DISPOSITIVOS DESECHABLES DE PRUEBA PARA REALIZAR REACCIONES DE AMPLIFICACIÓN DE ÁCIDO NUCLEICO
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere al campo de los métodos y dispositivos para realizar reacciones de amplificación de ácido nucleico
ARTE PREVIO Las reacciones de amplificación aho son ampliamente usadas en la investigación y los laboratorios clínicos para la detección de enfermedades infecciosas y genéticas. Los esquemas de amplificación actualmente conocidos pueden agruparse ampliamente en dos clases, basadas en todo caso, después de una etapa de desnaturalización inicial (típicamente realizada en una temperatura de > 65 grados C) para amplificaciones de ADN o para amplificaciones de ARN que involucran una alta cantidad de estructura secundaria inicial, las reacciones se cond ucen vía una oscilación continua de la temperatura entre la temperatura de desnaturalización y una primera alineación y síntesis de amplicon (o actividad polimerasa) temperatura ("reacciones de oscilación") o si la temperatura se mantiene constante a través del proceso de amplificación enzimática ("reacciones isotérmicas"). Las reacciones de oscilación típicas son la Reacción en Cadena de Ligasa y Polimerasa (PCR y I CR, respectivamente). Los esquemas de la reacción isotérmica representativa son NASßA (Amplificación Basada en la Secuencia de Acido Nucleico), la Amplificación Mediada con Transcripción (TMA) y la Amplificación de Desplazamiento de Hebras (SDA). En las reacciones isotérmicas, después de la etapa de
La presente invención evita la inconveniencia y el riesgo de contaminación descrito anteriormente mediante proporcionar un di spositivo de prueba novedoso de una tira que incluye una cámara dual o un vaso de reacción "binaria" y una manera de usar el dispositivo. La invención logra la integración de la etapa de desnaturalización con la etapa de amplificación sin la necesidad de la ad icion manual de una enzima y sin la exposición de la cámara de amplificación al ambiente, Los riesgos de contaminación de la muestra para la contaminación de la muestra en la estación de procesamiento se evitan dado que la cámara de reacción de amplificación esta sellada y no se abre para introducir la muestra del paciente a la enzima. La contaminación a partir de los recursos ambientales se evita dado que la cámara de reacción de amplificación permanece sellada. El riesgo de contaminación en las reacciones de ampli icación de ácido nucleico es especialmente crítico debido a las grandes cantidades del producto de amplificación que se produce. La presente invención proporciona una ccááfnara de reacción diseñada que elimina sustancialmente estos riesgos. La modalidad de la tira de prueba p ferida permite un dispositivo de prueba para usarse en una base de instrumento realmente instalado después de la realización de la reacción de amplificación, llamado el instrumento VIDAS ® fabricado y distribuido por el consignatario de la presente invención, bio érieux, Inc. Además, proporciona dispositivos de prueba de un tamaño y configuración para usarse rápidamente en una base de instrumento existente permitiendo que los di ¿positivos sean comercializados y usados con un gasto de capital reducido y sin tener que desarrollar un nuevo instrumento para procesar la reacción y detectar los ampl icoris resultantes. Será aparente, sin embargo, a partir de la siguiente descripción detallada que la invención puede practicarse en otras configuraciones de la modalidad preferida presente descrita en detalle en este documento.
una válvula en el canal de fluido, como sé describe en la solicitud con no. de serie 09/053,823 presentada el 2 de Abril, 1998 la Patente de E.U.A. No. 5,786,182. Varias modalidades de válvulas diferentes se describen en este documento. En uso, la muestra de fluido se introduce en la primera cámara y la primera cámara se calienta a una temperatura de desnaturalización (es decir, 95 grados C).
Después de que han reaccionado los reactivos de amplificación en la primera cámara con la muestra de fluido y el proceso de desnaturalización se ha completado, la primera cámara se enfría a 42 grados C para la primera alineación. Las dos cámaras del vaso de reacción no están en comunicación del fluido uno del otro antes de completar la etapa de enfriamiento y desnaturalización. Después de que estas etapas se completan, los medios para controlar el flujo de fluido se operan para permitir que la solución de reacción pase a través del canal del fluido de la primera cámara a la segunda cámara. Por ejemplo, la válvula en el canal del fluido se abre y la muestra del fluido se dirige a la segunda cámara mediante presión o las técnicas de vapor. La solución de reacción posteriormente se coloca en contacto con la (s) enzima (s) de amplificación (es decir, T7 y/o RT) y el proceso de amplificación enzimática procede en la segunda cámara a 42 grados C. En una modalidad preferida, después de completar la reacción de amplificación, un
SPR ® (un dispositivo como pipeta de transferencia de fluido que funciona como un receptáculo de fase sólida) se introduce en la segunda cámara. La tira de prueba contiene una pluralidad de pozos colocados en una serie. La hibridación, posteriormente el análisis óptico y de lavado procede en los pozos de conformidad con las técnicas bien conocidas para detectar los productos de amplificación Dichos procesos pueden ocurrir en los pozos adyacentes de una modalidad de tira de prueba del vaso de reacción de cámara dual automáticamente en un instrumento automatizado, tal como el instrumento VIDAS ® de bioMérieux, Inc.
Además, una forma preferida de la presente ¡nvención comprende una tira de prueba para realizar una reacción de ampli 'icación de ácido nucleico. La tira de prueba incluye un alojamiento prolongado integral formado en una tira que tiene un primer extremo y un segundo extremo con el alejamiento que tiene una porción del mismo definiendo una pluralidad de pozos colocados en una serie lineal dispuesta en la tira entre el primero y segundo extremos. Los pozos sierán típicamente usados para la hibridación, lavado u otra etapa de descontaminación y detección después que se ha completado la reacción de amplificación de ácido nucleico. El alojamiento de la tira de prueba iheluye un vaso de reacción de cámara dual para que se lleve cabo en el mismo una reacción de amplificación de ácido nucleico, colocado adyacente al primer extremo de la tira de prueba. El vaso de reacción de la cámara dual comprende (1 ) una primera cámara en la cual una primera porción de una reacción de amplificación de ácido nucleico se realiza (es decir, la desnaturalización y la primera alineación), (2) una segunda cámara en la cual una segunda porción de una reacción de amplificación de ácido nucleico se realiza (es decir, amplificación de nucleótidos mediante una enzima de amplificación) y (3) un conducto de conexión destapable uniendo la primera cámara a la segunda cámara. En la fabricación de la tira de prueba, un primer reactivo (es decir, iniciadores y/o nucleótidos) se inserta en la primera cámara para la primera porción de la reacción de amplificación de ácido nucleico y un segundo reactivo (es decir, una enzima de amplificación) se inserta en o se coloca en comunicación del fluido con la segunda cámara. Después de que se cargan los reaclivos en las dos cámaras del vaso de reacción de cámara dual (y cualquier reactivo (s) requerido insertado en los pozos restantes de la tira de prueba), una membrana se fija al alojamiento de la tira de prueba. La membrana se aplica al alojamiento par cubrir la primera y la segunda cámaras y los pozos. Pueden proporcionarse el cubrimiento y las etapas de carga de reactivos separadas. Tales otros
La Figura 4 es una vista en perspectiva aislada del miembro de cubierta de las Figuras 1-3 mostradas desde abajo; Las Figuras 4A y 4B son vistas en perspectiva de una modalidad alternativa del miembro de cubierta; Las Figuras 4C y 4d son vistas de otra modalidad alternativa del miembro de cubierta; Las Figuras 4E, 4F y 4G son vistas detalladas de la parte inferior de las Figuras 4C y 4D; La Figura 5 es una vista en plano superior de la tira de prueba de las Figuras 1-3; La Figura 6 es una vista transversal de la tira de prueba de la Figura 5, mostrada a lo largo de las líneas 6-6 de la Figura 5; La Figura 7 es una vista transversal de la tira de prueba de la Figura 5, mostrada a lo largo de las líneas 7-7 de la Figura 5; La Figura 8 es una vista elevada lateral de la tira de prueba de la Figura 5; La Figura 9 es una vista elevada detallada de la porción superior de la tira de prueba en la región adyacente al segundo vaso de reacción, mostrando las características de la parte lateral de la tira de prueba que están sujetadas seguramente mediante patas flexibles del miembro de cubierta para cerrar el miembro de cubierta a la tira de prueba; La Figura 10 es una vista transversal detallada de la tira de prueba, parcialmente abierta ilustrando las características de cierre mostradas en la Figura 9; La Figura 11 es una vista transversal de la tira de prueba de la Figura 5 tomada a lo largo de las líneas 11-11 de la Figura 5: mostrada parcialmente abierta ilustrando el pozo desecante y los pozos del granulo de enzima; La Figura 12 es una vista en plano detallado del pozo desecante y las estructuras adyacentes en la tira de prueba de la Figura
La Figura 13 es una vista seccional detallada del pozo desencante y una porción de la segunda cámara de reacción de la tira de prueba de la Figura 5; La Figura 14 es una vista en perspectiva de un miembro de tapón mostrado en la Figura 3 que cierra la parte inferior de la primera cámara de reacción y proporciona una ruta de fluido para unir la primera cámara de reacción al conducto de conexión colocado verticalmente conduciendo a la segunda ccáár?ara de reacción; La Figura 15 es una vista en plano de miembro de tapón de la Figura 14; La Figura 16 es una vista en plano detallado de la parte superior de la tira de prueba de la Figura 5 en la región del conducto de conexión uniendo la primera cámara de reacción a la segunda cámara de reaccióiji, en donde a' = para las patas 38 b' = para las patas 20 La Figura 17 es una vista transversal de una porción de la tira de prueba de las Figuras 5 y 16 tomadas a lo largo de las líneas 17-17 de la Figura 16, que está a lo largo del eje de la tira de prueba en la región del conducto de conexión uniendo la primera cámara de reacción a la segunda cámara ce reacción, mostrando la colocación de una bola dentro del conducto de conexión que aqtúa como una válvula para cerrar el conducto de conexión; La Figura 18 es una vista transversal de una porción de la tira de prueba de la Figura 5 tomada en una dirección ortogonal a lo largo del eje de la cápsula, a lo largo de las líneas 18-18 de las Figuras 16 y 17; La Figura 19 es una vista en perspectiva de una tira de prueba de la clase mostrada en la Figura 5 con implemento de horquilla usado para abrir el conducto de conexión con la flecha indicando la moción relativa de la horquilla con respecto a la tira de prueba y las líneas punteadas indicando la inserción de los dientes de la horquilla en la tira de prueba para abrir la válvula de bola e?j? el conducto de conexión;
La Figura 20 es una ilustración esquemática de una estación de vapor incorporando un termo-enfriador eléctrico (TEC)/sistema de control termal de escape térmico para la tira de prueba y que tiene un alojamiento que acopla una estructura de soporte para formar un cierre al vacío alrededor de las tiras de prueba, con cada tira de prueba asociada con una horquilla para abrir el conducto de conexión cuando el alojamiento de la cámara al vacío mueve y acopla la estructura de soporte; La Figura 21 es una vista transversal pe la tira de prueba de la Figura 5 tomada en una dirección transversal a lo largo del eje* de la tira de prueba en la proximidad del conducto de conexión, mostrando la acción de las horquillas de las Figuras 19 y 20 en la deformación del material del conducto de conexión para de este modo abrir la válvula; La Figura 22 es una vista transversal de la tira de prueba de la Figura 22, mostrando la deformación del conducto de conexión y el flujo del fluido a través del conducto de conexión, en donde: c' = de la cámara A d' = a la cámara 52 y la cámara B y La Figura 23 es una vista en perspectiva de una modalidad alternativa de una tira de prueba en la cual las paredes de la tira de prueba que forman las primera y segunda cámaras de reacción que tienen superficies exteriores configuradas para acoplar las superficies calentadas en una estación de amplificación de ácido nucleico procesando las tiras de prueba para asistir en el manteni niento de dos cámaras a las temperaturas deseadas.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA MODALIDAD PREFERIDA Una forma preferida de la invención proporciona una cámara dual o vaso de reacción "binaria" incorporada en una tira de prueba u otras configuraciones. El término "binaria" se refiere a la característica del va$o de almacenar en una forma espacialmente
separada al menos dos reactivos diferentes, por ejemplo un reactivo (s) de amplificación/muestra estable de calor cue contiene, por ejemplo, Iniciadores y nucleótidos en una cámara y calentar la enzima (s) inestable tal como T7 y RT en la segunda cámara. Los reactivos en las dos cámaras no están en contacto antes de completar las etapas de enfriamiento y desnaturalización. La primera cámara esta accesible vía un cierre de tapón cubriendo una membrana penetrable u otros medios de manera que se permita una (s) muestra (s) de control o clínica o analítica en forma líquida para agregarse en la primera cámara. L segunda cámara se sella y contiene los compuestos enzimáticos de la reacción de amplificación. Los reactivos pueden ser de varias formas físicas, tales como líquidas, dranuladas, liofilizadas, etc. en cantidades de dosis unitarias. Después de que los contenidos de la primera cámara se colocan en contacto con la segunda cámara, la reacción de amplificación posteriormente puede efectuarse tal como en la segunda cámara. En una posible forma de la invención, las dos cámaras pueden ser parte de una unidad desechable integrada. En otra modalidad posible, las dos cámaras pueden ser dos unidades distintas, que tienen superfic es de acoplamiento complementarias o características que permiten las dos unidades combinarse en una unidad individual. En la primera modalidad, en donde las dos cámaras son parte de un artículo unitario, la unidad deberá hacerse para prohibir el intercambio de materiales entre las dos cámaras durante el envío y antes de las etapas de desnaturalización (calentamiento). En ambas modalidades, se requiere un mecanismo mediante el cual los contenidos de la primera cámara (una solución que contiene la muestra de prueba o del paciente y la mezcla de reactivo (s) de amplificación después de la desnaturalización y la primer aleación) se colocan en contacto con la enzima (s) en lei segunda cámara. El mecanismo opera para introducir los contenidos de la primera cámara en la segunda cámara, siguiendo la terminación de la etapa de desnaturalización en la primera cámara de reacción en una
minimizar la estructura secundaria de ARN. La temperatura de la cámara A posteriormente se enfría debajo de la primeia alineación. Subsecuentemente, la solución de la cámara A se coloca en contacto con un granulo de enzima en el pozo del granulo 52 y la solución se introduce en la cámara B. Las cámaras A y B, ahora en comunicación del fluido una co? otra, posteriormente se mantiene en la temperatura óptima para la reacción de amplificación, es decir, 42 grados C. Mediante la separación espacial de la cámara A de la cámara B y la aplicación del calor para la desnaturalización de la cámara A solamente, las enzimas termo-inestables se protegen de la inactivación durante la etapa de desnaturalización. El calentamiento controlado del vaso de reacción de cámara dual 12 en la tira de prueba descrita anteriormente y transferir la solución de la Cámara A a la Cámara B, se realiza preferiblemente en una estación de amplificación o instrumento diseñado para procesar la etapa de prueba 10. Una estació de amplificación preferida se describe en la Patente de E.U.A. 5,786,182. Después de que se completa la reacfción, la tira de prueba 10 posteriormente se procesa en una máquina tal como el instruniento VIDAS® comercialmente disponible de bioMérieux, Inc. La tira de prueba 10 de la Figura 1 broporciona un factor de forma particular (es decir, forma, longitud, amplitud, altura, características de terminación 18A y 18B, etc.) de manera que se habilite la tira de prueba para ser compatible con una base de instrumento seleccionada o existente que tiene un receptáculo de fase sólida u otro medio de transferencia de fluidos y otro equipo para procesar los resultados de la reacción de amplificación del ácido nucleico en la tira de prueba por seg. Además, la modalidad preferida de la tira de prueba 10 tiene una forma y tamaño apropiado para la base de instrumento VIDAS® del inventor consignatario bioMerieux, Inc. Será apreciado que un tamaño diferente, forma, configuración y oirás características físicas del dispositivo de
prueba incorporando el vaso de reacción de cámara dual puede llegar en para ajustarse a otros instrumentos analíticos y otros instrumentos que conducirían a la reacción de amplificación de ácido nucleico en el vaso de reacción de cámara dual. Además, los inventores no consideran la invención limitapa a la tira de prueba particular ilustrada en los dibujos. Las figuras 2 y 3 son vistas en perspectiva de la tira de prueba 10 y el miembro de cubierta 14 de la Figura 1. La Figura 4 es una vista en perspectiva aislada del miembro de cubierta. Con referencia a las Figuras 2-4, el miembro de cubierta 14 tiene un par de patas flexibles 20 con una característica de reborde 21 que se cierra en las capas correspondientes formadas en el borde superior de la tira de prueba, que se explicará junto con las Figuras 7-10. Las patas 20 permiten la porción trasera 22 de la cubierta 14 para estar anexada firme y seguramente a la tira de prueba 10, mientras que se permite una segunda o porción delantera 24 de la cubierta 14 para elevarse y relativamente bajarse a la porción trasera 22. La cubierta 14, hecha de un material polimérico moldeado, incluye una porción de bisagra integral 26 uniendo de manera conjunta las porciones 22 y 24. La cubierta también incluye una abertura central 28 que tiene un filtro de malla porosa colocada en el mismo para permitir que el eiire entre en o sea removido de la cámara A
(después de la remoción de la membrana de sellado de la parte superior de la cámara A), mientras que se bloquea sustancialmente el escape de fluidos o reactivos de la cámara A o la entrada de material extraño en la cámara El propósito de la cubierta 14 es parq controlar el acceso mediante el usuario a la cámara A y para proporcionar una barrera protectora del ambiente durante la realización de la reacción de amplificación de ácido nucleii'co. Durante la fabricación de la tira de prueba, los reactivos se cargan en las cámaras A y B (y a los pozos 13) y posteriormente se aplica una membrana de sellado a la su erficie 15 de la tira de prueba 10, cubriendo todos los pozos 13 y las cámaras A y b En una modalidad posible, la membrana
el botón 41 se conecta al resto de la cubierta mediante el medio de las patas flexibles 41 A que permiten el botón 41 y el punto de proyección 41 B para moverse relativamente al miembro de cubierta y de esta manera penetrar la membrana. Una vez que se mueve la posición inferior, la pared lateral 41 D del bolón se fija apretadamente en la porción de la pared circular correspondiente 41 E del miembro de cubierta 14, mostrado mejor en la Figura 4B. Estas figuras también muestran a abertura central 28 que recibe un filtro de malla porosa. Otra modalidad alternativa para el Miembro de cubierta 14 se muestra en las Figuras 4C y 4D. El botón 41 de una posición superior mostrada en la Figura 4C, en la cual la superficie de corte de proyección 41 B está arriba de la membrana (no mostrada? cubriendo la cámara A a una posición Inferior, mostrada en la Figura 4D, en la cual la superficie de corte de proyección 41 B se corta a través de la membrana. El usuario posteriormente levanta el extremo 30 del miembro de cubierta e inserta la muestra de prueba en el orificio pequeño formado en la membrana mediante la característica de corte 41 B. Una característica de orilla de rompimiento flexible 41 F en la porción inferior del botón 41 acopla una saliente de proyección en la parte superior de la cámara A, como se muestra en la Figura 4D, por ello dando senlido positivo del acoplamiento del botón con la membrana. El usuario todavía puede rápidamente levantar el extremo del miembro de cubierta 14 para introducir la muestra en la cámara A. Con referencia en particular a las Fi ¡guras 2 y 4, el miembro de cubierta 14 tienen una región vacía 40 que proporciona el acceso para una horquilla que corresponde relativamente a la tira de prueba en una esitación de proceso para la tira de prueba. La horquilla, subsecuentemente descrita junto con las Figuras 19-22, opera para abrir la válvula de bola en un conducto de conexión proporcionado en la tira de prueba que une a las cámaras A y B del vaso de reacción de cámara dual 12
La Figura 5 es una vista en plano elevado de la tira de prueba de las Figuras 1-3, con el miembro de cubierta descubierto para ilustrar mejor las características de la tira de prueba por se. Con referencia al extremo de mano derecha de la Figura 5, un miembro de sellado tal como una película de aluminio 42 se aplica a la superficie superior de la tira de prueba 10. La membrana 42, mostrada particularmente abierta, se extiende de la posición mostrada en el extremo de mano derecha de la Figura 5 para dejar cruzar la superficie superior total de la tira de prueba. La membrana termina en un extremo libre 32 adyacente a la cámara A del vaso de reacción de cámara dual 12 en la proximidad del extremo 18A. La membrana 42 por ello cubre completamente y sella los pozos 13 de la tira de prueba. El extremo a mano derecha 18B de la tira de prueba incluye una abertura 44 para recibir una cubeta óptica para los propósitos de an?jl ¡sis óptico de una detección de productos de reacción usados en un procedimiento ana ítico de la tira de muestra en una manera conocida. Los productos de reacción resultan de reacción (es) de hibridación usando un soporte sólido para capturar la sonda del producto de reacción, es decir, el complejo de hibridación del amplicon y la sonda del detector. Los tipos adicionales de las sondas competidoras también pueden usarse pero no se detectan en la reacción (es) de hibridación. Con referencia ahora al extremo a mano izquierda de la Figura 5, la tira de prueba 10 incluye la cámara A del vaso de reacción de cámara dual, un conducto de conexión verticalmente colocado 50 conduciendo de la base de la tira de prueba arriba de la región superior del mismo y un pozo de granulo ce enzimas 52 conteniendo la enzima (s) de amplificación. Una válvula, subsecuentemeifite descrita junto con las Figuras 19-22, se localiza en el conducto de conexión 50 y se abre selectivamente para permitir que una solución pase de la Cámara A a través de conducto de conexión 50 y en el pozo de granulo de enzima 52. El pasaje de la soluciióonn a través del pozo de granulo de enzima
disuelve el granulo de enzima. La solución jngresa en la cámara B y la amplificación se lleva a cabo en la cámara B. La tira de muestra 10 además incluye un par de pozos desecantes 54 y 56 que se colocan en el aire o la comunicación de fluidos con la cámara B. El pozo desecante 54 también se muestra en la Figura 6, que es una vista transversal de la tira de prueba tomada a lo largo de las líneas 6-6 de la Figura 5. Los pozos desecantes 54 y 56 se designan para portar una pluralidad de pequeños granulos desecantes apilados en la parte superior uno del otro en los pozos. Durante el montaje de la tira de prueba, la inspección de la máquina de los pozos desecantes confirmará la cantidad de granulos desecantes en los pozos 54 y 56. El propósito del desecante es extender la vida de la saliente de la enzima de amplificación cargada en la tira de prueba, particularmente en donde la enzima de amplificación está en una forma granulada y susceptible a degradación en la presencia de un ambien te húmedo. El desecante es particularmente importante a la tolerancia del reactivo o granulos de enzima para humedecerse para la escala extremadamente crítica de las concentraciones de reactivos proporcionados en un material permeable en gas, es decir, una tira de prueba. En el caso de que los nucleótidos, MgCI2, iniciadores y otros reactivos cargados en la cámara A están en forma líquida, posteriormente los pozos desecantes 54 y 56 necesitan colocarse en aire directo o comunicación en fluido con la cámara A. Sin embargo, en el caso de que los reactivos en la cámara A también están en la forma de granulos o de otra manera susceptibles a la degradación en un ambiente húmedo, posteriormente los pozos desecantes se diseñarán y construirán para comunicarse con la cámara A además de la cámara B o alternativamente, un segundo juego de pozos desecantes puede proporcionarse adyacente a la cámara A para servir los reac ivos en la cámara A. Con referencia en particular a las Figuras 6 y 13, la porción lateral extrema del pozo desecante 54 incluye un pasaje indicado mediante las flechas 58 en la Figura 13,
indicando la comunicación con aire con la cámara B (y últimamente la comunicación con aire con el granulo de enzima colocado en e pozo del granulo de la enzima 52). El pasaje
58 se proporciona arriba de una pared 60 separando la porción lateral del pozo desecante
54 de la cámara B. Los dos pozos desecantes pueden acomodar diferentes composiciones desecantes que tienen características de absorción diferentes. Tres bolas desecantes 63 colocadas en el pozo desecante 54 se indican en fantasma en la Figura
13. Alternativamente, el desecante podría estar en la forma de un cuerpo desecante unificado simple. Alternativamente, las bolaá desecantes podrían colocarse directamente en la cámara B sin efecto adverso en la reacción de amplificación o moldeadas en el material formando el vaso de reacción de cámara dual 12. Con referencia a las Figuras 5 y 6, la superficie superior 15 de la tira de prueba 10 incluye una apertura 70 diseñada para ac3modar las horquillas de las Figuras 19-21 durante el proceso de apertura del conducto de conexión 50. EL miembro de cubierta 14 de las Figuras 3 y 4 se instala sobre la tira de prueba 10 de manera que la abertura 40 del miembro de cubierta está directamente sobre la apertura 70 de la tira de prueba. La Figura 5 también muestra las características de reborde 72 que permiten a las patas flexibles 20 del miembro de cubierta 14 cerrar la tira de prueba cuando el miembro de cubierta se instala en la tira de prueba. Estéis características también se muestran en las
Figuras 8-12. Con referencia a las Figuras 9 y 10, la tira de prueba tiene una porción diagonal 74 en la cual la característica de cuña 21 (Figura 4) del miembro de cubierta se desliza hasta que la característica de cuña 21 se cierra debajo del reborde 76 y se presiona en contra de la porción de pared 78. La naturaleza flexible de las patas 20 del miembro de cubierta y la acción del reborde 21 en contra de la saliente 76 previene que el miembro de cubierta 14 se desacople de la tira de prueba durante la operación de elevación y reducción de la porción frontal 24 del miembro de cubierta. La superficie
diagonal 80 de la Figura 9 asiste en la instalación del miembro de cubierta y la alineación de las patas 20 relativas a la característica de reborde 72. Con referencia a las Figuras 6 y 8, la tira de prueba tiene un par de aristas 84 extendiéndose transversalmente moldeadas en la parte inferior de la tira de prueba que permite que la tira de prueba se coloque pn una actitud de nivel estable en una parte superior de la mesa. Las Figuras 2 y 8 ilustran un tapón base 86 que esta fabricado separadamente y soldado ultrasónicamente a la base de la tira de prueba 10. El tapón 86 cubre la porción más baja del extremo de la cámara A y proporciona una ruta de fluido para que la solución pase de la cámara A a la base del conducto de conexión verticalmente colocado 50 y proporciona el cierre en contacto con un sistema de control termal de escape térmico/TEC. El tapón 86 se muestra en mayor detalle en las Figuras 14 y 15. Con referencia a las Figuras 8 y 14-15, el tapón 86 incluye una porción semicircular 88 que esta unida a la base de la cámara A. Un par de elementos de orilla opuestos 90 se unen a una porción del alma 87 (Figura 8) conectando la cámara A al conducto de conexión 52
El tapón incluye otra porción semicircular 92 que esta unida a una superficie semicircular correspondiente en la base del conducto de conexión 50. Por ello, el tapón forma un pasaje 94 permitiendo que el fluido pase de a base a la cámara A a la base del conducto de conexión 50, como se indica mediante las flechas en la Figura 14. La Figura 11 es una vista transversal detallada de la tira de prueba de la Figura 5 tomada a lo largo de las líneas 11 de la Figura 5, mostrada parcialmente abierta, ilustrando el pozo desecante 56 y el pozo del granulo de enzima 52. La Figura 16 es una vista en plano detallado de la tira de muestifa 10, mostrando las estructuras del vaso de reacción de cámara dual. Con referencia a estas figuras, junto con las Figuras 17-22, la operación de la válvula en el conducto de conexión 50 y el flujo de la solución del vaso de reacción A para el vaso de reacción B se describirán en detalle.
como se describe en detalle en la Patente de E.U.A. No. 5,786,182. El alojamiento de cubierta al vacío 134 se anexa a un mecanismo de conducción mecánico que eleva y disminuye el alojamiento de cubierta al vacío relativo a un miembro de soporte horizontal 138. El alojamiento de cubierta 134 y el miembro de soporte 138 define un cierre al vacío o cámara 140. El alojamiento de cubierta al vacío 134 además incluye puertos (no mostrados) para retirar el aire del cierre al vacío 140 e introducir el aire de nuevo en el cierre al vacío 140. Cuando el alojamiento de la cubierta al vacío 134 se disminuye por debajo del miembro de soporte 138, forma un sello hermético de aire con el miembro de soporte 138 (usando una estructura de empaque apropiada en la región 139), permitiendo al vacío ser empatado en el cierre. El empate del vacío en el cierre 140 causa que el aires se retire del vaso de reacción de cámara dual vía la apertura 28 en el miembro de cubierta 14 y un filtro permeable del aire 142 colocado en el mismo (ver la Figura 19). Posteriormente, cuando el vacío se libera en el cierre 140, con el alojamiento 134 permaneciendo en la posición inferior durante la liberación del vacío, la presión diferencial entre las cámaras A y B causa la solución del fluido en la cámara A para migrar a través del conducto de conexión, abierto mediante la acción de las horquillas 110 y en la cámara de granulo de enzima y la cámara B en la manera descrita previamente. Detalles adicionales en una estación de amplificación actualmente preferida incorporando el vacío y otras características; de la Figura 20 se describen en la solicitud de Bryan Kluttz et al, presentada actualmente y previamente citada. Mientras que la modalidad de válvula de bola anterior es una modalidad actualmente preferida, se apreciará que oíros equivalentes numerosos y mecanismos alternos pueden incorporarse en un dispositivo de prueba para propósitos de permitir que el fluido migre o se transfiera de la cámara A a la cámara B. Varios diferentes mecanismos se describen en la Patente de E.U.A. No. 5,786,182. Todavía otros mecanismos de válvula diferentes pueden existir o pueden desarrollarse mediante
preferidas descritas anteriormente sin apartarse del real espíritu y alcance de la invención, Este real espíritu y alcance se determina mediante la referencia de las reivindicaciones anexas, interpretadas a la luz de la especific, ación precedente.