MXPA01012460A - Una cepa bacteriana, extractos de planta procesadas y composiciones probisticas para uso humano y veterinario. - Google Patents
Una cepa bacteriana, extractos de planta procesadas y composiciones probisticas para uso humano y veterinario.Info
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Abstract
Una formulacion que comprende por lo menos una fraccion volatil (VF) de un extracto vegetal, la fraccion volatil que se prepara por destilacion de vapor de extracto vegetal bajo presion reducida y en un bano de temperatura que no excede 38 degree C. El extracto puede ser obtenido a partir de hoja, vastagos, raices o frutos del a planta. La planta puede ser una verdura o hierba, tal como perejil, menta o eneldo. La verdura puede ser frijol de soya, alfalfa, ajo, remolacha y col. La formulacion puede ademas comprender propoleos u otro producto derivado de las abejas.
Description
UNA CEPA BACTERIANA, EXTRACTOS DE PLANTA PROCESADAS Y COMPOSICIONES PROBISTICAS PARA USO HUMANO Y VETERINARIO
DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención se relaciona a un microorganismo probiótico no patogénico, una formulación la cual comprende una solución acuosa de una fracción volátil (VF) preparada a partir del extracto de por lo menos una planta, y una composición probiótica la cual comprende el microorganismo probiótico o la formulación la cual comprende el microorganismo probiótico. Las formulaciones de la invención son capaces de sostener la viabilidad del microorganismo probiótico suspendidos en las mismas por lo menos un año, bajo refrigeración. Además, las formulaciones de la invención tienen un efecto incrementado en incremento de peso en animales. El microorganismo probiótico y las composiciones de la invención tienen actividad benéfica y terapéutica en el tracto gastrointestinal (GI) . Además, la invención se -relaciona al proceso para preparar las formulaciones y las composiciones probióticas de acuerdo a la invención y a sus usos diferentes. Bajo condiciones normales, la microflora del tracto gastrointestinal (GI) contribuye significativamente a la salud y el bienestar de un individuo. Es bien conocido que la microflora es una población compleja y diversa, la cual puede tener tanto efectos benéficos y dañinos en el individuo. En general, el feto en el útero es estéril, pero al paso a través de la vagina durante el nacimiento adquiere microorganismos lo cual resulta en la formación de una microflora en los intestinos. La microflora de los intestinos autóctona final la cual se estabiliza en el intestinos es una colección muy compleja de más de miles de microorganismos, la cual consiste de 400 tipos diferentes de bacterias [Fuller R.J. Applied Bacteriology 66:365-378 (1989)]. La composición de la flora se determina por el huésped y los factores microbianos, y aunque hay muchas bacterias las cuales sobreviven y crecen en el tracto GI, hay muchas las cuales no. Además, los organismos que sobreviven tienen que evitar el .. efecto de la peristálsis la cual normalmente hace fluir hacia fuera las bacterias con los alimentos. Esto puede ser logrado por las bacterias que se inmovilizan a si mismas por la unión a la pared de los intestinos, o por crecer en una velocidad que es mayor que la velocidad de eliminación por peristálsis . La microflora protege al individuo a partir de las infecciones provocadas por los patógenos. Se ha descrito este fenómeno bajo tales nombres como "antagonismo bacteriano", "interferencia bacteriana", "efecto de barrera", "resistencia a la colonización", "exclusión competitiva" y muchos otros. Esta flora protectora es muy estable. Sin embargo, es menos efectiva en los jóvenes y personas de la tercera edad y el paciente comprometido. Además, esto puede ser influenciado por ciertas dietas y factores ambientales, los tres más importantes que son higiene excesiva, terapia antibiótica y tensión. Bajo condiciones donde el equilibrio de la microflora de los intestinos se afecta adversamente, los probióticos llegan a ser de valor potencial al restablecer la flora de los intestinos y permite al huésped regresar a la normalidad . Los probióticos son una clase de microorganismos definidos como organismos microbianos vivos que afectan benéficamente los huéspedes animales y humanos. Los efectos benéficos incluyen la mejora del equilibrio microbiano de la microflora intestinal o mejora de las propiedades de la microflora autóctona. Los efectos benéficos de los probióticos pueden ser mediados por un efecto antagonístico directo contra grupos específicos de organismos, lo cual resulta en una disminución en números, por un efecto en su metabolismo o por estimulación de inmunidad. Los probióticos pueden suprimir las cuentas viables de un organismo indeseado al producir compuestos antibacterianos, por competir por nutrientes o por sitios de adhesión. Además, pueden alterar el metabolismo microbiano al incrementar o disminuir la actividad enzimática o pueden estimular el sistema inmune al incrementar los niveles de anticuerpos o incrementar la actividad de macrófagos. Se propone la presente invención para proporcionar un microorganismo probiotico no patogénico novedoso derivado ^ a partir de E. coli, una formulación la cual comprende una
5 solución acuosa de una fracción volátil preparada a partir del extracto de por lo menos una planta, y una composición probiótica la cual comprende el organismo probiotico suspendido en la formulación. La solicitud W095/16461 describe un probiotico o 10 composición de bacterias anaeróbicas efectivas para controlar o inhibir la colonización de Salmonella de animales domésticos. El probiotico incluye poblaciones o cultivos de 29 bacterias substancial y biológicamente puras, ínter aj.ia, E. coli. Sin embargo, la supresión del patógeno por el 15 probiotico o composiciones descritas en esta publicación requiere la acción combinada de un gran número de cepas bacterianas . ? ^ La solicitud W097/35596 describe la administración de una mezcla probiótica preparada recientemente obtenida al
20 mezclar un polvo el cual contiene Lactobacillus reuteri, Lactobacillus acidophilus y Bifidobacteriu infantis con un liquido. Se describe la mezcla para ser efectiva para evitar la diarrea infecciosa o la diarrea provocada por la terapia antibiótica en humanos. Las bacterias vivas secas por
25 congelación, están, sin embargo, en estado anabiótico. La necesidad para humedecer el microorganismo antes de la administración, con el fin de reestablecer su vitalidad, es una desventaja, ya que normalmente muchas bacterias no sobreviven a la rehidratación. Por otra parte, los organismos sobrevivientes no son inmediatamente activos metabólicamente, y no pueden sobrevivir las condiciones extremas, ácidas del estómago. La preservación de la biabilidad y la conservación de la actividad de los organismos probióticos por su formulación es la cuestión de numerosas publicaciones. La solicitud W098/26787 describe el incremento de una población residente de microorganismos que producen ácido láctico, preferentemente lactobaccillii, en el tracto GI de un animal al proporcionar lo mismo con ß-glucano, opcionalmente en combinación con el probiótico y/o microorganismos probióticos . La solicitud W097/34591 también describe ei incremento de la población residente de microorganismos, o la supresión de la población residente indeseada en un sitio seleccionado del tracto GI de un individuo, al proporcionar al individuo con un almidón modificado o no modificado seleccionado o mezclas de los mismos, el cual actúa como un portador para uno o más microorganismos probióticos y como un medio de crecimiento o mantenimiento para los microorganismos. Los elementos probióticos se enlazan al portador en una forma para proteger asi a los microorganismos durante el paso en el intestino grueso u otras regiones del tracto GI. Se ha descubierto inesperadamente que una especie simple de un microorganismo probiótico no patogénico derivado de E. cali es solo capaz de restablecer la flora GI normal del hombre y de una variedad de animales y pájaros. Se ha descubierto también sorpresivamente que este microorganismo puede ser conservado por mucho tiempo, en una forma activa metabólicamente y viable, en una formulación la cual comprende una solución de agua de fracciones volátiles de varios extractos vegetales. La composición probiótica la cual comprende el organismo probiótico en la formulación se encuentra que es efectiva en el tratamiento y la prevención de varios trastornos gastrointestinales. Se ha encontrado además inesperadamente que la formulación per se es efectiva como un incrementador de la ganancia de peso corporal y un estimulador inmune en mamíferos y pájaros. La presente invención se relaciona a un microorganismos probiótico no patogénico, es decir E. coli cepa BU-230-98 (No. de depósito en ATCC 202226) . La presente invención también se relaciona a una formulación la cual comprende una solución acuosa de una fracción volátil (VF) preparada a partir del extracto de por lo menos una planta. Las fracciones volátiles de los extractos vegetales se preparan por destilación de vapor del extracto vegetal bajo presión reducida y en una baño de temperatura que no excede 38 °C. La materia vegetal utilizada en las formulaciones de la invención puede ser cualquier fruta adecuada, verdura, hoja, vástago o raíz, y es preferentemente manzana, frutas cítricas, soya, remolacha, perejil, menta, eneldo, ajo, alfalfa y col. Las formulaciones de la invención pueden ser usadas como preparaciones veterinarias y aditivos de alimentos/alimentación, las cuales tienen actividad incrementada en la ganancia de peso corporal. Las formulaciones de la invención pueden ser usadas también como un medio de suspensión para los microorganismos microbióticos . Bajo refrigeración, las formulaciones de la invención pueden sostener la viabilidad de los microorganismos probióticos suspendidos en las mismas por lo menos un año. El término aditivo de alimentos/alimentación como se usa en la presente es para ser tomado para significar un aditivo de alimentos o aditivo nutricional para uso humano o un aditivo de alimentación o aditivo nutricional para uso cón animales de granja y aves, así como también otros animales domésticos.
La invención además se relaciona a las composiciones probióticas las cuales comprenden microorganismos microbióticos suspendidos en las formulaciones de la invención. Las composiciones microbióticas de la invención tienen actividad biológica benéfica y efectos terapéuticos en el tracto GI. Como las formulaciones de la invención, también las composiciones probióticas presentes pueden ser usadas como aditivos de alimentos/alimentación, como se define anteriormente. El aditivo de alimentos/alimentación de la invención, para estar en la formulación o composición de la invención, puede tener numerosas aplicaciones, inter alia, prevenir o tratar las infecciones gastroentéricas, tratar o evitar la diarrea por infección, diarrea crónica o diarrea provocada por la infección, por antibióticos o quimioterapia, tratar la enterocolitis, restablecer efectivamente la microflora del GI, tratar los síntomas dispépticos, incrementar la ganancia del peso corporal, estimular el sistema inmune en un sujeto, aliviar la intolerancia a la lactosa en sujetos que sufren de la misma, normalizar el metabolismo de alimentos del GI, tratar la constipación y/o reducir los niveles de colesterol sanguíneo. En aún un aspecto adicional, la invención se relaciona a un proceso para preparar una fracción volátil de un extracto vegetal, el proceso que comprende las etapas de: (a) triturar una materia vegetal para obtener una biomasa;
(b) mezclar la biomasa vegetal obtenida en la etapa (a) con agua en una cierta proporción, preferentemente, en una proporción en peso de 3 partes de agua a 1 parte de la biomasa vegetal y agitar los mismos por al menos 2 horas en temperatura ambiente; (c) destilar la mezcla obtenida en la etapa (b) bajo presión reducida y en un baño de temperatura que no exceda 38 °C; (d) recolectar la fracción volátil la cual puede ser diluida además en un amortiguador adecuado. Esta misma fracción puede constituir una formulación de la invención . La invención se relaciona también a un proceso para la preparación de las formulaciones de la invención, al mezclar varias fracciones volátiles de varios extractos vegetales y opcionalmente mezclarlos con agua, y aditivos adecuados, adyuvantes o portadores. La invención además proporciona un proceso para preparar las composiciones probióticas, al suspender por lo menos un microorganismo probiótico viable el cual tiene una actividad biológica benéfica y/o actividad terapéutica en el tracto GI, en la fracción volátil obtenida por el proceso de la invención o en una mezcla de varias de tales fracciones volátiles . Finalmente, la invención se relaciona al uso de por lo menos una fracción volátil (VF) de un extracto vegetal en la preparación de las formulaciones, aditivos de alimentos/alimentación y composiciones probióticas de la invención . La presente invención se relaciona a un microorganismo probiótico que es una bacteria no patogénica derivada de E. coli, la cual tiene una actividad fisiológica y/o terapéutica benéfica en el tracto GI y se deposita en ATCC bajo el no. de depósito 202226 y en DSMZ bajo e\ No. de depósito 12799. La presente invención se relaciona además a una formulación la cual comprende por lo menos una fracción volátil (VF) de un extracto vegetal, la fracción volátil que se prepara por destilación del extracto vegetal bajo presión reducida y en un baño de temperatura que no excede 38 °C. La materia vegetal a partir de la cual puede ser obtenida la fracción volátil puede ser cualquier parte adecuada de la planta tal como la fruta, hoja, vástago o raíz. Muchas plantas son adecuadas como una fuente para las fracciones volátiles, por ejemplo la manzana, cítricos, fríjol de soya, remolacha, col, ajo y alfalfa, así como también hierbas tales como perejil, menta y eneldo. Las formulaciones de la invención pueden además opcionalmente comprender una cantidad adecuada de una fracción volátil de un producto de apicultura tal como miel, propóleos u otro producto derivado de las abejas, el cual puede ser preparado en la misma forma como se describe en la presente para obtener fracciones volátiles a partir de los extractos-vegetales . Como se describirá con mayor detalle en los siguientes Ejemplos, la misma formulación puede ser usada como un aditivo de alimentos/alimentación. Se ha descubierto en la presente que tienen una actividad de incremento de la ganancia de peso y constituye un aspecto de la invención, De acuerdo a una modalidad particular de este aspecto de la invención, la formulación de incremento de ganancia en peso del animal o aditivo de alimentación comprende el agua destilada y las fracciones volátiles de alfalfa, frijol de soya, remolacha y eneldo, preferentemente en una proporción en volumen de las fracciones volátiles de 2:8:1:4. En un aspecto adicional, la invención se relaciona a una composición probiótica la cual comprende la formulación de la invención y por lo menos un microorganismo probiótico viable el cual tiene una actividad biológica terapéutica o benéfica en el tracto GI. Una ventaja particular de la composición probiótica de la invención se origina del hecho de que es una preparación liquida. Estando bajo condiciones biológicamente activas, la formulación sirve también como un medio de soporte para las bacterias vivas, opuesto a las formulaciones liofilizadas donde las bacterias están en una condición anabiótica. Como resultado, la composición probiótica de la invención es activa inmediatamente siguiendo la administración oral, iniciando con la porción superior del tracto GI, donde los efectos primarios de la mayoría de los patógenos intestinal tomar lugar, provocando el desarrollo de síndromes gastroentéricos adversos. Las composiciones probióticas de la invención pueden ser usadas también como preparaciones que incrementan el peso corporal o aditivos de alimentos/alimentación . Debe notarse que las bacterias diferentes a aquellas que pertenecen a la cepa BU-230-98 (no. de depósito de ATCC 202226, también depositada en DSM bajo el NO. 12799), pueden ser usadas con la formulación de la invención. Tales bacterias tienen un espectro muy amplio de actividad antagonística . También pertenecen al mismo grupo filogenético de la mayoría de los patógenos intestinal y comparten los mismos sistemas de sobrevivencia. Por lo tanto, la supresión y exclusión de los patógenos intestinales puede incluir muchos mecanismos diferentes, por ejemplo, la secreción de material antagonístico, competición para la utilización de nutrientes y competición para los receptores de adhesión. De esta forma, cualquier bacteria no patogénica la cual cumpla con estos criterios, puede ser usada en las composiciones probióticas de la invención. De acuerdo a un aspecto adicional de la invención, las composiciones probióticas de la invención pueden ser usadas para evitar o tratar las infecciones gastroentéricas . El término "infección gastroentérica" es para ser tomado para significar cualquier infección provocada por un patógeno entérico, el cual incluyen, inter alia, bacterias Gram negativas y Gram positivas. Al mejorar el equilibrio general y la salud del tracto GI, las formulaciones y las composiciones probióticas de la invención pueden ser instrumentales en profilaxis de también las infecciones GI provocadas por levaduras, virus y protozoarios . El término "cantidad terapéuticamente efectiva" o "cantidad efectiva" para propósitos de la presente es la cantidad determinada por tales consideraciones como que son conocidas en la técnica. La cantidad debe ser suficiente para permitir el restablecimiento eficiente de la microflora del GI llevando de esta forma a la normalización de la función del tracto GI . En una modalidad particular, la composición probiótica para evitar el desarrollo de las infecciones gastroentéricas comprende la formulación de la invención hecha a partir del agua destilada y las fracciones volátiles de alfalfa, frijol de soya, remolacha, eneldo y menta como se define en la presente, en una proporción en volumen de, por ejemplo, 5:1:5:15:1, y una cantidad terapéuticamente efectiva de una bacteria probiótica tal como E. coli No. de depósito de ATCC 202226 (idéntico con DSM 12799) . Un ejemplo especifico para una infección gastroentérica es aquella provocada por Salmonella la invención tiene una ventaja particular en prevenir o tratar las infecciones gastroentéricas provocadas por la misma. Además, el aditivo de alimentos o formulación de la invención, sola o en combinación con una cantidad efectiva de un microorganismo probiótico, tal como la cepa de E. noli No. de depósito de ATCC 202226 (idéntica con DSM 12799), puede ser usado para tratar o prevenir la diarrea de infección, diarrea crónica o diarrea provocada por antibióticos o quimioterapia . De acuerdo a una modalidad especifica adicional de la invención, tal composición probiótica para tratar la diarrea por infección puede comprender agua destilada y fracciones volátiles de alfalfa, frijoles de soya, remolacha, eneldo y menta en una proporción en volumen de, por ejemplo 5:1:5:15:1, y una cantidad terapéuticamente efectiva del No. de ATCC 202226 (DSMZ 12799) . La diarrea por infección puede ser provocada por factores numerosos, por ejemplo, por un microorganismo seleccionado de C. Difficile, Salmonella, particularmente S. Shigella, Campylobacter, E. coli, Proteus, Pseudomonas, Clostridium, Stap ylococcus entérico. Estos son unos cuantos de muchos agentes infecciosos.
Aún además, las composiciones probióticas de la invención pueden ser usadas para restablecer efectivamente la microflora GI en un sujeto en necesidad de tal tratamiento lo cual lleva a la normalización de la función del tracto GI. Tales composiciones pueden incluir, por ejemplo, agua destilada y fracciones volátiles de alfalfa, frijol de soya, remolacha, eneldo, menta, perejil y col, preferentemente en una proporción de fracciones volátiles de por ejemplo, 1:5:5:2:2:1, y una cantidad terapéuticamente efectiva de la bacteria probiótica no. de depósito de ATCC 202226 (DSM 12799) . Otros propósitos para los cuales las composiciones probióticas de la invención, las cuales comprenden por lo menos un probiótico el cual tiene un efecto terapéutico en el tracto gastroinestinal, incluyen el alivio de la intolerancia a la lactosa en sujetos que sufren de intolerancia a la lactosa, tratamiento de enterocolitis, tratamiento de constipación, para reducción de los niveles de colesterol en la sangre, para el tratamiento de síntomas dispépticos, y/o para la estimulación del sistema inmune en sujetos que sufren de un trastorno del sistema inmune, el cual puede ser un trastorno inmune provocado por la terapia inmunosupresiva. En un aspecto diferente, la invención se relaciona a un proceso para preparar una fracción volátil de un extracto vegetal, el proceso que comprende las etapas de: (a) triturar la materia vegetal para obtener una biomasa vegetal; (b) mezclar la biomasa vegetal obtenida en la etapa (a) con agua en una proporción en peso de 3 partes de agua a 1 parte de la biomasa vegetal y agitar los mismos por al menos 2 horas en temperatura ambiente; (c) destilar la mezcla obtenida en la etapa (b) bajo presión reducida y en un baño de temperatura que no excede 38 °C; y (d) recolectar la fracción volátil obtenida a partir de la destilación de vapor, la fracción que puede ser además diluida en un amortiguador adecuado. La fracción volátil de la invención puede ser mezclada con agua para dar el aditivo de alimento/alimentación o formulación de la invención. El aditivo de alimento/alimentación o formulación de la invención puede ser preparada también al mezclar más de una fracción volátil vegetal obtenida por el proceso de la invención. Esta mezcla puede ser mezclada además con agua. Las fracciones volátiles pueden ser preparadas a partir de cualquier frutal adecuada, verdura, hoja, vástago o raíz de una planta. La planta puede ser, por ejemplo, manzana, fruta cítrica, frijol de soy, remolacha, ajo, col o alfalfa, o una hierba tal como perejil, menta o eneldo. Debe indicarse que cuando es apropiado, la formulación puede además comprender las fracciones volátiles de los productos de apicultura tales como miel o propóleos u otros productos derivados de abejas. Estas fracciones volátiles pueden ser preparadas en la misma forma de las fracciones volátiles de1 extractos vegetales. De acuerdo al proceso de la invención, la etapa de 5 destilación es realizada preferentemente bajo presión reducida de 5-10 mbar. Como se indica anteriormente en la presente, el aditivo o formulación de alimento/alimentación de la invención puede además ser combinada con por lo menos un 10 agente probiótico, para dar las composiciones probióticas de
V,. la invención. De esta forma, el proceso de preparación de la invención puede también además comprender la etapa de suspender por lo menos un microorganismo probiótico el cual tiene una actividad terapéutica en el tracto GI en la 15 fracción volátil obtenida en la etapa (d) o en una mezcla de tales fracciones volátiles obtenidas como se describe anteriormente . De acuerdo a un proceso particular de la invención, el microorganismo probiótico suspendido puede ser la bacteria 20 novedosa de la invención, derivada de E. coli y depositada en
ATCC bajo el No. de depósito No. 202226 (y en DSM bajo el NO. de depósito 12799) . Finalmente, la invención se relaciona al uso de una fracción volátil (VF) de un extracto vegetal en la 25 preparación de un aditivo de alimento/alimentación, en donde se prepara la VF por destilación de vapor de un extracto vegetal o de un extracto de producto de apicultura tal como miel o propóleos en un baño de temperatura que no excede 38°C. La presente invención se define por las reivindicaciones anexas, los contenidos de la cual son para ser leídos como se incluyen dentro de la descripción de la especificación, y serán descritos ahora con mayor detalle en virtud de los siguientes ejemplos. Mientras que la descripción mencionada anteriormente describe en detalle solamente unas cuantas modalidades específicas de la invención, se entenderá por aquellos expertos en la técnica que la invención no se limita a las mismas y que pueden ser posibles otras variaciones en la composición sin alejarse del alcance y espíritu de la invención como se describe en la presente. EJEMPLOS Ejemplo 1 Preparación de la "fracción volátil" de extractos vegetales o extractos a partir de productos de apicultura Los vegetales frescos obtenidos de mercados comerciales son lavados completamente por agua corriente, cortados y molidos finamente en un mezclador industrial. Se agrega agua destilada a la biomasa vegetal en la proporción de 3 partes de agua a 1 parte de la masa vegetal en peso y se deja bajo agitación por al menos 2 horas en temperatura ambiente. Se transfiere entonces la mezcla en el matraz de evaporación de un evaporador giratorio y se evapora en la presión reducida (5-10 mbar) bajo tales condiciones que la temperatura del baño de agua no excede 38 °C, y aquella de la entrada del condensador es 2-5°C. Aproximadamente 2.5 litros del condensado (fracción volátil) se recolectan por un kg. de biomasa vegetal. Este material puede ser conservado bajo refrigeración por al menos 6 meses sin perder sus propiedades . Puede ser realizado el mismo ¦ procedimiento, reemplazando el material vegetal con productos de apicultura tales como miel o propóleos. Usualmente, cada "fracción volátil" es preparada a partir de un solo tipo de vegetales y usada en una dilución diferente para preparar mezclas diferentes para varios propósitos . Ejemplo 2 Crecimiento del organismo probiótico E. colí no. de depósito ATCC 202226 El organismo probiótico E. coli (depositado en ATCC bajo el No. 202226 el 3 de Mayo de 1999 y en DSM bajo el No. 12799 el 4 de Mayo de 1999) se hace crecer en el siguiente medio (g/1) : (NH4)3S04 5, KH2P04 13, Na2HPO« 13, MgCl2 3, CaCl2 0.3, extracto de levadura 10, peptona de soya 10, glucosa 5. se agregan continuamente los nutrientes adicionales (extracto de levadura 1, peptona y soya 2.5, glucosa 90) siguiendo el crecimiento del cultivo en tal forma que la concentración de la glucosa en el caldo de fermentación se mantiene en el nivel de 2 g/1. El pH del caldo de fermentación se mantiene neutral por la adición continua de NH4OH 4 N . Se realiza el cultivo en 30°C en un recipiente de fermentación estándar con aireación de 0.5 vvm por 16 horas, cuando el crecimiento llega a ser confluente. Este procedimiento resulta en 1010-10n células/ml. Se cosechan las células de E. coli por centrifugación, se vuelven a suspender en solución salina y reprecipitan . La biomasa microbiana puede ser mantenida en el refrigerados por 48 horas sin perder la viabilidad. Ejemplo 3 Preparación de la formulación de aditivo de alimentación/alimentos para el incremento acelerado de peso corporal en pájaros y animales. Ejemplo 4 Preparación del complemento alimenticio para la normalización de la función del tracto GI humano La mezcla contiene (ml/1) fracciones volátiles de: alfalfa 50, frijoles de soya 10, remolacha 50, eneldo 50, menta 20, perejil 20 y col 10. Se hace el equilibrio por agua destilada. Se suspenden las células de E. coli (ATCC 202226) (ejemplo 3) en la mezcla en la concentración celular de 1(T células/ml. Puede ser agregado el NaCl (4-10 g/1) para la mejora del sabor. Ejemplo 5 Preparación de la formulación del aditivo de alimentación para la profilaxis de infecciones del GI en pájaros y animales La mezcla contiene (ml/1) fracciones volátiles de: alfalfa 50, frijoles de soya 10, remolacha 50, eneldo 150 y menta 10. Se hace el equilibrio por agua destilada. Se suspenden las células de E. coli (ATCC 202226) (Ejemplo 2) en la mezcla en una concentración celular de 107 células/ml. NaCl (4-10 g/'l) puede ser agregado opcionalmente para la mejora del sabor. Ejemplo 6 Actividad antagonística de E. coli (ATCC 202226) contra Salmonella thyphymirium (ATCC) 14028) Las cajas de Petri que contienen Agar verde brillante modificado, un medio de crecimiento selectivo para Salmonella, se inoculan con S. typhimirium. Se hace un pozo de 9 mm de diámetro en el agar. Se deposita un volumen del complemento alimenticio (Ejemplo 4) en cada pozo, y se incuban las placas por 24 horas en 35°C. Se repite lo mismo, pero en lugar del complemento alimenticio, el fluido obtenido por su filtración a través de una membrana de filtro microbiológico (tamaño de poro de 0.45 µp?) se deposita en el pozo. Alrededor de cada pozo que contiene el aditivo alimenticio se observa una zona de inhibición (10-17 mm) sin colonias de S. typhimirium. No se observa ninguna zona de inhibición alrededor de los pozos que contienen el filtrado libre del organismo probiótico. Ejemplo 7 Actividad antagonistica de E. coli ATCC 202226 asi como también de su cepa progenitora £. coJi -17 contra Shigella sps Se hacen crecer por separado los cultivos de S. flexnery, S. sonnei, E. coli (ATCC 202226) y M-17 por separado en el Agar nutritivo por 18-20 horas a 37 °C. Se cosechan todos los cultivos en solución salina y se diluyen a la densidad óptica de 10 unidades Klett. Las alícuotas de los cultivos diluidos de la especies Shigella (1 mi) solas o en combinación con el cultivo diluido de E. coli (ATCC 202226) (1 mi) se siembran en tubos de prueba de taza de ventilación que contienen caldo nutritivo (5 mi) . Se incuban los tubos por 24 horas en 37 °C. Se determina el número de las unidades formadoras de colonias (CFU) de los patógenos y de E. coli (ATCC 202226) por colocar en placa los cultivos en agar nutritivo. Se muestran en la Tabla 1 los números CFU de dos especies de Shigella en el cultivo puro y en cultivos mezclados con ambas especies E. coli probióticas. Tabla 1 Organismo Crecimiento de Shigella CFU/ml probiótico S. flexnery S. sonnel E. coli ATCC <5xl04 <5xl04 202226 E. coli M-17 lxlO6 2xl06 Cultivo puro de 6xl06 2xl06 Shigella Ejemplo 8 Aplicación del complemento alimenticio (Ejemplo 4) y de Colibacterin (formulación seca de E. coli M-17) en pacientes hospitalizados con gastroenteritis Un grupo de 60 pacientes que desarrollan la gastroenteritis después de la hospitalización se dividen aleatoriamente en 3 subgrupos con una distribución similar de sexo, edad y severidad de los síntomas de gastroenteritis. Todos los pacientes reciben tratamiento soportivo normal, rehidratación, vitaminas, etc. La severidad de la condición no requiere tratamiento con antibióticos. El primer grupo de 20 pacientes recibe 10 mi del complemento alimenticio (Ejemplo 5) 3 veces diariamente 30 minutos antes de las comidas por 7 días. El segundo grupo del mismo número recibe Colibacterin (Colibacterinum siccum) como se recomienda por el productor (una dosis dos veces al día 30 minutos antes de la comida) y el tercer grupo no recibe ningún complemento. Se registra el inicio de la normalización (en días) de los síntomas de la gastroenteritis en todos los grupos y se muestran en la Tabla 2. Tabla 2
Colibacterin (Colibacterinum siccum) preparación seca por congelación de E. coli M-17 viva producida por BIOMED Ltd., Moscú, Rusia, y se recomienda para uso contra la diarrea [Vidal Handbook: Pharmaceutical preparations in Russia (N.B. Nikolaeva, B.P. Alperovich and V.N. Sovinov, Eds) AstraPharmService, 1997, Moscú, pág. 275). Los pacientes con infecciones GI severas de varias etiologías: salmonelosis, esqueriquiosis, shigelosis, infecciones con estafilococos e intoxicaciones con alimentos de etiología desconocida. En todos los pacientes se indica la hospitalización por un inicio agudo de la enfermedad y aparición de gastroenteritis aguda. El total de 186 pacientes se tratan con el complemento alimenticio y un grupo similar de 102 pacientes recibe tratamiento estándar. El inicio de la normalización (en días) de los síntomas de gastroenteritis en todos los grupos se registra y se muestra en la tabla 3. Tabla 3
En un estudio separado un grupo de 30 pacientes con tifoidea intestinal se trata con el complemento alimenticio. En 80% de los pacientes los síntomas de la enfermedad desaparece dentro de 3 días. Solamente en 3 casos se detiene el tratamiento del complemento debido al desarrollo de colitis crónica más severa.
Ejemplo 10 Aplicaciones del complemento alimenticio (Ejemplo 4) en pacientes con trastornos GI provocados por antibióticos
Los pacientes con trastornos GI severos se dividen en 2 grupos. El grupo I contiene 48 pacientes con enfermedad de úlcera péptica que desarrollan trastornos GI después del tratamiento con antibióticos contra H. pylori. El grupo II contiene 22 pacientes que desarrollan trastornos GI después del tratamiento con antibióticos de neumonía. Se da el complemento alimenticio (5 mi) 3 veces un día antes de las comidas por 7 días. En ambos grupos los síntomas de la diarrea desaparecen en 2-3 días en todos los pacientes. Después de la administración del complemento, se observa la normalización completa de la microflora intestinal en 84.5% de los pacientes. Se demuestra por un incremento dramático en lactobacilos y Bifidobacterias, la reducción en la cuenta general de E. coli, desaparición completa de E. coli hemolítica y otros patógenos tales como Staphylococci , Proteus vulgaris e incluso Candida sps. En el resto 15.5% de los pacientes, se observa una mejora significativa. Ejemplo 11 Aplicación del complemento alimenticio (Ejemplo 5) en pacientes con enterocolitis con radiación tardía Se da el complemento alimenticio (10 mi, 3 veces al día por 14 días, 30 minutos antes de las comidas) a 24 pacientes con cáncer de útero, colon y gástrico que desarrollan enterocolitis después de la terapia con radiación o una combinación de radiación y quimioterapia. Antes al uso del complemento alimenticio, todos los pacientes se quejan acerca de deseo frecuente y doloroso para defecar, heces fecales líquidas (4-12 veces al día) aparición de moco (9 casos) y sangre (3 casos) en las heces fecales. Dos o tres días después de la ingestión del complemento, todos los pacientes notan la pérdida de dolor y reducción en el número de defecaciones; las heces fecales tienen una apariencia normal. Cuatro a cinco días después se va el síndrome de la diarrea, cesa la aparición del moco y la sangre. El análisis sanguíneo muestra una fuerte mejora en los indicadores sanguíneos. En el grupo de control de un tamaño similar persisten los síntomas. Ejemplo 12 Aplicación del complemento alimenticio (Ejemplo 4) en pacientes con SIDA Los pacientes que sufren de SIDA desarrollan frecuentemente la diarrea crónica. Se le da a un grupo de tales pacientes 10 mi del complemento alimenticio (Ejemplo 5) 3 veces al día 30 minutos antes de las comidas por 20 días. El grupo de control no recibe complemento. Se muestran los resultados del tratamiento en la Tabla 4.
Tabla 4
Los pacientes que reciben el complemento alimenticio muestra normalización de la microflora intestinal: reducción en el número general de coliformes, desaparición de E. coli hemolitico, incremento en los números de Lactobacilli y Bifidobacteria, reducción en Candida sps. Ejemplo 13 Aplicación del aditivo para alimentos/alimentación 5 (Ejemplo 3) para incremento acelerado de peso en lechones saludables Se administra a los lechones saludables 3 mi per os del aditivo para alimentos/alimentación por lechón por día hasta el destete. El grupo que recibe el aditivo alimenticio ^ 10 gana en peso en el promedio de 1.0 kg por lechón más que el ^ grupo de control. Ejemplo 14 Aplicación del aditivo alimenticio (Ejemplo 5) en lechones saludables 15 Se administra a varios cientos de lechones saludables 3 mi per os del aditivo alimenticio por lechón en el primer y tercer día después del nacimiento y en el '^ destete. La mortalidad se corta por 50% comparado con el grupo de control que recibe tratamiento profiláctico estándar 20 con antibióticos. El grupo que recibe el aditivo alimenticio gana peso en el destete en el promedio de 0.39 kg por lechón más que el grupo de control Cuando se comparan el aditivo alimenticio y el tratamiento antibiótico en el mismo litro, la ganancia de peso en los lechones que obtienen el aditivo alimenticio se encuentra que es superior por 2.4 kg que en el control . Ejemplo 15 Aplicación del aditivo alimenticio (Ejemplo 4) en lechones que muestran diarrea Se les da a varios cientos de lechones que muestran diarrea diariamente 5 mi per os del aditivo alimenticio por lechón. El grupo de control del mismo tamaño se trata con antibióticos: advocina, gentiamicina, amoxicilina. Los síntomas de diarrea en el grupo que recibe el aditivo alimenticio desaparecen dentro de 1-2 días. No se observa mortalidad, y los lechones se desarrollan normalmente. Los antibióticos detienen la diarrea en la gran mayoría de lechones pero los lechones permanecen enanos en su desarrollo . Aproximadamente 70 lechones retardados, que reciben el tratamiento con antibióticos contra la diarrea por una semana, y generalmente considerados perdidos, se les da el aditivo alimenticio por tres días. Todos excepto dos sobreviven . Ejemplo 16 Aplicación del aditivo alimenticio (Ejemplo 4) en becerros saludables Se administran a becerros saludables de un día de edad 5 mi del aditivo alimenticio al día en la leche durante 7 días. Más del 95% de los becerros no desarrolla diarrea hasta que tienen 14 días de edad, cuando se diagnostican unos cuantos casos positivos para rotavirus. " Ejemplo 17 5 Aplicación del aditivo alimenticio (Ejemplo 6) en becerros que muestran diarrea Se les da a los becerros que desarrollan diarrea diariamente 10 mi del aditivo alimenticio por animal con la leche durante 3-5 días. Los síntomas de la diarrea 10 desaparecen dentro de 1-2 días en 90-95% de los becerros. En ^ el resto 5-10% la diarrea es provocada por virus. Se tratan estos becerros con antibióticos con resultados deficientes. Ejemplo 18 Aplicación del aditivo alimenticio (Ejemplo 6) en 15 bebés de borregos y cabras saludables Se les administra a los bebés de borregos y cabras saludables de un día de edad 3 mi del aditivo alimenticio al f'^ día en leche durante 7 días. En algunos casos se observan signos ligeros a moderados de diarrea. Estos signos 20 desaparecen usualmente espontáneamente o se tratan exitosamente con una dosis incrementada del aditivo alimenticio (5 mi) . Ejemplo 19 Aplicación del aditivo alimenticio (Ejemplo 5) en 25 bebes de borregos y cabras que muestran diarrea Se prueba el aditivo alimenticio en un rebaño que sufre de infecciones de E. coli patogénicas. En el año que precede el experimento, aproximadamente 90 de 120 bebes de borregos y cabras murieron de diarrea. El tratamiento con antibióticos es ineficaz, ya que la enfermedad se desarrolla de pronto y con mortalidad rápida. Se les da a los bebes de borregos y cabras que desarrollan diarrea diariamente 5 mi del aditivo alimenticio por animal con la leche durante 3- 5 días. Se trata un grupo de acoplamiento de animales, como se recomienda normalmente, con antibióticos. Los síntomas de diarrea desaparecen dentro de 1-2 días en aproximadamente 90% de los bebes de borregos y cabras que reciben el aditivo alimenticio. Su desarrollo adicional parece normal. El grupo de control que recibe antibióticos (gentamicina ) muestra resultados más deficientes. La diarrea en este grupo persiste, provocada por tratamiento repetido con antibióticos. El desarrollo del grupo de control se retrasa severamente. Ejemplo 20 Aplicación del aditivo alimenticio (Ejemplo 5 ) en aves Se agrega el aditivo alimenticio al agua para beber con la ingesta promedio de 0 . 01 mi del aditivo por día por pollo durante el periodo de reproducción ( 42-49 días) . Un incremento de 3 . 2 % en ganancia de peso, acompañado con 4 % de mejora en la conversión de alimentos se nota en pruebas controladas en pollos para asar. Se obtienen también excelentes resultados con pavos de 1 día de edad a 6 semanas. Cada pájara recibe 0.01 mi del aditivo por día. Una ganancia de peso de más del 10% se observa, junto con relación reducida de mortalidad. Los pájaros que todavía exhiben diarrea, se tratan con 0.1 mi por día del aditivo alimenticio, sin ningún tratamiento con antibióticos, y muestran una mejor recuperación a partir de pájaros de control los cuales se tratan con solamente antibióticos . Ejemplo 21 Aplicación del aditivo alimenticio (Ejemplo 5) en perros y gatos La aplicación de los aditivos alimenticios en cachorros resulta en el cese de los síntomas de la diarrea dentro de 24-48 horas.
Claims (1)
- REIVINDICACIONES 1. Una cepa de Escherichia coli BU-230-98 depositada en ATCC No. 20226 (DSM 12799) ^ 2. Una formulación está caracterizada porque 5 comprende por lo menos una fracción volátil FV de un extracto vegetal, la fracción volátil que se prepara por destilación de vapor del extracto vegetal bajo presión reducida y en un baño de temperatura que no excede 38°C. 3. Una formulación de conformidad con la 10 reivindicación 2, está caracterizada porque se obtiene el extracto a partir de hojas, vástagos, raices o frutos de la planta . 4. Una formulación de conformidad con la reivindicación 2 ó 3, está caracterizada porque la planta es 15 una verdura o hierba. 5. Una formulación de conformidad con la reivindicación 4, está caracterizada porque la verdura es frijol de soya, alfalfa, ajo, remolacha y col. 6. Una formulación de conformidad con la 20 reivindicación 4, está caracterizada porque la hierba es perejil, menta o eneldo. 7. Una formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, está caracterizada además opcionalmente porque comprende propóleos u otro producto 25 derivado de las abejas. 8. Un aditivo alimenticio veterinario para incrementar la ganancia de peso del animal está caracterizado porque comprende una formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7. 9. Un aditivo veterinario de conformidad con la reivindicación 8, está caracterizado porque consiste de una formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7. 10. Un aditivo veterinario de conformidad con la reivindicación 8 ó 9, está caracterizado porque comprende agua destilada y fracciones volátiles de alfalfa, frijoles de soya, remolacha y eneldo, preferentemente en una proporción de fracciones volátiles de 2:8:1:4 (v/v) . 11. Una composición probiótica está caracterizada porque comprende una formulación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, y una cantidad efectiva de por lo menos un microorganismo probiótico viable el cual tiene una actividad biológica o terapéutica benéfica en el tracto gastrointestinal. 12. Una composición probiótica de conformidad con la reivindicación 11, está caracterizada porque el microorganismo probiótico es E. coli. 13. Una composición probiótica de conformidad con la reivindicación 8, está caracterizada porque el microorganismo probiótico es la cepa de E. coli BU-230-98, ATCC No. de depósito 202226. 14. Una composición probiótica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, está caracterizada porque evita o trata las infecciones gastroentéricas . 15. Una composición probiótica de conformidad con la reivindicación 14, está caracterizada porque evita o trata la infección gastroentérica provocada por un patógeno entérico . 16. Una composición probiótica de conformidad con la reivindicación 15, está caracterizada porque el patógeno es una bacteria Gram negativa o bacteria Gram positiva. 17. Una composición probiótica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 16, está caracterizada porque comprende agua destilada y fracciones volátiles de alfalfa, frijoles de soya, remolacha, eneldo y menta, preferentemente en una proporción de 5:1:5:15:1 (v/v) . 18. Una composición probiótica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, está caracterizada porque evita o trata la infección gastroentérica por Salmonella . 19. Una composición probiótica de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, está caracterizada porque evita o trata la diarrea por infección, diarrea crónica o la diarrea que resulta de la terapia con antibióticos . 20. Una composición de conformidad con la reivindicación 19, para tratar la diarrea por infección, la cual está caracterizada porque comprende agua destilada y fracciones volátiles de alfalfa, frijoles de soya, remolacha, eneldo y menta, preferentemente en una proporción de 5:1:5:15:1 (v/v) . 21. Una composición de conformidad con la reivindicación 20, está caracterizada porque la diarrea por infección es provocada por C. Difficile, Salmonella, particularmente S. Shigella, Campylobacter, E. coli, Proteus, Pseudomonas o Clostridium. 22. Una composición de conformidad con la reivindicación 11, para restablecer efectivamente la microflora intestinal en un sujeto, normalizando de esta manera la actividad fisiológica del tracto gastrointestinal. 23. Una composición probiótica para la normalización de la función del tracto gastrointestinal de conformidad con la reivindicación 22, está caracterizada porque comprende agua destilada y en donde las fracciones volátiles son fracciones volátiles de alfalfa, fríjoles de soya, remolacha, eneldo, menta, perejil y col, preferentemente en una proporción de fracciones volátiles de 1:5:5:2:2:1, y el microorganismo probiótico es la cepa no patogénica de E. coli BU-230-98, No. de depósito en ATCC 202226. 24. Una composición probiótica de conformidad con la reivindicación 11, está caracterizada porque tiene una actividad antitumor, capaz de evitar el desarrollo de las células tumorales y/o de suprimir el crecimiento de las células tumorales. 25. Una composición probiótica de conformidad con la reivindicación 11, está caracterizada porque comprende tratar los síntomas dispépticos. 26. Una composición probiótica de conformidad con la reivindicación 11, está caracterizada porque estimula la respuesta inmune en un paciente que sufre de un trastorno inmune . 27. Una composición probiótica de conformidad con la reivindicación 26, está caracterizada porque el trastorno inmune resulta de la terapia de supresión de la respuesta inmune . 28. Una formulación líquida de conformidad con la reivindicación 2, está caracterizada porque tiene una vida media larga. 29. Una composición probiótica líquida de conformidad con la reivindicación 11, está caracterizada porque tiene una vida media larga. 30. Un proceso para preparar una fracción volátil de un extracto vegetal, está caracterizado porque comprende las etapas de: V. a) triturar una planta o parte de la planta 5 para dar una biomasa vegetal; b) mezclar la biomasa obtenida en la etapa (a) con agua en una proporción en peso de 3 partes de agua a 1 parte de biomasa y agitar la misma por al menos 2 horas en temperatura ambiente; 10 c) destilar en vapor la mezcla obtenida en la etapa (b) bajo presión reducida y en un baño de temperatura que no exceda 38 °C; y d) recolectar la fracción volátil obtenida a partir de la destilación de vapor, la fracción puede además 15 ser diluida con un amortiguador adecuado. 31. Un proceso de conformidad con la reivindicación 30, está caracterizado porque se prepara una formulación la ^-^ cual consiste de una fracción volátil de un extracto vegetal, opcionalmente además que comprende mezclar la fracción 20 volátil obtenida en la etapa (d) con portadores o diluyentes fisiológica o veterinariamente aceptables. 32. Un proceso para preparar una formulación está caracterizado porque comprende por lo menos una fracción volátil de un extracto vegetal el cual comprende mezclar 25 diferentes fracciones volátiles de extractos vegetales como se obtienen en la etapa (d) de conformidad con la reivindicación 30, y opcionalmente que además comprende agregar a la mezcla aditivos, portadores o diluyentes fisiológica o veterinariamente aceptables. 33. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 30 a 32, está caracterizado porque se obtiene el extracto vegetal a partir de hojas, vástagos, raices o frutos de la planta. 34. Un proceso de conformidad con la reivindicación 33, está caracterizado porque la planta es una verdura o hierba . 35. Un proceso de conformidad con la reivindicación 34, está caracterizado porque la verdura se selecciona de soya, alfalfa, ajo, remolacha y col. 36. Un proceso de conformidad con la reivindicación 34, está caracterizado porque la hierba es perejil, menta o eneldo . 37. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 32 a 36, está caracterizado porque el aditivo es propóleo u otro producto derivado de las abejas adecuado. 38. Un proceso de conformidad con la reivindicación 30, está caracterizado porque se realiza la destilación en una presión reducida de 5-10 mbar. 39. Un proceso de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 30 a 32, está caracterizado porque además comprende la etapa de suspender por .lo menos un microorganismo probiótico viable el cual tiene actividad biológica o terapéutica benéfica en el tracto gastrointestinal en la fracción volátil obtenida en la etapa (d) de la reivindicación 30 ó en la mezcla de tales fracciones volátiles obtenidas por el proceso de conformidad con la reivindicación 32. 40. El proceso de conformidad con la reivindicación 38, está caracterizado porque el microorganismo probiótico es la cepa de E. coli no patogénica BU-230-98, ATCC No. de depósito 202226. 41. El uso de una fracción volátil VF de un extracto vegetal preparado por destilación de vapor del extracto vegetal en un baño de temperatura que no excede 38 °C en la preparación de un aditivo para alimento/alimentación. 42. Una formulación está caracterizada porque comprende una fracción volátil de por lo menos un extracto vegetal, substancialmente como se describe en la especificación . 43. Un proceso para preparar un aditivo para alimentos/alimentación está caracterizado porque comprende por lo menos una fracción volátil de un extracto vegetal, substancialmente como se describe en la especificación. 44. El uso de una composición que comprende por lo menos una fracción volátil de ur. extracte vegetal preparado por destilación de vapor del extracto vegetal en un baño de temperatura que no excede 38 °C, y un microorganismo probiótico no patogénico, viable, en la preparación de un aditivo para alimento/alimentación. 45. Un proceso para preparar una composición probiótica está caracterizado porque comprende por lo menos una fracción volátil de un extracto vegetal y un microorganismo probiótico no patogénico, viable, substancialmente como se describe en la especificación.
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