MXPA01002431A

MXPA01002431A - Metodo para el examen rapido de analitos.

Info

Publication number: MXPA01002431A
Application number: MXPA01002431A
Authority: MX
Inventors: Rudi Wilfried Jan Pauwels
Original assignee: Tibotec Nv
Priority date: 1998-09-08
Filing date: 1998-09-08
Publication date: 2002-05-08
Also published as: IL141810A0; CA2342627A1; WO2000014540A1; TW429312B; KR20010106467A; BR9816009A; AU2251200A; JP2003517575A; AU771520B2; RU2225985C2; NZ510765A; TR200101255T2; PL346565A1; IL141810A; EP1112494A1; CN1315001A; KR100562872B1

Abstract

Un metodo para el examen rapido de analitos, tales como potenciales candidatos de farmacos, comprende las etapas de aplicar una pluralidad de analitos a ser examinados sobre un soporte solido o mas soportes solidos (61) de modo que los analitos queden separados entre si; poner en contacto dicho soporte o soportes (61) que llevan analito con objetivos proporcionados en un medio semisolido o liquido, con lo que dichos analitos son liberados del soporte o soportes solidos (61) a los objetivos; y medir las interacciones de analito-objetivo; este metodo sirve para la manipulacion de miles de diferentes analitos simultaneamente; cuando el analito es aplicado al soporte solido (61) puede difusionar en el mismo de modo que produzca un gradiente de concentraciones y una dilucion seriada de analito si se requiere una curva de respuesta de dosis para un farmaco candidato; el metodo descrito puede ser facilmente automatizado.

Description

MÉTODO PARA EL EXAMEN RÁPIDO DE ANALITOS CAMPO TÉCNICO La presente invención se refiere a un método para el examen rápido de grandes cantidades de analitos, incluyendo el examen rápido de compuestos químicos en forma líquida, para su utilización como fármacos potenciales.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Actualmente, la identificación de compuestos potenciales candidatos para la utilización como fármacos se efectúa por medio de programas de examen y/o diseño racional de fármacos. Si bien, el concepto de diseño de fármacos ab initio efectúa originalmente amplias expectativas de éxito, este método no ha probado tener éxito en la práctica, principalmente debido a una falta de suficiente relación clara entre la estructura molecular y los sitios receptores. Por consiguiente, el examen de compuestos es todavía la tecnología de elección para la rápida identificación y selección de compuestos principales como fármacos candidatos. Actualmente, se utilizan diversos métodos de examen de alto rendimiento (HTS) en el examen de compuestos como candidatos para fármacos potenciales. Sin embargo, la velocidad y la efectividad por el costo del HTS están limitadas por la no disponibilidad de equipos que puedan simultáneamente tratar grandes cantidades de compuestos en forma líquida. En los exámenes HTS actuales, la placa de microtitulación tiene 5 un rol central, ya que es el dispositivo estándar en que se efectúan los ensayos. La placa de microtitulación ha determinado el diseño de equipos de procesamiento de líquidos, tales como estaciones de trabajo de procesamiento de líquidos programables y también ha conducido al desarrollo de periféricos de placas de microtitulación para filtrado, lavado, lectura y otras 10 operaciones que intervienen en el HTS. Para adaptarse a los requerimientos siempre crecientes de alto rendimiento, los equipos basados en placas de microtitulación han sido integrados con manipuladores robóticos. El rol central de la placa de microtitulación y los requerimientos de rendimiento siempre crecientes han 15 llevado a módulos de HTS aún mayores y más complejos. Tales módulos complejos ¡ncluyen rieles de robot para acceder a superficies más amplias, incubadoras de placas de microtitulación automáticas y más grandes, y dispositivos de almacenamiento para desechos. Además, se requieren programas de planificación de operaciones complejos y software de 20 integración para la administración óptima de todos los componentes de hardware. El rol central de la placa de microtitulación determina también otros aspectos de un procedimiento típico de examen, tales como aspectos de banco química. Tradicionalmente, los compuestos son sintetizados, almacenados y catalogados en repositorios químicos centrales de los cuales nuevos compuestos son despachados por solicitud de laboratorios de ensayos biológicos en o fuera de una organización. A menudo, cada compuesto nuevo debe pesarse y disolverse antes de cada nuevo ensayo. Por lo tanto, es esencial que los compuestos puedan ser accedidos individualmente y recuperados rutinariamente. Impulsados por las más recientes disposiciones y capacidades de sistema de HTS se trata de adaptar las condiciones de almacenamiento físico de los compuestos con el formato de la placa de microtitulación. Por ello, se desarrollan soluciones de reserva de compuestos de resierva disueltos en dimetiisulfóxido que son almacenadas en formato de placas; de microtitulación, por lo que cada compuesto es ubicable. La base de la infraestructura de HTS es aún la placa de microtitulación estándar de 96 cavidades, y la mayoría de los sistemas de examen desarrollados hasta la fecha han sido desarrollados para utilización en este formato. Sin embargo, las placas de microtitulación de más alta densidad (por ejemplo, placas de 384-, 864-, 1546 y 9600 cavidades) son incompatibles con la mayor parte de los equipos diseñados para la placa de 96 cavidades. Como los formatos de examen probablemente cambien considerablemente en el futuro, los sistemas de examen deben tener suficiente flexibilidad para cumplir este requerimiento.

La velocidad del desarrollo de HTS hasta la fecha ha sido determinada por el desarrollo de sistemas rápidos de tratamiento de líquidos capaces de tratar pequeños volúmenes de líquidos para que sirvan para la miniaturización de ensayos en formatos de placas de microtitulación, en las cuales, la cantidad de cavidades ha sido aumentada drásticamente a fin de que sirva para las cantidades siempre crecientes de compuestos a ser examinados. Sin embargo, ya que el número de cavidades se incrementa, la capacidad de volumen de las cavidades disminuye drásticamente. Por lo tanto, es obvio que esta tendencia está haciéndose una tendencia autolimitante debido a las limitaciones físicas impuestas, por ejemplo, por equilibrios bioquímicos relacionados con el cultivo de tejidos en general donde el control del pH, el intercambio de dióxido de carbono, la humedad y la temperatura son de suma importancia, y cuyos parámetros son muy difíciles de controlar en pequeños volúmenes del tipo empleado en placas de microtitulación de alta densidad. Un problema con la utilización de formatos de placas de microtitulación de alta densidad es que no es posible obtener fácilmente dilución seriada donde se requiere una curva de respuestas a dosis. Por ejemplo, no es posible efectuar una dilución seriada en las cavidades mismas, de modo que la dilución seriada debe ser efectuada externamente a las cavidades. Sin embargo, aunque la dilución seriada sea efectuada de esta manera, se tiene todavía el problema del aspecto de tratamiento de líquidos del procedimiento de examen. De este modo, para dilución seriada, actualmente se está efectivamente confinando a la utilización de la placa de microlitulación de 96 cavidades. Asimismo, aún cuando el tratamiento de los compuestos sea efectuado bajo control robótico, la cantidad de compuestos que pueden ser tratados en cualquier momento dado es típicamente de 8 ó 12 con un máximo de 96. No se conoce ningún sistema hasta la fecha que pueda simultáneamente procesar grandes cantidades de analitos para examinar 100 o más o hasta 1000 analitos simultáneamente, a lo que en lo que sigue se referencia como una mayor cantidad de analitos. Por lo tanto, existe una necesidad de contar con un método para examinar simultáneamente grandes cantidades de analitos y cuyo método obvie las dificultades y limitaciones de los sistemas de HTS. Existe también una necesidad de contar con un método para la manipulación simultánea de grandes cantidades de analitos con elementos para simplificar la identificación y la recuperación de los analitos para HTS.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención proporciona un método para el rápido examen de analitos, que comprende las etapas de: a) colocar una pluralidad de analitos que se van a examinar, dentro de receptáculos individualmente identificables, para almacenamiento; b) aplicar simultáneamente dicha pluralidad de analitos a uno o más soportes sólidos de modo que dichos analitos se apliquen directamente desde dichos receptáculos a cada uno de los soportes sólidos y permanezcan aislados entre sí; c) contactar dicho soporte o soportes sólidos que llevan analitos con objetivos provistos en un medio semisólido o líquido, con lo que dichos analitos son liberados del soporte o soportes sólidos a los objetivos; y d) medir las interacciones de analito-objetivo. El método de acuerdo con la invención sirve para la manipulación de cientos de diferentes analitos simultáneamente. La etapa a) del método de conformidad con la invención asegura que los analitos se transfieran desde los receptáculos al soporte o soportes sólidos de manera tal que se mantenga el contenido transferido de cada receptáculo de cada uno de los otros receptáculos. Los receptáculos individualmente identificables son preferentemente seleccionados de tubos, incluyendo tubos capilares, plumas, incluyendo marcadores, y cabezas impresoras, o cualquier receptáculo que sirva para almacenar y aplicar directamente una analito desde el receptáculo a un soporte sólido dado. Además, preferentemente, los receptáculos identificables individualmente son un grupo de tubos capilares, cada uno de los cuales es identificable de acuerdo a su posición dentro del grupo, y en el que la transferencia de los analitos al soporte o soportes sólidos se produce administrando los analitos a través de los extremos abiertos de los tubos capilares. Grupos preferidos especialmente son receptáculos individuales dispuestos en grupos concéntricos o en espiral. 5 La transferencia de los analitos al soporte sólido se puede obtener administrando dichos analitos desde los extremos abiertos de los tubos capilares al soporte sólido con o sin contacto directo entre los tubos capilares y el soporte sólido. Los analitos pueden ser transferencias al soporte sólido en 10 cantidades variables. De este modo, variando el tamaño de las gotas que se transfieren se puede obtener una dilución seriada, si se requiere. La transferencia simultánea de analito desde los capilares puede ser obtenida aplicando un estímulo, tal como un cambio de presión, utilizando un elemento piezoeléctrico. Alternativamente, se pueden utilizar condiciones 15 de alta frecuencia para dividir una columna líquida en gotitas que son administradas al soporte sólido, según se requiera. El tamaño de la gotitas típicamente será en volúmenes de nanolitros o picolitros. De este modo, se puede obtener un formato de ensayo de conformidad con la invención, donde el analito no es pipeteado, según es 20 actualmente la norma, sino que es aplicado directamente de su receptáculo individual al medio de ensayo. Se apreciará que los receptáculos identificables individualmente aquí descritos, proporcionen un medio para almacenar compuestos de reserva tt, ?f"<?e$> a los cuales se puede acceder y utilizar según se requiera. De este modo, las unidades de aplicación de analito pueden consistir en receptáculos identificables individuales ensamblados en compartimientos accesibles que pueden ser recuperados automáticamente como un todo y de los cuales los analitos puede ser aplicados directamente a un soporte sólido. Por ejemplo, una modalidad preferida del receptáculo identificable es un tubo capilar y los compuestos de reserva en solución son absorbidos en una pluralidad de tales tubos capilares por efecto capilar. De esta manera cantidades ilimitadas de capilares pueden ser llenadas sin requerimientos especiales de energía. Los tubos capilares llenados con soluciones de reserva de los compuestos pueden ser almacenados a temperaturas y condiciones deseadas. El método de conformidad con la invención, sirve para la aplicación masiva simultánea de analitos sobre un soporte sólido. Por ejemplo, según se describe en mayor detalle en la presente solicitud se puede obtenesr una aplicación masiva simultánea de volúmenes iguales de 10.000 o más compuestos provenientes de un grupo de receptáculos individuales, tales como capilares a una fase sólida. La cantidad de compuesto administrado puede ser determinada por el tiempo de contacto de los capilares con el soporte sólido. Los receptáculos de analito pueden ser también adecuadamente dispositivos similares a un marcador dirigible que permite el dibujo simultáneo de líneas paralelas de analito sobre un soporte sólido de elección.

Después de la administración de los compuestos, los compuestos que pueden ser dispuestos según un modelo de puntos o líneas separadas, se dejan que sequen sobre la fase sólida. En una modalidad, el soporte sólido es sustancialmente plano, y 5 de forma en disco, rectangular o cuadrado. El soporte sólido puede comprender un material que sirva para el desprendimiento espontáneo del analito o analitos cuando son aplicados al mismo. Alternativamente, el soporte sólido puede comprender un 10 material que sirva para la liberación controlada del analito o analitos cuando son aplicados al mismo. En cada caso, el material puede ser semi-sólido. Preferentemente, cuando cada analito es aplicado al soporte sólido difusiona en el mismo de modo que se produzca un gradiente de 15 concentración. De esta manera se puede obtener una dilución seriada de analito si se requiere una curva de respuesta de dosis para un fármaco candidato, en lugar de un resultado positivo o negativo simple (si/no). La utilización de difusión de analito retardado en un medio o 20 matriz semi-sólida elimina además la necesidad de separación física, como en el caso de las cavidades de una placa de microtitulación y la necesidad de difusión seriada de analitos, cuando ella se requiera como un gradiente de concentración será establecida por difusión pasiva.

Preferentemente, la superficie del soporte sólido sobre el cual los analitos son aplicados es seleccionada de polímeros, cerámicas, metales, celulosa y vidrio. Además, preferentemente, dicho medio semi-sólido está dispuesto sobre un portador. En otra modalidad, ei soporte sólido se encuentra en forma de una película o cinta flexible sobre la cual se aplica el medio semi-sólido que contiene el objetivo, con lo que el método puede ser automatizado utilizando una disposición de rodillos para hacer progresar la película o cinta flexible a través de las diversas etapas del método. En esta modalidad, el portador puede ser cubierto por otra capa de película o cinta, y está de este modo intercalado entre el soporte sólido y la capa de cobertura. Asimismo, el soporte sólido o capa de cobertura (si la hay) puede ser provista de una pista para registro de información referente a los analitos aplicados, con lo que la información puede ser leída y procesada simultáneamente con la medición de interacciones analito-objetivo en un procese- automatizado. En otra modalidad adicional, el soporte sólido es en sí mismo un detector o forma parte de un detector. En esta modalidad, el soporte sólido es preferentemente seleccionado de una oblea de SiO2, un dispositivo acoplado con cargas, y una película fotográfica.

La superficie del soporte sólido puede estar revestida con una membrana, un monocapa molecular, una monocapa celular o una película de Langmuir-Blodgett. Todos estos revestimientos pueden ser utilizados para controlar la liberación de analitos cuando son aplicados a los mismos. En otra modalidad, el soporte sólido es en sí mismo un portador de información que lleva información en forma electrónica, magnética o digital zada. En una modalidad alternativa, la superficie del soporte sólido es reflectora. Por ejemplo, la superficie puede ser la superficie reflectora de un disco compacto. El método de conformidad con la invención puede comprender además la etapa de copiar dicho disco compacto a un disco compacto en el que se puede escribir. En otra modalidad, el medio semi-sólido comprende una sustancia que proporciona un entorno semi-sólido o de líquido viscoso que permite la liberación controlada de dichos analitos a dicho objetivo. Preferentemente, la sustancia que proporciona un entorno semisólido o de líquido viscoso es seleccionado de gelatina, polisacáridos tales como agar y agarosa, y polímeros tales como metilcelulosa y poliacrilamida o un denominado material inteligente. Tales sustancias pueden ser también utilizadas para controlar la liberación de los analitos cuando son aplicadas a las mismas.

Los denominados materiales inteligentes son geles poliméricos naturales y sintéticos que son sometidos a transiciones de fase y fenómenos críticos, por ejemplo transiciones de fase acompañadas por un cambio de volumen reversible, discontinuo hasta varios cientos de veces, en respuesta a variaciones infinitecimales en condiciones ambientales. Ejemplos de los denominados materiales interligentes son materiales de tipo gel poliméricos, en particular hidrogeles que pueden absorber un fluido y subsiguientemente desprender ese fluido en respuesta a un estímulo o disparador químico o físico. Un ejemplo de un estímulo químico es un cambio de pH o composición iónica o de solvente, y un ejemplo de un estímulo físico es luz de una longitud de onda particular o un rayo láser, o cambio de temperatura o un campo eléctrico chico. Por ejemplo, un gel que contiene N-isopropilacrilamida (componente principal) y el cromóforo sensible a la luz, la sal de trisodio de cobre es sometida a transiciones de fase inducidas por la luz visible (Suzuki, A, y Tanaka, T (nature (1990); 346, 345-347). Una gama de polímeros termosensibles adecuados es descrita por Snowden, M. J. et al (Chemistry & Industry (julio 1996); p.p. 531-534. Otros geles adecuados son los geles comercializados bajo la marca comercial THERA GEL comercializados por la compañía Gel Sciences Inc., Eloston M. A. Estados Unidos de América. En una modalidad adicional, las etapas b) y c) son efectuadas simultáneamente.

En otra modalidad más, cada analito es aplicado a un único soporte sólido. En esta modalidad, el soporte sólido es preferentemente de una forma en varilla o de una forma esférica. Además, preferentemente cada soporte sólido que lleva analito es puesto en contacto en la etapa b) con un objetivo en un compartimiento separado de un aparato con múltiples compartimientos, más especialmente dichos compartimientos son una disposición de minicavidades en dicho apáralo. En otra modalidad preferida, los receptáculos de analitos son soportes sólidos inertes pequeños sobre las superficies de los cuales los analitos han sido aplicados. La inmersión de los sólidos en una fase líquida o una fase semisólida da como resultado una liberación dependiente del tiempo de analito del soporte sólido hacia dentro de la fase líquida o semisólida. De esta manera, se pueden obtener diluciones de cantidades muy pequeñas de analitos en la fase líquida o semisólida, sin la utilización de dispositivos de tratamiento de líquidos. La concentración final de analitos desprendida hacia adentro de la fase líquida o semisólida es determinada por el tiempo de contacto entre el soporte sólido que lleva analito y la fase líquida o semisólida. Los analitos para el examen rápido en el método de conformidad con la invención son preferentemente seleccionados de compuestos químicos, antígenos, anticuerpos, sondas de ADN, células y glóbulos y liposomas que lleven un analito de interés.

Además, preferentemente, los analitos cuando son aplicados al soporte sólido, son disueltos en un solvente orgánico o inorgánico. Adecuadamente, el solvente incluye un denominado material inteligente que tiene respuesta a un parámetro físico o químico, de modo que cada analito a continuación de la aplicación al soporte sólido y secado, se licúe en respuesta a dicho parámetro químico o físico. El analito en una modalidad preferida es un compuesto químico para examen como candidato de fármaco potencial. Preferentemente, los objetivos son seleccionados de células procarióticas, células eucarióticas, virus, moléculas, receptores, glóbulos, y combinaciones de los mismos. Según se utiliza en la presente solicitud, el término compuesto o compuestos significa cualquier compuesto sintético, semisintético o natural o combinación de los mismos. En una modalidad los objetivos son células de funciones de información. En una modalidad preferida, los objetivos son células mamíferas provistas de una única construcción o múltiples construcciones de información. La actividad y/o expresión de los genes informantes depende del impacto de las condiciones experimentales específicas, por ejemplo el efecto in vitro de compuestos liberados de un soporte sólido a una fase semisólida. La unidad de incubación utilizada en esta modalidad típicamente será una incubadora del tipo que se utiliza en general para cultivo de tejidos.

La unidad de detección que se utiliza para medir la interacción de compuesto-célula adecuadamente consistirá en un microscopio invertido (por ejemplo, Zeiss Axiovert 100) acoplado a una cámara de video (por ejemplo, dage-MTI CCD72E) y un sistema de computación (por ejemplo, Pentium PC 300 Mhz) con software básico SK400 y la opción gráfica KS400. El microscopio invertido puede estar provisto además de una etapa de escaneo modificada para que se adapte a todas las configuraciones de placas de cultivo (formatos desde 6 cavidades hasta 9600 cavidades) como también otros formatos del tipo que se describen en la presente solicitud y que están provisitos de un motor de pasos con una resolución de 17,600 etapas por revolución. El paquete de software KS400 proporciona menús de fácil uso para ingresar parámetros de configuración, de calibración y de ensayo o especificaciones de análisis de datos. Otros elementos de detección incluyen la utilización de anal¡2:adores de imagen asistidos por computadora. En el caso que se utilicen células adherentes como objetivo, estas células se hacen crecer confluentemente ya sea cubriendo la superficie del soporte sólido o la superficie de glóbulos pequeños que son después suspendidos homogéneamente en la fase semisólida. Además, preferentemente, dichas interacciones de analito-objetivo son medidas utilizando uno o más de los siguientes métodos: método microscópico, colorimétrico, fluorométrico, luminométrico, densitométrico, isotópico y físico.

Por ejemplo, se puede utilizar una combinación de microscopía y fluorescencia. Por consiguiente, el microscopio puede ser configurado para epifluorescencia provisto de un motor de pasos y de un sistema de cámara. La adquisición de imágenes e interpretación puede ser controlada con computadora personal. Se apreciará que el método de conformidad con la invención sirva para el acoplamiento del principio de difusión de compuestos en medios semisólidos que contengan sistemas biológicos experimentales para producir imágenes en sistemas de microscopía. La invención sirve también para visualizar y determinar el efecto de compuestos en funciones de células procarióticas y eucarióticas. La visualización se puede obtener con células producidas genéticamente incluidas en un medio semisólido y expresado únicos o múltiples genes reporteros de los cuales el producto o productos de expresión es/son fluoróforo intracelular de excitación específica y longitudes de onda de emisión que correspondan con características de longitud de onda de un sistema de microscopía de emisión de imágenes de fluorescencia de alta densidad. A título de ejemplo, el método de conformidad con la invención típicamente comprende las etapas de: a) dirigir la aplicación de compuestos a ser examinados como potenciales candidatos de fármacos sobre un soporte sólido; b) disponer en capas un medio semi-sólido que contenga objetivos de interés sobre el soporte que lleva el compuesto; c) difusión de compuestos en el medio semisólido; d) incubación; e) visualización y registro de la interacción de compuesto-objetivo. A título de ejemplo, si se desea examinar fármacos potenciales o combinaciones de fármacos para utilización en el tratamiento de individuos infectados con virus de VIH, que tengan SIDA o ARC plenamente desarrollados, entonces objetivos adecuados para utilización de conformidad con la invención son células de proteína verde fluorescente producida genéticamente (GFP) expresante de MT4 que contienen el promotor a largo plazo sin repetición (LTR) (pLTR-EGFP-C1) y depositadas en el BCCM el 20 de agosto de 1998, bajo el N° de acceso N° LMBP3879. El pLTR-EGFP-C1 (4777bp) se basa en pEGFP-C1 (Clontech). En la expresión pEGFP-C1 de la proteína verde fluorescente intensificada (EGFP) es controlada por el promotor inmediato anterior (589bp) de tipo citom€?galovirus humano resistente. En el pLTR-EGFP-C1 , el promotor de CMV ss reemplazado por el LTR de repetición terminal largo VIH-1 (652bp) que contiene el promotor altamente inducible en la región U3. Tales células cuando están infectadas con VIH se hacen fluorescentes debido a la activación de LTR y la expresión de GFP. Si un fármaco candidato inhibe VIH, por ejemplo, inhibiendo la transcriptasa, proteasa o integrasa inversa viral, la fluorescencia es reducida o totalmente inhibida y se observan regiones progresivamente oscurecidas en el área de interacción de compuesto-objetivo. La etapa b) del método de conformidad con la invención típicamente involucrará mantener los analitos y los objetivos bajo condiciones 5 de ensayo apropiadas y con un período de tiempo suficiente para la liberación de los analitos del soporte sólido y la difusión de dichos analitos dentro de la fase líquida o semisólida que contenga los objetivos de interés. El mantenimiento de las condiciones de ensayo apropiadas incluirá mantener correcta temperatura, osmolaridad, pH, tonicidad y lo similar. Estas 10 condiciones son adicionalmente determinadas por la naturaleza de los objetivos. Típicamente, con células mamíferas como objetivo, la temperatura puede estar comprendida entre aproximadamente 4°C y aproximadamente 50°C y el pH puede estar comprendido entre 15 aproximadamente 6.5 y aproximadamente 7.5. La osmolaridad y tonicidad serán elegidos de una manera que se puedan obtener interacciones óptimas de células-analito. La única limitación bajo estas condiciones físicas es que las condiciones que se utilicen no afecten adversamente la viabilidad de las células ni interfieran con las interacciones de analito-objetivo. 20 Se apreciará que el método de conformidad con la invención pueda ser efectuado en un sistema totalmente integrado. El método de conformidad con la invención facilita la utilización de una unidad de administración de datos. Tal unidad adecuada comprende ?«Mtt¡g datos de bancos de compuestos químicos con identificación de compuestos, seguimiento de historia y tecnología de software que permita acceso e identificación de compuestos dentro de la instalación de almacenamiento hasta el momento. En otra modalidad preferida, la aplicación de analito, la interacción de analito-objetivo, la incubación, la detección y la interpretación de dalos están encadenados de manera tal que todo el método de examen de conformidad con la invención sea u método totalmente automatizado desde el principio al final. Un ejemplo típico de un método automatizado de examen rápido de compuestos de conformidad con la invención comprende las etapas de: 1. Aplicación de compuestos por medio de administración capilar produciendo puntos separados o líneas separadas de compuestos sobre la superficie de un portador, tal como una película transparente o portador de información utilizado en la industria de cassette de audio; 2. Secado de la superficie del portador; 3. Disposición en capas de células incluidas en una matriz semisólida de espesor constante sobre la superficie de una película transparente; 4. Puesta en contacto de la superficie del portador que contiene compuestos en puntos o líneas de compuestos separadas y la superficie de la película que sirve como el portador de matriz semisólida; 5. Enrollado de las superficies de película puestas en contacto; 6. Incubación de la película enrollada; 7. Desenrollado de la película y exposición a una unidad de detección y lectura de información; 8. Lectura continua de la película expuesta por medio, por ejemplo, de un sistema de análisis de imágenes microscópicas por fluorescencia; y 9. Análisis de datos. Las superficies externas, (que no llevan compuestos o que no están en contacto con la matriz semisólida) pueden contener información digital referente a la identidad de los compuestos aplicados que es leída simultáneamente durante el análisis de las muestras según se ha descrito en la etapa 8. De esta manera, la información biológica y de compuestos puede ser leída y procesada al mismo tiempo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La figura 1 ¡lustra el principio de difusión de compuestos en una matriz semisólida según se ha descrito en el ejemplo 1 a una densidad de células de 10E5/ml. La figura 2 ilustra el principio de difusión de compuestos en una matriz semisólida según se ha descrito en el ejemplo 1 a una densidad de células de 10E6/ml.

La figura 3 ilustra el principio de difusión de compuestos en una matriz semisólida según se ha descrito en el ejemplo 1 a una densidad de células de 10E7/ml. La figura 4 es un dispositivo porta-tubos capilares (8 x 12) según se ha descrito en el ejemplo 2. La figura 5 muestra la fluorescencia observada con células MT4 que expresan GFP (proteína verde fluorescente) (promotor LTR (de largo plazo sin repetición) en medio de RPMI (Rosemount Park Memorial Institute) sin rojo fenol, con 10% de FCS (suero de ternero fetal) y 1% de Pen-Strep (penicilina-estreptomicina) en ausencia de VIH-1 (a) y en presencia de VIH-1 (b), según se ha descrito en el ejemplo 3. Las figuras 6(a) y (b) muestran la fluorescencia observada con células MT4 que expresan GFP (promotor de LTR) en fase semisólida (medio RPMI sin rojo fenol y 10% de FCS, 1 % de Pen-Strep.0.34% de agar) en ausencia de VIH-1 (a) y en presencia de VIH-1 (b) según se ha descrito en el ejemplo 3. La figura 7(a)-(e) muestra la fluorescencia observada con células MT4 que se expresa en GFP (promotor LTR) en medio RPM I (sin rojo fenol y suplernentado con 10% de FCS, 1% de Pen-Strep) en ausencia (a) y en presencia de VIH-1 (b) y en presencia de VIH-1 y los inhibidores de transcriptasa inversos: AZT (c), 3TC (d) y Lovirida (e) a una concentración final ele 2.5 µM en un volumen total de 20 µl según se ha descrito en el ejemplo 3.

Las figuras 8(a)-(e) muestran la fluorescencia observada con células MT4 que se expresan con GFP (promotor LTR) en fase semisólida, con 0.34% de agar en medio RPMI (medio RPMI sin rojo fenol, suplementado con 10% de FCS y 1% de Pen-Strep) en ausencia (a) y en presencia de VIH-1 (b) y en presencia de VIH-1 y los inhibidores de transcriptasa inversos; AZT (c), 3TC (D), y Lovirida (e) punteados (1 µl de solución de reserva) sobre una superficie de soporte sólido a una concentración que produce una concentración final de 2.5 µM, suponiendo difusión completa de los compuestos en 20 µl de fase semi-sólida según lo descrito en el ejemplo 3. La figura 9 muestra la fluorescencia observada con células MT4 infectadas con VIH-1 en fase semi-sólida (0.34% de agar en medio RPMI sin rojo fenol, suplementado con 10% de FCS y 1 % de Pen-Strep) cuando células infectadas con VIH-1 fueron mezcladas con un soporte sólido sobre el cual se aplicó 1 µl de 2.5 µM, 250 nM y 2.5 nM de inhibidores de transcriptasa inversos, se dejaron secar y se les mantuvo durante 1 semana a una temperatura de 4°C antes de la utilización según lo descrito en el ejemplo 3. La figura 10 muestra la fluorescencia observada con células de MT4 infectadas con VIH-1 en medio (RPMI sin rojo fenol, suplementado con 10% de FCS y 1 % de Pen-Strep) cuando células infectadas con VIH-1 fueron agregadas en el medio a las cavidades de una placa de cultivo de tejido de 384 cavidades que contenía 1 µl de 2.5 µM, 250 nM y 2.5 nM de los inhibidores de transcriptasa inversos, AZT, 3TC y Lovirida, respectivamente, según se describe en el ejemplo 3. -#gm «i La figura 11 es una representación esquemática de un soporte sólido que lleva compuestos punteadas en el método de conformidad con la invención. La figura 12 ilustra- esquemáticamente como la distancia entre capilares en un grupo puede ser variada y adaptada a los requerimientos específicos del método de conformidad con la invención. La figura 13 es un modelo de difusión de calceína de una fase semi-s>ólida sobre un soporte sólido de conformidad con la invención. La figura 14 ilustra el principio de examen automatizado en línea de mega producción utilizando el método de conformidad con la invención. La figura 15 es una representación esquemática con detalles despiezados del elemento de clasificación de tubos capilares. Las figuras 16(a)-(c) muestran el desplazamiento de los tubos capilares de la figura 16 a una placa de microtitulación para llenado. La figura 17 ilustra el llenado de los tubos capilares de la figura 15. La figura 18 muestra un dispositivo roscado que se utiliza para reducir el espaciamiento entre los tubos capilares de la figura 15. La figura 19 muestra los tubos capilares individuales de la figura 15 cuando están siendo formados en un grupo en espiral. La figura 20 ilustra elementos por medio de los cuales el líquido en los tubos capilares de la figura 15 es liberado sobre un soporte sólido. La figura 21 ilustra un modelo de deposición de muestras.

S¿8 La figura 22 es una vista plana de un soporte sólido con analitos punteados sobre el mismo. La figura 23 ilustra la aplicación de una fase semisólida al soporte sólido.

MÉTODOS PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN La invención será ilustrada adicionalmente con los siguientes ejemplos: EJEMPLO 1 Principio de difusión e interacción de compuestos con células incluidas en un medio semi-sólido Calceína, un marcador de viabilidad de células fue disuelto a una concentración de 5 mM en sulfóxido de dimetilo (DMSO). Un tubo capilar de vidrio con una capacidad volumétrica total de 0.5 µl fue sumergido en la solución de calceína y llenado por efecto capilar. La punta del tubo capilar fue después contactada con una superficie de poliestireno de manera tal que una pequeña gota de solución de calceína fue administrada del tubo capilar a la superficie plástica. Después del secado de la gota, 20 µl de una suspensión de células en medio semi-sólido (células MT4 suspendidas en RPMI (Rosemount Park Memorial Instituí) 1640, sin rojo fenol, suplementada con 10% de FCS (suero de ternero fetal), 1% de Pen-Strep (penicilina- estreptomicina) y que contenía 0.34% de agar) fue colocada en capas sobre el punto de calceína secado. Después de un tiempo de incubación de 2 horas a una temperatura de 37°C (atmósfera humidificada y 5% de dióxido de 5 carbono) la difusión de la calceí?a hacia adentro de la fase semisólida fue observada por medio de microscopía de fluorescencia y visualización de la fluorescencia producida por la célula MT4 incluidas. El método de administración de gotas, secado y disposición en capas de la matriz semisólida que contiene densidades cada vez mayores de células MT4 incluidas 10 se ilustra en las figuras 1 , 2 y 3. En base a estos resultados se observa que la distancia sobre la cual se produce la difusión de calceína en una matriz semisólida de densidad constante es también determinada por la cantidad de células incluidas. 15 EJEMPLO 2 Principio de la aplicación de compuestos de alta densidad y difusión en una matriz semi-sólida Un haz de tubos capilares rellenados con calceína y dispuestos 20 (8x12) en un dispositivo portador según se ilustra en la figura 4 fue contactado con una superficie de poliestireno de modo que una gota de calceína fuera administrada simultáneamente de cada capilar a la superficie del poliestireno. El dispositivo portador se indica genéricamente con el número de referencia -.ÁLí¿^r.*e.iy-47r¿, ., 10 y comprende tubos capilares 11 montados en placas 12, 13 para mantener los tubos capilares 11 en la relaciór deseada entre sí. A continuación del secado, una suspensión homogénea de células MT4 en medio RPMI 1640 complementado con 10% de FCS, 1% de agar fue dispuesta en capas sobre 5 los puntos. Después de un período de incubación de dos horas (atmósfera humidificada, 5% de dióxido de carbono) se halló que para cada uno de los puntos la distancia de difusión de la calceína en la matriz semi-sólida fue reflejada por la fluorescencia de las células MT4 incluidas. 10 EJEMPLO 3 Interacción de compuesto-objetivo: Efecto de compuestos anti-VIH en la fluorescencia de células MT4 que se expresan en GFP (promotor LTR) en presencia de VIH-1 en una fase semisólida 15 Tres compuestos de actividad bien conocida contra VIH-1 (AZT, 3TC y Lovirida) fueron punteados (+/- 1 µl de reserva en un tubo capilar según precedentemente descritos) sobre la superficie de fondo de las cavidades de una placa de cultivo de tejido de poliestireno transparente de 384 cavidades. Se dejó que los compuestos en las cavidades secaran y se almacenó a una 20 temperatura de 4°C. Una semana después, se recogieron células MT4 de frascos de cultivo de tejido y se suspendieron a 10E7/ml en medio RPMI. Esta suspensión de células fue adicionalmente dividida por partes iguales en cuatro tubos. Estos tubos fueron después centrifugados a 450 g durante 10 minutos. A los corpúsculos de células obtenida a"espués de centrifugación de dos de estos tubos, se agregó 200 µl de suspensión VIH en un medio RPMI en un medio durante un período de 2 horas a una temperatura de 37°C. Los otros dos tubos fueron tratados de la ü?$ma manera, excepto que no se agregó ningún virus. Después de un tiempo de incubación de dos horas, se agregó solución de agar (a una temperatura de 39°C) a un tubo que contenía células y VIH y a un tubo que sólo contenía células a una concentración final de 0.34%. Después, 20 µl de suspensión de células en agar y 20 µl de suspensión de células/virus-agar fueron agregados a las diferentes cavidades de una placa de 384 cavidades que contenía los compuestos punteados según arriba indicados. A los corpúsculos de células de los dos tubos remanentes, se agregaron respectivamente 200 µl del medio y 200 µl de medio que contenía virus. Luego de un período de incubación de 2 horas a 37°C, el volumen final fue corregido (se igualó al volumen final de la composición de agar) y 20 µl de suspensiones de células infectadas y no infectadas fueron agregados a las cavidades de la placa de cultivo de 384 cavidades con compuestos punteados como se describió anteriormente. A las cavidades se agregaron volúmenes d 1 µl de compuesto inmediatamente antes de que se agregan las células infectadas con VIH. El volumen total de ensayo fue de 20 µl.

Después de un período de incubación de 3 días, la fluorescencia de las células MT4 que se expresan efe GFP fue evaluada por microscopía de fluorescencia y lectura de placas. Los resultados se resumen en las figuras 5-10. Estos datos muestran que a continuación de la aplicación de los compuestos sobre un soporte sóUdo (cavidad de una placa de microtitulación de 384 de cavidades) y después de almacenamiento de una semana a una temperatura de 4°C, la actividad (efecto protector de estos compuestos contra infección con VIH-1 ) no difirió de la situación donde la difusión de compuestos se produce en una fase líquida. Asimismo, los resultados obtenidos demuestran que los efectos que dependen de la concentración de inhibidores de RT en infección de VIH según reflejado por las células MT4 que se expresan en GFP son observados en fase semisólida y que la naturaleza del compuesto y su eficacia para inhibición RT de VIH-1 no es afectada por la utilización de un medio semisólido. La invención será adicionalmente ilustrada con la siguiente descripción de modalidades de la misma que se proporcionan a título de ejemplo solamente, con referencia a los dibujos adjuntos. Con referencia a la figura 11 , en la misma se indica un soporte sólido 20 que lleva compuestos 21 que han sido punteados sobre el mismo desde un grupo de 196 haces de tubos capilares (que no se muestran) cada uno de los cuales lleva 110 tubos capilares de modo que 21.560 compuestos fueron punteados sobre el soporte sólido 20.

La figura 12 muestra como se puede variar la distancia entre los tubos capilares en un grupo (1 ,414 mm, 1 mm, 2,236 mm, 2 mm, 3,623 mm, 3 mm) para cumplir los requerimientos específicos de un método de examen de conformidad con la invención. La figura 13 es un modelo de difusión de calceína en una fase semisólida sobre un soporte sólido. La calceína fue punteada sobre una superficie de poliestireno utilizando un dispositivo portador de compuestos capilar€is según se ilustra en la figura 4, con tubos capilares dispuestos a una distancia entre centros de 2 mm. La densidad de las células superpuestas, suspendida en el medio de fase semisólido (medio RPMI 1640, 10% de FCS, 1% de Pen-Strep, 0.34% de agar) fue de 10E7 células (MT4)/ml. La detección se efectuó por microscopía de fluorescencia después de un período de incubación de 2 horas. La figura 14 es una representación esquemática de un método automatizado para el examen rápido de compuestos de conformidad con la invención. Un portador de información 30 en forma de una película o cinta y con compuestos a ser examinados aplicados como puntos o líneas separadas sobre su superficie 31 es puesto en contacto con la superficie 32 de un portador de información 33, que es también una película o cinta, que lleva objetives de interés incluidos en una matriz semisólido. Los respectivos portadores 30, 33 son después enrollados con sus superficies 31 y 32 en contacto e incubados en un entorno de temperatura, humedad y contenido de dióxido de carbono controlados, de modo que los compuestos fueron liberados de la superficie 32 del portador 33. Los portadores son después desarrollados y el portador 33 se hace pasar a una unidad de análisis y lectura de información indicada genéricamente con el número de referencia 34. En las siguientes figuras 15 a 23, las partes similares se indican con los mismos números de referencia. Con referencia a la figura 15, en la misma se indica genéricamente con el número de referencia 40, un aparato para alimentar tubos capilares 41 de una provisión de los mismos a una cinta transportadora 42 con acanaladuras transversales 43 regularmente espaciadas entre sí. Los tubos capilares 41 ingresan a un canal 44 que puede dar cavidad a una única capa de tubos capilares 41 en respuesta al movimiento antihorario de una correa 46 y son administrados uno por vez a las acanaladuras 43 a medida que la cinta transportadora 42 se desplaza en una dirección horaria. Los tubos capilares 41 se desplazan a lo largo del canal 44 por el efecto combinado de la gravedad y la cinta 45. Cada vez que una acanaladura 43 está posicionada al final 46, un tubo capilar 42 es administrado a la cinta. Con referencia a las figuras 16a-c y la figura 17, se ilustran las etapas que intervienen en la transferencia de los tubos capilares 41 a una placa de microtitulación 47 para llenado. Los tubos capilares 41 son elevados de la cinta 42 por un dispositivo de sujeción por efecto engrampante que se indica genéricamente con el número de referencia 48. El dispositivo de sujeción 48 comprende dos componentes 49 alargados que sujetan con efecto engrampante una pluralidad de tubos 41 entre los mismos aplicando una fuerza lateral a los tubos. De esta manera, los tubos capilares 41 son transferidos de la cinta transportadora 42 a la placa de microtitulación 47 para llenado. El desplazamiento de las acanaladuras 43 en la cinta 42 es el mismo que el desplazamiento de las cavidades 50 en la placa de microtitulación 47. 5 El dispositivo de sujeción 48 eleva y transporta los tubos 41 en grupos de doce que corresponden al número de cavidades 50 en una hilera de la placa de microtitulación 47. Durante la etapa de transporte, el dispositivo de sujeción 48 se hace girar en 90° de modo que un extremo de los tubos capilares 41 se haga descender hacia adentro de las cavidades 50 de la placa de 10 microtilulación 47. El dispositivo de sujeción 48 y los tubos capilares 41 tienen libertad para desplazarse según un eje geométrico vertical para permitir que los tubos 41 se hagan descender hacia adentro de las cavidades 50 de la placa de microtitulación 47. Los tubos capilares 41 son mantenidos en las 15 cavidades 50 durante un período de tiempo suficiente para permitir que el líquido en las respectivas cavidades 50 sea aspirado hacia dentro de los tubos 41 por efecto capilar. Una vez que ha transcurrido el tiempo de llenado dado, los tubos 41 son extraídos y el dispositivo de sujeción 48 se hace girar a 90° para nuevamente adoptar una orientación horizontal. 20 A continuación del llenado de los tubos capilares 41 , dichos tubos eon transferidos a un dispositivo roscado 51 que se utiliza para reducir el espaciamiento entre los tubos capilares 41 según se muestra en la figura 18. Los; tubos capilares 41 son administrados al dispositivo roscado 51 en el ^^g^ ¡^^ ^^^!^ -¿^^^^S^ ? extremo 52. La rosca 53 del dispositivo roscado 51 tiene un paso variante, que es mayor en el extremo 52 que en el extremo 54. A medida que gira el dispositivo roscado 51 , los tubos capilares 41 avanzan a lo largo de su longitud en la dirección de la flecha, y debido al paso variante también se acercan entre sí. En el extremo 54 los tubos 41 sólo están separados por la pared 55 del filete de rosca 53. Con referencia a la figura 19, los tubos capilares 41 son descargados del dispositivo roscado 51 sobre una cinta 56 que tiene una capa de adhesivo a la que los tubos 41 se adhieren con sus lados a tope. La cinta 56 avanza a la misma velocidad que los tubos 41 dejando el dispositivo roscado 51. La cinta 56 es después enrollada progresivamente para formar un grupo en espiral estrechamente apretado según se muestra en 57. Con referencia a la figura 20, en la misma se indica genéricamente con el número de referencia 60, un aparato para liberar el líquido en los tubos capilares 41 que definen el grupo 57 a la superficie del soporte sólido 61 y que es desplazable en relación al mismo. El aparato 60 comprende un alojamiento 62 que está adaptado para recibir a dicho grupo 57. El alojamiento 62 está conectado a una bomba de aire 63 y creando un área de presión positiva en relación al exterior del alojamiento 62 fuerza al líquido hacia fuera de los tubos 41 sobre la superficie del soporte sólido 61 , cuando se requiere. La figura 21 muestra el grupo 57 de tubos capilares 41 dispuesto por sobre el soporte sólido 61 a continuación de la aplicación de gotitas de analitos líquidos provenientes -de los tubos 41 y el modelo de puntos 64 separados dispuestos sobre dicho soporte sólido 61. La figura 22 es una vista plana de un soporte sólido 61 que muestra la disposición en espiral de los puntos 64 separados del analito líquida fijada. Con referencia a la figura 23, la misma se ilustra un dispositivo que se indica genéricamente con el número de referencia 70, para aplicar células objetivo en una fase semisólida 71 a la superficie 72 del soporte sólido 61 a continuación del secado del analito líquido. El dispositivo 70 comprende un brazo 73 y una cabeza impresora 74. El soporte sólido 61 está libre para girar y el dispositivo 70 está libre para desplazarse en el plano z y/o los planos x o y, ce modo que la cabeza impresora 74 sea ubicada por una combinación del movimiento del brazo 73 y el soporte sólido 61.

RECOLECCIONES COODINADAS DE MICROORGANISMOS DE BELGICA-RECOLECCION DE BCCM™/LMBP Página 1 de la forma BCCM .TM /LMBP/BP/4/98-16 Recibo en caso de un depósito original Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos para Propósitos de Procedimiento para Patente Recibo en caso de un depósito original emitido conforme a la regla 7.1 por la Autoridad Depositaría Internacional BCCM™/LMBP que se identifica al final de la siguiente página Forma Internacional BCCM ' "7LMBP/BP/4/98-16 Para: nombre del depositario: TIBOTEC N.V.

Dirección: Institute for Antiviral Research Generaal De Wittelaan L11 B3 B-2800 Mechelen Bélgica I. Identificación del microorganismo: 1.1 Referencia de identificación por parte del depositario: pLTR-EGFP-C1 1.2 Numero de acceso dado por la Autoridad Depositaría Internacional LMBP3879 RECOLECCIONES COODINADAS DE MICROORGANISMOS DE BELGICA-RECOLECCION DE BCCM™/LMBP Página 2 de la forma BCCM LMBP/BP/4/98-16 Recibo en caso de un depósito original Descripción científica y/o designación taxonómica propuestas El microorganismo identificado bajo el número I anterior estaba acompañado de: (marcar una cruz en el recuadro(s)) correcto: \? una descripción científica D una designación taxonómica propuesta Recibo y aceptación Esta Autoridad Depositaría Internacional acepta los microorganismos identificados con el número I que se mencionó anteriormente, que se recibió (fecha del depósito original): el 20 de agosto de 1998 IV. Autoridad Depositaría Internacional Recolecciones Coordinadas de Microorganismos de Bélgica (BCCM «T"M"X) Laboratorium voor Moleculaire Biologie-Plasmidecollectie (LMBP) Universiteit Gent K.L. Ledeganckstraat 35 E3-9000 Gent, Bélgica Firma(s) de la persona(s) que tiene la autoridad para representar a la Autoridad Depositarla Internacional o el funcionario(s) autorizado: FIRMA 5 Fecha: 26 de agosto de 1998 Funcionario autorizado Martine Vanhoucke BCCM™/LMBP RECOLECCIONES COODINADAS DE MICROORGANISMOS DE BELGICA-RECOLECCION TM, DE BCCM" LMBP .TM Página 1 de la forma BCCM /LMBP/BP/9/98-16 Declaración de viabilidad Tratado de Budapest sobre el Reconocimiento Internacional del Depósito de Microorganismos para Propósitos de Procedimiento para Patente Declaración de viabilidad emitida de conformidad con la regla 10.2 por la Autoridad Depositaría Internacional BCCM™/LMBP identificada en la siguiente página Forma Internacional BCCM"7LMBP/BP/9/98J6 Para: Parte a la cual se emite la declaración de viabilidad: Nombre: Chris Roelant Dirección: TIBOTEC N.V. Institute for Antiviral Research Generaal De Wittelaan L11 B3 B-2800 Mechelen Bélgica jjS fc Depositario: 1.1 Nombre: TIBOTEC N.V. 1.2 Dirección: Institute for Antiviral Research Generaal De Wittelaan L11 B3 B-2800 Mechelen Bélgica Identificación del microorganismo: 11.1 Número de acceso dado por la Autoridad Depositaria Internacional: LMBP3879 11.2 Fecha del depósito original (o en donde se ha hecho un nuevo depósito o una transferencia, la fecha relevante más reciente): 20 de agosto de 1998 Declaración de viabilidad La viabilidad de los microorganismos identificados con el número II anterior se probaron el: 25 de agosto de 1998. (Fecha dada. En los casos mencionados en la regla 10.2 (a)(ii) y (iii), en relación con la prueba de viabilidad más reciente). En esa fecha, los citados microorganismos fueron: (marcar el recuadro correcto con L na cruz) • viable o no viable RECOLECCIONES COODINADAS DE MICROORGANISMOS DE BELGICA-RECOLECCION .TM Página 2 de la forma BCCM ' "7LMBP/BP/9/98-16 Declaración de viabilidad IV. Condiciones bajo las cuales se realizó la prueba de viabilidad: (Llenar el recuadro si se ha requerido la información y si los resultados de la prueba fueron negativos).

V. Autoridad Depositaría Internacional Recolecciones Coordinadas de Microorganismos de Bélgica (BCCM™) Laboratorium voor Moleculaire Biologie-Plasmidencollectie (LMBP) Universiteit Gent K.L. Ledeganckstraat 35 B-9000 Gent, Bélgica Firma(s) de la persona(s) que tiene la autoridad de representar a la Autoridad [Depositaría Internacional o del funcionario(s) autorizado: FIRMA Fecha: 26 de agosto de 1998 Funcionario autorizado Martine Vanhoucke BCCM™/LMBP *

Claims

NOVEAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un método para el examen rápido de analitos, caracterizado por las; etapas de: a) colocar una pluralidad de analitos que se van a examinar, dentro de receptáculos individualmente identificables, para almacenamiento; b) aplicar simultáneamente dicha pluralidad de analitos a uno o más soportes sólidos de modo que dichos analitos se apliquen directamente desde dichos receptáculos a cada uno de los soportes sólidos y permanezcan aislados entre sí; c) contactar dicho soporte o soportes sólidos que llevan analitos con objetivos provistos en un medio semisólido o líquido, con lo que dichos analitos son liberados del soporte o soportes sólidos a los objetivos; y d) medir las interacciones de analito-objetivo.

2.- El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque los receptáculos identificables individualmente son seleccionados de tubos, incluyendo tubos capilares, lapiceras, incluyendo marcadores, y cabezas impresoras.

3.- El método de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque los receptáculos identificables individualmente son un grupo de tubos capilares, cada uno de los cuales es identificable de acuerdo a su posición dentro del grupo, y en el que la transferencia de los analitos al soporte o soportes sólidos se produce por administración de las mismas a través de los extremos abiertos de los tubos capilares.

4.- El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-3, caracterizado además porque el soporte sólido es de una forma sustancialmente plana, en disco, rectangular o cuadrada.

5.- El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque el soporte sólido comprende un material que sirve piara la liberación espontánea del analito o analitos cuando están aplicados al mismo.

6.- El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque el soporte sólido comprende un material que sirve para la liberación controlada del analito o analitos cuando están aplicados al mismo.

7.- El método de conformidad con la reivindicación 5 ó 6, caracterizado además porque dicho material es dicho medio semisólido.

8.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones procedentes, caracterizado además porque cuando cada analito es aplicado al soporte sólido difusiona en el mismo de modo de producir un gradiente de concentración.

9.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque la superficie del soporte sólido sobre el cual los analitos son aplicados es seleccionado de polímeros, cerámicas, metales, celulosa y vidrio. ».ta? ,.^'¿

10.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque dicho medio semisólido está dispuesto sobre un portador.

11.- El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque el soporte sólido tiene la forma de una película o cinta flexible sobre la cual se aplica el medio semisólido que contiene el objetivo, con lo que el método puede ser automatizado utilizando una disposición de rodillos para hacer progresar la película o cinta flexible a través de las diversas etapas del método.

12.- El método de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizado además porque el portador está cubierto por una capa adicional de película o cinta y está de modo intercalado entre el soporte sólido y la capa de cobertura.

13.- El método de conformidad con la reivindicación 11 ó 12, caracterizado además porque el soporte sólido o la capa de cobertura (si la hay) está provista de una pista para el registro de información referente a los analitos; aplicados, con lo que la información puede ser leída y procesada simultáneamente con la medición de interacciones de analito-objetivo en un procedimiento automatizado.

14.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque el soporte sólido es en sí mismo un detector o forma parte de un detector.

15.- El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque el soporte sólido es seleccionado de una oblea de SiO2, un dispositivo acoplado con cargas, y una película cinematográfica.

16.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque la superficie del soporte sólido está revestida con una membrana, una monocapa molecular, una monocapa celular o una película de Langmuir-Blodgett.

17.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque el soporte sólido es en sí mismo un portador de información que lleva información en forma electrónica, magnética o digitalizada.

18.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque dicha superficie del soporte sólido es reflectora.

19.- El método de conformidad con la reivindicación 18, cuando depende de la reivindicación 16, caracterizado además porque dicha superficie es la superficie reflectora de un disco compacto.

20.- El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además por comprender además la etapa de copiar dicho disco compacto o un disco compacto grabable.

21.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque el medio semisólido comprende una sustancia que proporciona un entorno semisólido o líquido viscoso que permite la liberación controlada de dichos analitos a dicho objetivo.

22.- El método de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado además porque dicha sustancia es seleccionada de gelatina, polisacáridos tales como agar y agarosa, y polímeros tales como metilcelulosa y poliacrilamida o un denominado material inteligente.

23.- El método de conformidad con la cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque las etapas b) y c) son efectuadas simultáneamente.

24.- El método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque dicho analito es aplicado a un único soporte sólido.

25.- El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado además porque el soporte semisólido es de una forma en varilla o una forma esférica.

26.- El método de conformidad con la reivindicación 24 ó 25, caracterizado además porque cada soporte sólido que lleva analito es contactado en la etapa b) con un objetivo en un compartimiento separado de un aparato con múltiples compartimientos.

27.- El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado además porque dichos compartimientos son una disposición de minicavidades en dicho aparato.

28.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque los analitos son seleccionados de compuestos químicos, antígenos, anticuerpos, sondas de ADN, células y glóbulos y liposomas que llevan un analito de interés.

29.- El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado además porque los analitos, cuando son aplicados al soporte sólido, están disueltos en un solvente orgánico o inorgánico.

30.- El método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado además porque el solvente incluye un denominado material inteligente que tiene respuesta a un parámetro químico o físico, de modo que cada analito a continuación de la aplicación al soporte sólido y secado licúa en respuesta a dicho parámetro químico o físico.

31.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 28-30, caracterizado además porque el analito es un compuesto químico.

32.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque dichos objetivos son seleccionados de células procarióticas, células eucarióticas, virus, moléculas, receptores, glóbulos y combinaciones de los mismos.

33.- El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado además porque los objetivos son células provistas de funciones informadoras.

34.- El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado además porque dichas interacciones de analito-objetivo son medibles por los efectos de los analitos sobre las funciones informadoras de las células.

35.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque dichas interacciones de analito-objetivo son medidas utilizando uno o más de los siguientes métodos: medición microscópica, colorimétrica, fluorométrica, luminométrica, densitométrica, isotópica y física.

36.- El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones 11-35, caracterizado además por: a) un primer portador de información, en forma de una película o cinta, que tiene analitos a ser examinados aplicados a una superficie del mismo como puntos o líneas separadas, es puesto en contacto con un segundo portador de información, cuyo portador está también en forma de una película o cinta, que tiene objetivos de interés incluidos en una matriz semísólida sobre una superficie del mismo; b) los respectivos portadores son enrollados con sus respectivas superficies de soporte de analito y objetivo en contacto; c) los portadores enrollados son incubados bajo condiciones a las que los analitos son liberados del primer portador a la superficie de soporte del objetivo; d) el primer portador y el segundo portador son desarrollados; y e) el segundo portador de información se hace pasar a una unidad de análisis de lectura de información. t «wftilfc

37.- Un método para el examen rápido de analitos caracterizado además por: a) poner un primer portador de información, en forma de una película o cinta, y tiene analitos a ser examinados aplicados a una superficie de la misma como puntos o líneas separadas en contacto con un segundo portador de información, cuyo portador está también en forma de una película o cinta, que tiene objetivos de interés incluidos en una matriz semisólida sobre una superficie del mismo; b) enrollar los respectivos portadores con sus respectivas superficies de soporte de analito y objetivo en contacto; c) incubar los portadores enrollados bajo condiciones a las que los analitos son liberados del primer portador a la superficie de soporte de objetivo; d) desenrollar el primer portador y el segundo portador; y e) hacer pasar el segundo portador de información a una unidad de análisis y lectura de información.

38.- Un aparato caracterizado por: a) un grupo de tubos capilares de los cuales los analitos en tubos pueden ser simultáneamente liberados a una superficie de un soporte sólido, siendo dicho soporte desplazable en relación al grupo; y b) un alojamiento adaptado para recibir el grupo, estando el alojamiento conectado a una bomba de aire capaz de expeler los analitos de sus respectivos tubos capilares sobre el soporte sólido por medio de un cambio de presión.

39.- El aparato de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado además porque dichos analitos están en forma líquida.

40.- Un método de conformidad con la reivindicación 1 , sustancialmente como se ha descrito con relación a y como se ilustra u en los dibujos, anexos.

41.- El método de conformidad con la reivindicación 1 , sustancialmente como se ha descrito con relación a los dibujos anexos.

42.- El método de conformidad con la reivindicación 37, sustancialmente como se ha descrito y ejemplificado.

43.- Un aparato de conformidad con la reivindicación 38, sustancialmente como se ha descrito con particular referencia a y como se ¡lustró en la figura 20 de los dibujos anexos,