEC ID NO: 36; y la secuencia parcial de Arsa-27 cADN se señala en la SEC ID NO: 37. Las secuencias de aminoácidos de cada una de las catorce sécuencias de polinucleótidos determinadas se pronostican utilizando el código genético conocido. Se realizaron búsquedas de homología utilizando BLASTP para investigar la homología entre una secuencia de aminoácidos pronosticada y la secuencia de NCBI no redundante Gn Bank CDS. Todas las investigaciones de la homología se conducen utilizando un valor E umbral = 0.005. Por lo tanto, los resultados de cada búsqueda de homología BLAST (discutida abajo) se basan en este valor umbral inicial. El análisis de la mancha Northern se utilizó para analizar los niveles de expresión de los genes en el A. níger nativo, que corresponden a cada ' una de la catorce clonas de cADN. La expresión de cada gene , por A. nígerr que exhibe la morfología filamentosa, se compara a la expresión del mismo gene en el A. níger, que exhibe la morfología de pellas. Para el análisis de expresión, el A. níger crece inicialmente en un medio de cultivo que contiene menos de o igual a aproximadamente 12 partes por mil millones (ppb) de Mn2+ durante 12 ¦ horas. Después de las 12 horas iniciales de crecimiento/' el cultivo se dividió en dos mitades, la primera mitad se mantiene a una concentración baja de Mn2+ (menos o igual a alrededor de 12 ppb) y la otra mitad se lleva a una concentración final de aproximadamente 1000 ppb de Mn2+ (o, en algunos casos, a una concentración final mayor o igual a aproximadamente 15 ppb de Mn2+) . El A. níger puede ser extremamente sensible a la concentración de Mn2+. A las concentraciones de Mn2+ de o debajo de alrededor de 12 ppb, el A. níger nativo exhibe la morfología en pellas, mientras a concentraciones de Mn2+ mayores de aproximadamente 12 ppb, el A. níger nativo exhibe la morfología filamentosa. Para simplificar la presente descripción, el punto en el cual el cultivo se divide en dos mitades (después de 12 horas de crecimiento inicial) puede ser referido como el tiempo cero (t = 0) . Adicionalmente, puesto que la adición del Mn2+ a una concentración final de aproximadamente 12 ppb, promueve la morfología filamentosa, la adición de Mn2+ puede ser referida como la inducción de filamento. Se recogieron muestras de cultivos a los 20, 40, 60 y 120 minutos, después del tiempo cero, de tanto el cultivo no inducido (morfología de pellas) como el cultivo inducido (morfología filamentosa) . Las muestras se centrifugaron para formar pellas de cultivo que se congelan con nitrógeno liquido y se almacenan a -80°C para la extracción del ARN total futuro. El ARN total se puede aislar de las pellas de cultivo congeladas utilizando métodos convencionales. Después del fraccionado, de tamaño de la muestra de ARN total por las técnicas de electroforesis de gel convencionales y la transferencia subsiguiente a una membrana de manchado, las muestras del ARN total recogidas en cada punto del tiempo se analizaron usando la hibridización de las sondas que se sintetizaron por el apresto aleatorio de los fragmentos de cADN de hibridización substractiva de supresión aislados o por los fragmentos de apresto aleatorios del cADN de longitud completa, digeridos con la endonucleasa de restricción. La síntesis de sonda incluye la incorporación de [32P] - -dCTP. Los resultados de la hibridización de las manchas Northern pueden ser visualizados por la exposición de las manchas a la película de rayos X. La Figura 1 muestra la exposición de la película de rayos X de un análisis de mancha Northern de la expresión di j gene A. níger que corresponde a Balu-4, SEC ID NO: 1. La hibridización aumentada es evidente en las muestras de mARN tomadas de los cultivos filamentosos (pistas 4, 5 y 6) relativos al mARN producidos en la morfología de pella (pistas 1-3) . Quince microgramos (ug.) del ARN total se usaron para cada pista.- Las muestras del ARN utilizadas se obtuvieron desde los cultivos de pellas después de t = 0 a t = 20 minutos (pista 1) , t = 40 minutos (pista 2) y t = 120 minutos (pista 3) ; y los cultivos filamentosos post-inducción a t = 20 minutos (pista 4), t = 40 minutos (pista 5) y t = 120 minutos (pista 6) . -El ARN total usado para cada pista y la identificación de la pista para cada mancha Northern, discutida abajo, es la misma como la señalada para la Figura 1. Los resultados mostrados en la Figura 1 indican que Balu-4 es expresado diferencialmente en el A. níger nativo con un nivel aumentado de expresión detectado en la morfología filamentosa. La secuencia de aminoácidos pronosticada de Balu- se señala en SC ID NO: 1. Esta secuencia de aminoácidos de Balu-4 se predijo de la secuencia de cADN de Balu-4 (SEC ID NO:l). Como se muestra en la Figura 2, una búsqueda de la homología de la secuencia de aminoácidos, que utiliza BLSASTP indica que la SEC ID NO: 2 (secuencia superior) tiene una identidad del 97% con la secuencia de aminoácidos de una subunidad beta de la proteína' G de Emerdcella nidulans, SC ID NO: 3 (secuencia de fondo). Las. posiciones de la identidad de secuencia se indican por la colocación del símbolo de aminoácido idéntico correspondiente entre SEC ID NO: 2 (superior) y SEC ID NO: 3 (fondo). El símbolo w+" muestra la SEC ID NO: 2 intermedia y la SEC ID NO: 3 indica una diferencia de aminoácido conservativa. Para propósitos de la presente invención, una diferencia de aminoácido ¦ conservativa o una ' sustitución de aminoácido conservativa pueden referirse a una sustitución de un aminoácido por otro aminoácido con propiedades químicas similares. Adicionalmente, el término de "homología" puede, en algunos caso, referirse a un aminoácido idéntico o un aminoácido conservativo. La apariencia de un espacio abierto entre las posiciones correspondientes en la SC ID NO: 2 y SEC ID NO: 3 en la Figura 2, indica una diferencia de aminoácido no conservativa entre las dos secuencias alineadas. Tres secciones de la SEC ID N0.:2, que tiene una identidad relativamente mínima con la SEC ID NO.: 3 se señalan como las SEC ID Nos:. 30, 31 y 32. La SEC ID NO.: 30 corresponde a los aminoácidos- 28-49 de la SEC ID N0.:2. La SEC ID NO.:31 corresponde a los aminoácidos 194-209 de la SEC ID N0.:2. La SEC ID N0.:32 corresponde a los aminoácidos 260-288 de la SEC ID NO . : 2. La Figura 3 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de la expresión del gene nativo que corresponde a Balu-41, SEC ID NO.: . La detección aumentada del mAR que corresponde a Balu-42 en la morfología filamentosa indica que Balu-42 es expresado diferencialmente con la expresión aumentada en filamentos relativos a la morfología de pella del A. niger nativo. La SEC ID NO.: 5 corresponde a la secuencia de aminoácidos \ de Balu-42 predicha ; desde la SEC ID NO.: 4. Una búsqueda de la homología BLASTP es incapaz de identificar la homología entre la SEC ID NO.: 5 y cualquier secuencia en la base de datos buscada. La Figura 4 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de la expresión del gene nativo que corresponde 'a la secuencia del cADN de Brsa-25. señalada en la SEC ID NO. :'6. Los resultados indican que Brsa-25 es expresada diferencialmente con la expresión aumentada en la morfología filamentosa del A. niger nativo relativo a la morfología de pellas . La secuencia de aminoácidos pronosticada de Brsa-25, SEC ID NO.:6, se señala en la SEG ID NO.:7. Una búsqueda déla homología BLASTP fue incapaz de identificar la homología entre la SEC ID NO.: 7 y cualquier secuencia en la base de datos buscada.

La Figura 5 muestra los resultados del análisis de mancha Nortéen de la expresión del gene nativo que corresponde a Brsa-43 cADN señalado en la SEC ID NO.: 8. Los resultados de la mancha Northern indican que Brsa-43 se expresa diferencialmente con la expresión aumentada en la morfología filamentosa del A. níger nativo con relación a la morfología de pellas. La secuencia de aminoácidos de Brsa-43 predicha de la SEC ID NO.:B, se señala en la SEC ID N0.:9. La SEC ID NO.:10 corresponde a los aminoácidos 29-594 de la SEC ID NO.: 9. La Figura 6 muestra el alineamiento de BLASTP y la comparación de Brsa-43, SEC ID NO.: 10 (secuencia superior) que tiene el 31% de identidad, a la secuencia de aminoácidos del precursor de la tripeptidil-peptidasa I humana (proteasa insensitiva de pepstatina lisosomal) , la SEC ID NO.:ll (secuencia de fondo). La indicación de la identidad y la homología entre las secuencias es como se discute más adelante con respecto a la Figura 2. La Figura 7 muestra los resultados del análisis de mancha Northern de la expresión del gene Brsa-47 nativo que corresponde a la secuencia del cADN señalada en la SEC ID NO.: 12. Los- resultados indican que el Brsa-47 es expresado j diferencialmente; con los niveles de expresión aumentados aparentes en la morfología filamentosa con relación a la morfología de pellas del A. niger nativo. La secuencia de aminoácidos de Brsa-47, como se predijo de lal2, se señala en la SEC ID N0.:13. La Figura 8 muestra los resultados de la homología de BLASTP para la SEC ID N0.:14 (secuencia superior) que corresponde a los aminoácidos 26-530 de la SEC ID NO.:13. Los resultados de BLASTP indican que la SEC ID NO.: 14 tiene una identidad del 56% con la secuencia de aminoácidos de la sintaza del 1-fosfato de Mio-inositol del Sesamum indicum, SEC ID NO.: 15 (secuencia de fondo) . Los resultados del análisis de la mancha Northern de la expresión del gene Brsa-109 en A. niger nativo, que corresponde a la secuencia de cADN señalada en la SEC ID NO.: 16, se muestra en la Figura 9. Los resultados indican que el gene Brsa-109 es expresado diferencialmente con la expresión aumentada detectada en la morfología filamentosa relativa a la morfología de pellas. La secuencia de aminoácidos de Brsa-109 pronosticada de la SEC ID NO.:16, se señala en la SEC ID NO,:17. Una búsqueda de la homología de BLASTP es incapaz de identificar la homología entre la SEC ID NO.: 2 y cualquier secuencia en la base de datos.

La Figura 10 muestra los resultados del análisis de mancha Northern de la expresión del gene Brsa-118 en A. níger nativo, que corresponde a la secuencia de cADN señalada en la SEC ID NO.:18. Los resultados indican que el gene Brsa-118 es expresado diferencialmente, con la expresión aumentada en la morfología filamentosa relativa a la morfología de pellas. La secuencia de aminoácidos de Brsa-118 pronosticada de la SEC ID NO.:18 se señala en la SEC ID NO.:19. La Figura 11 muestra los resultados de la búsqueda de la homología BLASTP para Brsa-118. Los resultados muestran que la secuencia de aminoácidos pronosticada de Brsa-118, SEC ID NO.:20 (secuencia superior) , tiene el 66% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la sintasa de hidroximetilglutaril-CoA probable desde Neurospora cxassa, SEC ID NO.: 21 (secuencia de fondo). La Figura 12 muestra los resultados del análisis de la mancha Northern de la expresión del gene Arsa-7 en A, níger nativo, que corresponde a la secuencia de cADN señalada en la SEC ID NO.:22. Los resultados indican que el gene Arsa-7 se expresó diferencialmente, con niveles de expresión aumentados en la morfología de pellas con relación a los niveles de expresión en la morfología filamentosa.

La secuencia de aminoácidos de Arsa-7, como se predijo de la SEC ID NO.:22, se señala en la SEC ID NO.:23. Los resultados de la búsqueda de'- la homología BLAST fueron incapaces de identificar cualquier secuencia con homología a la secuencia de aminoácidos predicha de Arsa-7. La Figura 13 muestra los resultados del análisis de mancha Northern y la expresión del gene Arsa-48 en A. níger nativo, que corresponde a la secuencia del cADN señalada en la SEC ID NO.:24. Los resultados indican que el gene Arsa-48 se expresó diferencialmente, con los niveles de expresión aumentados que ocurren en la morfología de pellas con relación a la morfología filamentosa. La secuencia de aminoácidos de Arsa-48, como se pronosticó de la SEC ID NO.: 24, se señala en la SEC ID NO.: 25. Una búsqueda de la homología BLASTP fue incapaz de identificar la homología entre la secuencia de aminoácidos de Arsa-48 y cualquier otra secuencia de aminoácidos en la base de datos buscad . La Figura 14 muestra los resultados de un análisis de la mancha Northern de la expresión del gene A-37 en ?. níger nativo, que corresponde a la secuencia de cADN señalada en la SEC ID NO.: 26. Los resultados indican que el gene A-37 es expresado diferencialmente con la expresión aumentada que ocurre en la morfología de pellas con relación al nivel de expresión detectado en la morfología filamentosa. La secuencia de aminoácidos de A-37, como se pronosticó en la SEC ID NO. 26, se señala en la SEC ID NO.:27. La búsqueda' de la homología BLASTP fue incapaz de detectar cualquier homología entre la secuencia de aminoácidos de A-37 pronosticada y las otras secuencias de aminoácidos en la base de datos buscada. La Figura 15 muestra el. resultado del análisis de mancha Northern de la expresión del gene A-90 en ?. niger nativo, que corresponde a la secuencia del cADN señalada en la SEC ID NO.:28. Los resultados indican que A-90 es expresada diferencialmente con un nivel de expresión aumentado que ocurre en la morfología de pellas con relación al nivel de expresión detectado en la morfología filamentosa. La secuencia de aminoácidos de A-90, como se pronosticó de la SEC ID NO.:28, se señala en la SEC ID NO.:29. Una búsqueda de homología BLASTP ejecutada en la SEC ID NO.: 29 es incapaz de detectar cualquier homología con cualquier otra secuencia de aminoácidos en la base de datos. La Figura 16 muestra el resultado del análisis de mancha Northern de la expresión del gene Arsa-43 en A. niger nativo, que corresponde a la secuencia del cADN señalada en la SEC ID N0.:22. Los resultados indican que el gene Arsa-43 es expresado diferencialmente con un nivel de expresión aumentado en la morfología de pellas con relación al nivel de expresión en la morfología filamentosa. La secuencia de aminoácidos de Arsa-43, como se pronosticó de la SEC ID NO.: 33, , se señala en la SEC ID NO.: 34. La Figura 17 muestra los resultados de la búsqueda de la homología BLASTP para Arsa-43. Estos resultados muestran que la secuencia de aminoácidos pronosticada de Arsa-4, SEC ID NO.:34 (secuencia superior) tiene el 96% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la proteína de poliubiquitina de Aspergillus nidulans, SEC ID NO.:35 (secuencia de fondo). La Figura 18 muestra los resultados del análisis de mancha Northern de la expresión del gene Arsa-10 en A. niger nativo, que corresponde a la secuencia parcial del cADN señalada en la SEC ID NO.: 36. Los resultados indican que el gene Arsa-43 se expresó diferencialmente con un nivel de expresión aumentado que ocurre en la morfología de pellas con relación a la morfología filamentosa. La búsqueda de la homología es incapaz de detectar cualquier homología entre la SEC ID NO.: 36 y otras secuencias de polinucleótidos en la base de datos buscada.

La Figura 19 muestra los resultados del análisis de mancha Northern de la expresión del gene Arsa-27 en A. niger nativo, que corresponde a la secuencia del cADN señalada en la SEC ID NO.: 37. Los resultados indican que el gene Arsa-43 se expresó diferencialmente con un nivel de expresión aumentado en la morfología de pellas con relación a la morfología filamentosa,. En la búsqueda de la homología no se pudo detectar cualquier homología entre la SEC ID NO.: 37 y otras secuencias de polinucleótidos, con respecto a la base de datos buscada. Haciendo referencia a las Figuras 20 y 21, la comparación de la gráfica de barras mostrada de la expresión diferencial de varios genes de A. níger. La Figura 20 muestra los niveles de transcripción para los genes Balu-4, Brsa-25, Brsa-43, Brsa-47, Brsa-109 y Brsa-118, los cuales muestran la expresión aumentada en el A. níger filamentoso. La Figura 21 muestra los niveles de trascripción para los genes Arsa-7, Arsa-10, Arsa-27, A-37, Arsa-42 y A-90, los cuales muestran la expresión aumentada en dicha morfología de pellas del A. níger. Se condujo un análisis de expresión adicional utilizando ios cultivos que crecen por hasta 5 días después de t = 0 (como se definió antes) . Haciendo referencia a la Figura 22, muestra los niveles de trascripción aumentados para los gene Balu-4, Balu-42, Brsa-25, Brsa-109 y Brsa-118 en el A. niger nativo que crece con las condiciones filamentosas (Panel B) en comparación con los niveles de trascripción en A. níger crecido en las condiciones de pellas (Panel A) . Haciendo referencia a la Figura 23, que muestra los niveles de trascripción aumentados para los genes Arsa-7, A-37, Arsa- 8 y A-90 en A. niger nativo en condiciones de pellas (Panel A) , en comparación con los niveles de la trascripción correspondiente en los cultivos filamentosos (Panel B) . En modalidades particulares, la presente invención se relaciona con moléculas de polipéptidos aislados que comprenden una secuencia de aminoácidos señalados en cualquiera de las SEC ID N0s„: 2, 5, 7, 9, 13. 17, 19, 23, 25, 29 y 34 y sus equivalentes funcionales. Para los fines de la presente descripción, el término de equivalente funcional se puede referir a una versión truncada o una versión sustituida conservadoramente de una secuencia de aminoácidos, que tiene propiedades funcionales sustancialmente equivalentes y/o una actividad biológica con relación al polipéptido no sustituido o truncado. Como se entenderá por lo expertos en la materia. Los métodos convencionales pueden ser utilizados para truncar o introducir sustituciones de aminoácidos conservativas en las secuencias de aminoácidos señaladas en la lista de secuencias. Métodos convencionales están disponibles, que pueden ser utilizados para producir los polipéptidos aislados de la presente invención. Además de las moléculas de polinucleótidos aislados discutidas abajo, la presente invención abarca polinucleótidos que comprenden secuencias de polinucleótidos alternativas, que codifican las secuencias de aminoácidos señaladas en las SEC ID N0s.;2, 5, 7, 9, 13, 17, 19, 23, 25, 27, 29 y 34, o que codifican los equivalentes funcionales de estas secuencias de aminoácidos. La invención también abarca las secuencias de aminoácidos codificadas por las SEC ID NOs.: 36 y 37 y sus equivalentes funcionales, y las secuencias de polinucleótidos alternativas que codifican las secuencias de aminoácidos codificadas por las SEC ID NOs . : 36 y 37. Como comprenderán los expertos en la materia, varias modificaciones pueden ser introducidas en la secuencia de polinucleótidos sin afectar la secuencia de aminoácidos resultante, debido a la naturaleza degenerativa del código genético. Varios constructores de polinucleótidos recombinantes son abarcados por la presente invención. En modalidades particulares, un constructor de polinucleótidos recombinantes, de acuerdo con la presente invención, puede comprender cualquiera de las secuencias -de polinucleótidos aislados discutidos antes. Todas o partes de cualquiera de las secuencias ¦ de polinucleótidos discutidas aquí, pueden ser enlazadas a un promotor, preferiblemente enlazado en forma operable a un promotor. Enlaces operables de un polinucleótido a un promotor para formar un constructor de polinucleótido recombinante, puede permitir que la expresión de la secuencia de polinucleótidos sea controlada por el promotor. Alternativamente, una secuencia complementaria a cuando menos cierta parte de la secuencia señalada en cualquiera de las SEC ID NOs.: 1, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 22, 24, 26, 28, 33, 36 y 37, puede ser utilizada para formar un polinucleótido recombinante, el cual puede ser incorporada en la orientación en contrasentido. En aspectos particulares, la secuencia complementaria puede comprender una porción de la secuencia complementaria de suficiente longitud para habilitar la hibridización de supresión (discutida abajo) . Aunque la utilización de las secuencias de polinucleótido de menos de 30 nucleótidos se considera, la hibridización de * supresión puede implicar típicamente la utilización de uno o más polinucleótidos que tienen una longitud mayor de o igual a 30 nucleótidos. Por lo tanto, la invención abarca secuencias de polinucleótidos que comprenden un fragmento de cualquiera de las secuencias señaladas en cualquiera de las SEC ID NOs.: 1, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 22, 24, 26, 28, 33, 36 y 37, y fragmentos complementarios. Tales fragmentos pueden comprender preferiblemente una longitud de al menos 30 nucleótidos de la secuencia correspondiente o una secuencia complementaria. La invención también se refiere a un vector que comprende cualquiera de las secuencias de polinucleótidos antes discutidas . Vectores abarcados por la presente invención pueden ser, por ejemplo, una plasmida, una cosmida o un vector viral. Los vectores, de acuerdo con la presente invención, pueden ser utilizados para introducir en una célula huésped una o más de las moléculas de polinucleótidos aisladas discutidas. Las células huésped no se limitan a un tipo de célula particular y pueden ser, por ejemplo, una bacteria, un hongo o una célula eucariótica superior. Adicionalmente, los vectores de la presente invención pueden ser los vectores de clonación, los vectores de expresión y/o los vectores de integración. La invención también se refiere a una célula huésped transformada y a cultivos celulares los cuales se han transformado para comprender cualquiera de las moléculas de polinucleótidos aislados, discutidas antes. Se pueden utilizar técnicas convencionales de transformación de células para la introducción de los polinucleótidos aislados en una célula huésped deseada. La presente invención abarcan los métodos para promover una morfología en un hongo. Un proceso para promover una morfología en un hongo se describe con referencia al diagrama de flujo de la Figura 24. En la etapa inicial 100, un polinucleótido aislado es provisto. Este polinucleótido aislado de la etapa 100 puede comprender cualquiera de estos polinucleótidos aislados discutidos anteriormente. Los polinucleótidos aislados de la etapa 100 se pueden usar para formar un polinucleótido recombinante en la etapa 110. Como se discutió antes, la formación de los polinucleótidos recombinantes puede comprender enlazar operablemente un promotor y la secuencia del polinucleótido aislado. Adicionalmente, la formación de una etapa 110 de nucleótido recombinante puede comprender la formación de un vector, el cual se puede utilizar para transformar un hongo en la etapa 120. Numerosos hongos están disponibles para la utilización- en la etapa 120 de transformación. Preferiblemente, los hongos que serán transformados son capaces de exhibir la morfología filamentosa y además capaces de exhibir una morfología de pellas. Hongos ejemplares para los propósitos de la etapa 120 pueden ser, por ejemplo, cualquiera de los hongos discutidos anteriormente con respecto a los hongos de la fuente. Dé.spués de la etapa 120 de transformación, un polipéptido codificado por el polinucleótido recombinante se puede expresar desde el hongo transformado en la etapa 130. La expresión en la etapa 130 puede promover una morfología particular de los hongos. Esta morfología particular promovida por la expresión, puede ser determinada por la secuencia del polinucleótido aislado provisto en la etapa 100. Por ejemplo, una morfología filamentosa puede ser promovida proporcionando un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido que comprende un secuencia de aminoácidos señalada en cualquiera de las SEC ID Nos.: 2, 5, 7, 9, 13, 17 y 19, y sus equivalentes funcionales. Alternativamente, la morfología de pellas puede ser promovida proporcionando un polinucleótido aislado en la etapa 100, que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos señalada en cualquiera de las SEC ID Nos.: 23, 25, 27, 29 y 34, o un equivalente funcional del mismo, oque codifica una secuencia de aminoácidos codificada por los polinucleótidos SEC ID Nos.: 36 ó 37, o su equivalente funcional.

En una modalidad alternativa de la presente invención, un polinucleótido recombinante, que comprende una secuencia complementaria orientada en contrasentido (discutida anteriormente) se puede utilizar para la etapa 120 de transformación. En una etapa 1,40 de supresión, el ARN producido de la trascripción del ADN en contrasentido puede formar un ARN doble (dsARN) con el mARN nativo y asi promover la degradación del ARN y/o inhibir o bloquear la traslación del mARN. Por lo tanto, los constructores en contrasentido recombinantes, introducidos en la etapa 10, pueden suprimir o bloquear la expresión del gene complementario para promover una morfología deseada. Por ejemplo, un constructor de polinucleótidos que comprende una secuencia complementara a un fragmento o enteramente cualquiera de las SEC ID Nos.:l, 4, 6, 8, 12, 16 ó 18, puede ser introducido en la etapa 120. En la etapa 140, la trascripción producida de la secuencia complementaria en contrasentido puede hibridizar al mARN trascrito desde los genes Balu-4, respectivamente, y la r inhibición o bloqueo de la produqción del producto de proteina correspondiente» La supresión de uno o más de Balu-4 Balu-42, Brsa-25, Brsa-47, Brsa-109 o Brsa-118 por los métodos de acuerdo con la presente invención, puede promover la morfología de pellas en el huésped transformado. Similarmente, los polinucleótidos que tienen una o más secuencias complementarias a un fragmento o una forma completa de cualquiera de las SEC ID Nos.:22, 24, 26, 28, 33, 36 y 37, pueden ser introducidos en la etapa 120 y pueden inhibir o bloquear la expresión del gene correspondiente de Arsa-7, Arsa-28, A-37, A-90, Arsa-43, Ara-10 y Arsa-27. La supresión de uno o más de Arsa-7, Arsa-28, A-37, A-90, Arsa-43, Ara-10 y Arsa-27 en la etapa 140, por métodos de acuerdo con la presente invención, puede promover la morfología filamentosa en el huésped transformado. Aunque el proceso mostrado en la Figura 24 se discutió en términos de proporcionar un solo polinucleótido aislado en la etapa 100, se entenderá que la invención abarca la provisión de dos o más de las secuencias de polinucleótidos aisladas, discutidas antes. Adicionalmente, se entenderá que se pueden proporcionar las secuencias de polinucleótidos aislados en la etapa 100, en que al menos uno de los polinucleótidos aislados pueden promover la morfología de pellas, cuando se expresan y al menos otro proporciona el polinucleótido aislado y puede promover la morfología filamentosa cuando se expresa. ,,Por enlazar operablemente diferentes 'polinucleótidos aislados a diferentes promotores inducibles en la etapa 110, y usando múltiples polinucleótidos recombinantes para la etapa 120 de transformación, puede ser posible promover selectivamente cualquiera de la morfología filamentosa o la morfología de pellas, induciendo la expresión en las etapas 130 ó 140. Puede ser ventajoso promover una morfología particular en un hongo, puesto que la utilización de una morfología de hongo particular puede aumentar un bioproceso en un cultivo de hongo. Por ejemplo, la utilización de una forma de pella de un hongo puede aumentar varios bioprocesos, tal como, por ejemplo, la expresión de la semicelulasa, expresión de la celulasa, expresión de la lignasa, conversión de la biomasa al alcohol, producción de ácidos orgánicos, producción de la glucoamilasa, producción de la penicilina y producción de la lovastatina. Alternativamente, la utilización de cultivos de hongos filamentosos puede aumentar los bioprocesos, tal como la producción del ácido fumárico o la producción de la enzima péptica. El proceso mostrado en la Figura 24 puede ser utilizado para producir un hongo transformado y promover una morfología de pellas en el hongo transformado, el cual puede ser utilizado para aumentar la producción de un producto deseado en un cultivo que contiene el hongo transformado con relación a cultivos de hongos no transformados, de otra manera bajo condiciones idénticas. Alternativamente, el proceso puede ser utilizado para producir un hongo transformado y promover una morfología filamentosa en este hongo transformado. La morfología del filamento promovida puede aumentar la producción de un producto deseado en un cultivo que contiene el hongo transformado con relación al cultivo del hongo no transformado, bajo condiciones sustancialmente idénticas de otra manera. La invención también considera la introducción en conjunto de uno o más polinucleótidos que codifican una o más proteínas de interés, junto con los constructores que promueven la morfología, discutidos antes. La proteína de interés puede ser nativa al huésped o puede ser de diferentes especies fúngales o no fúngales. Cuando las proteínas de interés tienen una expresión y/o actividad aumentada en una primera morfología con relación a una segunda morfología, el constructor que promueve la morfología co-introducido puede promover preferiblemente la primera morfología. Una proteína de interés puede ser aquella que pueda ser recogida del cultivo o puede ser aquella que está implicada en un bioproceso que produce un producto o compuesto deseado.

EJEMPLOS Ejemplo 1: Métodos Generales para el Aislamiento del ADN v Análisis Funcionales Cepas de Escherichia coli (E. coli) DH5 y JM109 se usaron como huéspedes para experimentos de clonación. La cepa Agrobacterium tumefaciens AGLO se utilizó como huésped para vectores binarios y la transformación de A. niger. Para el aislamiento de los genes asociados con la morfología por la hibridización substractiva de supresión ("SSH") el AR total se aisló de. A. niger, de acuerdo con el método de extracción de isotiocianato-cloroformo de fenol-guanidinio modificado con ácido, descrito por Chomczynski y Sacch (Anal, Biochem. 162:156-159 (1987)). La SSH se ejecutó utilizando el equipo de substracción de cADN PCR-SELECT™ (CLONTECH, Palo Alto, CA) , como se describe por el fabricante, con la excepción que la cantidad del cADN del impulsor relativa al probador utilizado se: triplicó para cada una de la primera y segunda hibridizaciones . Las clonas asociadas con la morfología se identificaron por la clasificación diferencial de las colecciones de cADN de SSH. Los dos oligonucleótidos se diseñaron contra cada secuencia de clonas aislada recientemente. La amplificación rápida del cADN y la PCR (RACE-PCR) se ejecutó para aislar el extremo 5' y el extremo 3' de cada clona de cADN. La transformación fungal se logró utilizando el fragmento BGI II/Xba I pGpdA-hph-TtrpC en pAN7-l (Punt y van der Hondel, Methods Enzymol, 216_ 447-57 (1992)), insertado en el vector primario pGA 82 (An et al, "Binary vectors" in Plant Molecular Biology Manual, Gelvin y Sc ilperolands (1988) , en pp A3/1-19)'; La introducción de los constructores basados en pGA482 en Agrobactexlum tumefaciens, cepa AGLO, se condujo utilizando el método de congelación y derretido (Ebert et al., Proc. Nati. Acá. Sci., USA 84: 5745-5749 (1987)). Las plasmidas se aislaron de A. tumefaciens transformado, y se digirieron con varias enzimas de restricción, y se analizaron utilizando ía electroforesis del gel de agarosa para confirmar la transformación. Las transformaciones fúngales se ejecutaron como se describe por Groot et al (Nat. Biotechnol. 18: 839-42 (1998) . Al menos quince hongos transformados en forma independientemente se seleccionaron y crecieron en el medio mínimo de agar, que contiene 250 µg/ml de higromicina y 250 pg/ml de cefotaxina para cada evento transgénico.

Ejemplo 2: Promoción de una morfología usando la expresión en contrasentido Se construyeron vectores de expresión de transgenes individúales para comprender la secuencia de polinucleótidos complementaria a una de las siguientes Balu (SEC ID No.: 4); Brsa-25 (SEC ID No.: 6); Brsa-118 (SEC ID NO. 18); Arsa-7 (SEC ID No.: 22); A-37 (SEC ID No.: 26); y A-90 (SEC ID No.: 28). Las secuencias complementarias se incorporaron en los vectores en la orientación en contrasentido bajo el control de A. Nidulans, el promotor de dshidrogenasa de fosfogliceral (gpdA) y el terminador de trpC de A. nidulans. Los vectores construidos se introdujeron independientemente en A. niger, utilizando la transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens. El A. niger de control se preparó por la transformación con el vector binario sin la secuencia en contrasentido incorporada. Haciendo referencia a la Figura 25, que muestra la promoción de la morfología de pellas en el A. niger transgénico, que expresa Balu-42, Brsa-25 y Brsa-118 (derecha) en contrasentido, en comparación con el A. niger de control cultivado bajo condiciones idénticas. La Figura 26 muestra la promoción de la morfología filamentosa en el A. niger transgénico ' que expresa Arsa-7, A-37 y A-89 (derecha) en contrasentido, en comparación al A. niger de control, cultivado bajo condiciones idénticas.

Ejemplo 3: Bio-producción aumentada de la morfología El A. niger transgénico que comprende Balu-42 (cepa 2805) o Brsa-118 (cepa 808) complementaria en contrasentido, se preparó como se describió en el Ejemplo 1. Múltiple cultivos transformados independientemente de cada cepa y múltiples cultivos de control (preparados como se describió anteriormente) crecieron a 30 °C durante alrededor de 50 horas. Haciendo referencia a la Figura 26, el Panel A muestra la producción del ácido cítrico para cultivos individuales de las cepas transformadas 2805 (Balu. y 2808 (Brsa-118) y para el A. niger de, control. El Panel B muestra la producción promedio del ácido cítrico para cultivos de las cepas 2805 y 2808 con relación a los cultivos de control. Los resultados indican que los métodos y secuencias de la invención pueden ser utilizados para promover la morfología en los hongos. La promoción de una morfología por t la metodología de la invención se puede usar para aumentar la producción de la proteína y/o aumentar un bioproceso que utiliza hongos transgénicos .

En cumplimiento con los estatutos, la invención se ha descrito en un lenguaje más o menos específico como las características estructurales y metódicas. Sin embargo, se entenderá que la invención no se limita a las características específicas 'mostradas y descritas, .puesto que los significados aquí descritos comprenden formas preferidas de llevar a cabo la invención. Por lo tanto, la invención, reclamada en cualquiera de sus formas o modificaciones dentro del ámbito apropiado de las reivindicaciones anexas, se interpretará apropiadamente de acuerdo con las doctrinas de equivalentes.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> Battelle Memorial Institute Lasure, Linda L. Dai, Ziyu <120> Polinucleótidos Aislados y Métodos para Promover una Morfología en un hongo 5 <130> BA4-195 <150> 60\382,132 <151> 2002-05-20 <160> 37 <170> Patentln versión 3.2 <210> 1 10 <211> 2208 <212> ADN <213> Aspergillus niger <400> 1 accgtcaact caatttctcc ccctcaggcc cgtcctccgt ttcacaattg acatcttccc 60 tctccagggg cttgttccgt caagatggcc gacatgtccg gcgaacagat gcaggctaag 120 attaccgcgg ctaggcgcga agccgaaggc ctgaaggaca agatcaagcg cagaaaggat 180 gagttggccg atacgactct ccgtcaagtc gcgcagaacc aaactgaaac cttgcctcgt 240 attggtatga agccccggcg gacgctcaag ggacatttgg ccaagatcta cgccatgcat 300 tggtcgaccg accgccgaca tctcgtctca gcctctcagg acggaaagct catcatctgg 360 jj- gacgcctaca ccacgaacaa ggtccatgcg atcccgctga ggtcatcatg ggtcatgacc 420 tgtgcctatg ccccgagtgg aaactacgtc gcctgcggtg gtctcgacaa catttgctcg 480 atctacaacc tctcctctcg cgagggtccg acccgtgtcg cgcgtgagct ctccggacac 540 tctggctacc tctcttgctg ccggttcatc aacgatcgca gaatcatcac gtcttccggc 600 gacatgactt gcatgctgtg ggatatcgaa tcgggctcga aagttactga attcgctgat 660 caccttggcg acgtgatgtc aatcagcatc aacccgacaa accagaacgt tttcg.tttcg 720 ggcgcctgtg atgccttcgc caagctgtgg gacattcgta ccggaaaggc ggtgcaaact 780 ttcgctggac acgaatccga catcaacgcc atccagttct tccccgacgg aaacgctttc 840 ggaacgggtt ccgacgacac ctcctgccgt ctgtttgaca tccgtgcgga tcgcgaactc 900 aacacctacc agagcgacca aatactgtgc ggtatcacct ccgttgcctt ctccgtctct 960 ggcagattgc tttttgctgg ttacgatgac ttcgagtgca aggtctggga tgttctgcgc 1020 ggagacaagg ttggatccct gagtggtcac gagaaccgcg taagctgcct gggagtcagc 1080 0 aacgatggca tcagcttgtg cactggatcc tgggattctc tgctcaaggt ctgggcttgg 1140 taaaaaagca aaacgaacaa aaacagcaaa gataccctgt ctcagtcttt tgcgacgtcc 1200 tcattccaag tttctctttt tttccttttt ctgcgccact aggctaaatg tccgccattg 1260 tacgataatc tttttcaccg ggagcaaatc ttgtcgccct tgctccataa tgtactatct 1320 cggagtaccg gcaaagttac cacgaaacga aaaaatcacg gggcagtcag ggtgcctaga 1380 catgtcgggg ttggggattc tgccgccttt cccagctggg tgtgacgaga aagaataagc 1440 caagaaaaga gcagaatgcc aacaagaacc gacaatgctc gaatactggt gcggtgggtt 1500 gtaataatgc tattgatgtt tgagacctcg ggatcgttgc acggatatca gtgcgttgct 1560 gggcaagagg cagcgcatct cacatgtcat cttttgagct tcgaatattt gcaggcccct 1620 gttcttatgt attcgcgggc ttgactttct acttatgttc ctttttcttt cgatctcgct 1680 ttacccttca cccttactaa ccccatcccc cccctccttc gatgtcttgt tcttttcttc 1740 aatttcttac ctcgattact accatgatcg agtattcttt tgttcacttt tcattgtttc 1800 cttctcttgc cccctctttt cttctctgac ctttcttact cactatcttc tgtactttt 1860 tgcgggtgat ggatggaaag ggagggaatg tttccggata ggccatgacg tttttctttc 1920 gactcttact gcgatcccct tctgttacta atcatcagcc tacgtcttga aagtgtcggt 1980 tgtgtcattt gagtgttttc aagcgggctt ttttttcttt tatatccggt gttgaaatcg 2040 accatgtttc cagcaaatct ttcctttatc cctcgggggt ttcgccccac gatgtcatgt 2100 tccgcgacac tcttatgtcc cgacctggtg gtcagccaag gtgtggcaga gagttgttag 2160 gcagccacta gtacaaatga caggcaatac tttttggtaa aaaaaaaa 2208 <210> 2 <211> 352 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 2 Met Ala Asp Met Ser Gly Glu Gln Met Gln Ala Lys He Thr Ala Ala 1 5 10 15 Arg Arg Glu Ala Glu Gly Leu Lys Asp Lys He Lys Arg Arg Lys Asp 20 25 30 Glu Leu Ala Asp Thr Thr Leu Arg Gln Val Ala Gln Asn Gln Thr Glu 35 40 45 Thr Leu Pro Arg lie Gly Met Lys Pro Arg Arg Thr Leu Lys Gly His 50 55 60 Leu Ala Lys lie Tyr Ala Met His Trp Ser Thr Asp Arg Arg His Leu 65 70 75 80 Val Ser Ala Ser Gln Asp Gly Lys Leu He He Trp Asp Ala Tyr Thr 85 90 95 Thr Asn Lys Val His Ala lie Pro Leu Arg Ser Ser Trp Val Met Thr 100 105 110 Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Tyr Val Ala Cys Gly Gly Leu Asp 115 120 125 Asn lie Cys Ser lie Tyr Asn Leu Ser Ser Arg Glu Gly Pro Thr Arg 130 135 140 Val Ala Arg Glu Leu Ser Gly His Ser Gly Tyr Leu Ser Cys Cys Arg 145 150 155 160 Phe lie Asn Asp Arg Arg lie lie Thr Ser Ser Gly Asp Met Thr Cys 165 170 175 Met Leu Trp Asp lie Glu Ser Gly Ser Lys Val Thr Glu Phe Ala Asp 180 185 190 His Leu Gly Asp Val Met Ser- lie Ser He Asn Pro Thr Asn Gln Asn 195 200 205 Val Phe Val Ser Gly Ala Cys Asp Ala Phe Ala Lys Leu Trp Asp He 210 215 220 Arg Thr Gly Lys Ala Val Gln Thr Phe Ala Gly His Glu Ser Asp lie 225 230 235 240 Asn Ala lie Gln- Phe Phe Pro Asp Gly Asn Ala Phe Gly Thr Gly Ser 245 250 255 Asp Asp Thr Ser ¦Cys Arg Leu Phe Asp He Arg Ala Asp Arg Glu Leu 260 265 270 Asn Thr Tyr Gln Ser Asp Gln He Leu Cys Gly He Thr Ser Val Ala 275 280 285 Phe Ser Val Ser Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly Tyr Asp Asp Phe Glu 290 295 300 Cys Lys Val Trp Asp Val Leu Arg Gly Asp Lys Val Gly Ser Leu Ser 305 ¦310 315 320 Gly His Glu Asn Arg Val Ser Cys Leu Gly Val Ser Asn Asp Gly He 325 330 335 Ser Leu Cys Thr Gly Ser Trp Asp Ser Leu Leu Lys Val Trp Ala Trp 340 345 350 <210> 3 <211> 352 <212> PRT <213> Emericella nidulans <400> 3 Met Ala Asp Met Ser Gly Glu Gln Met Gln Ala Lys lie Thr Ala Ala 1 5 10 15 Arg Arg Glu Ala Glu Gly Leu Lys Asp Lys lie Arg Arg Arg Lys Asp 25 30 Asp Leu Ala Asp Thr Thr Leu Arg Asp Val Ala Gln Asn Gln Thr Asp 40 45 Ala Leu Pro Arg lie Gly Met Lys Pro Arg Arg Thr Leu Lys Gly His 50 55 60 Leu Ala Lys lie Tyr Ala Met His Trp Ser Thr Asp Arg Arg His Leu 65 70 75 80 Val Ser Ala Ser Gln Asp Gly Lys Leu lie lie rp Asp Ala Tyr Thr 85 90 95 Thr Asn Lys Val His Ala lie Pro Leu Arg Ser Ser Trp Val Met Thr 100 105 110 Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Tyr Val Ala Cys Gly Gly Leu Asp 115 120 125 Asn lie Cys Ser lie Tyr Asn Leu Ser Ser Arg Glu Gly Pro Thr Arg 130 135 140 Val Ala Arg Glu Leu Ser Gly His Ser Gly Tyr Leu Ser Cys Cys Arg 145 150 155 160 Phe lie Asn Asp Arg Arg lie lie Thr Ser Ser Gly Asp Met. Thr Cys 165 170 175 Met Leu Trp Asp lie Glu Ser Gly Ser Lys Val Thr Glu Phe Ala Asp 180 185 190 His Phe Gly Asp Val Met Ser lie Ser lie Asn Pro Thr Asn Gln Asn 195 200 205 lie Phe Val Ser Gly Ala Cys Asp Ala Phe Ala Lys Leu Trp Asp He 210 215 220 Arg Thr Gly Lys Ala Val Gln Thr Phe Ala Gly His Glu Ser Asp He 225 230 235 240 Asn Ala lie Gln Phe P.he Pro Asp Gly Asn Ala Phe Gly Thr Gly Ser 245 250 255 Asp Asp Thr Thr Cys Arg Leu Phe Asp lie Arg Ala Asp Arg Ser Leu 260 265 270 Asn Thr Tyr Gln Ser Asp Gln lie Leu ¦Cys Gly lie Thr Ser Val Gly 275 280 285 Phe Ser Val Ser Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly Tyr Asp Asp Phe Glu 290 295 300 Cys Lys Val Trp Asp Val Leu Arg Gly Asp Lys Val Gly Ser Leu Ser 305 310 315 320 Gly His Glu Asn Arg Val Ser Cys Leu Gly Val Ser Asn Asp Gly He 325 330 335 Ser Leu Cys Thr Gly Ser Trp Asp Ser Leu Leu Lys Val Trp Ala Trp 340 345 350 <210> 4' <211> 1149 <212> ADN <213> Aspergillus niger <400> 4 acgatttgac gtccctcgcg ttttcgccct ctcccacggt agtcactcct ttgcactaca 60 tacacgaagt cttacttcca gtcactcttt gaaaccactt ctcaatatcc ctacctctta 120 tcattcttta cttcacgcac aagacacgaa agtgaacctg taaaaatgcg tttcttcacc 180 accgcccttg tctctgccct tgcggccctg gcctctgcct acactcagcc cgactactct 240 cagaacccca ccggcaatgc catcctcacc cccgaactga accaggttgt tcctgctggc 300 aagcccttcg agatcacctg ggaccccact acctcgggca ctgtgtctct tgtccttctg 360 cgcggcccca gcaccaacgt cgtccccatc cagaccattg tcgaagacat cgacaactct 420 ggcagttact cttggactcc cagcaccacc ctcgagcctg acaccaccca ctacggtatc 480 ctccttgttg tcgagggcac tggccagtac cagtactccg tccagttcgg catctccaac 540 ccttactact cttcttcttc ctctgttgcc gctgctacta gcaccactgc cgccgccgct 600 gtgagctctg atgcttccga gactagcgtt atcatcagca agatcaccag cactatctgc 660 cccgagactg ccactgccac tgccgacgtc aagcccacct ccgtccctgt ggtcggtggc 720 aacaagccca ccagcttcgt cgttgctccc tctgcctccg gctctgccag ccttatccgc 780 agctctgcca ctccctccgg cactcctgct gccagcagct cctccgtctc tcccgttttc 840 accggtgctg ctgaccgcaa cgccatcagc ctcggcgccg tcgccgtcgg tgtcgctgcc 900 gtccttgctt tctaaatggg gcagccatcc ggcattctta ggaatttgta aagtgatgga 960 ggttgtacct agctgagaca gttgtatgta caagaacgcg caagcgcgag agagtgtgtt 1020 gagattattc atgtttgcag cgattcgatt cgattcgtcg actctttact tatgacaata 1080 tacccccata gttaatgagc aagggtaata ataagagcat tgtattatcc caaaaaaaaa 1140 aaaaaaaaa 1149 <210> 5 <211> 249 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 5 Met Arg Phe Phe Thr Thr Ala Leu Val Ser Ala Leu Ala Ala Leu Ala 1 5 10 . 15 Ser Al Tyr Thr Gln Pro Asp Tyr Ser Gln Asn Pro Thr Gly Asn Ala 20 25 30 lie Leu Thr Pro Glu Leu Asn Gln Val Val Pro Ala Gly Lys Pro Phe 35 40 45 Glu lie Thr Trp Asp Pro Thr Thr Ser Gly Thr Val Ser Leu Val Leu 50 55 60 Leu Arg Gly Pro Ser Thr Asn Val Val Pro lie Gln Thr lie Val Glu 65 70 75 80 As lie Asp Asn Ser Gly Ser Tyr Ser Trp Thr Pro Ser Thr Thr Leu 85 90 95 Glu Pro Asp Thr. Thr His Tyr Gly lie Leu Leu Val Val Glu Gly Thr 100 105 110 Gly Gln Tyr Gln Tyr Ser Val Gln Phe Gly lie Ser Asn Pro Tyr Tyr 115 120 125 Ser Ser Ser Ser Ser Val Ala Ala Ala Thr Ser Thr Thr Ala Ala Ala 130 135 140 Ala Val Ser Ser Asp Ala Ser Glu Thr Ser Val lie lie Ser Lys lie 145 150 155 160 Thr Ser Thr lie Cys Pro Glu Thr Ala Thr Ala Thr Ala Asp Val Lys 165 170 175 Pro Thr Ser Val Pro Val Val Gly Gly Asn Lys Pro Thr Ser Phe Val 180 185 190 Val Ala Pro Ser Ala Ser Gly Ser Ala Ser Leu lie Arg Ser Ser Ala 195 200 205 Thr Pro Ser Gly Thr Pro Ala Ala Ser Ser .Ser Ser Val Ser Pro Val 210 215 220 Phe Thr Gly Ala Ala Asp Arg Asn Ala lie Ser Leu Gly Ala Val Ala 225 230 235 240 Val Gly Val Ala Ala Val Leu Ala Phe 245 <210> 6 <211> 2083 <212> ADN 5 <213> Aspergillus niger <400> 6 aaagttcgtc ctctattctg tctcccttcg gcgattgtct tcgtcattcg ccttgcttta 60 ccatggccac agaaatcgag ccggccgaga tccctcccgt gctgggagtc ctcccagcat 120 acggacagga taaagaaacc cccctgagga tggtgccacg tgccgatggt gttcgcgctc 180 gcttagatcc gaacgtcacc ctcgaggagt acatgtactg ggccaagatc gagcgtcagc 240 tggaagagga agagaaccgc cagtacgtgc tggagcgcgg gcctctgacc gtcggcaagg 300 tcatccagaa ccgtttctcc aagggcgtcc accatgagaa ggagaagaaa ggcgcccaga 360 atagcccgca gatcgaaggt gaaaagggca tggtcgcatc cactccctca gattcgtccc 420 tagctgttac cgatgaggaa tggagaactg cagctcgcgc cctccgaaca gccagttggg 480 gtaccgtctt ctacttgatt accaccgacg tgctaggctg ggcaaacgca ccgttcgtct 540 1° ttgcaagtgt gggatacggt cctgccgtgg ctttgttcat tgtttttggt tgcttcgccg 600 gcttcagtgg ctggattctg tggaaggtgt ttctagaact cgactcaacg cgctacccct 660 tgatcaactt tggtgacacc táctatcgtg tttttggagc ttggagtcgt catttggtca 720 acatcggaca gtcgctgcag ctgctgatgt cggtgtccgt gcttgttctg ggtaacggcc 780 agatcctgtc gcagctgtcc aatgaaagta tctgtttcgt ggcgtgcatg attatccatg 840 atggtcatcg gcatggtact gtggaagcat tcggtccctt gcagcgtctc ggatggctga 900 ccaacgctgc cgtctggttg aacatcgcgg acttcatcat gatcatggtc gctgctggtg 960 gccactttgg tatcgactat caggccgtca tctcatccac cttgatccag gtcgtcgagc 1020 ccgtcaaggt cttcgctggg ccaccgcccg acaagtatca gattcaggcg acagggttct 1080 cgggacaatt cactggtgtc gaccagatgg tttacagcta cggtggtgct attttatttg 1140 ttgccttcct ggctgaaatg cgccatccgt gggacttctg gaagggattg ttgtgcgccc 1200 agatgttcat ttgttttgtc tacatcttct tcggtgcctt tgtctacagc ttctacggcc 1260 ^ aatactccat ctccaacctt tacaacgtgg ttgagccgaa aggtctacaa atggcagtaa 1320 atatagtcta ctttttaaca tccattattg cctgcattct ctacttcaat atcggcatga 1380 agtccatcta ccaacaggtc tttatggagc ttctcaactt cccagatatc tccaccaccc 1440 gcggccgcat gctctggtac ggtctcggcc cgatctactg ggtgattgcg ttcgtcatcg 1500 ccgctgccgt gccaaacttt agtggaattt ccagcatggt cggcgcggcc ctgatcctca 1560 acttcaccta cacgctcccg ggtattctat acgttggttt ccgatgccag aaggatgctg 1620 cgctacccgg agaggggtat gatcctgcga ccggggagac ggtgcgccat gattccggca 1680 tgcagcggta tatccgtggg ttcaagaagc actgggtgct gaatcttttc tgtatcttct 1740 acttctgtgg tggattggcg tgttctggta tgggcatgtg ggctgccatt gagagtttga 1800 ttgaggtgtt tgggcccggg ggtacggtgg ctacgtcttt tgggtgtgct gcacctgttt 1860 agaggggaga ttaaaggaga gtgcactgtg gagtagatgg gcactcttga tgagactgtc 1920 tataatatta ttgttagtag atggtgatga tggtatatat gctctcatct ctgtatatgt 1980 ctgtgatggt gtcattatca tgtatggtac gacatggatg tgattttaat gttaatgcta 2040 tgatcttcta tccccaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 2083 <210> 7 <211> 599 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 7 Met Ala Thr Glu lie Glu Pro Ala Glu lie Pro Pro Val Leu Gly Val 1 5 10 15 Leu Pro Ala Tyr Gly Gln Asp Lys Glu Thr Pro Leu Arg Met Val Pro 25 30 Arg Ala Asp Gly Val Arg Ala Arg Leu Asp Pro Asn Val Thr Leu Glu 40 45 Glu Tyr Met Tyr Trp Ala Lys lie Glu Arg Gln Leu Glu Glu Glu Glu 50 55 60 Asn Arg Gln Tyr Val Leu Glu Arg Gly Pro Leu Thr Val Gly Lys Val 65 70 75 80 lie Gln Asn Arg Phe Ser Lys Gly Val His His Glu Lys Glu Lys Lys oJ 90 95 Gly Al Gln Asn Ser Pro Gln lie Glu Gly Glu Lys Gly Met Val Ala 100 105 110 Ser Thr Pro Ser Asp Ser Ser Leu Ala Val Thr Asp Glu Glu Trp Arg 115 120 125 Thr Ala Ala Arg Ala Leu Arg Thr Ala Ser Trp Gly Thr Val Phe Tyr 130 135 140 Leu lie Thr Thr Asp Val Leu Gly Trp Ala Asn Ala Pro Phe Val Phe 145 150 155 160 Ala Ser Val Gly Tyr Gly Pro Ala Val Ala Leu Phe lie Val Phe Gly 165 170 175 Cys Phe Ala Gly Phe Ser Gly Trp lie Leu Trp Lys Val Phe Leu Glu 180 185 190 Leu Asp Ser Thr Arg Tyr Pro Leu lie Asn Phe Gly Asp Thr Tyr Tyr 195 200 205 Arg Val Phe Gly Ala Trp Ser Arg His Leu Val Asn lie Gly Gln Ser 210 215 220 Leu Gln Leu Leu Met Ser Val Ser Val Leu Val Leu Gly Asn Gly Gln 225 230 235 240 lie Leu Ser Gln Leu Ser Asn Glu Ser lie Cys Phe Val Ala Cys Met 245 250 255 lie lie His Asp Gly His Arg His Gly Thr Val Glu Ala Phe Gly Pro 260 265 270 Leu Gln Arg Leu Gly Trp Leu Thr ¦Asn Ala Ala Val Trp Leu Asn lie 275 280 285 Ala Asp Phe lie Met lie Met Val Ala Ala Gly Gly His Phe Gly lie 290 295 300 Asp Tyr Gln Ala Val lie Ser Ser Thr Leu lie Gln Val Val Glu Pro 305 310 315 320 Val Lys Val Phe Ala Gly Pro Pro Pro Asp Lys Tyr Gln lie Gln Ala 325 330 335 Thr Gly Phe Ser Gly Gln Phe Thr Gly Val Asp Gln Met Val Tyr Ser 340 345 350 Tyr Gly Gly Ala lie Leu Phe Val Ala Phe Leu Ala Glu Met Arg His 355 360 365 Pro Trp Asp Phe Trp Lys Gly Leu Leu Cys Ala Gln Met Phe lie Cys 370 375 380 Phe Val Tyr lie Phe Phe Gly Ala Phe Val Tyr Ser Phe Tyr Gly Gln 385 390 395 400 Tyr' Ser lie Ser Asn Leu Tyr Asn Val Val Glu Pro Lys Gly Leu Gln 405 410 415 Met Ala Val Asn lie Val Tyr Phe Leu Thr Ser lie lie Ala Cys lie 420 425 430 Leu Tyr Phe Asn lie Gly Met Lys Ser lie Tyr Gln Gln Val Phe Met 435 440 445 Glu Leu Leu Asn Phe Pro Asp lie Ser Thr Thr Arg Gly Arg Met Leu 450 455 460 Trp Tyr Gly Leu Gly Pro lie Tyr Trp Val lie Ala Phe Val lie Ala 465 470 475 480 Ala Ala Val Pro Asn Phe Ser Gly lie Ser Ser Met Val Gly Ala Ala 485 490 495 Leu lie Leu Asn Phe Thr Tyr Thr Leu Pro Gly lie Leu Tyr Val Gly 500 505 510 Phe Arg Cys Gln Lys Asp Ala Ala Leu Pro Gly Glu Gly Tyr Asp Pro 515 520 525 Ala Thr Gly Glu Thr Val Arg His Asp Ser Gly Met Gln Arg Tyr lie 530 535 540 Arg Gly Phe Lys Lys His Trp Val Leu Asn Leu Phe Cys lie Phe Tyr 545 550 555 560 Phe Cys Gly Gly Leu Ala Cys Ser Gly Met Gly Met Trp Ala Ala lie 565 570 575 Glu Ser Leu lie Glu Val Phe Gly Pro Gly Gly Thr Val Ala Thr Ser 580 585 590 Phe Gly Cys Ala Ala Pro Val 595 <210> 8 <211> 2006 <212> ADN <213> Aspergillus niger <400> 8 gtgtgttgtc cctctcaagg tctccagcat gcgttcttcc ggtctctaca cagcactcct 60 gtgctccctg gccgcctcga ccaacgcgat tgtccatgaa aagctcgccg cggtcccctc 120 cggctggcat cacgtcgaag atgctggctc cgaccaccag atcagcctgt cgatcgcgct 180 ggcacgcaag aacctcgatc agcttgaatc caagctgaaa gacttgtcaa cacctggcga 240 atcgcaatac ggccagtggc tggaccagga ggatgtcgac acgctgttcc cagtggccag 300 cgacaaggct gtgattaact ggctgcgcag cgccaatatc acccatattt cccgccaggg 360 cagcttggtg aactttgcga ccacggtcga taaggtgaac aagcttctca acgccacctt 420 tgcctactac caaagcggct cttcccagag attgcgcaca acagagtact ccatcccgga 480 tgatttggtc gactcaatcg acctcatctc cccaacgacg ttcttcggca aggaaaagac 540 tactgctggt ttgaaccagc gggcgcaaaa gattgacaac catgtggcca aacgttccaa 600 cagctcgtcc tgtgccgatc tcattacgct gtcctgcctg aaggagatgt acaactttgg 660 caactacact cccagcgctt cgtcgggcag caagctgggc ttcggcagct tcctgaacga 720 atccgcctcg tattctgacc ttgccaagtt cgagaagctg tttaacctgc cctctcagag 780 cttttccgtg gagttggtca acggcggcgt caatgatcag aatcaatcga cggcttcctt 840 gaccgaggcg gacctcgatg tggaattgct cgtcggagtt gctcatcccc tccctgtgac 900 tgagttcatc acttctggcg aacctccttt cattcccgac cccgatgagc cgagtgccgc 960 cgacaacgag aacgagcctt acctccagta ctatgagtac ctcctctcca agcccaactc- 1020 ggctctgccc caagtgattt ccaactccta tggtgacgac gaacagaccg ttcccgagta 1080 ctacgccaag cgagtctgca acctgaccgg acttgttggc ctgcgcggca tcagtgtcct 1140 cgagtcgtcc ggtgacgaag gtattggatc cggctgccga accaccgacg gcaccaaccg 1200 aacccaattc aaccccatct- tcccggccac ctgtccctac gtgaccgccg tgggagggac 1260 aatgtcctat gcccccgaga tcgcctggga agccagttcc ggcggattca gcaactactt 1320 cgagcgggcg tggttccaga aggaagctgt gcagaactac ctggcgcacc acatcaccaa 1380 cgagacgaag cagtactac't cgcaattcgc caactttagc ggtcgcggat tccctgacgt 1440 tgctgcccat agcttcgagc cttcatatga. g'gtgatcttc tacggcgccc gctacggctc 1500 cggcggtacc tcagccgcgt gtcccctttt ctctgcgcta gtgggcatgt tgaacgatgc 1560 tcgtctgcgg gcgggcaagt ccacgctggg tttcttgaac cccctgctct acagcaaggg 1620 gtacagagcg ttgactgatg tgacgggggg ccagtcgatc ggatgcaatg gcattgatcc 1680 gcagaatgat gagactgttg ccggcgcggg cattatcccg tgggcgcact g.gaacgccac 1740 ggtcggatgg gatccggtga ctggattggg acttcctgac tttgagaagt tgaggcagtt 1800 ggtgctgtcg ttgtagatgt atactatgta tatggtatga gattttgtgt gtgatgtgtg 1860 atcttatatg agagagaatg gtttagactg tgcgtgatat acatggacag ttcattttct 1920 catttaatga gacccttcat acggtagggg tcttagaggt cctcccattg ttatgcaaaa 1980 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa · 2006 <210> 9 ' <211> 595 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 9 Met Arg Ser Ser Gly Leu Tyr Thr Ala Leu Leu Cys Ser Leu Ala Ala 1 5 10 15 Ser Thr Asn Ala lie Val His Glu Lys Leu Ala Ala Val Pro Ser Gly 20 25 30 Trp His His Val Glu Asp Ala Gly Ser Asp His Gln He Ser Leu Ser 35 40 45 lie Ala Leu Ala Arg Lys Asn Leu Asp Gln Leu Glu Ser Lys Leu Lys 50 55 60 Asp Leu Ser Thr Pro Gly Glu Ser Gln Tyr Gly Gln Trp Leu Asp Gln 65 70 75 80 Glu Asp Val Asp Thr Leu Phe Pro Val Ala Ser Asp Lys Ala Val He 85 90 95 Asn rp Leu Arg Ser Ala Asn lie Thr His He Ser Arg Gln Gly Ser 100 105 110 Leu Val Asn Phe Ala Thr Thr Val Asp Lys Val Asn Lys Leu Leu Asn 115 120 125 Ala Thr Phe Ala Tyr Tyr Gln Ser Gly Ser Ser Gln Arg Leu Arg Thr 130 135 140 Thr Glu Tyr Ser lie Pro Asp Asp Leu Val Asp Ser He Asp Leu He 145 150 155 160 Ser Pro Thr Thr Phe Phe Gly Lys Glu Lys Thr Thr Ala Gly Leu Asn 65 170 175 Gln Arg Ala Gln Lys lie Asp Asn His Val Ala Lys Arg Ser Asn Ser 180 185 190 Ser Ser Cys Ala Asp Leu lie Thr Leu Ser Cys Leu Lys Glu Met Tyr 195 200 205 Asn Phe Gly Asn Tyr Thr Pro Ser Ala Ser Ser Gly Ser Lys Leu Gly 210 215 220 Phe Gly Ser Phe Leu Asn Glu Ser Ala Ser Tyr Ser Asp Leu Ala Lys 225 230 235 240 Phe Glu Lys Leu Phe Asn Leu Pro Ser Gln Ser Phe Ser Val. Glu Leu 245 250 255. Val Asn Gly Gly Val Asn Asp Gln Asn Gln Ser Thr Ala Ser Leu Thr 260 265 270 Glu Ala Asp Leu Asp Val Glu Leu Leu Val Gly Val Ala His Pro Leu 275 280 285 Pro Val Thr Glu Phe lie Thr Ser Gly Glu- Pro Pro Phe He Pro Asp 290 295 300 Pro Asp Glu Pro Ser Ala Ala Asp Asn Glu Asn Glu Pro Tyr Leu Gln 305 310 315 320 Tyr Tyr .Glu Tyr Leu Leu Ser Lys Pro. 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Aspergillus niger <400> 19 Met Ala Ala Arg Pro Gln Asn lie Gly lie Lys Ala lie Glu Val Tyr 1 5 10 15 Phe Pro Arg Gln Cys Val Asp Gln Ser Glu Leu Glu Lys Phe Asp Gly 20 25 30 Val Ser Glu Gly Lys Tyr Thr lie Gly Leu Gly Gln Th .Lys Met Ser 35 40 45 Phe Cys Asp Asp Arg Glu Asp lie Tyr Ser lie Ala Leu Thr Thr Phe 50 55 60 Ser Ser Leu Leu Arg Lys Tyr Asn lie Asp Pro Asn Ser lie Gly Arg 65 70 75 80 Leu Glu Val Gly Thr Glu Thr Leu Leu Asp Lys Ser Lys Ser Val Lys 85 90 95 Ser Val Leu Met Gln Leu Leu Ala Pro His Gly Asn Thr Asn Val Glu 100 105 110 Gly Val Asp Asn Val Asn Ala Cys Cys Gly Gly Thr Asn Ala Val Phe 115 120 125 Asn Ser lie Asn Trp Leu Glu Ser Ser Ala Trp Asp Gly Arg Asp Ala 130 135 140 Val Val Val Cys Gly Asp lie Ala Leu Tyr Ala Glu Gly Ala Ala Arg 145 150 155 160 Pro Thr Gly Gly Ala Gly Cys Val Ala Met Leu lie Gly Pro Asp Ala 165 170 175 Pro lie Val Phe Glu Pro Gly Leu Arg Ala Ser Tyr Val Thr His Ala 180 .185 190 Tyr Asp Phe Phe Lys Pro Asp Leu Thr Ser Glu Tyr Pro Val Val Asp 195 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Glu Lys Leu Asp Leu Lys Asn 385 390 395 400 Arg Leu Ser Asn Arg Asn Val Leu Pro Pro Gln Ser Tyr Val Asp Met 405 410 415 Cys Ala Leu Arg Glu His Ala His Leu Lys Lys Asn Phe Lys Pro Ser 420 425 430 Gly Asn Thr Glu Thr Leu Tyr Pro Gly Thr Tyr Tyr Leu Thr Glu Val 435 440 445 Asp Asp Met Phe Arg Arg Lys Tyr Asp Val Lys Ala 450 455 460 <210> 21 <211> 454 <212> PRT <213> ' Neurospora crassa <400> 21 Met Ala Thr Arg Pro Gln Asn He Gly He Lys Ala He Glu He Tyr 1 5 10 15 Phe Pro. Ser Gln Tyr Val Glu Gln Ser Glu Leu Glu Lys Phe Asp Gly 20 25 30 Val Ser Thr Gly Lys Tyr Thr He Gly Leu Gly Gln Thr Lys Met Ala 40 45 Phe Cys Asp Asp Arg Glu Asp He Tyr Ser Leu Ala Leu Thr Ala Val 50 55 60 Ser Arg Leu Leu Lys Asn Tyr Glu He Asp Thr Asn Thr He Gly Arg 65 70 75 80 Leu Glu Val Gly Thr Glu Thr Leu Leu Asp Lys Ser Lys Ser Val Lys ? 90 95 Ser Val Leu Met Gln Leu Phe Gly Glu Asn Thr Asn He Glu Gly Val 100 105 110 Asp Thr lie Asn Ala Cys Tyr Gly Gly Thr Asn Ala Phe Phe Asn Ser 115 120 125 Val Asn Trp He Glu Ser Ser Ala Trp Adp Gly Arg Asp Ala He Val 130 135 140 Val Ala Gly Asp He Ala Leu Tyr Ala Lys Gly Asn Ala Arg Pro' Thr 145 150 155 160 Gly Gly Ala Gly Cys Val Ala Met Leu Val Gly Pro Asn Ala Pro He 165 170 175 Ala Val Glu Pro Gly Leu Arg Gly Ser Tyr Met Ala His Ala Tyr Asp 180 185 190 Phe Tyr Lys Pro Asp Leu Thr Ser Glu Tyr Pro Tyr Val Asp Gly His 195 200 205 Tyr Ser Val Asn Cys Tyr Thr Glu Ala Leu Asp Gly Ala Tyr Arg Ala 210 215 220 Tyr Asn Gln Arg Glu Lys Leu Leu Thr Asn Gly Val Asn Gly His Ser 225 230 235 240 Glu Asp Ser Thr Lys Thr Pro Leu Asp Arg Phe Asp Tyr Leu Ala Phe 245 250 255 His Ala Pro Thr Cys Lys Leu Val Gln Lys Ser Tyr Ala Arg Leu Leu 260 265 270 Tyr His Asp Tyr Leu Ala Asn Pro Glu Ser Pro Val Phe Ala Asp Val 275 280 285 Pro Pro Glu Val Arg Asp Met Asp Tyr Lys Lys Ser Leu Thr Asp Lys 290 295 300 Val Val Glu Lys Thr Phe Met Thr Leu Thr Lys Lys Arg Phe Gln Glu 305 310 315 320 Arg Val Asn Pro Ala He Gln Val Pro Thr Leu Cys Gly Asn Met Tyr 325 330 335 Cys Gly Ser Val Trp Gly Gly Leu Ala Ser He He Gly His Val Asp 340 345 350 Ser Ala Gln Leu Glu Gly Lys Arg He Gly Leu Phe Ser Tyr Gly Ser 355 360 365 Gly Leu Ala Ala Ser Phe Cys Ser Phe Arg Val Thr Gly Ser Thr Glu 370 375 380 Lys Leu Ala Lys Thr Leu Asn Leu Pro Ala Arg Leu Ala Ala Arg Arg 385 390 "395 400 Ala Val Pro Pro Glu Ser Tyr Asp Ala Met Cys Asp Leu Arg Lys Gln 405 410 415 Ala His Leu Gln Lys Asn Tyr Thr Pro Lys Gly Glu Val Ser Thr Leu 420 425 430 Glu Pro Gly Thr Tyr Tyr Leu Glu Asn Val Asp Asp Met Phe Lys Arg 435 440 445 Thr Tyr Ser He Lys Ala 450 <210> 22 <211> 1498 <212> ADN <213> Aspergillus niger <400> 22 agctcaaatt ctcttccctt tgatctcaac taccattcct taagaagctg tgcttcgtac cttcatttcg ccttactttt tttctgctta ctactacaac tccatcactc tctattcttt caatatgaag ttcaccggaa tcgctttcgc cggtcttatc ggttacgctg ccgccctgcc 180 ggccatgggc gcccagcaag actctgctcc caacggtgtt caggccaccg gagctccctc 240 cttccagggt gctgccccct ccggctcccc tcttcccctt ccctcgggtg ctcctcaggg 300 ccagggcttc ggaggccagg gcttcggcaa ctctaacggt cagggccagg ctcccaccgt 360 gagcttgggc gatgctcctc agcctcctcc cactggctcc gctgcccctg ctccttctgg 420 agctcctcgt ggccacaaga ggcgtcagct cgagatcccg gcttccgtct ccaacgtccc 460 cgccccgacc ggctccgctg ctgctggagg tgacttcggt ggtgctcctt cgggtcccgc 540 tccctctggt gccgctccct ctggcgtcgc tggtggtgac ggcccctctc cttctggttc 600 tttcggtggc cagggcggcc agtctggctc tttcggcggc aacggcgccg ctccctctgg 660 cattgctggc ggcaatggcc cctctacttc cggctctttc ggtggtgccg ctcctccggt 720 gttgctggta gcaatggccc ctctacctcc ggctcttttg gcggccagcá gggtcagcag 780 ggccagagcg gcttcggcgg ccaggactcc cagtcccagg gccagtccca ggactccaag 840 tctcagagct ctaagtccca gaactccagg tctgagggct ctcagtctca ggactcccag 900 tcccagggat ctgactctga gggatctcag ggctctttcg agcagggctc ctcctctgag 960 cagggctctg gctctagctc tttcggtggt aacggtgctg ctccctccgg tgttgctggt 1020 ggcaacggcc cctctccttc cggctctttc ggcggtgctg ctccctccgg tgttgctggc 1080 ggcaacggtc cctctccctc tggctccttc ggcggtaacg gcgctgctcc ctctggcgtc 1140 gctggtggaa acggcccctc tccttccggc tccttcggtg gtaacggtgc tgctccttct 1200 ggtgctgccg gtggtgctcc cgctgcctcg ggcgcccccg ccgccgctcc ctcgggtgct 1260 tcttactaag tccatgcgaa agtcttggac ttcgatcgac aataaacacc ttccatatca 1320 tctgacgctg atgcaatagt tccaccgagg acatcgacaa tgccattgtg tcggcgtgga 1380 ccagaacaac aacaactgga tgaaggtgtg atggattgga cgcttgtgta cattaatcac 1440 tcaataacca gtcattcctt tgaccagatc tggtagaaag aaaaaaaaaa aaaaaaaa 1498 <210> 23 <211> 404 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 23 Met Lys Phe Thr Gly lie Ala Phe Ala Gly Leu lie Gly Tyr Ala Ala 1 5 10 15 Ala Leu Pro Ala Met Gly Ala Gln Gln Asp Ser Ala Pro Asn Gly Val 20 25 30 Gln Ala Thr Gly Ala Pro Ser Phe Gln Gly Ala Ala Pro Ser Gly Ser 35 40 45 Pro Leu Pro Leu Pro Ser Gly Ala Pro Gln Gly Gln Gly Phe Gly Gly 50 55 60 Gln Gly Phe Gly Asn Ser Asn Gly Gln Gly Gln Ala Pro Thr Val Ser 65 70 75 80 Leu Gly Asp Ala Pro Gln Pro Pro Pro Thr Gly Ser Ala Ala Pro Ala 85 90 95 Pro Ser Gly Ala Pro Arg Gly His Lys Arg Arg Gln Leu Glu lie Pro 100 105 110 Ala Ser Val Ser Asn Val Pro Ala Pro Thr Gly Ser Ala Ala Ala Gly 115 120 125 Gly Asp Phe Gly Gly Ala Pro Ser Gly Pro Ala Pro Ser Gly Ala Ala 130 135 140 Pro Ser Gly Val Ala Gly Gly Asp Gly Pro. Ser ¦Pro Ser Gly Ser Phe 145 150 155 160 Gly Gly Gln Gly Gly Gln Ser Gly Ser Phe Gly Gly Asn Gly Ala Ala 165 170 175 Pro Ser Gly lie Ala Gly Gly Á'sn Gly Pro Ser Thr Ser Gly Ser Phe 180 185 190 Gly Gly Ala Ala Pro Pro Val Leu Leu Val Ala Met Ala Pro Leu Pro 195 200 205 Pro Ala Leu Leu Ala Ala Ser Arg Val Ser Arg Ala Arg Ala Ala Ser 210 -215 220 Ala Ala Arg Thr Pro Ser Pro Arg Ala Pro Arg Thr Pro Ser Leu 225 230 235 240 Arg Ala Leu Ser Pro Arg Thr Pro Gly Leu Arg Ala Leu Ser Leu Arg 245 250 255 Thr Pro Ser Pro Arg Asp Leu Thr Leu Arg Asp Leu Arg Ala Leu Ser 260 265 270 Ser Arg Ala Pro Pro Leu Ser Arg Ala Leu Ala Leu Ala Leu Ser Val 275 280 285 Val Thr Val Leu Leu Pro Pro Val Leu Leu Val Ala Thr Ala Pro Leu 290 295 300 Leu Pro Ala Leu Ser Ala Val Leu Leu Pro Pro Val Leu Leu Ala Ala 305 310 315 320 Thr Val Pro Leu Pro Leu Ala Pro Ser Ala Val Thr Ala Leu Leu Pro 325 330 335 Leu Thr Ser Leu Val Glu Thr Ala Pro Leu Leu Pro Ala Pro Ser Val 340 345 350 Val Thr Val Leu Leu Leu Leu Val Leu Pro Val Val Leu Pro Leu Pro 355 360 365 Arg Ala Pro Pro Pro Pro Leu Pro Arg Val Leu Leu Thr Lys Ser Met 370 375 380 Arg Lvs Ser Trp Thr Ser lie Asp Asn Lys His Leu Pro Tyr His Leu 385 390 395 400 Thr Met Gln <210> 24 <211> 763 <212> ADN <213> Aspergillus niger <40C> 24 acacaaagca cattccttac attcacattc gtttcttctt cactccttta cttccctatc 60 tttccaatat tcacgatgca gtggacgaac tttctgtgcc ctctgattgc catgcaggct 120 agcctgagtg ctgcctgggg cacccacgtc aagagaggat cggagaccaa tgccaccctg 130 tttgcctatg gacagaactc ttccgcttac cccattgctt atgggctcag tgacggtctt 240 ctctacattg cccaagatcc ggagaacacc gcggcggacc tgacacccat gtcc gggat 300 ctgccctcca tcactgatga gtgctggatt gtcaacggca cgtttatgaa tggcactcgt 360 gcaggatctc tctatatccg accggatagc aacaactgtc ttggcgtgct gccttttgcc 420 caggctaaag gggtgaatgg cgtggtcacg ggctttggcc tctttgcatc gcagctggtc 480 tataacaacg atacccagct ggaagcacag ttctgggcgt cgaagacaga cactgaagat 540 gtctacaaac tggtgtgggt ggaggactct tcgcaaattg cgagcgaaag ctttcccgtc 600 gtggtgaaag cgtccgagga ctcgacctga aaagaacagc gatccaggga ggtgtgactt 660 gggttgttgg ggtggtgctc cgagcatgat gttgttcatt gccattgcgt ggtaatatat 720 ataatagtca ctcgtttata tttgacaaaa aaaaaaaaaa aaa 763 <210> · 25 <211> 184 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 25 Met Gln Trp Thr Asn Phe Leu- Cys Pro Leu lie Ala Met -Gln Ala Ser 1 5 · " 10 15 Leu Ser Ala Ala Trp Gly Thr His Val Lys Arg Gly Ser Glu Thr Asn 20 . 25 30 Ala Thr Leu Phe Ala Tyr Gly Gln Asn Ser Ser Ala Tyr Pro lie Ala 35 40 45 Tyr Gly Leu Ser Asp Gly Leu Leu Tyr lie Ala Gln Asp Pro Glu Asn 50 55 60 Thr Ala Ala Asp Leu Thr Pro Met Ser Trp Asp Leu Pro Ser lie Thr 65 70 75 80 Asp Glu Cys Trp lie Val Asn Gly Thr Phe Met Asn Gly Thr Arg Ala 85 90 95 Gly Ser Leu Tyr lie Arg Pro Asp Ser Asn Asn Cys Leu Gly Val Leu 100 105 110 Pro Phe Ala Gln Ala Lys Gly Val Asn Gly Val Val Thr Gly Phe Gly 115 120 125 Leu Phe Ala Ser Gln Leu Val Tyr Asn Asn Asp Thr Gln Leu Glu Ala 130 135 140 Gln Phe Txp Ala Ser Lys Thr Asp Thr Glu Asp Val Tyr Lys Leu Val 145 150 155 160 Trp Val Glu Asp Ser Ser Gln lie Ala Ser Glu Ser Phe Pro Val Val 165 170 175 Val Lys Ala Ser Glu Asp Ser Thr 180 <210> 26 <211> 641 <212> ADN <213> Aspergillus niger <400> 26 actccacctt ttctcatctg tcctctgtac ctagattcct tcttatatct tatccgtggt 60 tccttctttt ctggccaaga tcttagccat ctatcaacac gagagaaaac ttattcccat 120 cctatcacat cacaatgtct gctgctgctc ctcctgctcc cccggttaac ggtgaccggc 180 ccgagacggg tcactcacat ggaaagagtt ccctgtccag caagtcggac ccgaaccagg 240 cgttgagagg tgaagaggct gtgtacagcg ttggatcgag tggattctct ctacgctcaa 300 tgcagcatcg cgaccgtggg ggcaaaatca tcactgaacc cgacttgtcc aaccctaccc 360 gttaccgatt cgagcggccg ctggacacca ttcgatcgtt tgaggcagcc atcgagcgcc 420 gtcgtcgtga ggccatgtaa gatgagactt ggcgtgtgaa tatactgcga atgatgttcg 480 atttcttgtg attatgtttg ggttcggcgc tggacgacgt atggatatgg acatggacat 540 ggatatgagt ttgatttgat tgagcgtgta cattacttca ctgggtatgc ttctggaatg 600 ttaccttgtc gatctcttat ttcaaaaaaa aaaaaaaaaa a 641 <210> 27 <211> 101 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 27 Met Ser Ala Ala Ala Pro Pro Ala Pro Pro Val Asn Gly Asp Arg Pro 1 5 10 15 Glu Thr Gly His Ser Eis Gly Lys Ser Ser Leu Ser Ser Lys Ser Asp- 20 25 . ' 30 Pro Asn Gln Ala Leu Arg Gly Glu Glu Ala Val Tyr Ser Val Gly Ser 35 40 ' 45 Ser Gly Phe Ser Leu Arg Ser Met Gln His Arg Asp Arg Gly Gly Lys 50 55 60 ' lie lie Thr Glu Pro Asp Leu Ser Asn Pro Thr Arg Tyr Arg Phe Glu 65 70 75 80 Arg Pro Leu Asp Thr lie Arg Ser Phe Glu Ala Ala lie Glu Arg Arg 85 90 95 Arg Arg Glu Ala Met 100 <210> 28 <211> 1343 <212> ADN <213> Aspergillus niger <400> 28 cgactggagc acgagggaca ctgacatgga ctgaaggagt agaaaagatc ttcctctccc 60 acctccccag cctttccttc tttgcacctg tgccgtgcac ggtcgagcca ttccttcatt 120 ctttgaacat attgcctggc tccgagtagt ctagcatcca ctccttgcaa gagcactttg 180 agagaaccgg tcttctcata ctcaaaagtt atacatacac atcacttctc tccgaacaaa 240 accgaacaga attcgaagaa cacatacaca atggtctcct tcaagtctct tctgaccgcc 300 accaccctgg ccaccgccgt tctggccatc cctcatagtg gccacggcca tggcagccac 360 aagcaccgtt ccacccatgt cgcctccaag cggacctctt cctccaagcg tggcgctgcc 420 tacaactctg cttccagcgt tcacacgctg acctccggct cctccggcaa cggtaccgtc 480 tcctgggcct acgactggaa catgtacgcc gacggcaccc tccccagtaa cgtcgaatac 540 gtgcccatgc tgtggggcag caagatgttt ggaggctggt tgaccgccat cgagactgcc 600 ctggacagcg gtagcaatta catcatggga ttcaacgagc ctgactcctc ctcccaagcc 660 tcgatgactg cttccgaggc cgccagctcc tacaagaatt acatcactcc ttactctggc 720 aaggctaagc tcgtcacccc ggccgtgacc agtagcacca cggaaggcga gggtctcagc 780 tggatgaagt ccttcctgtc cgaatgcagc gagtgtgaca tgtcggtgct ggcagtccac 840 tggtacggca cctcggccga tgagttcaag tccttcgtgc aggaggccat gcaggtggcg 900 gacgacaacg gattggacga gacctgggtg acagaattcg ccctcaccag cgacgagtct 960 gccggcggcg atgagagttc agcggcggac ttccttgacg aagttttgcc gtggttggac 1020 agccagagtg gcgtgggacg gtatgcgtat tacatgtgtg cagatgggta tctgctcagc 1080 ggggaggagt tgagctcgag tggaaaggtc tacgttgcat agaacaacca actacctttg 1140 gattccatta gatctgcttt accttggact tttatcccgt gatacctttt tgtgctgttt 1200 tttattctat tccattctac catccatctc tcacctaaga gggaaagaga gacggacaac 1260 cccattttac ccacccactt tactttccaa tatattacaa ttccaatttg aatcaaattc 1320 aaatccaaaa aaaaaaaaaa aaa 1343 <210> 29 <211> 283 <212> PRT <213> Aspergillus niger <220> <221> MISC_FEATU E <223> X = gap en secuencia homologa <400> 29 Met Val 'Ser Phe Lys Ser Leu Leu Thr Ala Thr Thr Leu Ala Thr Ala. 1 5 10 15 Val Leu Ala lie Pro His Ser Gly His Gly His Gly Ser His Lys His 20 25 30 Arg Ser Thr His Val Ala Ser Lys Arg Thr Ser Ser Ser Lys Arg Gly 35 40 45 Ala Ala Tyr Asn Ser Ala Ser Ser Val His Thr Leu Thr Ser Gly Ser 50 . 55 60 Ser Gly Asn Gly Thr Val Ser Trp Ala Tyr Asp Trp Asn Met Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Gly Thr Leu Pro Ser Asn Val Glu Tyr Val Pro Met Leu Trp Gly 85 90 95 Ser Lys Met Phe Gly Gly Trp Leu Thr Ala lie Glu Thr Ala Leu Asp 100 105 110 Ser Gly Ser Asn Tyr lie Met Gly Phe Asn Glu Pro Asp Ser Ser Ser 115 120 125 Gln Ala Ser Met Thr Ala Ser Glu Ala Ala Ser Ser Tyr Lys Asn Tyr 130 135 140 lie Thr Pro Tyr Ser Gly Lys Ala Lys Leu Val Thr Pro Ala Val Thr 145 150 155 160 Ser Ser Thr Thr Glu Gly Glu Gly Leu Ser Trp Met Lys Ser Phe Leu 165 170 175 Ser Glu Cys Ser Glu Cys Asp Met Ser Val Leu Ala Val His Trp Tyr 180 185 190 Gly Thr Ser Ala Asp Glu Phe Lys Ser Phe Val Gln Glu Ala Met Gln 195 200 205 Val Ala Asp Asp Asn Gly Leu Asp Glu Thr Trp Val Thr Glu Phe Ala 210 215 220 Leu Thr Ser Asp Glu Ser Ala Gly Gly Asp Glu Ser Ser Ala Ala Asp 225 230 235 240 Phe Leu Asp Glu Val Leu Pro rp Leu Asp Ser Gln Ser Gly Val Gly 245 250 255 Arg Tyr Ala Tyr Tyr Met Cys Ala Asp Gly Tyr Leu Leu Ser Gly Glu 260 265 270 Glu Leu Ser Ser Ser Gly Lys Val Tyr Val Ala 275 280 <210> 30 <211> 22 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 30 Lys Arg Arg Lys Asp Glu Leu Ala Asp Thr Thr Leu Arg Gln Val Ala 1 5 10 15 Gln Asn Gln Thr Glu Thr 20 <210> 31 <211> 16 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 31 Leu Gly Asp Val Met Ser lie Ser lie Asn Pro Thr Asn Gln Asn. Val 1 5 1.0 . 15 <210> 32 <211> 29 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 32 Ser Cys Arg Leu Phe Asp Ile Arg Ala Asp Arg Glu Leu Asn Thr Tyr 1 5 10 15 Gln Ser Asp Gln lie Leu Cys Gly lie Thr Ser Val Ala 20 25 <210> 33 <211> 1221 <212> ADN <213> Aspergillus niger <400> 33 taccactcac ctttcgcgca tcgccatctg cgatcctccc cacaacactc cacctagata 60 catacaccat taactgcgct tctacaacat gcagatcttc gttaagaccc tcaccggcaa 120 gacaatcacc ctcgaggtcg agtccagcga taccatcgac aacgtcaaga ccaagatcca 180 ggataaggag ggcatccctc ccgaccagca gcgtctgatc ttcgccggaa agcagctgga 240 ggatggccgc acgcttagtg actacaacat ccagaaggag tctactctcc atcttgtcct 300 ccgcctgcgt ggtggtatgc agattttcgt caagaccctg accggaaaga ccatcaccct 360 tgaggtggag tcttctgaca ccatcgacaa tgtgaagacc aagattcagg acaaggaggg 420 cattcccccg gaccagcagc gtctgatctt cgctggaaag cagctggagg atggccgtac 480 cctgtctgac tacaacattc aaaaggaatc cacccttcac ctcgtccttc gtctgcgtgg 540 tggtatgcag atcttcgtca agactctcac gggaaagacg atcacattgg aagttgaatc 600 ttccgacaca attgataacg' ttaagaccaa gattcaagac aaggaaggca tccccccgga 660 ccagcagcgt ttgatcttcg ctggtaagca gttggaggat ggccgtacct tgtccgacta 720 caacatccag aaagaatcca ctcttcacct tgtccttcgt ctccgtggtg gtatgcagat 780 cttcgtgaag actcttaccg gcaagacgat tacgctggag gtggagagct cggataccat 840 tgataacgtc aagactaaga ttcaagataa ggagggcatt cccccggacc agcagcgtct 900 catcttcgct ggtaagcagt tggaagatgg acgtacgctc tccgattaca acatccagaa 960 ggagagcact ctgcacctgg tgctccgtct ccgtggcgga aactaatgcc ttattttgat 1020 ctttcttctt tagcacggct catctacggt tgagtggcct gcatggcgtt gggacggttg 1080 ttttcatcgg tttttatgat acggataaat tgggcatacc ttagggtcac catcttccat 1140 ggtgccttgc gtcattcttt tacctaggaa tcaattcaat aatcatattc cacctgatat 1200 ctaaaaaaaa aaaaaaaacc t 1221 <210> 34 <211> 236 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 34 Val Leu Arg Leu Arg Gly Gly Met Gln lie Phe Val Lys Thr Leu Thr 1 5 10 15 Gly Lys Thr lie Thr Leu Glu Val Glu Ser Ser Asp Thr lie Asp Asn 20 25 30 Val Lys Thr Lys lie Gln Asp Lys Glu Gly lie Pro Pro Asp Gln Gln 35 40 45 Arg Leu lie Phe Ala Gly Lys Gln Leu Glu Asp Gly Arg Thr Leu Ser 50 55 60 Asp Tyr Asn lie Gln Lys Glu Ser Thr Leu His Leu Val Leu Arg Leu 65 70 75 80 Arg Gly Gly Met Gln lie Phe Val Lys Thr Leu Thr Gly Lys Thr lie 85 90 95 Thr Leu Glu Val Glu Ser Ser Asp Thr lie Asp Asn Val Lys Thr Lys 100 105 110 lie Gln Asp Lys Glu Gly lie Pro Pro Asp Gln Gln Arg Leu lie Phe 115 120 125 Ala Gly Lys Gln Leu Glu Asp Gly Arg Thr Leu Ser Asp Tyr Asn lie 130 135 140 Gln Lys Glu Ser Thr Leu His Leu Val Leu Arg Leu Arg Gly Gly Met 145 150 155 160 Gln lie Phe Val Lys Thr Leu Thr Gly Lys Thr lie Thr Leu Glu Val 165 170 175 Glu Ser Ser Asp Thr lie Asp Asn Val Lys Thr Lys lie Gln Asp Lys 180 185 190 Glu Gly lie Pro Pro Asp Gln Gln Arg Leu lie Phe Ala Gly Lys Gln 195 200 205 Leu Glu Asp Gly Arg Thr Leu Ser Asp Tyr Asn lie Gln Lys Glu Ser 210 215 220 Thr Leu His Leu Val Leu Arg Leu Arg Gly Gly Asn 225 230 235 <210> 35 <211> 235 <212> PRT <213> Aspergillus niger <400> 35 Val Leu Arg His Ala Asn Asn Leu Ala Val Val Lys Thr Leu Thr Gly 1 5 10 15 Lys Thr lie Thr Leu Glu Val Glu Ser Ser Asp Thr lie Asp Asn Val 25 30 Lys Thr Lys lie Gln Asp Lys Glu Gly lie Pro Pro Asp Gln Gln Arg 40 45 Leu lie Phe Ala Gly Lys Gln Leu Glu Asp Gly Arg Thr Leu Ser Asp 50 55 60 Tyr Asn lie Gln Lys Glu Ser Thr Leu His Leu Val Leu Arg Leu Arg 65 70 75 80 Gly Gly Met Gln lie Phe Val Lys Thr Leu Thr Gly Lys Thr lie Thr 85 90 95 Leu Glu Val Glu Ser Ser Asp Thr lie Asp Asn Val Lys Ser Lys lie 100 105 110 Gln Asp Lys Glu Gly lie Pro Pro Asp Gln Gln Arg Leu lie Phe Ala 115 120 125 Gly Lys Gln Leu Glu Asp Gly Arg Thr Leu Ser Asp Tyr Asn lie Gln 130 135 140 Lys Glu Ser Thr Leu His Leu Val Leu Arg Leu Arg Gly Gly Met Gln 145 150 155 160 lie Phe Val Lys Thr Leu Thr Gly Lys Thr lie Thr Leu Glu Val Glu 165 170 175 Ser Ser Asp Thr lie Asp Asn Val Lys Thr Lys lie Gln Asp Lys Glu 180 185 190 Gly lie Pro Pro Asp Gln Gln Arg Leu lie Phe Ala .Gly Lys Gln Leu 195 200 205 Glu Asp Gly Arg Thr Leu Ser Asp Tyr Asn lie Gln Lys Glu Ser Thr 210 215 •220 Leu His Leu Val Leu Arg Leu' Arg Gly Gly Asn 225 230 235 £210> 36 <211> 404 <212> ADN <213> Aspergillus niger <400> 36 tcgagcggcc gccgggcagg tacctccctt atgctgctgg atgaagacgt ggttactgcc 60 tactatgcgc aagttcccaa ctcggtctac gtgagcagtg ccggtggtta catctacccc 120 tgcaacacca ctcttcccag cttctcgctt gtcctcggcg agtcgagcct ggccacgatc 180 cccggtaacc tgatcaattt ctccaaggtt ggcaccaaca ccaccaccgg acaggccttg 240 tgctttggcg gcattcaatc caacggaaac acctcgctgc agattctggg cgatattttc 300 ctgaaggcct ttttcgttgt cttcgacatg cgcggcccct cgcttggtgt tgcctctccc 360 aagaactagt ttccttttcc tgtacctcgg ccgcgaccac gcta 404 <210> 37 <211> 334 <212> ADN <213> Aspergillus niger <400> 37 acaaagaatt ctccaggact cttgtctgac gtaaa tagg aagaaaagga aaactgaggt 60 gatatcgcct gtgtagtgcg gcgattgacg tccttcctcc gcttgcccag cggtggtggg 120 tcgagctgag gtgtccgttt atacgtgatg gtagtggtca cgatatggcg cacacaaaag 180 gtgtttccat tctcactgac gggtgattcg aagaagcgct gtccccggtc tgatggagta 240 aaaggggaac ggagggggtg cgcactccgc ggggacgcag acactggggt aatagaggta 300 tggtgcagga aggcgcatgc gctgggcatg aata 334

Claims (45)

1. KEIVI DICACIOMES 1. - Una molécula aislada de polinucleótido, que comprende una secuencia de polinucleótidos que se expresa diferencialmente en un hongo nativo, el cual exhibe una morfología de pella, con relación al hongo nativo que exhibe una morfología filamentosa.
2. 2. - La molécula de polinucleótido de la reivindicación 1, en que la expresión de la secuencia de polinucleótidos está ausente o se encuentra a un nivel menor en la morfología de pella en relación con la morfología filamentosa del hongo nativo.
3. 3. - La molécula de polinucleótido de la reivindicación 1, en que la expresión de la secuencia de polinucleótidos está ausente o se encuentra a un nivel menor en la morfología filamentosa en elación con la morfología de pella del hongo nativo.
4. 4. - La molécula de polinucleótido de la reivindicación 1, en que el hongo es el Aspergillus niger.
5. 5. - Un método para promover' una morfología en un hongo, este método comprende: proporcionar una molécula de polinucleótido recombinante; transformar un hongo con el polinucleótido recombinante; y expresar un polipéptidp codificado por la secuencia de polinucleótidos, para promover una morfología fungal.
6. 6. - El método de la reivindicación 5, en que la morfología promovida es una morfología de pella.
7. 7. - Una molécula de polinucleótido aislada, que comprende una secuencia de nucleótidos señalada en cualquiera de las secuencias SEC ID NOs.: 1, 4, 6, 8, 12, 16, 18, 22, 24, 26,. 28, 33, 36 y 37.
8. 8. - Una molécula de polinucleótido, transcrita desde el polinucleótido de la reivindicación 7.
9. 9. - Un constructor de polinucleótido recombinante, que comprende una secuencia de polinucleótidos que consiste de al menos de 30 nucleótidos consecutivos de cualquiera de las secuencias SEC ID NOs.: 4, 6, 8, 12, 16, 18, 22, 24, 26, 28, 33, 36, 37 y las secuencias complementarias a dichas secuencias SEC ID Nos.: 4, 6, 8, 12, 16, 18, 22, 24, 26, 28, 33, 36, 37.
10. 10. - Un vector, que comprende el constructor del polinucleótido recombinante de la reivindicación 9.
11. 11. - Una célula huésped transformada, que comprende el constructor del polinucleótido recombinante de la reivindicación 9.
12. 12. - Un método para promover una morfología en un hongo, este método comprende: proporcionar un polinucleótido recombinante, que comprende cuando menos 30 nucleótidos consecutivos de cualquiera de las secuencias SEC ID NOs.: 4, 6, 8, 12, 16, 18, 22, 24, 26, 28, 33, 36, 37; transformar un hongo con el polinucleótido recombinante; y expresar un polipéptido, codificado por la secuencia de polinucleótidos, para promover una morfología fungal .
13. 13. - El método de la reivindicación 12, en que la secuencia de polinucleótidos comprende la secuencia señalada en cualquiera de las secuencias SEC ID NOs.: 22, 24, 26, 28, 33, 36, 37 y donde la morfología fungal es una morfología de pella .
14. 14. - El método de la reivindicación 12, en que la secuencia de polinucleótidos comprende la secuencia señalada en cualquiera de las secuencias SEC ID Nos.: 4, 6, 8, 12, 16, 18 y donde la morfología fungal promovida es una morfología filamentosa.
15. 15. - Un método para promover una morfología en un hongo, este método comprende: proporcionar un polinucleótido recombinante que incluye una secuencia orientada en contrasentido, que es complementaria a cuando menos parte de un gene; transformar un hongo con el polinucleótido recombinante; y suprimir la expresión del gene que utiliza los productos de trascripción producidos por la expresión el polinucleótido recombinante, la supresión que promueve la morfología.
16. 16. - El método de la reivindicación 15, en que la secuencia orientada en contrasentido comprende cuando menos 30 nucleótidos consecutivos complementarios a cualquiera de las secuencias SEC ID NOs. : 4, 6, 8, 12, 16, 18, 22, 24, 26, 28, 33, 36, 37.
17. 17. - El método de la reivindicación 16, en que la secuencia complementaria es aquélla complementaria a cualquiera de las secuencias SEC ID NOs.: 22, 24, 26, 28, 33, 36, 37 y donde la morfología fungal promovida es una morfología de filamento.
18. 18. - El método de la reivindicación 16, en que la secuencia complementaría es complementaria a cualquiera de las secuencias SEC ID Nos.: 4, 6, 8, 12, 16, 18, y donde la morfología fungal promovida es una morfología de pella.
19. 19. - Una molécula de polinucleótido aislada, que codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos, señalada en cualquiera de las secuencias SEC ID Nos.: 2, 5, 7, 9, 13, 17, 19, 23, 25, 27, 29 y 34. .
20. 20. - Un constructor de polinucleotidos recombinantes, que comprende la secuencia de polinucleotidos de la reivindicación 19, enlazada operablemente a un promotor .
21. 21. - Un vector que comprende el constructor de polinucleótidos recombinantes de la reivindicación 20.
22. 22. - Una célula huésped transformada, que comprende el constructor de polinucleótidos recombinantes de la reivindicación 20.
23. 23. - ün método para promover una morfología en un hongo, este método comprende: proporcionar un polinucleótido recombinante, que incluye una secuencia de polinucleótidos aislada, que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos señalada en cualquiera de las secuencias SEC ID NOs.: 2, 5, 7, 9, 13, 17, 19, 23, 25, 27, 29 y 34; transformar un hongo con el polinucleótido recombinante; y expresar un polipéptido, codificado por la secuencia de polinucleótidos, para promover una morfología fungal.
24. 24. - El método de la reivindicación 23, en que la secuencia de polinucleótidos codifica una secuencia de aminoácidos, señalada en cualquiera de las secuencias SEC ID Nos.: 23,· 25, 27, 29 y 34, y la morfología fungal promovida es una morfología de pella.
25. 25. - El método de la reivindicación 23, en que el polinucleótido codifica una secuencia de aminoácidos, señalada en cualquiera de las secuencias SEC ID NOs.: 2, 5, 7, 9, 13, 17, 19, y la morfología fungal promovida es una morfología filamentosa.
26. 26. ~ Un método para aumentar un bioproceso que utiliza un hongo, este método comprende: producir un hongo transformado, por la transformación de un hongo con una molécula de polinucleótido recombinante, que comprende la secuencia de polinucleótidos señalada en cualquiera de las secuencias SEC ID Nos.: 22, 24, 26, 28, 33, 36, 37, enlazada operablemente a un promotor; y expresar un polipéptido codificado por la secuencia de polinucleótidos, el polipéptido promueve la morfología de pella, esta morfología de pella aumenta un bioproceso con relación al bioproceso que utiliza una morfología filamentosa del hongo transformado.
27. 27. - El método de la reivindicación 26, en que el bioproceso se selecciona del grupo que consta de la expresión de la celulasa, expresión de la semicelulasa, expresión de lignasa, conversión de la biomasa en alcohol, producción de ácidos orgánicos, producción de la glucoamilasa, producción de la penicilina y producción de la lovastatina.
28. 28. - El método de la reivindicación 26, en que los hongos ¦ comprenden un hongo seleccionado del grupo que consta de: Phanerochaete chrysosporium, Aspergillus. niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus terreus, Emericella nidulans, Neurospora crassa, 'Fusarium oxysporum, Penicillium chrysogenum, Trichoderma reesel, Rhizomucox miehei y Rhizopus oryzae.
29. 29.- El método de la reivindicación 26, en que el bioproceso aumentado por la morfología de pella del hongo transformado se aumenta más con relación al hongo no transformado, bajo condiciones idénticas de otra manera.
30. 30. - Un método para aumentar un bioproceso, el cual utiliza hongos, este método comprende: producir un hongo transformado por la transformación de un hongo con una molécula de polinucleótido recombinante, que incluye . una secuencia de polinucleotidos complementaria a cualquiera de las secuencias SEC ID Nos.:l, 4, 6, 8, 12, 16 y 18, enlazada operablemente a un promotor en una orientación en contrasentido; transcribir la secuencia de polinucleotidos para producir transcripciones de polinucleotidos; e hibridizar las transcripciones al mARN, para suprimir la expresión del gene y promover la morfología de pella, esta morfología de pella aumenta un bioproceso con relación al bioproceso que utiliza una morfología filamentosa del hongo transformado.
31. 31. - El método de la reivindicación 30, en que los hongos comprenden un hongo seleccionado del grupo que consta de Phanerochaete chrysosporiim./ Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Aspergillus terreus, Emericella nidulans, Neurospora crassa, Fusarium oxysporumr Penicillium chrysogenum r Trichoderma reesel, Rhizomucor miehei y Rhizopus oryzae.
32. 32. - El método de la reivindicación 30, en que el bioproceso se selecciona del grupo que consta de la expresión de la celulasa, expresión de la semicelulasa, expresión de lignasa, conversión de la biomasa en alcohol, producción de ácidos orgánicos, producción de la glucoamilasa, producción de la penicilina y producción de la lovastatina.
33. 33. - Un método para aumentar un bioproceso, que utiliza hongos, este método comprende: producir un hongo transformado por la transformación de un hongo con una molécula de polinucleótido recombinante, que incluye una secuencia de polinucleótidos complementaria a cualquiera de las secuencias SEC ID Nos. : 22, 24, 26, 28, 33, 36, 37 enlazada operablemente a un promotor en una orientación en contrasentido; transcribir la secuencia de polinucleótidos para producir' transcripciones de polinucleótidos; e hibridizar las transcripciones al mARN, para suprimir la expresión del gene y promover la morfología de pella,- esta morfología de pella aumenta un bioproceso con relación al bioproceso que. utiliza una morfología filamentosa del hongo transformado.
34. 34. - El método de la reivindicación 33, en que los hongos comprenden un hongo seleccionado del grupo que consta de Phanerochaete chrysosporium, Aspergillus níger, Aspergillus oryzae, Aspergillus terreus, Emericella nidulans, Neurospora crassa, Fusarium oxysporum, Penicillium chrysogenum, Trichoderma reesel, Rhizomucor miehei y Rhizopus oryzae.
35. 35. - El método de la reivindicación 3, en que el bioproceso se selecciona del grupo que consiste de la producción de la enzima péptica y la producción del ácido fumárico.
36. 36. - Una molécula de polinucleótido aislada, que comprende cuando menos un segmento de 10 nucleótidos de la secuencia señalada en la secuencia SEC ID NO. : 1; este segmento de al menos 10 nucleótidos comprende al menos un codon que codifica para un diferente aminoácido con relación al codon que correspondiente señalado en la secuencia SEC ID No.3.
37. 37. - Una molécula aislada de polinucleótido, que codifica una proteina que tiene un primer nivel de expresión en un hongo, que exhibe una morfología filamentosa y que-tiene un nivel disminuido o sin expresión en el hongo que exhibe una morfología de pella.
38. 38. - El polinucleótido aislado de la reivindicación 37, en que la proteína comprende una secuencia de aminoácidos mayor del 31% de identidad de cualquiera de las secuencias SEC ID Nos. : 5, 7, 10 y 17·.
39. 39. - El polinucleótido aislado de la reivindicación 37, en que la proteina comprende una secuencia de aminoácidos mayor del 56% de identidad de cualquiera de las secuencias SEC ID Nos.: 5, 7, 10, 14 y 17.
40. 40. - El polinucleótido aislado de la reivindicación 37, en que la proteina comprende una secuencia de aminoácidos mayor del 66% de identidad de cualquiera de las secuencias SEC ID Nos.: 5, 7, 10, 14, 17 y 19.
41. 41.- El polinucleótido aislado de la reivindicación 37, en que la proteina comprende una secuencia de aminoácidos mayor del 97% de identidad de cualquiera de las secuencias SEC ID Nos.: 2, 5, 7, 10, 14, 17 y 19.
42. 42. - Una molécula aislada de polinucleótido, que % codifica una proteina que tiene un primer nivel de expresión en un hongo que exhibe una morfología de pella y que tiene un nivel disminuido o no tiene expresión en el hongo que exhibe una morfología filamentosa.
43. 43. - ün polipéptido aislado, que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste de una secuencia de aminoácidos que tiene más del 31% de identidad' a la SEC ID NO. 10; una secuencia de aminoácidos que tiene más del 56% de identidad a la secuencia SEC ID NO. 14; una secuencia de aminoácidos que tiene más del 66% de identidad a la secuencia SEC ID NO. 20; una secuencia de aminoácidos que tiene más del 97% de identidad a la secuencia SEC ID NO. 2; una secuencia de aminoácidos que contiene al menos 10 aminoácidos consecutivos, según se señalan en cualquiera de las secuencias SEC ID Nos. 5, 7, 10, 17, 19, 23, 25, 27 y 29; una secuencia de aminoácidos que contiene más de 16 aminoácidos consecutivos, según se señalan en la secuencia SEC ID No. 14; una secuencia de aminoácidos, que contiene más de 25 aminoácidos consecutivos, según se señalan en la secuencia SEC ID No. 14; una secuencia de aminoácidos, señalada en cualquiera de las secuencias SEC ID Nos. 30, 31 y 32; y una secuencia de aminoácidos homologa a cualquiera de las secuencias señaladas en las secuencias SEC I Nos. 2, 5, 7, 9, 13, 17, 19, 23, 27, 29 y 34.
44. 44. - Un polinucleótido aislado que codifica el polipéptido de la reivindicación 43.
45. 45. - Un polinucleótido aislado, que comprende una secuencia complementaria al polinucleótido de la reivindicación 44.