CN1360505A - 假单胞霉素抗真菌组合物和它们的使用方法 - Google Patents
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Abstract
治疗真菌感染的组合物和方法,其包括假单胞霉素或相关抗真菌剂和环糊精的制剂。该组合物在药物应用中是特别有效的,以减少副作用。
Description
发明领域
本发明涉及治疗真菌感染的组合物和方法,包括假单胞霉素(pseudomycin)或脂缩酚十肽(lipodepsidecapeptide)和环糊精,特别是,羟丙基-β-环糊精或磺基丁基醚-β-环糊精。
背景
真菌感染是人类,特别是免疫损害患者之中,疾病,生活质量下降,和死亡的重要原因。人类真菌感染的发病率在过去20年中大大地上升。这部分是由于具有变弱或损害的免疫系统的人数增加所致,其中免疫系统是由于器官移植,癌症化疗,AIDS,老化,和其它类似的病症或情况而变弱和损害的。这种患者倾向于由于真菌病原体而发病,该病原体是通过群体流行的,但是可以通过运行免疫系统而控制。这些病原体是难以控制的,因为某些现有的抗真菌剂或者是高毒性的,或者仅仅抑制真菌的活性。例如,多烯是杀真菌的但是有毒;而,吡咯毒性低,但仅仅是制真菌的。更重要的是,近来已经有了念珠菌属的吡咯和多烯抗性品系的报道,相对于这种菌株,其严重地抑制了治疗的选择。
一类新的抗真菌剂,假单胞霉素,对于治疗各种患者的真菌感染显示了较大的希望。假单胞霉素是来源于丁香假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)分离菌的天然产品。丁香假单胞杆菌是一大族植物细菌,其是若干生物活性物质,如杆菌肽和丁香霉素的来源。天然菌株和丁香假单胞杆菌突变株产生的转位子产生具有抗真菌活性的化合物。丁香假单胞杆菌174的野生型菌株的调节突变株产生的转位子,称为MSU 16H(ATCC 67028),产生各种假单胞霉素。例如,已经分离和纯化了各假单胞霉素A,B,C和C′,且它们的结构已经通过包括氨基酸序列,NMR,质谱的方法鉴定了,且已经显示出具有广谱的抗真菌活性,包括对人和植物中的重要真菌病原体的活性。见,例如,Ballio et al.,“来源于丁香假单胞杆菌的新的生物活性的lipodepsipeptides,”FEBS Lett.355.96-100(1994)和美国专利第5,576,298。假单胞霉素,丁香霉素,丁香假单胞菌毒素和syringostatins代表抗真菌化合物的结构上独特的一族。
至今,对于抗真菌治疗有效的,来源于丁香假单胞杆菌的假单胞霉素和相关的抗真菌剂还没有研制。代表性地,假单胞霉素的注射伴随有不可接受的副作用,如注射部位的刺激性。因而需要一种假单胞霉素或相关抗真菌剂的组合物,其可用于治疗真菌感染,且在一定的假单胞霉素制剂中没有观察到副作用。
发明概述
本发明涉及一种有效的组合物和方法,在需要时,将假单胞霉素或相关的抗真菌剂给予患者。该方法包括通过给予有效量的组合物来治疗真菌感染,其中该组合物包含假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关的抗真菌剂和羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精。该方法对于减少真菌感染的症状且,优选地,杀死引起感染的真菌是有效的。该方法对于真菌,包括念珠菌,新型隐球菌,烟曲霉,和荚膜组织胞浆菌的感染是有效的。在第二个实施方案中,该方法减少注射假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂的副作用,其中是在含羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精的组合物中给予假单胞霉素或相关抗真菌剂的。在另一个实施方案中,该方法包括给予毒理学相应剂量的假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关的抗真菌剂,其是在含羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精和假单胞霉素的组合物中的。
该方法中的组合物包括假单胞霉素或相关的抗真菌剂,如假单胞霉素B,或相关的抗真菌剂和羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精。这种组合物对于真菌感染症状的减轻或治疗,对于减少注射假单胞霉素,如假单胞霉素β,或相关抗真菌剂的副作用,对于给予毒理学相关剂量的假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关的抗真菌剂是有效的。该组合物包括摩尔量超出假单胞霉素或相关的抗真菌剂的环糊精,优选至少过量大约两-倍的摩尔数,且适于非肠道给药。该组合物可以包括赋形剂如氯化钠,甘露醇,或葡萄糖,其调节组合物的毒性。该组合物可用于治疗真菌感染的药物的生产,该组合物包括假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂,或其药学上可接受的盐,水合物或酯,和羟烷基-β-环糊精或磺烷基醚-β-环糊精的组合。
定义
此处使用的,术语“假单胞霉素”指的是具有化学式I的化合物:其中R是亲脂性部分。该亲脂性部分包括C9-C15烷基,C9-C15羟烷基,C9-C15二羟烷基,C9-C15链烯基,C9-C15羟链烯基,或C9-C15二羟链烯基。假单胞霉素化合物A,A′,B,B′,C,C′是通过上面的化学式I代表的,其中R定义如下。
假单胞霉素A R=3,4-二羟基十四烷酰
假单胞霉素A′ R=3,4-二羟基十五酸盐
假单胞霉素B R=3-羟基十四烷酰
假单胞霉素B′ R=3-羟基癸酸盐
假单胞霉素C R=3,4-二羟基十六烷酰
假单胞霉素C′ R=3-羟基十六烷酰
此处使用的,术语“脂缩酚十肽”指的是具有化学式II的化合物:其中,R是亲脂性部分。该亲脂性部分包括C9-C15烷基,C9-C15羟烷基,C9-C15二羟烷基,C9-C15链烯基,C9-C15羟链烯基,或C9-C15二羟链烯基。优选地,该亲脂性部分是C11烷基。烷基,羟烷基,二羟烷基,链烯基,羟链烯基或二羟链烯基可以是支链的或无支链的。优选地,depsidecapeptide环的氨基酸序列是苏氨酸-丙氨酸-苏氨酸-谷氨酸-高丝氨酸-脱氢氨基丁酸-丙氨酸-脱氢丙氨酸-苏氨酸-精氨酸,此处称作“25-B1十肽”或
“Thr-Ala-Thr-Gln-Xaa-Xaa-Ala-Xaa-Thr-Arg(SEQ ID NO:1)”。
此处使用的,术语“25-B1十肽抗真菌剂A”指的是具有优选氨基酸序列SEQ ID NO:1且R是无支链的C11烷基(即,R=-(CH2)10CH3)的特殊depsidecapeptide。
上述假单胞霉素和相关的假单胞霉素(例如,脂缩酚十肽s)的任一类似物或衍生物也认为包括在本发明的精神之内。虽然上面描述了特殊的构象,其它的立体异构体和非对映的立体异构体也包括在本发明的精神之内。
详细的描述假单胞霉素和相关的抗真菌剂
此处使用的,假单胞霉素(PS)指的是抗真菌剂一族中的一种或多种组成部分,其已经从丁香假单胞杆菌中分离出来了。假单胞霉素是一种lipodepsipeptide,一种环化肽,其包括一种或多种稀有氨基酸且具有一个或多个附加的疏水的或脂肪酸侧链。特别地,假单胞霉素是lipodepsi nanopeptide,具有通过内酯键闭合的环化肽部分,并包括稀有氨基酸4-氯苏氨酸(ClThr),3-羟基天门冬氨酸(HOAsp),2,3-脱氢-2-氨基丁酸(Dhb),和2,4-二氨基丁酸(Dab)。相信这些稀有氨基酸包含在假单胞霉素的生物特性之内,如在血清中的稳定性和它们的杀伤作用。假单胞霉素包括假单胞霉素A,假单胞霉素A′,假单胞霉素B(PSB),假单胞霉素B′,假单胞霉素C,和假单胞霉素C′。这些假单胞霉素中的每一种均具有相同的环化肽核,但是他们附着在此核上的疏水侧链不同。
假单胞霉素A,A′,B,B′,C和C′中的每种均已经被分离和纯化了,且它们的结构已经通过包括排序,NMR,和质谱的方法鉴定了。见,例如,美国专利第5,576,298,1996年11月19日出版,Strobelet al.,Hartison et al.;“假单胞霉素,具有广谱抗真菌活性的来源于丁香假单胞杆菌的一族新的肽”J.Gen.Microbiology137,2857-2865(1991);Ballio et al.,“来源于丁香假单胞杆菌的新的生物活性的lipodepsipeptides:the假单胞霉素”FEBSLett.355,96-100(1994);和Coiro,V.M.,et al.,“使用距离集合和分子动力学通过计算机模拟自NMR数据确定的丁香假单胞杆菌MSU 16H植物毒性的lipodepsipeptide假单胞霉素A的溶液构成”Eur.J.Biochem.。257(2),449-456(1998)。归因于假单胞霉素的抗真菌活性要追溯到具有已知的Tn 903转位子的丁香假单胞杆菌上,其编码卡那霉素的抗性。转位子Tn 903的序列和操纵方法是已知的。Oka et al J.Mol.Biol.147,217-226(1981);“卡那霉素抗性转位子Tn 903的核苷酸序列”。各种丁香假单胞杆菌菌株的培养方法和它们在抗真菌剂,如假单胞霉素生产中的用途由Matthew D.Hilton在美国专利申请系列第PCT/US00/08728中公开,名称为“自丁香假单胞杆菌的假单胞霉素的生产”,其是在同此相同的日期递交的,且下面描述了来源于保藏的生物材料的假单胞霉素和脂缩酚十肽s的生产(见实施例)。假单胞霉素A′和B′由PalaniappanKulanthaivel在美国专利申请系列第PCT/US00/08727中描述,名称为“假单胞霉素天然产物”,其是在同此相同的日期递交的,且可以使用下述一般的过程来生产。此段引证的各参考文献是特别引入此处作为参考的。
假单胞霉素的结构和特性发生变化。假单胞霉素显示了对广谱多种真菌的活性,而且还抑制通常可接受的毒性。与其它的假单胞霉素相比,假单胞霉素B对于某些真菌具有更大的潜能和更低的毒性水平。因此,对于本发明的制剂和方法来说,假单胞霉素B是优选的。假单胞霉素的结构是通过上面的化学式I代表的,其中R=3-羟基十四烷酰。假单胞霉素B具有环状的九肽环,该九肽环具有序列Ser-Dab-Asp-Lys-Dab-Thr-Dhb-HOAsp-ClThr,更特别的是,用ClThr的羧基和丝氨酸的羟基闭合的,具有内酯键的环L-Ser-D-Dab-L-Asp-L-Lys-L-Dab-L-aThr-Z-Dhb-L-Asp(3-OH)-L-Thr(4-Cl)。丝氨酸的胺基用3-单羟基十四烷酰基部分的羧基形成酰胺键。丝氨酸的羧基用环中的Dab形成酰胺键。
此处使用的,与假单胞霉素相关的抗真菌剂包括用丁香假单胞杆菌生产的脂缩酚十肽抗真菌剂。这类化合物的代表,25-B1十肽抗真菌剂A,已经被纯化了,并确定了它的结构。脂缩酚十肽抗真菌剂,如25-B1十肽抗真菌剂A,已经由Palaniappan Kulanthaivel在美国专利申请系列第PCT/US00/08724中描述了,名称为“从丁香假单胞杆菌分离的抗真菌剂”,其是在同一日期递交的,且可以使用下述的一般过程来生产。此专利申请是特别引入此处作为参考的。假单胞霉素的生产方法
为了自丁香假单胞杆菌的突变菌株或野生型菌株生产一种或多种假单胞霉素,在含水的营养培养基中搅拌培养生物体,该营养培养基包括有效量的三种或更少的氨基酸。这三种或更少的氨基酸是优选的谷氨酸,甘氨酸,组氨酸,或其组合。在一个优选的实施方案中,氨基酸包括甘氨酸和,任选地,一种或多种马铃薯产品和脂类。培养是在对丁香假单胞杆菌的生长和所期望的假单胞霉素或假单胞霉素的生产有效的条件下进行的。有效的条件包括大约22℃-27℃的温度,大约36小时-大约96小时的持续时间。当在培养基,如此处描述的那些中培养时,丁香假单胞杆菌可以在直到大约10-15g/L干重的细胞密度中生长,并生产总量至少大约10μg/mL,优选至少大约40μg/mL,更优选大约500μg/mL或更多的假单胞霉素。
调节丁香假单胞杆菌培养过程中培养基中的氧浓度对于假单胞霉素的生产是有利的。优选地,氧的水平保持在大约5%-大约50%饱和度,更优选大约30%的饱和度。用空气,用纯氧,或用含氧的气体混合物喷射,可以调节培养基中氧的浓度。此外,搅拌速率的调节可用于调节氧的传递速率。
调节丁香假单胞杆菌培养过程中的培养基的PH对于假单胞霉素的生产是有利的。假单胞霉素在碱性PH时不稳定,且如果培养基的PH大于6超过大约12小时,则可能发生严重的降解。优选地,培养基的PH保持在小于6,更优选小于5.5,最优选大约4.0。PH优选保持在大约5-5.4,更优选大约5.0-5.2。虽然没有限制于本发明,相信在碱性PH下的假单胞霉素降解归因于内酯环的开环和Cl-的脱去。
当在分批培养中生长时,丁香假单胞杆菌可以生产一种或多种假单胞霉素。然而,可调节PH的葡萄糖和,任选地,酸或碱,如氢氧化铵的半-持续给料或分批给料,能提高假单胞霉素的产量。自丁香假单胞杆菌的假单胞霉素的生产可以通过使用连续进料的方法得到进一步的提高,其中调节PH的葡萄糖和,任选地,酸或碱,如氢氧化铵是自动进料的。
使用丁香假单胞杆菌,可以生产一种或多种基本量的假单胞霉素。即,一种或多种假单胞霉素的总量为至少大约200μg/mL-900μg/mL,优选大约600μg/mL-900μg/mL,更优选大约800μg/mL-900μg/mL。优选地,对于假单胞霉素A的生产,所生产的假单胞霉素A的总量为至少大约10μg/mL-400μg/mL,更优选大约300μg/mL-400μg/mL,最优选大约350μg/mL-大约400μg/mL。优选地,对于假单胞霉素B的生产,所生产的假单胞霉素B的总量为至少大约10μg/mL-300μg/mL,更优选大约200μg/mL-300μg/mL,最优选大约250μg/mL-300μg/mL。优选地,对于假单胞霉素C的生产,所生产的假单胞霉素C的总量为至少大约5μg/mL-100μg/mL,更优选大约5μg/mL-50μg/mL,最优选大约10μg/mL-50μg/mL。优选地,对于假单胞霉素C’的生产,所生产的假单胞霉素C’的总量为至少大约1μg/mL-50μg/mL,更优选大约10μg/mL-50μg/mL,最优选大约30μg/mL-50μg/mL。用于假单胞霉素A’和/或B’生产的有效条件包括大约22℃-27℃的温度和大约36小时-96小时的持续时间。当在培养基,如此处描述的那些中培养时,丁香假单胞杆菌可以在直到10-15g/L干燥重量的细胞密度中生长,并产生总量至少约10μg/mL的假单胞霉素。
丁香假单胞杆菌菌株的选择可以影响假单胞霉素或假单胞霉素的分布和量,其是通过在此处描述的条件下培养所产生的。例如,菌株MSU 16H和67H1,和相似的菌株,每种均主要生产假单胞霉素A,但是也生产假单胞霉素B和C,大概的比例为4∶2∶1。菌株67 H1和相似菌株,然而,代表性地,生产的假单胞霉素的水平,比用菌株MSU 16H生产的大3-5倍。与菌株MSU 16H和67H1相比,菌株25-B1和相似菌株生产更多的假单胞霉素B和更少的假单胞霉素C。菌株7H9-1和相似菌株是独特地,主要生产假单胞霉素B,其可以比其它菌株生产出更大量的假单胞霉素B。例如,此菌株可以生产超过假单胞霉素A或C至少10倍的假单胞霉素B。假单胞霉素A’和/或B’可以自丁香假单胞杆菌的突变株生产。突变株是通过用对产生突变株有效的诱变剂量处理细菌而生产的,其过量生产假单胞霉素A’和/或B’,生产超过其它假单胞霉素的假单胞霉素A’或B’,或在有利的生长条件下生产假单胞霉素A’或B’。然而所使用的诱变剂的量和类型可以变化,优选的方法是连续稀释NTG至1-100μg/ml的水平。突变株过量产生假单胞霉素A’和/或B’,优选地到至少大约10μg/mL。
可以通过那些本领域技术人员已知的各种方法中的任一种来检测,确定,分离和/或纯化每种假单胞霉素或假单胞霉素的混合物。例如,在液体培养基中或在分离或纯化的组合物中的假单胞霉素活性的水平可以用对真菌,如念珠菌属的抗真菌作用来确定。假单胞霉素分析和制备的许多方法均是已知的。例如,可以通过层析,如HPLC来分离和纯化一种或多种假单胞霉素。丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽的生产方法
为了自丁香假单胞杆菌的突变菌株或野生型菌株生产一种或多种丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽s,如25-B1十肽抗真菌剂A,在含水的营养培养基中搅拌培养生物体,其中的营养培养基包含有效量的三种或更少的氨基酸。这三种或更少的氨基酸是优选的谷氨酸,甘氨酸,组氨酸,或其组合。在一个优选的实施方案中,氨基酸包括甘氨酸和,任选地,一种或多种马铃薯产品和脂类。培养是在对丁香假单胞杆菌的生长和所期望的丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽,如25-B1十肽抗真菌剂A的生产有效的条件下进行的。有效的条件包括大约22℃-大约27℃的温度,和大约36小时-大约96小时的持续时间。当在培养基,如此处描述的那些中培养时,丁香假单胞杆菌可以在直到大约10-15g/L干燥重量的细胞密度中生长,并产生总量至少为大约10μg/mL,优选至少大约50μg/mL的丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽,如25-B1十肽抗真菌剂A。
调节丁香假单胞杆菌培养过程中的培养基中氧的浓度对于丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽,如25-B1十肽抗真菌剂A的生产是有利的。优选地,氧的水平保持在大约5%-50%饱和度,更优选大约30%饱和度。用空气,用纯氧,或用含氧的气体混合物喷射,可以调节培养基中氧的浓度。此外,搅拌速率的调节可用于调节氧的传递速率。
调节丁香假单胞杆菌培养过程中的培养基PH对于丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽,如25-B1十肽抗真菌剂A的生产是有利的。培养基的PH可保持在大约小于6且大于4。
当在分批培养中生长时,丁香假单胞杆菌可以生产丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽,如25-B1十肽抗真菌剂A。然而,可调节PH的葡萄糖和,任选地,酸或碱,如氢氧化铵的半-持续给料或分批给料,能提高丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽,如25-Bl十肽抗真菌剂A的生产。自丁香假单胞杆菌的syringas假单胞杆菌脂缩酚十肽,如25-B1十肽抗真菌剂A的生产可以通过使用持续培养的方法得到进一步的提高,其中调节PH的葡萄糖和,任选地,酸或碱,如氢氧化铵是自动供给的。PH优选保持在大约5-5.4,更优选大约5.0-5.2。
丁香假单胞杆菌菌株的选择可以影响通过在此处描述的条件下培养而产生的丁香假单胞杆菌脂缩酚十肽,如25-B1十肽抗真菌剂A的分布和量。例如,菌株25 B1可主要生产25-B1十肽抗真菌剂A。
丁香假单胞菌脂缩酚十肽的环十肽环可以通过从亲脂部分切除来制备例如通过脱酰基。切除和脱酰基的方法是本领域技术人员已知的。环糊精
此处使用的,“环糊精”指的是包括环状α(1→4)连接的D-吡喃型葡萄糖单元的化合物。代表性地,环糊精是通过淀粉酶对淀粉的作用形成的。α-环糊精指的是具有6个环状的,连接的D-吡喃型葡萄糖单元的环糊精,β-环糊精指的7个环状的,连接的D-吡喃型葡萄糖单元的环糊精,γ-环糊精指的8个环状的,连接的D-吡喃型葡萄糖单元的环糊精。这些环状的,连接的D-吡喃型葡萄糖单元围成疏水腔,且已知环糊精在固体状态或含水溶液中形成与其它有机分子,与盐,和与卤素的包合物。最天然的,未取代的环糊精显示药物组合物中不可接受的毒性,且不能很容易地在患者的血流中一次除去。制备环糊精的方法对于本领域的那些技术人员来说是已知的。
环糊精包括取代的环糊精。此处使用的,“取代的环糊精”指的是通过在环糊精的一个或多个位置上添加侧链所形成的环糊精衍生物。该侧链可以是有机部分或杂有机部分。取代的环糊精包括已经烷化的,羟基烷化的或反应形成磺烷基醚的环糊精。取代的环糊精包括羟丙基环糊精,羟乙基环糊精,葡糖基环糊精,麦芽糖基环糊精,和磺丁基醚环糊精。制备环糊精衍生物的方法在本领域中是已知的,且一些方法在美国专利第4,727,064(Pitha,1988年2月23日授予)和5,134,127(Stella,1992年7月28日授予),欧洲专利申请公开号0 499 322A1,和Pitha et al.,Int.J.Pharm.,29,73-82(1986)中描述。此段中引证的每篇文献的内容在此引入作为参考。
环糊精的结构和性能发生改变。例如,在取代的和未取代的α-,β-,和γ-环糊精之间,疏水腔的功能性(例如,疏水性,电荷,反应性和氢结合能力)和大小(例如,直径,和深度)变化。代表性地,制剂中所选择的环糊精具有与制剂中其它组分相迎合的功能性和大小。对于本发明的制剂和方法,相信取代的环糊精,像羟烷基环糊精和磺烷基醚环糊精具有与制剂中其它组分,如假单胞霉素或相关的抗真菌剂,如假单胞霉素B相迎合的功能性和大小。优选的环糊精包括羟丙基-β-环糊精(HP-CD),和磺丁基醚-β-环糊精(SBE-CD)。
磺丁基醚环糊精是商购的,且可以通过本领域已知的方法来合成。此处使用的,磺丁基醚环糊精或SBE-CD指的是β-环糊精的磺丁基醚衍生物,代表性地在β-环糊精环的2,3,和6位上包括平均大约1-8,优选大约6-7个磺丁基醚基团。羟丙基环糊精是商购的,且可以通过本领域已知的方法来合成。此处使用的,羟丙基环糊精或HP-CD指的是β-环糊精的2-羟丙基衍生物,代表性地在β-环糊精环的2,3,和6位上包括平均大约8个2-羟丙基基团。假单胞霉素和相关抗真菌剂的生物活性
假单胞霉素具有包括杀死各种真菌,如植物和动物的真菌病原体在内的多种生物活性。特别是,假单胞霉素或相关抗真菌剂相对于真菌是活性的抗真菌剂,其中该真菌在免疫损害个体中引起条件性病原微生物感染。这些真菌包括新型隐球菌,烟曲霉,荚膜组织胞浆菌,和包括近平滑念珠菌,白色念珠菌,glabrata念珠菌,热带念珠菌,和krusei念珠菌在内的各种念珠菌。抑制,甚至杀死真菌,特别是真菌病原体的生长是所期望的和优选的假单胞霉素的生物活性。
已经显示出假单胞霉素对于宽范围的植物-病原性真菌是有毒的,该真菌包括Rynchosporium secalis,Ceratocystisulmi,Rizoctonia solani,sclerotiorum核盘菌,albo-atrum轮枝孢菌,dahliae轮枝孢菌,Thielaviopis basicola,oxysporum尖镰孢和culmorum尖镰孢(见Harrison et al.,“假单胞霉素,来源于具有广谱抗真菌活性的丁香假单胞杆菌的一族新的肽”,J of GeneralMicrobiology,7,2857-2865(1991))。此外,已经显示丁香假单胞杆菌MSU 16H较之野生型菌株给予Ceratocystic ulmi感染的榆树更大的保护,榆树枯萎病的病因剂(见,例如,Lam etal,Proc.Natl. Sci.USA,84,6447-6451(1987))。
假单胞霉素或相关的抗真菌剂具有一些相反的生物活性,或副作用。此处使用的,假单胞霉素或相关抗真菌剂的副作用指的是在假单胞霉素或相关抗真菌剂的注射部位或附近出现的副作用。特别重要的是假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂的副作用。例如,醋酸盐缓冲液制剂中的假单胞霉素,如假单胞霉素B的静脉内注射导致损伤其中注射进假单胞霉素的血管。在血管(即外渗)外,假单胞霉素损伤注射部位附近的组织。假单胞霉素,如假单胞霉素B对血管和周围组织的副作用包括血管内皮的损伤,组织损伤,发炎,和对受体组织的局部毒性。虽然不限制本发明,相信假单胞霉素的静脉内注射导致血管内皮的损伤和假单胞霉素的外渗,又,导致对血管周围组织的副作用。假单胞霉素或相关抗真菌剂的抗真菌作用和配制
副作用起因于假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂的许多不同制剂的注射,其中的许多不同制剂包括醋酸盐缓冲液制剂,含盐的制剂,微乳制剂,乳状液制剂,Povidone K12复合制剂,和胶束制剂。用这些赋形剂观察的副作用阻止假单胞霉素有效抗真菌量的给予。在仅仅一次或几次注射之后,获得充足的抗真菌效果之前,该副作用代表性地要求停止用假单胞霉素或相关抗真菌剂给药。甚至是在他们较缓和的形式中,这种注射部位的副作用也可能阻止患者顺应有效给药状况。因此,运用假单胞霉素或相关抗真菌剂的有效抗真菌方法需要一种制剂,其允许重复剂量的给药。这种制剂允许至少大约0.01mg/kg,优选多于大约0.1mg/kg,优选大约0.1-5mg/kg,更优选大约0.1-0.5mg/kg的假单胞霉素或相关抗真菌剂重复剂量的给药,在注射部位没有不可接受的副作用。
所观察到的副作用还阻止接近最大耐受剂量的假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂剂量的给药,其中的最大耐受剂量是引起受者靶器官毒性或严重全身毒性的最低剂量。这种高剂量的假单胞霉素代表性地是大约0.5mg/kg,优选大约5mg/kg或更多,优选大约5至25-50mg/kg。甚至在赋形剂,如醋酸盐缓冲液中的假单胞霉素的单独给药也可能引起副作用,该副作用阻止假单胞霉素或相关抗真菌剂的进一步给药。这种副作用可以阻止假单胞霉素或相关抗真菌剂的毒理学相应剂量的给药,其阻止确定抗真菌剂的相应毒理学参数。这种高剂量对于菌株或生物体的真菌感染治疗也是必需的,其中该菌株或生物体对假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂是抗性或耐受的。
配制假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂和环糊精,如HP-CD,SBE-CD,或相似的环糊精,允许该制剂有效抗真菌的或毒理学的给药。这种制剂减轻或阻止假单胞霉素或相关抗真菌剂注射的副作用。假单胞霉素B可溶于含水培养基中至15mg/mL,所以代表性地不需要环糊精增加这种抗真菌剂的溶解性。假单胞霉素B和HP-CD或SBE-CD可以毫不困难地溶解在适当浓度的含水赋形剂,如注射用盐水,或已知的甘露糖醇或葡萄糖赋形剂中。如果需要,该制剂的毒性可以用,例如,NaCl来调节,以使其在一适宜的生理学范围之内。
优选地,假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂和HP-CD,SBE-CD,或相似环糊精的制剂包括大约0.05mg/mL-大约20mg/mL,优选大约1-15mg/mL的假单胞霉素。该制剂包括HP-CD,SBE-CD,或相似的环糊精,其量能够有效减轻假单胞霉素或相关抗真菌剂注射的副作用,并允许这种抗真菌剂的毒理学或抗真菌给药。代表性地,HP-CD,SBE-CD,或相似的环糊精以大约0.5重量%(溶液的重量/体积)大约-6重量%,优选大约1重量%-大约5重量%,优选大约2重量%存在于制剂中。有利地,HP-CD,SBE-CD,或相似的环糊精以超过假单胞霉素,如pesudomycin B,或相关抗真菌剂的摩尔数存在。优选地,至少大约2-倍-大约4-倍摩尔数过量。这种有效的毒理学或抗真菌剂制剂的给药每天可以至少发生大约1-5次,优选2-3次注射,大约1-7天,注射部位没有不可接受的副作用。
虽然没有限制本发明,相信假单胞霉素或相关抗真菌剂在注射上的副作用部分是由于制剂可溶性聚集物的作用。例如,假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关的抗真菌剂包括肽环和长脂肪链,且长脂肪链可以诱导含水溶液或血中胶束的形成。根据此模型,期望减小假单胞霉素或相关抗真菌剂的可溶性聚集物的大小。这可以通过操纵赋形剂的组成,降低聚集假单胞霉素或相关抗真菌剂的推动力来实现。两者择一地,赋形剂可以包括一种试剂,其复合假单胞霉素或相关的抗真菌剂,并阻止在损伤血管和周围组织的聚集。例如,根据此模型,假单胞霉素或相关抗真菌剂的脂肪链与环糊精或取代环糊精的复合物,可以,提供在注射部位不引起副作用的,假单胞霉素或相关抗真菌剂的形式。
当以有效的抗真菌量给予假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂与环糊精,如HP-CD或SBE-CD的组合物时,可以减轻真菌感染的负担,减轻与真菌感染有关的症状,并可以引起真菌感染的消除。真菌感染可以被消除,因为假单胞霉素可以杀死,而不仅仅降低真菌的生长。
需要用假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂和HP-CD,SBE-CD,或相似环糊精的制剂抗真菌治疗的典型患者具有严重的感染症状,如高烧,且可能是需重症的或危急监护的。各种真菌均可以引起这种严重的感染。念珠菌,例如,引起粘膜的和严重的全身感染,且存在于对吡咯和多烯抗真菌剂有抗性的菌株中。曲霉引起威胁生命的全身性感染。隐球菌则对脑膜炎负责。这种严重的真菌感染可能出现在免疫损害的患者中,如那些接受器官和骨髓移植的,遭受癌症化疗的,从严重的外科手术恢复的,或遭受HIV感染的。
抗真菌治疗包括假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂和HP-CD,SBE-CD,或相似环糊精的制剂的给药,代表性地非肠道给药,静脉内给药多天,以终止感染。对于大多数真菌感染来说,感染症状的减轻包括退烧,恢复意识,和患者本质健康(例如,患者的行动和感觉更好)的增加。优选地,症状是通过杀死真菌而除去感染,或使感染至患者可忍受的水平,或可由患者免疫系统控制的水平。包含假单胞霉素或相关抗真菌剂和环糊精的制剂的药物组合物
一种药物组合物,包括假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂和环糊精,如SBE-CD或HP-CD的制剂,还可以包括载体,赋形剂,媒介物和其它的添加剂。该制剂可以包括添加剂,如各种油,包括那些石油,动物油,植物油或合成来源的,例如,花生油,大豆油,矿物油,和芝麻油。适宜的药物赋形剂包括淀粉,纤维素,葡萄糖,乳糖,蔗糖,明胶,麦芽,硬脂酸镁,硬脂酸钠,甘油单硬脂酸酯,氯化钠,干燥的脱脂乳,甘油,丙二醇,水和乙醇。该组合物可以经受常规的药学方法,如杀菌,且可以包含常规的药物添加剂,如防腐剂,稳定剂,湿润剂或乳化剂,调节渗透压的盐,和缓冲液。适当的药物载体和它们的制剂在Martin,“Remington’sPharmaceutical Science,”15th Ed;Mack PublishingCo.,Easton(1975);见,例如,pp.1405-1412和pp.1461-1487中描述。这种组合物,通常,包含有效量的活性化合物和适当量的载体,以便制备适当的给药形式以适当的给予受体。
代表性地,应当在需要的时候,给予患者(人或其它的动物,包括哺乳动物如,但不限制于,猫,马和牛和鸟类)有效量的该组合物,以抑制真菌复制。对于全身给药来说,成人治疗所用的每日剂量为50mg-5000mg,优选50mg-2000mg的活性成分,其可以给予1-5的每日剂量,例如,取决于患者的条件和给药途径。当组合物包括剂量单位时,每个单位优选包含2mg-2000mg,例如50mg-500mg的活性成分。对于严重的感染,可以通过静脉内输注,例如,0.01-10mg/hr的活性成分给予该化合物。假单胞霉素-环糊精制剂的用途
本发明还包含含本药物组合物的试剂盒,且其与本发明的方法一起使用。该试剂盒可以包含一个管瓶,该管瓶包含本发明的制剂和适当的载体,干燥或液体的形式。该试剂盒进一步包括管瓶上标签形式的说明书和/或包括在盒子中的插入物形式的说明书,其中的管瓶是封装的,用于化合物的给药和使用。该说明书包括的信息有足够的剂量和给药的信息,以便让本领域的工作人员给药。预期本领域的工作人员包括任一医生,护士,或可以给药的技术人员。
本发明还涉及一种药物组合物,包括假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂和环糊精的制剂,其是适于注射给药的。根据本发明,假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂和环糊精的制剂可用于制造假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂和环糊精的组合物,其是适于注射给药的形式。例如,可以使用常规技术,以各种方式制造液体或固体的制剂。液体制剂可以通过在适当的溶剂,如水,适宜的PH,包括缓冲液或其它赋形剂中溶解假单胞霉素,如假单胞霉素B,或相关抗真菌剂和环糊精来制造。包括假单胞霉素或相关抗真菌剂和环糊精的制剂的农业组合物
包含假单胞霉素,脂缩酚十肽,或其组合(包括其水合物,溶剂化物和酯)和环糊精(例如,SBE-CD或HP-CD)的组合物可用于植物中真菌的治疗(特别是,albo-atrum轮枝孢菌,Rizoctonia solani和oxysporum尖镰孢),作为直接的治疗或预防性治疗。通常,受感染的植物是通过注射或喷射丁香假单胞杆菌的含水混悬液至植物中或植物上而治疗的。注射工具(例如,圆凿枪)对于本领域的那些技术人员来说是已知的。可以使用任一喷射混悬液的工具,以分布有效量的活性材料在植物表面上。该混悬液还可以包括本领域的那些技术人员通常使用的添加剂,如增溶剂,稳定剂,湿润剂,和其组合。
参考下列实施例可以更好地理解本发明。这些实施例是本发明特殊实施方案的代表,且不限制本发明的范围。
实施例
保藏的生物材料
丁香假单胞杆菌MSU 16H可以从美国典型培养物保藏中心,Parklawn Drive,Rockville,MD,USA公开地得到,保藏登记号为第ATCC 67028。丁香假单胞杆菌菌株25-Bl,7H9-1和67H1是于2000年3月23日在美国典型培养物保藏中心保藏的,并指定为下列保藏登记号第:
25-B1 保藏登记号第PTA-1622
7H9-1 保藏登记号第PTA-1623
67H1 保藏登记号第PTA-1621
实施例1—没有环糊精的注射用盐水中的
假单胞霉素B制剂静脉内注射的副作用
在注射用盐水中配制的假单胞霉素B,没有环糊精,在对静脉内注射副作用的1-周试验性研究中评估。材料和方法
将CD-1小鼠(雄性)分为四组,给予0,1,5,10,25或50mg/kg/day的PSB-TFA,静脉内注射(缓慢的灌注)进外侧尾部的血管中。用于此研究的赋形剂是注射用盐水。调节假单胞霉素B(PSB-TFA)三氟醋酸盐的潜能使之以三氟醋酸盐形式存在。所采集的数据包存活阶段(即,临床观察,体重,和死亡率),临床化学,有限的器官重量,和有限的组织病理学(肾,肝,心,和注射部位)。结果
所有的动物存活至预定终点第7天。然而,每只小鼠均在注射部位显示了严重的副作用。这作为标记的肿胀和尾部的变黑而开始,代表性地发生在注射之后大约6-8小时之内。接受≥10mg/kg剂量的所有动物中的组织反应的严重性导致第2-5剂量之后给药的终止。没有观察到重要的临床化学,严重的病理学,或组织病理学结果来指示除了注射部位严重副作用的迹象之外的靶器官的作用。
实施例2—假单胞霉素B和相关化合物
对动物细胞的副作用的评估
试验假单胞霉素B和相关化合物对哺乳动物细胞的体外毒性,以评估是否毒性与化合物的结构相关。材料和方法
在0.5mg/mL的浓度下,试验假单胞霉素B(PSB)和相关化合物假单胞霉素A(PSA)对L6骨骼肌细胞的作用。已经证实这种体外肌肉模型与体内非肠道抗菌静脉刺激性相关。见:Rosalki S.B.,用于血清肌酸磷酸激酶测定的改进过程J.Lab.Clin.Chem.69:696-705(1967);D.M.Hoover et al.,Fundamental and AppliedToxic.14:589-597(1990);Mosmann T.,Rapid Colorimetric Assayfor Cellulsr Growth and Survival,J.Immunol.Method 65:55-63(1983)。
毒性是用标准方通过在细胞中监测肌酸磷酸激酶(CPK)和MTT还原酶的活性水平而确定的。结果
数据在表1中概括,其鉴定所测试的化合物,并记录肌酸磷酸激酶的残留量(对照的百分数),和MTT还原酶的活性(对照的百分数)。毒性越大,所测量的CPK残留水平和MTT还原酶的活性越低。
表1-假单胞霉素B和相关化合物的体外毒性
结论
化合物种类 | CPK | MTT |
PSB-TFA | 0 | 13 |
PSB-FB | 0 | 10 |
PSC | 0 | 3 |
PSA | 0 | 11 |
此假单胞霉素A和B的体外细胞毒性,暗示这些化合物的制剂对于降低静脉内注射的副作用是必需的。
实施例3—静脉内假单胞霉素B的各种制剂的
静脉内注射的改进和副作用的评估
这三种研究检查了各种假单胞霉素B制剂的对在注射部位观察到的副作用的效果,和静脉内注射副作用的改进。研究1
此研究评估含假单胞霉素B的制剂,该制剂是在醋酸盐缓冲液中,微乳中,和具有SBE-CD。材料和方法
动物是上述实施例1中的动物。所选择的剂量是基于图1中所观察到的副作用。低剂量是5mg/kg,其中,在实施例1中,引起轻微的组织损伤,但允许给药7整天。高剂量是25mg/kg,其中,在实施例1中,导致严重的组织损伤且限制给药。此研究试验了三种制剂,醋酸盐缓冲液,微乳,和磺丁基醚-β-环糊精(SBE-CD)赋形剂,其每种中均有两种剂量PSB-TFA。微乳赋形剂是在PH4.5的具有1.75重量%葡萄糖的0.05M醋酸盐缓冲液中包括1.7重量%的丙二醇,3.4重量%的emulphor EL.,1.4重量%的phospholipon 90,3.5重量%的分馏的椰子油。
SBE-CD是从Cydek,Inc.,12980 Metcalf Ave.,Suite470,Overland Park,Kansas 66213获得的,并作为PH4.5的具有1.75重量%葡萄糖的0.05M醋酸盐缓冲液中的2重量%磺丁基醚-β-环糊精而制备的。代表性地,SBE-CD母液是通过混合冰醋酸和去离子水和NaOH,获得PH4.5的0.05M的醋酸溶液而制备的。固体葡萄糖和SBE-CD溶液在醋酸缓冲液中至所期望的浓度。然后,加入假单胞霉素B,获得所期望的浓度,搅拌该溶液直到假单胞霉素溶解。结果
研究设计和结果在表2中概括。
表2—对各种假单胞霉素B(PSB)制剂的反应
1 在PH4.5的,具有1.75重量%葡萄糖的0.05M醋酸盐缓冲液中的1.7重量%丙二醇,3.4重量%Emulphor EL,1.4重量%Phospholipon 90,3.5重量%分馏的椰子油2 在PH4.5的,具有1.75重量%葡萄糖的0.05M醋酸盐缓冲液中的2重量%的磺丁基醚-β-环糊精结论
组 | 赋形剂 | PSB的剂量 | 结果 |
01 | 醋酸盐缓冲液 | 5mg/kg | 接受完全的7剂,记录尾部肿胀。 |
02 | 醋酸盐缓冲液 | 25mg/kg | 接受2-3剂,在第一剂后尾部肿胀,第2剂后皮下出血,第4天尾部变黑。第5天2只动物的部分尾部失去。 |
03 | 微乳 | 5mg/kg | 接受完全的7剂,在整个研究过程中,尾部看起来很正常。 |
04 | 微乳 | 25mg/kg | 接受2剂,第1和第2剂之后尾部肿胀,约第5天尾部恢复到可给药的程度,且在研究的终了鉴测到进一步的恢复。 |
05 | SBE环糊精2 | 5mg/kg | 接受完全的7剂,在整个研究过程中,尾部看起来很正常。 |
06 | SBE环糊精2 | 25mg/kg | 接受完全的7剂,在整个研究过程中,尾部看起来很正常。 |
此研究结果表明SBE-CD赋形剂完全地改进了由于假单胞霉素B直到25mg/kg静脉内给药剂量所显示的副作用。微乳在两个剂量均减轻了副作用。然而,在较高的剂量,副作用是充足的,不得不混悬给药。研究2
此研究评估包括假单胞霉素B的制剂,该制剂在醋酸缓冲液中,具有SBE-CD,具有HP-CD,具有γ-CD,在乳状液中,在Povidone制剂中,和在胶束制剂中。材料和方法
动物是实施例1中描述的,并用于3组中。以25mg/kg/day的剂量给予假单胞霉素B 7天,以10mL/kg静脉内造影给予外侧尾部的血管。组1(阳性对照)的赋形剂是单独的醋酸盐缓冲液,这已经显示出(实施例1和实施例2,研究1)导致显著的副作用。组2(阴性对照)的赋形剂是含2重量%SBE-CD的醋酸盐缓冲液,已经显示出(实施例2,研究1)当pseudomoycin B是在醋酸盐缓冲液中给予时,完全改善了所观察到的副作用。其它的赋形剂是下列:组3,2重量%羟丙基-β-环糊精;组4,2重量%γ-环糊精;组5,lyposin II乳状液,其包括10%大豆油和10%和10%红花油;组6,Povidone K12乳状液,其包括聚乙烯吡咯烷酮2000-3000m.w.;和组7,0.5重量%聚山梨酸酯80胶束制剂,其包括葡萄糖,聚山梨酸酯80,PH4.5醋酸盐缓冲液。结果
研究的结果在表3中列出。
·醋酸缓冲液,Povidone,和聚山梨酸酯组中的动物显示严重的尾部血管刺激性。
·由于给药事故,在第2天,γ-CD组中有一只动物死亡。此组中的其它动物显示它的尾部变红。
·由于未知的原因,发现在第2天尾部变红的动物在第4天死亡。
此研究结果证实,当在醋酸盐缓冲液中给药时,假单胞霉素B的潜在刺激性。组1表示在第一次给药后的尾部变色和肿胀,其在第二天和第三天减少给药。第4天,副作用阻止动物的进一步给药。SBE-CD阻止在组1中观察到的副作用。组2接受7天25mg/kg每日剂量的假单胞霉素B,没有副作用的迹象。组3和组4,包括羟丙基-β-环糊精或γ-环糊精的制剂,也显示出对假单胞霉素B引起的副作用的阻止。Liposin II乳剂仅仅提供局部保护。虽然动物被连续7天每日给药,尾部肿胀减少了在研究最后3天的给药。与单独的醋酸盐缓冲液相比,Povidone K12复合物和0.5重量%聚山梨酸酯80胶束制剂没有提供保护。结论
此研究表明添加的环糊精,如,羟丙基-β-环糊精和γ-环糊精也显示保护作用。然而,由于这组中一只动物尾部的变红和所见的不能解释的死亡,具有γ-CD的该结果是不可靠的。研究3
此研究评估包括假单胞霉素B的制剂,该制剂在两种PH的注射用盐水中,在聚丙二醇与环氧乙烷的加聚物F68中,在solutol中,和在聚山梨酸酯中。材料和方法
动物是根据制定的方案处理过的雌性CD1小鼠。将小鼠分为3组。以25mg/kg/day的剂量给予假单胞霉素B 7天,以10mL/kg静脉内造影给予外侧尾部的血管。组2的赋形剂是PH4.5的0.9重量%NaCl(注射用盐水)。组3的赋形剂是PH6.5的0.9重量%NaCl(注射用盐水)。组4的赋形剂是在0.05重量%Pluronic F68中的0.9重量%的NaCl,其包括各种m.w.的环氧丙烷和环氧乙烷共聚物,PH6.5.组5的赋形剂是PH6.5时,在0.5重量%聚丙二醇与环氧乙烷的加聚物F68中的0.9重量%的NaCl.组6的赋形剂是PH6.5时,在0.05重量%Solutol中的0.9重量%的NaCl,Solutol包括70%12-羟基硬脂酸酯的聚乙二醇酯和30%聚乙二醇。组7的赋形剂是PH6.5时,在0.05重量%聚山梨酸酯中的0.9重量%的NaCl.结果
研究结果在表4中列出。影响所有治疗组的临床观察包括肿胀和变色的尾部。此外,03-07组中的各动物证实了组织坏死的迹象。研究中有3只动物死亡(动物6051在试验的第5天死亡,动物6053和6052在试验的第6天死亡)。所有这些死亡均是在给药过程中持续的机械损伤的结果且,因此,不认为是化合物-相关的。
0=正常,1=尾部肿胀,2=尾部变色,3=尾部坏死,PD=局部给药,UD=不能给药
+=动物死亡
灰色阴影表明本研究中的这样一些点:这些点上甚至是至少有一天部分剂量给药也防止组织损伤。结论
在目前的研究中试验的制剂没有能够完全改善假单胞霉素B注射的副作用的。已经证实用SBE-CD可完全改善。
实施例4--具有各种浓度假单胞霉素B的
SBE-CD制剂的体内毒理学评估
此研究评估了潜在的毒性,包括注射部位的任何副作用,在四种假单胞霉素B浓度的磺丁基-β-环糊精制剂的动物模型中。材料和方法
用于此大鼠研究的假单胞霉素B的剂量是0,1,10或50mg/kg/day,为静脉内快速浓注给药14天。SBE-CD制剂为2重量%,且所用的给药体积为5mL/kg。用标准方法监测的毒理学参数包括体重,临床观察,死亡率,血液学,临床化学,有限的病理学(肝,肾,心,和注射部位),和骨髓微核(作为遗传毒性的初步评估)。结果
在开始存活阶段的2天内,高-剂量动物的尾部肿胀且变色,因而进一步的给药变得难以忍受(表5)。但是决定完成这些动物的研究以再评估用于高-剂量毒性评估的该方法和制剂。将1和10mg/kg/day剂量组进行完全的2周,并显示没有明显毒性的迹象。表5--在假单胞霉素B的三种浓度下给予SBE-CD制剂的结果。=没有发现=由于较早终止而没有评估的参数Li=肝,Ki=肾,Ht=心,IS=注射部位
在终止的时候,高-剂量动物大概证实了明显的尾部血管刺激性。这与降低的体重和血管坏死和注射部位发炎的组织病理学发现相关。在这些动物中,肝和肾的重量也增加。骨髓微核试验在低-和中-剂量的动物中是阴性的(由于较早终止,没有在高-剂量组中评估骨髓微核)。唯一的其它发现是在高-剂量动物中观察到的肾小管轻微空泡形成的组织病理学观察。结论
虽然实施例2中记录的研究证实了具有SBE-CD的制剂改善假单胞霉素B注射的副作用,但仍然在本研究中观察SBE-CD的副作用。然而,本研究中的假单胞霉素B的浓度和给药量明显地高。此研究评估了假单胞霉素B直到50mg/kg的剂量,其两倍于在实施例2记录的研究中的试验剂量,其是25mg/kg。而且,本研究在仅仅为实施例2所使用体积的一半中注射此两倍的假单胞霉素B剂量。因而,制剂中假单胞霉素B的浓度增加了4-倍。这些研究中的SBE-CD的浓度保持在恒定的2重量%,因此假单胞霉素B的浓度相对于SBE-CD的浓度增加了4-倍。
此研究表明注射副作用的改善至少需要相对于假单胞霉素B浓度的某最小SBE-CD浓度。虽然不限制本发明,此观察与假单胞霉素B和SBE-CD复合物的制剂一致。
本研究工作调查了具有增加量的SBE-CD的高剂量假单胞霉素B的毒性,并确定较高浓度的环糊精改善了实施例4中所示的高剂量假单胞霉素B的副作用。
实施例5--在假单胞霉素B的高剂量时
增加SBE-CD的浓度以改善副作用
动物是实施例4中描述的。用于此研究的假单胞霉素B的剂量是0,25,或50mg/kg/day,其使用计算机控制的泵静脉内缓慢注射14天,以使试验物质到周围组织的外渗减到最少。用于此研究的赋形剂是4重量%SBE-CD,给药体积是10mL/kg。SBE-CD浓度和剂量体积的增加,调节假单胞霉素B对SBE-CD的比例,使其达到实施例3记录的研究中的水平。对照组仅仅接受4重量%的SBE-CD。体重,临床观察,死亡率,血液学,临床化学,有限的病理学(肝,肾,心,和注射部位),和骨髓微核是通过标准方法监测的。结果
此研究的存活阶段是在没有明显毒性的迹象下完成的,如表6中的结果所示。
表6--给予具有高浓度假单胞霉素B的4重量%SBE-CD制剂的结果
-=没有发现=由于较早终止而没有评估的参数Li=肝,Ki=肾,Ht=心,IS=注射部位结论
参数 | 25mg/kg/day | 50mg/kg/day |
临床观察 | - | - |
死亡率 | - | - |
体重 | - | - |
严重的病理学 | - | - |
器官的重量(Li,Ki,和Ht) | ·↑Ki 重量 (9%) | ·↑Ki重量(14%) |
血液学 | - | ·减少红细胞系的值(轻微贫血) |
临床化学 | - | ·↑ALT&AST(15X·↓胆固醇·↓总蛋白质/白蛋白·↓BUN(非常少) |
组织病理学(Li,Ki,Ht,和IS) | ·肾小管的轻微空洞形成 | ·非常少的肝细胞变质·肾小管的轻微空洞形成 |
骨髓微核 | - | - |
增加制剂中SBE-CD对假单胞霉素B的比例可完全地改善在实施例4记录的研究中,用50mg/kg/day剂量组所见到的刺激性。这与环糊精-间介的保护机理相一致,其包括含假单胞霉素B和环糊精的复合物的形成,引起血管内皮的保护。
注射部位副作用的改善使得明显靶器官作用的最初观察在假单胞霉素B的最高试验剂量起作用。血液学,临床化学,和组织病理学数据表明靶器官作用与假单胞霉素B的给予相关。轻微贫血症的发展暗示血红细胞或产生骨髓元素的血红细胞起作用。肝也作为潜在的靶器官而出现,具有肝酶渗漏和肝细胞损伤和死亡的迹象。这些效果仅仅在50mg/kg/day的最高剂量下见到。在25和50mg/kg/day均能见到肾重量增加和肾小管的轻微空泡形成,且可以表明假单胞霉素B的肾脏作用。
实施例6--在SBE-CD制剂的静脉内注射之后
假单胞霉素B代谢的评估
本研究评估在静脉内注射大鼠后,具有磺丁基酯-β-环糊精的假单胞霉素B制剂的代谢。材料和方法
用于此大鼠研究的假单胞霉素B的剂量是5和25mg/kg/day,作为静脉内造影给药一次给予。SBE-CD制剂为2重量%,且所用的给药体积是5mL/kg。用标准方法监测的参数包括可检测水平(AUC),半衰期,和Cmax的持续时间的曲线下的面积。结果
此研究的结果在表7中记录。
表7--具有SBE-CD的假单胞霉素B制剂的代谢研究
结论
PSB的剂量(mg/kg) | 制剂 | AUC0(ng·hr/mL | 半衰期(hours) | Cmax(μg/mL) |
5 | NaOAc buffer | 48,799 | 4.2 | 17.0 |
5 | 2wt-%SBE-CD | 41,156 | 4.0 | 20.6 |
25 | 2wt-%SBE-CD | 60,873 | 4.0 | 85.9 |
在醋酸钠缓冲液或具有2重量%SBE-CD的制剂中的5mg/kg/给药之后,假单胞霉素B的血浆浓度相似。2重量%SBE-CD的存在与醋酸盐缓冲液相比,不影响假单胞霉素B的血浆药物代谢动力学分布。该制剂没有改变任何所测量的药物代谢动力学参数。在2重量%SBE-CD的制剂中,从5mg/kg/增加假单胞霉素B的剂量至25mg/kg,导致Cmax和AUC相近比例的增加。假单胞霉素B的血浆半衰期与所检测的剂量无关。在给药之后,可测量的假单胞霉素B的血浆浓度存在24小时。
实施例7--假单胞霉素B的γ-环糊精和
HP-CD制剂的体内毒理学评估
此研究进一步评估羟丙基-β-环糊精和γ-环糊精制剂为假单胞霉素B静脉内注射的副作用提供保护的能力。材料和方法
动物是实施例4中描述的雄性大鼠,将其分为4组。用于此研究的假单胞霉素B的剂量是0和50mg/kg/day,以66mL/hr的速率,10mL/kg的剂量体积静脉内快速浓注给药14天。羟丙基-β-环糊精是从Cyclodextrin Technology Inc.获得的。γ-环糊精是从Wacker获得的。用于赋形剂制剂中的环糊精浓度是在PH4.5的醋酸盐缓冲液中(0.05M)的4重量%。对照组接受或者4重量%γ-CD或者4重量%羟丙基-CD,其没有假单胞霉素B。结果此研究的结果在表8中记录。
表8在两种假单胞霉素B的浓度下
γ-CD赋形剂对此研究中假单胞霉素B的副作用没有提供保护。仅仅在第一次给药之后,记录尾部的变色和肿胀。在第二天其变得严重到足以阻止给药。
羟丙基-β-环糊精赋形剂对假单胞霉素B副作用提供保护。因此,羟丙基-β-CD制剂的每日给药可以给予完全的2-周。对红血球组分,肝,肾和脂类代谢的副作用与在50mg/kg/day水平使用基于SBE-CD赋形剂(实施例5)2周之后的在先观察相一致。在本研究中,在肉眼的和显微镜检水平时,注射部位有轻微副作用的迹象。其没有在前面的SBE-CD赋形剂的研究中记录,暗示SBE-CD,在试验条件下,可以提供较之羟丙基-β-CD赋形剂更高程度的保护。结论
在此研究中,γ-CD没有对假单胞霉素B注射的副作用提供保护。羟丙基-β-CD保护这些动物对假单胞霉素B注射的副作用。
已经参考各种特殊的和优选的实施方案和技术描述了本发明。然儿,应当知道,许多变化和改进也包括在本发明的精神和范围之内。
在此说明书中的所有出版物和专利申请均可表示本领域普通技术人员的水平。此处引用作为参考的所有出版物和专利申请均是相同程度的,好象每种单独的出版物或专利申请均是特别地和单独地参考简述的。
序列列表<110>Eli Lilly and Company<120>Pseudomycin抗真菌组合物和它们的使用方法
Their Use<130>X-11463 序列列表<140><141><150>60/129,435<151>1999-04-15<160>1<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>10<212>PRT<213>Pseudomonas syringae<214>丁香假单胞杆菌<220><223>Xaa在5位是高丝氨酸<220><223>Xaa在6位是脱氢氨基丁酸<220><223>Xaa在8位是脱氢丙氨酸<400>1Thr Ala Thr Gln Xaa Xaa Ala Xaa Thr Arg1 5 10
Claims (28)
1.一种在患者需要时,减轻真菌感染症状的方法,包含:
给予患者有效量的组合物,该组合物包含假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯,和羟烷基-β-环糊精或磺烷基醚-β-环糊精。
2.根据权利要求1的方法,其中减轻症状包含减少真菌感染的负担。
3.根据权利要求1的方法,其中减轻症状包含杀死真菌。
4.根据权利要求1的方法,其中真菌感染包含由于近平滑念珠菌,白色念珠菌,glabrata念珠菌,热带念珠菌,krusei念珠菌,新型隐球菌,烟曲霉和荚膜组织胞浆菌的感染。
5.根据权利要求1的方法,其中组合物包含羟丙基-β-环糊精。
6.根据权利要求1的方法,其中组合物包含磺丁基醚-β-环糊精。
7.根据权利要求1的方法,其中患者没有遭受不可接受的假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯注射的副作用。
8.根据权利要求1的方法,其中给予毒理学相关剂量的假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯。
9.根据权利要求1的方法,其中组合物包含与所给予的假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂相比,至少约为1摩尔比例的环糊精。
10.根据权利要求的方法,进一步包含:
确定给予假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂的需要;并
监测患者假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂外渗的病征。
11.根据权利要求1的方法,其中的给药包含大约0.1-5mg/kg的每天大约1-3次的假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂的非肠道给药。
12.根据权利要求1的方法,其中减轻真菌感染的症状包含减轻发热,并增加患者的整体健康本质。
13.根据权利要求1的方法,其中假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂的有效量是有效的抗真菌量。
14.根据权利要求1的方法,其中假单胞霉素包含假单胞霉素A,假单胞霉素A’,假单胞霉素B,假单胞霉素B’,假单胞霉素C,假单胞霉素C’,其组合,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯。
15.根据权利要求14的方法,其中假单胞霉素包含假单胞霉素B或或其药学上可接受的盐,水合物,或酯。
16.根据权利要求1的方法,其中脂缩酚十肽抗真菌剂包含25-B1十肽抗真菌剂A,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯。
17.一种抗真菌组合物,包含羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精和有效抗真菌量的假单胞霉素,脂缩酚十肽抗真菌剂,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯;羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精的摩尔数超过假单胞霉素,脂缩酚十肽抗真菌剂,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯。
18.根据权利要求17的抗真菌组合物,包含羟丙基-β-环糊精。
19.根据权利要求17的抗真菌组合物,包含磺丁基醚-β-环糊精。
20.根据权利要求17的抗真菌组合物,其中组合物包含羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精,与假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂相比,其摩尔比至少约为2∶1。
21.根据权利要求17的抗真菌组合物,进一步包含葡萄糖和醋酸盐缓冲液。
22.根据权利要求17的抗真菌组合物,其中假单胞霉素包含假单胞霉素A,假单胞霉素A’,假单胞霉素B,假单胞霉素B’,假单胞霉素C,假单胞霉素C’,其组合,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯。
23.根据权利要求23的抗真菌组合物,其中假单胞霉素包含假单胞霉素B或其药学上可接受的盐,水合物,或酯。
24.根据权利要求17的抗真菌组合物,其中脂缩酚十肽抗真菌剂包含25-B1十肽抗真菌剂A,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯。
25.假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯,其与羟烷基-β-环糊精或磺烷基醚-β-环糊精相组合,在制造治疗真菌感染的药物中的用途。
26.根据权利要求25的用途,其中假单胞霉素包含假单胞霉素A,假单胞霉素A’,假单胞霉素B,假单胞霉素B’,假单胞霉素C,假单胞霉素C’,其组合,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯。
27.根据权利要求25的用途,其中脂缩酚十肽抗真菌剂包含25-B1十肽抗真菌剂A,或其药学上可接受的盐,水合物,或酯。
28.根据权利要求25的用途,其中羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊精存在于药物中,与假单胞霉素或脂缩酚十肽抗真菌剂相比,其摩尔比至少约为2∶1。
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Cited By (1)
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