MXPA03000363A - Derivados de hidrazida del acido pirrolidin-2-carboxilico para su uso como inhibidores de metaloproteasas. - Google Patents

Derivados de hidrazida del acido pirrolidin-2-carboxilico para su uso como inhibidores de metaloproteasas.

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Abstract

La presente invencion se refiere a los compuestos de formula I: (ver formula I) en donde R1, R2, R3, R4, R5 y X son como se ha definido en la descripcion y las reivindicaciones y los esteres y/o las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos. Los compuestos son de utilidad como inhibidores de las metaloproteasas, por ejemplo, zinc proteasas, en particular zinc hidrolasas, y los cuales son efectivos en el tratamiento de estados de enfermedad, asociados con la vaso constriccion de incidentes crecientes.

Description

DERIVADOS DE HIDRAZIDA DEL ACIDO PIRROLIDIN-2- CARBOXÍLICO PARA SU USO COMO INHIBIDORES DE METALOPROTEASAS Campo de la Invención La presente invención se refiere a compuestos que son de utilidad como inhibidores de las metaloproteasas, por ejemplo, las zinc proteasas, en particular las zinc hidrolasas, y las cuales son efectivas en la profilaxis y tratamiento de estados de enfermedad que están asociados con la vasoconstricción de incidentes crecientes. Ejemplos de tales trastornos son la presión arterial alta, trastornos coronarios, insuficiencia cardiaca, isquemia renal y miocárdica, insuficiencia renal, diálisis, isquemia cerebral, infarto cardiaco, migraña, hemorragia subaracnoidea, síndrome de Raynaud y alta presión pulmonar. Además, los compuestos son de utilidad como agentes citostáticos y cerebroprotectores para la inhibición de rechazo de injertos, para protección de órganos y para el tratamiento de enfermedades oftalmológicas. Antecedentes de la Invención Las endotelinas son péptidos que existen en tres iso-formas ET-1, ET-2, y ET-3, cada una de ellas codificada mediante un gen diferente. Fueron descubiertas originalmente en el medio condicionado de células endoteliales porcinas en 1988 por Yanagisawa (Yanagisawa M; Kurihara H; Kimura ?; Tomobe Y; Kobayashi M; Mitsui Y; Yazaki Y; Goto K; Masaki T: REF.: 144443 A novel potent vasoconstrictor peptide produced by vascular endothelial cells ("Un nuevo y potente péptido vasoconstrictor obtenido mediante células endoteliales vasculares") [ver comentarios] NATURE (1988 Mar 31), 332(6163), 411-5) . Los ETs activos son peptidos de 21 aminoácidos con dos puentes disulfuro intramoleculares. Se obtienen a partir de preproteínas de 203 a 212 aminoácidos que son procesados mediante furina como endopeptídasas para obtener la gran-endotelma biológicamente inactiva (big-ET) . Las granETs son específicamente procesadas obteniéndose las Ets maduras mediante una escisión hidrolítica entre los aminoácidos 21 y 22 que son Trpr - Val¿ (gran-ET-1, gran ET-2) y Trp2i - He22 en gran ET-3 respectivamente. Ya en 1988, se postuló que una metaloproteasa específica era la responsable de esta escisión específica. En 1994, se purificó la ECE-1 (enz?ma-1 que convierte la endotelma) y se clonó del adrenal bovino (Xu D, E oto N, Giaid A, Slaughter C, Ka S, de Witt D, Yanagisawa M: "ECE-1: a membrane-bound metallo-protease that catalyzes the proteolytic activation of big endothelm-1" ("ECE-1: una metaloproteasa unida a la membrana, la cual cataliza la activación proteolítica de la gran endotelma-1" ) -Cell (1994) 78: 473-485) . ECE-1 es una zmc-endopeptidasa tipo II unida a la membrana, con un pH neutro óptimo y un motivo unido al zinc HExxHx (>20) E. Pertenece a la subfamilia M13 y tiene un gran ectodomimo de 681 aminoácidos que contiene el sitio activo. Otros miembros de la familia M13 son el NEP24.11 (endo-peptidasa neutra) , PEX, un fosfato que regula la endopepti-dasa neutra, y una proteína del grupo sanguíneo Kell, que ha sido descrita recientemente como una enzima de procesado de la gran-ET-3. Miembros de la familia M13 de origen humano, se caracterizan por un alto peso molecular (>80 kDa) un número de puentes disulfuro conservados y un modelo de glicosilación complejo. La estructura del NEP ha s do recientemente solucionada (Oefner y col., J. Mol. Biol. 2000, 296, 341-349) . El dominio catalítico de la ECE y las protemasas M13 humanas afines, son significativamente más grandes (>650 aminoácidos) que los miembros de las metalo-proteasas de matriz (MMPs) . A diferencia de la familia de las MMPs, que pertenecen a lae metzmcinas y presentan un modelo típico HExxHxxGxxH, los miembros de la familia M13 son gluzincinas que contienen un modelo HExxHx (>20) E. Estas dos familias son claramente diferentes en el tamaño de los dominios catalíticos, la estructura y el modelo de coordinación del zinc de los ligandos. Los sitios activos de las dos familias muestran claras diferencias las cuales tienen un claro impacto sobre el tipo de inhibidores y la potencial selectividad. Descripción de la Invención Por lo tanto, un objetivo de la presente invención es el de proporcionar compuestos de utilidad para la inhibición selectiva de la ECE-1, especialmente compuestos de fórmula (I) en donde R: es hidrógeno, alquilcarbonilo o aplcarbomlo; RL es alquilo, alquilcicloalquilo, alquilcicloalquilalquilo, cicloalquilo, haloalquilo, carboxialquilo, ammo-alquilo, dialquila moalquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilalquilo, alqumilo, arilo, aplalquilo, arilalqu l (alcoxicarboml ) alquilo, aplcarbonilalquilo, arilox alquilo, arilalquenilo, apl (alcoxicarbonil) alquilo, heteroaplo, heteroarilalquilo, heterociclilo o heterociclilalquilo; R es hidrógeno, aplo, alquilo o aplalquilo, aplsulfonilo, heteroaplsulfonilo; R4 es hidrógeno, arilalquilo, alquilo, arilo, cicloal-quilo, cicloalquilalquilo, alquilsulfonilo, arileulfonilo, arilalquilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, carboxialquilo, carboxialquilsulfomlo o alcoxicarbonilalquilo; o los grupos -NRJR" ó R5- [N-N(R4) ] -R3 forman un anillo alifático saturado o no saturado, de 5 ó 6 miembros; R" es hidrógeno, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, hete-roarilsulfonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, hete-roariloxicarbonilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, hete-roaplcarbonilo, heteroaplalquilcarbonilo, heterociclilo, (mono o dialquilapuno) -alquilcarbonilo, (mono y dialquil) ammosulfonilo, aril-ammocarbomlo, alquilo, alquilcarbo-nilo, alcoxicarbonilo, aplo, a ilalquilo, arilalcoxicarbomlo, o heteroarilo; RL es hidrogeno, alquilo, aplo o carboxialquilo; X es -(S(0)2-, -?(0)Z-NH-, -C(0)-, -C(0)NR6ó C(0)-0- y esteres farmacéuticamente aceptables, y/o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. El término "alquilo" como se usa aquí, solo o en combinación, significa un grupo alquilo de cadena lineal o cadena ramificada que contiene un máximo de 7, de preferencia un máximo de 4, átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo (2-metilpropilo (iso-butilo) , 1-metiletilo (iso-propilo) , n-butilo, y 1, 1-dimetiletil (t-butilo) . El término "carboxilo" se refiere al grupo -C(0)OH. El término "carbamoilo" se refiere al grupo -C(0)NH2. El término "carbonilo" se refiere al grupo -C(O)-.
El término "halógeno" se refiere al grupo flúor, bromo, cloro y yodo, de preferencia flúor y/o cloro, con mayor preferencia, flúor. El término "sulfonilo" se refiere al grupo -S(0:)-. El término "alquenilo" se refiere a una cadena de hidrocarburo como se ha definido para alquilo, la cual tiene como mínimo un enlace doble olefínico (incluyendo por ejemplo, el vmilo, alilo y butenilo). El término "alqumilo" se refiere a una cadena de hidrocarburo como se ha definido para alquilo, la cual tiene como mínimo un enlace triple olefínico (incluyendo por ejemplo el propinilo, butm- (1 ) -lio, etc. El término "alcoxilo", solo o en combinación, significa un grupo éter alquilo en el cual el término "alquilo" tiene el significado dado anteriormente, tal como metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, isopropoxilo, n-butoxilo, ísobutoxilo, sec.butoxilo, tere.butoxilo, y similares. El término "alcoxicarbonilo" se refiere a un grupo de fórmula -C(0)Rc, en donde Rc es alcoxilo como se ha definido más arriba. El término "hidroxilo" se refiere al grupo -OH, el término "ciano" al grupo -CN. El término "hidroxialquilo" significa un grupo alquilo como se ha definido anteriormente, el cual está substituido con un grupo hidroxilo.
El término "tioalquilo" se refiere a un grupo alquilo como se ha definido más arriba, el cual está substituido con un grupo ~SH. El término "haloalquilo" se refiere a un grupo alquilo como se ha definido anteriormente, el cual está substituido con uno o tres átomos de halógeno, de preferencia flúor, por ejemplo, trifluorometilo, 2, 2, 2-trifluoroetilo, etc. "Carboxialquilo" significa un alquilo inferior como se ha definido más arriba, el cual está substituido con un grupo HOOC- . El termino "alquilcarbonilo, solo o en combinación, significa un grupo acilo derivado de un ácido alcanocarboxílico, es decir, alquil-C (0) -, tal como acetilo, propiomlo, butirilo, valerilo, 4-met?lvalerilo, etc. El término "cicloalquilo", solo o en combinación, significa un grupo hidrocarburo cíclico saturado, con 3-8, de preferencia 3-6 átomos de carbono, es decir, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo y similares. El término "a ino" se refiere al grupo -NH2. El término "arilo" para R2, solo o en combinación, se refiere a un radical carbocíclico aromático, es decir, un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 ó 10 miembros, por ejemplo, fenilo, naftilo o tetrahidronaft lo, de preferencia fenilo o naftilo, y con mayor preferencia, fenilo. El grupo arilo está opcionalmente substituido con uno o más grupos, de preferencia 1-5, con mayor preferencia 1-3, independientemente seleccionados de halógeno, de preferencia flúor, alcoxicarbonilo, por ejemplo, metilcarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, tpfluormetilo, trifluormetoxilo, con mayor preferencia flúor, alcoxicarbonilo, alquilo, tpfluorometilo y tpfluorometoxilo y con mayor preferencia, flúor. Los grupos aromáticos más preferidos son el naftilo o fenilo substituido con uno o más átomos de flúor, por ejemplo, naftilo, 2, 3, 4, 5, 6-pentafluorofen?l o bifenilo. El término "arilo" para R3 y R6, solo o en combinación, se refiere a un radical carbocíclico aromático, es decir, un anillo aromático o parcialmente aromático, de 6 a 10 miembros, por ejemplo, fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo, de -preferencia fenilo o naftilo, y con mayor preferencia, fenilo. El grupo arilo eetá opcionalmente substituido con uno o más grupos, de preferencia 1-5, con mayor preferencia 1-3, independientemente seleccionado de halógeno, de preferencia flúor, alcoxicarbonilo, por ejemplo metilcarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, tpfluormetilo, tpfluormetoxilo, hidroxilo, alquilamido, por ejemplo, acetam do, nitro, alquilsulfonilo, por ejemplo, metilsulfonilo con mayor preferencia alquilo o alcoxilo. El término "arilo" para R4, solo o en combinación, se refiere a un radical carbocíclico aromático, es decir, un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 ó 10 miembros, por ejemplo, fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo, de preferencia fenilo o naftilo, y con mayor preferencia, fenilo. El grupo arilo está opcionalmente substituido con uno o máe grupos, de preferencia 1 a 3, independientemente seleccionados de halógeno, de preferencia flúor, alcoxicarbonilo, por ejemplo, metilcarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo, trifluormetoxilo, ciclohexilo, hidroxilo, alquilamido, por ejemplo, acetamido, nitro, alquilsulfonilo, por ejemplo, metilsulfonilo, con más preferencia flúor, cloro, bromo, alcoxilo, carboxilo, alcoxicarbonilo, y con mayor preferencia, flúor. Ejemplos para grupos aromáticos son fenilo, 2, 4, 5-tr?fluorofenilo, y 2, 4-d?fluorofenilo . El término "arilo" para R5, solo o en combinación, se refiere a un radical carbocíclico aromático, es decir, un anillo aromático o parcialmente aromático de 6 a 10 miembros, por ejemplo, fenilo, naftilo o tetrahidronaftilo, de preferencia fenilo o naftilo, y con mayor preferencia, fenilo. El grupo aplo está opcionalmente substituido con uno o más grupos, de preferencia 1-5, con mayor preferencia 1-3, independientemente seleccionado de halógeno, de preferencia flúor, alcoxicarbonilo, por ejemplo, metilcarbonilo, carboxilo, ciano, alquilo, alcoxilo, fenilo, fenoxilo, trifluormetilo, trifluormetoxilo, de preferencia alquilo o alcoxilo por ejemplo, metilo o metoxilo. Ejemplos de estos grupos aplo son 4-met?l-fen?lo y 4-metox?-fen?lo . El término "ariloxilo" se refiere a un grupo arilo como se ha definido más arriba, unido a una estructura madre mediante un radical oxilo, es decir, ar?l-0-. El término "heteroaplo" para solo o en combinación, se refiere a un radical aromático monovalente mono o bicíclico que tiene de 5 a 10, de preferencia de 5 a 6 átomoe en el anillo, que contiene uno a tree heteroátomos, de preferencia un heteroátomo, por ejemplo, independientemente eeleccionado entre nitrógeno, oxigeno o azufre. E emploe de grupoe heteroarilo eon tiofen lo, íeoxazol lo, tiazolilo, piridmilo, pirrolilo, ímidazolilo, tetrazolilo, de preferencia, piridmilo, íeoxazolilo y tiazolilo. Opcionalmente, el grupo heteroaplo puede ser mono, di o tpsubstituido, independientemente con fenilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbomlo, hidroxilo, ammo, alquilammo, dialquilammo, carboxilo, alcoxicarbonilalquilo, de preferencia alquilo. El término "heteroarilo" para R3 o R5, solo o en combinación, se refiere a un radical aromático monovalente mono o bicíclico que tiene de 5 a 10, de preferencia de 5 a 6 átomos anulares, que contienen de uno a tres heteroátomos, de preferencia un heteroátomo, por ejemplo, independientemente seleccionado entre nitrógeno, oxígeno o azufre. Ejemplos de grupos heteroarilo son pipdimlo, tiofenilo, isoxizolilo, isoquinolilo, qumolilo, indolilo, pirimidma, piridazina, y pirazma, de preferencia tiofenilo, furanilo, pirrolidmilo, mdolilo e soxazolilo. Opcionalmente, el grupo heteroaplo puede ser mono, di o trisubstituido, independientemente con fenilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, hidroxilo, amino, alquilammo, dialqu lammo, carboxilo, oxilo, alcoxicarbonilalquilo, de preferencia alquilo. El término "heterociclilo", solo o en combinación, se refiere a un radical no aromático monovalente mono o bicíclico que tiene de 5 a 10, de preferencia de 5 a 6 átomos anulares, que contienen uno a tres heteroátomos, de preferencia un heteroátomo, por ejemplo, independientemente seleccionados entre nitrógeno, oxigeno o azufre. Opcionalmente el anillo heterocíclico puede estar substituido con un grupo independientemente seleccionado entre halógeno, alquilo, alcoxilo, oxocarboxilo, alcoxicarbonilo, etc. y/o sobre un átomo de nitrógeno secundario (es decir, -NH-) con alquilo, aplalcoxicarbonilo, alquilcarbonilo o un átomo de nitrógeno terciario (es decir =N-) con óxido. Ejemplos de grupos heterocíclicos son morfolmilo, pirrolidinilo, pipepdilo, etc. Los términos "forma dimérica" significa un compuesto en donde dos grupos R1 de dos compuestos idénticos de fórmula I han sido reemplazados por un enlace simple común, ó en donde R" es glutation-S- ó cisteína-?- ó éster y/o alquilcarbonilo o aplcarbonilo derivados de los mismos, por ejemplo, acetilcisteína-S- ó benzoilcisteína-S-, de preferencia glutation-S-, cisteína-?-, acetilcisteína-S- ó benzoilcisteína-S- . El término "eal farmacéuticamente aceptable", se refiere a aquellas sales que conservan la efectividad y propiedades biológicas de las basee libres o ácidos libres, los cuales no son ni biológicamente ni de otra forma, indeseables. Las sales se forman con ácidos inorgánicos tales como el ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares, y ácidos orgánicos tales como el ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandél co, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido salicílico, y similares. Además, estas sales, pueden prepararse a partir de la adición de una base inorgánica o una base orgánica al ácido libre. Las salee derivadae de una baee inorgánica incluyen, aunque no están limitadas a, las sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio y similares. Las sales derivadas de las bases orgánicas incluyen, aunque no están limitadas a, las sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas substituidas incluyendo las aminas substituidas que se encuentran en la naturaleza, aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio iónico, tales como la ísopropilamina, tnmetilamma, dietilamma, trietilamma, tppropilamma, etanolamma, lisma, arginina, N-etilpipepdma, p peridma, resinas de poli ina y similares. "Esteres farmacéuticamente aceptables" significa que los compuestos de fórmula general (I) pueden ser derivatizados en loe grupos funcionales para proporcionar derivados que son capaces de la retroconversión a los compuestos originales in vivo. Ejemplos de estos compuestos incluyen los derivados de esteres fisiológicamente aceptables y metabólicamente lábiles, talee como los ésteree de metoximetilo, esteres de metiltiometilo, y esteres de pivaloiloximetilo . Además, cualquier equivalente fisiológicamente aceptable de los compuestos de fórmula general (I), similar a los esteres metabólicamente lábiles, los cualee eon capaces de producir los compuestos originales de fórmula general (I) in vivo, están dentro del ámbito de esta invención. Los compuestos de fórmula (I) son de utilidad en la inhibición de la actividad metaloproteasa en mamíferos, particularmente la actividad zinc hidrolasa. Máe específicamente, los compuestos de fórmula (I) son de utilidad como medicamentos para el tratamiento y profilaxis de trastornos que está asociados con enfermedades causadas por la actividad de la enzima convertidora de la endotelína (ECE) . La inhibición de esta enzima sería de utilidad para el tratamiento de la isquemia miocárdica, fallo congestivo del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, ateroesclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma. Además, los compuestos son de utilidad como citostátícos y agentes cerebroprotectores, para la inhibición de los rechazos de injertos, para la protección de órganos y para el tratamiento de enfermedades oftalmológicas -' Más detalladamente, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula (I) en donde R1 ee hidrógeno, alquilcarbonilo o arilcarbonilo; R¿ es alquilo, alquilcicloalquilo, alquilcicloalquil-alquilo, cicloalquilo, haloalquilo, carboxialquilo, amino- alquilo, dialquilammoalquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbo-nilalquilo, alqumilo, arilo, aplalquilo, aplalquil (alcoxicarbonil) alquilo, arilcarbonilalquilo, aploxialquilo, arilalquenilo, apl (alcoxicarbonil) alquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo o heterocíclll lquilo; R3 es hidrógeno, arilo, alquilo o arilalquilo, aril-sulfonilo, heteroaplsulfonilo; R4 es hidrógeno, arilalquilo, alquilo, arilo, cicloal-quilo, cicloalquilalquilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, aplalquilsufonilo, heteroarilsulfonilo, carboxialquilo, carboxialquilsulfonilo o alcoxicarbonilalquilo; o los grupos -NRJR'" o R- [N-N(R^) ] ~R3 forman un anillo alifático saturado o sin eaturar, de 5 ó 6 miembros; ' R~ es hidrógeno, alquilsulfo ilo, arilsulfonilo, hetero-aplsulfonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroaril-oxicarbonilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcar-bonilo, heteroaplalquilaralquilo, heterociclilo, (mono o di-alquilamino) -alquilcarbonilo, (mono y dialquil) aminosulfoni-lo, aplammocarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilo, arilalquilo, arilalcoxicarbomlo, o heteroar lo; R6 es hidrógeno, alquilo, aplo o carboxialquilo; X es -S(0)2-, -?(0)2-NH-, -C(0)-, -C(0)NRu ó C(0)-0- y formae diméricas, y/o esteres farmacéuticamente aceptables, y/o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, de preferencia éeteree farmacéuticamente aceptablee y/o eales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y con mayor preferencia sales farmacéuticamente aceptables de loe miemoe. En una modalidad preferida, la invención se refiere a compuestos en donde R~ es hidrógeno. En otra modalidad preferida de la presente invención, R2 ee alquilo, haloalquilo, alquilammo, alcoxilo, cicloalquillo, cicloalquilarnmo, arilo, arilalquilo, aploxilo, arilalquilammo, arilalcoxilo, heteroarilo, a mo, o (mono y dialquil) ammo; de preferencia alquilo, haloalquilo, alquilammo, alcoxilo, cicloalquilo, cicloalquilammo, aplo, arilalqu lo o heteroarilo e incluso con mayor preferencia, es arilo o heteroaplo y con mayor preferencia, aplo. El término arilo en la definición para R2 eignifica eepecialmente naftilo o fenilo, en donde fenilo está opcionalmente substituido con uno o más flúor o mediante un grupo fenilo, por ejemplo, R? es naftilo, 2,3,4,5,6-pentafluorofenilo o bifen lo. De conformidad con la presente invención, R3 es de preferencia hidrógeno o alquilo, con mayor preferencia hidrógeno . En los compuestos de más arriba, R4 es de preferencia hidrógeno, arilalquilo, alquilo, arilsulfonilo, heteroa-rileulfonilo, cicloalquilalquilo o carboxialquilo, con mayor preferencia hidrógeno, alquilo, aplalquilo, cicloalquilo, aplsulfonilo o carboxialquilo, con mayor preferencia hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, carboxialquilo o aril alquilo, incluso con mayor preferencia hidrógeno, alquilo o arilalquilo, por ejemplo, hidrógeno, 2, 4, 5-tr?fluorobencilo, 2, 4-d?fluorobencilo, bencilo, metilo, etilo, ísopropilo, isobutilo, bencilo o H02C-CH2-, o cicloalquilpropilmetilo . En una modalidad preferida de la presente invención R5 es hidrógeno, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalquilo, arilcarbonilo (mono y dialquilami-no) alquilcarbonilo, (mono y dialquil ) ammosulfonilo, aril-alcoxicarbonilo, aplaminocarbonilo, aplsulfomlo, hete-roarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilsul-fonilo, arilammocarbonilo, heteroarilo o heterociclilo, con mayor preferencia, aplo, aplalquilo, aplcarbonilo, aplalcoxilo, arilaminocarbonilo, ariisulfonilo, hetero-arilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroaplsulfo-nilo, arilammocarbonilo, heteroarilo o heterociclilo, con mayor preferencia arilsulfonilo, aplalquilo, heteroarilal-quilcarbonilo, heteroarilsulfonilo y con mayor preferencia 4-met l-bencenosulfonilo, bencilo, 4-metox?bencenosulfonilo, (lH-mdol-3-?l) acet lo, tiofen-2-ilo, ó 3, 5-d?met?l-?soxyzol-4-eulfon?lo . En los compuestos descritos más arriba, X ee de prefe-rencia -S02-, -C(0)-, y con mayor preferencia -S02-.
En la modalidad más preferida de la presente invención, los compuestos pueden ser descritos mediante la fórmula (II) en donde R1, R2, R3, R4, R5 y X son como se ha definido más arriba, y los esteres y las sales farmacéuticamente aceptablee de loe mismos. En otra modalidad preferida de la presente invención R1 es hidrógeno, R es naftilo o fenilo, en donde fenilo está opcionalmente substituido con uno o más flúor o mediante un grupo fenilo, R3 es hidrógeno o alquilo, R4 es hidrógeno, alquilo o arilalquilo, Rs es aplsulfonilo, aplalquilo, hetéroarilalqu lcarbo ilo, heteroaplsu fonilo; y X es -?02-.
Las modalidades preferidas de la presente invención son los compuestos ejemplificados en los ejemplos. Eepecialmente la preeente invención comprende compueetoe de conformidad con la fórmula (I) ó (II) seleccionados entre el grupo formado por: a) N' -ísobutil-N' - (4-metil-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S, R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-eulfonil ) -pirrolidm-2-carboxí1ico; b) N' - (4-met?l~bencenoeulfon?l) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-eulfonil ) -p?rrol?din-2- carboxílico; c) N' -bencil-hidrazida del ácido (2S, R) -4-mercapto-l- (n ftalen-2-sulfonil) -p rro1ídm-2-carboxí1ico; d) N' -bencil-N' - ( -met?l-fenileulfonil ) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-eulfonil) ?rrol?dm-2-carboxílico; e) N' -metil-N' - (4-metil-bencenoeulfon?l) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l- (naf talen-2-sulf onil ) -pirrolidin-2-carboxíl?co; f) N'-bencenosulfoml-hidrazida del ácido (2?,4R)-4-mercapto-1- (naf talen-2-sulfon?l) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co; g) N' - (4-metox?-bencenoeulfon?l ) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naf talen-2-sulfonil ) -p?rrol?dm-2-carboxílico; h) N'- [ (lH-mdol-3-?l)-acet?l]-h?draz?da del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naf talen-2-sulf onil) -p?rrol?din-2-carboxílico; i) N'-tiofen-2-sulfon?l-h?drazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1- (naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co; j) N' - (3, 5-dimetil-isoxazol-4-sulfonil) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l- (naf talen-2-sulf onil) -pirrolidin-2 -carboxí 1 ico; k) N' -c?cloprop?lmetil-N' - ( -met?l-bencenosulf oml) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l- (naf talen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co; 1) N' - (4-met?l-bencenosulfonil) -N' -(2,4, 5-tnfluoro-bencil) -hidrazida del ácido (2S-4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidm-2-carboxílico; m) N' - (2, 5-d?fluoro-bencil) -N' - (4-met?l-bencenosulfo-nil) -hidrazida del ácido (25, R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-eul fonil) -pirro1idin-2-carboxílico; n) N' -isopropil-N'- (4-met?l-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-eulfoml) -pirrolidm-2-carboxílico; o) ácido (2S,4R)-[N'-[4-merca?to-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?d?n-2-carbonil] -N- ( 4-met?l-bencenosulfonil) -hidrazmo] -acético; p) N' -metil-N' - (4-met?l-bencenosulfon?l) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -1- (b?fen?l-4-sulfon?l) -4-mercapto-p?rrolidm-2-carboxílico; q) N' - (4-metil-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (2, 3, 4, 5, 6-pentafluoro-bencenosulfonil) -pirroli in-2-carboxílico; r) N' -bencil-N' - (4-metox?-bencenosulfonil ) -hidrazida del ácido (25, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-eulfon?l) -pirrolidin-2-carboxí1ico; s) N' -met?l-Nr - ( -met?l-bencenoeulfonil ) -hidrazida del ácido 2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil ) -pirrolidin-2-carboxíl?co; y t) N-metil-N' -bencil-N' - (4-met?l-bencenosulfonil) - hidrazida del ácido (25, R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxí1ico . Estos compuestos presentan unos valores IC50 en el radiommunoensayo (E sobre inhibición ECE, ver más adelante) de aproximadamente 50 nM a 1 µM. La invención se refiere también a composiciones que contienen un compuesto como se ha definido más arriba y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Otra modalidad de la presente invención se refiere al uso de compuestos como se ha definido más arriba como ingredientes activos en la elaboración de medicamentos que contienen un compuesto como se ha definido más arriba para la profilaxis y tratamiento de trastornos que son causadoe por la actividad de la enzima convertidora de la endotelina (ECE) , especialmente la isquemia miocárdica, falla congestiva del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, ateroesclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma, enfermedades asociadas con indicaciones citostáticas, oftalmológicas y cerebroprotectoras, y protección de órganos. Además, la invención se refiere al uso de compueetoe como se han descrito más arriba para el tratamiento o profilaxis de enfermedades que están asociadas con la isquemia miocárdica, falla congestiva del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, aema, vaeoeepaemo cerebral, hemorragia eubaracnoidea, pre-eclampeia, enfermedades renales, ateroesclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma, enfermedades asociadas con indicaciones citostáticas, oftalmológicas y cerebroprotectorae, y protección de órganos. Ademáe, la invención comprende compuestos como se han descrito más arriba para el uso como substancias activas terapéuticas, en particular en el contexto con enfermedades que están asociadas con la actividad de la hidrolasa de zinc tal como la isquemia miocárdica, falla congestiva del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampeia, enfermedades renales, ateroesclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, ehock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma, enfermedades asociadas con indicaciones citostáticas, oftalmológicas y cerebroprotectoras, y protección de órganos. La invención comprende también un método para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la isquemia mío-cárdica, falla congestiva del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-ecla psia, enfermedades renales, ateroesclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma, enfermedades asociadas con indicaciones citoetáticas, oftalmológicas y cerebroprotectoras, y protección de órganos, el cual método comprende la administración de un compuesto como se ha definido más arriba a un ser humano o animal. La invención se refiere también al uso de compuestos como se ha definido más arriba para la inhibición de la actividad de la zinc hidrolasa. La invención se refiere también a un procedimiento para la preparación de un compuesto como se ha definido más arriba, que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (III) en donde R:, R y X son como se ha definido máe arriba y A ee un grupo protector de HS-, con; a) HNRNR4R= para la introducción de una hidrazida: ó b) HNR3NR4R5 con R5 como grupo protector, eeguido por la conversión o introducción de R3 y R4; eeguido opcionalmente por la conversión del R5 y/o del grupo R2-X en un R° diferente y/o un grupo R2-X y/o la desprotección y/o la liberación del tiol y en donde R3, R4 y R~ son como se ha definido más arriba. La invención se refiere también a loe compuestos de más arriba siempre que estén elaborados mediante uno de los procedimientos descritos. Loe compuestos de fórmula (I) pueden prepararse por métodos ya conocidos en la especialidad o como se describen más adelante. A no ser que se indique otra cosa, los subetituyentes R , R", R3, R4, R3, R6, y X son como se ha descrito más arriba.
Esquema de Reacción 1 PG = grupo de protección corno por ejemplo, el tritilo o PMB El etapa a) del esquema de reacción 1 describe la persilación de los grupos hidroxilo y amino, por ejemplo, por reacción del compuesto 1 con el hexametildisilazano/140°C seguido por la reacción con R2S02C1 en THF o la conversión a todos los otros R2X descritos posteriormente di-t- but?ld?carbonato/NaHC03 en d?oxano/H20 (protección con BOC) . Para la inversión de la configuración (vía mesilato) el alcohol 2 resultante se trata con MeS03H/Ph3P/DIAD en tolueno (temperatura ambiente a 80°C) ó (vía bromuro) con LiBr/DIAD/Ph,? en THF (4°C a (temperatura ambiente) ó (vía cloruro) con Ph3P/CClí en CH2C12 (3°C a temperatura ambiente) . En caso de retención de la configuración (vía mesilato) el alcohol 2 puede ser transformado a un compuesto de fórmula 3 por reacción con Me502Cl/p?r?d?na/DMAP (0°C a temperatura ambiente) . Para la introducción de un grupo t ol protegido, los compuestos de fórmula 3 se tratan con por ejemplo, tpfen lmetanotiol ó 4-metox?benc?lmercaptano y K-Ot-Bu en DMF (para Br : 0°C a temperatura ambiente; para Cl : 0°C; para el esilato: temperatura ambiente a 100°C) . La hidrólisis del éster 4 con LiOH en THF (0°C a temperatura ambiente) da el ácido 5. La síntesie de los compueetos finales se muestra en el esquema de reacción 2: La síntesis empieza con una preactivación af del ácido la (N-h?drox?-2-p?r?dona, N, N-diciclohexilcarbodiimida, 4-etilmorfolma en CH2C12 a temperatura ambiente) seguido por la reacción con una alquil-hidraz da (NHR3NHR4) (etapa a) o para la hidrazida del ácido carboxílico 2 (R3, R4, Rb = H) , éster lb es tratado directamente con hidrazma (NH2NH2.H20) en EtOH (a temperatura ambiente) . La conversión en el tiol libre 3 se hace de la siguiente manera: en el caso de que el PG (grupo de protección) sea el Tr, mediante reacción con por ejemplo, TFA/Et3?iH, de 0°C a temperatura ambiente, y en el caso de que el PG sea el PMB, mediante reacción con por ejemplo, TFA/Et3?iH, de 0 a 80°C (etapa b) . En el caso de la hidrazida del ácido carboxílico 2 (R3, R"", RD = H) , R4 se introduce mediante una aminación reductora: la formación de imína con un aldehido en EtOH seguida de la reducción con NaBH3CH en THF da el compuesto 4 (etapa c) . Para la introducción de un nuevo R5 en el caso de que R4 sea un alquilo (Rtj = H) , la reacción con C1COR5, C1C0?R5 ó C1S02 R5 ó iPr?NEt ó base Huenig CH2C12 en presencia de una cantidad catalítica de DMAP ó poli-DMAP ó R5NC0 en THF a temperatura ambiente da el compuesto 4 el cual se deeprotege para dar el tiol final 5, como se describe más arriba (etapa c y b) . La desprotección selectiva del BOC del compuesto 2 ó 4 (TFA, CHC12 a 0°C), seguida por la reacción con C1C02R2, NEM ó iPr2NEt, CH2C12 ó R2NCO en THF a 0°C a temperatura ambiente (o conversión a todos los otros R2X descritos para R5-introducción más arriba) da el compuesto 7 (etapa e) . La desproteccíón del tiol como se describe máe arriba da el tiol final 8 (etapa b) .
El esquema de reacción 3 muestra un camino distinto para la síntesis de las hidrazidae. La preactivación del ácido 1 (N-h?droxi-2-pir?dona, N,N-diciclohexilcarbodiimida, 4-etilmorfolina en CH2C12 a temperatura ambiente) , eeguida por la reacción con un éster bencílico del ácido alquil-hidrazincarboxílico (NHR3NHR4) (etapa a) , da la hidrazida 2 la cual se convierte con HBr en AcOH a 0°C para dar el 3 (etapa b) . También es posible la conversión directa de 1 a 3 con preactivación y reacción con NHR3NHR"R (etapa c) . La introducción de un nuevo R3 se hace con un R3-haluro/NaH en DMF (de 0°C a temperatura ambiente; -> 4, etapa e) . La desprotección para dar el tiol 5 se hace de -la siguiente manera: en caeo de que PG eea Tr, por reacción con por ejemplo, TFA/Et3SiH de 0°C a temperatura ambiente, o en caso de que PG sea PMB, por reacción con por ejemplo, TFA/Et3SiH, de O a 80°C (etapa d) .
Esquema de Reacción 3' PG El esquema de reacción 4 muestra otra vía para la síntesis de las hidrazidas. Preact ivación del ácido 1 (N-hidroxi - 2 -piridona , N,N diciciohexilcarbodiimida, 4 - et ilmor f ol ina en CH2C12 a temperatura ambiente) , seguida por la reacción con un 2 -alquil -hidraz incarboxilat o de terc-butilo (NHR3NHBOC) (etapa a) da la hidrazida 2 la cual por tratamiento con t riet il silano en TFA de 0 a 80°C da el tiol 3 (etapa b) . La alquilación con haluro de alquilo (R5-haluro) y DMF con NaH como base (de 0°C a temperatura ambiente) da como resultado el compuesto 4 el cual da después de la desprotección Et3SiH/TFA (como se ha descrito en el esquema de reacción 1) , el tiol 5 (etapa c , d) . ' La desprotección selectiva del BOC (TFA en CH2C12 -> 6) seguida de la reacción con ClC02R4, C1S02R4, iPr2NEt ó NEM en CH2C12, en presencia de una cantidad catalítica de DMAP ó poli-DMAP a temperatura ambiente, da los compuestos 7 (R4 = R5) y 8, los cuales se separan y desprotegen (Et3SiH/TFA como se describe en el esquema de reacción 1) para dar tiol 5 (etapa e, f y d) . La hidrazida 8 no completamente substituida puede ser después alquilada (R5-haluro y DMF/NaH, 0°C a temperatura ambiente) y desprotegida (Et3SiH/TFA como se ha descrito en el esquema de reacción 1) para dar el tiol (etapa g y d) .
Esquema de reacción 4 El esquema de reacción 5 muestra la posterior transformación de la hidrazida 1. La acílación con el cloruro de ?-bromo-alcanoilo en presencia de iPr2EtN en THF (0°C a temperatura ambiente) da el compuesto 2 el cual se cicla (NaH en DMF a temperatura ambiente) . La separación de los dos isómeros y la desproteccion del tiol (Et^siH/TFA como se describe en el esquema de reacción 1), da las hidrazidas 3 y 4. Eequema de reacción 5: Para la preparación de loe compueetos de fórmula 5, puede seguirse la ruta de reacción del esquema de reacción 6: la síntesis del material de partida 1 a partir de la hidroxiprolma se describe en el esquema de reacción 1. La desprotección con TFA/tri-isopropilo, a reflujo durante 30 minutos da el tiol 2 que está unido a la resma. El R2X final se introduce bien al principio o bien después de lae manipulaciones con NRNR4R: (esquema de reacción 9) . En el segundo caeo, el R2X (=BOC) del ácido de partida 1, se transforma por métodos ya conocidos en la técnica, y descritos por ejemplo en "The practice of Peptide Syntheeis" ("Práctica de la síntesis de péptidos"), M. Bodaszky y A. Bodanzky, Editorial Springer, Berlín, 1984, en un grupo protector no ácido lábil (por ejemplo, RX = FMOC, etapa a: en primer lugar, deeprotección selectiva del BOC con 40% de TFA en CH2C12 a temperatura ambiente, eeguido por la reacción con Fmoc-Osu en dioxano/agua y NaHC03 como base) .
Esquema de Reacción 6 R' -X La resina ee prepara como eigue (etapa b) : El engarce ácido 4- (a,a-difenilhidroximetil) benzoico, se activa empleando TPTU, DIEA en DMF y se añade a la resina de benzi-drilamina 3. La resina se trata a continuación con tiol 2 en CH2C12/TFA para el material de partida 5 cargado de resina.
Esquema de Reacción 7 Re sina Re La síntesis de los compuestos finales sobre la res a 1 ee muestra en el esquema de reacción 7: la síntesis comienza con una preactivac ón del ácido 1 (TPTU, base Huenig en DMF a temperatura ambiente) seguido por la reacción con una alquil-hidrazma (NHNHR'") (etapa a) para dar loe productos intermediarios 2a, 2b ó 4 (R3, R4, R = H, etapa c) . La separación de la resina del tiol libre 3 se hace con TFA/iPr3S?H en CH_>C12 a temperatura ambiente (etapa b) . En el caso de la hidracida del ácido carboxílico 4, la introducción de un nuevo R5 se hace por reacción con C1COR", C1C02R5, C1?0 R= Ó ClS02NR , en DMF para dar el compuesto 2 el cual está opcionalment e alquilado (alquil haluro/DBU en DMF) para dar la hidrazida disubs t ítuida 6 (etapa d y f) . La separación de la resma como se ha deecrito máe arriba da el tiol final 3. En el caso de la reacción de la hidrazida 4 con C1S02R3, tiene lugar la doble eulfonación para dar el compueeto 2a y 2b (etapa d) , estos compuestos pueden separarse después de la separación de la resma como el correspondiente tiol 3. S R2X es FMOC: deeprotección del compuesto 2 (20% de piperidma/DMF, a continuación reacción con C1C02R2, piridina, DMF o R'NCO en DMF a temperatura ambiente o conversión a todos los otros R2X, descritos para la introducción del R4 más arriba) da el compuesto 5 (etapa e) . La alquilación (alquil haluro/DBU en DMF) y desprotección de la resina como se ha descrito más arriba, da el tiol final 3 (etapa f y b) . La capacidad de los compuestos de fórmula (I) para inhibir la actividad metaloproteasa, particularmente la actividad zinc hidrolasa, puede demostrarse mediante diferentes ensayos vitro e in vivo ya conocidos por los expertos en la especialidad. A) Cultivo de células Se cultivó una línea celular estable endotelial de la vena umbilical humana (ECV304) en "fábricas de células" hasta la confluencia, como se ha deecpto en (Schweitzer y col. 1997, Biochem. J. 328: 871-878). Las células confluyentes se separaron con una solución de tppema/EDTA y ee recogieran mediante centrifugación a ba a velocidad. La pildora celular se lavó una vez con solución salina tamponada con fosfato de pH 7,0 y se guardó a -80°C hasta el momento de ser empleada.
B) Solubilización de la ECE a partir de células ECV30 . Todoe los procedimientos se efectuaron a 0-4°C si no se especificó otra cosa. La pildora de células con lxlO9 células, se euependió en 50 ml de tampón A (Tris 20 mM/HCl, pH 7,5 conteniendo 5 mM de MgCl2, 100 µM de PMSF, 20 µM de E64, 20µM de leupeptina) y se trató con ultrasonidos. El ho ogeneizado celular resultante, se centrifugó a 100.000 gav durante 60 minutos. El sobrenadante se retiró y la pildora de membrana resultante se homogeneizó en 50 ml de tampón A y se centrifugó como se ha descrito. El lavado de la fracción de membrana en tampón A se repitió dos veces. La preparación de membrana final se homogeneizó en 50 ml de tampón B (tampón A +0.5^ de Tween 20 (v/v) 0.5% de CHAPS (p/v), 0.5% de digitomna (p/v) y se agitó a 4°C duranne 2 horae. A continuación los fragmentos de membrana restantes, fueron sedimentados como se ha descrito. El sobrenadante es transparente resultante que contenía la ECE solubilizada se almacenó en alícuotas de 1.0 ml a -120°C hasta su empleo. C) Ensayo con ECE El ensayó midió la producción de ET-1 a partir de la gran ET-1. Para medir los altos números de muestras se ideó un ensayo realizado en placas de 96 pocilios. Se efectuó la reacción de la enzima y la detección radiommunológica de la ET-1 producida en el mismo pocilio, usando una técnica de recubrimiento específicamente desarrollada y optimizada. D) Placas de recubrimiento Placas Fluoronunc Maxisorp White (código 437796) de 96 pocilios, se irradiaron con 1 julio durante 30 minutos en un UV Stratalinker 2400 (Stratagene) . Las placas de 96 pocilios se llenaron a continuación con 300 µl de solución de proteína A (2 µg/ml en Na2C03 0,1 M pH 9,5) por pocilio y se incubaron durante 48 horas a 4°C. Las placae recubiertae pueden guardaree haeta 3 semanas, antes de eer utilizadas.
Antes de ser utilizadas, se vació la solución de proteína A y las placas se bloquearon durante 2 horae a 4°C con 0.5% de BSA en Na2COj 0,1 M pH 9,5. Las placas se lavaron con agua bidestilada con lo cual quedaron listas para realizar el ensayo ECE. E) Ensayo de selección Los compuestos del ensayo se disuelven y diluyen en DMSO. Se colocaron 10 µl de DMSO en los pocilios, seguido de 125 µl de tampón de ensayo (50 mM de Tps/HCl, pH 7,0, 1 µM de Thiorphan, 0.1% de NaN3, 0.1% de BSA) que contenía 200 ng de la gran ET-1. La reacción de la enzima comenzó por la adición de 50 µl de ECE solubilizada (diluida en tampón de ensayo 1:30 a 1:60 veces (v/v)). La reacción de la enzima se efectuó durante 30 minutos a 37 °C. La reacción enzimática se interrumpió mediante la adición de 10 µl de ETDA 150 mM, pH 7,0. Radioinmunoensayo : El ET-1 RÍA se efectuó principalmente como se ha descrito anteriormente (Loffler, B.-M. y Maire, J.-P. 1994, Endothelium I: 273-286). A las placas que contentan la mezcla de reacción enzimática parada con EDTA, se añadieron µl de tampón de ensayo que contenía 20000 cpm (3- ( 12 ''I ) Tyr) -endotelma-1 y 25 µl de antisuero AS-3 específico de la ET (dilución en el tampón de ensayo 1:1000) . Las placas se incubaron con agitación, a 4°C durante la noche. A continuación, la faee liquida se aepiró con un lavador de placas y lae placas se lavaron una vez con agua bideetilada. A las placas lavadas se añadieron 200 µl de un preparado para centelleo (Microscmt 40 LSC-Cockta l, de Packard, código 6013641), y lae placas se contaron durante 2 minutos por pocilio en un Topcount. Se prepararon las curvas estándar en placas con ET-1 sintético, con concentraciones finales de O a 3000 pg de ET-1 por pocilio. En todos los controles de placas para una actividad máxima de ECE (en presencia de 10 µl de DEMO) y para la producción de fondo de ET-1, se realizo la mmuno-reactividad (en presencia de 10 mM de EDTA o 100 µM de fosfora idon) . Los ensayos fueron efectuados por triplicado. F) Ensayo cinético El formato del ensayo descrito podría ser empleado para determinar las características cinéticas de la preparación empleada de ECE aeí como también de diferentee inhibidores de la ECE (es decir Km, Ki) , mediante la variación de la concentración del eubetrato usado en el ensayo. G) Ensayo de la ECE basado en las células La ECE-lc humana fue estable expresada en células MDCK como ee describe (Schweizer y col., 1997, Biochem. J. 328: 871-878) . Las células fueron cultivadas en placas de 24 pocilios hasta la confluencia, en el medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) euplementado con 10% (v/v) de suero fetal bovino (FBS), 0.8 mg/ml de geneticina, 100 u.i./ml de penicilina y 100 µg/ml de estreptomicina en una atmósfera de aire/C02 (19:1) humidificado . Antes del ensayo de la ECE, el medio se substituyó por 0.5 ml de DMEM-HBS? 1:1, 10 mM de HEPES pH 7,0 suplementado con 0.1% (p/v) de BSA. Loe inhibidores se añadieron en DMSO a una concentración final de 1-6. La reacción de la enzima se puso en marcha mediante la adición de 0.42 µM de gran ET-1 humana y se realizó durante 1.5 horas a 37°C en una incubadora. Al final de la incubación, el medio de incubación se retiró rápidamente y se analizaron alícuotas mediante radioinmunoensayo para la ET-1 producida, como se ha descrito más arriba. El ensayo de selección de la ECE se validó mediante la medición de las constantes características del inhibidor del fosforamidón (IC5e 0.8 + 0.2 µM) y CG? 314447 (IC50 20 + 4 nM) [De Lombaert, Stephane; ?tamford, Liea B.; Blanchard, Louis; Tan, Jenny; Hoyer, Dentón; Diefenbacher, Clive G.; Wei, Dongchu; Wallace, Eli M.; Moskal, Michael A.; y col., Potentee inhibidores duales no peptídicos de la enzima convertidora de la endotel a y la endopeptidasa neutra 24.11. Bioorg. Med. Chem. Lett. (1997), 7(8), 1059-1064]. Los dos inhibidores se midieron con los valores IC50 no eignificativamente diferentee de los deecritos en la literatura pero medidos con diferentes protocolos de ensayo. En el ensayo basado en las células, el fosforamidón mostró un IC0„ de 4 µM. Eete eneayo dio una información adicional acerca de la potencia inhibidora de los inhibidores bajo condiciones mucho más fisiológicas, como por ejemplo, el ECE se incrusto en un ambiente normal de la membrana del plasma. Ee importante citar que el eneayo de eelección se efectuó en presencia de 1 µM de Tiorphan para bloquear cualquier potencial degradación de la gran ET-1 debida a la acción del NEP24.11. Ninguna actividad NEP estuvo presente en las células transfectadas MDCK-ECE-lc en los experimentos preliminares cuando la producción de ET-1 se midió en presencia o ausencia de tiorphan. En los experimentos subsiguientes no se añadió thiorphan al medio de incubación.
De conformidad con los métodos de más arriba, los compuestos de la preeente invención muestran valores IC50 en el radioinmunoensayo (E sobre inhibición ECE) desde aproximadamehte 50 nM hasta aproximadamente 1000 µM. Los compuestos preferidos muestran valores de 50 nM a 1 µM. Como se ha mencionado anteriormente, los medicamentos que contienen un compuesto de fórmula I son también objeto de la presente invención, así como también un procedimiento para la elaboración de dichos medicamentos, el cual procedimiento comprende la utilización de uno o más compuestos de fórmula I, y si se desea, de uno o más distintas substancias terapéuticamente valiosa, en una forma de administración galénica.
Las composiciones farmacéuticas pueden ser administradas oralmente, por ejemplo en forma de comprimidos, comprimidos lacados, grageas, cápsulas de gelatina dura o blanda, soluciones, emulsiones o suspensiones. La administración puede también efectuarse por vía rectal por ejemplo empleando supositorios; por vía local o percutánea, por ejemplo empleando ungüentos, cremas, geles o soluciones; o parentalmente, por ejemplo, usando soluciones inyectables. Para la preparación de comprimidos, comprimidos lacados, grageas o cápsulas de gelatina dura, los compuestos de la presente invención pueden mezclarse con excipientes farmacéuticamente inertes, inorgánicos u orgánicos. Ejemplos de excipientes adecuados para comprimidos, grageae o cápeulae de gelatina dura, incluyen la lactosa, almidón de maíz o derivados de los mismos, talco, acido esteárico o sales de los miemos. Excipientes adecuados para emplear con cápsulas de gelatina blanda incluyen por ejemplo los aceites vegetales, ceras, grasas, polioles semi-sólidos o líquidos, etc.; de conformidad con la naturaleza de los ingredientes activos puede llegar el caso, sin embargo, de que no eea necesaria la utilización de ningún excipiente en absoluto para las cápsulas de gelatina blanda. Para la preparación de soluciones y jarabes, los excipientes que pueden emplearse incluyen por ejemplo, el agua, polioles, eacarosa, azúcar invertido y glucosa. Para las soluciones inyectables, los excipientes que pueden utilizarse, incluyen, por ejemplo, agua, alcoholes, polioles, glicenna y aceites vegetalee Para loe eupositorios y aplicación local o percutánea, los excipientes que pueden emplearee incluyen por ejemplo aceites naturales o endurecidos, ceras, grasas y polioles semisólidos o líquidos, Las composiciones farmacéuticas pueden contener también, agentes conservantes antioxidantes, agentes solubilizantes, agentes estabilizantes, agentes humectantes, emulsionantes, edulcorantes, colorantes, odorantes, sales para variar la presión osmótica, tampones, agentes de recubrimiento o antioxidantes . Pueden también contener otros agentes terapéuticos valiosoe. Las dosificaciones en las cuales ee administran los compuestos de fórmula I en cantidades efectivas, dependen de la naturaleza del ingrediente activo específico, la edad y neceeidades del paciente y el modo de aplicación. En general, entran en consideración, dosificaciones de 0.1-100 mg/kg de peso corporal por día, aunque el límite superior indicado puede sobrepasarse cuando se demuestra que está indicado. Loe ejemploe eepecíficos siguientes, se exponen como guía para ayudar en la puesta en práctica de la invención, y no pretenden ser una limitación del ámbito de la invención.
EJEMPLOS Observaciones generales Todae lae reaccionee se efectuaron en atmósfera de argón. Abreviaturas EtOH etanol, THF tetrahidrofurano, Et20 dietileter, MeOH metanol, CH2C12/ EDCI hidrocloruro de N-(3-dimetilammopropil) -N -etilcarbodumida, HOBT 1-h?drox?ben-zotpazol, DBU 1, 8-d?azab?c?clo [5.4.0] undec-7-eno (1, 5-5) , LAH hidruro de aluminio y litio, LDA dusopropilamida de litio, DEAD azodicarboxilato de dietilo, DIAD azodicarboxilato de dusopropilo, DMAP 4-d?met?lammop?pd?na, DMAP-pol?-4- (N-bencil-N-metilam o) pipdma, (polieetireno basado 2 % de DVC, aproximadamente 1.6 mmoles "DMAP'Vg de resma) soportado por polímero, NEM N-etilmorfolma, NMN N-metilmorfolma, TBAF fluoruro de tetrabutila onio, DIEA dietilam a, DMF dimetilformamida, TFA ácido tpfluoroacético, TPTU tetrafluoroborato de 2- (2-p?ndon-l-?l) -1, 1, 3, 3-tetramet?l uro-nio, base Huenigs ?Pr2NEt ó N-etildiisopropilamma, FMOC-OSu éster 9-fluorenilmetil-oxicarbonil-N-hidroxisuccinimido . Ejemplo 1: materiales de partida (Esteres - esquema de reacción 1) 40 g (220 mmoles) de clorhidrato del éster metílico de la L-hidroxiprolma (dos vecee suspendido en tolueno y evaporado a presión reducida para eliminar el agua) , se suspendieron en 600 ml de hexametildis lazano y se calentaron a reflujo durante 2 horas. La solución se evaporó a presión reducida y se disolvió en 100 ml de THF. Se añadieron lentamente 49.9 g (220 mmoles) de cloruro de 2-naftalen-sulfonilo en 200 ml de THF, y se agitaron lentamente durante 16 horas a temperatura ambiente. Se añadieron 150 ml de H20 y después de 1 hora los disolventes se evaporaron. El residuo se repartió en agua/acetato de etilo (3x), lae fases orgánicas ee lavaron con NaCl 10% y se secaron con Na2?04 para dar 60.4 g (82%) del éeter metílico del ácido (2S,4R)-4-hidroxi-1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico, EM: 335 (M~) . Esquema de Reacción 1: PG R-X Análogamente, El hidrocloruro del éster bencílico de la L-hidroxi-prolma, y el cloruro de 1-naftalensulfonilo, dieron el éster bencílico del ácido (2?, 4R) -4-h?droxi-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?din-2-carboxíl?co, EM: 411 (MHT); El clorhidrato del éster bencílico de la L-hidroxi-prolma, y el cloruro de metansulfonilo, dieron el éster bencílico del ácido (2?, 4R) -4-hidroxi-l-metansulfon?l-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, p.f. 132-133°C, EM: 300 (MH+) ; El clorhidrato del éster metílico de la L-hidroxi-prol a, y el cloruro de metansulfonilo, dieron después de la extracción con CH2C1¿/ el éster metílico del ácido (2?,4R)-4-h?drox?-l-metansulfon?l-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, p.f. 115.5- 117°C, EM: 164 (M-COOMe); Vía mesilato: Una solución bifásica de 13.9 ml (215 mmolee) de ácido metansulfónico, 29.8 ml (215 inmoles) de trietilamma y 58.7 g (224 inmoles) de trifenilfosfina en 150 ml de tolueno, se añadieron a una euepeneión de 60 g (179 mmolee) del éster metílico del ácido (2?,4R)-4-h?drox?-1- (naftalen-2-sulfoml) -p?rrolidin-2-carboxíl?co, en 300 ml de tolueno el cual se agitó mecánicamente. Después de añadir 44.9 ml (233 mmoles) de azodicarboxilato de diisopropilo (¡exotérmico!), se calentó la solución durante 2.5 horas a 80°C. Se añadieron 300 ml de agua a TA y se extrajeron con acetato de etilo (3x300 ml ) . La fase orgánica se lavó con KH?04 acuoso al 10? (2x100 ml), NaCl 10% (2x150 ml), se eecó con N 2S04 y se evaporó para dar 180 g de producto crudo. La cromatografía flash (acetato de etilo/hexano 1:1) dio 63.7 g (86%) del éster metílico del ácido (4?, 25) -4-metansulfon?lox?-l- (naftalen-2-sulfoml) -pirro1idin-2-carboxí1ico. 64.2 g (167 inmoles) de tpfenilmetantiol ee añadieron lentamente a TA a una solución de 17.9 g (160 mmolee) de terc-butilato de potasio en 300 ml de DMF y se agitaron mecánicamente durante 30 minutos. A continuación, se añadieron 63 g (152 inmoles) del éeter metílico del ácido (4?, 2?) -4-metansulfon?lox?-l- (naftalen-2-eulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en 300 ml de DMF a 20°C mediante enfriamiento al final con un baño de hielo. La reacción se cal ntó durante 1.3 horas a 100°C, se enfrió, se evaporó a 400 ml y se extrajo con 250 ml de NH4C1 acuoso saturado/acetato de etilo (3x300) . Lae fases orgánicas se lavaron con NaCl acuoso 10%, se secaron (Na2S04) y se evaporaron. La cromatografía flash (CH2Cl2/MeOH 99:1) dio 58.6 g (65%, isómero (2?, R) / (2R, 4R) aproximadamente 4:1, XH-RMN) y 9.2 g (10%, isómero (2?, 4R) / (2R, 4R) aproximadamente 1:1, ^-RMN) del éster metílico del ácido (2S,4R)-1-(naft len-2-eulfon?l) - -tptilsulfan?l-p?rrol?dm-2-carboxílico, EM: 594 (MH+) . Análogamente: El éster metílico del ácido (2?, 4R) -4-hidroxi-l-metan-eulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico dio deepués de 3.75 horas a 80°C el éster metílico del ácido (4S, 2S) -4-metansul-foniloxi-1- (metiisulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico, el cual se calentó durante 45 minutos a 100°C con el trifenilmetan-tiolato para dar el éster metílico del ácido (2S,4R)-1-metansulfonil-4-tritilsulfañil-pirrolidin-2-carboxílico isómero (2S, 4R) / (2R, 4R) aproximadamente 9:1, ^-RMN) , EM: 482 (MH+) ; El éster bencílico del ácido (2S, 4R) -4-hidroxi-l-metaneulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico dio deepués de 5 horas a 80°C, el éster bencílico del ácido (2S,4S)-1-metansulfoni1- -metaneulfoniloxi-pirrolidin-2-carboxílico, el cual se calentó durante 30 minutos con el 4-metoxibencil-tiol/terc-butilato de potaeio para dar el éeter bencílico del ácido (2?, ?) -1-metansulfonil-4-metansulfoniloxi-pirrolidin-2-carboxílico, p.f. 91-92°C, EM: 453 (M+NH4+) Vía bromuro: A una solución de 76.5 g (291.6 minóles, 6 equiv.) de trifenilfosfina en 650 ml de THF, se añadieron 44.6 ml (286.8 mmolee, 5.9 equiv.) de DEAD en 70 ml de THF a una temperatura entre 1.5-4.5°C durante un tiempo de 0.5 horas. La solución se agitó durante 0.5 horas antes de añadir 42.2 g (486.1 mmolee, 10 equiv.) de LiBr, y la mezcla de reacción ee enfrió de nuevo a 4°C durante la adición de 20 g (48.6 inmoles) de éster bencílico del ácido (2S,4R)-4- h?droxi-1- (naftalen-2-sulfoml) -??rrol?din-2-carboxíl?co en 75 ml de THF. Después de agitar a TA durante 3 horas, se añadió agua, y la suspensión se concentró y redisolvió en 700 ml de acetato de etilo y agua. Las capas se separaron, la capa inorgánica se extrajo con 100 ml de acetato de etilo (3x), y las capae orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con MgS04 y se evaporaron. Se separó el óxido de tpfenilfoefina por cristalización con acetato de etilo/hexano y las aguas madree ee purificaron mediante cromatografía de columna sobre silica gel con hexano: acetato de etilo 3:1 obteniéndose 13.4 g (62%) del éster bencílico del ácido (2S, 4? ) -4-bromo-l- (naftalen-2-sulfonil ) -pirrolidin-2-carboxíl?co, en forma de un sólido incoloro, p.f. 97-98°C, EM: 473 (MH") . 3.58 g (30.1 mmoles, 1.1 equiv.) de terc-butilato de potaeio en 150 ml de DMF, se trataron con 4.4 ml (31.5 mmoles, 1.15 equiv.) de 4-metoxibenc?l mercaptano a 0°C. La solución se agitó a TA durante 1 hora antes de añadir 12.99 g (27.4 inmoles) del éster bencílico del ácido (2?, S) -4-bromo-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrolidin-2-carboxílico en 100 ml de DMF. La reacción se agitó a TA durante la noche, la DMF se separó al vacío, y el residuo se redisolvió en acetato de etilo y KHSO^ acuoso ÍM. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó con Na2SO,j y se evaporó. El aceite crudo se purificó mediante cromatografía flash sobre silica gel con hexano/acetato de etilo (3:1 - 2:1) como eluyente, obteniéndose 7.23 g (48%) del éster bencílico del ácido (2S, 4R) -4- (4-metoxi-bencil-eulfanil) -1- (naftalene-2-eulfonil ) -p?rrol?dm-2-carbox?l?co, en forma de un sólido de color amarillo claro, p.f. 90-91°C, EM: 547 (M~) . Análogamente : El éeter 1-terc-butíl?co y éeter 2-metílico del ácido (2S, 4R) -4-h?drox?-p?rrol?din-l, 2-d?carboxíl?co, con 4-meto-xibenciltiol/terc-butilato de potasio, dieron el éster 1-terc-butíl?co y éster 2-metíl?co del ácido (2S, 4R) -4- (4-metoxi-bencilsulfanil) -p?rrol?dm-1, 2-d?carboxíl?co. EM: 382 (MH*) El éster metílico del ácido (2?, 4R) -4-h?drox?-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxílico, con 4-metox?-benciltiol/terc-butilato de potasio, dieron el éster metílico del ácido (2?-4R) -4- (4-metox?-bencilsulfañil ) -1- (naftalen-2-eulfon?l) -pirrol?din-2-carboxíl?co, en forma de un aceite incoloro, EM: 472 (MH+) ; Vía cloruro: Ester 1-terc-butíl?co y éster 2-metílico del ácido (2S-4R) -4-tritileulfaml-pirrolidm-l, 2-dicarboxílico : la síntesis del intermediario de la presente invención es ya conocida en la técnica y está descrita por ejemplo en la Solicitud de Patente Internacional WO 9820001 y la Publicación de la Solicitud de la Patente Europea n° EP-A-696593) . Una solución de 374 g (1.48 mmoles) del éster 1-terc-butílíco y éster 2-metíl?co del ácido (2?, 4R) -4-h?droxi-p?rrol?dm-1, 2-d?carboxíl?co, en 1.61 de CHC12, se trató con 680 g (2.6 inmoles) de tpfenilfosfma, se enfrió a 3-5°C y se trató en 10 minutos con 1.24 1 (12.8 mmoles) de CC14, después de 2 horas a esta temperatura se interrumpió el enfriamiento, la temperatura de la reacción aumentó durante 2 horas a 35°C. Se enfrió a 20°C y se agitó durante otros 45 minutos. Después de la adición de 4 litros de n-heptano, la reacción se evaporó a 2.9 litros, se enfrió a 0°C, se filtró, el residuo se trató dos veces de la misma manera, la tercera vez disolviendo el residuo de nuevo en 2 litros de CH2C12. Los disolventes se evaporaron y se filtraron a través de silica gel con hexano/terc-butil-metiléter 9:1 como eluyente. La evaporación de loe disolventes dio 347 g (89%) del éster 1-terc-butílico y éster 2-metíl?co del ácido (2S, 4S) -4-cloro-p?rrol?din-1, 2-dicarboxíl?co, EM: 246 (MH+) Una solución de 76 g (0.68 mmolee) de terc-butilato de potasio en 1.5 litros de DMF se enfrió (-3°C) y se trató lentamente (1.5 horas) con 202 g (0.73 inmoles) de tpfenil-metanotiol en 0.8 litros de DMF (máximo a 1°C). Después de 2.5 horas a 0°C, se añadió una solución de 161 g (0.61 inmoles) del éster 1-terc-butíl?co y éster 2-metíl?co del ácido (2S-4S) -4-cloro-p?rrolidm-l, 2-d?carboxílico en 0.35 litros de DMF. La reacción se agitó durante la noche a 2°C, se evaporó, se disolvió en 1.5 litros de acetato de etilo, se vertió en 2.7 litros de solución eaturada de NH4C1 y se extrajo con acetato de etilo (2x) . La fase orgánica se lavo con NaHCOj acuoeo saturado, se secó con Na2?04 y ee evaporo. La HPLC eobre silica gel con hexano/acetato de etilo (95:5 a 7:3) dio 268 g (87%) del éster 1-terc-butilico y éster 2-metíl?co del acido (2S-4R) -4-trit?lsulf ñil) -p?rrol?din-l,2-d?carboxíl?co, EM: 504 (MH") . Ejemplo 2: Hidrólisis (esquema de reacción 1) A una solución de 14.8 g (31.6 mmoles) del éster metílico del ácido (25, 4R) -4- (4-metox?-benc?lsulfan?l)-l- (naftalen-2-eulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en 950 ml de THF, se añadieron 950 ml de LiOH 0,1M (95 inmoles) a 0°C. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, se diluyó con agua de hielo, se acidificó mediante la adición de KH?Oí ÍM (pH 2), y se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con sal muera, se secaron con Na2?Oí y se evaporaron. El producto se cristalizó con acetato de etilo/hexano, obteniéndose 13.15 g (90%) del ácido (2S, 4R) -4- (4-metox?-bencilsulfan?l) -1- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxílico, en forma de un sólido incoloro, EM: 456 (MH") . Análogamente se prepararon loe siguientes compueetoe: Acido (2S,4R)-l-metaneulfon?l-4-tr?t?lsulfanil- p?rrol?din-2-carboxíl?co, en forma de una espuma de color pardo claro, EM: 466 (M-H") ; Eeter 1-terc-butílico del ácido (2?, 4R) -4- (4-metoxi-bencileulfaml) -p?rrol?dm-1, 2-d?carboxíl?co, EM: 366 (M-H") ; Se prepararon otros compuestos adicionales, de conformidad con las eiguientee referencias: 2-isobut?l) hidraz carboxilato de terc-butilo (Faess-ler, Alexander; Bold, Guido; Capraro, Hans-Georg; Cozens, Robert; Mestan, Juergen; Poncioni, Bernard; Roesel, Johannes; Tmtelnot-Blom ey, Marina; Lang, Marc. Análogos a péptidos aza como potentes inhibidores de la proteasa del virus humano de la m unodefíciencia tipo 1, con biodispomb lidad oral. J. Med. Chem. (1996), 39 (16), 3203-3216). 2- (metil) hidrazmcarboxilato de tere-butilo (Lenman, Morág M.; Lewis, Arwel; Gam, David. Síntesis de 1,2,5-triaze?in-1, 5-d?onas fusionadas y algunos derivados substituidos en N2 y N3 : potenciales miméticos conformacionales para las cis-peptidil prolinamidas . J. Chem. Soc./ Perkm Trans. 1 (1997), edición 16, 2297-2311). Eeter bencílico del ácido N-metil-hidrazincarboxílico (Lenman, Norag M.; Lewis, Arwel; Gam, David. Síntesis de 1, 2, 5-triazepm-l, 5-dionas fusionadas y algunos derivados substituidos en N2 y NS : potenciales miméticos conformacionales para las cis-peptidil prolmamidas . J. Chem. Soc., Perkín Trans. 1 (1997), edición 16, 2297-2311).
Ejemplo 3: Síntesis de hidracidas Ejemplo 3a: secuencia A (esquema de reacción 2) (etapa 1) A una solución de 4.4 g (9.6 inmoles) de ácido (2S, 4R) -4- (4-metoxi-bencilsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfonil ) -pirrolidin-2-carboxílico, en 200 ml de CH2C12, se añadieron 1.2 g (10.8 inmoles, 1.1 equiv.) de N-hidroxi-2-piridona, seguido de 2.2 g (10.7 mmoles, 1.1 equiv.) de N,N-di-ciclohexilcarbodiimida en 25 ml de CH2C12 a 0°C durante un período de 30 minutos. La suspensión se agitó durante 4 horas más a la temperatura antes de añadir 4.2 ml (33.0 inmoles, 3.4 equiv.) de NEM y 1.9 g (mmolee, 1.05 equiv.) de eulfato de ieobutilhidrazina . La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La suspensión se trató con 0.55 ml (9.6 mmoles, 1.0 equiv.) de acida acético glacial en 10 ml de agua y se agitó durante 1.5 horas, se diluyó con NaHC03 acuoso diluido (5%) y se extrajo con CH2C12. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con solución ÍM de KH?04, agua y salmuera, se secó con Na2??4 y se evaporó. La trituración con hexano dió un rendimiento de 5.02 g (cuantitativo) de N' -isobutil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-(4-metoxi-bencilsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico, la cual ee sometió directamente a la siguiente reacción.
Secuencia A 4-et?lmorfoiina SECUENCIA C (etapa 2) Se trataron 222 mg (0.42 mmoles) de N'-isobutil-hidrazida del ácido ( 2S , 4R) -4 - (4 -metoxi -bencilsulf añil) -1- (naftalen-2 - sulfonil ) -pirrolidin- 2 -carboxílico, en 10 ml de TFA, con 0.68 ml(4.2 mmoles, 10 equiv.) de triet il silano a 80°C durante 90 minutos. El disolvente se evaporó al vacío y el producto crudo se purificó mediante cromatografí flash, obteniéndose 148 mg (86%) de la N ' - isobut i 1 -hidrazida del ácido (2 s , 4R) -4 -mercapto-2 - (naf talen-2 - sul fonil ) -pirrolidin-2 -carboxí lico , en forma de un sólido cristalino de color amarillo claro, E : 408 (MH+) . Análogamente se prepararon los siguientes compuestos : A partir del ácido (2S,4R) -4- (4- etoxi-bencilsulfañil) -1- (naftalen- 2 - sulfonil ) -pirrol idin- -carboxílico, y b) bencilidrazina, seguido de la desprotección: N ' -bencil-hidrazida del ácido (2S , 4R) -4 -mercapto- 1 - (naftalen-2 -sulfonil) -pirrolidin- 2 - carboxí 1 ico , en forma de un sólido de color blanco, EM ; 442 (MH+); c) p-toluensulfonilhidrazina seguido de la desprotección: N' - ( 4 -met il -bencenosulfonil ) -hidrazida del ácido ( 2 S , 4R) - 4 -mercapto- 1 - (naf talen- 2 - sul foni 1 ) -pirrol idin-2 -carboxí lico , en forma de un sólido de color blanco, EM : 506 (MH+) ; d) metílhidrazina seguido de la desprotección: N'-metil-hidrazida del ácido (2S, 4R) -1-mercapto-l- (naftalen-2-sulfnil) -pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 366 (MH+) ; A partir del ácido (2S, 4R) -l-metanosulfonil-4-tritilsulfanil-pirrolidin-2-carboxílico, y p-toluensulfonil-hidrazina seguido de la desprotección N' - (4-metil-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4 -mercapto- 1-metansulfonil-pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 394 (MH+) ; Ejemplo 3b: Secuencia B (etapa 1 de la secuencia A seguido del etapa 3, 4-esquema de reacción 2) (etapa 3) 4.3 g (3.15 mmoles) de N ' -isobutil-hidrazida el ácido (2?, 4R) -4- (4-metoxi-bencilsulfañil) -1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico, en 450 ml de CH2Cl2, se trataron con 5.6 ml (32.6 mmoles, 4 equiv.) de N-etildi-isopropilamina, 3.1 g (16.3 mmoles, 2 equiv.) de cloruro de p-toluensulfonilo, y 100 mg (0.8 mmoles, 0.1 equiv.) de DMAP a 0°C y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron 2.05 g (16.1 mmoles, 2 equiv.) de eNHCH2C02K, y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, se añadió solución 1 14 de KHS04, y las fases se separaron. La capa orgánica se extrajo con NaHC03 saturado, y las capas inorgánicas se lavaron con CH2CI2 - Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se eecaron con Na2?O,. y se evaporaron. La purificación del residuo crudo mediante cromatografía flash con hexano: acetato de etilo 2:1 como eluyente proporcionó 2.68 g (48%) de N' -?eobut?l-N' - (4-met?l-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2?, R) -4- (4-metox?-bencilsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -p?rrolidm-2-carboxílico, el cual se sometió directamente a la siguiente reacción . (etapa 4) A 2.68 g (3.9 mmoles, 1 equiv.) de la N'-iso-butil-N' - (4-metil-bencenosulfon?l) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -4- (4-metox?-benc?lsulfan?l) -1- (naftalen-2-sulfonil) -pi-rrol?dm-2-carboxíl?co, en 100 ml de TFA, ee añadieron 6.2 ml (39 mmolee, 10 equiv.) de tpetilsilano, y la mezcla se calentó a 80ÜC durante 1.5 horas, se concentró al vacío y se redisolvió en tolueno y se evaporó. La trituración con hexano proporcionó el producto crudo que seguidamente se purificó mediante cromatografia flash con hexano : acetato de etilo 1:1 obteniéndose 1.65 g (74%) de la N' -isobutil-N' - (4-metil-bencenosulfonil) -hidraz da del ácido (2S, 4R) -4-mercapt?-l-(naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol?dm-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 562 (MH+) . Análogamente, ee prepararon los compueetoe eiguientes (etapas 1,3,4) : A partir de ácido (2S, 4R) -4- ( -metox?-benc?leulfañil ) -1-(naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxílico, b) y metilhidrazma, eeguido por la reacción con cloruro de p-toluensulfonilo y desprotección: N* -metil-N' - ( 4-met?l- fenilsulfomlj -hidrazida del ácido (2S, R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfon?l) -??rrol?din-2-carboxí lico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 520 (MH") ; c) y sulfato de ieobutilhidrazina, seguido por la reacción con cloruro de 4-t-but?l-fenileulfonilo y deeprotección: N' - (4-terc-but?l-bencenoeulfonil ) -N' -isobutil-hidrazida del ácido (25, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 604 (MH+) ; d) y metilhidrazina, seguido por la reacción con cloruro de metansulfonilo y desprotección: N' -metansulfoml-N' -metil-hidrazida del ácido (2S, R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en forma de un sólido de color blanco, EM: 444 (MH+) ; e) y sulfato de isobutilhidrazina, seguido por la reacción con cloruro de metansulfonilo y desprotección: N' -?sobut?l-N' -metansulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1- (na talen-2-sulfon?l ) -p?rrol?dm-2-carboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 486 (MH+) ; f) y bencilhidracina, seguido por la reacción con cloruro de metansulfonilo y desprotección; N' -bencil-N' -metansulfoml-hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l-(naftalen-2-sulfon?l) -p?rrolidm-2-carboxíl?co, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 520 (MHT) ; g) y bencilhidrazma, seguido por la reacción con cloruro de p-toluensulfonilo y desprotección; N' -bencil-N' - (4- metil-femlsulfonil) -hidrazida del acido (2?,4R)~4-mercapto-1- (naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 596 (MH+) ; A partir del ácido (25, 4R) -l-metansulfon?l-4-tr?t?l-sulfanil-pirrolídm-2-carboxí1ico a2) y bencilhidrazma, seguido de la reacción con clo-ruro de metansulfonilo y desprotección: N' -bencil-N' -metansulfoml-hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l-metansulfon?l-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en forma de un sólido de color blanco, EM: 408 (MH+) ; b2) y eulfato de ísobutilhidrazma, seguido de la reacción con cloruro de metaneulfonilo y desprotección N'-ísobutil-N'-metansulfonil-hidrazida del ácido (2?,4R)-4-mercapto-l-metansulfon?l-p?rrol?d?n-2-carboxíl?co, en forma de un sólido incoloro, EM: 450 (MH+) ; c2) y sulfato de íeobutilbidrazma, eeguido de la reacción con cloruro de p-tolueneulfonilo y deeprotección: N' -ísobutil-N' - (4-met?l-bencenosulfon?l-h?draz?da del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l-metansulfon?l-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en forma de un sólido incoloro, EM: 374 (MH+) ; d2 ) y sulfato de ísobutilh drazma, seguido de la reacción con cloruro de 4-terc-but?l-bencenosulfonilo y des- protección: N' - (4-terc-but?l-bencenosulfon?l) -N' -ísobutil-hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l-metansulfon?l-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 492 (NH+) . Ejemplo 3c: Secuencia C (esquema de reacción 2) Análogamente a la secuencia A, B (etapas 1,3), a partir del éeter 1-terc-butíl?co del ácido (2S, 4R) -4- (4-metox?-bencilsulfanil) -p?rrol?dm-1, 2-d?carboxílico, y la metilhi-drazma, seguido de tratamiento con cloruro de p-toluensul-fónico, se obtuvo el éster 1-terc-butíl?co del ácido (2S,4R)-2- [N' -metil-N' - ( -met?l-fenilsulfonil ) -hidrazmocarbonil ] -4- (4-metox?-benc?lsulfan?l) -p?rrol?dm-1-carboxíl?co, el cual se sometió directamente a la reacción siguiente. (etapa 5) 2.37 g (4.3 mmoles) del éster 1-terc-butíl?co del ácido (2S, 4R) -2- [N' -metil-N' - ( -met?l-fenilsulfonil) -hidrazmocarboni] -4- (4-metox?-benc?lsulfan?l) -p?rrol?din-1-carboxílico, en 10 ml de CH2C12, ee trataron con 4 ml de IFA a 0°C y se guardaron en el congelador durante la noche. El disolvente se evaporó, el material crudo se disolvió y evaporó con tolueno (2x) y hexano (3x) obteniéndose la (25, 4R) -2- [N' -metil-N' - ( 4-met?l-fenilsulfonil) -hidrazmocarbo-nil] -4- (4-metox?-benc?lsulfan?l) -pirrolidma como sal de TFA, como producto crudo, el cual se sometió a la siguiente reacción sin previa purificación. (etapa 6) A 250 mg (0.44 mmoles, 1.0 equiv. ) de (2?,4R)- 2- [N' -metil-N' - (4-met?l-fenilsulfonil ) -hidrazmocarbonil] -4- (4-metox?-bencilsulfanil) -pirrolidma-TFA en 5 ml de CH2C12 se añadieron 360 µl (2.1 inmoles, 4.8 equiv.) de N-etildiieopropilamma y 70 µl (0.56 inmoles, 1.2 equiv. ) de cloroformiato de etilo a 0CC. La solución se agitó a temperatura ambiente durante la noche, se añadió KHSO^ 1 N, las fases se eepararon y la fase inorgánica se extrajo con CH2C12, la fase orgánica se lavó con KHSO.; ÍN y salmuera, se secó con Na2S0 y se evaporó. (etapa 7) El material crudo ee redisolvió en 10 ml de TFA y se añadieron 700 µl (4.4 mmoles, 10 equiv.) de trietilsilano a temperatura ambiente y la solución ee agitó a 80JC durante 70 minutos. La evaporación y cromatografía flash con hexano : cetato de etilo 1:1 eeguida por la liofílización, proporcionó 149.2 mg (75%) del éster fenílico del ácido (2?, 4R) -2- [N' -metil-N' - ( 4-met?l-femlsulfonil) -hidrazinocar-bonil] -4-mercapto-p?rrol?dm-l-carboxíl?co, en forma de un sólido de color blanco, EM: 450 (MH+) . De forma similar (etapa 6,7) se prepararon loe eiguien-tee compuestos: A partir de (2?, 4R) -2- [N' -me il-N' -( 4-metil-fenilsul-fonil) -hidrazinocarbonil] -4- ( 4-metox?-benc?lsulfañil) -pirrolidma-TFA, con cloroformiato de n-butilo, cloroformiato de í-propilo, cloruro de butileulfamollo, cloruro de ciclopropilsulfamoilo, cloruro de bencilsul- famollo: Ester butílico del ácido (2S, 4R) -2- [N' -metil-N' - (4-metil-femlsulfonil) -hidrazmocarbonil] -4-mercapto-p?rrol?dm-1-carboxíl?co, en forma de una goma incolora, EM: 430 (MH"); Ester isopropílico del acido (2S, 4R) -2- [N' -metil-N' - (4-metil-fenilsulfonil) -hidrazmocarbonil ] -4-merca?to-p?rrol?-dm-1-carboxíl?co, en forma de un sólido de color blanco, EM: 416 (MH") ; Butilamida del ácido (2S, 4R) -2- [N' -metil-N' - (4-met?l-fenilsulfonil) -hidrazmocarbonil ] -4-mercapto-p?rrol?dm-l-sulfonico, en forma de un solido liofilizado de color blanco, EM: 463 (M-H)"; Ciclopropilamida del acido (2S, 4R) -2- [N' -metil-N' - (4-metil-fenilsulfonil) -hidrazmocarbonil] -4-mercapto-p?rrol?dm-1-sulfón?co, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, EM: 447 (M-H)", Bencilamida del ácido (25, 4R) -2- [N* -metil-N' - (4-met?l fenilsulfonil) -hidrazmocarboml] -4-mercapto-p?rrol?dm-l-sulfónico, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, EM: 497 (M-H)"; A partir del eeter 1-terc-butílico del acido (2?,4R)-2- [N' -ísobutil-N' - (4-met?l-fen?leulfon?l) -hidrazmocarbonil] -4- (4-metox?-benc?leulfañil) -p?rrol?dm-1-carbox?l?co, se trató con cloroformiato de í-propilo, cloroformiato de n-butilo, clorofor iato de bencilo, cloroformiato de fenilo, cloruro de qu?nolm-8-sulfon?lo, cloruro de tiofen-2-eulfomlo, cloruro de bencilsulfamoilo, cloruro de butileulfamoilo o cloruro de ciclopropilsulfamoilo de conformidad con loe protocolos (etapas 5-7) para dar los siguientes compuestos: Eeter ísopropílico del ácido (2S, 4R) -2- [N' -ieobutil N' - ( 4-met?l-fenilsulfonil) -hidrazmocarbonil ] -4-mercapto-p?rrol?din-1-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 458 (MH+) . Ester butílico del ácido (2S, 4R) -2- [N' -?sobut?l-N' - (4-metil-fenilsulfonil) -hidrazmocarbonil] -4-mercapto-p?rrol?-dm-1-carboxíl?co, en forma de un sólido de color blanco, EM: 472 (MH") ; Ester bencílico del ácido (2?, 4R) -2- [N' -ísobutil-N' - (4-metil-fenilsulfonil) -hidrazmocarbonil] -4-mercapto-p?rrol?-dm-1-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 506 (MH+); Ester fenílico del ácido (2S, 4R) -2- [N1 -ieobutil-N' - (4-metil-fenileulfonil) -hidrazmocarbonil] -4-mercapto-pirroli-dm-1-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 492 (MH") ; N1 -ieobutil-N' - (4-met?l-benc?l) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l- (qu?nolm-8-sulfonil ) -p?rrol?din-2-car-boxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 563 (MH" ) ; N' -?sobut?l-N' - (4-met?l-benc?l) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- ( tiof n-2-sulfonil ) -p?rrol?din-2-car-boxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 518 (MH") ; Bencilamida del ácido (2S, 4R) -2- [N' -?sobut?l-N' - (4-metil-fenilsulfonil) -hidrazmocarbonil] -4-mercapto-p?rrol?dm-1-sulfón?co, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, p.f. 67CC, EM: 539 (M-H)"; Butilamida del ácido (2S, 4R) -2- [N' -ísobutil-N' - (4-metil-fenilsulfonil) -hidrazinocarbonil] -4-mercapto-p?rrolidin-l-sulfónico, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, EM: 467 (M-H)"; Ciclopropilamida del ácido (25, R) -2- [N' -?sobut?l-N' - (4-met l-fenilsulfonil) -hidrazmocarbonil ] -4-mercapto-pirrol?-d?n-1-sulfón?co, en forma de un sólido liofilizado de color blanco, EM: 489 (M-H)"; Ejemplo 3d: Secuencia D - Formación directa del éster (esquema de reacción 3) Análogamente a Ruye Xmg y Robert P. Hanzli , J. Med. Chem. 1998, 41, 1344-1351, se efectuaron las siguientes reacciones : (etapa 8) A una solución de 5 g (10.6 inmoles, 1 equiv.) del éster metílico del ácido (2S, 4R) -4- (4-met?xi-bencilsulfañil) -1- (naftalen-2-eulfon?l ) -p?rrol?dm-2-carboxílico, en 20 ml de metanol, se añadieron 6.45 ml (110 inmoles, 10 equiv.) de hidrato de hidrazina y la solución se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. El disolvente se evaporó, seguido por la disolución y evaporación con EtOH, éter y hexano. El sólido de color amarillo claro se secó al vacío dando la hidrazida del ácido (2?, 4R) -4- (4-metoxi-bencilsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfonil ) -pirrolidin-2-carboxí-lico, p.f. 130&C, EM: 472 (MH") . (etapa 9) 150 mg (0.3 mmoles, 1.0 equiv.) de hidrazida del acidó (2?, 4R) -4- (4-metoxi-bencilsulf ñil) -1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico en 5 ml de TFA y 0.65 ml de triisopropilsilano, se agitaron durante 3 días a temperatura ambiente. El disolvente se evaporó y el residuo ee redieolvió en so lución saturada de NaHCOj acetato de etilo, las fasee se separaron y la fase inorgánica se extrajo con.' acetato de etilo. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con agua y salmuera. La cromatografía de columna proporcionó 68 mg (61%) de hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1- (naftalen-2-eulfonil ) -pirrolidin-2-carboxílico, en forma de una eepuma de color blanco, EM: 352 (MH+) .
Esquema de Reacción 3 y R4 oo CIA E Ejemplo 3e: secuencia E - intermediarios (esquema de reacción 3) Análogamente a la secuencia D etapa 8, se preparó el siguiente compuesto a partir del éster metílico del ácido (2?, 4R) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -4-tpt?lsulfanil-pirrolidm-2-carboxíl?co, y la hidrazina hidrato: Hidrazida del ácido (2?, 4R) -1- (naftalen-2-sulfonil) -4-tptilsulfan?l-p?rrolidm-2-carboxíl?co, en forma de un sólido de color blancuzco, p.f. 172ÜC, EM: 594 (MH+). (etapa 10) A una suspensión de 3.0 g (5.05 inmoles) de hidrazida del ácido (2?, 4R) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -4-tritilsulfan?l-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en etanol, se añadieron 0.56 ml (5.6 mmolee, 1.1 equiv.) de benzaldehido a temperatura ambiente, y la mezcla de reacción se calentó a 80GC durante 3 horas. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía flash sobre silica gel con acetato de etilo, hexano 1:1 como eluyente, obteniéndose 2.75 g (80%) de benciliden-hidrazida del ácido (2?,4R)-1- (naftalen-2-eulfon?l) -4-tpt?lsulf ni1-pirrolidin-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco, EM: 662 (MH+) . (etapa 11) A 2.48 g (3.64 mmoles) de benciliden-hidrazida del ácido (2S, 4R) -1- (naftalen-2-sulfonil) -4-tritilsulfan?l-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, se añadieron 228,6 mg (3.64 mmoles, 1.0 equiv, ) de NaBH^CN en 12.4 ml de THF, seguido de 691.8 mg (3.64 mmoles, 1.0 equiv.) de acido to- luen-4-sulfón?co en 8.7 ml de THF. La solución se agito a temperatura ambiente durante 2 horas, se añadieron mmolee adicionales, 0.3 equiv.) de NaBH3CN, y la reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con salmuera, solución saturada de NaHC03 y salmuera, se secó con Na2?O^ y el disolvente se evaporó. El residuo se disolvió en 11 ml de NaOH ÍM, y 15 ml de THF y se agitó durante 1 hora, se diluyó con acetato de etilo y se añadieron 9 ml de KHSO4 ÍM, seguido de solución al 5% de NaHCOj. La solución ligeramente básica se extrajo con acetato de etilo. La fase orgánica ee lavó con agua y ealmuera, se secó con Na2SOJ] y se evaporó obteniéndose 2.45 g (98%) de N'-bencil-hidrazida del ácido (2S, 4R) -1- (naftalen-2-sulfonil) -4-tr?t?lsulfan?l-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en forma de una espuma de color blanco, EM: 684 (MH+) (análogamente a Alexander Faseler, Guido Bold, Hane-Georg Capraro, Robert Cozene, Jurgen Mestan, Bernard Poncioni, Johannes Rüeel, Marina Tmtelnot-Blomley, y Marc Lang, J. Med. Chem. 1996, 39, 16, 3203-3216) . Análogamente, se preparó el siguiente compuesto a partir de la hidrazida del ácido (2?, 4R) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -4-tpt?lsulfan?l-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, y el 2, 5-d?fluoro-benzaldehido : N'- (2-5-d?fluoro-benc?l) -hidrazida del ácido (2?,4R)-1~ (naftalen-2-sulfonil) -4-tr?t?lsulfan?l-pirrol?dm-2-carboxílico, en forma de una espuma de color blanco. MS : 720 (MH)\ Ejemplo 3e: Secuencia E-productos finales (esquema de reacción 3) (etapa 12) A 200 mg (0.3 inmoles) de N' -bencil-hidrazida del ácido (2S, 4R) -1- (naftalen-2-sulfonil) -4-tpt?lsulfanil-p?rrol?dm-2-carboxílico, en 3 ml de CH2C12, se añadieron 60µl (0.35 mmoles, 1.2 equiv. ) de N, N-dnsopropiletilamina, 72.5 mg 0.35 mmoles, 1.2 equiv.) de cloruro de 4-metoxibencensulfonilo, y 22.5 mg (0.12 equiv.) de poli-DMAP a 0°C. La suepeneión ee eacudió a temperatura ambiente durante 3 días, se añadieron adicionalmente 25 µl (0.15 inmoles, 0.5 equiv.) de N, N-dnsopropiletilamina, 31 mg (0.15 mmoles, 0.5 equiv.) de cloruro de 4-metoxibencensulfonilo y 22.5 mg (0.12 equiv.) de poli-DMAP, y la reacción se continuó durante un día. Despuée de la filtración y lavado de la resina con CH^C12, se concentró la fase orgánica y el material crudo se purificó mediante cromatografía flash obteniéndose 152 mg (61%) de la N' -bencil-N' - (4-metoxibencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -1- (naftalen-2-sulfonil) -4-tritileulfanil-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, la cual se sometió directamente a la siguiente reacción. (etapa 13) A 148 mg (0.17 mmoles) de N' -bencil-N' - (4- metoxi-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S,4R)-1- (n ft len-2-sulfon?l) -4-tr?t?lsulfanil-p?rrol?dm-2-car-boxílico, en 3.0 mide TFA, se añadieron 276 µl (1.73 inmoles, 10 equiv.) de trietilsilano a 0GC. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, el disolvente se evaporó y el residuo se redisolvió en acetato de etilo, solución acuosa saturada de NaHC03, las capas se separaron y la capa inorgánica se extra o con acetato de etilo. Las capas orgánicae combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con N __S?4 y se evaporaron. El residuo se purificó mediante cromatografía flash con un gradiente de acetato de et?lo:hexano (1:1,5 a 1:1) obteniéndose 76 mg (72%) de la N'-bencil-N' * (4-metox?-bencenoeulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-eulfon?l ) -p?rrol?dm-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco, EM: 612 (MH") . Análogamente, se prepararon los siguientes compuestos a partir de la N' -bencil-hidrazida del ácido (2S,4R)-1~ (naftalen-2-sulfonil) -4-tpt?lsulfan?l-p?rrol?dm-2-car-boxílico y el cloruro de p-toluoilo, cloruro de acetilo, cloruro de p-anisoilo, seguido de la desprotección: (b) N-bencil-N' - [ -mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil ) -p?rrol?dm-2-carbonil] -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-met?l-benzoico, en forma de una espuma de color blanco, EM: 560 (MHX) . (c) N-acetil-N' -bencil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercaptó-1- (naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol?dm-2-carbox?l?co, en forma de un solido de color blanco, p.f. 64LC, EM: 484 (MH") . (d) N-bencil-N' - [4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil ) -p?rrol?dm-2-carbon?l] -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-metox?-benzoico, en forma de una espuma de color blanco, EM: 576 (MHT) . A partir de la N' - (2, 5-d?fluoro-bencil ) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -4-tr?t?lsulfanil-pi-rrol?dm-2-carboxíl?co, y cloruro de 2, -d?fluorobenzoilo, cloruro de 2-t?ofeno-carbonilo, cloruro de etanosulfomlo, cloruro de metoxi-bencenoeulfonilo, cloruro de 2-t?ofenosulfonilo, cloruro de bencenosulfañilo, cloruro de 4-fluorobencenosulfonilo : (e) N- (2, 5-d?fluoro-benc?l) -N' - [4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol?dm-2-carboml] -hidrazida del ácido (2S, 4R) -2, 4-d?fluoro-benzoico, en forma de una espuma de color blanco. EM: 618 (MH") . (f) N- (2, 5-d?fluoro-benc?l)-N'- [4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol?dm-2-carbon?l] -hidrazida del ácido (23, 4R) -2, 4-t?ofen-2-carboxíl?co en forma de una espuma de color blanco. EM: 588 (MH") . (g) N' - (2, 5-d?fluoro-bencil) -N' -metansulfoml-hidrazida del ácido (25, 4R) -1- (naftalen-2-sulfonil ) -4-tpt?lsulfan?l- p?rrol?d?n~2~carbox?l?co en forma de una espuma de color blanco. EM: 556 (MH+) . (h) N' - (2, 5-d?fluoro-benc?l) -N' - (4-metoxi-benceno-sulfonil) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -1- (naftalen-2-sulfonil) -4-tpt?lsulfanil-p?rrol?dm-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco. EM: 648 (MH") , (i) N' - (2, 5-difluoro-bencil) -N' - ( tiofen-2-sulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -4-trit?leulfan?l-p?rrolidin-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco. EM: 624 (MH+) . (] ) N' - (2, 5-d?fluoro-benc?l) -N' -bencenosulfonil-hidrazida del ácido (25, 4R) -1- (naftalen-2-sulfonil) -4-tpt?lsulfanil-pirrol?din-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco. EM: 618 (MH+) . (k) N'- (2, 5-d?fluoro-benc?l) -N' - (4-fluoro-benceno-sulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -1- (naftalen-2-sulfonil) -4-trit?lsulfanil-pirrol?dm-2-carboxílico en forma de una espuma de color blanco. EM: 636 (MH+) . Ejemplo 3f: Síntesis de conformidad con el esquema de reacción 4 Análogamente a la secuencia A-etapa 1, a partir del ácido (2S, 4R) -4- ( -metox?-benc?lsulfañil ) -1- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxíl co, y el éeter bencílico del ácido N-metil-hidrazmcarboxílico, se preparó el intermediario Ester bencílico del ácido (2S, 4R) -N' - [4- (4-metoxi-bencilsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carbo-nil] -N-metil-hiarazincarboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blancuzco, EM: 620 (MHT). (etapa 14) 2.45 g (1.52 mmoles) del éster bencílico del ácido (2S, 4R) -N' - [4- ( 4-metoxi-bencilsulfañil) -1- (naftalen-2-eulfonil) -pirrolidin-2-carbonil] -N-metil-hidrazincarboxílico, ee dieolvieron en 9 ml de ácido acético y ee añadieron 9 ml de HBr (33% en ácido acético) a 0°C agitadoe durante 4 horas a 0°C. La solución se concentró y el residuo se disolvió en CH2C1 y solución acuosa saturada de NaHC0 , las capas se separaron y la capa inorgánica se extrajo con CH2C12 y las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y ee secaron con Na2SO^ . El producto crudo se purificó mediante cromatografía flash con acetato de etilo: exano 1:1 obteniéndose 380 mg (44%) de la N-bencil-N-metil-hidrazida del ácido (2?, R) -4- (4-metoxi-bencilsulfañil ) -1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, p.f. 83.2°C, EM: 576 (MH+). La deeprotección de conformidad con el esquema de reacción 2 (etapa 4) dió: N-bencil-N-metíl-hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-1- (naftalen-2-sulfonil) -pírrolidin-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, p.f. 69°C, EM: 456 (MH+) . (etapa 16) 180 mg (0.31 inmoles) de la N-bencil-N-metil~ hidrazida del áctdo (2S, 4R) -4- (4-metox?-benc?lsulfan?l) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -pirrol?dm-2-carboxíl?co, en 7.5 ml de DMF, se trataron con 16.5 mg (0.34 mmoles, 1.1 equiv.) de NaH y 21 µl (0.34 inmoles, 1.1 equiv.) de yoduro de metilo a 0°C y, la solución se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. La eolución se diluyó con agua y CH2C12. Las faees se separaron y la capa inorgánica se extrajo con CH2C12, las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2S04 y se evaporaron. El material crudo se purificó mediante cromatografía flash con un gradiente de acetato de et?lo:hexano 2:1 a acetato de etilo, obteniéndose 110 mg (60') de la N' -bencil-N, N-dimetil-hidrazida del ácido (2?, 4R) -4- (4-metox?-bencilsulfan?l) -1- (naftalen-2-eulfonil) ~ p?rrol?dm-2-carboxíl?co, la cual ee desprotegió empleando el protocolo deecpto.
Esquema de Reacción 4 13) Eeter bencílico del ácido N-metil-hidrazincarboxílico, N-hidroxi-2-piridona, DDC, NEM, CH2C12 14) HBr, AcOH 15) TFA, Et3SlH 16) NaH, RBr, DMF 17) TFA, EtiSiH para el esquema de reacción 2 (etapa 4) para dar la N' -benc?l-N,N-d?met?l-h?draz?da del ácido (2?, R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol?d?n-2-carboxíl?co, en forma de un sólido de color blanco, p.f. 133.2°C, EM: 470 (MH") . Ejemplo 3g: Síntesis de conformidad con el esquema de reacción 5 Análogamente a la secuencia A-etapa 1, a partir del ácido (25, R) -4- (4-metox?-benc?lsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, y el 2- (metll) hidrazin-carboxilato de tere-butilo, se preparó el intermediario éster terc-butílico del ácido (2?, 4R) -N' - [4- (4-metox?-bencilsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfonil ) -p?rrol?dm-2-carbonil] -N' -metil-hidrazmcarboxílico, en forma de un sólido cristalino de color blanco, EM: 586 (NH+) . (etapa 19) A 200 mg (0.34 mmoles) del éster terc-butílico del ácido (2S, 4R) -N' - [4- (4-metoxi-bencilsulfañil) -1- (naftalen-2-eulfonil) -pirrol?dm-2-carbon?l] -N-metil-h drazmcarboxílico, en 10 ml de TFA ee añadieron 0.54 ml (3.4 inmoles, 10 equ v.) de tpetilsilano a temperatura ambiente y la solución se agitó a 80°C durante 1 hora. El disolvente se evaporó al vacío y el material crudo se purificó mediante cromatografía flash con acetato de etilo ¡hexano obteniéndose 61.6 mg (40%) de la N-metil-N' -tpfluoroacetil-hidrazida del ácido (2S,4R)- 4-mercapto-l-(naftalen-2-sulfon?l) -p?rrolidm-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 461 (MH+) . (etapa 20,21) De conformidad con el procedimiento (esquema de reacción 4, etapa 16) se preparó a partir del éster terc-butílico del ácido (25, 4R) -N' - [4- (4-metoxi-bencilsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol?dm-2-carbonil] -N' -metil-hidrazmcarboxílico, y bromuro de bencilo, el éster terc-butílico del ácido (2S, 4R) -N' - [4- ( 4-metox?-bencilsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfonil ) -p?rrolidm-2-carbonil] -N' -metil-N-bencil-hidrazincarboxílico, el cual se desprotegió directamente del BOC y PMB, de conformidad con el esquema de reacción (etapa 4) para dar la N-bencil-N-metil-hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en forma de un aceite incoloro, MS : 456 (MH"). (Etapa 22) Se trataron 2 g (3.4 mmolee) del éster terc-butílico del ácido (2?, 4R) -N' - [4- ( 4-metoxi-benc?lsulfañil) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -pirrolidin-2-carbon?l ] -N' -metil-hidra-zmcarboxílico, en 9 ml de CH2C1 , con 3.4 ml de TFA durante 2 horas. La solución se concentró, se redisolvió en tolueno y se evaporó. El residuo se disolvió en acetato de etilo y NaHC03 acuoso saturado, lae capas se separaron y la capa inorgánica se extrajo con acetato de etilo, las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2S04 y se concentraron obteniéndoee 1.67 g (cuantitativo) de la N-metil-hidrazida del ácido (2S, 4R) -4- (4-metox?- bencilsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2- carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 486 (MH") . (Etapa 23) A 1.67 g (3.4 inmoles) de N-metil-hidrazida del ácido (2S, 4R) -4- (4-metox?-benc?lsulfañil) -1- (naftalen-2-sulfoml) -pirrol?dm-2-carboxíl?co, se añadieron 0.78 g (4.08 inmoles, 1.2 equiv.) de cloruro de toluensulfonilo, 0.7 ml (4.08 mmoles, 1.2 equiv.) de N-etil-dnsopropilamina, y 106 mg (0.17 mmoles, 0.05 eguiv.) de resma DMAP, eeguido de 324 mg (1.7 mmoles, 0.5 equiv.) adicionales de cloruro de toluensulfonilo deepués de 3 días. La reacción ee filtró, se añadió HCl ÍM y la fase inorgánica se extrajo con CH2C1 . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron con Na2S0^ y se concentraron. El producto crudo ee purificó mediante cromatografía flaeh empleando acetato de et?lo:hexano 1:2 obteniéndose 350 mg (13%) de la N-metil- N'N' -bis- (4-metil-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -4- (4-met?x?-benc?lsulfan?l) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en forma de un sólido blanco, EM: 794 (MH+) y 630 mg (29%) de la N-metil-N' - (4-metil-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -4- (4-metox?-bencilsulfanil) -1- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrolidm-2-carboxí-lico, en forma de un sólido de color blanco, EM: 640 (MH+) . Estos compuestos fueron desprotegidos de conformidad con el esquema de reacción 2 (etapa 4), dando: N-metil-N'N' -bis- (4-met?l-bencenosulfonil ) -hidrazida del acido (2S, R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfon?l) -pirrolidm-2-carbox?l?co, en forma de un sólido cristalino de color blanco, p.f. 110°C, EM: 674 (MH") . N-metil-N' - (4-met?l-bencenosulfon?l) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil ) -p?rrol?dm-2-carboxílico, en forma de un solido cristalino de color blanco, p.f. 103.5CC, EM: 520 (MH+). (etapa 25,26) De conformidad con el procedimiento (esquema de reacción 4, etapa 16), se preparo a partir de la N-metil-N' - (4-met?l bencenosulfonil ) -hidrazida del ácido (2S, R) -4- (4-metox?-benc?leulfan?l) -1- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, y bromuro de bencilo, la N-metil- N' -bencil-N' - ( 4-met?l-bencenosulfon?l ) -hidrazida del acido (2?,4R)-4-(4 metoxi-bencileulfañil ) -1- (naftalen-2-eulfonil ) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, la cual fue directamente desprotegida de conformidad con el esquema de reacción 2 (etapa 4) para dar la N-metil-N' -bencil-N' - (4-met?l-bencenosulfonil) -hidrazida del acido (2S, 4R) -4-mercapto-l-(naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol dm-2-carboxílico, en forma de un sólido de color blanco, p.f. 82.5°C, EM: 610 (MH") .
Esquema de Reacción 5 ) Nuil, DnDreriDMF \" . 2!)EtjSiMe??TFA SV sn 22) TFA, CH,CI2 15 23) I. RSOiCI, OüPr2N, DMAP, CH2C12, 2. separación 24)Et?SiHenTFA 25) NaH, BiiBr en DMF 26) EtjSiH cn TFA Ejemplo 3h: Síntesis de compuestos cíclicos (esquema de reacción 6) (etapa 27) A 150 mg (0.25 inmoles) de hidrazida del ácido (2S, 4R) -1- (naftalen-2-sulfon?l) -4-tnt?leulfaml-pirrolidin-2-carboxíl?co, en 65 ml de THF, ee añadieron 52 µl (0.3 mmoles, 1.2 equiv) de ?Pr2EtN y 29 µl (0.25 inmoles) de cloruro de 4-bromobut?ril a 0°C. La eolución se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, la solución se concentró y redisolvió en acetato de etilo/H20. La fase inorgánica se extrajo con acetato de etilo y, la fase orgánica se lavó con salmuera y se secó con Na2S04. La cromatografía de columna con acetato de etilo: hexano 1:1 proporción 170 mg (92%) de N' - ( 4-bromo-but?nl ) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -1- (naftalen-2-sulfon?l) 4-tr?t?lsulfanil-p?rrol?dm-2-carboxíl?co, la cual se disolvió en 120 ml de DMF y se trató con 17 mg (0.38 inmoles, 55% en aceite mineral) de NaH y la solución se agitó durante 2 horas, se concentró y se disolvió en acetato de et?lo/H20. La fase inorgánica se extrajo con acetato de etilo, la faee orgánica ee lavó con ealmuera y se secó con Na2SO<? . El producto crudo se purificó mediante cromatografía de columna obteniéndose 75 mg (45%) de la (2-oxo-p?rrolidm-l-il) -amida del ácido (2?,4R)-4-tpt?lsulfan?l-1- (naftalen-2-sulfonil ) -p?rrolidin-2-carboxí-lico, en forma de una espuma de color blanco y 40 mg (25%) de (2S, 4R) -1- [4-tptileulfan?l-l- (naftalen-2-sulfonil) -pirro- l?dm-2-carbon?l] -tetrah?dro-p?pdazm-3-ona, en forma de una espuma de color blanco. Loe dos compuestos fueron tratados separadamente en TFA (2 ml/mmol de trisulf ñilo) con 10 equivalentes de tpetilsilano a 0C a temperatura ambiente, hasta que no pudo detectarse la presencia de ningún educto más, obteniéndose la (2-oxo-??rrol?dm-l-?l) -amida del acido (2?, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil ) -p?rrol?dm-2-carboxílico, en forma de una espuma de color blanco, EM: 420 (MH1) y la (2?, 4R) -1- [ 4-mercapto-l- (naf alen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carbon?l] -tetrah?dro-p?pdazm-3-ona, en forma de una espuma de color blanco, EM: 420 (MH+), respectivamente . Esquema de reacción 6 27) Br (CH2)3C0C1, ?Pr2NEt, THF 28) NaH, DMF, TA seguido de la separación de los dos compuestos 29) Et3SiH, TFA emplo 4 : Síntesis en fase sólida de derivados de hidraz da Síntesis del bloque de construcción (esquema de reacción 21'" El éster 1-terc-butílico del ácido (2S, 4R) -4- (4-metoxi-bencilsulfanil) -pirrolidm-1, 2-dicarboxílico (19.48 g, 53 inmoles), se trató con TFA (80 ml ) en CH2C12 (120 ml) durante 15 minutoe. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y el aceite de color rojo oscuro resultante se trituró en éter dietílico/n-hexano (1:4 v/v, 860 ml). La sal precipitada se recogió y se secó a presión reducida (18.9 g) y se empleó directamente en el próximo etapa. : La sal de TFA (18.9 g, 53 inmoles) del ácido (2S,4R)-4- (4-metoxi-bencilsulfanil) -pirrolidin-2-carboxílíco, en 1,4-dioxano/H20 (300 ml) conteniendo NaHC03 (17.8 g, 212 mmoles), se trató con Fmoc-O?u (19.7 g, 58.3 mmoles) y se agitó magnéticamente durante 16 horas. La mezcla de reacción se diluyó con agua (400 ml) y se lavó con éter dietílico (2x) . Se añadieron acetato de etilo (400 ml) y HCl (25%, 50 ml) . La fase orgánica se extrajo y se lavó con H0, NaCl eaturada y se secó con MgSO,;. La filtración y concentración a presión reducida proporcionaron una espuma (22.5 g) .
Esquema de reacción 7 1. TFA 40%/CH2Cl2 ' 2. Fmoc-O?u, NaHC03, H20, 1,4-dioxan 3. TFA, triisopropilsilano La espuma de más arriba (20.7 g 42.3 minóles) se disolvió en TFA (350 ml) y se añadió triisopropileilano (43.5 ml) , La mezcla ee calentó a reflujo durante 0.5 horas y se concentró a presión reducida. Se añadieron dietil éter (100 ml) y n-hexanos (300 ml) obteniéndose un precipitado. El sobrenadante se decantó y el precipitado se secó a presión reducida y alto vacío obteniéndose una espuma de color blanco, de ácido (2S, 4R) -4-sulf ñil) -1- (fluorenilmetoxi-carbonil) -pirrolidin-2-carboxílico (9.6 g, EM: 370 MH+) .
Depvatización de la res a (esquema de reacción 8) El engarce 4- (a,a-d?fenilh?drox?met?l) benzoico (18.3 g, 60 inmoles) se activó empleando TPTU (17.8 g, 60 inmoles), DIEA (30.8 ml, 180 inmoles) en DMF (absoluto, 250 ml) durante 3 minutos. La mezcla se añadió a un matraz que contenía resma de bencidplamma (NH2 de carga, 0.9 mmoles/g, 44.4 g) y el matraz se sacudió durante 1 hora. La resina se recogió sobre un filtro y se lavó (3x alternando DMF/isopropanol) , CH2Cl2, éter, y se secó: 54.65 g, 0.65 mmoles/g (carga referida sobre el aumento de masa) . A la resma lavada con CH2C12 de más arriba (46.9 g, 30 mmoles), se añadió una mezcla de ácido (25, R) -4-eulfan?l-1- (naftalen-2-eulfonil) -p?rrol?din-2-carboxíl?co, (12.2 g, 36 mmolee) en CHC12 (abeoluto, 550 ml ) , TFA (80 ml). La mezcla de color rojo se agitó durante 1.5 horas y a continuación, se filtró la resina, se lavó (3x, alternando CH2Cl2/?sopropanol) , CH2C12, éter y se secó : 42 g, 0.65 mmoles/g (carga basada sobre el aumento de peso) . A la resma de más arriba, lavada con CH2C12 (33.5 g, 22 mmolee), se añadió una mezcla de ácido (2S, 4R) -4-sulfanil-1- ( fluorenilmetoxicarbonil) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co (9.7 g, 26 inmoles) en CHC12 (absoluto, 450 ml), TFA (67 ml ) . La mezcla de color rojo se agitó durante 1.5 horas y a continuación se filtró la res a, se lavó (3x, alternando CH?Cl2/?sopropanol) , CH2C1 , éter y se secó: 42 g, 0,59 mmoles/g (carga basada sobre el aumento de peso) Esquema de reacción 8 1. Acido 4- ( a, a-difenilhidroximetil) benzoico, tetrafluoroborato de 0- (l,2-dihidro-2-oxopirid-l-il) -N,N,N' ,N'-tetrametiluronio (TPTU) , base de Huenig 2. Acido (2?, 4R) -4-sulfanil-1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico ó ácido (2s, 4R) -4-sulfanil-l- (fluorenilmetoxicarbonil) -pirrolidin-2-carboxílico; TFA, CH2C12 Ejemplo 5: Quimica paralela sobre fase sólida (esquema de reacción 9) Procedimiento típico: etapas 1,2 Resina derivatizada con ácido. (2S, 4R) -4-sulfanil-1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrol?dm-2-carboxíl?co (0.4 g, 0.26 mmoles), de más arriba, se trató con DMF (absoluto, 5 ml), TPTU (0.18 g, 0.61 mmoles), DIEA (0.21 ml, 1.21 inmoles) durante 10 minutos. El DMF de la solución se eliminó al vacío y el matraz de reacción se cargó con hidrazida de benciloxicarbonilo (0.13 g, 0.77 mmoles) en DMF (absoluto, 3 ml) . La mezcla de reacción se agitó durante 0.5 horas y la res a se recogió en el filtro, se lavó (3x alternando DMF/isopropanol) , CH2C12, éter y ee secó. La resma (440 mg) ee trató con TFA 40%/CHCl2 (10 ml), triieopropilsilano (0.5 ml) durante 10 minutos y el filtrado se recogió y concentró a presión reducida y el residuo se liofilizó con ácido acético (10 ml) obteniéndose 41 mg del éster bencílico del ácido (2S, 4R) -N' - [ 4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carbonil] -hidrazmcarbo-xílico, en forma de un liofilizado de color blanco, EM: 508.3 (MNa^) . Otroe compuestos preparados en paralelo, mediante el procedimiento de más arriba, ee indican en la tabla 1.
Esquema de Reacción 9 Resina HHiHHCO 1 TPTU, hase de TFA/C H7C17, triisopropils M}|7N)IR4, TPTU, base de Huenlg, PMF NI^NÜJ.HJO, TTTU, DMF R'sOjCl, DHF da dos productos (R^R') los cuales se separaron después de separarlos de la resina Haluro de R5, DBU, DHF piperidina 20Í/DMF, y a continuación, X-haluro de R!, piridina en mF Procedimiento tipico: etapas 3,2 La resina derivatizada con el ácido (2S, 4R) -4-sulfanil-1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrol?din-2-carboxílico (0.5 g 0.33 mmoles), de más arriba, ee trató con DMF (absoluto 5 ml), TPTU (0.19 g, 0.65 mmoles), DIEA (0.22 ml, 1.3 mmoles), durante 10 inutoe . El DMF de la solución se eliminó al vacío y el matraz de la reacción ee cargó con hidrazida de 4-metoxibencenosulfonilo (0.20 g, 1.00 inmoles) en DMF (absoluto, 5 ml) . La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora y la resina se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/ieopropanol ) , CH-C12, éter y ee secó. La reeina (540 g) se trató con TFA 40ci/CH2Cl2, triiso-propilsilano (0.5 ml ) durante 15 minutos y el filtrado ee recogió y concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante CLAR preparativa de fase inversa, y las fracciones deseadas se reunieron y se liofilizaron con ácido acético (10 ml) obteniéndose la N' - (4-metoxi-bencenoeulfonil) -hidrazida del acida (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico, en forma de un liofilizado de color blanco, EM: 520.1 (MH") . Otros compuestos preparados en paralelo, mediante el procedimiento de más arriba, se indicaron en la tabla 1. Procedimiento típico etapas 3, 6, 2 La resina derivatizada can el ácido (2?, 4R) -4-sulfanil-1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico (4.3 g, 2.75 mmoles), de más arriba, se trató con DMF (absoluto 30 ml), TPTU (1.63 g, 5.50 minóles), DIEA (1.41 ml, 8.25 inmoles), durante 15 minutos. El DMF de la solución se eliminó al vacío y el matraz de la reacción se cargó con toluen-4- sulfonhidrazida (1.54 g, 8.25 inmoles) en DMF (absoluto, 30 ml) . La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas y la resma se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropanol) , CH2C12, éter y se secó. Un etapa de alquilación típico, por ejemplo A la resma (0.8 g, 0.45 mmoles), se añadió DMF (absoluto, 10 ml), diazabiciclo [5. .0] undec-7-eno (0.08 ml, 0.54 inmoles), bromuro de 2 , 5-difluorobencilo (0.11 g, 0.54 mmoles) , y la mezcla ee agitó durante 16 horas y la resma se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropa-nol), CHC1 , éter y se secó. La resma (0.16 g) se trató con TFA 40%/CH2Cl2 (10 ml) , triisopropilsilano (0.5 ml) durante 15 minutos y el filtrado se recogió y concentró a preeión reducida y el residuo se purificó mediante CLAR preparativa de fase inversa, y las fracciones deseadas se reunieron y se liofilizaran con ácido acético, obteniéndose la N' - (2, 5-d?fluorobencil-N' - (4-metil-bencenoeulfoml) -hidrazida del ácido (2?, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, , en forma de un liofilizado de color blanco, EM: 632.0 (MH+) . Otros compuestos preparados en paralelo, mediante el procedimiento de más arriba, se indicaron en la tabla 1. Se obtuvieron también los productoe dieubetituidos . Procedimiento típico: etapas 4,5,2 La resma depvatizada con el acida (2?, 4R) -4-sulfan?l-1- (naftalen-2-eulfonil) -p?rrol?dm-2-carboxílico (1.0 g, 0.65 mmolee), de más arriba, se (trató con DMF (absoluto 10 ml ) , TPTU (0.39 g, 1.3 inmoles), DIEA (0.45 ml, 2.6 mmoles), durante 10 minutos. El DMF de la eolución se eliminó al vacío y el matraz de la reacción se cargó con hidrato de hidrazma (25%, 0.42 ml, 3.25 mmolee) en DMF (absoluto, 8 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora y la resma se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/ ísopropanol) , CH2C12, éter y se secó. A esta resma (0.22 g, 0.14 mmoles), se añadió DMF (absoluto, 3 ml ) , DIEA (0.10 ml, 0.60 inmoles), cloruro de 4-fluorobencenosulfonilo (0.11 g, 0.56 inmoles), y la mezcla ee agitó durante 3.5 horas y la resma se recogió en el filtro, ee lavó (3x, alternando DMF/ieoprapanol ) , CH2C12, éter y se secó . La resma (0.25 g) se trató con TFA 40%/CH2Cl2 (10 ml) , trusopropilsilano (0.5 ml) durante 15 minutos y el filtrado se recogió y concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante CLAR preparativa de fase inversa, y las fracciones deseadas se reunieran y ee liofilizaran con ácido acético (10 ml) , obteniéndose la N' - (4-fluoro- bencenosulfoml-hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfan?l) -p?rrol?dm-2-carboxíl?co, en forma de un liofilizado de color blanco, EM: 510.2 (MH") . Otros compuestos preparados en paralelo, mediante el procedimiento de más arriba, se indicaron en la tabla 1. Procedimiento típico: etapas 3,7,2 La resma depvatizada con el ácido (2?, 4R) -4-sulfanil-1- (fluorenilmetoxicarbonil) -pirrol?dm-2-carboxílico (20.1 g, 11.9 inmoles), de más arriba, se trató con DMF (absoluto 150 ml), TPTU (7.1 g, 23.8 inmoles), DIEA (6.1 ml, 35.7 mmoles), durante 10 minutos. El DMF de la solución se eliminó al vacío y el matraz de la reacción se cargó con toluen-4-sulfonhidrazida (6.65 g, 35.7 inmoles) en DMF (absoluto, 100 ml) . La mezcla de reacción se agitó durante 16 horas y la resma ee recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropanol) , DMF. La retirada del grupo Fmoc se efectuó con piperidina 20%/DMF (2 x 5 minutos) . Siguieron las reacciones de substitución de la pirrolidina, por ejemplo, A eeta res a (0.60 g,- 0.30 inmoles) , se añadió DMF (absoluto, 6 ml), pipdma (0.12 ml, 1.50 inmoles), cloruro de 8-qumolmsulfon?lo (0.08 g, 0.36 mmoles), y la mezcla se agitó durante 16 horas y la resma se recogió en el filtro, se lavó (3x, alternando DMF/isopropanol), CH2C12, éter y se secó . La resina (0.25 g) se trató con TFA 40%/CH2Cl2 (10 ml), triisopropilsilano (0.5 ml) durante 15 minutos y el filtrado ee recogió y concentró a presión reducida y el residuo ee purificó mediante CLAR preparativa de faee inversa, y las fracciones deseadas se reunieron y se liofilizaron con ácido acético (10 ml), obteniéndose la N' - (4-fluoro-bence-nosulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfon?l) -p?rrol?dm-2-carboxílico, en forma de un liofilizado de color blanco, EM: 505.3 (MH") . Otros compuestos preparados en paralelo, mediante el procedimiento de más arriba, ee indicaron en la tabla 1.
EJEMPLO A Pueden elaborarse de una manera convencional, comprimidos conteniendo los siguientes ingredientes : EJEMPLO B Pueden elaborarse de una manera convencional, cápsulas conteniendo los siguientes ingredientes: EJEMPLO C Las soluciones para inyección pueden tener la siguiente composición: EJEMPLO D 500 mg de compuesto de fórmula I se suspenden en 3.5 ml de Myglyol 812 y 0.08 g de alcohol bencílico. Esta suspensión se introduce en un recipiente provisto de una válvula de dosificación. 5.0 g de freón 12 se introducen a presión en el recipiente a través de la válvula. El freón se disuelve en la mezcla de Myglyol -alcohol bencílico con agitación. Este recipiente de pulverización contiene aproximadamente unas 100 descargas simples que pueden aplicarse individualmente. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (31)

  1. R E I V I N D I C A C I O N E S Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Compuestos de fórmula general (I) caracterizado porque R1 es hidrógeno, alquilcarbonilo o arilcarbonilo; R2 es alquilo, alquilcicloalquilo, alquilcicloal-quilalquilo, cicloalquilo, haloalquilo, carboxialquilo, aminoalquilo, (mono y dialquil) aminoalquilo, alcoxialquilo, alcoxicarbonilalquilo, alquinilo, arilo, arilalquilo, arilalquil (alcoxicarbonil) lquilo, arilcarbonilalquilo, ariloxialquilo, arilalquenilo, aril (alcoxicarbonil) alquilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, heterociclilo o heterociclilalquilo; R3 ee hidrógeno, arilo, alquilo o arilalquilo, ariisulfonilo, heteroarilsulfonilo; R4 es hidrógeno, arilalquilo, alquilo, arilo, cicloal-quilo, cicloalquilalquilo, alquilsulfonilo, ariisulfonilo. arilalquilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, carboxialquilo, carboxialquilsulfonilo o alcoxicarbonilalquilo; o los grupos -NR3R4 ó R5- [N-N(R4) ] -R3 forman un anillo alifático saturado o sin saturar, de 5 ó 6 miembros; R5 es hidrógeno, alquilsulfonilo, ariisulfonilo, hete-roarilsulfonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, hete-roariloxicarbonilo, alquilcarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquilcarbonilo, heterociclilo, (mono o dialquilamino) -alquilcarbonilo, (mono y dialquil) aminosulfonilo, arilaminocarbonilo, alquilo, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, arilo, arilalquilo, arilalcoxicarbonilo, o heteroarilo; R6 es hidrógeno, alquilo, arilo o carboxialquilo; X es -(S(0)2-, -S(0)2-NH-, -C(0)-, -C (O) NR6 ó C (0) -0- -' y esteres farmacéuticamente aceptables, y/o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
  2. 2. Compuestos de fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1, caracterizados porque R1 es hidrógeno.
  3. 3. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 2, caracterizados porque R2 es alquilo, haloalquilo, alquilamino, alcoxilo, cicloalquilo, cicloalquilamino, arilo, arilalquilo, ariloxilo, arilalquilamino, arilalcoxilo, heteroarilo, amino, o (mono y dialquil) mino;
  4. 4. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, caracterizados porque R2 es alquilo, haloalquilo, alquilamino, alcoxilo, cicloalquilo, cicloalquilamino, arilo, arilalquilo o heteroarilo.
  5. 5. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 4, caracterizados porque R2 es arilo o heteroarilo .
  6. 6. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 5, caracterizados porque R2 es arilo.
  7. 7. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 6, caracterizados porque R2 es naftilo o fenilo, en donde fenilo está opcionalmente substituido con uno o más flúor o mediante un grupo fenilo.
  8. 8. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 7, caracterizados porque R2 es naftilo, 2 , 3 , 4 , 5 , 6-pentafluorobenceno o bifenilo.
  9. 9. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 8, caracterizados porque R3 es hidrógeno o alquilo;
  10. 10. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 9, caracterizados porque R3 es hidrógeno.
  11. 11. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 10, caracterizados porque R4 es hidrógeno, a ilalquilo, alquilo, aplsulfonilo, heteroarileulfonilo, cicloalquilalquilo o carboxialquilo.
  12. 12. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 11, caracterizados porque R4 es hidrógeno, alquilo, arilalquilo, cicloalquilo, aplsulfonilo o carboxialquilo.
  13. 13. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 12, caracterizados porque R4 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, carboxialquilo o arilalquilo .
  14. 14. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 13, caracterizados porque R4 es hidrógeno, alquilo o arilalquilo.
  15. 15. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 14, caracterizados porque R4 es hidrógeno, 2 , 4 , 5-trifluorobencilo, 2 , -difluorobencilo, bencilo, metilo, etilo, isopropilo, isobutilo, bencilo ó H02C-CH2-, ó cicloalquilpropilmetilo.
  16. 16. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 15, caracterizados porque R5 es hidrógeno, alquilcarbonilo, alcoxicarbonilo, alquilsulfonilo, arilo, arilalquilo, arilcarbonilo (mono y dialquilammo) alquilcarbonilo, (mono y d alquil) minoeulfonilo, arilalcoxicarbonilo, arilamino-carbonilo, ariisulfonilo, heteroarilcarbonilo, hete-roaplalquilcarbonilo, heteroaplsulfonilo, arilaminocarbo-nilo, heteroarilo o heterociclilo;
  17. 17. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 16, caracterizados porque R5 es arilo, arilalquilo, aplcarbonilo, arilalcoxilo, arilaminocarbonilo, aplsulfomlo, heteroarilcarbonilo, heteroarilalquil-carbonilo, heteroarilsulfonilo, arilammocarbonilo, heteroaplo o heterociclilo .
  18. 18. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 17, caracterizados porque R5 es arilsulfonilo, aplalquilo, heteroarilalquilcarbonilo, heteroarilsulfonilo .
  19. 19. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 18, caracterizados porque Rc' es 4-met?l-bencenosulfonilo, bencilo, 4-metox?bencenosulfonilo, (1H-mdol-3-?l) acetilo, tiofen-2-?lo, ó 3, 5-dimetil-?soxyzol-4-sulfon lo .
  20. 20. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 19, caracterizados porque X es -S02-, -C(0)-.
  21. 21. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 20, caracterizados porque X es -S02- .
  22. 22. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 21, caracterizados porque tienen la siguiente fórmula 00
  23. 23. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 22, caracterizados-porqué R1 es hidrógeno; R2 es naftilo o fenilo, en donde fenilo está opcionalmente substituido con uno o más flúor o mediante un grupo fenilo; R3 es hidrógeno o alquilo; R4 es hidrógeno, alquilo o arilalquilo; R5 ee ariisulfonilo, arilalquilo, heteroarilalquil-carbonilo, heteroarileulfonilo; y X ee -S02-,
  24. 24. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 23, caracterizados porque se seleccionan del grupo formado por •• a) N' -isobutil-N' - (4-metil-bencenoeulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2 -carboxílico; b) N '- (4-metil~bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S,4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carboxílico; c) N' -bencil -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l-(naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2 -carboxílico; d) N' -bencil-N' - (4-metil-fenilsulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4 -mercapto- 1- (naftalen-2 -sulfonil) pirrolidin-2-carboxílico; e) N' -metil-N' - (4 -metil -bencenosulfoml) -hidrazida del ácido (2S,4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2 -sulfonil) -pirrolidm-2 -carboxí1ico; f) N' -bencenosulfonil-hidrazida del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1- (naftalen-2-eulfoml) -p?rrolidm-2-carboxíl?co; g) N' - (4-metoxi-bencenosulfon?l) -hidrazida del ácido (2?,4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidm-2-carboxílico; h) N' -[ (lH-?ndol-3-?l) -acetil] -hidrazida del ácido (2S,4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -pirrol?d?n-2 -carboxí1ico,- i) N1 -t?ofen-2-sulfonil-h?draz?da del ácido (2S,4R)-4-mercapto-1- (naftalen-2 -sulfoml) -p?rrol?dm-2-carboxílico; ]) N' - (3 , 5-d?metil-?soxazol-4-sulfonil) -hidrazida del ácido (2S,4R) -4 -mercapto-1- (naftalen-2 -sulfonil ) -pirrolidm-2 -carboxí1ico; k) N' -ciclopropilmetil-N' - (4-metil-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-eulfonil) -pirrolí in-2 -carboxílico; 1) N' - (4-metil-bencenosulfon?l) -N' - (2, 4, 5-trifluorobencil) -hidrazida del ácido (2S-4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolídm-2 -carboxílico; m) N' - (2 , 5-difluoro-bencil) -N' - (4-met?l-bencenosulfo-nil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -p?rrolidm-2-carboxílico; n) N' -ieopropil-N' - (4 -metil -bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2 -carboxílico; o) ácido (2S,4R) - [N1 - [4 -mercapto- 1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2-carbonil] -N- (4-metil-bencenosulfonil) -hidrazino] -acético; p) N' -metil-N' - (4-metíl-bencenoeulfonil) -hidrazida del ácido (2S,4R) -1- (bifenil-4-sulfonil) -4-mercapto-pirrolidin-2-carboxílico; q) N' - (4-metil-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4 -mercapto-1- (2,3,4,5, 6 -pentafluoro-bencenosulfonil) -pirrolidin-2 -carboxílico; r) N' -bencil-N' - (4-metoxi-bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4 -mercapto-1- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2 -carboxílico; e) N' -metil-N' - (4 -metil -bencenosulfonil) -hidrazida del ácido (2S, 4R) -4 -mercapto- 1- (naftalen-2 -eulfonil) -pirrolidi -2 -carboxílico; y t) N-metil-N' -bencil-N' - (4-metil-bencenoeulfonil) -hidrazida del ácido (2S , 4R) -4-mercapto-l- (naftalen-2-sulfonil) -pirrolidin-2 -carboxílico .
  25. 25. Una composición farmacéutica caracterizada porque contiene un compueeto de conformidad con una cualquiera de lae reivindicaciones 1 - 24 y uno o más excipientee farmacéuticamente aceptablee.
  26. 26. El empleo de compuestos de las reivindicaciones 1 - 24 como ingredientes activos en la elaboración de medicamentos para la profilaxis y tratamiento de trastornos que están causados por la actividad de la enzima convertidora de la endotelma (ECE) , especialmente la isquemia miocárdica, falla congestiva del corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, ateroesclerosie, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma, enfermedades asociadas con indicaciones citostáticas, oftalmológicas y cerebro-protecto-ras, y para la protección de órganoe .
  27. 27. El empleo de compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1-24, para el tratamiento o profilaxis de enfermedades que están asociadas con la isquemia miocárdica, falla congestiva de corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoeepasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedadee renales, ateroesclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma, enfermedades asociadas con indicaciones citostáticas, oftalmológicas y cerebro-protectoras, y para la protección de órganos,
  28. 28. Compuestos de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, caracterizados para su empleo como substancias terapéuticamente activas, en particular en el contexto con enfermedades que están asociadas con la actividad zinc hidrolasa, tales como la isquemia miocárdica, fallo congestivo de corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, ateroesclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticas, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma, enfermedades asociadas con indicaciones citostáticas, oftalmológicas y cerebro-protectoras, y para la protección de órganos.
  29. 29. Un método para el tratamiento terapéutico y/o profiláctico de la isquemia miocárdica, fallo congestivo de corazón, arritmia, hipertensión, hipertensión pulmonar, asma, vasoespasmo cerebral, hemorragia subaracnoidea, pre-eclampsia, enfermedades renales, ateroesclerosis, enfermedad de Buerger, artritis de Takayasu, complicaciones diabéticae, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, desórdenes gastrointestinales, shock endotóxico y septicemia, y para la curación de heridas y control de la menstruación, glaucoma, enfermedades asociadas con indicaciones cítostáticas , oftalmológicas y cerebro-protector~5? y para la protección de órganos, caracterizado porque el método comprende la administración de un compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, a un ser humano o animal .
  30. 30. Un procedimiento para la elaboración de un compuesto como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 24, caracterizado porque comprende la reacción de un compuesto de fórmula III en donde R1, R2 y X son como se ha definido más arriba y A es un grupo protector HS- a) con HNR3NR4R5 para la introducción de una hidrazida: ó b) HNR3NR4R5 con R5 como grupo protector, seguido por la conversión o introducción de R3 y Reseguido opcionalmente por la conversión del R5 y/o del grupo R2-X en un R5 diferente y/o un grupo R -X y/o la desprotección y/o la liberación del tiol y en donde R3, Pb y R5 son como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1-21.
  31. 31. Un compuesto caracterizado porque es preparado de conformidad con el procedimiento de la reivindicación 30.
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