JPH09165342A - 抗真菌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 少用量で有効であり、副作用が少なく、耐性
菌の出現頻度が少ない抗真菌剤を提供する 【解決手段】 アゾール系抗真菌剤及びラクトフェリン
類の加水分解物又はラクトフェリン類の加水分解物由来
の抗菌性ペプチドを有効成分として含有する抗真菌剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、アゾール系抗真菌
剤及びラクトフェリン加水分解物又はラクトフェリン由
来抗菌性ペプチドを有効成分として含有する抗真菌剤に
関するものであり、更に詳しくは、本発明は、アゾール
系抗真菌剤と哺乳動物の主として乳汁に存在する生理活
性蛋白質であるラクトフェリン類の加水分解物又はラク
トフェリン類の加水分解物由来の抗菌性ペプチドとを併
用することにより、従来のアゾール系抗真菌剤と比較し
てその有効成分の使用量を顕著に低減することを可能と
すると共に、少用量で強い抗真菌効果が得られ、副作用
が少なく、耐性菌の出現頻度を低下させることが可能な
新規抗真菌剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】表在性真菌症は、起因菌の侵襲が表皮、
毛髪、爪等の角化組織、口腔、膣等の皮膚に隣接する粘
膜部位に限定される疾患と定義され、発生頻度が最も高
い疾患である。代表的な表在性真菌症の一つとして知ら
れている皮膚糸状菌症（白癬）の発症率は、全人口の１
０％以上にも及び、しかも再発又は再感染を反復する症
例も多数認められ、足白癬、体部白癬、股部白癬等多様
な病態が知られている。

【０００３】他の代表的な表在性真菌症としては、カン
ジダ症が知られている。カンジダ症は、口腔カンジダ
症、食道・腸管カンジダ症、外陰膣カンジダ症等の疾患
が、カンジダ属真菌の侵襲によって惹起され、腎盂腎
炎、間擦疹、指間びらん症、爪囲爪炎、膀胱炎等のカン
ジダ症も多く知られている。また、腸管でのカンジダ属
真菌の異常増殖がアトピー性皮膚炎の原因になっている
ことも報告されている（アレルギーの臨床、第１１巻、
第７６８〜７７２ページ、１９９１年）。

【０００４】一方、近年、重篤な深在性真菌症が急激に
増加しているが、その背景には、広域抗生物質、抗癌
剤、臓器移植における免疫抑制剤、経口避妊薬等多くの
薬剤の投与及び高カロリー輸液、留置カテーテル等の使
用、更には、エイズ等易感染状態にある患者の急増があ
り、臨床上の大きな問題となっている。

【０００５】従来、内用抗真菌剤として真菌症の治療に
使用される抗真菌剤は、ポリエン系のアムホテリシン
Ｂ、フルオロピリジン系のフルシトシン、イミダゾール
系（アゾール系）のミコナゾール及びトリアゾール系
（アゾール系）のフルコナゾールの４剤のみであった
が、１９９３年９月にアゾール系のイトラコナゾールが
市販された。

【０００６】これらの抗真菌剤のターゲットとなる病原
真菌の種類と薬剤感受性は、それぞれの抗真菌剤によっ
て異なるが、カンジダ属、クリプトコッカス属、アスペ
ルギルス属、トリコフィトン属、マラセチア属、コキデ
ィオイデス属等である。

【０００７】アゾール系として総称される抗真菌剤は全
て化学合成によって作られ、イミダゾール環又はトリア
ゾール環を有し、生物活性においても類似の性状を示し
ている。特に真菌細胞の小胞体に局在するエルゴステロ
ール合成経路におけるステロール・Ｃ−１４脱メチル反
応障害が、抗真菌の作用機序となっている点で共通して
いる。

【０００８】単独製剤として用いられているこのような
内用抗真菌剤の使用の現状は、アゾール剤の占有率が大
きい。アゾール剤がこのように常用されるのは、アムホ
テリシンＢ及びフルシトシンと比較して安全性が高いこ
と、耐性菌が出現し難いこと等の利点によるものであ
る。しかしながら、最も大きい占有率を有するフルコナ
ゾール（アゾール系抗真菌剤）について、カンジダ症及
びクリプトコッカス症に対する有効率に比較して、アス
ペルギルス症に対する有効率が低いことが報告されてい
る（化学療法の領域、第１０巻、第１７〜２６ページ、
１９９４年）。

【０００９】一般にアゾール剤は静菌的に作用するの
で、患者の感染抵抗力が著しく低下している場合又は侵
襲性の重篤な感染が惹起されている場合には奏効し難い
とされている（化学療法の領域、第１０巻、第１７〜２
６ページ、１９９４年）。このように、現在のアゾール
剤には、殺菌的作用が存在しないため、比較的多量の薬
剤の長期間投与が必要とされている（化学療法の領域、
第１０巻、第１７〜２６ページ、１９９４年）。従っ
て、このような抗真菌剤の長期大量投与による肝障害、
腎障害、下痢、嘔吐等の副作用の発生が、臨床上問題で
あり、更に、長期投与によってもたらされる真菌症原因
菌の薬剤耐性化が危惧されている。

【００１０】一方、抗菌性蛋白質であるラクトフェリン
の加水分解物、またはラクトフェリンに由来するペプチ
ドが、抗菌活性あるいは抗真菌活性を発揮することが知
られている（特開平５−３２００６８号公報、特開平５
−９２９９４号公報）。また、抗生物質と、ラクトフェ
リン類の分解物またはラクトフェリン関連抗菌性ペプチ
ドとを含む抗菌剤について報告されている（特開平５−
３１０５９４号公報）が、合成抗真菌剤であるアゾール
系抗真菌剤と、ラクトフェリンの加水分解物またはラク
トフェリンに由来する抗菌ペプチドとを組み合わせるこ
とにより抗真菌活性が増強されることについてはこれま
で知られておらず、報告も皆無である。

【００１１】このような従来技術の情況から、少量の使
用で殺菌的作用を有する抗真菌剤、すなわち、副作用が
少なく、かつ強い抗真菌作用を有する抗真菌剤又は抗真
菌剤の使用法の開発が待望されていた。

【００１２】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、前記従
来技術に鑑みて新規な抗真菌剤について鋭意研究を行っ
た結果、アゾール系抗真菌剤に、ラクトフェリンの加水
分解物あるいはラクトフェリン由来抗菌ペプチドを添加
することにより、アゾール系抗真菌剤が、従来の用量よ
りもはるかに少用量で、強い抗真菌活性を発揮すること
を見い出し、本発明を完成した。

【００１３】本発明の目的は、少用量で有効であり、副
作用が少なく、耐性菌の出現頻度が少ない抗真菌剤を提
供することである。

【００１４】

【課題を解決するための手段】前記課題を解決する本発
明は、アゾール系抗真菌剤及びラクトフェリン類の加水
分解物又はラクトフェリン類の加水分解物由来の抗菌性
ペプチドを有効成分として含有する抗真菌剤であり、ア
ゾール系抗真菌剤が、フルコナゾール、イトラコナゾー
ル、クロトリマゾール、ケトコナゾール、ラノコナゾー
ル又はこれらの混合物であること、ラクトフェリン類の
加水分解物由来の抗菌性ペプチドが、牛乳若しくは人乳
由来のラクトフェリン類の加水分解物から単離されたペ
プチド、このペプチドと同一のアミノ酸配列を含む化学
合成されたペプチド、それらの誘導体、又はこれらの２
種以上の混合物であること、ラクトフェリン類の加水分
解物由来の抗菌性ペプチドが、配列番号１乃至配列番号
８のいずれかに記載されたアミノ酸配列を有すること、
アゾール系抗真菌剤１部（重量）に対してラクトフェリ
ン類の加水分解物が、少なくとも１００部（重量）の割
合で含有されていること、及びアゾール系抗真菌剤１部
（重量）に対してラクトフェリン類の加水分解物由来の
抗菌性ペプチドが、少なくとも０．５部（重量）の割合
で含有されていることを望ましい態様としてもいる。

【００１５】

【発明の実施の形態】次に本発明について詳述する。

【００１６】本発明に使用するアゾール系抗真菌剤は、
従来から用いられているアゾール系抗真菌剤のいずれで
もよいが、特に、フルコナゾール、イトラコナゾール、
クロトリマゾール、ケトコナゾール又はラノコナゾール
が好ましい。

【００１７】本発明に用いられるラクトフェリン類の加
水分解物は、牛乳、人乳、その他哺乳動物の乳由来のラ
クトフェリン、このラクトフェリンから鉄を除去したア
ポラクトフェリン、アポラクトフェリンを銅等の金属で
飽和した金属飽和ラクトフェリン、これらの任意の割合
の混合物等（以下、これらをまとめてラクトフェリン類
と記載する）を、常法により蛋白分解酵素又は酸により
加水分解して得た加水分解物（以下ラクトフェリン加水
分解物と記載する）である。

【００１８】また、本発明に使用するラクトフェリン類
の加水分解物由来の抗菌性ペプチドは、前記ラクトフェ
リン類の加水分解物から単離されたペプチド、このペプ
チドと同一のアミノ酸配列を含む化学合成されたペプチ
ド、それらの誘導体、配列番号１乃至配列番号８のいず
れかに記載のアミノ酸配列を有するペプチド、又はこれ
らの２種以上の混合物（以下、これらをまとめてラクト
フェリン由来抗菌性ペプチドと記載する）である。

【００１９】ラクトフェリン加水分解物を配合した本発
明の抗真菌剤は、後記する試験例から明らかなとおり、
アゾール系抗真菌剤１部（重量。以下同じ）に対して少
なくとも１００部、望ましくは２００〜６５，０００
部、の割合でラクトフェリン加水分解物が配合されてい
る。ラクトフェリン加水分解物の配合量が１００部未満
の場合は、併用による抗真菌効果が認められず、２５
０，０００部を超える場合は、ラクトフェリン加水分解
物の増加による抗真菌効果の増強が認められない。

【００２０】また、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド
を配合した本発明の抗真菌剤は、後記する試験例から明
らかなとおり、アゾール系抗真菌剤１部に対して少なく
とも０．５部、望ましくは１〜２５０部、の割合でラク
トフェリン由来抗菌性ペプチドが配合されている。ラク
トフェリン由来抗菌性ペプチドの配合量が０．５部未満
の場合は、併用による抗真菌効果が認められず、１，０
００部を超える場合は、ラクトフェリン由来抗菌性ペプ
チドの増加による抗真菌効果の増強が認められない。

【００２１】本発明の抗真菌剤は、公知の方法により経
口剤、注射剤、膣剤、トローチ剤、軟膏、ローション剤
等に加工することができ、これに含有されている公知の
抗真菌剤の投与方法と同様に投与することができる。ま
た、アゾール系抗真菌剤を従来通り、経口、注射、経皮
投与し、ラクトフェリン加水分解物又はラクトフェリン
由来抗菌性ペプチドを経口投与して、感染患部で真菌の
増殖を抑制あるいは殺菌することもできる。

【００２２】本発明の抗真菌剤の用量は、後記する試験
例から明らかなとおり、従来の抗真菌剤の用量の１／４
又は１／１６以下であっても、従来の抗真菌剤と同等又
はそれ以上の抗真菌活性を有する。

【００２３】抗真菌剤中の有効成分の含量は、アゾール
系抗真菌剤が、少なくとも３ｎｇ／ｍｌ、ラクトフェリ
ン加水分解物が、少なくとも５０μｇ／ｍｌ、また、ラ
クトフェリン由来抗菌性ペプチドが、少なくとも０．７
８μｇ／ｍｌである。

【００２４】ラクトフェリン加水分解物又はラクトフェ
リン由来抗菌性ペプチドは、食品の一成分であり、また
食品としても利用されるもので、全く毒性を示さず、副
作用が問題とされる従来の抗真菌剤の使用量を低減する
ことにより、安全な抗真菌剤を提供することができる。

【００２５】次に試験例を示して本発明を更に詳述す
る。

【００２６】試験例１ １）試料の調製 アゾール系抗真菌剤としてジフルカン静注液（「ジフル
カン」は登録商標。ファイザー製薬社製）から、常法に
より精製したフルコナゾールをリン酸緩衝塩溶液に溶解
した。また、参考例１と同一の方法で製造したラクトフ
ェリン加水分解物を蒸留水に溶解し、滅菌濾過した。

【００２７】２）試験方法 試験管に試験培地としてサブロー・デキストロース・ブ
ロス（１％ペプトン、２％グルコース）を１ｍｌ秤取
し、培地１ｍｌ当たり表１に示す濃度でフルコナゾール
を添加し、対照試料（単用）とした。一方、試験培地１
ｍｌ秤取し、ラクトフェリン加水分解物を培地１ｍｌ当
たり２００μｇの割合で添加し、更に表１に示す濃度で
フルコナゾールを添加し、試験試料（併用）とした。

【００２８】試験菌としてカンジダ・アルビカンス菌
（Candida albicans TIMM 1768株。帝京大学医真菌研究
センターから入手）を、寒天スラントから掻き取り、最
終菌濃度約１０⁴ ／ｍｌの割合で前記各試料に添加し、
３７℃で１７時間培養し、のち６３０ｎｍで吸光度を測
定し、菌の増殖程度を判定した。

【００２９】菌の増殖程度の判定は、アゾール系抗真菌
剤を添加していない対照試料の試験管の示す吸光度を１
００％としたとき、吸光度が２５％より大きい試験管を
増殖（＋と表示）、２５％以下の試験管を未増殖（−と
表示）と判定し、表１に示した。

【００３０】３）試験結果 この試験の結果は表１に示すとおりである。表１から明
らかなとおり、ラクトフェリン加水分解物２００μｇ／
ｍｌ単独では、試験菌の増殖を抑制し得なかった。一
方、フルコナゾール単独では１６μｇ／ｍｌで増殖を抑
制したが、ラクトフェリン加水分解物２００μｇ／ｍｌ
が共存することによって、増殖を抑制するのに必要なケ
トコナゾール量は１μｇ／ｍｌ（１／１６）まで顕著に
減少した。尚、真菌及びラクトフェリン加水分解物の種
類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００３１】

【表１】

【００３２】試験例２ １）試料の調製 アゾール系抗真菌剤としてイトリゾールカプセル５０
（「イトリゾール」は登録商標。ヤンセン協和社製）か
ら、常法により精製したイトラコナゾールを０．１規定
塩酸、ジメチルスルフォキサイド（ナカライテスク社
製）に溶解して用いたことを除き、試験例１と同一の方
法により試料を調製した。

【００３３】２）試験方法 試験例１と同一の方法によって試験を行った。

【００３４】３）試験結果 この試験の結果は表２に示すとおりである。表２から明
らかなとおり、ラクトフェリン加水分解物２００μｇ／
ｍｌ単独では増殖を抑制し得なかった。一方、イトラコ
ナゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで増殖を抑制したが、
ラクトフェリン加水分解物２００μｇ／ｍｌが共存する
ことによって、増殖を抑制するのに必要なイトラコナゾ
ール量は３．１ｎｇ／ｍｌ（１／１６）まで顕著に減少
した。尚、真菌及びラクトフェリン加水分解物の種類を
変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００３５】

【表２】

【００３６】試験例３ １）試料の調製 アゾール系抗真菌剤としてクロトリマゾール（シグマ社
製）をジメチルスルフォキサイド（ナカライテスク社
製）に溶解して用いたことを除き、試験例１と同一の方
法により試料を調製した。

【００３７】２）試験方法 試験例１と同一の方法によって試験を行った。

【００３８】３）試験結果 この試験の結果は表３に示すとおりである。表３から明
らかなとおり、ラクトフェリン加水分解物２００μｇ／
ｍｌ単独では増殖を抑制し得なかった。一方、クロトリ
マゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで増殖を抑制したが、
ラクトフェリン加水分解物２００μｇ／ｍｌが共存する
ことによって、増殖を抑制するのに必要なクロトリマゾ
ール量は３．１ｎｇ／ｍｌ（１／１６）まで顕著に減少
した。尚、真菌及びラクトフェリン加水分解物の種類を
変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００３９】

【表３】

【００４０】試験例４ １）試料の調製 アゾール系抗真菌剤としてケトコナゾール（シグマ社
製）をジメチルスルフォキサイド（ナカライテスク社
製）に溶解して用いたことを除き、試験例１と同一の方
法により試料を調製した。

【００４１】２）試験方法 試験例１と同一の方法によって試験を行った。

【００４２】３）試験結果 この試験の結果は表４に示すとおりである。表４から明
らかなとおり、ラクトフェリン加水分解物２００μｇ／
ｍｌ単独では増殖を抑制し得なかった。一方、ケトコナ
ゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで増殖を抑制したが、ラ
クトフェリン加水分解物２００μｇ／ｍｌが共存するこ
とによって、増殖を抑制するのに必要なケトコナゾール
量は３．１ｎｇ／ｍｌ（１／１６）まで顕著に減少し
た。尚、真菌及びラクトフェリン加水分解物の種類を変
更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００４３】

【表４】

【００４４】試験例５ １）試料の調製 アゾール系抗真菌剤としてアスタット液（「アスタッ
ト」は登録商標。ツムラ社製）から精製したラノコナゾ
ールをジメチルスルフォキサイド（ナカライテスク社
製）に溶解して用いたことを除き、試験例１と同一の方
法により試料を調製した。

【００４５】２）試験方法 試験例１と同一の方法によって試験を行った。

【００４６】３）試験結果 この試験結果は表５に示すとおりである。表５から明ら
かなとおりに、ラクトフェリン加水分解物２００μｇ／
ｍｌ単独では増殖を抑制し得なかった。一方、ラノコナ
ゾール単独では８００ｎｇ／ｍｌで増殖を抑制したが、
ラクトフェリン加水分解物２００μｇ／ｍｌが共存する
ことによって、増殖を抑制するのに必要なラノコナゾー
ル量は５０ｎｇ／ｍｌ（１／１６）まで顕著に減少し
た。尚、真菌及びラクトフェリン加水分解物の種類を変
更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００４７】

【表５】

【００４８】試験例６ １）試料の調製 参考例２と同様の方法で製造したラクトフェリン由来抗
菌性ペプチドを蒸留水に溶解し、滅菌濾過したことを除
き、試験例１と同一の方法により試料を調製した。

【００４９】２）試験方法 ラクトフェリン由来抗菌性ペプチドを試験培地１ｍｌに
３．１μｇの割合で添加したことを除き、試験例１と同
一の方法によって試験を行った。

【００５０】３）試験結果 この試験の結果は表６に示すとおりである。表６から明
らかなとおり、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド３．
１μｇ／ｍｌ単独では増殖を抑制し得なかった。一方、
フルコナゾール単独では１６μｇ／ｍｌで増殖を抑制し
たが、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド３．１μｇ／
ｍｌが共存することによって、増殖を抑制するのに必要
なフルコナゾール量は４μｇ／ｍｌ（１／４）に減少し
た。尚、真菌及びラクトフェリン抗菌性ペプチドの種類
を変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００５１】

【表６】

【００５２】試験例７ １）試料の調製 アゾール系抗真菌剤としてイトリゾールカプセル５０
（「イトリゾール」は登録商標。ヤンセン協和社製）か
ら精製したイトラコナゾールを０．１規定塩酸、ジメチ
ルスルフォキサイド（ナカライテスク社製）に溶解して
用いたこと及び参考例３と同様の方法で製造したラクト
フェリン由来抗菌性ペプチドを蒸留水に溶解し、滅菌濾
過したことを除き、試験例１と同一の方法により試料を
調製した。

【００５３】２）試験方法 ラクトフェリン由来抗菌性ペプチドを試験培地１ｍｌに
３．１μｇの割合で添加したことを除き、試験例１と同
一の方法によって試験を行った。

【００５４】３）試験結果 この試験の結果は表７に示すとおりである。表７から明
らかなとおり、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド３．
１μｇ／ｍｌ単独では増殖を抑制し得なかった。一方、
イトラコナゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで増殖を抑制
したが、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド３．１μｇ
／ｍｌが共存することによって、増殖を抑制するのに必
要なイトラコナゾール量は１２．５ｎｇ／ｍｌ（１／
４）まで減少した。尚、真菌及びラクトフェリン由来抗
菌性ペプチドの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の
結果が得られた。

【００５５】

【表７】

【００５６】試験例８ １）試料の調製 アゾール系抗真菌剤としてクロトリマゾール（シグマ社
製）をジメチルスルフォキサイド（ナカライテスク社
製）に溶解して用いたこと及び配列番号５のラクトフェ
リン由来抗菌性ペプチドを蒸留水に溶解し、滅菌濾過し
たことを除き、試験例１と同一の方法により試料を調製
した。

【００５７】２）試験方法 ラクトフェリン由来抗菌性ペプチドを試験培地１ｍｌに
３．１μｇの割合で添加したことを除き、試験例１と同
一の方法によって試験を行った。

【００５８】３）試験結果 この試験の結果は表８に示すとおりである。表８から明
らかなとおり、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド３．
１μｇ／ｍｌ単独では増殖を抑制し得なかった。一方、
クロトリマゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで増殖を抑制
したが、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド３．１μｇ
／ｍｌが共存することによって、増殖を抑制するのに必
要なクロトリマゾール量は１２．５ｎｇ／ｍｌ（１／
４）まで減少した。尚、真菌及びラクトフェリン由来抗
菌性ペプチドの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の
結果が得られた。

【００５９】

【表８】

【００６０】試験例９ １）試料の調製 アゾール系抗真菌剤としてケトコナゾール（シグマ社
製）をジメチルスルフォキサイド（ナカライテスク社
製）に溶解して用いたこと及び配列番号６のラクトフェ
リン由来抗菌性ペプチドを蒸留水に溶解し、滅菌濾過し
たことを除き、試験例１と同一の方法により試料を調製
した。

【００６１】２）試験方法 ラクトフェリン由来抗菌性ペプチドを試験培地１ｍｌに
３．１μｇの割合で添加したことを除き、試験例１と同
一の方法によって試験を行った。

【００６２】３）試験結果 この試験の結果は表９に示すとおりである。表９から明
らかなとおり、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド３．
１μｇ／ｍｌ単独では増殖を抑制し得なかった。一方、
ケトコナゾール単独では５０ｎｇ／ｍｌで増殖を抑制し
たが、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド３．１μｇ／
ｍｌが共存することによって、増殖を抑制するのに必要
なクロトリマゾール量は１２．５ｎｇ／ｍｌ（１／４）
まで減少した。尚、真菌及びラクトフェリン由来抗菌性
ペプチドの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の結果
が得られた。

【００６３】

【表９】

【００６４】試験例１０ １）試料の調製 アゾール系抗真菌剤としてアスタット液（「アスタッ
ト」は登録商標。ツムラ社製）から精製したラノコナゾ
ールをジメチルスルフォキサイド（ナカライテスク社
製）に溶解して用いたこと及び配列番号７のラクトフェ
リン由来抗菌性ペプチドを蒸留水に溶解し、滅菌濾過し
たことを除き、試験例１と同一の方法により試料を調製
した。

【００６５】２）試験方法 ラクトフェリン由来抗菌性ペプチドを試験培地１ｍｌに
３．１μｇの割合で添加したことを除き、試験例１と同
一の方法によって試験を行った。

【００６６】３）試験結果 この試験の結果は表１０に示すとおりである。表１０か
ら明らかなとおり、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド
３．１μｇ／ｍｌ単独では増殖を抑制し得なかった。一
方、ラノコナゾール単独では３２００ｎｇ／ｍｌで増殖
を抑制したが、ラクトフェリン由来抗菌性ペプチド３．
１μｇ／ｍｌが共存することによって、増殖を抑制する
のに必要なラノコナゾール量は８００ｎｇ／ｍｌ（１／
４）まで減少した。尚、真菌及びラクトフェリン由来抗
菌性ペプチドの種類を変更して試験したが、ほぼ同様の
結果が得られた。

【００６７】

【表１０】

【００６８】参考例１ ウシ・ラクトフェリン（シグマ社製）５０ｍｇを精製水
０．９ｍｌに溶解し、０．１規定塩酸でｐＨを２．５に
調整し、のち市販のブタペプシン（シグマ社製）１ｍｇ
を添加し、３７℃で６時間加水分解した。次いで０．１
規定水酸化ナトリウムでｐＨを７．０に調整し、８０℃
で１０分間加熱して酵素を失活させ、室温に冷却し、１
５，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、透明な上清を
得た。この上清を凍結乾燥し、ラクトフェリン加水分解
物を得た。

【００６９】参考例２ 参考例１で製造したラクトフェリン加水分解物を水に溶
解し、１００μｌをＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ（東ソ
−社製）を用いた高速液体クロマトグラフィ−にかけ、
０．８ｍｌ／分の流速で試料注入後１０分間０．０５％
ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）を含む２０％アセトニトリ
ルで溶出し、のち３０分間０．０５％ＴＦＡを含む２０
〜６０％のアセトニトリルのグラジエントで溶出し、２
４〜２５分の間に溶出する画分を集め、真空乾燥した。
この乾燥物を２％（Ｗ／Ｖ）の濃度で精製水に溶解し、
再度ＴＳＫゲルＯＤＳ−１２０Ｔ（東ソ−社製）を用い
た高速液体クロマトグラフィ−にかけ、０．８ｍｌ／分
の流速で試料注入後１０分間０．０５％ＴＦＡを含む２
４％アセトニトリルで溶出し、のち３０分間０．０５％
ＴＦＡを含む２４〜３２％のアセトニトリルのグラジエ
ントで溶出し、３３．５〜３５．５分の間に溶出する画
分を集めた。上記の操作を２５回反復し、真空乾燥し、
配列番号１のラクトフェリン由来抗菌性ペプチド約１．
５ｍｇを得た。

【００７０】参考例３ ペプチド自動合成装置（ファルマシアＬＫＢバイオテク
ノロジ−社製。ＬＫＢＢｉｏｌｙｎｘ４１７０）を用
い、シェパ−ド等による固相ペプチド合成法［ジャ−ナ
ル・オブ・ケミカル・ソサイエティ−・パ−キンＩ（Jo
urnal of Chemical Society Perkin Ｉ）、第５３８
頁、１９８１年］に基づいてペプチドを次のようにして
合成した。

【００７１】アミン官能基を９−フルオレニルメトキシ
カルボニル基で保護したアミノ酸［以下Fmoc−アミノ酸
またはFmoc−固有のアミノ酸の名称（例えば、Fmoc−ア
スパラギン）と記載することがある］に、Ｎ，Ｎ−ジシ
クロヘキシルカルボジイミドを添加して所望のアミノ酸
の無水物を生成させ、このFmoc−アミノ酸無水物を合成
に用いた。ペプチド鎖を製造するためにＣ−末端のセリ
ン残基に相当するFmoc−セリン無水物を、そのカルボキ
シル基を介し、ジメチルアミノピリジンを触媒としてウ
ルトロシンＡ樹脂（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロ
ジ−社製）に固定する。次いでこの樹脂をピペリジンを
含むジメチルホルムアミドで洗浄し、Ｃ−末端アミノ酸
のアミン官能基の保護基を除去する。のちアミノ酸配列
のＣ−末端から２番目に相当するFmoc−アスパラギン酸
無水物を前記Ｃ−末端アミノ酸残基を介して樹脂に固定
されたセリンの脱保護アミン官能基にカップリングさせ
た。以下同様にして順次アミノ酸を固定した。全部のア
ミノ酸のカップリングが終了し、所望のアミノ酸配列の
ペプチド鎖が形成された後、９４％ＴＦＡ、５％フェノ
−ル、および１％エタンジオ−ルからなる溶媒でアセト
アミドメチル以外の保護基の除去およびペプチドの脱離
を行ない、自然酸化によりジスルフィド結合を形成し、
高速液体クロマトグラフイ−によりペプチドを精製し、
この溶液を濃縮し、乾燥して、ペプチド粉末を得た。

【００７２】前記のペプチドについてペプチドシーケン
サーを用いて常法によりアミノ酸配列を分析し、配列番
号３に記載のアミノ酸配列を有することを確認した。

【００７３】次に実施例により本発明を更に詳細に説明
するが、本発明は以下の実施例により限定されるもので
はない。

【００７４】

【実施例】

実施例１ ケトコナゾール（シグマ社製）１ｍｇに対して参考例１
の方法で製造したラクトフェリン加水分解物１ｇの割合
で混合し、常法により内服用抗真菌剤を製造した。

【００７５】実施例２ 注射用水（大塚製薬社製）１０ｍｌに、ケトコナゾール
（シグマ社製）１ｍｇ、参考例２の方法で製造した配列
番号１のラクトフェリン由来抗菌性ペプチド１００ｍ
ｇ、塩化ナトリウム（和光純薬社製）１００ｍｇを溶解
し、ｐＨを７に調整し、濾過滅菌し、１ｍｌずつアンプ
ルに充填し、注射用の抗真菌剤１０個を得た。

【００７６】実施例３ 参考例３の方法で製造した配列番号３のラクトフェリン
由来抗菌性ペプチド１ｇ、パラオキシ安息香酸メチル
（ナカライテスク社製）０．１ｇ、パラオキシ安息香酸
プロピル（ナカライテスク社製）０．１ｇ、プロピレン
グリコール（ナカライテスク社製）１２ｇ、精製水２
７．８ｇを加温しながら撹袢溶解した。別に予め、クロ
トリマゾール（シグマ社製）５ｍｇ、白色ワセリン（ナ
カライテスク社製）２５ｇ、ステアリルアルコール（ナ
カライテスク社製）２０ｇ、ポリオキシエチレン硬化ヒ
マシ油（ナカライテスク社製）４ｇ、モノステアリン酸
グリセリン（ナカライテスク社製）１ｇを加温しながら
撹袢混合した溶液を前記溶液に添加し、ホモミキサーを
用いて乳化し、Ｏ／Ｗ型クリームを調製し、１０ｇずつ
アルミチューブに充填し、外用抗真菌剤１０個を得た。

【００７７】

【発明の効果】以上詳述したとおり、本発明は、アゾー
ル系抗真菌剤及びラクトフェリン加水分解物又はラクト
フェリン由来抗菌性ペプチドを有効成分として含有する
抗真菌剤であり、本発明により奏せられる効果は次のと
おりである。

【００７８】１）本発明の抗真菌剤は、少用量で強い抗
真菌効果を有するので、種々の真菌症の治療剤として使
用できる。

【００７９】２）本発明の抗真菌剤は、消化管内でのカ
ンジダ菌の異常増殖の阻止手段としても、安全に使用で
きる。

【００８０】３）本発明の抗真菌剤は、副作用が少な
く、耐性菌の出現頻度が低下する。

【００８１】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、３番
の Cysと２０番の Cysがジスルフィド結合している。 配列： Phe Lys Cys Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala 1 5 10 15 Pro Ser Ile Thr Cys Val Arg Arg Ala Phe 20 25

【００８２】配列番号：２ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列においてCys*
は、ジスルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル
基を化学的に修飾したシステインを示す。 配列： Phe Lys Cys* Arg Arg Trp Gln Trp Arg Met Lys Lys Leu Gly Ala 1 5 10 15 Pro Ser Ile Thr Cys* Val Arg Arg Ala Phe 20 25

【００８３】配列番号：３ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、３番
の Cysと２０番の Cysがジスルフィド結合している。 配列： Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly 1 5 10 15 Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp Ser 20 25

【００８４】配列番号：４ 配列の長さ：２５ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列においてCys*
は、ジスルフィド結合の形成を防止するため、チオ−ル
基を化学的に修飾したシステインを示す。 配列： Thr Lys Cys* Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val Arg Gly 1 5 10 15 Pro Pro Val Ser Cys* Ile Lys Arg Asp Ser 20 25

【００８５】配列番号：５ 配列の長さ：４７ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、配列
の長さ３６であって９番、２６番、及び３５番に Cysを
有するペプチドの、９番の Cysと２６番の Cysとがジス
ルフィド結合し、上記配列の長さ３６のペプチドの３５
番の Cysが、配列の長さ１１であって１０番にCysを有
するペプチドの１０番の Cysとがジスルフィド結合して
いる。 配列： Val Ser Gln Pro Glu Ala Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5 10 15 Met Arg Lys Val Arg Gly Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp 20 25 30 Ser Pro Ile Gln Cys Ile 35 Gly Arg Arg Arg Arg Ser Val Gln Trp Cys Ala 1 5 10

【００８６】配列番号：６ 配列の長さ：４７ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、１０
番の Cysと４６番の Cysとがジスルフィド結合し、２０
番の Cysと３７番のCys とがジスルフィド結合してい
る。 配列： Gly Arg Arg Arg Arg Ser Val Gln Trp Cys Ala Val Ser Gln Pro 1 5 10 15 Glu Ala Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn Met Arg Lys Val 20 25 30 Arg Gly Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp Ser Pro Ile Gln 35 40 45 Cys Ile

【００８７】配列番号：７ 配列の長さ：３６ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド。下記配列において、９番
の Cysと２６番の Cysとがジスルフィド結合している。 配列： Val Ser Gln Pro Glu Ala Thr Lys Cys Phe Gln Trp Gln Arg Asn 1 5 10 15 Met Arg Lys Val Arg Gly Pro Pro Val Ser Cys Ile Lys Arg Asp 20 25 30 Ser Pro Ile Gln Cys Ile 35

【００８８】配列番号：８ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列の特徴：このペプチド、およびこのペプチドをフラ
グメントとして含むペプチド

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 川瀬 興三 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社栄養科学研究所内 (72)発明者 山内 恒治 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社栄養科学研究所内 (72)発明者 若林 裕之 神奈川県座間市東原５−１−83 森永乳業 株式会社栄養科学研究所内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アゾール系抗真菌剤及びラクトフェリン
   類の加水分解物又はラクトフェリン類の加水分解物由来
   の抗菌性ペプチドを有効成分として含有する抗真菌剤。
2. 【請求項２】 アゾール系抗真菌剤が、フルコナゾー
   ル、イトラコナゾール、クロトリマゾール、ケトコナゾ
   ール、ラノコナゾール又はこれらの混合物である請求項
   １に記載の抗真菌剤。
3. 【請求項３】 ラクトフェリン類の加水分解物由来の抗
   菌性ペプチドが、牛乳若しくは人乳由来のラクトフェリ
   ン類の加水分解物から単離されたペプチド、このペプチ
   ドと同一のアミノ酸配列を含む化学合成されたペプチ
   ド、それらの誘導体、又はこれらの２種以上の混合物で
   ある請求項１又は請求項２に記載の抗真菌剤。
4. 【請求項４】 ラクトフェリン類の加水分解物由来の抗
   菌性ペプチドが、配列番号１乃至配列番号８のいずれか
   に記載されたアミノ酸配列を有する請求項１乃至請求項
   ３の抗真菌剤。
5. 【請求項５】 アゾール系抗真菌剤１部（重量）に対し
   てラクトフェリン類の加水分解物が、少なくとも１００
   部（重量）の割合で含有されている請求項１又は請求項
   ２に記載の抗真菌剤。
6. 【請求項６】 アゾール系抗真菌剤１部（重量）に対し
   てラクトフェリン類の加水分解物由来の抗菌性ペプチド
   が、少なくとも０．５部（重量）の割合で含有されてい
   る請求項１乃至請求項４に記載の抗真菌剤。