MXPA01010247A - Composiciones antifungosas de pseudomicina y metodos para su uso. - Google Patents

Abstract

Se describen metodos y composiciones para el tratamiento de infecciones fungicas que incluye formulaciones de una pseudomicina o un agente antifungico relacionado y una ciclodextrina. Las composiciones son particularmente utiles en aplicaciones farmaceuticas para reducir los efectos adversos.

Description

COMPOSICIONES ANTIFUNGOSAS DE PSEUDOMICINA Y MÉTODOS PARA SU USO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con métodos y composiciones para el tratamiento de infecciones fúngicas que incluyen formulaciones de una pseudomicina o un lipodepsidecapéptido y una ciclodextrina, en particular, hidroxipropil-ß-ciclodextrina o sulfobutiléter-ß-ciclodextrina. ANTECEDENTES Las infecciones fúngales o fúngicas son una causa significante de enfermedad, degradación de calidad de vida, y mortalidad entres seres humanos, particularmente para pacientes inmuno-comprometidos. La incidencia de infecciones fúngicas en seres humanos ha incrementado mucho en los últimos 20 años. Esto es en parte debido al número incrementado de gente con sistemas inmunológicos debilitados o devastados por trasplantes de órganos, quimioterapia de cáncer, SIDA, edad, y otros trastornos o condiciones similares. Tales pacientes están propensos a ataques por patógenos fúngicos que son frecuentes por toda la población pero se mantienen en control mediante un sistema de funcionamiento inmunológico. Estos patógenos son difíciles Ref: (132848) para controlar debido a que algunos agentes antifúngicos existentes son ya sea altamente tóxicos o solamente inhiben actividad fúngica. Por ejemplo, los polienos son funguicidas pero tóxicos; mientras, los azoles son mucho menos tóxicos pero únicamente fungistáticos . De manera más importante, han existido reportes recientes de cepas de azol y polieno resistentes de Candida que limitan severamente las opciones de terapia contra tales cepas. Las pseudomicinas, una clase de nuevos agentes antifúngicos, muestran grandes promesas para tratar infecciones fúngicas en una variedad de pacientes. Las pseudomicinas son productos naturales derivados de aislados de Pseudomonas syringae. La P. syringae es una familia grande de la bacteria de las plantas que ha sido la fuente de diversas sustancias bioactivas, tales como bacitracina y las síringomicinas . Las cepas naturales y los mutantes generados de transposon de P. syringae producen compuestos con actividad antifúngica. Un mutante regulador generado de transposon de la cepa de tipo silvestre P. syringae 174, conocida como MSU 16H (ATCC 67028), produce diversas pseudomicinas. Las pseudomicinas A, B, C y C han sido aisladas y purificadas y sus estructuras han sido caracterizadas por métodos que incluyen la secuenciación de aminoácidos, RMN, y espectroscopia de masa y han sido mostradas para poseer actividad antifúngica de amplio espectro, incluyendo actividad contra patógenos fúngicos importantes en tanto humanos como en plantas. Véase, por ejemplo, Ballio et al., "Novel bioactive lipodepsipeptides from Pseudomonas syringae: the pseudomycins, " FEBS Letters, 355, 96-100, (1994) y la Patente de los Estados Unidos No. 5,576,298. Las pseudomicinas, las siringomicinas, y las siringostatinas representan estructuralmente distintas familias de compuestos antifúngicos. Hasta ahora, no se han desarrollado las formulaciones de pseudomicinas y agentes antifúngicos relacionados de P. syringae que son efectivos para la terapia antifúngica. Típicamente la inyección de una pseudomicina está acompañada por efectos secundarios adversos no aceptables tales como irritación en el sitio de inyección. Permanece una necesidad para una composición de una pseudomicina o un agente antifúngico relacionado que se puede utilizar para el tratamiento de infecciones fúngicas sin los efectos secundarios adversos observados en ciertas formulaciones de pseudomicinas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con un método y una composición efectiva para la administración de una pseudomicina o un agente antifúngico relacionado, a un paciente que necesita del mismo. El método incluye tratar una infección fúngica administrando una cantidad efectiva de una composición que incluye una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado y la hidroxipropil-ß-ciclodextrina o sulfobutiléter-ß-ciclo-dextrina. El método es efectivo para reducir los síntomas de la infección fúngica y, de preferencia, mata el hongo que provoca la infección. El método es efectivo contra infecciones de hongos que incluyen Candida spp . , Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumiga tus , e Histoplasma capsula tum. En una segunda modalidad, el método reduce los efectos adversos de la inyección de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado administrando la pseudomicina o un agente antifúngico relacionado en una composición que incluye hidroxipropil-ß-ciclodextrina o sulfobutiléter-ß-ciclodextrina . En otra modalidad, el método incluye administrar dosis relevantes toxicológicamente de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngíco relacionado en una composición que incluye la pseudomicina y la hidroxipropil-ß-ciclodextrina o sulfobutiléter-ß-ciclodextrina. La composición del método incluye una pseudomicina o agente antifúngico relacionado, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado y la hidroxipropil-ß-ciclodextrina o sulfobutiléter-ß-ciclodextrina. Tal composición es efectiva para el tratamiento o reducción de los síntomas de infecciones fúngicas, para la reducción de los efectos adversos de la inyección de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado y para la administración de dosis relevantes toxicológicamente de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado. La composición incluye la ciclodextrina en un exceso molar sobre la pseudomicina o un agente antifúngico relacionado, de preferencia en al menos aproximadamente dos veces un exceso molar y es adecuada para la administración parenteral. La composición puede incluir excipientes tal como cloruro de sodio, manitol o dextrosa que ajusta la toxicidad de la composición. Las composiciones que contienen una pseudomicina o un agente antifúngico lipodepsidecapéptido, o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable, en combinación con una hidroxialquil-ß-ciclodextrina o una sulfoalquiléter-ß-ciclodextrina pueden ser utilizadas para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección fúngica.

Definiciones Como se utiliza en la presente, el término "pseudomicina" se refiere a compuestos que tienen la siguiente fórmula I: I donde R es una porción lipofílica. La porción lipofílica incluye alquilo de C9-C15, hidroxialquilo de C9-C15, dihidroxi-alquilo de C9-C15, alquenilo de C9-C15, hidroxialquenilo de C9-C15, o dihidroxialquenilo de C9-C15. Los compuestos de pseudomicina A, A' , B, B' , C, C están representados por la fórmula I anterior, donde R es como se define a continuación. Pseudomicina A R = 3, 4-dihidroxitetradecanoilo Pseudomicina A' R = 3, 4-dihidroxipentadecanoato Pseudomicina B R = 3-hidroxitetradecanoilo Pseudomicina B' R = 3-hidroxidodecanoato Pseudomicina C R = 3, 4-dihidroxihexadecanoilo Pseudomicina C R = 3-hidroxihexadecanoilo Como se utiliza en la presente, el término "lipodepsidecapéptido" se refiere a compuestos que tienen la fórmula II: II donde R es una porción lipofílica. La porción lipofílica incluye alquilo de C9-C15, hidroxialquilo de C9-C15, dihidroxi-alquilo de C9-C15, alquenilo de C9-C15, hidroxialquenilo de C9-C15, o dihidroxialquenilo de C9-C15. De preferencia, la porción lipofílica es alquilo de Cu. Los grupos alquilo, hidroxialquilo, dihidroxialquilo, alquenilo, hidroxialquenilo o dihidroxialquenilo pueden ser ramificados o sin ramificar. De preferencia, la secuencia de aminoácidos del anillo depsidecapéptido es treonina-alanina-treonina-glutamina-homoserina-ácido deshidroarninobutírico-alanina-deshidroalanina-treonina-arginina, referida en la presente como "decapéptido 25-B1" o "Thr-Ala-Thr-Gln-Xaa-Xaa-Ala-Xaa-Thr-Arg (SEC. DE IDENT. NO:l)". Como se utiliza en la presente, el término "agente A antifúngico de decapéptido 25-B1" se refiere al depsidecapéptido específico que tiene la secuencia de aminoácidos preferido SEC. DE IDENT. NO: 1 y R es un alquilo de Cu sin ramificar (es decir, R = - (CH2) ?oCH3) . Cualesquiera derivados o análogos de las pseudomicinas descritas en lo anterior y pseudomicinas relacionadas (por ejemplo, lipodepsidecapéptidos) son también considerados para estar dentro del espíritu de la presente invención. Aunque una conformación específica está representada en lo anterior, otros estereoisómeros y diastereoisómeros están también contemplados para estar dentro del espíritu de la presente invención.

DESCRIPCIÓN DETALLADA Pseudomicinas y Agentes Antifúngicos Relacionados Como se utiliza en la presente, la pseudomicina (PS) se refiere a uno o más miembros de una familia de agentes antifúngicos que han sido aislados de la bacteria Pseudomonas syringae. Una pseudomicina es un lipodepsipéptido, un péptido cíclico que incluye uno o más aminoácidos inusuales y que tienen una o más cadenas laterales hidrofóbicas o de ácido graso anexadas. Específicamente, las pseudomicinas son lipodepsinanopéptidos, con una porción de péptido cíclica encerrada por un enlace lactona y que incluye los aminoácidos inusuales 4-clorotreonina (CIThr) , ácido 3-hidroxiaspártico (HOAsp) , ácido 2, 3-deshidro-2-aminobutírico (Dhb), y ácido 2, 4-diaminobutírico (Dab). Se cree que estos aminoácidos inusuales están implicados en características biológicas de las pseudomicinas, tal como estabilidad en el suero y su acción destructiva. Las pseudomicinas incluyen la pseudomicina A, pseudomicina A', pseudomicina B (PSB) , pseudomicina B' , pseudomicina C, y pseudomicina C . Cada una de estas pseudomicinas tiene el mismo núcleo de péptido cíclico, pero difieren en la cadena lateral hidrofóbica unida a este núcleo. Las pseudomicinas A, A' , B, B' , C y C han sido cada una aislada y purificada y sus estructuras han sido caracterizadas por métodos que incluyen la secuenciación, RMN y espectrometría de masa. (Véase, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 5,576,298, expedida el 19 de noviembre de 1996 a Strobel et al.; Harrison et al.,) "Pseudomycins, a family of novel peptides from Pseudomonas syringae possessing broad-spectrum antifungal activity," J. Gen . Microb±ology, 137, 2857-2865 (1991); Ballio, A., et al., "Novel bioactive lipodepsipeptides, from Pseudomonas syringae: the pseudomycins," FEBS Letters, 355, 96-100, (1994); y Coiro, V.M., et al., "Solution conformation of the Pseudomonas syringae MSU 16H phytotoxic lipodepsipeptide Pseudomicyn A determined by computer simulations using distance geometry and molecular dynamics from NMR data," Eur. J. Biochem., 257(2), 449-456 (1998) . La actividad antifúngica debido a diversas pseudomicinas se delinea a P. syringae que lleva un transposon conocido como Tn 903, que codifica la resistencia a la kanamicina. Son conocidos la secuencia de y métodos para manipular el transposon Tn 903. Oka et al., J. Mol . Biol . 147, 217-226 (1981) ; "Nucleotide sequence of the kanamycin resistance transposon Tn 903." Métodos para el crecimiento de varias cepas de P. syringae y su uso en la producción de agentes antifúngicos tales como pseudomicinas se describen en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. de Serie PCT/US00/08728 por Matthe D. Hilton, et al., intitulada "Producción de Pseudomicina Por Pseudomonas Syringae" presentada a la fecha con la misma y descrita más abajo para la producción de las pseudomicinas y lipodepsidecapéptidos a partir de materiales biológicos en depósito (ver Ejemplos) . Las pseudomicinas A' y B' se describen en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. de Serie PCT/US00/08727, por Palaniappan Kulanthaivel et al., intitulada "Productos de Pseudomicina Naturales" presentada a la fecha con la misma y puede ser producida utilizando los procedimientos generales descritos más abajo. Cada una de las referencias citadas en este párrafo se incorpora específicamente en la presente por referencia . Las pseudomicinas varían en estructura y propiedades. Las pseudomicinas exhiben actividad contra una amplia variedad de hongos y también exhiben toxicidad por lo general aceptable. Comparada con las otras pseudomicinas, la pseudomicina B tiene mayor potencia contra ciertos hongos y un nivel inferior de toxicidad. Por lo tanto, para las formulaciones y métodos presentes, se prefiere la pseudomicina B. La estructura de la pseudomicina B está representada por la Fórmula I anterior donde R = 3-hidroxitetradecanoilo. La pseudomicina B tiene un anillo nonapéptido cíclico que tiene las secuencias Ser-Dab-Asp-Lys-Dab-Thr-Dhb-HOAsp-ClThr, más específicamente, L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z-Dhb-L-Asp(3-0H)-L-Thr (4-C1) con el grupo carboxilo de la CIThr y el grupo hidroxilo de la serina encerrada en el anillo con un enlace lactona. El grupo amina de la serina forma un enlace amida con el carboxilo de una porción de 3-monohidroxitetradecanoilo. El grupo carboxilo de la serina forma un enlace amida con la Dab del anillo. Como se utiliza en la presente, los agentes antifúngicos relacionados con las pseudomicinas incluyen agentes antifúngicos lipodepsidecapéptidos producidos por Pseudomonas syringae . Un representante de esta clase de compuestos, agente A antifúngico decapéptido 25-B1, ha sido purificado y su estructura se determina. Los agentes antifúngicos lipodepsidecapéptidos, tales como el agente A antifúngico decapéptido 25-B1, se describen en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. de Serie PCT/US00/08724, por Palaniappan Kulanthaivel et al. intitulada "Agentes Antifúngicos Aislados De Pseudomonas Syringae" presentada a la fecha con la misma y se puede producir utilizando los procedimientos generales descritos más abajo. Esta solicitud de patente se incorpora específicamente en la presente por referencia.

Método para la Producción de Pseudomicina Para producir una o más pseudomicinas de una cepa de tipo silvestre o mutante de P. syringae, el organismo se cultiva con agitación en un medio nutriente acuoso que incluye una cantidad efectiva de tres o menos aminoácidos. Los tres o menos aminoácidos son de preferencia ácido glutámico, glicina, histidina, o una combinación de los mismos. En una modalidad preferida, los aminoácidos incluyen glicina y, opcionalmente, uno o más productos de papa y un lípido. El cultivo se conduce bajo condiciones efectivas para el crecimiento de P. syringae y producción de la pseudomicina o pseudomicinas deseadas. Las condiciones efectivas incluyen temperatura de aproximadamente 22 °C a aproximadamente 27 °C, y una duración de aproximadamente 36 horas a aproximadamente 96 horas. Cuando se cultiva en los medios tales como aquellos descritos en la presente, la P. syringae puede crecer, en densidades celulares de hasta aproximadamente 10-15 g/1 de peso seco y produce pseudomicinas en cantidades totales en al menos aproximadamente 10 µg/ml, de preferencia al menos de aproximadamente 40 µg/ml, de más preferencia aproximadamente 500 µg/ml o más.

Controlando la concentración de oxígeno en el medio durante el cultivo de P. syringae es ventajoso para la producción de una pseudomicina. De preferencia, los niveles de oxígeno se mantienen en aproximadamente 5% a aproximadamente 50% de saturación, de más preferencia aproximadamente 30% de saturación. Rociando con aire, con oxígeno puro, o con mezclas gaseosas que incluyen oxígeno pueden regular la concentración de oxígeno en el medio. Además, el ajuste de la velocidad de agitación se puede utilizar para ajustar la velocidad de transferencia de oxígeno. Controlando el pH del medio durante el cultivo de P. syringae es ventajoso para la producción de una pseudomicina. Las pseudomicinas son lábiles en pH básico, y la degradación significante puede ocurrir si el pH del medio de cultivo está por arriba de aproximadamente 6 por más de aproximadamente 12 horas. De preferencia, el pH del medio de cultivo se mantiene a menos de aproximadamente 6, de más preferencia menos de aproximadamente 5.5, y de mayor preferencia por arriba de 4.0. El pH se mantiene de preferencia en aproximadamente 5 a aproximadamente 5.4, de más preferencia de aproximadamente 5.0 a aproximadamente 5.2. Aunque sin limitar a la presente invención, se cree que la degradación de pseudomicina a pH básico es debido a la abertura del anillo de lactona y saliente de Cl".

La P. syringae puede producir una o más pseudomicinas cuando crecen en cultivos por lotes.. Sin embargo, los alimentos semi-continuos o alimentación por lotes de glucosa y, opcionalmente, un ácido o base, tales como hidróxido de amonio, para el control del pH, aumenta la producción de pseudomicina. La producción de pseudomicina por P. syringae puede ser aumentada además utilizando métodos de alimento continuos en cuya glucosa y, opcionalmente, un ácido o base, tal como hidróxido de amonio, para el control del pH, se alimentan automáticamente. Empleando P. syringae, se puede producir una o más pseudomicinas en cantidades sustanciales. Es decir, las cantidades totales de una o más pseudomicinas de al menos aproximadamente 200 µg/ml a aproximadamente 900 µg/ml, de preferencia desde aproximadamente 600 µg/ml a aproximadamente 900 µg/ml, de más preferencia de aproximadamente 800 µg/ml a aproximadamente 900 µg/ml. De preferencia, para la producción de la pseudomicina A, se produce la pseudomicina A en cantidades totales de al menos aproximadamente 10 µg/ml a aproximadamente 400 µg/ml, de más preferencia desde aproximadamente 300 µg/ml a aproximadamente 400 µg/ml, de mayor preferencia de aproximadamente 350 µg/ml a aproximadamente 400 µg/ml. De preferencia, para la producción de pseudomicina B, se produce la pseudomicina B en cantidades totales de al menos aproximadamente 10 µg/ml a aproximadamente 300 µg/ml, de más preferencia de aproximadamente 200 µg/ml a aproximadamente 300 µg/ml, de mayor preferencia de aproximadamente 250 µg/ml a aproximadamente 300 µg/ml. De preferencia, para la producción de pseudomicina C, se produce la pseudomicina C en cantidades totales de al menos aproximadamente 5 µg/ml a aproximadamente 100 µg/ml, de más preferencia desde aproximadamente 5 µg/ml a aproximadamente 50 µg/ml, de mayor preferencia de aproximadamente 10 µg/ml a aproximadamente 50 µg/ml. De preferencia, para la producción de pseudomicina C , se produce la pseudomicina C en cantidades totales de al menos aproximadamente 1 µg/ml a aproximadamente 50 µg/ml, de más preferencia desde aproximadamente 10 µg/ml a aproximadamente 50 µg/ml, de mayor preferencia de aproximadamente 30 µg/ml a aproximadamente 50 µg/ml. Las condiciones efectivas para la producción de la Pseudomicina A' y/o B' incluyen la temperatura de aproximadamente 22 °C a aproximadamente 27 °C, y una duración de aproximadamente 36 horas a aproximadamente 96 horas. Cuando se cultiva en el medio tal como aquella descrita en la presente, la P. syringae puede crecer en densidades celulares de hasta aproximadamente 10-15 g/1 de peso seco y puede producir las pseudomicinas A' y/o B' en cantidades totales al menos de aproximadamente 10 µg/ml. La elección de la cepa P. syringae puede afectar la cantidad y distribución de la pseudomicina o pseudomicinas producidas por cultivo bajo las condiciones descritas en la presente. Por ejemplo, las cepas MSU 16H y 67 Hl, y cepas similares, cada una produce predominantemente la pseudomicina A, pero también produce la pseudomicina B y C, normalmente en relaciones de aproximadamente 4:2:1. La cepa 67 Hl y cepas similares, sin embargo, producen normalmente niveles de pseudomicinas de aproximadamente 3- a aproximadamente 5-veces más grandes, que son producidas por la cepa MSU 16H. Comparada con las cepas MSU 16 H y 67 Hl, la cepa 25-B1 y cepas similares producen más pseudomicina B y menos pseudomicina C. La cepa 7H9-1 y cepas similares son características en producir predominantemente la pseudomicina B y para producir grandes cantidades de pseudomicina B que otras cepas. Por ejemplo esta cepa puede producir la pseudomicina B en al menos 10 veces en exceso sobre cualquier pseudomicina A o C. La pseudomicina A' y/o B' puede ser producida a partir de mutantes de P. syringae. Los mutantes se producen al tratar la bacteria con una cantidad de un agente mutagénico efectivo para producir mutantes que sobreproducen la pseudomicina A' y/o B' , que produce la pseudomicina A' y/o B' en exceso sobre otras pseudomicinas, o que produce la pseudomicina A' y/o B' bajo condiciones de crecimiento ventajosas. Mientras el tipo y cantidad de agente mutagénico que se utiliza puede variar, un método preferido es para NTG diluido en serie a niveles que varían de 1 a 100 µg/ml. Los mutantes sobreproducen la pseudomicina A' y/o B' , de preferencia para al menos aproximadamente 10 µg/ml. Cada pseudomicina o mezclas de pseudomicinas pueden ser detectadas, determinadas, aisladas y/o purificadas por cualesquiera de una variedad de métodos conocidos para aquellos de habilidad en la técnica. Por ejemplo, el nivel de la actividad de pseudomicina en un caldo o en una composición aislada o purificada se puede determinar por la acción antifúngica contra un hongo tal como Candida . Numerosos métodos son conocidos para la preparación y análisis de la pseudomicina. Por ejemplo, una o más pseudomicinas pueden ser aisladas y purificadas por cromatografía, tal como CLAP.

Método para Producir un Lipodepsidecapéptido P. syringae Para producir uno o más lipodepsidecapéptidos P. syringae, tal como el agente A antifúngico decapéptido 25-Bl, de una cepa de tipo silvestre o mutante de P. syringae, el organismo se cultiva con agitación en un medio nutriente acuoso que incluye una cantidad efectiva de tres o menos aminoácidos. Los tres o menos aminoácidos son de preferencia ácido glutámico, glicina, histidina, o una combinación de los mismos. En una modalidad preferida, los aminoácidos incluyen glicina y, opcionalmente, uno o más productos de papa y un lípido. El cultivo se conduce bajo condiciones efectivas para el crecimiento de P. syringae y producción de un lipodepsidecapéptido P. syringae deseado, tal como el agente A antifúngico decapéptido 25-B1. Las condiciones efectivas incluyen una temperatura de aproximadamente 22 °C a aproximadamente 27 °C, y una duración de aproximadamente 36 horas a aproximadamente 96 horas. Cuando se cultiva en los medios tales como aquellos descritos en la presente, la P. syringae puede crecer en densidades celulares de hasta aproximadamente 10-15 g/1 de peso seco y produce un lipodepsidecapéptido P. syringae, tal como el agente A antifúngico decapéptido 25-B1, en una cantidad total en al menos aproximadamente 10 µg/ml, de preferencia al menos de aproximadamente 50 µg/ml. Controlando la concentración de oxígeno en el medio durante el cultivo de P. syringae es ventajoso para la producción de un lipodepsidecapéptido P. syringae, tal como el agente A antifúngico decapéptido 25-B1. De preferencia, los niveles de oxígeno se mantienen en aproximadamente 5% a aproximadamente 50% de saturación, de más preferencia aproximadamente 30% de saturación. Rociando con aire, con oxígeno puro, o con mezclas gaseosas que incluyen oxígeno pueden regular la concentración de oxígeno en el medio. Además, el ajuste de la velocidad de agitación se puede utilizar para ajustar la velocidad de transferencia de oxígeno. Controlando el pH del medio durante el cultivo de P. syringae es ventajoso para la producción de un lipodepsidecapéptido P. syringae, tal como el agente A antifúngico decapéptido 25-B1. El pH del medio de cultivo se puede mantener en menos de aproximadamente 6 y por arriba de aproximadamente 4. La P. syringae puede producir un lipodepsidecapéptido P. syringae, tal como el agente A antifúngico decapéptido 25-Bl, cuando crecen en cultivos por lotes. Sin embargo, los alimentos semi-continuos o alimentación por lotes de glucosa y, opcionalmente, un ácido o base, tales como hidróxido de amonio, para el control del pH, aumenta la producción de un lipodepsidecapéptido P. syringae, tal como el agente A antifúngico decapéptido 25-B1. La producción de un lipodepsidecapéptido P. syringae, tal como el agente A antifúngico decapéptido 25-Bl, por P. syringae puede ser aumentado además utilizando métodos de cultivo continuos en cuya glucosa y, opcionalmente, un ácido o base, tal como hidróxido de amonio, para el control del pH, se alimentan automáticamente. El pH se mantiene de preferencia a un pH de aproximadamente 5 a aproximadamente 5.4, de más preferencia de aproximadamente 5.0 a aproximadamente 5.2. La elección de la cepa P. syringae puede afectar la cantidad y distribución del lipodepsidecapéptido P. syringae, tal como el agente A antifúngico decapéptido 25-B1 producido por cultivo bajo las condiciones descritas en la presente. Por ejemplo, la cepa 25 Bl puede producir predominantemente el agente A antifúngico decapéptido 25-B1.

El núcleo decapéptido cíclico de los lipodepsidecapéptidos P. syringae se puede preparar dividiendo la porción lipofílica, tal como por desacilación. Los métodos de división y desacilación son bien conocidos para aquellos expertos en la técnica, tal como el uso de las enzimas desacilasa.

Ciclodextrinas Como se utiliza en la presente, "ciclodextrina" se refiere a un compuesto que incluye unidades de D-glucopiranosa unida a alfa(l—4) cíclica. Típicamente, las ciclodextrinas se forman por la acción de una amilasa en almidón. La a-ciclodextrina se refiere a una ciclodextrina con 6 unidades de D-glucopiranosa unida, cíclica, la ß-ciclodextrina tiene 7 unidades de D-glucopiranosa unida, cíclica, y la ?-ciclodextrina tiene 8 unidades de D-glucopiranasa unida, cíclica. Estas unidades de D-glucopiranasa unida, cíclica definen una cavidad hidrofóbica, y las ciclodextrinas son conocidas para formar compuestos de inclusión con otras moléculas orgánicas, con sales, y con halógenos ya sea en el estado sólido o en soluciones acuosas. Las ciclodextrinas no sustituidas, más naturales exhiben toxicidad inaceptable en composiciones farmacéuticas y no son fácilmente eliminadas una vez en una corriente sanguínea del paciente. Los métodos para la preparación de ciclodextrinas son bien conocidos para aquellos expertos en la técnica.

Las ciclodextrinas incluyen ciclodextrinas sustituidas. Como se utiliza en la presente, "ciclodextrina sustituida" se refiere a un derivado de una ciclodextrina formada por la adición de una cadena lateral a una o más posiciones en la ciclodextrina. La cadena lateral puede ser una porción orgánica, o una porción heteroorgánica. Las ciclodextrinas sustituidas incluyen ciclodextrinas que han sido alquiladas, hidroxialquiladas o hechas reaccionar para formar un sulfoalquiléter. Las ciclodextrinas sustituidas incluyen ciclodextrina de hidroxipropilo, ciclodextrina de hidroxietilo, ciclodextrina de glucosilo, ciclodextrina de maltosilo y ciclodextrina de sulfobutiléter. Los métodos para la preparación de derivados de ciclodextrina son conocidos en la técnica, y se describen ciertos métodos en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,727,064 (expedida para Pitha el 23 de febrero de 1988) y 5,134,127 (expedida para Stella et al. el 28 de julio de 1992) , la Publicación de Solicitud de Patente Europea Número 0 499 322 Al, y Pitha et al., Int. J. Pharm. , 29, 73-82 (1986). Las descripciones de cada uno de los documentos citados en este párrafo se incorpora específicamente en la presente por referencia. Las ciclodextrinas varían en estructura y propiedades. Por ejemplo, el tamaño (por ejemplo diámetro y profundidad) y funcionalidad (por ejemplo hidrofobicidad, carga, reactividad, y capacidad para unir el hidrógeno) de la cavidad hidrofóbica varía entre las a-, ß- y ?-ciclodextrinas sustituidas y no sustituidas. Típicamente, una ciclodextrina seleccionada para una formulación tiene un tamaño y funcionalidad que hace referencia a los otros componentes de la formulación. Para las formulaciones y métodos presentes, se cree que las ciclodextrinas sustituidas como las ciclodextrinas de hidroxialquilo y ciclodextrinas de sulfoalquiléter tienen un tamaño y una funcionalidad que hace referencia a los otros componentes de la formulación, tal como la pseudomicina o el agente antifúngico relacionado, tal como la pseudomicina B. Las ciclodextrinas preferidas incluyen hidroxipropil-ß-ciclodextrina (HP-CD) , y sulfobutiléter-ß-ciclodextrina (SBE-CD) . • La ciclodextrina de sulfobutiléter está disponible comercialmente y se puede sintetizar por métodos conocidos en la técnica. Como se utiliza en la presente, la ciclodextrina de sulfobutiléter o SBE-CD se refiere al derivado de sulfobutiléter de la ß-ciclodextrina que incluye típicamente un promedio de aproximadamente 1 a aproximadamente 8, de preferencia de aproximadamente 6 a aproximadamente 7 grupos sulfobutiléter en las posiciones 2, 3 y 6 en el anillo ß-ciclodextrina . La cíclodextrina de hidroxipropilo está disponible comercialmente y se puede sintetizar por métodos conocidos en la técnica. Como se utiliza en la presente, la ciclodextrina de hidroxipropilo o HP-CD se refiere al derivado de 2-hidroxipropilo de ß-ciclodextrina que incluye típicamente un promedio de aproximadamente 8 grupos 2-hidroxipropilo en las posiciones 2, 3 y 6 en el anillo ß-ciclodextrina .

Actividades Biológicas de Pseudomicinas y Agentes Antifúngicos Relacionados Las pseudomicinas tienen diversas actividades biológicas que incluyen varios hongos destructivos, tales como patógenos fúngicos de plantas y animales. En particular, las pseudomicinas o agentes antifúngicos relacionados son agentes antimicóticos activos contra hongos que provocan infecciones oportunistas en individuos inmuno-comprometidos. Estos hongos incluyen Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus , Histoplasma capsula tum, y varias especies de Candida que incluye C. parapsilosis , C. albicans, C. glabrata , C. tropicalis, y C. krusei . La destrucción, más bien que la inhibición del crecimiento de hongos, particularmente de patógenos fúngicos, es una actividad biológica preferida y deseable de una pseudomicina. Las pseudomicinas han sido también mostradas para ser tóxicas a un amplio intervalo de hongos de plantas patogénicas que incluyen Rynchosporium secalis, Cera tocystis ulmi , Rhizoctonia solani r Sclerotinia sclerotiorum, Verticilli um albo-a trum, Verticillium dahliae, Thielaviopis basicola , Fusarium oxysporum y Fusarium culmorum . (véase Harrison, L., et al., "Pseudomycins, a family of novel peptides from Pseudomonas syringae possessing broad-spectrum antifungal activity," J of General Microbiology, 7, 2857-2865 (1991).) En adición, la P. syringae MSU 16H ha sido mostrada para conferir una mayor protección que la cepa de tipo silvestre en olmos infectados con Cera tocystic ulmi , el agente causal de la enfermedad del olmo de Dutch, (véase por ejemplo, Lam et al., Proc. Nati . Sci. USA, 84, 6447-6451 (1987)). Las pseudomicinas o agentes antifúngicos relacionados tienen ciertas actividades biológicas adversas, o efectos adversos. Como se utiliza en la presente, efectos adversos de una pseudomicina o agente antifúngico relacionado se refiere a efectos adversos que ocurren en o cerca del sitio de inyección de una pseudomicina o agente antifúngico'" relacionado. De interés particular, son los efectos adversos de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado. Por ejemplo, la inyección intravenosa de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, en una formulación de amortiguador de acetato resulta en el daño de la vena en donde se inyectó la pseudomicina. Fuera de la vena (es decir extravasación) , la pseudomicina daña el tejido cerca del sitio de inyección. Los efectos adversos de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, en la vena y en tejidos circundantes incluye la destrucción del endotelio de la vena, la destrucción del tejido, inflamación, y toxicidad local a tejidos hospedantes. Aunque sin limitar a la presente invención, se cree que la inyección intravenosa de la pseudomicina resulta en pérdida de endotelio vascular y extravasación de la pseudomicina que, a su vez, resulta en efectos adversos en los tejidos alrededor de la vena.

Formulación y Acción Antifúngica de una Pseudomicina o Agente Antifúngico Relacionado Los efectos adversos resultan a partir de la inyección de numerosas formulaciones diferentes de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado que incluye una formulación de amortiguador de acetato, una formulación salina, una formulación de microemulsión, una formulación de emulsión, una formulación compleja de Povidone K12, y una formulación de micela. Los efectos adversos observados con estos vehículos previenen la administración efectiva de cantidades antifúngicas de la pseudomicina. Los efectos adversos normalmente requieren interrumpir la dosis con la pseudomicina o el agente antifúngico relacionado después de que se obtiene solo una o unas pocas inyecciones, y antes de un efecto antifúngico suficiente. Aún en sus formas más suaves, los efectos adversos en el sitio de inyección pueden desalentar al paciente de acuerdo con un régimen de dosificación efectiva. Por lo tanto, un método antifúngico efectivo que emplea la pseudomicina o el agente antifúngico relacionado requiere una formulación que permita la administración de dosis repetidas. Tal formulación permite la administración de dosis repetidas de pseudomicina o agente antifúngico relacionado de al menos aproximadamente 0.01 mg/kg, de preferencia más de aproximadamente 0.1 mg/kg, de preferencia de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 5 mg/kg, de más preferencia de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 0.5 mg/kg, sin efectos adversos inaceptables en el sitio de inyección. Los efectos adversos observados también previenen la administración de dosis de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado que se aproxima a la dosis tolerada máxima, es decir, la dosis más baja que provoca toxicidad sistémica significativa o toxicidad de un órgano objetivo en el hospedante. Tales dosis altas de pseudomicina son típicamente de aproximadamente 0.5 mg/kg, de preferencia de aproximadamente 5 mg/kg o más, de preferencia de aproximadamente 5 a aproximadamente 25-50 mg/kg. Aún una administración simple de pseudomicina en vehículos tal como un amortiguador de acetato puede provocar efectos adversos que previenen la adminis ración adicional de pseudomicina o agente antifúngico relacionado. Tales efectos adversos pueden prevenir la administración de una dosis toxicológicamente relevante de pseudomicina o agente antifúngico relacionado, que previene determinar los parámetros relevantes toxicológicos para el agente antifúngico. Tales dosis altas también llegan a ser necesarias para la terapia de infecciones fúngicas para cepas u organismos tolerantes de o resistentes a una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado. Formular una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado con una ciclodextrina, tal como HP-CD, SBE-CD, o una ciclodextrina similar, permite una dosificación efectiva del agente antifúngico o toxicológico. Tal formulación reduce o previene los efectos adversos de inyección de la pseudomicina o del agente antifúngico relacionado. La pseudomicina B es soluble en solución acuosa a al menos aproximadamente 15 mg/ml, de manera que la ciclodextrina no es típicamente necesaria para incrementar la solubilidad de este agente antifúngico. La pseudomicina B y HP-CD o SPE-CD se puede disolver sin dificultad en concentraciones adecuadas en un vehículo acuoso tal como solución salina para inyección, o vehículos de manitol o dextrosa conocidos. La toxicidad de la formulación se puede ajustar con, por ejemplo, NaCl para conducirse dentro de un intervalo fisiológico, apropiado, si es necesario. De preferencia, una formulación de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado con HP-CD, SBE-CD, o una ciclodextrina similar, incluye aproximadamente de 0.05 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml de pseudomicina, de preferencia de aproximadamente 1 a aproximadamente 15 mg/ml. La formulación incluye HP-CD, SBE-CD o una ciclodextrina similar en una cantidad efectiva para reducir los efectos adversos de inyección de la pseudomicina o del agente antifúngico relacionado y para permitir una dosificación toxicológica o antifúngica de este agente antifúngico. Típicamente, HP-CD, SBE-CD o una ciclodextrina similar están presentes en la formulación en aproximadamente 0.5 % en peso (peso/volumen de la solución) a aproximadamente 6 % en peso, de preferencia de aproximadamente 1 % en peso a aproximadamente 5 % en peso, de preferencia de aproximadamente 2 % en peso. Ventajosamente, la HP-CD, SBE-CD o una cíclodextrina similar está presente en un exceso molar sobre la pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado, de preferencia, al menos aproximadamente un exceso molar de 2 veces a aproximadamente 4 veces. La dosificación de tal formulación efectiva toxicológica o antifúngica puede ocurrir por al menos aproximadamente 1-5, de preferencia de aproximadamente 2-3 inyecciones por día por aproximadamente 1-7 días sin efectos adversos inaceptables en el sitio de inyección. Aunque sin limitar a la presente invención, se cree que los efectos adversos de las pseudomicinas o agentes antifúngicos relacionados con la inyección son debido en parte a los efectos de agregados solubles del agente. Por ejemplo, una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado incluye un anillo peptídico y una cadena graso grande y se cree que una cadena graso grande puede inducir la formación de micelas en soluciones acuosas o en la sangre. De acuerdo con este modelo, es deseable reducir el tamaño de los agregados solubles de la pseudomicina o agente antifúngico relacionado. Esto se puede realizar al manipular la composición del vehículo para reducir el ímpetu de la pseudomicina o agente antifúngico relacionado con el agregado. Alternativamente, el vehículo puede incluir un agente que sea complejo en la pseudomicina o agente antifúngico relacionado y prevenga los agregados a partir del daño de la vena y tejidos circundantes. Por ejemplo, un complejo de la cadena graso de la pseudomicina o agente antifúngico relacionado con una ciclodextrina o ciclodextrina sustituida, puede, de acuerdo con este modelo, proporcionar una forma de la pseudomicina o agente antifúngico relacionado que no provoque la reacción adversa en el sitio de inyección. Cuando es administrada en una cantidad efectiva antifúngica, una composición de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado con una cíclodextrina, tal como HP-CD o SPE-CD, reduce la carga de una infección fúngica, reduce los síntomas asociados con la infección fúngica, y puede resultar en la eliminación de la infección fúngica. La infección fúngica se puede eliminar debido a que las pseudomicinas pueden destruir, más bien que reducir exactamente el crecimiento de los hongos. Un paciente típico que necesita de la terapia antifúngica con una formulación de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado y HP-CD, SBE-CD, o una ciclodextrina similar, tiene síntomas severos de infección, tal como fiebre alta, y es probable que esté en cuidado intensivo o crítico. Diversos hongos pueden provocar tales infecciones serias. Candida, por ejemplo, provoca infecciones mucosas y sistémicas serias y existe en cepas que son resistentes a antifúngicos de azol y polieno. Aspergillus provoca infecciones sistémicas que amenazan la vida. Cryptococcus es responsable de la meningitis. Tales infecciones fúngicas serias pueden ocurrir en pacientes inmuno-comprometidos, tales como aquellos que reciben trasplantes de órganos o médula ósea, que sufren de quimioterapia del cáncer, que se recuperan de una cirugía mayor, o que sufren de infección por VIH. La terapia antifúngica incluye la administración, la administración típicamente parenteral, de preferencia la administración intravenosa, de una formulación de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado y HP-CD, SBE-CD o una ciclodextrina similar durante varios días para detener la infección. Para más infecciones fúngicas, la reducción de los síntomas de la infección incluye la reducción de la fiebre, regreso del conocimiento y bienestar aumentado del paciente (por ejemplo el paciente actúa y se siente mejor) . De preferencia, los síntomas son reducidos al destruir el hongo para eliminar la infección o para conducir a infección al nivel tolerado por el paciente o controlado por el sistema inmunológico del paciente.

Composiciones Farmacéuticas que Incluyen una Formulación de una Pseudomicina o Agente Antifúngico Relacionado y una Ciclodextrina Una composición farmacéutica que incluye una formulación de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado y una ciclodextrina, tal como SBE-CD o HP-CD, puede también incluir portadores, excipientes, vehículos y otros aditivos. La formulación puede incluir aditivos tales como diversos aceites, incluyendo aquellos de petróleo, de origen animal, vegetal o sintético, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de soya, aceite mineral, y aceite de ajonjolí. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, celulosa, glucosa, lactosa, sucrosa, gelatina, malta, estearato de magnesio, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, cloruro de sodio, leche descremada seca, glicerol, propilenglicol, agua y etanol. Las composiciones pueden estar sometidas a expedientes farmacéuticos convencionales, tales como esterilización, y pueden contener aditivos farmacéuticos convencionales, tales como preservativos, agentes estabilizadores, agentes humectantes o emulsionantes, sales para ajustar la presión osmótica, y amortiguadores. Los portadores farmacéuticos adecuados y sus formulaciones se describen en Martín, 'Remington's Pharmaceutical Sciences," 15a Ed.; Mack Publishing Co., Easton (1975); ver, por ejemplo, las páginas 1405-1412 y las páginas 1461-1487. Tales composiciones contendrán, en general, una cantidad efectiva del compuesto activo junto con una cantidad adecuada del portador para preparar la forma de dosis apropiada para la administración apropiada al hospedero. Típicamente, las composiciones serán administradas a un paciente (humano u otro animal, incluyendo mamíferos tales co o, pero no limitados a, gatos, caballos y ganado y especies de aves) que necesitan de las mismas, en una cantidad efectiva para inhibir la replicación fúngica. Para la administración sistémica, la dosis diaria empleada para el tratamiento de un ser humano variará de 5 mg a 5000 mg de ingrediente activo, de preferencia de 50 mg a 2000 mg, que se pueden administrar en dosis diarias de 1 a 5, por ejemplo, dependiendo de la vía de administración y la condición del paciente. Cuando las composiciones incluyen unidades de dosis, cada unidad contendrá de preferencia de 2 mg a 2000 mg de ingrediente activo, por ejemplo de 50 mg a 500 mg. Para infecciones serias, el compuesto se puede administrar por infusión intravenosa utilizando, por ejemplo, de 0.01 a 10 mg/kg/hora del ingrediente activo.

Usos de Formulaciones de Pseudomicina-Ciclodextrina La presente invención también abarca un equipo que incluye las composiciones farmacéuticas presentes y que se utilizan con los métodos de la presente invención. El equipo puede contener un frasco que contiene una formulación de la presente invención y portadores adecuados, ya sea en forma seca o en forma líquida. El equipo además incluye instrucciones en la forma de una etiqueta en el frasco y/o en la forma de un circular incluida en una caja en donde el frasco está envasado, para el uso y administración de los compuestos. Las instrucciones pueden también estar impresas en la caja en donde el frasco está envasado. Las instrucciones contienen información tal como información de administración y dosis suficiente para permitir a un trabajador en el campo administrar la droga. Se anticipa que un trabajador en el campo abarca cualquier doctor (a), enfermero (a) o técnico quién podría administrar la droga. La presente invención también se relaciona con una composición farmacéutica que incluye una formulación de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado y una ciclodextrina, y que es adecuada para la administración por inyección. De acuerdo con la invención, una formulación de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico y una ciclodextrina pueda ser utilizada para la fabricación de una composición de una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado y una ciclodextrina en una forma que sea adecuada para la administración por inyección. Por ejemplo, una formulación líquida o sólida se puede fabricar en diversas formas, utilizando técnicas convencionales. Una formulación líquida puede ser fabricada al disolver una pseudomicina, tal como la pseudomicina B, o un agente antifúngico relacionado y una ciclodextrina en un solvente adecuado, tal como agua, a un pH apropiado, incluyendo amortiguadores u otros excipientes .

Composiciones Agrícolas que Incluyen una Formulación de una Pseudomicina o Agente Antifúngico Relacionado y una Ciclodextrina Las composiciones que contienen una o más pseudomicinas, lipodepsidecapéptidos o combinaciones de las mismas (incluyendo hidratos, solvatos y esteres de los mismos) y una ciclodextrina (por ejemplo, SBE-CD o HP-CD) se pueden utilizar en el tratamiento de hongos en las plantas (en particular, V. Albo-a trum, Rhizoctonia solani y F. Oxysporum) ya sea como un tratamiento directo o un tratamiento preventivo. Por lo general, las plantas infectadas se tratan inyectando o rociando una suspensión acuosa de los agentes antifúngicos P. syringae en o dentro de la planta. Los medios de inyección son bien conocidos para aquellos expertos en la técnica (por ejemplo, pistola en forma de gubia) . Cualquier medio de rociar la suspensión se puede utilizar que distribuya una cantidad efectiva del material activo sobre la superficie de la planta. La suspensión puede también incluir otros aditivos, por lo general utilizados por aquellos expertos en la técnica, tales como solubilizantes, estabilizantes, agentes humectantes y 'combinaciones de los mismos. La presente invención puede ser entendida mejor con referencia a los siguientes ejemplos. Estos ejemplos están destinados para ser representativos de las modalidades específicas de la invención, y no están destinadas como limitantes del alcance de la invención.

EJEMPLOS Materiales Biológicos en Depósito La P. syringae MSU 16H está disponible públicamente de la American Type Culture Collection, Parklawn Drive, Rockville, MD, USA como No. de Acceso ATCC 67028. Las cepas de P. syringae 25-B1, 7H9-1 y 67 Hl se depositaron con la American Type Culture Collection el 23 de marzo del 2000 y se asignaron los siguientes Nos. de Acceso: 25-B1 No. de Acceso PTA-1622 7H9-1 No. de Acceso PTA-1623 67 Hl No. de Acceso PTA-1621 Ejemplo 1 - Reacción Adversa a la Inyección Intravenosa de una Formulación de Pseudomicina B en Solución Salina por Inyección y Sin Ciclodextrina La pseudomicina B formulada en solución salina para inyección, sin ninguna ciclodextrina, se evaluó en un estudio piloto de 1 semana por reacción adversa con inyección intravenosa.

Materiales y Métodos Se dividieron ratones CD-1 (machos) en grupos de cuatro y se dieron 0, 1, 5, 10, 25 0 50 mg/kg/día de PSB-TFA como una inyección intravenosa (bolo lento) en una vena posterior lateral. El vehículo utilizado para este estudio fue una solución salina para inyección. La potencia de la sal de ácido trifluoroacético de la pseudomicina B (PSB-TFA) se ajustó para explicar el ácido trifluoroacético presente en la forma de sal. Los datos recolectados incluidos la fase viva (es decir, observaciones clínicas, peso corporal, y mortalidad) , química clínica, pesos de órganos limitados e histopatología limitada (riñon, hígado, corazón y sitio de inyección) .

Resultados Todos los animales sobrevivieron a la terminación proyectada en el día 7. Sin embargo, cada uno de los ratones presentó una reacción adversa severa en el sitio de inyección. Esto comienza como hinchazón y oscurecimiento marcado de la parte posterior, ocurriendo típicamente dentro de aproximadamente 6 a 8 horas después de la inyección. La severidad de la reacción del tejido en todos los animales que recibieron una dosis de ^> 10 mg/kg resultó en la interrupción de la dosificación después de 2 a 5 dosis. No hay química clínica significativa, patología notoria o descubrimientos de histopatología observada para indicar efectos de órganos objetivos distintos que den testimonio de la reacción adversa severa en el sitio de inyección.

Ejemplo 2 - Evaluación de la Reacción Adversa de Células Animales a la Pseudomicina B y Compuestos Relacionados Se probaron la pseudomicina B y compuestos relacionados para su toxicidad in vi tro con respecto a células de mamífero para evaluar si la toxicidad se relacionó con la estructura del compuesto.

Materiales y Métodos La pseudomicina B (PSB) y la pseudomicina A del compuesto relacionado (PSA) se probaron en una concentración de 0.5 mg/ml para su efecto en células del músculo esquelético L6. Este modelo del músculo in vi tro ha sido demostrado para correlacionarse con la irritación venosa antibiótica parenteral in vivo. Ver: Rosalki S.B., An Improved Procedure for Serum Creatine Phosphokinase Determination. J. Lab. Clin. Chem. 69: 696-705 (1967); D.M. Hoover et al., Fundamental and Applied Toxic. 14: 589-597 (1990); Mosmann T., Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth and Survival, J. Immunol . Method 65: 55-63 (1983). Se determinó la toxicidad verificando los niveles de las actividades de la creatina fosfocinasa (CPK) y MTT reductasa en las células por métodos estándar.

Resultados Los datos se resumen en la Tabla 1 que identifica los compuestos probados y reporta la cantidad de retención de creatina fosfocinasa (por ciento de control) , y la actividad de MTT reductasa (por ciento de control) . Lo mayor la toxicidad, lo menor los niveles de medición de la retención de CPK y la actividad de MTT reductasa.

Tabla 1 - Toxicidad ±n v±tro de la Pseudomicina B y Compuestos Relacionados Conclusión Esta toxicidad celular in vi tro de las pseudomicinas A y B, sugiere que la formulación de estos compuestos pueda ser necesaria para reducir las reacciones adversas por la inyección intravenosa.

Ejemplo 3 - Evaluación de las Reacción Adversas y Su Mejora Con la Inyección Intravenosa de Varias Formulaciones de Pseudomicina B Intravenosa Se examinan estos tres estudios de los efectos de varias formulaciones de pseudomicina B en las reacciones adversas observadas en el sitio de inyección, y mejoramiento de la reacción adversa, con inyección intravenosa.

Estudio 1 Se evalúa este estudio de las formulaciones que incluye la pseudomicina B en un amortiguador de acetato, en una microemulsión, y con SBE-CD.

Materiales y Métodos Los animales fueron como se describió en lo anterior en el Ejemplo 1. Las dosis seleccionadas se basaron en los efectos adversos observados en la Figura 1. La dosis baja fue 5 mg/kg, la cual, en el Ejemplo 1, provocó lesión ligera del tejido pero se permitió la dosificación por 7 días completos. La dosis alta fue 25 mg/kg, la cual, en el Ejemplo 1, resultó en lesión severa del tejido y dosificación restringida. Se probó este estudio de tres formulaciones de amortiguador de acetato en cada una de estas dos dosis de PSB-TFA, un vehículo de microemulsión y un vehículo de sulfobutiléter-ß-ciclodextrina (SBE-CD) . El vehículo de microemulsión incluye 1.7 % en peso de propilenglicol, 3.4 % en peso de emulphor EL, 1.4 % en peso de phospholipon 90, 3.5 % en peso de aceite de coco fraccionado en amortiguador de acetato 0.05M con 1.75 % en peso de dextrosa, a pH de 4.5. Se obtuvo SBE-CD de Sydek, Inc., 12980 Metcalf Ave., Suite 470, Overland Park, Kansas 66213 y se preparó como Sulfobutiléter-ß-ciclodextrina al 2 % en peso en amortiguador de acetato 0.05M con 1.75 % en peso de dextrosa, a pH de 4.5. Típicamente, se preparó una solución madre de SBE-CD al mezclar ácido acético glacial con agua desionizada y NaOH para lograr una solución que es de 0.05 M en ácido acético y a pH de 4.5. La dextrosa sólida y SBE-CD se disolvieron en el amortiguador de ácido acético para la concentración deseada. Luego se agregó la pseudomicina B para lograr la concentración deseada y la solución se agitó hasta que se disolvió la pseudomicina.

Resultados El diseño del estudio y los resultados se resumen en la Tabla 2.

Tabla 2 - Reacciones de Varias Formulaciones de Pseudomicina B (PSB) . 1 1.7 % en peso de Propilenglicol, 3.4 % en peso de Emulphor EL, 1.4 % en peso de Phospholipon 90, 3.5 % en peso de aceite de coco fraccionado en amortiguador de acetato de 0.05M con 1.75 % en peso de dextrosa, pH de 4.5 2 2 % en peso de Sulfobutiléter-ß-ciclodextrina en amortiguador de acetato de 0.05M con 1.75 % en peso de dextrosa, pH de 4.5 Conclusión Los resultados de este estudio indican que el vehículo de SBE-CD está completamente mejorado de los efectos adversos presentados por la pseudomicina B con la administración intravenosa de dosis de hasta 25 mg/kg. La microemulsión está reducida de los efectos adversos en ambas dosis. Sin embargo, en las dosis más altas, los efectos adversos fueron suficientes que tuvo que ser suspendida la dosificación.

Estudio 2 Estas formulaciones se evaluaron del estudio que incluye la pseudomicina B en un amortiguador de acetato, con SBE-CD, con HP-CD, con gamma-CD, en una emulsión, en una formulación de Povidone, y en una formulación de micela.

Materiales y Métodos Los animales fueron como se describió en el Ejemplo 1 y fueron utilizados en grupos de tres. Se administró la pseudomicina B en una dosis de 25 mg/kg/día por 7 días mediante la administración de bolo intravenosa en una vena posterior lateral en 10 ml/kg. El vehículo para el Grupo 1 (control positivo) fue el amortiguador de acetato solo después de que ha sido mostrado (Ejemplo 1 y Ejemplo 2, Estudio 1) para resultar en reacciones adversas marcadas. El vehículo para el Grupo 2 (control negativo) fue amortiguador de acetato que contenía 2 % en peso de SBE-CD, el cual ha sido mostrado (Ejemplo 2, Estudio 1) para mejorar completamente los efectos adversos observados cuando se administró la pseudomicina B en amortiguador de acetato. Los otros vehículos son como sigue: Grupo 3, 2 % en peso de hidroxipropil-ß-ciclodextrina; Grupo 4, 2 % en peso de gamma-ciclodextrina; Grupo 5, emulsión de liposina II, que incluye 10 % de aceite de soya y 10% de aceite de cártamo; Grupo 6, emulsión de Povidone K12, que incluye Polivinilpirrolidona 2000-3000 m.w.; y el Grupo 7, 0.5 % en peso de preparación de micela de polysorbate 80, que incluye dextrosa, polysorbate 80, pH de 4.5 de amortiguador de acetato.

Resultados Los resultados del estudio se muestran en la Tabla 3.

Tabla 3 - Reacciones para Varias Formulaciones de Pseudomicina B. a Dosificación nopnal Dosificación parcial y/o hinchazón/descoloración observado después de la dosificación Sin dosificación • Los {nipos de animales en amortiguador de acetato, Povidone y por/sorbate presentaron irritación severa en la vena posterior.

• Día 2 - Un animal en el grupo Gamma-CD muere debido a un accidente de dosificación. Otro animal en este grupo presentó enrojecimiento de su parte posterior. • Día 4 - El animal que tuvo enrojecimiento en su parte posterior en el Día 2 se encontró muerto debido a causas no conocidas.

Los resultados de este estudio confirman la irritación potencial de la pseudomicina B cuando se administra en amortiguador de acetato. El Grupo 1 muestra hinchazón y descoloramiento en la parte posterior después de la primera dosis que deteriora la dosificación en el segundo y tercer día. En el día 4, la reacción adversa previene otra dosificación de los animales. El SBE-CD previene la reacción adversa observada en el Grupo 1. El Grupo 2 recibe 7 dosis diarias de 25 mg/kg de pseudomicina B sin ninguna evidencia de reacción adversas. Los Grupos 3 y 4, las formulaciones que incluyen hidroxipropil-ß-ciclodextrina o gamma-ciclodextrina, también muestran la protección de las reacciones adversas provocadas por la pseudomicína B. La emulsión de Liposin II proporciona solamente protección parcial. Aunque los animales fueron dosificados al día por 7 días, la hinchazón de la parte posterior se dañó por dosificación en los últimos 3 días del estudio. El complejo de Povidone K12 y 0.5 % en peso de la preparación de micela de Polysorbate 80 no proporcionó protección y comparado con el amortiguador de acetato solamente.

Conclusión Este estudio mostró que las ciclodextrinas adicionales, tales como hidroxipropil-ß-ciclodextrina y gamma-ciclodextrina también presentó el efecto protector. Sin embargo, los resultados con gamma-CD pueden ser equívocos debido al enrojecimiento en la parte posterior y muerte inexplicada vista con un animal en este grupo.

Estudio 3 Estas formulaciones se evaluaron del estudio que incluye la pseudomicina B en solución salina por inyección en dos pH, en pluronic F68, en solutol, y en polysorbate.

Materiales y Métodos Los animales fueron ratones hembra de CDl tratados de acuerdo con los protocolos establecidos. Los ratones se dividieron en grupos de tres. Se administró la pseudomicina B en una dosis de 25 mg/kg/día por 7 días mediante administración de bolo intravenosa en una vena posterior lateral en 10 ml/kg. El vehículo del Grupo 2 fue de 0.9 % en peso de NaCl (solución salina para inyección) a pH de 4.5. El vehículo para el Grupo 3 fue de 0.9 % en peso de NaCl (solución salina para inyección) a pH de 6.5. El vehículo para el Grupo 4 fue de 0.9 % en peso de NaCl en 0.05 % en peso de Pluronic F68, que incluye copolímeros de óxido de propileno y óxido de etileno en varias m.w. y HLB a pH de 6.5. El vehículo para el Grupo 5 fue de 0.9 % en peso de NaCl en 0.5 % de Pluronic F68 a pH de 6.5. El vehículo para el Grupo 6 fue de 0.9 % en peso de NaCl en 0.05 % en peso de Solutol, que incluye 70% de poliglicoléster de 12-hidroxiestearato y 30% de polietilenglicol a pH de 6.5. El vehículo para el Grupo 7 fue de 0.9 % en peso de NaCl .en 0.05 % en peso de polysorbate 20 a pH de 6.5.

Resultados Los resultados del estudio se muestran en la Tabla 4. Las observaciones clínicas que afectan todos los grupos de tratamiento, incluidas las partes posteriores hinchadas y descoloradas. Además, los animales individuales en los Grupos 03-07 demostraron evidencia de necrosis del tejido. Tres animales muertos en el estudio (Animal 6051 en el día de prueba 5 y Animales 2053 y 6052 en el día de prueba 6) . Todas de estas muertes fueron el resultado de las lesiones mecánicas sostenidas durante la dosificación y, por lo tanto, no se consideraron relacionadas con el compuesto.

Tabla 4 - Reacciones a Varias Formulaciones de Pseudomicina B.

Conclusión Ninguna de las formulaciones probó en el estudio actual completamente mejorado los efectos adversos de la inyección de la Pseudomicina B. El mejoramiento completo ha sido demostrado con SBE-CD.

Ejemplo 4 - Evalna -íón Toxicológica ±n v±vo de una Fonrrulación de SBE- , CD con Concentraciones que Varían de Pseucjomicina B Este estudio evaluó las toxicidades potenciales , incluyendo cualesquiera efectos adversos en el sitio de inyección, en un modelo animal de formulaciones de sulfobutiléter-ß-ciclodextrina en cuatro concentraciones de pseudomicina B.

Materiales y Método Las dosis de pseudomicina B utilizadas para este estudio de ratas fueron 0, 1, 10, ó 50 mg/kg/día por 14 días administrados como una dosis intravenosa en bolo. La formulación de SBE-CD fue del 2 % en peso y el volumen de dosis utilizado fue de 5 ml/kg. Los parámetros toxicológicos se verificaron por métodos estándar incluidos los pesos corporales, observaciones clínicas, mortalidad, hematología, química clínica, patología limitada (hígado, riñon, corazón y sitio de inyección) , y micronúcleo de la médula ósea (como una valoración preliminar de la toxicidad genética) .

Resultados Antes de 2 días del inicio de la fase de vida, las partes posteriores de los animales en dosis altas se hincharon y descolorearon al punto que la dosificación adicional llegó a ser imposible (Tabla 5) . La decisión se hizo para sacar estos animales fuera del estudio y para reevaluar el método y formulación utilizado para la valoración de toxicidad de dosis altas. Los grupos de dosis de 1 y 10 mg/kg/día funcionan las 2 semanas completas y no se muestra evidencia de toxicidad manifiesta.

Tabla 5 - Resultados de Administración de las Formulaciones de SBE-CD en Tres Concentraciones de Pseudomicina B.

En término, los animales de dosis altas demostraron excesivamente irritación marcada en la vena posterior. Esto se asoció con la disminución de peso corporal y un descubrimiento de histopatología de inflamación en el sitio de inyección y necrosis de la vena. Los pesos del hígado y riñon también se incrementaron en estos animales. No hubo tales descubrimientos en los animales en dosis media y baja. La prueba del micronúcleo de la médula ósea fue negativa en los animales en dosis baja y media (no se evaluó el micronúcleo de la médula ósea en el grupo de dosis alta debido al término temprano) . El único descubrimiento distinto fue la observación histopatológica de vacuolización leve del túbulo renal observado en los animales en dosis alta.

Conclusión Aunque el estudio reportado en el Ejemplo 2 demuestre que la formulación con SBE-CD mejora los efectos adversos de inyección de la pseudomicina B, se observaron los efectos adversos con una formulación de SBE-CD en el estudio presente. Sin embargo, la cantidad de dosis y concentración de pseudomicina B son más elevados significativamente en el estudio presente. Estas dosis se evaluaron del estudio de la pseudomicina B de hasta 50 mg/kg, que es dos veces más la dosis probada en los estudios reportados en el Ejemplo 2, la cual fue de 25 mg/kg. Además, en el estudio presente se inyectó esta dosis doble de pseudomicina B en un volumen de una sola mitad que se utiliza en los estudios reportados en el Ejemplo 2. De esta forma, la concentración de pseudomicina B en la formulación se incrementa 4 veces. La concentración de SBE-CD permanece constante en 2 % en peso en estos estudios, así la concentración de pseudomicina B se incrementa 4 veces con relación a la concentración de SBE-CD. Este estudio indica que el mejoramiento de los efectos adversos de la inyección requiere al menos una cierta concentración mínima de SBE-CD con relación a la concentración de la pseudomicina B. Aunque sin limitar a la presente invención, esta observación es consistente con la formación de un complejo de SBE-CD y la pseudomicina B.

Ejemplo 5 - Incremento de la Concentración de SBE-CD a una Dosis Alta de Pseudomicina B, Mejora los Efectos Adversos Este estudio investigó las toxicidades de la pseudomicina B de dosis alta con una cantidad incrementada de SBE-CD y determinó que las concentraciones más altas de la ciclodextrina mejoró los efectos adversos de la pseudomicina B de dosis alta observados en el Ejemplo 4.

Materiales y Métodos Los animales fueron como se describió en el Ejemplo 4. Las dosis de pseudomicina B utilizadas para este estudio fueron de 0, 25 ó 50 mg/kg/día administradas por 14 días como una inyección lenta intravenosa utilizando una bomba programadora controlada para minimizar el artículo de extravasación de prueba en el tejido circundante. El vehículo utilizado para este estudio fue de 4 % en peso de SBE-CD y el volumen de dosis fue de 10 ml/kg. Estos aumentan en la concentración de SBE-CD y el volumen de dosis está ajustado a la relación de la pseudomicina B al contrario de SBE-CD que estuvo en los estudios reportados en el Ejemplo 3. El grupo de control recibió solo 4 % en peso de SBE-CD. Los pesos corporales, observaciones clínicas, mortalidad, hematología, química clínica, patología limitada (hígado, riñon, corazón y sitio de inyección) , y micronúcleos de la médula ósea fueron verificados por métodos estándar.

Resultados La fase de vida en este estudio se completó sin ninguna evidencia de toxicidad manifiesta, como se mostró por los resultados reportados en la Tabla 6.

Tabla 6 - Resultados de la Administración del 4 % en peso de la Formulación de SBE-CD con Concentraciones Altas de Pseudctnicina B. -= n a os mk E Parámetro no evaluado debido a la terminación temprana Li = hígado, Ki = riñon, Ht = corazón, e IS = sitio de inyección Conclusión Incrementando la relación de SBE-CD a la pseudomicina B en la formulación mejorada completamente, la irritación se observó con el grupo de dosis de 50 mg/kg/día en el ,estudio reportado en el Ejemplo 4. Esto es consistente con un mecanismo de la protección mediada con ciclodextrina que implica la formación de un complejo que incluye la pseudomicina B y la ciclodextrina, que resulta en la protección del endotelio vascular. El mejoramiento de los efectos adversos en el sitio de inyección dejó la primera observación de los efectos del órgano objetivo aparente en la dosis probada más alta de la pseudomicina B. Los datos de hematología, química clínica, e histopatología indican los efectos del órgano objetivo asociados con la administración de la pseudomicina B. El desarrollo de una anemia ligera sugiere efectos en los glóbulos rojos de la sangre o en un glóbulo rojo de la sangre que produce elementos de la médula ósea. El hígado también surge como un órgano objetivo potencial con evidencia de escape de la enzima del hígado y lesión hepatocelular y muerte. Ambos de estos efectos fueron observados solamente en la dosis más elevada de 50 mg/kg/día. El peso de riñon aumentado y vacuolización ligera de los túbulos renales se observó en ambos de 25 a 50 mg/kg/día y puede indicar los efectos renales de la pseudomicina B.

Ejemplo 6 - Evaluación del Metabolismo de la Pseudomicina B Seguido por la Inyección Intravenosa de una Formulación de SBE-CD Este estudio evaluó el metabolismo de una formulación de pseudomicina B con sulfobutiléter-ß-ciclodextrina seguido por inyección intravenosa en ratas.

Materiales y Método Las dosis de pseudomicina B utilizadas para este estudio de rata fueron de 5 y 25 mg/kg administradas una vez con una dosis intravenosa en bolo. La formulación de SBE-CD fue de 2 % en peso y el volumen de dosis utilizado fue de 5 ml/kg. Los parámetros se verificaron por métodos estándar incluidos en el área bajo la curva para la duración de niveles detectables (AUC) , vida media, y Cmax.

Resultados Los resultados de este estudio se reportaron en la Tabla 7 Tabla 7 - Estudios de Metabolismo de las Formulaciones de la Pseudomicina B Con SBE-CD.

Conclusiones Las concentraciones de plasma de la pseudomicina B fueron similares después de una dosis de 5 mg/kg en cualquier amortiguador de acetato de sodio o en una formulación con 2 % en peso de SBE-CD. La presencia de 2 % en peso de SBE-CD no afecta el perfil farmacocinético de plasma de la pseudomicina B en comparación con el amortiguador de acetato. La formulación no cambia ninguno de los parámetros farmacocinéticos medidos. En la formulación del 2 % en peso de SBE-CD, el incremento de la dosis de pseudomicina B de 5 a 25 mg/kg resulta en un aumento proporcional cercano en Cmax y AÜC. La vida media de plasma de la pseudomicina B fue independiente de la dosis examinada. Las concentraciones de plasma mensurables de pseudomicina B estuvieron presentes por 24 horas después de la administración de la dosis.

Ejemplo 7 - Evaluación Toxicológica In vivo de un HP-CD y una Formulación Gamma-Ciclodextrina de Pseudomicina B Este estudio evalúa además la capacidad de las formulaciones de hidroxipropil-ß-ciclodextrina y gamma-ciclodextrina para proporcionar protección de efectos adversos de la inyección intravenosa de pseudomicina B.

Materiales y Métodos Los animales fueron ratas macho como se describió en el Ejemplo 4 los cuales se dividieron en cuatro grupos de cinco. Las dosis de pseudomicina B utilizadas para este estudio fueron de 0 y 50 mg/kg/día por 14 días administrados como un bolo intravenoso en un volumen de dosis de 10 ml/kg a una velocidad de 66 ml/hora. La hidroxipropil-ß-ciclodextrina se obtuvo de Cyclodextrin Technology Inc. La gamma-ciclodextrina se obtuvo de Wacker. La concentración de ciclodextrina utilizada en las preparaciones de vehículo fue del 4 % en peso en pH de 4.5 de amortiguador de acetato (0.05 M) . Los grupos control recibidos ya sea de 4 % en peso de gamma-CD o de 4 % en peso de hidroxipropil-CD carecen de pseudomicina B.

Resultados Los resultados de este estudio se reportan en la Tabla 8.

Tabla 8 - Resultados de la Administración de las Formulaciones de Hidroxipropil-ß-Ciclodextrina y Gamma- Ciclodextrina en Dos Concentraciones de Pseudomicina B . igfe [ El sombreado indica ningún efecto en el parámetro indicado El sombreado indica que no se midió el parámetro indicado debido a la terminación temprana El vehículo gamma-CD no proporciona protección adecuada de los efectos adversos de la pseudomicina B en este estudio. Solamente después de la primera dosis se observó hinchazón y descoloración de la parte posterior. Esto llegó a ser bastante grave para prevenir la dosificación en el día 2. El vehículo de hidroxipropil-ß-CD proporciona protección de los efectos adversos de la pseudomicina B. Como resultado, las dosis diarias de la formulación de hidroxipropil-ß-CD se administraron por las 2 semanas completas del estudio. Los efectos adversos en el componente de eritrón, hígado, riñon, y metabolismo del lípido son consistentes con las observaciones previas de las 2 semanas siguientes de dosificación en el nivel de 50 mg/kg utilizando un vehículo basado en SBE-CD (Ejemplo 5) . Fueron algunas evidencias del efecto adverso leve en el sitio de inyección en el nivel grueso y microscópico en el estudio actual. Esto no está reportado en el estudio de vehículo de SBE-CD previo, sugiriendo que la SBE-CD, bajo las condiciones probadas, pueda proporcionar un grado mayor de protección que el vehículo de hidroxipropil-ß-CD.

Conclusión En este estudio, la gamma-CD no proporciona protección de los efectos adversos de la inyección de pseudomicina B. La hidroxipropil-ß-CD protege estos animales de los efectos adversos de la inyección de pseudomicina B. La invención se ha descrito con referencia a varias modalidades y técnicas específicas y preferidas. Sin embargo, debe ser entendido que se pueden hacer muchas variaciones y modificaciones mientras que permanecen dentro del espíritu y alcance de la invención. Todas las publicaciones y solicitudes de patente en esta especificación, son indicativos del nivel del experto ordinario en la técnica para la cual esta invención pertenece. Todas las publicaciones y solicitudes de patente se incorporan en la presente por referencia al mismo alcance como si cada publicación individual o solicitud de patente fuera indicada específica e individualmente por referencia.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> Eli Lilly and Company <120> Composiciones Antifúngicas de Pseudomicina y Métodos para Su Uso <130> X-11463 Listado de Secuencias <140> <141> <150> 60/129,435 <151> 1999-04-15 <160> 1 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Pseudomonas syringae <220> <223> Xaa en la posición 5 es homoserina. <220> <223> Xaa eñ la posición 6 es ácido deshidroaminobutírico. <220> <223> Xaa en la posición 8 es deshidroalanina. <400> 1 Thr Ala Thr Gln Xaa Xaa Ala Xaa Thr Arg 1 5 10 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (28)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un método para la reducción de los síntomas de una infección fúngica en un paciente que necesita del mismo, caracterizado porque comprende: administrar al paciente una cantidad efectiva de una composición que comprende una pseudomicina o un agente antifúngico lipodepsidecapéptido, o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable, y una hidroxialquil-ß-ciclodextrina o sulfoalquiléter-ß-ciclodextrina.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la reducción de los síntomas comprende disminuir una carga de una infección fúngica.

3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la reducción de los síntomas comprende destruir el hongo.

4. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la infección fúngica comprende la infección por C. parapsilosis , C. albicans , C. glabra ta , C. tropicalis, C. krusei , Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, o Histoplasma capsula tum.

5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la composición comprende hidroxipropil-ß-ciclodextrina .

6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la composición comprende sulfobutiléter-ß-ciclodextrina .

7. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el paciente sufre de efectos adversos no inaceptables de la inyección de la pseudomicina o del agente antifúngico lipodepsidecapéptido, o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable.

8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque se administra una dosis toxicológicamente relevante de la pseudomicina o del agente antifúngico lipodepsidecapéptido, o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable.

9. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la composición comprende la ciclodextrina en aproximadamente una relación molar de al menos aproximadamente 1 comparada con la pseudomicina o el agente antifúngico lipodepsidecapéptido administrados.

10. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque además comprende: determinar la necesidad para administrar la pseudomicina o el agente antifúngico lipodepsidecapéptido; y verificar al paciente por signos de extravasación de la pseudomicina o del agente antifúngico lipodepsidecapéptido .

11. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque administrar comprende la administración parenteral de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 veces por día de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 5 mg/kg de la pseudomicina o del agente antifúngico lipodepsidecapéptido .

12. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque reducir los síntomas de una infección fúngica comprende reducir la fiebre e incrementar el bienestar general del paciente.

13. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cantidad efectiva de la pseudomicina o del agente antifúngico lipodepsidecapéptido es una cantidad efectiva antifúngica.

14. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la pseudomicina comprende la pseudomicina A, pseudomicina A' , pseudomicina B, pseudomicina B' , pseudomicina C, pseudomicina C , una combinación de las mismas, o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable.

15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la pseudomicina comprende la pseudomicina B o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable.

16. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente antifúngico lipodepsidecapéptido comprende el agente A antifúngico decapéptido 25-B1, o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable.

17. Una composición antifúngica, caracterizada porque comprende una hidroxipropil-ß-ciclodextrina o una sulfobutiléter-ß-ciclodextrina y una cantidad efectiva antifúngica de una pseudomicina, un agente antifúngico lipodepsidecapéptido, o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable; estando la hidroxipropil-ß-ciclodextrina o la sulfobutiléter-ß-ciclodextrina en un exceso molar sobre la pseudomicina, el agente antifúngico lipodepsidecapéptido, o sus sal, hidrato o éter farmacéuticamente aceptable.

18. La composición antifúngica de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque comprende la hidroxipropil-ß-ciclodextrina .

19. La composición antifúngica de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque comprende la sulfobutiléter-ß-ciclodextrina .

20. La composición antifúngica de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque la composición comprende hidroxipropil-ß-ciclodextrina o sulfobutiléter-ß-ciclodextrina en al menos aproximadamente una relación molar de 2:1 comparada con la pseudomicina o el agente antifúngico lipodepsidecapéptido .

21. La composición antifúngica de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque además comprende dextrosa y amortiguador de acetato.

22. La composición antifúngica de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque la pseudomicina A, pseudomicina A' , pseudomicina B, pseudomicina B' , pseudomicina C, pseudsmicina C , una combinación de las mismas, o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable.

23. La composición antifúngica de conformidad con la reivindicación 22, caracterizada porque la pseudomicina comprende la pseudomicina B o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable.

24. La composición antifúngica de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque el agente antifúngico lipodepsidecapéptido comprende el agente A antifúngico decapéptido 25-B1 o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable.

25. El uso de una pseudomicina o un agente ' antifúngico lipodepsidecapéptido, o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable, en combinación con una hidroxialquil-ß-ciclodextrina o una sulfoalquiléter-ß- ciclodextrina para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de una infección fúngica.

26. El uso de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la pseudomicina comprende la pseudomicina A, pseudomicina A' , pseudomicina B, pseudomicina B' , pseudomicina C, pseudomicina C , una combinación de las mismas, o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable.

27. El uso de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el agente antifúngico lipodepsidecapéptido comprende el agente A antifúngico decapéptido 25-B1 o su sal, hidrato o éster farmacéuticamente aceptable.

28. El uso de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la hidroxipropil-ß-ciclodextrina o la sulfobutiléter-ß-ciclodextrina está presente en el medicamento en al menos una relación molar de 2:1 comparada con la pseudomicina o con el agente antifúngico lipodepsidecapéptido .