MXPA00010110A - Factores angiogenicos terapeuticos y metodos para su uso. - Google Patents

Abstract

Se proporciona metodos para estimular la angiogenesis en un humano o animal en necesidad de esta. Tambien se proporcionan composiciones que comprenden un factor angiogenico en un portador farmaceuticamente aceptable. En otro aspecto, el metodo comprende administrar al humano o animal una cantidad terapeuticamente efectiva de un factor angiogenico, tal como una proteina pleiotrofina o midkina, en un portador farmaceuticamente aceptable. El portador en un aspecto comprende una matriz de liberacion controlada, tal como un polimero que permite controlar la liberacion del factor angionenico. El polimero puede ser biodegradable, y/o bioerosionable y preferiblemente biocompatible. Los polimeros los cuales pueden ser usados para controlar la liberacion incluyen, por ejemplo, poli(esteres), poli(anhidridos), y poli(aminoacidos). Los polimeros ejemplares incluyen copolimeros de bloque poli(aminoacido) elastina de seda y poli- lactido-co-glicolido. El portador, tal como un liposoma, puede ser provisto con un ligando indicador capaz de dirigir el portador a un sitio preseleccionado en el cuerpo. El factor angiogenico puede ser administrado al sistema vascular, por ejemplo al sistema cardiovascular, o al sistema vascular periferico. En un aspecto preferido, el factor angiogenico es una proteina pleiotrofina, o una proteina midkina. En otro aspecto, un metodo es proporcionado para estimular la angiogenesis en un humano o animal que comprende la administracion de una cantidad terapeuticamente efectiva de un vector, de transferencia del gen que codifica la produccion de la proteina pleiotrofina o midkina en un portador farmaceuticamente aceptable. El vector de transferencia del gen puede ser, por ejemplo, DNA puro o un vector virico, y puede ser administrado, por ejemplo, en combinacion con liposomas.

Description

FACTORES ANGIOGENICOS TERAPÉUTICOS Y MÉTODOS PARA SU USO CAMPO TÉCNICO. Esta invención describe generalmente el uso de factores angiogenicos terapéuticos tales como la pleiotrofina, para promover la angiogenesis en el tratamiento de una variedad de indicaciones que incluyen enfermedades cardiovasculares.

ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA Los factores de crecimiento del polipéptido han sido mostrados por jugar roles fisiológicos importantes en el desarrollo oportuno de los tejidos durante el crecimiento neonatal y embrionario y, por lo tanto, su expresión es rigurosamente regulada. Reciprocamente, la expresión del gen del factor de crecimiento del polipéptido es desregulada en las lineas de células tumorosas, asi como, en tumores sólidos. Cross y Dexter, Cell, 64:271 (1991). La pleiotrofina (PTN) es un factor de crecimiento secretado que pertenece a una familia de factores de crecimiento de ligamiento heparina. Lai et al . , Biochem, Biophys, Res . Commun . , 187:1113-1121 (1992). La Ref. 124137 pleiotrofina originalmente se purifica como un mitogeno débil de un útero de bovino y como un promotor de excrecencia de la neurita del cerebro de rata neonatal. Milner et al., Biochem. , Biophys. Res. Commun, 165 : 1096-1103 (1989); Rauvala, EMBO J. , ^:2933-2941 (1989); y Li et al., Science, 250:1690-1694 (1990). La purificación de un factor de crecimiento de ligamiento heparina kDa 18 de la media condicionada de una linea de células de cáncer de pecho humanas ha sido reportada. ellstein et al., J. Biol. Chem, 267 : 2582-2587 (1992) . Los cDNAs para humanos, bovinos y PTNs de ratas han sido clonadas y sequenciadas . Fang et al., J. Biol. Chem, 267:25889-25897 (1992): Li et al. (1990) supra/ Lai et al (1992), supra, Kadomatsu et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 151: 1312-1381 (1988); Tomomura . et al J. Biol. Chem., 265: 10765-10770 (1990); Vrios et al., Biochem, Biophys. Res. Commun., 175: 617-624 (1991); y Li et al., J. Bio. Chem., 267:26011-26016 (1992).

La PTN pertenece a una familia de proteínas de ligamiento heparina que incluye las proteínas de factor de crecimiento midquina (MK) . La proteina Midquina tiene aproximadamente el 50% de homología del aminoácido a la PTN. Kadomatsu et al., J. Cell. Biol., 110: 607-616 (1990); y Kretschmer et al., Growth Factors 5:99-114 (1991). La PTN y las proteínas MK aparecen para desempeñar un papel durante el desarrollo de la neuroectoderma. La expresión fisiológica de Iss genes en el adulto ocurre solo en áreas restringidas del sistema nervioso. Bohlen and Kovesdi, Prog. Growth Factor Res. 3:143-157 (1991). La PTN actúa como un factor de crecimiento en los tumores. Los nucleótidos antisentidos a la PTN han sido desarrollados para inhibir la formación del tumor como se describe en PCT WO 96/02257, desclaración la cual es incorporada aqui. La expresión de PTN es elevada en melanomas que son altamente vascularizadas, y la PTN soporta el crecimiento de las células SW13 en agar suave. Wellstein et al., J. Bio. Chem., 267:2582-2587 (1992). La PTN purificada de diferentes fuentes ha sido descrita por tener una actividad mitogénica para las células epitelial y endotelial y para los fibroblastos. Ver por ejemplo, Fang et al., J. Biol. Chem., 267: 25889-25897 (1992); Kuo et al., J. Bio. Chem., 265: 18749-18752 (1990); Rauvala, EMBO J., 8:2933-2941 (1989); Merenmies and Rauvala, J. Biol. Chem., 265:16721-16724(1990); Li et al., Science, 250:1690-1694(1990); y Minler et al., Biochem. Biophys. Res.

Commun., 165:1096-1103 (1989) . La PTN ha mostrado una actividad mitogénica para las células capilares del cerebro bovino y una actividad angiogénica en el ensayo de la 'córnea del conejo (Courty et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 180:145-151 (1991) . La PTN también ha mostrado que induce la formación de tubo de células endotelial in vitro. Laaroubi et al., Growth Factors, 10_: 89-98 (1994). La PTNmRNA se ha detectado en muestras de cáncer de pecho humano y en lineas de células de cáncer de pecho humano. Fang et al., J. Bio. Chem., 267: 25889-25897(1992). La PTN también fue detectada en tumores mamarios de rata de carcinógeno inducido. Kayoma et al., J. Nati. Cáncer Inst. 48:1671-1680(1972) . Otros cánceres humanos primarios y lineas de células se encontraron para manifestar la PTN, incluyen la melanoma, carcinomas de células escamosas de la cabeza y cuello, neuroblastomas y glioblastomas. La PTN aparece por ser muy rigurosamente regulada en el estado no canceroso, expresada solo en regiones del cerebro y el tracto reproductivo, basado en modelos de roedores. Bloch et al., Brain Res. Dev. Brain. Res., 70:267-278 (1992); y Vander inden et al., Anat. Embryol. , (Berl) 186: 387-406 (1992) .

La PTN se encontró por ser mucho más ampliamente expresada durante el desarrollo embrionico, en contraste con el adulto. Se ha detectado en el cerebro, mesenquima del pulmón, intestino, el riñon y el tracto reproductivo, y en los progenitores del hueso y del cartílago. (Bloch et al., Brain Res. Dev. Brain Res., 70:267-278 (1992); y Vander inden et al., Anat. Embryol. , (Berl) 186: 387-406 (1992) ) . Esto sugiere un papel fisiológico importante para la PTN durante el desarrollo cerebral y la organogénesis. La PTN ha sido descrita como la pleiotrofina . Ver, por ejemplo, la PCT WO 96/02257, descripción la cual es incorporada aqui. Se ha descrito por diferentes nombres dependiendo de la fuente del tejido: proteina regulatoria de afinidad heparina, HARP (Courty et al., J. Cell. Biochem., 15F: Abstr 221-Abstr 220 (Abstract) (1991); y Biochem. Biophys. Res. Commun, 180: 145-151 (1991)), el factor neurotrófico de ligamiento heparina, HBNF (Kovesdi et al., Biochem. Biophys, Commun., 172:850-854 (1990) y Huber et al., Neurochem. Res. JL5: 35-439 (1990) y pld (Kuo et al., J. Biol. Chem., 265: 18749-18752 (1990) del cerebro de bovino; la molécula asociada al crecimiento del ligamiento heparina HB-GAM (Rauvala, EMBO J. 8:2933-2941 (1989); y Merenmies y Rauvala, J. , Biol, Chem., 265:16721-16724 (1990)) del cerebro de rata, factor de crecimiento del ligamiento heparina 8, HBGF-8 (Milner et al., Biochem. Biophys. Res. Commun, 165:1096-1103' (1989)), factor especifico osteoblasto, OSF-1 (Tezuka et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 173:246-251 (1990) y pleiotrofina, PTN (Li et al., Science 250:1690-1694 (1990) de la placenta humana y el cerebro de rata. La estructura de la proteina de la PNT ha sido reportada conteniendo cinco puentes disulfuro que determinan su estructura tridimensional. La presencia de los puentes disulfuro resulta en ciertas características de la proteina, tal como su resistencia a un pH bajo y la sensibilidad a las condiciones reducidas. Wellstein et al., J. Biol. Cdhem., 267:2582-2587 (1992); y Fang et al., Biol. Chem., 267:25889-25897 (1992). Existe la necesidad para el desarrollo de métodos para administrar los factores de crecimiento angiogenicos, tales como la pleiotrofina, en cantidades terapéuticamente efectivas en pacientes que necesiten la terapia angiogenica. Existe una necesidad particular para el desarrollo de métodos terapéuticos para el uso de factores de crecimiento angiogénicos en el tratamiento de condiciones isquémicas. También existe una necesidad para el desarrollo de métodos para el tratamiento de enfermedades vasculares tal como las enfermedades cardiovasculares. Existe además, una necesidad para sistemas de suministro para entregar los factores de crecimiento angiogénicos, lo que permitirá un suministro controlado y una liberación de los factores de crecimiento.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los métodos son proporcionados para la estimulación de la angiogenesis en un ser humano o un animal en necesidad de lo mismo. También se proporciona composiciones que comprenden un factor angiogenico en un portador farmacéuticamente aceptable. En un aspecto, el método comprende la administración a un ser humano o animal en necesidad del mismo, de una cantidad efectiva de un factor angiogenico tal como la molécula de pleiotrofina o midquina, opcionalmente en un portador farmacéuticamente aceptable. El factor angiogenico puede ser, por ejemplo, una proteina pleiotrofina o midquina o midcina.

El portador en un aspecto comprende una matriz de liberación controlada, tal como un polímero, que permite la liberación controlada del factor angionenico. El polímero puede ser biodegradable o bioerosionable y biocompatible. Los polímeros que pueden ser usados para la liberación controlada, incluyen por ejemplo, poli (esteres) , poli (anhídridos) , y poli (aminoácidos) . Los poli (aminoácidos) ejemplares incluyen copolimeros de bloque poli (aminoácido) de elastina de seda. En un aspecto adicional, un factor angiogenico puede ser proporcionado en un portador que comprende un liposoma, tal como un liposoma heterovesicular. El portador, tal como un liposoma, puede proporcionar con un ligando indicador capaz de dirigir el liposoma a un sitio preseleccionado en el cuerpo. En un aspecto, el factor angiogenico es administrado al sistema vascular, por ejemplo, el sistema cardiovascular o el sistema vascular periférico. El factor angiogenico puede ser administrado en una cantidad terapéuticamente efectiva para el tratamiento de, por ejemplo, enfermedad de la arteria coronaria, enfermedad del corazón isquémico, vasculopatia periférica diabética o enfermedad aterosclerótica periférica. En otro aspecto, el factor angiogenico es administrado localmente en una cantidad terapéuticamente efectiva a una lesión para promover la curación de la misma. Las lesiones que pueden ser tratadas incluyen las úlceras, sensibilidad a la presión, heridas inducidas quirúrgicamente, y heridas inducidas traumáticamente . En un aspecto adicional, el factor angiogenico es administrado localmente en una cantidad terapéuticamente efectiva al tejido que comprende nervios para tratar una condición neurológica, tal como un trastorno cerebro vascular, demencia multi infarto, e isquemia del cerebro general. El factor angiogenico además puede ser administrado localmente en una cantidad terapéuticamente efectiva al tejido que comprende el hueso y el cartílago, por ejemplo, para el tratamiento de condiciones tales como la osteoporosis, la artritis, y la reparación o reemplazo de una articulación. El factor angiogenico además puede ser administrado localmente en un huésped en una cantidad terapéuticamente efectiva a un sitio de transplante de órgano para promover el injerto del transplante en el huésped.

En un aspecto preferido, el factor angiogenico es una proteina pleiotrifina, o una proteina midquina, por ejemplo, aislada de una fuente de células humanas o un fragmento activo o análogo de lo mismo, que puede ser, por ejemplo, producido, recombinantemente en una célula huésped eucariótica. En un aspecto, se proporciona un método de estimulación de angiogénesis en un ser humano o animal en necesidad de lo mismo, el método comprende la administración al ser humano o animal de una cantidad terapéuticamente efectiva de un factor angiogenico en un portador farmacéuticamente aceptable que comprende un compolimero de bloque poli (aminoácido) elastina de seda y/o un poli-láctido-co-glicólido. Los factores angiogenicos los cuales pueden ser usados incluyen la pleiotrofina, la midquina, miembros de la familia del factor de crecimiento fibroblasto (FGF) , miembros de la familia del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) , miembros de la familia del factor de crecimiento derivado de plaqueta (PDGF) y miembros de la familia del factor de crecimiento epitelial (EGF) , asi como fragmentos activos y análogos de lo mismo.

En un aspecto adicional, un método es proporcionado para estimular la angiogenesis en un ser humano o animal en necesidad del mismo, el método comprende la administración al ser humano o animal de una cantidad terapéuticamente efectiva de un vector de transferencia del gen que codifica la producción de una proteina o midquina opcionalmente en un portador farmacéuticamenhte aceptable. El vector de transferencia del gen puede ser, por ejemplo, el DNA puro o un vector virico y puede ser administrado, por ejemplo, en combinación con liposomas.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una gráfica que muestra el incremento del porcentaje en la proliferación de células endotelial sobre el tiempo después de ser tratados con pleiotrofina. La figura 2 es una gráfica que muestra un área de la sección transversal del recipiente agregado sobre el tiempo después del tratamiento de una herida de ratón con un implante que comprende pleiotrofina.

MODOS PARA LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN Las composiciones proporcionadas incluyen los factores angiogenicos, asi como los métodos para su manufactura y uso. Los factores angiogenicos pueden ser administrados al tejido para revascularizar el tejido, por ejemplo, en el caso de un tejido vascular enfermo o dañado. En un aspecto, el factor angiogenico es proporcionado en una matriz de suministro para una liberación controlada del factor localmente en el sitio dañado o enfermo. Los métodos y composiciones promueven la angiogenesis, la formación de nuevos vasos sanguíneos, y de esta manera pueden ser usados en una variedad de aplicaciones terapéuticas. Los factores angiogenicos preferiblemente estimulan el crecimiento de células endotelial, células epitelial y fibroblastos en el sitio de la administración. La administración terapéutica de tales factores angiogenicos a varios tejidos vascularizados pobremente puede aumentar el suministro de sangre al estimular la formación de nuevos vasos sanguíneos. Los métodos y composiciones también son proporcionados para el suministro de estructuras del ácido nucleico las cuales dirigen la expresión de los factores angiogenicos .

FACTORES ANGIOGENICOS Como se usa aqui la frase "factor angiogénico" se refiere a una molécula que es capaz de estimular la angiogénesis. Los factores angiogénicos incluyen factores de crecimiento del polipéptido de origen natural, o fragmentos biológicamente activos o derivados o análogos de los mismos. La angiogénesis es definida como el desarrollo de nuevos vasos sanguíneos. La angiogenesis in vivo generalmente involucra la estimulación y crecimiento de células endotelial. Además, la estimulación de fibroblastos y células epitelial ayuda en la formación de la población celular total, que comprende el tejido vascular normal, que incluye la capa de tejido conectivo exterior de los vasos. Folkman, 1992, EXS 61: 4-13 y Bicknell et al., 1996, Curr. Opin . Oncol . 8(1): 60-65. En un aspecto, el factor angiogénico es una molécula de pleiotrofina. Las moléculas de pleiotrofina incluyen ,las proteínas de pleiotrofina. Las moléculas de pleiotrofina pueden ser, por ejemplo, las proteínas pleiotrofina de origen natural, asi como fragmentos biológicamente activos de lo mismo, y formas modificadas y sintéticas de lo mismo que incluyen derivados, análogos y miméticos tales como moléculas miméticas pequeñas. Las proteínas pleiotrofina de origen natural incluyen proteínas de la familia pleiotrofina, particularmente la pleiotrofina humana. Las proteínas pleiotrofina ventajosamente pueden estimular la proliferación de células endotelial, células epitelial y fibroblastos. Las proteínas pleiotrofina entonces pueden estimular ventajosamente tanto la neoangiogenesis y la fibroplasia, las cuales son importantes para una restauración del tejido y la curación de la herida natural. La neoangiogenesis es especialmente crítica para el salvamento de tejidos isquémicos. Las proteínas pleiotrofina en un aspecto pueden ser aisladas de fuentes naturales o por producción recombinanate. En un aspecto, la pleiotrofina es el péptido maduro que tiene la secuencia, codificada por las bases 447-980 de SEQ ID NO 1, como se describe en PCT WO 96/02257, declaración la cual es incorporada aquí . Otros factores angiogenicos los cuales son útiles incluyen los factores de crecimiento, tales como las midquinas, los miembros de la familia del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) que incluyen VEGF-2, VEGF-C y VEGF-D (Píate et al., J. Neurooncol. 35: 365-372 (1997); Joukov et al., J. Cell Physiol. 173: 211-215 (1997); miembros de la familia del factor de crecimiento fibroblasto (FGF), que incluyen el FGF-1 al FGF-18, particularmente del FGF-1, FGF-2 y FGF-5, el factor de crecimiento derivado de la hepatoma (HOGF) factor de crecimiento hepatocito/factor de dispersión (HGF, Boroset et al., Lancet, 345: 293-295 (1995); miembros de la familia del factor de crecimiento epidermal (EGF) , que incluyen el factor de crecimiento de transformación alfa (TGF-a) , EGF, y TGF-a-HIII (Brown, Eur J. Gastroenterol. Hepatol., 7:914-922 (1995) y la Aplicación de la Patente internacional No. WO 97/25349) ; y los factores de crecimientos derivados de la plaqueta (PDGFs) , que incluyen las isoformas AA, AB y BB (Hart et al., Genet. Eng 17:181-208 (1995). Otros factores angiogenicos incluyen las angiopoietinas, tales como Angl, y los factores de estimulación integrina, por ejemplo, Del-1. Angl es descrito en Suri et al., Cell, 87:1171-80 (1996); y Del-1 en Hidai et al., Genes Dev., 12:21-33 (1998), en donde las declaraciones de cada uno son incorporadas aquí por referencia .

En un aspecto, el factor angiogenico es una molécula midquina. Las moléculas midquina incluyen a las proteínas midquina. Las moléculas midquina pueden ser, por ejemplo, las proteínas midquina de origen natural, así como fragmentos biológicamente activos de lo mismo, y formas sintéticas y modificadas de lo mismo que incluyen derivados, análogos y miméticos. Los términos "proteína", "polipéptido" y "péptido" son usados intercambiablemente aquí para referirse a polímeros de aminoácidos de cualquier longitud. El polímero puede ser lineal o ramificado, puede comprender aminoácidos modificados, y puede ser interrumpido por no aminoácidos. Esto puede ser modificado naturalmente o por intervención; por ejemplo, la formación de un enlace disulfuro, la glicosilación, miristilación, acetilación, alquilación, fosforilación o desfosforilación. También incluido dentro de la definición son los polipéptidos que contiene uno o mas análogos de un aminoácido (que incluyen por ejemplo, aminoácidos no naturales) así como otras modificaciones conocidas en la técnica. Los factores de crecimiento fibroblastos (FGFs) están generalmente 10-20 kDa en masa molecular, aunque las formas de masas más altas han sido aisladas de fuentes naturales. Wilkie et al., Curr. Biol., 5:500-507 (1995). Al menos 18 miembros de la familia FGF son conocidos (FGF-1 a FGF-18), aunque el homólogo humano no ha sido clonado para todos los miembros de la familia FGF. La glicosilación no es requerida para la bioactividad, de manera que las proteínas de esta familia pueden ser producidas recombinantemente en sistemas de expresión tanto eucariotico y procariotico. Es preferible que la fuente del factor de crecimiento usada iguale al del paciente al cual el factor de crecimiento es administrado (por ejemplo, la pleiotrofina humana es administrada a un sujeto humano) . Sera entendible por aquélla persona con experiencia en el ámbito que el termino "fuente" como es usado en este contexto se refiere a la fuente de tejido de la proteína si es aislada de fuentes naturales, o la fuente de la secuencia del aminoácido, si la proteína es producida recombinantemente. La mayoría de los factores angiogenicos se conocen por ser producidos en un número de "variantes de empalme". Las variantes de empalme son producidas por empalmes diferenciales de uno o más exons del gen. No todos los exons del gen pueden ser retenidos en el mRNa empalmado que es trasladado. Las variaciones en el empalme del mRNA pueden ser específicas a los estados de desarrollo, de los tejidos particulares, o para condiciones patogénicas y que pueden llevar a la producción de un gran número de proteínas diferentes del mismo gen. Los factores angiogenicos útiles en la presente invención incluyen variantes del empalme.

INDICACIONES Una variedad de indicaciones pueden ser tratadas usando los métodos y composiciones descritas aquí. Los ejemplos incluyen enfermedades vasculares tales como enfermedad vascular periférica (PVD), incluyendo la PVD traumática y pos quirúrgica, y enfermedades cardiovasculares tales como la enfermedad de la arteria coronaria (CAD) . Otras enfermedades vasculares que pueden ser tratadas incluyen la microangiopatía periférica diabética y otras vasculopatías, y la claudicación debida a la enfermedad aterosclerotica. Los estados de la enfermedad del corazón isquémico pueden ser tratados incluyendo estados inoperables, tales como cuando existen comorbiditios significantes. Ejemplos de comorbiditios incluyen la enfermedad pulmonaria, por ejemplo, la enfermedad pulmonaria obstructiva crónica, la condición cardiaca frágil y las arritmias. Otros estados "inoperables" los cuales pueden ser tratados incluyen pacientes con intolerancia a la anestesia, alergias, o aquéllos que están bajo una terapia de drogas combinadas. El nuevo ataque de angina estable o no estable puede ser tratado. El tratamiento puede ser proporcionado como adjunto a los procedimientos cardiovasculares intervencionales, tales como el injerto de desvío de la arteria coronaria y la angioplastia coronaria transluminal percutanea (angioplastia de balón) . El tratamiento también puede ser conducido después de una intervención fallida. Los métodos y composiciones declaradas que pueden ser usados en una variedad de aplicaciones para la curación de las heridas y el tratamiento de quemaduras. Las aplicaciones para la curación de heridas incluyen úlceras cutáneas crónicas, sensibilidad a la presión o a la cama, quemaduras, y las heridas no curadas. Las heridas causadas por un trauma, tal como un accidente o por cirugía pueden ser tratadas.

La curación dañada o las heridas no curadas pueden ser tratadas, incluyendo heridas no granuladas. Por ejemplo, heridas asociadas con la diabetes pueden ser tratadas como úlceras diabéticas. Las heridas que ocurren en pacientes inmunosuprimidos o inmunocomprimidos pueden ser tratadas, por ejemplo, en pacientes que son sometidos a quimioterapias para el cáncer, pacientes con el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) , pacientes con transplantes, y cualquier paciente que sufre de la curación de heridas dañadas inducidas por medicación. Otras aplicaciones incluyen las regiones vascularizantes de tejidos que han sido cortadas del suministro secundario de sangre para la cirugía resectiva, o trauma, incluyen la cirugía general, cirugía plástica, y la cirug.ía de transplante, o el tratamiento de tejido isquémico, gangrenoso o el rescate de un miembro. Los métodos y composiciones declaradas aquí pueden ser usadas tanto como una primera linea de terapia, y adicionalmente siendo útiles cuando otras terapias disponibles han sido agotadas. Ventajosamente, los pacientes pueden ser tratados, después de ser declarados de "inoperables" por sus doctores, debido al riego quirúrgico ocasionado por su pobre estado de salud general. A la naturaleza difusa de su enfermedad en donde tiene muy pocas lesiones serias rociadas por todo el suministro de sangre coronario, mas bien que una o mas lesiones principales por desvío o abertura u otros que han sido sometidos a intentos previos fallidos al corregir su enfermedad con procedimientos invasivos. Los métodos y composiciones descritas aquí pueden ser usados en una variedad de aplicaciones neurológicas y neuroquirúrgicas, por ejemplo, para enfermedades cerebrovasculares, tales como la insuficiencia vascular crónica en el cerebro, demencia multi-infarto (MID) , trastorno cerebro vascular, e isquemia del cerebro general.

Otras aplicaciones incluyen la fortificación y el reparo del tejido, y el reparo del hueso, incluyendo el tratamiento de la osteoporosis, reparo del cartílago, tratamiento de la artritis y el reemplazo o reparo de la articulación, así como el tratamiento del folículo del cabello y el tratamiento de la caída del cabello. Generalmente las composiciones descritas aquí pueden ser diseñadas para la aplicación a un rango de tejido interno y externo dañado, incluyendo la piel, el sistema reproductivo, el sistemagenitourinario, el sistema pulmonar, para promover la revascularización y el reparo endotelial. En un aspecto, las compoosiciones pueden ser usadas en el tratamiento de la piel y la cirugía cosmética.

Portadores. El factor angiogenico, tal como una molécula pleiotrofina, puede ser proporcionado en un portador farmacéuticamente aceptable. Él portador puede ser una matriz de suministro biocompatible que permita la liberación controlada del factor angiogénico in si tu . Las matrices preferidas son aquéllas donde el factor angiogenico puede ser incorporado en una forma estable mientras se mantiene substancialmente su actividad y las matrices las cuales son biocompatibles . Dependiendo en la selección de la matriz de entrega, y la indicación siendo tratada la liberación controlada puede ser diseñada para que ocurra en el orden de horas, días semanas o más. El uso de una matriz de suministro controlado para factores angiogenicos, y en particular para las proteínas pleiotrofina o midquina, tiene muchas ventajas. La liberación controlada permite dosis a ser administradas sobre un tiempo, con cinéticas de liberación controlada. En algunas instancias el suministro del factor angiogenico necesita ser continuo al sito donde la angiogenesis es necesitada, por ejemplo sobre varias semanas. La liberación controlada sobre tiempo, por ejemplo sobre varios días o semanas, o más permite un suministro continuo del factor angiogenico para obtener una angiogenesis óptima en el tratamiento terapéutico. La matriz de suministro controlada también es conveniente ya que protege el factor angiogenico de la degradación in vivo en los tejidos y fluidos del cuerpo, por ejemplo, por las proteasas. La liberación controlada de la matriz de suministro puede diseñarse basada en factores tales como la selección del portador, la ocurrencia sobre tiempo, por ejemplo, por mas de cerca de 12 o 24 horas. El tiempo de liberación puede ser seleccionado, por ejemplo, para que ocurra sobre un periodo de tiempo de cerca de 12 a 24 horas; cerca de 12 horas a 42 horas; o por ejemplo de cerca de 12 a 72 horas. En otro aspecto, la liberación puede ocurrir por ejemplo en el orden de cerca de 2 a 90 días,- por ejemplo, cerca de 3 a 60 días. En un aspecto, el factor angiogenico tal como una molécula pleiotrofina, es suministrada localmente sobre un periodo de tiempo de cerca de 7-21 días, o cerca de 3 a 10 días. En el caso de una proteína de pleiotrofina, en un aspecto, la proteína es administrada sobre 1,2,3 o mas semanas en dosis controlada. El tiempo de liebración controlada puede ser seleccionado basado en la condición tratada. Por ejemplo, tiempos largos pueden ser más efectivos para curar una herida, en vista de que tiempos de suministros cortos pueden ser más útiles para algunas aplicaciones cardiovasculares. La liberación controlada del factor angiogenico, tal como la proteína de pleiotrofina de la matriz in vivo puede ocurrir, por ejemplo, en una cantidad de cerca de 1 ng a 1 mg/día, por ejemplo, cerca de 50 ng a 500 µg/día, o, en otro aspecto, cerca de 100 ng/día. Los sistemas de suministro que comprenden el factor angiogenico y el portador que pueden ser formulados que incluyen, por ejemplo, de 10 ng a 1 mg de factor angiogénico, o en otro aspecto, cerca de 1 µg a 500 µg o, por ejemplo, cerca de 10 µg a 100 µg, dependiendo de la aplicación terapéutica.

La matriz de entrega puede ser por ejemplo, un sistema matriz de difusión controlada o un sistema erosionable, como se describe por ejemplo en: Lee, "Diffusion-Controlled Matrix Systems", pp. 155-198 y Ron and Langer, "Erodible Systems", pp. 199-224, en "Treatise on Controlled Drug Delivery", A. Kydonieus Ed., Marcel Dekker, Inc., New York 1992, la declaración es incorporada aquí. La matriz puede ser, por ejemplo, un material biodegradable que puede degradar espontáneamente in si tu e in vivo por ejemplo, por hidrólisis o divición enzimática, por ejemplo, por proteasas. Opcionalmente, un conjugado del factor angiogenico y un portador polimerico pueden ser usados. La matriz de liberación puede ser, por ejemplo, un polímero o un copolímero sintético o de origen natural, por ejemplo en la forma de hidrogel. Los polímeros ejemplares con enlace hendibles incluyen los poliésteres poliortoésteres, polianhídridos, polisacáridos poli (fosfoésteres) , poliamidas, poliuretanos, poli (imidocarbonatos) y poli (fosfazenos) . Los poliésteres incluyen poli ( -hidroxiácidos) tales como poli (ácido láctico) y poli (ácido glicólico) y copolimeros de lo mismo, así como polímeros y copolímeros de poli (caprolactona) . En un aspecto preferido la matriz de liberación controlada es un poli-láctido-co-glicolido. La liberación controlada usando copolímeros de poli (láctido) y poli (glicólido) se describen en Lewis, "Controled reléase of Bioactive Agents from Lactide/Glycolide Polymers" en "Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems", Chasin and Langer, eds., Maree! Dekker, New York, 1990, pp. 1-41, en donde la declaración es incorporada aquí. Los poli-lactido-co-glicolidos pueden ser obtenidos o formados en varias proporciones de polímeros y copolímeros, por ejemplo, 100% de D,L-lactido, 85:15 D, L-lactido: glicólido; 50:50 D, L-lactido: glicolido; y 100% de glicolido, como se describe por ejemplo, en Lambert y Peck, J. Controlled Reléase, 33:189-195 (1995); y Shively et al., J. Controlled Reléase, 33:237-243 81995), la descripciones las cuales son incorporadas aquí. Los polímeros pueden ser procesados por métodos tales como la extrusión en fundido, el moldeado por inyección, vaciado del solvente o evaporación del solvente.

El uso de polianhidridos como una matriz de liberación controlada, y la formación de microesferas por las técnicas de fundido en caliente y remoción del solvente se describen en Chasin et al . , "Polyanhydrides as Drug Delivery Systems", en "Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems", Chasis and langer, Eds., Marcel Dekker, New York, 1990, pp. 42-70, en donde la declaración es incorporada aquí. Una variedad de polifosfazenos que pueden ser usados los cuales son disponibles en el ámbito, como se describe, por ejemplo en: Allcock, H.R., "Polyphosphazenes as New Biomedical and Bioactive Materials," en "Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems", Chasin and Langer, eds., Marcel Dekker, New York, 1990 pp. 163-193, en donde la declaración es incorporada aquí. Las poliamidas, tales como poli (aminoácidos) pueden ser usadas. En un aspecto, el polímero puede ser un copolímero de bloque poli (aminoácido) . Por ejemplo, los polímeros de fibrina elastina y la fibrina colágeno, así como otros polímeros proteinaceos, que incluyen la citina, alginato y gelatina pueden ser usados. En un aspecto, un copolímero de bloque poli (aminoácido) de elastina seda puede ser usado. Las técnicas ingenieriles de la proteína y la genética han sido desarrolladas para permitir el diseño de copolímeros de bloque poli (aminoácidos) de elastina seda con propiedades físicas y químicas controladas. Estos polímeros de la proteína pueden ser diseñados con bloques de secuencias de aminoácidos cristalinos como seda y bloques de secuencias de aminoácidos flexibles como elastina. Las propiedades de estos materiales son debido a la presencia de secuencias de oligopéptidos de repetición corta que pueden ser derivados de las proteínas de origen natural tal como la fibroina y la elastina. Los copolímeros de bloque poli (aminoácido) de elastina de seda recombinantes ejemplares son descritos en la Patente U.S. Nos. 5,496,712, 5,514,581, y 5,641,648 para Protein Polymer Technologies; Cappello, J. et al . , Biotechnol . Prog. , 6j_198-202 (1990); Cappello, J. , Trends Biotechnol . , 8^:309-11(1990); y Cappello et al . , Biopolymers, 34:1049-1058 (1994), en donde la declaración de cada una son incorporadas aquí por referencia. Los poli (fosfoésteres) pueden ser usados como la matriz de suministro controlada. Los poli (fosfoésteres) con diferentes cadenas laterales y los métodos para producirlos y procesarlos son descritos en Kadiyala et al . , "Poly (phosphoesters) : Synthesis, Physiochemical Characterization and Biological Response", en "Biomedical Applications of Synthetic Biodegradable Polymers", J.

Holliger, Ed., CRC Press, Boca Ratón, 1995, pp. 33-57, en donde la declaración es incorporada aquí. Los materiales de poliuretano que pueden ser usados, incluyen, por ejemplo, los copolímeros de bloque segmentado de amida de poliuretano, que son descritos, por ejemplo en la Patente U.S. No. 5,100,992 para Biomedical Polymers International, declaración la cual es incorporada aquí. Los polímeros poloxamero que pueden ser usados, son los copolímeros de bloque polioxialquilano, tales como los copolímeros de bloque óxido de propileno, óxido de etileno, por ejemplo, los geles Pluronicos. En otro aspecto la matriz de suministro controlada puede ser una liposoma. Las moléculas amfifílicas tales como las moléculas que contiene un lípido pueden ser usadas para formar liposomas, como se describe en Lasic, "Liposomes in Gene Delivery", CRC Press, New York, 1994, pp. 67-112, en donde la declaración es incorporada aquí. Los lípidos ejemplares incluyen lecitinas, esfingomielinas, Y fosfatidiletanolaminas, fosfatidilserinas, fosfatidilgliceroles y fosfatidilinositoles . Los lípidos naturales o sintéticos pueden ser usados. Por ejemplo, las moléculas de lípidos sintéticos usadas para formar los liposomas pueden incluir cadenas de lípidos tales como las cadenas de dimiristoilo, dipalmitoilo, distearoilo, dioleoilo y palmitoilo-oleoilo. El colesterol puede ser incluido. Los liposomas y los métodos para su formación también son descritos en Nassander, "Liposomes" en "Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems", Chasin and Langer, Eds, Marcel Dekker, New York, 1990, pp. 261-338, en donde la declaración es incorporada aquí. En un aspecto preferido, un liposoma heterovesicular, que incluye cámaras separadas de distribución y tamaño definido puede ser usado, como se describe, por ejemplo, en las Patentes Nos. 5,422,120 y 5,576,017 para Depo Tech Corporation, en donde la declaración es incorporada aquí. El colágeno, la albúmina y el fibrinogeno que contienen materiales pueden ser usados como se describe, por ejemplo, en Bogdansky, "Natural Polymers as Drug Delivery Systems", en "Biodegradable Polymers as drug Delivery Systems", Chasin and Langer, Eds, Marcel Dekker, New York, 1990, pp. 231-259, en donde la declaración es incorporada aquí. Las composiciones de colágeno ejemplares las cuales son usadas incluyen conjugados de polímeros de colágeno, como se describe en las Patentes U.S. Nos. 5,523,348, 5,510,418 5,475,052 y 5,446,091 para Collagen Corporation, en donde las descripciones son incorporadas aquí. El colágeno modificado de enlaces cruzados que incluye grupos tiol libres puede ser usado, como se describe, por ejemplo, en la Patente No. 5,412,076 para Fla el Technologies, en donde la declaración es incorporada aquí . Las matrices proteinaceas que incluyen colágeno también son descritas en la Patente U.S. No. 4,619,913 para Matrix Pharmaceuticals, en donde la declaración es incorporada aquí. Los sistemas de suministro del medicamento basados en hialuranos, por ejemplo, que incluyen hialuronanos o hialuronanos copolimerizados con un polímero hidrofílico o hilano, pueden ser usados, como se describió en la Patente No. 5,128,326 para Biomatrix Inc. En donde la declaración es incorporada aquí. Los materiales de hidrogel disponibles en el ámbito pueden ser usados. Los materiales ejemplares incluyen el poli (metacrilato de hidroxietilo) (poli (HEMA) ) , poliacrilatos insolubles en agua, y agarosa, poliaminoácidos tales como el alginato y poli (L-lisina) , poli (óxido de etileno) (PEO) que contiene polímeros, y diacrilatos de polietilenglicol (PEG) . Otros ejemplos de hidrogels incluyen cadenas poliméricas degradables de monometacrilato de polietilenglicol metoxi que tiene longitudes variables de las cadenas laterales de polioxietileno, como se describe en Nagaoka, et al . , en Polimers as Biomaterials (Shalaby, S. W. Et al., Eds), Plenum Press, 1983, p. 381, en donde la declaración es incorporada aquí. Los hidrogels que pueden ser usados incluyen componentes poliméricos hidrofilicos e hidrofobicos en bloque (como se describe en Okano, et al., j. Biomed. Mat. Research 15, 393, 1981), o estructuras copoliméricas de injerto (como se describe en Onishi, et al., en Contemporary Topics in Polymer Science, (W. J. Bailey & T. Tsuruta, eds.) Plenum Publ. Co., New York, 1984, p. 149), y mezclas (como se describe en Shah, Polymer, 28, 1212, 1987; y la Patente U.S. No. 4,369,229) y en donde las declaraciones de cada una de estas citaciones son incorporadas aquí por referencia. Los hidrogels que comprenden acrílicos terminados, cadenas solubles en agua de copolímeros de bloque poliéter dl-polilactido pueden ser usados. Los hidrogels pueden comprender el polietilenglicol, un poli (ácido a-hidroxi), tal como un poli (ácido glicólico), poli (DL-ácido láctico) o poli (ácido L-láctico) y copolímeros de lo mismo, o poli (caprolactona) o copolímeros de los mismos. En un aspecto, el hidrogel puede comprender un copolímero de poli (ácido láctico) y poli (ácido glicólico) también referido aquí como un polímero poli-láctido-co-glicolido (PLGA) . Los hidrogels que pueden ser usados son los macromonómeros degradables y polimerizados, donde los macromonomeros comprenden oligomeros hidrofílicos que tiene extensiones monoméricas u oligomericas biodegradables, terminadas en las terminales libres de lo mismo con monómeros de cubierta terminal u oligomeros capaces de la polimerización y degradación. El núcleo hidrofílico puede ser por si mismo degradable, por lo tanto combinando las funciones de extensión y del núcleo. Los macromeros son polimerizados por ejemplo usando iniciadores de radical libre bajo la influencia de la luz ultravioleta de gran longitud de onda, excitación de la luz visible o energía térmica. La biodegradación ocurre en los enlaces dentro de los oligomeros de extensión y resulta en fragmentos los cuales no son tóxicos y son fácilmente removidos del cuerpo. Los hidrogels ejemplares son descritos en las patentes U.S. Nos. 5,410,016, 5,626,863 y 5,468,505, en donde las declaraciones son incorporadas aquí. Los hidrogels basados en redes degradables covalentemente que comprenden componentes poliéster o polipéptido como los componentes inestables hidrolitica o enzimaticamente, pueden ser usados como se describe en Jarrett, et al., Trans, Soc. Biomater., vol. XVIII, 182, 1995; Pathak, et al., Macromolecules. , 26, 581, 1993; Park, et al., Biodegradable Hydrogels for Drug Delivery, Technomic Publishing Co., Lancaster, Pa., 1993; Park, Bio etriáis, 9, 435, 1998; y W. Shalaby, et al., 1992, en donde la declaración es incorporada aquí. Los gels del ácido hialuronico y los gels de polihidroxietilmetacrilato pueden ser usados. Además, la matriz de suministro puede incluir un ligando indicador el cual permite un suministro dirigido del factor angiogenico para un sitio preseleccionado del cuerpo. El ligando indicador es un radical de enlace específico el cual es capaz de enlazarse específicamente en un sitio en el cuerpo. Por ejemplo, el ligando indicador puede ser un anticuerpo o un fragmento de lo mismo, un ligando receptor o una molécula de adhesión selectiva o específica al sitio objetivo deseado. Los ejemplos de los sitios objetivos incluyen las moléculas de adhesión intercelular vascular (ICAMs) , y los receptores de superficie celular endotelial, tales como av ß3. Los aspectos de las matrices de suministro que incluyen un ligando indicador que incluyen liposomas de anticuerpos conjugados, en donde el anticuerpo es enlazado al liposoma vía un enlazador avidiva/biotina, los cuales son descritos, por ejemplo, en Sipkins, Radiology, 197 :276 (1995) (Resumen); y Sipkins et al . , Radiology 197:129 (1995) (Resumen) .

Formulaciones y métodos de administración El factor angiogénico, opcionalmente en un portador, o formulación de lo mismo puede ser administrado por una variedad de rutas conocidas en el ámbito que incluyen la administración, tópical, oral, parenteral (que incluye la inyección intravenosas, intraperitoneal, intramuscular y subcutánea así como administración intranasal o inhalación) e implantación. El suministro 'puede ser sistemático, regional o local. Además, el suministro puede ser intratecal, por ejemplo, para el suministro CNS. Por ejemplo, la administración del factor angiogenico para el tratamiento de heridas puede ser por una' aplicación tópical del factor angiogenico a la herida, la administración sistemática por rutas enteral o parenteral, o por la inyección regional o local o implantación. El factor angiogenico puede ser formulado en formas apropiadas para diferentes rutas de administración como se describe en la técnica, por ejemplo en, "Remington: The Science and Practice of Pharmacy", Marck Publishing Company, Pennsylvania, 1995, en donde la declaración es incorporada aquí por referencia. El factor angiogénico, opcionalmente incorporado en una matriz de liberación controlada, puede ser proporcionado en una variedad de formulaciones que incluyen soluciones, emulsiones, suspensiones, polvos, tabletas y gels. Las formulaciones pueden incluir excipientes disponibles en la técnica, tales como diluyentes, solventes, amortiguadores, solubilizantes, agentes portadores, agentes controladores de viscosidad, aglutinantes, lubricantes, surfactantes, preservativos y estabilizadores. Las formulaciones pueden incluir agentes de hinchamiento, agentes quelantes, y antioxidantes. Donde las formulaciones parenterales son usadas, la formulación puede adicional o alternativamente incluir azucares, aminoácidos o electrolitos. Los excipientes incluyen polioles por ejemplo de un peso molecular menor de cerca de 70,000 KD, tal como la trehalosa, manitol, y polietilenglicol. Ver por ejemplo, en la Patente U.S. No. 5,589,167, declaración la cual es incorporada aquí. Los surfactantes ejemplares incluyen surfactantes no iónicos, tales como los surfactantes Tween®, los polisorbatos, tales como los polisorbatos 20 o 80 etc. y los poloxameros, tales como los poloxameros 184 o 188, polioles Pluronic®, y otros polímeros de bloque etileno/propileno etc. los amortiguadores incluyen el tris, citrato, succinato, acetato o histidina. Los preservativos incluyen el fenol, el alcohol bencílico, el metacresol, paraben metilo, paraben propilo, cloruro de benzalconio y el cloruro de bencetonio. Otros aditivos incluyen la carboximetilcelulosa, dextran y la gelatina. Los agentes estabilizantes incluyen la heparina, polisulfato de pentosano y otros heparinoides, y cationes divalentes tales como le magnesio y el zinc. El factor angiogenico, opcionalmente en combinación con una matriz de suministro controlado, puede ser procesado en una variedad de formas que incluyen microesferas, microcápsulas, microparticulas, películas, y revestimientos. Los métodos disponibles en la técnica para procesar los medicamentos en portadores poliméricos pueden ser usados tales como es secado por rociado, precipitación y cristalización. Otros métodos incluyen técnicas de moldeado que incluyen moldeado de solventes, moldeado por compresión, microencapsulado por fundido en caliente, y microencapsulación por remoción del solvente, como se describe por ejemplo en Laurencin et al., "Poly (anhídridos) " en "Biomedical Applications of Synthetic Biodegradable Polimers", J. Hollinger, Ed., CRC Press, Boca Ratón, 1995, pp. 59-102, declaración la cual es incorporada aquí . En un aspecto, es ventajoso entregar el factor angiogenico localmente en un portador de liberación controlada, tal que como la ubicación y el tiempo de liberación son controlados. El suministro local puede ser, por ejemplo, para sitios selectos de tejido, tal como una herida u otra área en necesidad del tratamiento o un área de flujo de sangre inadecuada (isquemia) en el tejido, tal como un tejido del corazón isquémico u otro músculo tal como el periférico. El factor angiogenico opcionalmente en combinación con un portador tal como una matriz de liberación controlada, también puede ser administrada localmente cerca de la vasculatura existente en la proximidad a un área isquémica para una indicación tal como una enfermedad vascular oclusiva para promover la angiogénesis cerca del área que es tratada.

Terapia del ácido Nucleico El factor angiogenico también puede ser administrado por la administración de un ácido nucleico que codifica para el factor angiogenico. Los factores angiogenicos codificados de polímeros del ácido nucleico de esta manera pueden ser administrados terapéuticamente. Los factores angiogenicos codificados (DNA o RNA) de polímeros del ácido nucleico son incorporados en las estructuras del ácido nucleico (vectores de transferencia del gen) , que incluye los signos apropiados (por ejemplo, intensificadores, promotores, signos de procesamiento intron, signo de alto, signos de poli-adición, etc.) para la producción del factor angiogenico en las células del paciente, las estructuras del factor angiogenico codificado del ácido nucleico puede ser suministrado sistemáticamente, regionalmente, localmente o topicalmente, preferiblemente que sea suministrado topicalmente, localmente o regionalmente para inducir la producción de los factores angiogenicos por células del cuerpo de los pacientes. Alternativamente las estructuras del factor angiogenico codificado del ácido nucleico pueden ser suministradas a un sitio remoto, el cual producirá el factor angiogenico y permitirá que se disperse por todo el cuerpo del paciente. Las estructuras del factor angiogenico codificado del ácido nucleico puede ser suministrado como "DNA puro" (de esta manera sin ninguna membrana de encapsulación o envoltura/virica) . Las células de los músculos, particularmente las células de los músculos esqueléticos así como las células del músculo cardiaco son bien conocidas por tomar el DNA puro y por expresar genes codificados en el DNA puro. Este método de suministrar un una estructura del ácido nucleico codificado del factor angiogenico es un modo preferido para el tratamiento de la enfermedad de la arteria coronaria. El DNA puro comprende una estructura del ácido nucleico codificado del factor angiogenico que puede ser liberado localmente por ejemplo por la inyección en el músculo cardiaco en áreas que rodean un bloqueo, in lieu de o en conjunto con el tratamiento quirúrgico para el bloqueo. Los vehículos del DNA para el suministro del gen no vírico usando un minicirculo superenrollado también puede ser usado como se describe en Darquet et al., Gene Ther., 4:1341-1349 (1997), declaración la cual es incorporada aquí. Las estructuras del ácido nucleico codificador del factor angiogenico pueden también ser suministradas en sistemas de suministro no celular, tales como los liposomas o suspensiones de lípidos cationicos. El uso de liposomas para la terapia de transferencia del gen es bien conocida (ver por ejemplo Lee et al . , Crit . Rev. Ther. Drug Carrier Syst . , 14(2) : 173-206 (1997); Lee and Huang, Cri t Rev. Ther Drug Carrier Syst, 14:173-206 (1997) y Mahoto et al., Pharm . Res . 14:853-859(1997), declaraciones las cuales son incorporadas aquí. Generalmente,- las construcciones del ácido nucleico codificado del factor angiogenico son incorporadas en o complejadas con liposomas las cuales pueden ser además derivatizadas para incluir radicales indicadores tales como anticuerpos, ligandos receptores, adhesión de moléculas selectivas o específicas del sitio objetivo. Los sistemas de liposomas para el suministro de las estructuras del ácido nucleico codificado del factor angiogenico puede incluir complejos liposoma catiónico/DNA, liposomas neutrales o aniónicos los cuales encapsulan las estructuras, DNA de policatión condensada atrapa en liposomas u otros sistemas de liposomas conocidos en la técnica. Las proteínas portadoras que facilitan la transferencia del gen específico de la célula especifica vía la endocitosis mediada del receptor pueden ser usadas como se describe en Uherek et al., J, Biol. Chem. 273:8835-8841 (1998). Los poli (aminoácidos) glycosilados también son útiles vectores no víricos para la transferencia del gen en las células como se describe en Kollen, Chest. 111:95S-96S (1997), en donde la descripción es incorporada aquí. La transferencia del gen también puede ser implementada por los procesos biolísticos, tales como la inyección por mezcla como se describe en Furth, Mol. Biotech., 7:139-143 (1997), den donde la descripción es incorporada aquí. Los métodos no víricos de la tansferencia del gen los cuales pueden ser usados tales como un lanzador genético, la electroporación, la transferencia mediada del receptor, y los complejos macromoleculares artificiales son descritos en Zhdanov et al., Vopr Med Khim, 43:3-12 (1997), donde la descripción es incorporada aquí. El DNA puede ser un complejo para la proteína, el lípido u otro portador polimérico con ligandos indicadores del tejido como se describe en Sochanik et al., Biochim Pol 43:293-300 (1996), en donde la descripción es incorporada aquí. El uso de glico indicadores usando ligandos para lectinas que son después endocitosadas se describe en Wadhwa et al., J, . Drug Target 3:111-127 (1995), y Phillipis, Biologicals, 23:13-16 (1995), la descripción es incorporada aquí. Los vectores víricos incorporando estructuras al ácido nucleico codificado del factor angiogenico son útiles también para el suministro. El uso de estructuraqs víricas para la terapia del gen es bien conocido (ver Robbins et al., Trends Biotechnol. 16(1): 35-40(1998) para una revisión) , los virus útiles para la transferencia del gen incluyen los retrovirus (particularmente el virus de la leucemia de ratón, MLV, virus de tumores mamarios de ratón, MMTV y retrovirus andogeno humano) , adenovirus, virus de herpes simple y virus adenoasociados. Los vectores virales útiles para la transferencia del gen de acuerdo a la presente invención pueden ser una reproducción competente o incompetente. Los vectores virales de reproducción incompetente son preferidos generalmente para los vectores retroviricos. Generalmente la estructura del ácido nucleico codificado del factor angiogenico es incorporada en un vector el cual incluye información suficiente para ser empacado, frecuentemente por una línea de células de empacamiento especializado, con una partícula vírica. Si el vector vírico es competente en la reproducción, el vector vírico también incluirá información suficiente para codificar los factores y signos requeridos para la reproducción de nuevas partículas víricas infecciosas. Las perticulas virales que incorporan la estructura del ácido nucleico codificado del factor angiogenico son inyectadas o infundidas en o aplicadas al sitio deseado.

Producción de factores angiogenicos, En un aspecto, los factores angiogenicos pueden ser producidos recombinantemente usando una variedad de métodos disponibles en el ámbito. Para aquéllos factores angiogenicos los -cuales los cuales no son glicosilados y para aquellos factores angiogenicos donde la glicosilación no es requerida para la actividad del factor (por ejemplo, FGF-1 y FGF-2), el factor angiogenico puede ser producido por purificación de fuentes naturales o por expresión recombinantes en células huésped eucarioticas o procarioticas. Parea aquéllos factores angiogenicos donde la glicosilación es requerida o deseada para la actividad, la purificación de fuentes naturales o la producción recombinante en células huésped eucarioticas es apropiada. Los factores angiogenicos para su uso en la presente invención son producidos preferentemente por la expresión recombinante y son purificados. La manera exacta y el protocolo para la purificación de los factores angiogenicos de las fuentes naturales dependerá en el material de la fuente y el factor angiogenico particular, como es bien conocido en la técnica. Los métodos de purificación para los factores angiogenicos han sido publicados y pueden ser fácilmente reproducibles . Para la producción recombinante, una molécula de DNA codificando la proteína es incorporada en una "estructura de expresión" la cual tiene las secuencias de DNA apropiadas para dirigir la expresión en la célula huésped recombinante. La construcción de la estructura de expresión es bien conocida en la técnica, y las variaciones son simplemente un tema de preferencia. Los cDNAs de rata, bovina y humano codificando la pleiotrofina han sido secuenciados. Fang et al., J. Biol. Chem., 267:25889-25897 (1992); Li et al. (1990) supra; Lai et al., (1992), supra; Kadomatsu et al., Biochem. Biophys. Res. Commun 151:1312-1318 (1998); Tomomura et al., J. Biol. Chem. 265: 10765-10770(1990); Vrios et al., Biochem. Biophys. Res. Commun 175:617-624 (1991; y Li et al., J. Biol. Chem, 267: 26011-26016(1992). Sin embargo existe un número de variantes de empalme las cuales pueden producir diferentes isoformas de la proteína. En una isoforma preferida aislada de fuentes humanas, la proteína madura son los aminoácidos 136 (por ejemplo, el codificado de la proteina por las bases 573-980 de SEQ ID NO 1), que es producida por el desdoblamiento proteolítico de una secuencia signo N-terminal aminoácido 32 de la proproteína aminoácido 168 (por ejemplo, el codificado de la proteína por las bases 477-980 de SEQ ID NO 1) . Los cDNAs de Xenopus Laevis de pollo, ratón y humano para la midquina también han sido secuenciados (Tsutsui et al., Bioch. Biophys. Res. Commun., 176 (2) : 792-797 (1991); Fu et al., Gene, 146(2): 311-312; y Urios et al., Bioch. Biophys. Res, Comm., 175:617-624(1991). Los mRNE alternos para la midquina han sido detectados, aunque la variación parece ser en la región no trasladada 5' (5'-URT) de los mRNAs. Una proteína midquina preferida de fuentes humanas es la proteína madura aminoácido 121, que es un producto del proceso proteolitico de la proteína precursor aminoácido 143 (ver, por ejemplo las secuencias del nucleotido y de la proteína descritas en Genbank accession no. M69148) . Los cDNAs humanos para un número de miembros diferentes de la familia VEGF han sido clonados y secuenciados, incluyendo VEGF (Weindel et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 183(3): 1167-1174(1992)), VEGF 2 (Hu et al., Patente internacional de Plicación No. WO 95/24473), VEGF-C (Joukov et al., EMBO J, 15(2): 290-298(1996) y VEGF-D ( Yamada et al., Genomics 42(3): 483-488 (1997), y los factores relacionados con VEGF, VRF186 y VRF167 (Grimmond et al., Genome. Res. 6(2)122-129.(1996). Las secuencias cDNA conocidas para la familia FGF incluyen FGF-1, también conocidos como FGF o aFGF ácido (Yu et al., J. Exp. Med. 175 (4) : 1073-1080 (1992), FGF-2, también conocida como FGF o bFGF básica (Satoshi et al., Patente de aplicación Japonesa NO. JP 1993262798), FGF-5 (Haub et al., Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A, 87 : (20) : 8022-8026(1990)), FGF-6 también conocida como HST-2 (lida et al., Oncogene 7(2): 303-309 (1992)), FGF-8(Payson et al., Oncogene 13(1): 47-53 (1996)), FGF-9 (Miyamoto et al., Mol. Cell. Biol. 13(7): 4251-4259 (1993)), y FGF-10 (Emoto et al., J. Biol. Chem 272 (37)23191-23194 (1997) ) . Por lo menos tres miembros de la familia del factor de crecimiento epidermal (EGF) son conocidos, y las secuencias del ácido nucleico son disponibles para la EGF (Bell et al., Nucleic Acids Res. 14(21): 8427-8446 (1996)), factor alfa de crecimiento de transformación (TGF-a Jakowlew et al., Mol. Endocrinol. 2(11): 1056-1063 (1998)), y TGF-aHIII (Aplicación de la Patente Internacional NO. WO 97/25349) . El codificado de los genes para PDGFs son bien conocidos, el codificado de mRNAs para las cadenas A y B que han sido clonadas y secuenciadas, permite la producción combinante (Betsholtz et al., Nature 320 (6064) : 695-699(1986); y Collins et al., Nature 316(6030): 748-750(1985) ) . Un gran número de métodos son conocidos para la producción de proteínas en las células huésped procarioticas. Normalmente, solo la porción madura (i.e., la porción del factor angiogenico que queda después de que el proceso postranslacional normal sea completado) del factor angiogenico es usada para la expresión en los procariotes. Los factores angiogenicos pueden ser expresados "directamente" (i.e. el factor angiogenico es producido sin ninguna secuencia de fusión o de accesorio) o como una proteína de fusión. La expresión directa de los factores angiogenicos en células huésped procarioticas normalmente resultaran en la acumulación de cuerpos "refractivo" o de "inclusión", que contienen la proteína expresada recombinantemente. Los cuerpos de inclusión pueden ser colectados, y después resolubilizados . Los factores angiogenicos producidos en los cuerpos de inclusión normalmente requerirán de un "replegado" (i.e. la resolubilización y reducción seguida por la oxidación bajo condiciones las cuales permiten que la proteína asuma su conformación propiamente plegada y nativa) para generar la proteína biológicamente activa. Los protocolos de replegado son bien conocidos en la técnica, y existen varios métodos de plegado los cuales son considerados por ser generalmente aplicables a todas las proteínas (ver por ejemplo Patentes U.S. No. 4,511,502, 4,511,503, y 4,512,922). Las proteínas angiogenicas de replegado pueden ser convenientemente purificadas de acuerdo a cualquiera de los métodos conocidos en la técnica, particularmente por el uso de los protocolos desarrollados para la purificación de los factores de fuentes naturales. Existe un vasto número de asociados de fusión posibles para el factor angiogenico, si el factor es expresado como una proteína de fusión en las células huésped procarioticas. Las proteínas de fusión contienen secuencias guías de las proteínas periplasmaticas que son secretadas dentro del periplasma de la bacteria gram negativa tal como E. Coli. La secuencia guía es frecuentemente desdoblada en la secreción en el espacio periplasmico, resultando en la producción del factor angiogenico sin ninguna secuencia de extensión N-terminal. Ventajosamente, muchas proteínas de mamíferos se pliegan en su conformación activa, nativa cuando se expresan en su espacio periplasmico, debido a la presencia de proteínas "caperona" y al ambiente muy oxidante del periplasma. Las proteínas de fusión pueden también ser producidas con secuencias de aminoácidos las cuales mantienen la solubilidad de la proteína de fusión expresada o con secuencias de aminoácidos los cuales actúan como un "distintivo" (i.e. una secuencia la cual puede ser usada para identificar fácilmente o purificar la proteína de fusión) tal como la oligo histidina o una secuencia que es un substrato para la biotinilación por las células bacterianas. Las proteínas de fusión, las cuales no son desdobladas apropiada y naturalmente pueden también contener un sitio de reconocimiento de la proteasa el cual permitirá la remoción de la secuencia asociada de fusión. Tales secuencias son bien conocidas en la técnica. Los factores angiogenicos producidos como proteínas de fusión pueden requerir de un replegado, como se mencionó anteriormente. Después del replegado, el factor angiogenico puede además ser purificado de acuerdo a cualquiera de los métodos conocidos en la técnica, particularmente por el uso de protocolos desarrollados para la purificación de los factores de fuentes naturales. La producción recombinante de las proteínas en las células eucarioticas es bien conocido. Los factores angiogenicos pueden ser producidos en cualquier célula huésped eucariotica, que incluyen, pero no es limitado a un fermento de fisión o yemacion, células de insectos tales como las líneas de células D. Melanogaster, líneas de células de mamíferos y plantas. Si la célula huésped es una célula huésped que reconoce y pliega apropiadamente las secuencias de signos humanos (por ejemplo líneas de células de mamíferos) , entonces la región de codificación total del factor angiogenico puede ser incorporada en la estructura de expresión, de otra manera solo la porción que codifica la proteína madura es usada. Las estructuras de expresión para su uso en células huésped eucarioticas son bien conocidas en la técnica. Los sistemas preferidos para la producción de factores angiogenicos incluyen los sistemas de virus planta de tabaco/mosaico de tabaco, sistemas baculovirus/células de insectos y líneas de células de mamíferos. En el caso donde el factor angiogenico es la pleiotrofina y su expresión en líneas de células de mamíferos, es preferido que la estructura de expresión contenga la estructura de lectura abierta (ORF) de la pleiotrofina ligada a las secuencias -3' y -5' heterologas, como las secuencias -3' y -5' nativas pueden formar complejos antisentidos con proteínas humanas codificadas de mRNAs tal como 70 hsp. Además de la producción recombinanate, los factores angiogenicos también pueden ser producidos sintéticamente. Por ejemplo, los péptidos, los fragmentos de péptidos de factores de crecimiento de origen natural, con actividad angiogenica, pueden ser sintetizados usando las técnicas de fase sólida disponibles en el ámbito. Además los análogos, los cuales actúan como mimicos del factor de crecimiento, pueden ser sintetizados usando técnicas orgánicas sintéticas disponibles en el ámbito, como se describe por ejemplo en: March, "Advanced Organic Chemistry", John Wiley & Sons, New York, 1985. Los análogos incluyen miméticos de péptidos de moléculas pequeñas, . así como homólogos de peptidos activos sintéticos para factores angiogenicos de origen natural o fragmentos de lo mismo. Todas las referencias citadas aquí son por esto incorporadas aquí. La invención será mejor entendida por los siguientes ejemplos sin límite.

EJEMPLOS Ejemplo 1: Uso In Vitro de un Factor Angiogenico.

La pleiotrofina humana recombinante (PTN) es aislada como se describe en Fang et al., J. Biol. Chem., 267:25889-25897(1992)). Para determinar el porcentaje del incremento en la proliferación celular endotelial después de la estimulación PTN in vitro, las células endotelial (HUEVEC, células endotelial de la vena umbilical humana, Colección de Cultivo Tipo Americana, #CRL-1730) se siembran a 104 células por vaso en 12 platos de cultivo de tejido vaso, en 2 mi de medias F12K que contiene 10% de suero de bovino fetal (Life Technologies (Rockville MD) , # 11765054 y #16140071, respectivamente) usando procedimientos de cultivo de células estándar. Después de aproximadamente 6 horas se deja que las células empiecen a adherirse al plato de cultivo, 50 ng de PTN en 50 µl de amortiguador PBS (fosfato amortiguado salino) se añaden a cada vaso de tratamiento (n=6 en cada uno de los seis grupos de tratamiento) , el volumen equivalente de PBS solo se añade a cada vaso de control (n=6) para determinar el nivel de proliferación antecedente. La media es removida de los vasos, las células se lavan dos veces con 2 mi de PBS y 2 mi de media rellenada a cada punto de tiempo de 24 horas, excepto para el grupo de 12 horas el cual es rellenado con media en 12 horas. La misma dosis de PTN es también rellenada a cada punto de tiempo de 24 horas mas a la duración del tratamiento indicado, después de lo cual la media solo es rellenada. Al final de una semana las células se hacen desadherentes y se cuentan por técnicas de cultivo de células estándar. La Figura 1 muestra el por ciento del incremento promedio de cada grupo de tratamiento después de substraer la proliferación (no tratada) del antecedente promedio. Ejemplo 2: Tratamiento de una Herida de Ratón con un Factor Angiogenico In Vivo.

La PTN se aisla como se describe en el Ejemplo 1. Para determinar los efectos del tratamiento PTN local in vivo en la vasculatura subcutánea en los ratones, los implantes de la matriz se inyectan bilateralmente bajo la piel de un lado suelta de ratones BALB/c (Harían Sprague-dawley, Indianpolis, IN) , cinco ratones por grupo (n=10) . Para realizar los implantes, la proteína PTN en la solución PBS (como se hizo anteriormente) es mezclada en Matrigel™ (Investigación colaborativa, MA) un líquido a temperatura ambiente, a una concentración de 10 µg /mi. Los implantes de control se realizan similarmente, pero sin PTN en el amortiguador. Como la solución de la matriz se convierte en gel como la temperatura se incrementa para la temperatura ambiente anterior, pero debajo de la temperatura del cuerpo de 37 °C, .volúmenes de 1 mi por sitio se inyectan en una bolsa subdermal usando una aguja medida 16. La solución de gel se convierte en una matriz sólida parcialmente a la temperatura corporal. En cada punto, el grupo respectivo de ratones se sacrifica y la densidad y diámetros totales de los vasos de referencia en la región del implante se miden usando microcalibradores estándar. La figura 2 muestra el tamaño del vaso agregado promedio entre los grupos tratados (+PTN) y los no tratados (-PTN) sobre el tiempo.

Ejemplo 3: Angiogenesis In Vivo Usando una Matriz de Suministro Controlado. La PTN es obtenida como se describe en el Ejemplo 1. Para determinar los efectos del tratamiento PTN local mantenido en un sistema vascular funcional in vivo, el vaso conocido como ensayo Folkman CAM (membrana corialantoica de pollo) es usado. Después de abrir parcialemnte la cascara de los huevos de huevos de gallina fertilizados con cinco días de edad (local Leghorn white, Half Moon Bay, CA) , un sistema Vasotrofina™ (Angiogenix Inc, Burlingame, CA) es colocado en el borde principal del CAM, que es aproximadamente de 15 mm de diámetro. El sistema Vasotrophina™ usado es una pelotilla bioerosionable de 500 µl que consiste de PTN formulado en una matriz de poli (lactido-co-glicolido) (PLGA; Absorbable Polymer Technologies, Birmingham, AL) en 1 µg/ml, o cada uno que conteniendo 500 ng de PTN. Las pelotillas de control son producidas similarmente, pero sin PTN. CAMs son visualizados sobre las siguientes dos semanas y las diferencias en los patrones de crecimiento de los vasos sanguíneos son observados e imaginados a través de una cámara microscópica seccinada. Los vasos sanguíneos en la vecindad de los sistemas de Vasotrofina que contienen el factor de crecimiento demustran un incremento marcado tanto en la densidad de los vasos como en el calibre de los mismos. Existe también un crecimiento hacia dentro radial, o un crecimiento direccional de los vasos hacia las pelotillas. En el CAMs de control, los vasos sanguíneos continúan creciendo de la misma manera como el CAM no tratado completamente, en donde nada se colocó en la membrana. Los vasos de control son significativamente menos densos y pequeños en el diámetro; también crecen direccionalmente sin contemplar las pelotillas. Esto demuestra la estimulación específica y directa del calibre y densidad del vaso incrementada en la exposición local mantenida para la PTN.

LISTADO DE SECUENCIAS (1) INFORMACIÓN GENERAL: (i) SOLICITANTE: Colley, Kenneth (ii) TITULO DE LA INVENCIÓN: FACTORES ANGIOGENICOS TERAPÉUTICOS Y MÉTODOS PARA SU USO (iii) NUMERO DE SECUENCIAS: 1 (iv) DIRECCIÓN PARA CORRESPONDENCIA: (A) DESTINATARIO: MORRISON & FOERSTER (B) CALLE: 775 PAGE MILL ROAD (C) CIUDAD: Palo Alto (D) ESTADO: CA (E) PAÍS: USA (F) ZIP: 94304-1018 (v) FORMA LEÍBLE POR COMPUTADORA: (A) TIPO DE MEDIO: diskette (B) COMPUTADORA: IBM compatible (C) SISTEMA OPERATIVO: Windows (D) PROGRAMA: FastSEQ para Windows Versión 2.0b (vi) DATOS DE LA SOLICITUD PRESENTE: (A) NUMERO DE SOLICITUD: (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: (C) CLASIFICACIÓN: (vii) DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR: (A) NUMERO DE SOLICITUD: (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: (vii) DATOS DE LA SOLICITUD ANTERIOR: (A) NUMERO DE SOLICITUD: (B) FECHA DE PRESENTACIÓN: (viii) INFORMACIÓN DEL ABOGADO/AGENTE : (A) NOMBRE: Johnston, Madeline I (B) NUMERO DE REGISTRO: 36,174 (C) REFERENCIA/NUMERO DE CASO: 39084-30001.00 (xi) INFORMACIÓN PARA TELECOMUNICACIÓN: (A) TELEFONO: 650-813-5600 (B) TELEFAX: 650-494-0792 (C ) TELEX: 706141 (2) INFORMACIÓN PARA SEC ID No. 1: (i) CARACTERÍSTICAS DE LA SECUENCIA: (A) LONGITUD: 1383 pares de base (B) TIPO: ácido nucleico (C) HEBRA: simple (D) TOPOLOGÍA: lineal (xi) DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEC ID No. 1: AAGTAAATAA ACTTTAAAAA TGGCCTGAGT TAAGTGTATT AAAAAGAAGA AATAGTCGTA AGATGGCAGT ATAAATTCAT CTCTGCTTTT AATAAGCTTC CCAATCAGCT CTCGAGTGCA 120 AAGCGCTCTC CCTCCCTCGC CCAGCCTTCG TCCTCCTGGC CCGCTCCTCT CATCCCTCCC 180 ATTCTCCATT TCCCTTCCGT TCCCTCCCTG TCAGGGCGTA ATTGAGTCAA AGGCAGGATC 240 AGGTTCCCCG CCTTCCAGTC CAAAAATCCC GCCAAGAGAG CCCCAGAGCA GAGGAAAATC 300 CAAAGTGGAG AGAGGGGAAG AAAGAGACCA GTGAGTCATC CGTCCAGAAG GCGGGGAGAG 360 CAGCAGCGGC CCAAGCAGGA GCTGCAGCGA GCCGGGTACC TGGACTCAGC GGTAGCAACC 420 TCGCCCCTTG CAACAAAGGC AGACTGAGCG CCAGAGAGG? CGTTTCCAAC TCAAAAATGC 4 . - 0 AGGCTCAACA GTACCAGCAG CAGCGTCGAA AATTTGCAGC TGCCTTCTTG GCATTCATTT 540 TCATACTGGC AGCTGTGGAT ACTGCTGAAG CAGGGAAGAA AGAGAAACCA GAAAAAAAAG 600 TGAAGAAGTC TGACTGTGGA GAB.TGGCAGT GGAGTGTGTG TGTGCCCACC AGTGGAGACT 660 GTGGGCTGGG CACACGGGAG GGCACTCGGA CTGGAGCTGA GTGCAAGCAA ACCATGAAGA 720 CCCAGAGATG TAAGATCCCC TGCAACTGGA AGAAGCAATT TGGCGCGGAG TGCAAATACC 780 AGTTCCAGGC CTGGGGAGAA TGTGACCTGA ACACAGCCCT GAAGACCAGA ACTGGAAGTC 840 TGAAGCGAGC CCTGCACAAT GCCGAATGCC AGAAGACTGT CACCATCTCC AAGCCCTGTG 900 GCAAACTGAC CAAGCCCAAA CCTCAAGCAG AATCTAAGAA GAAGAAAAAG GAAGGCAAGA 960 AACAGGAGAA GATGCTGGAT TAAAAGATGT CACCTGTGGA ACATAAAAAG GACATCAGCA 1020 AACAGGATCA GTTAACTATT GCATTTATAT GTACCGTAGG CTTTGTATTC AAAAATTATC 1080 TATAGCTAAG TACACAATAA GCAAAAACAA CCAATTTGGG TTCTGCAGGT ACATAGAAGT 1140 TGCCAGCTTT TCTTGCCATC CTCGCCATTC GAATTTCAGT TCTGTACATC TGCCTATATT 1200 CCTTGTGATA GTGCTTTGCT TTTTCATAGA TAAGCTTCCT CCTTGCCTTT CGAAGCATCT 1260 TTTGGGCAAA CTTCTTTCTC AGGCGCTTGA TCTTCAGCTC TGCGAAATTC CTTCGCTTTT 1320 TCTTAAGGGT TTCTGGCACA GCAGGAACCT CCTTCTTCTT CTCTTCTACA CCCTCTATGT 1380 ACC 1383 Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes:

Claims (50)

REIVINDICACIONES

1. Un método para estimular la angiogenesis en un humano' o animal en necesidad de esto, el método comprende la administración a un humano u otro animal de una cantidad terapéuticamente efectiva de un molécula pleiotrifina o -midquina o midcina en un portador farmacéuticamente aceptable.

2. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula de pleiotrofina o midquina es una proteína pleiotrofina o midquina o midcina.

3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, el portador comprende una matriz de liberación controlada que permite controlar la liberación de la molécula de pleiotrofina o midquina o midcina.

4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque, el portador comprende un ligando capaz de dirigir la molécula de pleiotrofina o midquina a un sitio preselecto en el cuerpo.

5. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es administrada al sistema vascular.

6. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es administrada al sistema cardiovascular .

7. El método de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque, la molécula es administrada en una cantidad terapéuticamente efectiva para el tratamiento de una condición seleccionada de del grupo que consiste de una enfermedad de la arteria coronaria y enfermedad del corazón isquémica .

8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es administrada al sistema vascular periférico.

9. El método de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque, la molécula es administrada en una cantidad terapéuticamente efectiva para el tratamiento de una condición seleccionada del grupo que consiste de vasculopatías periféricas diabéticas y enfermedades ateroscleróticas periféricas.

10. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es administrada localmente en una cantidad terapéuticamente efectiva a una herida para promover la curación de la herida.

11. El método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque, la herida es seleccionada del grupo que consiste de una úlcera, sensibilidad a la presión, una herida inducida quirugicamente, y una herida inducida traumáticamente .

12. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es administrada localmente en una cantidad efectiva terapéuticamente al tejido que comprende los nervios para tratar una condición neurológica.

13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque, la molécula es administrada localmente en una cantidad efectiva terapéuticamente para el tratamiento de una condición seleccionada del grupo que consiste de trastorno cerebro vascular, demencia multi-infartoria, e isquemia cerebral general.

14. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es administrada localmente en una cantidad efectiva terapéuticamente a un tejido que comprende el hueso o cartílago.

15. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es administrada localmente en una cantidad efectiva terapéuticamente para el tratamiento de una condición seleccionada del grupo que cosiste de osteoporosis, artritis y reemplazo o reparo de una articulación.

16. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es una proteína pleiotrofina.

17. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es una proteína pleiotrofina, y en donde la molécula preiotrofina es una proteína pleiotrofina aislada de fuente celular humana, o un fragmento activo o análogo del mismo.

18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque, la proteína es producida recombinatemente en una célula huésped eucariotica.

19. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es una molécula midquina, y caracterizada porque la molécula midquina es una proteína midquina aislada de una fuente celular humana o animal, o un fragmento activo o análogo del mismo.

20. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque, la matriz de liberación controlada comprende un polímero.

21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque, el polímero comprende un polímero bioerosionable o biodegradable.

22. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque, el polímero es seleccionado del grupo que cosiste de poli (esteres) , poli (anhídridos) , y poli (aminoácidos) .

23. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque, el polímero es un copolímero de bloque poli (aminoácido) elastina de seda.

24. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, el portador comprende un liposona.

25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque, el liposoma comprende un ligando indicador capaz de dirigir el liposoma a un sitio preseleccionado en el cuerpo.

26. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque, la molécula es administrada localmente en una cantidad terapéuticamente efectiva a un sitio de transplante de órgano para promover el injerto del transplante en el huésped.

27. Un método para estimular la angiogénesis en un humano o animal en necesidad del mismo, el método comprende administrar al humano o animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un factor angiogenico en un portador farmacéuticamente aceptable que comprende un copolímero de bloque poli (aminoácido) elastina de seda.

28. El método de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque, el factor angiogenico es seleccionado del grupo que consiste de pleiotrofina, midquina, miembros de la familia del factor de crecimiento fibroblasto (FGF), miembros de la familia del factor de crecimiento andotelial vascular (VEGF) , factores de crecimiento derivados de plaqueta y miembros de la familia del factor de crecimiento epitelial (EGF) .

29. Un método para estimular la angiogenesis en u humano o animal en necesidad de esto, el método comprende la administración a el humano o animal de una cantidad terapéuticamente efectiva de un factor angiogenico en un portador farmacéuticamente aceptable que comprende poli-lactido-co-glicolido. Caracterizado porque el factor angiogenico es seleccionado del grupo que consiste de una molécula pleiotrofina y midquina.

30. Una composición farmacéuticamente aceptable para el suministro terapéutico de una molécula pleiotrofina o midquina a un humano o animal, la composición comprende una molécula pleiotrofina o midquina y un portador farmacéuticamente aceptable.

31. La composición de conformidad con la reivindicación 30, caracterizada porque la molécula de pleiotrofina o midquina es una proteína pleiotrofina o midquina.

32. La composición de conformidad con la reivindicación 30, caracterizada porque el portador comprende un polímero capaz de controlar la liberación de la molécula.

33. La composición de conformidad con la reivindicación 32, caracterizada porque el polímero es seleccionado del grupo que cosiste de poli (esteres) , poli (amhídridos) , y poli (aminoácidos) .

34. La composición de conformidad con la reivindicación 32, caracterizada porque el polímero es biodegradable o bioerosionable.

35. La composición de conformidad con la reivindicación 32, caracterizada porque el polímero es un copolímero de bloque poli (aminoácido) elastina de seda.

36. La composición de conformidad con la reivindicación 30, caracterizada porque el portador comprende un lipososma.

37. La composición de conformidad con la reivindicación 32, caracterizada porque el portador comprende un liposoma que comprende un ligando indicador capaz de dirigir el liposoma al sitio preseleccionado en el cuerpo.

38. La composición de conformidad con la reivindicación 36, caracterizada porque el liposoma comprende un liposoma heterovesicular.

39. La composición de conformidad con la reivindicación 30, caracterizada porque la molécula es una molécula pleiotrofina.

40. La composición de conformidad con la reivindicación 39, caracterizada porque la molécula pleiotrofina es una proteína pleiotrofina aislada de una fuente celular humana , o un fragmento activo o análogo del mismo.

41. La composición de conformidad con la reivindicación 30, caracterizada porque la molécula es una proteína midquina.

42. Un método para la estimulación de la angiogenesis en un humano o animal en necesidad del mismo, el método comprende la administración a un humano o animal de una cantidad terapéuticamente efectiva de un vector de transferencia del gen que codifica la produciión de la proteína pleiotrofina o midquina en un portador farmacéuticamente aceptable.

43. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el vector de transferencia del gen codifica la producción de la proteína pleiotrofina.

44. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque el vector de transferencia del gen codifica la producción de la proteína midquina.

45. El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque e vector de transferencia del gen es DNA puro.

46. El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el método comprende la administración del vector de transferencia del gen en combinación con liposomas.

47. El método de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque el vector de transferencia del gen es un vector vírico.

48. El método de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque el vector de transferencia del gen es DNA puro.

49. El método de conformidad con la reivindicación 44 , caracterizado porque el método comprende la administración del vector de transferencia del gen en combinación con liposomas.

50. El método de conformidad con la reivindicación 44, caracterizado porque dicho vector de transferencia del gen es un vector vírico. i RESUMEN DE LA INVENCIÓN Se proporciona métodos para estimular la angiogénesis en un humano o animal en necesidad de esta. También se proporcionan composiciones que comprenden un factor angiogenico en un portador farmacéuticamente aceptable. En otro aspecto, el método comprende administrar al humano o animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un factor angiogenico, tal como una proteína pleiotrofina o midkina, en un portador farmacéuticamente aceptable. El portador en un aspecto comprende una matriz de liberación controlada, tal como un polímero que permite controlar la liberación del factor angionenico. El polímero puede ser biodegradable, y/o bioerosionable y preferiblemente biocompatible. Los polímeros los cuales pueden ser usados para controlar la liberación incluyen, por ejemplo, poli (esteres) , poli (anhídridos) , y poli (aminoácidos) . Los polímeros ejemplares incluyen copolímeros de bloque poli (aminoácido) elastina de seda y poli-lactido-co-glicolido. El portador, tal como un liposoma, puede ser provisto con un ligando indicador capaz de dirigir el portador a un sitio preseleccionado en el cuerpo. El factor angiogenico puede ser administrado al sistema vascular, por ejemplo al sistema o0/ ío 110 cardiovascular, o al sistema vascular periférico. En un aspecto preferido, el factor angiogenico es una proteína pleiotrofina, o una proteína midkina. En otro aspecto, un método es proporcionado para estimular la angiogenesis en un humano o animal que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de un vector de transferencia del gen que codifica la producción de la proteína pleiotrofina o midkina en un portador I farmacéuticamente aceptable. El vector de transferencia del gen puede ser, por ejemplo, DNA puro o un vector vírico, y 'll puede ser administrado, por ejemplo, en combinación con liposomas . of/ió i i O