MXPA04001939A

MXPA04001939A - Composiciones para reparar tejidos y metodos para su manufactura y uso.

Info

Publication number: MXPA04001939A
Application number: MXPA04001939A
Authority: MX
Inventors: King Edward
Original assignee: Gensci Orthobiologics Inc
Priority date: 2001-08-30
Filing date: 2002-08-30
Publication date: 2005-03-07
Also published as: EP1453434A4; WO2003020117A3; US7811608B2; US7132110B2; EP1453434A2; KR20040048403A; US20030044445A1; EP1453434B1; NO20040875D0; BR0212212A; CA2458959A1; WO2003020117A2; US20060251729A1; ATE517646T1

Abstract

Una composicion osteogenica se prepara mediante un proceso que incluye los pasos de someter hueso desmineralizado a un medio de extraccion para producir un producto de extraccion insoluble y un producto de extraccion soluble, separar el producto de extraccion insoluble y el producto de extraccion soluble, secar el producto de extraccion soluble para remover toda o substancialmente toda la humedad en el producto de extraccion soluble y combinar el producto de extraccion soluble seco del paso c) con particulas de hueso desmineralizado, preferiblemente, el proceso no involucra calentamiento.

Description

COMPOSICIONES PARA RE PARAR TEJIDOS Y MÉTODOS PARA SU MANUFACTURA Y USO Esta solicitud exige prioridad a Solicitud de Patente Provisional de los Estados Unidos No. de serie 60/316,005, presentada el 30 de Agostó de 2001 , los contenidos completos de la cual se incorporan aqu í como referencia. La invención se refiere a composiciones para reparar tejidos y los métodos para manufacturar y utilizar tales composiciones.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Se han utilizado diversas composiciones para reparar tejidos dañados. Las composiciones sirven para suministrar un andamio para soportar el crecimiento de hueso nuevo y/o proveer factores que induzcan el crecimiento de hueso nuevo. Las partículas de hueso desmineralizado (también referidas como matriz de hueso desmineralizado o DBM) y las proteínas morfogenéticas del hueso (BMPs) son dos materiales que son utilizados para aumentar el crecimiento de hueso. Por ejemplo , Jefferies (Patente de Estados Unidos No. 4,394,370) revela composiciones para reparar tejidos qué contienen DBM, BMPs, o arribos éri uña matriz dé colágeno reconstruida. Glowacki et al. (Patente de Estados Unidos No . 4 ,440,750) revela composiciones acuosas de DBM y fibras de colágeno reconstru idas . Generalmente, DBM está Compuesta dé partículas dé tejido dé hueso que han sido especialmente tratadas, generalmente remojándolas en ácido para eliminar su contenido mineral. La DBM resultante está compuesta principalmente de colágeno altamente degradado. Las prote ínas restantes no colagenosas incluyen proteínas , tales como, TG F-ß, PDGF, osteopontina , osteonectina , BMPs, y otras. BMPs son un grupo de proteínas clasificadas en la transformación de la súper-familia de proteínas beta del factor de crecimiento. A la fecha, distintas BMPs se aislan y asocian con el proceso curativo del hueso . BMPs se pueden aislar del hueso como una mezcla de proteínas o producirse individualmente a través de tecnología de gene recombinante. DBM se puede utilizar directamente en composiciones para reparar hueso. Ver, por ejemplo, Jefferies, supra ; Glowacki et al. , supra . Sin embargo, en tales composiciones, los factores para reparar el tejido son atrapados dentro de la red de colágeno altamente degradada de la DBM . Se cree que las BMPs y otros factores para reparar tejido fijados son lentamente liberados mientras el componente de colágeno de la DBM es degradado. Por lo tanto, la eficacia del potencial dé los factores para reparar tejido dentro de la DBM es entorpecida. Una alternativa para disminuir la liberación , es aislar los factores para reparar tejido de la DBM. Los factores, aislados y purificados, para reparar tejido conjuntivo, se han utilizado en composiciones para reparar hueso, pero la extracción , purificación y mezcla con un medio de dispersión o incorporación dentro de un veh ículo de distribución requiere múltiples pasos. Existe u na necesidad en el arte de composiciones para reparar tejidos adicionales, qué emplean factores para reparar tejido que son substancialmente liberados de la red de colágeno de DBM degradada y que no requieren pasos complicados de extracción y purificación.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a composiciones para reparar tejidos que comprenden productos solubles y/o insolubles de la extracción de DBM, y métodos para su manufactura y uso. Estos productos derivados de la DBM, también referidos en la presente como el "producto de extracción soluble" y el "producto de extracción insoluble", pueden contener factores para reparar tejido y que se pueden procesar para producir una variedad de formulaciones y consistencias. De acuerdo con la invención, las composiciones utilizan los productos solubles y/o insolubles de la extracción de la DBM. Generalmente, la extracción de la DBM es conducida a temperatura ambiente en un medio de extracción adecuado. Siguiendo la extracción, los productos de extracción solubles e insolubles se separan. Posteriormente, estos productos se pueden procesar, por ejemplo, por medio de centrifugación, decantación, filtración, trituración, precipitación, diálisis, secado total o parcial, rehidratación y esterilización. En una modalidad preferida, estos pasos se llevan a cabo sin calentamiento. Estos productos se pueden utilizar en una variedad de composiciones para repara tejidos conjuntivo, solos o en combinación con otros ingredientes activos o inactivos. En una modalidad preferente, las composiciones inventivas contienen una forma rehidratada del producto de extracción soluble seco. El producto de extracción soluble rehidratado se puede utilizar solo o en una mezcla con uno o más ingredientes activos o no activos. Por ejemplo, el producto de extracción soluble rehidratado se puede combinar con uno o más materiales biológicamente activos y un agente espesador. Las propiedades físicas de la(s) mezcla(s) resultante(s), incluyendo viscosidad , se pueden cambiar, modificando las concentraciones relativas del producto de extracción soluble, el tamaño de las piezas del producto de extracción soluble seco, la cantidad de agua utilizada para la rehidratación , la extensión de cualquier secado posterior, y otros ingred ientes solubles o insólublés. Por ejemplo, la composición final puede tener la consistencia de un gel, pasta , masilla o esponja. De acuerdo con la invención , las composiciones se pueden preparar para inyección o inserción a , dentro, sobre o cerca de los lugares defectuosos del hueso, lugares para reparar cartílago, u otros lugares musculoesqueléticos. Las composiciones inventivas también se pueden utilizar cómo uña capa sobre implantes quirúrgicos para ser introducidos en , dentro, sobre o cerca de los lugares defectuosos del hueso, lugares para reparar cartílago, u otros lugares musculoesqueléticos. De acuerdo con lo anterior, la invención está dirigida a un implante quirúrgico óstéogéñicó, qué comprende implanté quirúrgico cubierto con las composiciones osteogénicas inventivas y un método para el tratamiento de un defecto del hueso qué comprende suministrar uñ implanté quirúrgico , cubrir el implante quirúrgico con la composición osteogénica inventiva, e implantar el implante quirúrgico en u n lugar defectuoso del h ueso.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS FIG. 1 A es una fotografía a color de la composición del Ejemplo 1 más masilla residual implantada por 28 días en un ratón atímico. La fotografía muestra un hueso chico (flecha) rodeando la médula espinal (BM) adiposa. El material residual (R) está todavía présente en este explante. Una mancha de hematoxilina y eosina; ampliación del original x 200. FIG. 1 B es una fotografía a color que expone la misma muestra en una situación diferente. Es evidente un nuévó y adicional hueso (flechas) y médula espinal (B). El material residual (R) también está presente en este lugar. Una mancha de hematoxilina y eosina; ampliación del original x 200. FIG. 2A es una fotografía de color de la composición del Ejemplo 2 más masilla de DBM implantada por 28 días en un ratón atímico. La fotografía muestra múltiples focos de hueso nuevo (flechas) y huesos chicos rodeando la médula espinal adiposa. DBM residual está todavía presente en este explanté. Mancha de hematóxiliná y eosina; ampliación del original x 1 00. FIG. 2B és una fotografía a color con una ampliación más alta, en donde la naturaleza de tejido del nuevo hueso de uno de los huesos chicos vistos en la Figura 2A es aparenté. El hueso tejido rodea un área dé médula espinal (BM) sana. Mancha de hematoxilina y eosina; ampliación del original x 400.

DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES ILUSTRATIVAS Una composición osteogénica se prepara mediante un proceso que incluye los pasos de someter un hueso desmineralizado (DBM) a un medio de extracción para producir un producto de extracción insoluble y un producto de extracción soluble, separar el producto de extracción insoluble y el producto de extracción soluble, secar el producto de extracción soluble para eliminar toda o considerablemente toda la humedad en el producto de extracción soluble, y combinar el producto de extracción soluble seco del paso c) con partículas de hueso desmineralizado. Preferentemente, el proceso no implica calentamiento. De acuerdo con la invención, la DBM utilizada en el proceso de extracción se puede preparar de acuerdo a una variedad de métodos diferentes. Son preferidos los métodos convencionales, tales como, aquellos identificados en Jefferies, supra y Glo acki eí al. , , supra. Tales métodos convencionales para preparar DBM incluyen un paso de desgrasamiento y un paso de desmineralización. Se pueden utiliza r diversos métodos de desgrasamiento, por ejemplo, agua caliente, o enjuagues con cloroformo/metanol . La desmineralización se puede llevar a cabo de acuerdo a un variedad de diferentes métodos, utiliza ndo generalmente, diversos tipos de soluciones ácidas pa ra períodos va riables y a temperaturas variables, para eliminar todo o substancialmente todo el contenido de mineral del hueso. Para propósitos de este invención , se puede utilizar cualqu ier forma y tamaño de partícula de DBM. Esto incluye DBM en la forma de fragmentos, partes, bolitas, virutas, tiras, gránulos o polvo, así como también, huesos enteros desmineralizados. Preferentemente, el hueso desmineralizado es de un tamaño de partícula pequeño, y más preferentemente en forma dé granulos o polvo. Más preferentemente, el hueso desmineralizado está en forma de partículas que tienen un tama ño de partícula promedio de desde aproximadamente 1 00 a aproximadamente 1 000 micrones, y más preferible de aproximadamente 125 a 850 micrones. De acuerdo con la invención, en el método de fabricación de las composiciones, DBM se coloca en un medio de base acuosa capaz de extraer colágeno, gelatina, y/o factores de tejido conjuntivo. Este paso se lleva a cabo a través de un método que es diferente de los métodos convencionales utilizados para extraer gelatina (LaRoche, eí al. (Patente de Estados Unidos No. 5, 908,921 ), Lilja, eí al.. (Patente de Estados U nidos No. 5,877 ,287), y Rainville, y otros. (Patente de Estados Unidos No. 6,080, 843)), porque éste se realiza a temperaturas ambientales y utiliza agitación diferente a otros métodos descritos (por ejemplo , como el descrito en O'Leary, et al. (Patente de Estados Unidos 5,236,456)). La extracción causa hidrólisis limitada de enlaces qu ímicos dentro del colágeno (Miller E .J. & Gay S. , Collagen: An Overview, In: Methods in Enzymology, vol. 82 (A), pp. 3-32 , 1 982). Esto resulta en la producción de una mezcla de proteína derivado de DBM, previamente caracterizado como colágeno soluble en agua y sus productos con desdoblamiento de peso molecular más bajo, colectivamente referidos como "gelatina" . (Rainville et al. supra: Nagumo et al. Kitasato Arch. Exp. Med. 48 : 1 89-191 , 1 975 ; Batge er al. , Eur. J. Biochem. 1 92: 1 53-1 59, 1 990) . Debido al desdoblamiento hidrolítico de los enlaces intra- e intermoleculares del colágeno, el proceso de extracción libera también algunos de los factores para reparar tejido conjuntivo que fueron fijados en la matriz de colágeno de la DBM. Los factores para reparar tejido conjuntivo liberados son solubles en la solución de extracto derivado de DBM. La extracción se puede conducir en un medio que es una solución ácida , alcalina o salada . Cualquiera de los distintos ácidos se pueden utilizar para llevar a cabo la extracción . Tales ácidos incluyen ácido clorhídrico, ácido cítrico, ácido acético , ácido láctico , y ácido málico . Alternativamente, cualquiera dé las varias soluciones alcalinas (por ejemplo, hidróxido de sodio, o hidróxido de potasio) o sales acuosas (tales cómo cloruró dé litio) se pueden utilizar para llevar a cabo la extracción . Preferentemente, se utiliza un ácido carboxílico. Más preferentemente , se utiliza ácido cítrico. La concentración del ácido, base y/o sal puede variar, dependiendo de la eficacia del ácido, base o sal utilizado como agente hidrolíticó. La cantidad de DBM colocada en la solución ácida, alcalina o salada puede variar, dependiendo de la fuerza de la solución y de la forma y tamaño de la DBM. Preferentemente, donde se utiliza ácido cítrico y DBM en polvo o granulado, aproximadamente 1 0 á aproximadamente 50 mL de aproximadamente 1 .0 a 1 0.0 M de ácido cítrico se utiliza por gramo de DBM. Más preferentemente, aproximadamente 20 mL dé aproximadamente 2.0 a aproximadamente 3.0 M de ácido cítrico se utiliza por gramo de DBM. La DBM y la solución ácida acuosa pueden ser sacudidas, revueltas, o agitadas de otra forma para apresurar este proceso de extracción . Preferentemente la solución ácida acuosa y la DBM son revueltas o agitadas entre aproximadamente 2 y aproximadamente 96 horas, y más preferentemente, entre aproximadamente 48 y aproximadamente 72 horas. El paso de extracción puede tomar lugar a cualqu ier temperatura debajo de la cual las proteínas endógenas dentro de la DBM comiencen a desnaturalizarse irrevocablemente. Para el propósito de este invención , es preferible que la temperatura ambiente o la temperatura del cuarto se encuentre entré aproximadamente 1 5°C y aproximadamente 25°C , más preferentemente entre aproximadamente 1 8°C y aproximadamente 25°C, y todavía más, preferentemente entré aproximadamente 15°C y 21 °C. Se puede afectar el peso molecular y las propiedades físicas de la gelatina resultante, variando los parámetros del sistema de extracción. El pH y/o concentración del sistema afectan la composición protéinica dé los productos dé extracción . La habilidad del sistema para extraer proteínas se basa tanto en el pH así como en la concentración de la DBM y él medio dé extracción . Por ejemplo, la extracción de colágeno y su conversión a una gelatina vía hidrólisis ha dejado ver que es dependiente del pH dé los medios dé extracción (La óché , ét al. ; Lilja , éí al. ; Rainville, et al. , supra). Igualmente, el pH y/o la concentración de los medios dé extracción afectan la composición protéinica de lós productos de extracción . Las concentraciones relativas de la DBM y el medio de extracción durante él pasó dé extracción , también afectan la habilidad y grado al cual son extraídas las proteínas. El paso de extracción también se puede realizar bajo u n vacío . Por ejemplo, partículas de hueso desmineralizado y un medio de extracción se pueden poner en contacto en un matraz atado a una tubería de vacío conectada a una bomba que suministra un vacío, por ejemplo, aproximadamente 28 mm Hg de vacío. Sigu iendo la exposición de la DBM al medio de extracción , él producto de extracción solu ble se sepa ra del prod ucto de extracción insoluble, el cual, generalmente, está en forma de un residuo sólido insoluble. Esta separación puede ocurrir por medio de cualquiera de diversos procesos, tales como, decantación , filtración , o centrifugación . Preferentemente , se utiliza la filtración Opcionalmente , se puede añadir agua al producto dé extracción insoluble restante, cómo uñ medió para lavar y reunir material adicional disuelto. Preferentemente , este paso de lavar con agua se realiza , por ejemplo, añadiendo aproximadamente 1 0 a aproximadamente 1 00 mL de agua deionizada estéril por gramo de material inicial de DBM, después de lo cual la mezcla es revuelta, sacudida o agitada de otra manera y después separada. Más preferentemente, se añaden aproximadamente 20 mL dé agua deionizada y estéril por gramo de material inicial de DBM, y la mezcla es agitada y después filtrada . La fase líquida puede se puede guardar y después combinar con el producto de extracción soluble para incrementar el rendimiento del producto. Opcionalmente , los pasos de extracción y separación se pueden repetir una o más veces añadiendo un medio de extracción nuevo al resid uo seguido por uñ lavado acuoso. Siguiendo las éxtraccioñés y los lavados dé agua repetidos, los volúmenes del lavado con agua y la extracción se pueden ahorrar y añadir a los volú menes de lavado con agua y/o extracción de la primera extracción para i ncrementar el rendimiento del producto. El producto de extracción insoluble se puede a horrar y utilizar como se ha descrito aquí. El producto de extracción soluble es a continuación diluido, neutralizado y/o las sales se eliminan. Esto también puede ocurrir a través de cualquiera de los diversos procesos, tale como, trituración, diálisis, extracción líquido-líquido, o precipitación . Preferentemente, se utiliza la diálisis. Un concentrador de proteína o unidad de ultrafiltración se puede utilizar antes ó durante la diálisis para apresurar los procesos dé dilución , neutralización y/o eliminación de sal Los procesos de neutralización y eliminación de sal deben eliminar una porción sustancial de los iones solubles y pequeñas moléculas en el producto de extracción soluble. Preferentemente, si se utiliza u n medio de extracción básico o ácido, el pH del producto de extracción soluble se ajusta de entre aproximadamente 4 y aproximadamente 1 0. Más preferentemente , si se utiliza un medio de extracción ácido, el pH del producto de extracción soluble restante se ajusta para estar entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 5.5 , todavía más preferentemente entre aproximadamente 0.5 y 3.5. El producto de extracción soluble neutralizado, libre dé sal, es parcial o totalmente secado para eliminar el exceso de agua . El secado puede ocurrir a través dé varios medios. Preferentemente, el secado ocurre a través de liofilización (secado por congelación) . Preferentemente , el secado se completa , de manera q ue toda el agua es eliminada y queda un producto seco. Alternativamente, la liofilización u otro proceso de sécadó se pueden detener en algún momento antes dé la terminación , de manera que una variedad de productos existen en una forma concentrada pero completamente deshidratada. Tales productos son referidos aquí como "concentrado". Generalmente, el producto de extracción soluble seco tiene generalmente una apariencia blanca y aborregada, como algodón. El concentrado tendrá un contenido de humedad más grande, y por consiguiente, puede tener la apariencia de un gel, masilla, o pasta. El producto de extracción soluble seco o concentrado, puede ser parcial o totalmente rehidratado a una forma fluida o plástica, tal como, uñ gel, masilla, ó pasta. Los componentes primarios de ésta material son agua, proteínas derivadas de DBM, y proteínas de tejido conjuntivo. Las cantidadés relativas dé producto dé extracción soluble sécó y agua, éh lá mezcla pueden variar para ajustar la viscosidad y otras características físicas de la mezcla. Preferentemente, aproximadamente 5 a aproximadamente 1 5 mL de agua deionizada se añaden a aproximadamente 0.1 a aproximadamente 3.0 g de producto seco, y más preferentemente aproximadamente 10 mL de agua deionizada se añaden a aproximadamente 0.8 g de producto seco. El proceso de rehidratáción puede ayudarse a través de medios de mezcla mecánicos, tales como, sacudir o agitar a temperatura ambienté. Preferentemente, la rehidratáción se ayuda a través de la agitación. El concentrado se puede utilizar en lugar de o en adición del producto secó. Dónde sé utiliza el concentrado, el agua o producto seco se pueden mezclar con el concentrado para cambiar la viscosidad y otras características físicas de la mezcla resultante. Uno o más ingredientes biológicamente activos se pueden añadir a la composición resultante. Estos ingredientes activos pueden o no relacionarse a las capacidades de la composición de reparar el tejido conju ntivo. Ingredientes activos adecuados son , DBM y el producto de extracción insolublé que contiene proteínas morfogenéticas de hueso endógeno residuales y prote ínas relacionadas, tales como , proteínas morfogenéticas derivadas de cartílago (CDMPs). Otros ingredientes activos que se pueden añadir a la composición son , materiales derivados dé hueso, tales como, pedacitos de hueso cortical o poroso y mineral de hueso, qu ímicos óstéogéñicós (por ejemplo, L-árginina) , péptidos osteogénicos (por ejemplo, OSA), factores de crecimiento osteogén ico (por ejemplo, factor de crecimiento de transformación beta [TGF-ß], factor de crecimiento tipo insulina [IGF], factor dé crecimiento derivado dé plaqueta [PDGF] , factor de crecimiento endotelia l vascular [VEGF] , factor de crecimiento fibroblasto [FGF], y BMPs recombinantes (por ejemplo, rBMP-2, rBMP-7), fibronectina, y proteínas derivadas de sangre. Cuando estos ingredientes activos se agregan en combinaciones apropiadas, pueden ayudar a reparar hueso, reparar cartílago, reparar tendón y ligamento, reparar meniscos, y otras aplicaciones musculoesqueléticas. Uno o más materiales espesores se pueden añadir a la composición resultante. Cualquiera de tales materiales pueden, también , ser ingredientes activos o biológicamente inertes. Materiales espesores adecuados son el colágeno, productos dé extracción insolublé (los cuales pueden o no contener BMPs residua les), mineral de hueso, hidroxvapatita , fosfató dé tricálcio, fosfató calcio bifásico, sulfató de calcio, vid rios biológicos, y polímeros sintéticos o natu rales. Ta les polímeros incluyen poloxámero 407 y polímeros relacionados. Donde se utiliza producto de extracción insolublé como un material espesor, este, preferentemente se lava con agua para eliminar cualquier medio de extracción residual. Preferentemente, producto de extracción insoluble, DBM, y/o medio de fase invertida se utilizan como material espesor con o sin adición de proteínas. El medio fase invertida puede ser una mezcla acuosa o Pluronic F1 27 (BAS F Corp.) en una cantidad suficiente para otorgar propiedad de fase invertida a la composición , preferentemente en aproximadamente 20-40 % p/p, más preferentemente aproximadamente 23-32% p/p y todavía más preferentemente aproximadamente 25% p/p o aproximadamente 35% p/p de mezcla dé Pluróñic® F127 y agua . Otros medios de fase invertida incluye mezclas acuosas de derivados de Pluronic® F127, tales como, aquéllos revelados en Solicitud dé Patente Provisional dé Estados U nidos No. 60/345, 1 1 3, el cual se incorpora aqu í como referencia . Las propiedades biológicas, fisicoquímicas de biodegradacion de la composición se pueden alterar a través de agentes de degradación conocidos , tales como, químicos (por ejemplo , g lutaraldehído o formaldeh ído) o radiación (por ejemplo, rayo de electrones o gamma). Preferentemente la radiación se utiliza como el agente de degradación, y más preferentemente la radiación de rayo de electrones (E-rayo) se utiliza para irradiar los materiales secos o mojados en dosis de entre aproximadamente 5 y 50 kGray. La composición resultante se puede utilizar de diferentes maneras. En una modalidad preferente, la composición se utiliza como una cubierta para implantes q uirúrgicos. Preferentemente, la mezcla se aplica a pedacitos de h ueso poroso liofilizado; o en pedacitos de hueso poroso son sumergidos en la mezcla. Los pedacitos de h ueso, cubiertos con la mezcla , se pueden secar. El paso de secado se puede conducir a través de cualquier proceso convencional de secado, incluyendo liofilización o secado en horno. Preferentemente , el secado es a través de liofilización . Los pedacitos de hueso cubiertos se pueden utiliza r como o en implantes q uirúrgicos a , en, sobre o cerca de los lugares con defecto del hueso, lugares para reparar cartílago, u otros lugares musculoesqueléticos. Alternativamente, la cubierta puede aplicarse a seg mentos más largos del hueso, implantes artificiales, o en cualq uier otro tipo de implante quirúrgico. En otra modalidad preferida , la composición se inyecta o introduce a , en , sobre o cerca de un lugar defectuoso del cartílago o hueso. La forma de inyección o introd ucción no es esencial , pero preferentemente la inyección es vía jeringa y la introducción es a través de crear una abertura quirúrgica para acceder al lugar defectuoso del cartílago o hueso. En otra modalidad preferente, la composición se mezcla con una combinación de materiales activos y de masilla o espesores, como DBM y producto de extracción soluble respectivamente, e inyectados o introducidos a , en , sobre o cerca del lugar defectuoso del cartílago o hueso. Preferentemente la relación peso contra peso (p/p) de DBM contra el producto de extracción insoluble es aproximadamente 3 a 1 . Alternativamente, el producto seco de extracción soluble o concentrado se puede mezclar con alcohol acuoso u otras soluciones volátiles, cambiando a un aspecto deseado y seco, para formar un material tipo esponja . Preferentemente, se utiliza de uno a seis alcoholes de carbono. Más preferentemente, se utiliza etanol. Preferentemente, se utiliza de 1 a 20 por ciento de alcohol por volumen de solución. Más preferentemente, se utiliza u n 4.75 por ciento de eta nol por volu men de solución . Preferentemente, 20 mg a 200 mg de material seco se combinan con cada ml_ de etanol. Preferentemente, se utilizan de 50 a 80 mg de producto de extracción soluble seco por ml_ de etanol. Se puede añadir un ingrediente biológicamente activo, como se discutió arriba . Preferentemente, se utiliza DBM Adicionalmente, se puede añadir u no o más materiales espesores, como se discutió a nteriormente. También , se puede añadir a esta composición el producto de extracción insoluble. La composición resultante puede ca mbiar a una capa u otra forma con o sin la adición de otros materiales. La capa u otra forma se seca . El secado se puede hacer a través de cualquier método convencional, incluyendo liofilización o secado con aire. Preferentemente, el secado es a través de liofilización. En una modalidad preferente, la capa o tipo formado con una solución de alcohol, como se describió anteriormente, se utiliza como o como parte de un implante quirúrgico. Preferentemente, donde una capa se utiliza, ésta se utiliza como una envoltu ra alrededor de un área o como un parche introd ucido en un sitio defectuoso del h ueso , por ejemplo, inserción en un defecto del hueso, un defecto de cartílago, una jaula de fusión vertebral o una cama cóncava-pre ensanchada . En una modalidad más preferente, el prod ucto de extracción soluble seco, el cual está en la forma de un material aborregado, blanco se utiliza para hacer un materia l tipo esponja q ue contiene partículas de hueso desmineralizado. El material aborregado, blanco se puede cortar en pequeñas piezas de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 5 cm . , más preferentemente aproximadamente 1 a aproximadamente 2 cm. Entonces, el material cortado se combina con etanol acuoso (aproximadamente 3-10% de etanol, más preferentemente aproximadamente 4-5% de alcohol etílico), y se mezcla hasta que el material a borregado, blanco se disperse. Entonces, las partículas de DBM se añaden en una proporción de aproximada mente 2-4: 1 en peso, más preferentemente 3: 1 en peso y la composición es perfectamente mezclada. Entonces, se añade el etanol a la composición y la composición mezclada se vierte en un recipiente, preferentemente un recipiente q ue está en la forma del producto deseado. Entonces, la composición es refrigerada, congelada y liofilizada para obtener una composición que está sustancialmente libre de humedad . El producto final tiene una consistencia tipo esponja . Los sig uientes ejemplos se incluyen para demostrar modalidades preferentes de la invención . Se debe apreciar por aquellos expertos en el arte , que las técnicas reveladas en los ejemplos que siguen , representan técnicas descubiertas por los inventores para funcionar bien en la práctica de la invención y, de esta manera, se pueden considerar para constituir modos preferentes para su práctica. Sin embargo, aquellos expertos en el arte deben apreciar, en vista del presente descubrimiento, que se pueden hacer muchos cambios en las modalidades específicas, las cuales son reveladas y todavía preva lecen resultados similares o parecidos sin apa rtarse del espíritu y alcance de la invención .

EJ EMPLOS Ejemplo 1 . 2.0M - 2 día de extracción con ácido cítrico Veinte mL de 2.0 M de ácido cítrico se añaden por gramo de DBM en un tubo centrifugador de polipropileno de 500 mL. El ácido cítrico y la DBM son mezclados a temperatura ambiente por 48 horas. La dispersión del solvente/DBM se filtra a través de u na malla de 1 00µ?t? . El residuo que no pasa a través de la malla , se lava con agua posteriormente. El enjuague se filtra y combina con el filtrado original. El filtrado y el residuo se guardan y se aparta . Ejemplo 2. 3.0M - 2 día de extracción con ácido cítrico Veinte mL de 3.0 M de ácido cítrico se añaden por gramo de DBM en un tubo centrifugador de polipropileno de 500 mL. El ácido cítrico y la DBM son mezclados a temperatura ambiente por 48 horas. La dispersión del solvente/DBM se filtra a través de una malla de 1 00µp? . El residuo que ño pasa a través de la malla , se lava con ag ua posteriormente . El enjuague se filtra y combina con el filtrado original . El filtrado y el residuo se guardan y se aparta . Ejemplo 3. 3.0M - 3 día de extracción con ácido cítrico Veinte m L de 3.0 M de ácido cítrico se añaden por gramo de DBM en u n tubo centrifugador de polipropileno de 500 m L. El ácido cítrico y la DBM son mezclados a temperatura ambiente por 72 horas. La dispersión del solvente/DBM se filtra a través de una malla de 1 00µ?? . El residuo que no pasa a través de la malla , se lava con agua posteriormente. El enjuague se filtra y combina con el filtrado original. El filtrado y el residuo se gua rdan y se apa rta .

Ejemplo 4. 3.0M - 5 día de extracción secuencial con ácido cítrico Veinte mL de 3.0 M de ácido cítrico se añaden por gramo de DBM en un tubo centrifugador de polipropileno de 500 m L. El ácido cítrico y la DBM son mezclados a temperatura ambiente por 24 horas. La dispersión del solvente/DBM se filtra a través de una malla de ? ??µ?t?. El filtrado se separa y se gua rda para un tratamiento posterior. El residuo que no pasa a través de la malla, se recombina con ácido cítrico nuevo (20 ml/g de DBM inicial) y se mezclan por 24 horas adicionales. Este proceso se repite por cinco días, de manera que ocurrirán cinco extracciones. El filtrado de cada paso de aislamiento se guarda de forma separada para un procesamiento individual. En el q uinto día , el liquido residual se enjuaga con agua deionizada (20 ml/g de la DBM inicial) el cual se combina con el filtrado original. El filtrado y los residuos se guardan y se apartan . Ejemplo 5. Neutralización y liofilización del sobrenadante El filtrado del Ejemplo 1 ,2,3 o 4 se coloca en un entubado de diálisis (tamaño de poro 8, 000-1 0,000 KDa) y se dializa contra agua desionizada hasta que el pH de las porciones del sobrenadante alcancen un mínimo de 5. En este punto , el filtrado se transfiere a un matraz de liofilización , se congela la capa, entonces, se coloca en un liofilizador. Este liofilizado es referido abajo como la porción soluble. Ejemplo 6. Tratamiento del residuo Las partículas insol ubles resultantes del Ejemplo 1 , 2 , 3 o 4 se lavan con 200 mL de H20 por gramo de DBM. Este lavado se repite hasta que las partículas alcancen un pH de 4-8; los líquidos para lavar se desechan. Las partículas insolubles se liofilizan para obtener un material insoluble seco . Ejemplo 7. Formulación de un gel extruibte La porción soluble del Ejemplo 5 se disuelve en agua deion izada en una concentración de 0.08 g de porción soluble por mi de agua . La mezcla se revuelve a temperatura ambiente por aproximadamente 1 5 minutos a 1 hora o hasta que la mezcla se vuelva homogénea . En este punto, la porción solu ble se habrá d isuelto y se comenzará a formar un gel. La gelatinización se puede acelerar enfriando la suspensión/solución a aproximadamente 1 a 1 0°C. El gel se coloca a 4°C por 1 5 minutos para acelerar la formación del gel o se deja a temperatura ambiente por 1 hora . El gel resultante es estable a temperatura ambiente. Este gel puede ser osteoinductivo en ciertas concentraciones y usado para inyecciones percutáneas o implantaciones quirúrgicas a, en , sobre o cerca de fracturas de hueso o lugares defectuosos. Este gel se puede mezclar con materiales activos o inactivos adicionales. Ejemplo 8. Formulación de un producto extru ible con poloxámero 407 como un material espesador. La porción soluble del Ejemplo 5 se disuelve en agua deionizada a una concentración de 0.04 g/ml. El gel resultante ( 1 0 mi) se mezcla con 20 mL de un 35% p/p de gel poloxámero 407. La mezcla se revuelve en temperatura ambiente por varios minutos o hasta que la mezcla se vuelva homogénea y opaca. Este gel puede ser osteoinductivo en ciertas concentraciones y se puede utilizar en inyecciones percutáneas o implantaciones q uirúrgicas en lugares defectuosos del hueso , o mezclada con rellenos activos o inactivos para crear una consistencia tipo pasta o masilla . Ejemplo 9. Formulación de un producto extruible con porción insolu ble como un material espesador U n gel, masilla o pasta extruible, se produce mezclando 2.0 mi del gel del Ejemplo 7 con 0.4 g de las partículas insolubles del Ejemplo 6. La mezcla se revuelve a temperatura ambiente por varios minutos hasta que se obtiene una consistencia de gel, masilla o pasta . Este material se puede utilizar para inyecciones o implantaciones quirúrgicas a, en , sobre o cerca de lugares defectuosos de hueso y/o del cartílago. Ejemplo 1 0. Formulación de un producto extruible con DBM como un material activo Un gel, masilla o pasta extruible, se produce mezclando 2.0 mi del gel del Ejemplo 7 con 0.6 g de DBM. La mezcla se agita a temperatura ambiente por varios minutos hasta que se obtiene una consistencia de masilla o gel. Este materia l se puede utilizar para inyección o implantaciones quirúrgicas a , en , sobre o cerca de lugares defectuosos del hueso y/o del cartílago. Ejemplo 1 1 . Formulación de un producto extruible con DBM y partícu las insolu bles como material espesador Ú n gel, masilla o pasta extru ible, se prod uce mezclando 4.76 mi del gel del Ejemplo 7 con 1 .02 g de DBM y 0.24 g de las partículas insolubles del Ejemplo 6. También se puede obtener una masilla similar con 1 .02 g de residuo insoluble y 0.24 g de DBM . La mezcla se ag ita a temperatura ambiente por varios minutos hasta que se obtiene una consistencia de gel o masilla . Este gel se puede utilizar para inyección a , en , sobre o cerca de lugares defectuosos del hueso y/o del cartílago. Ejemplo 1 2. Formulación de una masilla extruible con poloxámero 407 y porción insolu ble como materiales espesadores El gel del Ejemplo 8 (3.0 mi) se mezcla con 1 .5 g de partículas insolubles del Ejemplo 6. La mezcla se agita a temperatura ambiente por varios minutos hasta que se obtiene una consistencia de masilla . Este material se puede utilizar para inyección o colocación quirúrgica a , en , sobre o cerca de lugares defectuosos del h ueso y/o del cartílago. Ejemplo 13. Formulación de una masilla extruible con poloxámero 407, DBM y porción insoluble como materiales espesadores El gel del Ejemplo 8 (3.0 mi) se mezcla con 1 .2 g de DBM y 0.3 g de las pa rtículas insolubles del Ejemplo 6. Una masilla similar se puede formar de 1 .2 g de las partículas insolubles del Ejemplo 6 y 0.3 g de DBM. La mezcla se agita a temperatura ambiente por varios minutos hasta que se obtiene una consistencia de masilla . Este material se puede utilizar para colocaciones a , en , sobre o cerca de lugares defectuosos del hueso y/o del cartílago . Ejemplo 14. Formación de capas o formas de los productos solubles e insolubles La porción soluble seca del Ejemplo 5 se disuelve en una solución de etanol de 4.75% v/v en ag ua . Específicamente, 1 .2 g de la porción solu ble se disolvió en 40 mL de 4.75% v/v de etanol. Una vez que se obtiene una solución homogénea, se agregan 2.3 g de partículas insolu bles del Ejemplo 6. La dispersión es perfectamente mezclada y convertida en una capa . La mezcla es inmediatamente congelada y entonces liofilizada . El hueso poroso y/o DBM se puede agregar solo, como partículas insolubles o en combinación con otra. Este material se puede utilizar para colocaciones a , en, sobre o cerca de los defectos del hueso y/o del cartílago . Ejemplo 1 5. Utilización de un producto extruible como capa osteogénica El producto derivado de DBM de los Ejemplos 1 -14 se utiliza para cu brir un implante quirúrgico de hueso. El implante cubierto es liofilizado. El producto liofilizado se puede introducir a, en, sobre o cerca del lugar defectuoso del hueso y/o del cartílago. Ejemplo 1 6. Formulación de un producto extruible que contenga hueso poroso con o sin adición de sangre o médula espinal Los productos de gel y masilla derivados de DBM de los Ejemplos 1 -1 5 se combinan con material de hueso poroso para producir un gel o masilla con características de manejo diferentes. Además, el gel/masilla que contiene el (material) poroso se puede combinar con sangre y/o médula de espinal para suministrar un material osteogénico enriquecido con factor de crecimiento. Ejemplo 1 7. Ilustraciones de las propiedades inductivas del hueso Muestras del Ejemplo 1 (25 mg de material soluble liofilizado solo), Ejemplo 2 (25 mg de material soluble liofilizado solo), Ejemplo 3 (25 mg de residuo rehidratado), Ejemplo 8 (25 mg de producto como se describió en el Ejemplo 8 mas DBM y residuo), y Ejemplo 1 0 (25 mg de producto como se describió en el Ejemplo 1 0), se prepararon para implantación. Estas muestras, junto con las muestras de DBM activo que se utilizaron para crear las muestras, se esterilizaron utilizando tecnolog ía de rayo de electrones y se implantaron en la musculatura de ratones atímicos (rhu/rh u), de acuerdo a los protocolos aprobados por IACUC . Los ratones se anestesiaron utilizando una mezcla de cetamina/xilazina para la inducción y conservación de la anestesia por todo el procedimiento. La anestesia general se completo en aproximadamente 3-5 minutos y se verificó a través de una carencia de respuesta a un pellizco en la pata . El área dorsal de cada ratón se limpió utilizando un restregón de alcohol/betadina . Cada ratón se colocó en posición dorsal. Entonces, se utilizó un escalpelo o tijeras, se hizo una incisión de 1 cm en la piel. Se hizo una incisión de 1 .0 mm en el músculo y se utilizó una disección contundente para extender el lugar de implantación . Todos los implantes se colocaron entre los legajos de músculo. El procedimiento fue repetido en el lado contralateral, a través de la misma incisión de la piel. El cierre de la herida se completa con u na o dos suturas de vicrilo para cerrar el múscu lo y utilizando clips de acero inoxidable en la herida para la incisión de la piel . Las revisiones post-operación se realizaron para asegurar la completa recuperación de los animales del procedimiento. En el d ía 28 después de la operación , todos los an imales fueron anestesiados con pentobarbital de sodio y sacrificados por medio de d islocación cervical . Después de la eutanasia , la piel sobre el implante fue reflejada y ambos implantes fueron quitados. El implante derecho de cada animal se colocó en formalina regulada neutra de 1 0% para histología y el implante izquierdo de cada animal se colocó en criofrascos, entonces se congelaron en un instante en nitrógeno líquido para análisis de fosfatasa alcalina. Las muestras congeladas fueron almacenada a -80°C para análisis bioquímicos subsecuentes. El resto de las muestras se colocaron antes en formalina regulada neutra 1 0% v/v para tratamiento histológico . Éstas muestras se procesaron y se fijaron en parafina. Se prepararon secciones histológicas fijadas en parafina descalcificadas y teñidas con hematoxilina y eosina. Se realizaron análisis cualitativos para evaluar cada muestra para inductividad en el hueso. También , se evaluaron cuantitativamente muestras de cada sección fijada en parafina para determinar la cantidad de hueso nuevamente formado como una función del área del implante total. Los resultados de este estudio muestran que 25 mg (que contienen un poco más que 3 veces la cantidad de porción soluble presente en las formulaciones de masilla) de 2.0 M - 2 día del material soluble liofilizado (porción soluble) solo no es inductivo en este modelo. Contrariamente, 25 mg (un poco mas que 3 veces la cantidad de porción soluble presente en las formulaciones de masilla) de 3.0 M - 2 día del material seco liofilizado (porción soluble) es inductivo manera que huesos chicos muy pequeños se formaron en 5 de las 6 muestras evaluadas. El 2.0 M - 2 d ía más la masilla de DBM (Figuras 1 A y 1 B) y el 3.0 M - 2 día más la masilla de DBM residual (Figuras 2A y 2B) también fueron inductivas en este modelo. Ejemplo 18. Preparación de una Composición para Reparar Hueso Este proceso se conduce principalmente a temperatura ambiente en u n ambiente de fabricación con una temperatura controlada de aproximadamente 59-70°F (1 5-21 °C). Ciertos pasos se conducen bien por debajo de temperatura ambiente, incluyendo los pasos de congelación y liofilización (congelado en seco). Las partículas de matriz de hueso desmineralizado (DBM) se obtienen de un AATB acreditado u otros bancos de tejido o preparados a través de desmineralizar un hueso mineralizado por medio de métodos convencionales. Un lote de las partículas de DBM se divide en una primera porción (aproximadamente 60% del lote) y una segunda porción (aproximadamente el 40% del lote). Entonces, las partículas de DBM se colocan en un matraz equipado Erlenmeyer con un deflector perforado Teflón ™ . Se añaden unos 3 M de solución de ácido cítrico (20 mi de ácido por gramo de partículas DBM). El tapón de matraz se equipa con un accesorio para la colocación de una tubería de vacío conectada a una bomba que suministra aproximadamente 28 mm Hg de vacío. El montaje se sujeta a un agitador orbital suministrando una agitación vigorosa . El vacío y la agitación se aplican por 72 horas. Como alternativa , este proceso se puede conducir sin la aplicación de un vacío. Durante este tiempo , la temperatura de los contenidos del matraz están en o ligeramente debajo de la temperatura ambiente. Después de 72 horas, los contenidos del matraz consisten de dos porciones; un líquido ácido que contiene la parte soluble de las partículas de DBM y una partícula sólida insoluble. Los contenidos completos del matraz se filtran al vacío a través de una pantalla de 350 micrones sobre un embudo Buchner para separar la partícula sólida insoluble del líqu ido ácido que contiene la parte soluble de las partículas de DBM. Ambas partes se conservan . La partícula sólida insoluble se enjuaga múltiples veces con agua deionizada a temperatura ambiente en un limpiador ultrasónico. Las partículas lavadas se escurren, se colocan en bolsas Tyvek™ selladas, o en otro recipiente adecuado, se congelan en un congelador que se mantiene a aproximadamente -75 a -80°C, y entonces se liofilizan por 5-7 días. Después de la liof ilización , la fuente refrigerante se apaga automáticamente y las partículas regresan a temperatura ambiente. La porción de líquido ácido que se obtiene del paso de filtración se dializa por 72 horas en agua deionizada a temperatu ra ambiente. Él material dializado, entonces, se coloca en recipientes sellados, congelado en un congelador que se mantiene a -75 a -80°C, entonces se liofiliza por alrededor de varios días para eliminar el agua . De estos pasos de procesamiento resultan dos componentes distintos y separados: de las partículas DBM de la porción solubilizada un material aborregado, esencialmente blanco, seco y ligero y de las partículas sólidas insolubles una partícula seca y amarillenta. Entonces, los dos componentes se combinan a temperatura ambiente. Primero, el componente aborregado (producto de extracción soluble seco) se coloca en un recipiente plástico desinfectado y parcialmente disuelto en agua destilada a temperatura ambiente. Entonces, el pH se ajusta a aproximadamente 1 .8-2.2 por varios minutos por medio de por goteo, 3 M de ácido cítrico a temperatura ambiente. Entonces, las partículas sólidas insolubles y la segunda porción de las partículas de DBM se añaden y se mezclan . Esta formu lación final se inserta en jeringas y se enfría a una temperatura de refrigerador (aproximadamente -4°C) por 8-72 horas.

Las materias primas, materias intermedias o producto final se pueden esterilizar, por ejemplo, a través de un tratamiento de esterilización de rayo electrón ("E-rayo"), de preferencia en una dosis señalada dentro de 5-25 kilograys (kGy). Ejemplo 19. Preparación de una Composición para Reparar Hueso en la Forma de una Esponja Este proceso se conduce principalmente a u na temperatura ambiente en un ambiente de fabricación con una tem peratura controlada de aproximadamente 59-70°F (1 5-21 °C). Ciertos pasos se conducen bien por debajo de temperatura ambiente, incluyendo los pasos de congelación y liofilización (congelado-seco). El producto de extracción soluble seco como se prepa ró en el Ejemplo 18, se utiliza para este proceso. Se pesan 2.5137 gramos de partículas de DBM y 826.87 miligramos de producto de extracción soluble seco , aborregado y blanco . El material aborregado, blanco se corta en piezas pequeñas de aproximadamente 1 a aproximadamente 2 cm. El material cortado se coloca en un tubo centrífugo (aproximadamente un tubo de 50 mi) u otro recipiente de tamaño similar. Aproximadamente 35 mi de etanol a 4.75% refrigerado se agrega al tubo centrífugo y los conten idos se mezclan agresivamente, por ejemplo, con un mezclador vórtice por aproximadamente 3 minutos o hasta que se disperse el material aborregado y blanco. Entonces, las partículas de DBM se ag regan al tubo centrífugo y los contenidos se mezclan agresivamente por otro minuto o hasta que los contenidos se mezclan perfecta y uniformemente. Entonces, se añade el etanol al tubo, de tal forma que, los contenidos llenen el tubo, por ejemplo, aproximadamente 40 mi. Los contenidos del tubo se mezclan agresivamente otra vez por aproximadamente 15 seg undos o hasta se mezclen perfectamente. Entonces, la mezcla se vierte en una bandeja que tenga la forma del producto que se desea. La bandeja se coloca en un refrigerador (~4°C) por aproximadamente un hora o hasta que se obtenga un gel firme . Entonces, la bandeja se transfiere a un congelador de aproximadamente -84°C por al menos 3 horas. Entonces, la composición se liofiliza por aproximadamente 24 horas , o hasta que la composición está substancialmente libre de humedad . El producto final tiene una consistencia tipo esponja . El espesor puede variar, pero preferentemente es de 1 /8" a aproximadamente 1 " de grueso, más preferentemente aproximadamente 1 /4" de grueso.

Claims

REIVINDICACIONES : 1 . Una composición osteogénica resultante del proceso, comprende: a) someter un hueso desmineralizado a un med io de extracción para producir un producto de extracción insoluble y un producto de extracción soluble; b) separar el producto de extracción insoluble y el producto de extracción soluble; c) secar el producto de extracción soluble para eliminar toda o substancialmente toda la humedad en el producto de extracción soluble; d) combinar el producto de extracción soluble del paso c) con las partículas del hueso desmineralizado; caracterizado porque el proceso no involucra calentamiento.
2. La composición osteogénica de la reivindicación 1 , caracterizada porque el producto de extracción soluble seco del paso c) es subsecuentemente hidratado y la composición tiene la consistencia de un gel, pasta o masilla.
3. La composición osteogén ica de la reivindicación 1 , caracterizada porque el proceso, además, comprende el paso e) de combinar el producto de extracción soluble seco del paso c) con un alcohol y eliminar el alcohol por medio de secado, y la composición tiene la consistencia de una esponja.
4. La composición osteogénica de la reivindicación 1 , caracterizada porque la extracción del paso a) es conducida bajo vacío.
5. La composición de la reivindicación 1 , caracterizada porque el medio de extracción es un ácido.
6. La composición de la reivindicación 5, caracterizada porque el medio de extracción es ácido cítrico.
7. La composición de la reivindicación 1 , caracterizada porque el proceso, además, comprende un paso de esterilización .
8. La composición de la reivind icación 7, caracterizada porque la esterilización es conducida por medio de una esterilización de e-rayo.
9. La composición de la reivindicación 1 , caracterizada porque el secado del paso c) comprende liofilización . 1 0. La composición de la reivindicación 1 , la cual además comprende el producto de extracción ¡nsoluble. 1 1 . Un método para preparar una composición osteogénica , comprende : a) someter un hueso desmineralizado a un medio de extracción para producir producto de extracción insoluble y producto de extracción soluble; b) separar el producto de extracción insoluble y el producto de extracción soluble; c) secar el producto de extracción soluble para eliminar toda o substancialmente toda la humedad en el producto de extracción soluble; d) combinar el producto de extracción soluble seco del paso c) con las partículas del h ueso desmineralizado; caracterizado porque el método no involucra calentamiento. 12. El método de la reivindicación 11, caracterizado porque el producto de extracción soluble seco del paso c) es subsecuentemente hidratado y la composición tiene la consistencia de un gel, pasta o masilla. 13. El método de la reivindicación 11, caracterizado porque el método además comprende el paso de combinar el producto de extracción soluble seco del paso c) con un alcohol y eliminar el alcohol por medio de secado, y la composición tiene la consistencia de una esponja. 14. El método de la reivindicación 11, caracterizado porque la extracción del paso a) es conducida bajo vacío. 15. El método de la reivindicación 11, caracterizado porque el medio de extracción es un ácido. 16. El método de la reivindicación 15, caracterizado porque el medio de extracción es ácido cítrico. 17. El método de la reivindicación 11, caracterizado porque el método, además, comprende un paso de esterilización. 18. El método de la reivindicación 17, caracterizado porque la esterilización es conducida por medio de una esterilización e-rayo. 19. El método de la reivindicación 11, caracterizado porque el secado del paso c) comprende liofilización. 20. El método de la reivindicación 11, caracterizado porque la composición, además, comprende el producto de extracción insoluble. 21. Un implante quirúrgico osteogénico comprende: implante quirúrgico cubierto con la composición de la reivindicación 1. 22. Un método de tratamiento de un defecto del hueso, suministrar un implante quirúrgico; cubrir el implante quirúrgico con la composición de la reivindicación 1; y colocar el implante quirúrgico en un lugar defectuoso del hueso.