MX2015002901A - Inhibidores de la tirosina cinasa de bruton. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a compuestos de acuerdo con la fórmula general I: en donde todas la variables son como se definen en la presente, que inhiben la Btk. Los compuestos descritos en la presente son útiles para modular la actividad de Btk y tratar enfermedades asociadas con una actividad excesiva de Btk. Los compuestos son útiles además para tratar enfermedades inflamatorias y autoinmunes asociadas con la proliferación aberrante de las células B tal como la artritis reumatoide. Se describen también composiciones que contienen los compuestos de la fórmula I y al menos un portador, diluyente o excipiente.

Description

INHIBIDORES DE LA TIROSINA CINASA DE BRUTON Campo de la Invención La presente invención se refiere al uso de nuevos compuestos, que inhiben la Btk y son útiles para el tratamiento de enfermedades autoinmunes e inflamatorias causadas por la activación aberrante de las células B.

Antecedentes de la Invención Las proteína cinasas constituyen una de las familias más grandes de enzimas humanas y regulan muchos procesos de señalización distintos mediante la adición de grupos fosfato a las proteínas (T. Hunter, Cell 198750:823-829). De modo específico, las tirosina cinasas fosforilan las proteínas en la porción fenólica de los residuos tirosina. La familia de las tirosina cinasas incluye miembros que controlan el crecimiento, migración y diferenciación de las células. Una actividad anormal de las cinasas se ha implicado una variedad de enfermedades humanas, incluidos los cánceres y las enfermedades autoinmunes e inflamatorias. Debido a que las proteína cinasas se hallan entre los reguladores clave de la señalización celular, proporcionan un objetivo para modular la función celular con pequeños inhibidores de cinasas moleculares y, de este modo, constituyen buenos objetivos para el diseño de fármacos. Además del tratamiento de procesos patológicos mediados por las cinasas, los Ref.254171 inhibidores selectivos y eficaces de la actividad de las cinasas son también útiles para la investigación de procesos de señalización celular e identificación de otros objetivos celulares de interés terapéutico.

Existen indicios suficientes que las células B desempeñan un papel clave en la patogénesis de las enfermedades autoinmunes y/o inflamatorias. Los agentes terapéuticos basados en proteínas que reducen los niveles de células B, tal como rituxan, son eficaces contra las enfermedades autoinflamatorias originadas por autoanticuerpos tales como la artritis reumatoide (Rastetter et al., Annu. Rev. Med.2004 55:477). Por consiguiente, los inhibidores de las proteína cinasas que desempeñan un papel en la activación de las células B serían agentes terapéuticos útiles para las patologías mediadas por las células B, tal como la producción de autoanticuerpos.

La señalización mediante el receptor de células B (BCR, por sus siglas en inglés) controla un intervalo de respuestas de las células B, incluidas la proliferación y diferenciación en las células maduras que producen anticuerpos. El BCR es un punto regulador clave para la actividad de las células B y la señalización aberrante puede provocar la desregulación de la proliferación de células B y la formación de autoanticuerpos patógenos, que conducen a múltiples enfermedades autoinmunes y/o inflamatorias. La tirosina cinasa de Bruton (Btk, por sus siglas en inglés) es una cinasa no asociada a BCR, que se halla próxima a membranas e inmediatamente cadena abajo del BCR. Se ha mostrado que la falta de Btk bloquea la señalización del BCR y, por lo tanto, la inhibición de Btk podría ser un procedimiento terapéutico útil para bloquear los procesos patológicos mediados por las células B.

La Btk es un miembro de la familia Tec de tirosina cinasas, y se ha mostrado que es un regulador crítico del desarrollo temprano de las células B y de la activación y supervivencia de las células B maduras (Khan et al., Immunity 1995 3:283; Ellmeier et al., J. Exp. Med.2000 192:1611). La mutación de Btk en humanos conduce a la afección de agammaglobulinemia unida a X (XLA, por sus siglas en inglés) (revisada por Rosen et al., New Eng. J. Med.1995 333:431; y Lindvall et al., Immunol. Rev.2005 203:200). Estos pacientes están inmunocomprometidos y muestran un deterioro de la maduración de las células B, niveles disminuidos de inmunoglobulina y de células B periféricas, respuestas inmunes disminuidas independientes de las células T, así como una movilización atenuada del calcio después de una estimulación del BCR.

Se ha proporcionado también evidencia del rol de Btk en las enfermedades autoinmunes e inflamatorias por los modelos de ratones deficientes de Btk. En los modelos murinos preclínicos de lupus eritematoso sistémico (SLE, por sus siglas en inglés), los ratones deficientes de Btk muestran una mejora marcada del progreso de la enfermedad. Además, los ratones deficientes de Btk son resistentes a la artritis inducida con colágeno (Jansson and Holmdahl, Clin. Exp. Immunol. 1993, 94:459). Un inhibidor selectivo de Btk ha demostrado una eficacia dependiente de la dosis en un modelo de artritis en ratones (Z. Pan et al., Chem. Med. Chem.2007, 2:58-61).

La Btk se expresa también por células distintas de las células B que pueden intervenir en procesos patológicos. Por ejemplo, la Btk se expresa por mastocitos y los mastocitos derivados de médula ósea deficientes de Btk demuestran desgranulación deteriorada inducida por antígeno (Iwaki et al., J. Biol. Chem. 2005 280:40261). Esto muestra que la Btk podría ser útil para tratar respuestas patológicas de mastocitos tales como la alergia y asma. También los monocitos de pacientes XLA, en los que está ausente la actividad de Btk, muestran una producción disminuida de TNF-alfa después de la estimulación (Horwood et al., J. Exp. Med. 197:1603, 2003). Por consiguiente, la inflamación mediada por TNF-alfa podría modularse por los pequeños inhibidores de Btk moleculares. Se ha publicado además que la Btk desempeña un papel en la apoptosis (Islam and Smith, Immunol. Rev.2000 178:49) y según esto los inhibidores de Btk serían útiles para el tratamiento de ciertos linfomas de células B y leucemias (Feldhahn et al., J. Exp. Med.2005, 201:1837).

Breve Descripción de la Invención La presente solicitud proporciona compuestos inhibidores de Btk de la fórmula I, métodos de uso de los mismos, como se describen en la presente a continuación.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I: es un enlace sencillo o doble; X es CH, CH2 O N; R es H, -R1, -R1-R2-R3, -R3-R3 o -R2-R3; R1 es arilo, heteroarilo, heteroarilo bicíclico, cicloalquilo o heterocicloalquilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior, hidroxi, hidroxi-alquilo inferior, alcoxi inferior, halógeno, nitro, amino, amido, ciano, oxo o haloalquilo inferior; R2 es -C(=0), -C(=0)0, -C(=0)NR2', -NHC(=0)0, - C(R2')2, -O, -S, -C(=NH)NR2' O -S(=0)2; cada R2' es independientemente H o alquilo inferior; R3 es H o R4; R4 es alquilo inferior, haloalquilo inferior, alcoxi inferior, amino, alquilo inferior-amino, cicloalquil-amino, dialquilo inferior-amino, arilo, arilalquilo, alquilarilo, heteroarilo, alquil-heteroarilo, heteroaril-alquilo, cicloalquilo, alquil-cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, heterocicloalquilo, alquil-heterocicloalquilo, heterocicloalquil-alquilo, cicloalquilo bicíclico, heterocicloalquilo bicíclico, espirocicloalquilo, espiroheterocicloalquilo o espiroheterocicloalquilo bicíclico, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior, halógeno, alquilo inferior-amino, dialquilo inferior-amino, hidroxi, hidroxialquilo inferior, alcoxi inferior, alcanoilo inferior, halógeno, nitro, amino, amido, acilo, ciano, oxo, sulfonilo, alquilo inferior sulfonilo, guanidino, hidroxi1-amino, carboxi, carbamoilo, carbamato, haloalcoxi inferior, heterocicloalquilo o haloalquilo inferior, en donde dos grupos alquilo inferior juntos pueden formar un anillo; Y4 es Y4a, Y4b, Y4c o Y4d; Y4a es H o halógeno; Y4b es alquilo inferior opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de haloalquilo inferior, halógeno, hidroxi, amino, ciano y alcoxi inferior; Y4c es cicloalquilo inferior opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo inferior, haloalquilo inferior, halógeno, hidroxi, amino, ciano y alcoxi inferior; y Y4d es amino opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior, alcoxi alquilo inferior o hidroxialquilo inferior; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

La solicitud proporciona un método para tratar una afección inflamatoria y/o autoinmune que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la fórmula I, mezclado con al menos un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

Descripción Detallada de la Invención Definiciones Como se utiliza en la presente, la frase "un" o "una" entidad indica una o más de esta entidad; por ejemplo, un compuesto indica uno o más compuestos o al menos un compuesto. Como tales, los términos "un" (o "uno"), "uno o más" y "al menos uno" pueden utilizarse indistintamente.

La frase "como se define en la presente antes" indica la definición más amplia de cada grupo que se indica en la Breve Descripción de la Invención o en la reivindicación más amplia. En todas las demás modalidades que se indican a continuación, los sustituyentes, que pueden estar presentes en cada modalidad y que no se definen explícitamente, conservan la definición más amplia que se indica en la Breve Descripción de la Invención.

Como se utilizan en esta descripción, ya sea en una frase transitiva, ya sea en el cuerpo de conformidad con la reivindicación, los términos "comprende(n) " y "comprender" deberán interpretarse como provistos de un significado abierto. Es decir, los términos deberán interpretarse como sinónimos de las frases "tienen al menos" o "incluyen al menos". Cuando se usa en el contexto de un proceso, el término "comprender" significa que el proceso incluye menos las etapas mencionadas, pero puede incluir otras etapas adicionales. Cuando se usa en el contexto de un compuesto o composición, el término "comprender" significa que el compuesto o composición incluye menos las características o componentes mencionados, pero puede incluir también otras características o componentes adicionales.

Como se utiliza en la presente, a menos que se indique explícitamente otra cosa, la palabra "o" se usa en el sentido "inclusivo" de "y/o" y no en el sentido "exclusivo" de "ya sea/o".

El término "independientemente" como se utiliza en la presente indica que una variable se aplica en cualquier caso, independientemente de la presencia o la ausencia de otra variable que tenga el mismo significado o un significado distinto dentro del mismo compuesto. Por lo tanto, en un compuesto, en donde R" aparece dos veces y se define como "independientemente carbono o nitrógeno", los dos R" pueden ser carbonos, los dos R" pueden ser nitrógenos, o un R" puede ser carbono y el otro nitrógeno.

Si cualquier variable aparece más de una vez en cualquier porción o fórmula que represente y describa a los compuestos empleados o reivindicados en la presente invención, su definición en cada aparición es independiente de su definición en las demás apariciones. Además, las combinaciones de sustituyentes y/o variables solamente son permisibles si tales compuestos dan lugar a compuestos estables.

Los símbolos al final de un enlace o "- " trazados a través de un enlace indican en cada caso el punto de unión de un grupo funcional u otra porción química a la porción de la molécula de la que forma parte. Por ejemplo: Un enlace trazado en el sistema de anillos (a diferencia del conectado a un vértice concreto) indica que el enlace puede unirse a cualquiera de los átomos adecuados de tal anillo.

Los términos "opcional" u "opcionalmente" utilizados en la presente indican que el acontecimiento o circunstancia que se menciona a continuación puede ocurrir, pero no de forma forzosa y que la definición incluye los casos en los que el acontecimiento o circunstancia suceden y los casos en los que no sucede. Por ejemplo "opcionalmente sustituido" indica que la porción opcionalmente sustituida puede incorporar un átomo de hidrógeno o un sustituyente.

La frase "enlace opcional" indica que el enlace puede estar presente o no y que la descripción incluye los enlaces sencillo, doble y triple. Si un sustituyente se designa como "enlace" o "ausente", entonces los átomos unidos a los sustituyentes estarán conectados directamente.

El término "aproximadamente" utilizado en la presente indica en la región de, a grandes rasgos, o alrededor. Cuando se usa el término "aproximadamente" en combinación con un intervalo numérico, entonces modifica este intervalo extendiendo los límites superior e inferior del intervalo numérico determinado. En general, el término "aproximadamente" se usa para modificar un valor numérico por encima y por debajo del valor establecido con una varianza del 20 %.

Ciertos compuestos de la fórmula I pueden presentar tautomería. Los compuestos tautómeros pueden existir en dos o más especies interconvertibles. Los tautómeros prototrópicos resultan de la migración de un átomo de hidrógeno unido covalentemente entre dos átomos. Normalmente los tautómeros están en equilibrio, los intentos de aislar un tautómero individual producen por lo general una mezcla, cuyas propiedades físicas y químicas son consistentes con una mezcla de compuestos. La posición de equilibrio depende de las propiedades químicas de la molécula. Por ejemplo, en muchos aldehidos y cetonas alifáticos, como puedan ser el acetaldehído, predomina la forma ceto, mientras que en los fenoles predomina la forma enol. Los tautómeros prototrópicos habituales incluyen a los tautómeros ceto/enol (-C(=0)-CH--C(-OH)=CH-), amida/ácido imídico (-C(=0)-NH- ¾ -C(-0H)=N-) y amidina (-C(=NR)-NH- -C(-NHR)=N-). Los dos últimos son especialmente frecuentes en los anillos heteroarilo y heterocielilo y la presente invención abarca todas las formas tautómeras de estos compuestos.

Los términos téenicos y científicos que se utilizan en la presente tienen los significados que se les atribuyen normalmente entre los expertos en el ámbito al que se refiere la presente invención, a menos que se definan de otro modo. Se hace referencia en la presente a las diversas metodologías y materiales, que los expertos en la materia ya conocen. Entre los manuales de referencia que definen los principios generales de la farmacología cabe mencionar el de Goodman y Gilman: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10a ed., McGraw Hill Companies Inc., Nueva York (2001). Para llevar a la práctica la presente invención se pueden utilizar los materiales y/o métodos adecuados, que los expertos ya conocen. Sin embargo, se describen los materiales y métodos preferidos. Los materiales, reactivos y similares que se mencionan en la descripción que sigue y en los ejemplos pueden adquirirse a proveedores comerciales, a menos que se indique otra cosa.

Las definiciones descritas en la presente pueden completarse para formar combinaciones químicamente relevantes, por ejemplo "heteroalquilarilo", "haloalquilheteroarilo", "arilalquilheterocielilo", "alquilcarbonilo", "alcoxialquilo" y similares. Cuando el término "alquilo" se usa como sufijo después de otro término, por ejemplo en "fenilalquilo" o "hidroxialquilo", esto se efectúa para indicar un grupo alquilo, ya definido antes, que está sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del otro grupo que se nombra específicamente. Así por ejemplo "fenilalquilo" indica un grupo alquilo que tiene uno o dos sustituyentes fenilo e incluye, por lo tanto, bencilo, feniletilo y bifenilo. Un "alquilaminoalquilo" es un grupo alquilo que tiene uno o dos sustituyentes alquilamino. "Hidroxialquilo" incluye 2-hidroxietilo, 2-hidroxipropilo, 1-(hidroximetil)-2-metilpropilo, 2-hidroxibutilo, 2,3-dihidroxibutilo, 2-(hidroximetil), 3-hidroxipropilo, etcétera. Por consiguiente, como se utiliza en la presente, el término "hidroxialquilo" define un subconjunto de grupos heteroalquilo que se definen a continuación. El término (ar)alquilo indica un grupo aralquilo o alquilo no sustituido. El término (hetero)arilo o (het)arilo indica un grupo arilo o heteroarilo.

El término "espirocicloalquilo" como se utiliza en la presente indica un grupo cicloalquilo espirocíclico, por ejemplo espiro [3.3]heptano. El término espiroheterocicloalquilo como se utiliza en la presente indica un heterocicloalquilo espirocíclico, tal como por ejemplo 2,6-diaza-espiro[3.3]heptano.

Como se utiliza en la presente, el término "acilo" indica un grupo de la fórmula -C(=0)R, en donde R es hidrógeno o alquilo inferior, como se define en la presente. Como se utiliza en la presente, el término "alquilcarbonilo" indica un grupo de la fórmula C(=0)R, en donde R es alquilo como se define en la presente. Como se utiliza en la presente, el término acilo de Ci-6 indica un grupo -C(=0)R, que tiene 6 átomos de carbono. Como se utiliza en la presente, el término "arilcarbonilo" indica un grupo de la fórmula C(=0)R, en donde R es un grupo arilo; como se utiliza en la presente, el término "benzoilo" indica un grupo "arilcarbonilo", en donde R es fenilo.

El término "éster" como se utiliza en la presente indica un grupo de la fórmula -C(=0)0R, en donde R es alquilo inferior, como se define en la presente.

Como se utiliza en la presente, el término "alquilo" indica un residuo hidrocarburo saturado, monovalente, de cadena lineal o ramificada, que contiene de 1 a 10 átomos de carbono. El término "alquilo inferior" indica un residuo hidrocarburo de cadena lineal o ramificada, que contiene de 1 a 6 átomos de carbono. Como se utiliza en la presente, "alquilo de C1-10" indica un alquilo compuesto de 1 - 10 carbonos. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a grupos alquilo inferior metilo, etilo, propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo, t-butilo o pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, heptilo y octilo.

Cuando el término "alquilo" se usa como sufijo después de otro término, por ejemplo en "fenilalquilo" o "hidroxialquilo", esto indica que un grupo alquilo, ya definido antes, está sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados del otro grupo que se menciona específicamente. Así, por ejemplo, "fenilalquilo" indica el radical R'R"-, en donde R' es un radical fenilo y R" es un radical alquileno, que se define en esta descripción, dando por supuesto que el punto de unión de la porción fenilaquilo se halla en el radical alquileno. Los ejemplos de radicales arilalquilo incluyen, pero no se limitan a bencilo, feniletilo, 3-fenilpropilo. Los términos "arilalquilo" o "aralquilo" se interpretan de modo similar, excepto que R' es un radical arilo. Los términos "(het)arilalquilo" o "(het)aralquilo" se interpretan de modo similar, excepto que R' es opcionalmente un radical arilo o heteroarilo.

Los términos "haloalquilo" o "halo-alquilo inferior" o "haloalquilo inferior" indican un residuo hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, en donde uno o más átomos de hidrógeno se sustituyen con uno o más átomos de halógeno.

Como se utiliza en la presente, el término "alquileno" o "alquilenilo" indica un radical hidrocarburo saturado divalente lineal, de 1 a 10 átomos de carbono (por ejemplo, (CH2)n) o un radical hidrocarburo saturado divalente ramificado, de 2 a 10 átomos de carbono (por ejemplo, -CHMe-o -CH2CH(i-Pr)CH2-), a menos que se indique otra cosa. Excepto en el caso del metileno, las valencias abiertas de un grupo alquileno no estarán unidas al mismo átomo. Los ejemplos de radicales alquileno incluyen, pero no se limitan a metileno, etileno, propileno, 2-metil-propileno, 1,1-dimetil-etileno, butileno, 2-etilbutileno.

Como se utiliza en la presente, el término "alcoxi" indica un grupo -O-alquilo, en donde alquilo tiene el significado definido anteriormente, tal como metoxi, etoxi, n-propiloxi, i-propiloxi, n-butiloxi, i-butiloxi, t-butiloxi, pentiloxi, hexiloxi, incluidos sus isómeros. Como se utiliza en la presente, "alcoxi inferior" indica un grupo -O-alquilo, en donde alquilo es "alquilo inferior" como se define anteriormente. Como se utiliza en la presente, "alcoxi de Ci-io" indica un -0-alquilo, en donde el alquilo es de C1-10.

El término "PCyV' indica una fosfina trisustituida con tres porciones cíclicas.

Los términos "haloalcoxi" o "haloalcoxi inferior" indican un grupo alcoxi inferior, en donde uno o más átomos de hidrógeno se sustituyen con uno o más átomos de halógeno.

El término "hidroxialquilo" como se utiliza en la presente indica un radical alquilo en donde uno a tres átomos de hidrógeno de diferentes átomos de carbono se reemplazan por grupos hidroxilo.

Los términos "alquilsulfonilo" y "arilsulfonilo" como se utilizan en la presente indican un grupo de la fórmula -S(=0)2R, en donde R es alquilo o arilo respectivamente y alquilo y arilo son como se definen en la presente. El término "heteroalquilsulfonilo" como se utiliza en la presente indica un grupo de la fórmula -S(=0)2, en donde R es "heteroalquilo", como se define en la presente.

Los términos "alquilsulfonilamino" y "arilsulfonilamino" como se utilizan en la presente indican un grupo de la fórmula -NR'S(=0)2R, en donde R es alquilo o arilo, respectivamente, R' es hidrógeno o alquilo de C1-3 y alquilo y arilo son como se definen en la presente.

Como se utiliza en la presente, el término "cicloalquilo" indica un anillo carbocíclico saturado que tiene de 3 a 8 átomos de carbono, es decir ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo o ciclooctilo. Como se utiliza en la presente, "cicloalquilo de C3-7" indica un cicloalquilo compuesto de 3 - 7 carbonos en el anillo carbocíclico.

El término "carboxi-alquilo" como se utiliza en la presente indica una porción alquilo, en donde un átomo de hidrógeno se remplaza con un carboxilo, dando por supuesto que el punto de unión del resto heteroalquilo se halla en un átomo de carbono. El término "carboxi" o "carboxilo" indica una porción -CO2H.

El término "heteroarilo" o "heteroaromático" como se utiliza en la presente significa un radical monocíclico o bicíclico de 5 a 12 átomos en el anillo que tiene al menos un anillo aromático o parcialmente insaturado que contiene de cuatro a ocho átomos por anillo, que incorpora uno o más heteroátomos N, O o S, los demás átomos del anillo son carbonos, dando por supuesto que el punto de unión del radical heteroarilo se halla situado en el anillo aromático. Los expertos en la téenica ya saben que los anillos heteroarilo tienen un carácter menos aromático que sus oponentes constituidos exclusivamente por átomos de carbono. Por consiguiente, para los fines de esta invención, un grupo heteroarilo necesita poseer solamente un cierto grado de carácter aromático. Los ejemplos de porciones heteroarilo incluyen heterociclos aromáticos monocíclicos que tienen 5 a 6 átomos en el anillo y 1 a 3 heteroátomos incluyen, pero no se limitan a, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, oxazolilo, 4,5-dihidro-oxazolilo, 5,6-dihidro-4H-[1,3]oxazolilo, isoxazol, tiazol, isotiazol, triazolina, tiadiazol y oxadiazolina, que pueden estar opcionalmente sustituidos con uno o más sustituyentes, con preferencia uno o dos, seleccionados de hidroxi, ciano, alquilo, alcoxi, tio, haloalcoxi inferior, alquiltio, halógeno, haloalquilo, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, halógeno, amino, alquilamino, dialquilamino, aminoalquilo, alquilaminoalquilo y dialquilaminoalquilo, nitro, alcoxicarbonilo y carba oilo, alquilcarbamoilo, dialquilcarbamoilo, arilcarbamoilo, alquilcarbonilamino y arilcarbonilamino. Los ejemplos de porciones bicíclicas incluyen, pero no se limitan a, quinolinilo, isoquinolinilo, benzofurilo, benzotiofenilo, benzoxazol, bencisoxazol, benzotiazol, naftiridinilo, 5,6,7,8-tetrahidro-[1,6]naftiridinilo y bencisotiazol. Las porciones bicíclicas pueden estar opcionalmente sustituidas en ambos anillos; sin embargo, el punto de unión se halla en el anillo que contiene un heteroátomo.

El termino "heterociclilo" , "heterocicloalquilo" o "heterociclo" como se utiliza en la presente indica un radical cíclico saturado monovalente, que contiene uno o más anillos, con preferencia uno o dos anillos, incluidos los sistemas de anillo espirocíclicos, que contiene de tres a ocho átomos por anillos, e incorpora uno o más heteroátomos al anillo (elegidos entre N, 0 y S(0)0-2), y que pueden estar opcionalmente sustituidos independientemente por uno o más, con preferencia por uno o dos sustituyentes seleccionados de hidroxi, oxo, ciano, alquilo inferior, alcoxi inferior, haloalcoxi inferior, alquiltio, halógeno, haloalquilo inferior, hidroxialquilo, nitro, alcoxicarbonilo, amino, alquilamino, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, alquilaminosulfonilo, arilaminosulfonilo, alquilsulfonilamino, arilsulfonila ino, alquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, alquilcarbonilamino, arilcarbonilamino, y las formas iónicas de los mismos, a menos que se indique otra cosa. Los ejemplos de radicales heterocíclicos incluyen, pero no se limitan a, morfolinilo, piperazinilo, piperidinilo, azetidinilo, pirrolidinilo, hexahidroazepinilo, oxetanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, oxazolidinilo, tiazolidinilo, isoxazolidinilo, tetrahidropiranilo, tiomorfolinilo, quinuclidinilo e imidazolinilo y las formas iónicas de los mismos. Los ejemplos pueden ser también bicíclicos, por ejemplo, 3,8-diaza-biciclo [3.2.1]octano, 2,5-diaza-biciclo-[2.2.2]octano uu octahidro-pirazino [2,1- c] [1 , 4] oxazina .

Inhibidores de Btk La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I : en donde: Z Z1 es un enlace sencillo o doble; X es CH, CH2 O N; R es H, -R1, -R!-R^R3, -R!-R3 O -R2-R3; R1 es arilo, heteroarilo, heteroarilo bicíclico, cicloalquilo o heterocicloalquilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior, hidroxi, hidroxi-alquilo inferior, alcoxi inferior, halógeno, nitro, amino, amido, ciano, oxo o haloalquilo inferior; R2 es -C(=0), -C(=0)0, -C(=0)NR2', -NHC(=0)0, - C(R2')2, -O, -S, -C(=NH)NR2' O -S(=0)2; cada R2' es independientemente H o alquilo inferior; R3 es H o R4; R4 es alquilo inferior, haloalquilo inferior, alcoxi inferior, amino, alquilo inferior-amino, cicloalquil- amino, dialquilo inferior-amino, arilo, arilalquilo, alquilarilo, heteroarilo, alquil-heteroarilo, heteroaril-alquilo, cicloalquilo, alquil-cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, heterocicloalquilo, alquil-heterocicloalquilo, heterocicloalquil-alquilo, cicloalquilo bicíclico, heterocicloalquilo bicíclico, espirocicloalquilo, espiroheterocicloalquilo o espiroheterocicloalquilo bicíclico, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior, halógeno, alquilo inferior-amino, dialquilo inferior-amino, hidroxi, hidroxialquilo inferior, alcoxi inferior, alcanoilo inferior, halógeno, nitro, amino, amido, acilo, ciano, oxo, sulfonilo, alquilo inferior sulfonilo, guanidino, hidroxil-amino, carboxi, carbamoilo, carbamato, haloalcoxi inferior, heterocicloalquilo o haloalquilo inferior, en donde dos grupos alquilo inferior juntos pueden formar un anillo; Y4 es Y4a, Y4b, Y4C o Y4d; Y4a es H o halógeno; Y4b es alquilo inferior opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de haloalquilo inferior, halógeno, hidroxi, amino, ciano y alcoxi inferior; Y4c es cicloalquilo inferior opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo inferior, haloalquilo inferior, halógeno, hidroxi, amino, ciano y alcoxi inferior; y Y4d es amino opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior, alcoxi alquilo inferior o hidroxialquilo inferior; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Se da también por supuesto que cada modalidad referida a un residuo específico R, R1, R2, R3, R4, X, R2' e Y4 descrito en la presente puede combinarse con cualquier otra modalidad relativa a otro residuo R, R1, R2, R3, R4, X, R2' e Y4descrito en la presente.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde ZZZ1 es un enlace doble; y X es N.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde - es un enlace sencillo; y X es CH2.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde ZZZ1 es un enlace doble; X es N; R es -R1-R2-R3; R1 es piridilo; R2 es -S(=0)2, R3 es R4; y R4 es alquilo inferior.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde - es un enlace doble; X es N; R es -R1-R2-R3; R1 es piridilo; R2 es -C(CH3)2; R3 es R4; y R4 es alquilo inferior-amino, dialquilo inferior-amino o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde - es un enlace doble; X es N; R es -R1-R2-R3; R es fenilo o piridilo R2 es -C (=0) R es R y R4 es morfolina o piperazina opcionalmente sustituida con uno o más alquilo inferior.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde es un enlace doble; X es N; y Y4 es tere-butilo.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde ZZZ1 es un enlace doble; X es CH; y Y4 es en donde Y5 y Y6 son independientemente H, alquilo inferior, o haloalquilo inferior.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde - es un enlace doble; X es N; y Y4 es en donde Y5 es H, halógeno, alquilo inferior o haloalquilo inferior.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde es un enlace doble; X es N; y Y4 es en donde Y5 y Y6 son independientemente H o alquilo inferior.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde - es un enlace doble; X es N Y es tere-butilo R es -R!-R3; R1 es piridilo o pirazolopirazina; R3 es R4; y R4 es alquilo inferior opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo o alquil-heterocicloalquilo.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde - es un enlace doble; X es N Y es tere-butilo R es -R -R -R R1 es piridilo; R2 es -C(CH3)2; R3 es R4; y R4 es alquilo inferior-amino, dialquilo inferior-amino o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde ZZZ es un enlace doble; X es N; Y es tere-butilo R es -R -R -R R1 es piridilo; R2 es -C(=0); R3 es R4; y R4 es heterocicloalquilo opcionalmente sustituido o espiroheterocicloalquilo bicíclico.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I, en donde - es un enlace doble; X es N Y es tere-butilo R es -R1-R2-R3; R1 es piridilo; R2 es -C(=0); R3 es R4; y R4 es morfolina o piperazma opcionalmente sustituida.

La solicitud proporciona un compuesto de la fórmula I seleccionado del grupo que consiste de: 2-(3-{5-[5-(2-azetidin-1-il-1,1-dimetil-etoxi)-piridin-2-ilamino]-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-2-hidroximetil-fenil)-6-terc-butil-2H-ftalazin-l-ona; 6-terc-butil-2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(1'-metil-1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-2H-ftalazin-l-ona; 2-{3-[5-(5-azetidin-l-ilmetil-l-metil-1H-pirazol-3-ilamino)-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-2-hidroximetil-fenil}-6-terc-butil-2H-ftalazin-l-ona; 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{1-metil-5-[5-((S)-l-metil-pirrolidin-2-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-l-ona; 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-((S)-l-metil-pirrolidin-3-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-l-ona; 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{1-metil-5-[5-((R)-l-metil-pirrolidin-3-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-l-ona; 2-(2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(1'-metil-1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il)-2-metil-propionitrilo; 6-terc-butil-2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6 oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-2H-ftalazin-1-ona; 6-terc-butil-2-{3-[5-(l'-etil-l',2',3',4',5'6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-2-hidroximetil-fenil}-2H-ftalazin-1-ona; 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-(morfolina-4-carbonil)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-l-ona; 2-[2-(3-{5-[5-(2-azetidin-l-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2-ilamino]-l-metil-6-oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il} 2-hidroxi-metil-fenil)-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il]-2-metil-propionitrilo; 6-terc-butil-2-[2-hidroximetil-3-(5-{5-[2-(3-hidroxi-propil-amino)-1,1-dimetil-etoxi]-piridin-2-ilamino}-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il)-fenil]-2H-ftalazin 1-ona; 6-terc-butil-2-{2-hidroximetil-3-[1-metil-5-(1'-oxetan-3-il-1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-2H-ftalazin-1-ona; 6-terc-butil-2-[3-(5-{5-[2-(3,3-difluoro-azetidin-1-il)-1,1-dimetil-etoxi]-piridin-2-ilamino}-l-metil-6-oco-1,6-dihidro-piridazin-3-il)-2-hidroximetil-fenil]-2H- ftalazin-1-ona; y 2-(2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(1'-metil-1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-l,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-6-il)-2-metil-propionitrilo.

La solicitud proporciona un método para tratar una afección inflamatoria o autoinmune, que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona un método para tratar la artritis reumatoide, que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona un método para tratar el asma, que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva de la fórmula I.

La solicitud proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la fórmula I mezclado con al menos un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

La solicitud proporciona el uso del compuesto de la fórmula I en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio.

La solicitud proporciona el uso del compuesto de la fórmula I en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un trastorno autoinmune.

La solicitud proporciona el uso del compuesto de la fórmula I en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de la artritis reumatoide.

La solicitud proporciona el uso del compuesto de la fórmula I en la manufactura de un medicamento para el tratamiento del asma.

La solicitud proporciona el uso de un compuesto antes descrito para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o autoinmune.

La solicitud proporciona el uso de un compuesto antes descrito para el tratamiento de la artritis reumatoide.

La solicitud proporciona el uso de un compuesto antes descrito para el tratamiento del asma.

La solicitud proporciona un compuesto antes descrito para el uso en el tratamiento de un trastorno de afección inflamatoria o autoinmune.

La solicitud proporciona un compuesto antes descrito para el uso en el tratamiento de la artritis reumatoide.

La solicitud proporciona un compuesto antes descrito para el uso en el tratamiento del asma.

La solicitud proporciona un compuesto, método o composición descritos en la presente.

La solicitud proporciona un método para tratar un trastorno inflamatorio o autoinmune que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I' inhibidor de Btk.

La solicitud proporciona un método para tratar la artritis que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I' inhibidor de Btk.

La solicitud proporciona un método para tratar el asma que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I' inhibidor de Btk.

La solicitud proporciona un método para inhibir la proliferación de las células B que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I' inhibidor de Btk.

La solicitud proporciona un método para inhibir la actividad de Btk que comprende administrar el compuesto de cualquiera de la fórmula I' inhibidor de Btk, en donde el compuesto inhibidor de Btk exhibe una IC50 de 50 micromolar o inferior en el ensayo bioquímico in vitro de la actividad de Btk.

En una variante del método anterior, el compuesto inhibidor de Btk exhibe una IC50 de 100 nanomolar o inferior en el ensayo bioquímico in vitro de la actividad de Btk.

En otra variante del método anterior, el compuesto inhibidor de Btk exhibe una IC5o de 10 nanomolar o inferior en el ensayo bioquímico in vitro de la actividad de Btk.

La solicitud proporciona un método para tratar una afección inflamatoria que comprende coadministrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto antiinflamatorio en combinación con el compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona un método para tratar la artritis que comprende coadministrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto antiinflamatorio en combinación con el compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona un método para tratar un linfoma o una leucemia de células BCR-ABL1+ administrando a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la fórmula I' inhibidor de Btk, mezclado con al menos un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

La solicitud proporciona el uso del compuesto de la fórmula I en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio.

La solicitud proporciona el uso del compuesto de la fórmula I' en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un trastorno autoinmune.

La solicitud proporciona un compuesto, método o composición descritos en la presente.

Compuestos y Preparación En la tabla siguiente se proporcionan ejemplos de compuestos representativos contemplados por la presente invención y abarcados por el alcance de la invención. Estos ejemplos y preparaciones que siguen se proporcionan para permitir a los expertos una mejor comprensión y puesta en práctica de la presente invención. No deberán considerarse como una limitación del alcance de la invención, sino como meramente ilustrativos y representativos de la misma.

En general, en esta aplicación se usa la nomenclatura basada en AUTONOM™ v. 4.0, un sistema computarizado del Instituto Beilstein para la generación de la nomenclatura sistemática de la IUPAC. Si surgiera una discrepancia entre la estructura representada y el nombre atribuido a la misma, entonces deberá darse prioridad a la estructura representada. Además, si la estereoquímica de una estructura o porción de una estructura no se indica, por ejemplo con líneas de trazo continuo o discontinuo, entonces la estructura o porción de la estructura deberá interpretarse que abarca a todos los estereoisómeros de la misma.

La tabla I representa los ejemplos de compuestos de piridazinona de acuerdo con la fórmula genérica I.

Tabla I 0 5 0 5 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 5 0 Esquemas de reacción generales de síntesis La solicitud proporciona un proceso para preparar el compuesto de la fórmula II, en donde Yi es un ácido borónico o un boronato de pinacol, que comprende la etapa de: 5 I II 0 calentar un compuesto de la fórmula I de aproximadamente 40°C a 150°C, en la presencia de bis(pinacolato)diboro, un catalizador de paladio, una base y una fosfina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en 5 donde la fosfina es PCy3, un compuesto alquil-mono-fosfina, un compuesto aril -mono-fosf ina, un compuesto alquil-difosf ina o un compuesto aril-dif osf ina .

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la base es una base inorgánica, que incluye carbonato de potasio, carbonato de cesio, fosfato de potasio y acetato de potasio, o una base amina, incluyendo diciclohexilamina y trietilamina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde el catalizador de paladio es el acetato de paladio(II) o bis (dibencilidenoacetona) paladio ( 0 ) , tris (dibencilideno-acetona) dipaladio ( 0 ) o similares .

La solicitud proporciona un proceso para preparar el compuesto de la fórmula IV, que comprende las etapas de : II III IV a) calentar un compuesto de la fórmula II , en donde Y es un ácido borónico o un boronato de pinacol o una mezcla de los dos , de aproximadamente 40 °C a 150 °C, en la presencia de un compuesto de la fórmula III , un catalizador de paladio, una base y una f osf ina; y b) tratar el producto de la etapa a) con una base, tal como hidróxido de sodio o hidróxido de potasio o carbonato de potasio o carbonato de cesio, en un solvente tal como metanol, a una temperatura entre aproximadamente temperatura ambiente y 40 ° C .

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la fosfina es PCy3, un compuesto alquil-mono-fosfina, un compuesto aril-mono-fosfina, un compuesto alquil-difosfina o un compuesto aril-difosfina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la base es una base inorgánica, que incluye carbonato de potasio, carbonato de cesio, fosfato de potasio y acetato de potasio, o una base amina, incluyendo diciclohexilamina y trietilamina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde el catalizador de paladio es acetato de paladio(II) o bis(di-bencilidenoacetona)paladio(0), tris (dibencilideno-acetona)dipaladio(0) o similares.

La solicitud proporciona un proceso para preparar el compuesto de la fórmula IV, que comprende las etapas de: IV a) calentar un compuesto de la fórmula aproximadamente 40°C a 150°C, en la presencia del bis (pinacolato)diboro, un catalizador de paladio, una base y una fosfina; b) calentar el producto de la etapa a) sin aislamiento con coapuesto de la fórmula III de aproximadamente 40°C a 150°C, en la presencia de un compuesto de la fórmula VII, un catalizador de paladio, una base y una fosfina; y c) tratar el producto de la etapa b) con una base tal como hidróxido de sodio o hidróxido de potasio o carbonato de potasio o carbonato de cesio, en un solvente tal como metanol, a una temperatura entre aproximadamente temperatura anibiente y 40°C.

La solicitud proporciona un proceso para preparar el compuesto de la fórmula IV, que comprende las etapas de: .

II v IV a) calentar un conpuesto de la fórmula II, en donde Yi es un ácido borónico o un boronato de pinacol o una mezcla de los dos, de aproximadamente 40°C a 150°C, en la presencia de un compuesto de la fórmula V, un catalizador de paladio, una base y una fosfina; y b) tratar el producto de la etapa a) con un agente reductor tal como borohidruro de sodio o similares , en un solvente tal como metanol o una mezcla de metanol y agua, a una temperatura alrededor de la temperatura ambiente.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la fosfina es PCy3, un compuesto alquil-mono-fosfina, un compuesto aril-mono-fosfina, un compuesto alquil-difosfina o un compuesto aril-difosfina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la base es una base inorgánica, que incluye carbonato de potasio, carbonato de cesio, fosfato de potasio y acetato de potasio, o una base amina, incluyendo diciclohexilamina y trietilamina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde el catalizador de paladio es acetato de paladio(II) o bis(di-bencilidenoacetona)paladio(0), tris (dibencilideno-acetona)dipaladio(0) o similares.

La solicitud proporciona un proceso para preparar el compuesto de la fórmula VII, que comprende las etapas de: II VI VII a) calentar un compuesto de la fórmula II, en donde Yi es un ácido borónico o un boronato de pinacol o una mezcla de los dos, de aproximadamente 40°C a 150°C, en la presencia de un compuesto de la fórmula VI, un catalizador de paladio, una base y una fosfina; y b) tratar el producto de la etapa a) con un agente reductor tal como borohidruro de sodio o similares, en un solvente tal como metanol o una mezcla de metanol y agua, a una temperatura alrededor de la temperatura ambiente.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la fosfina es PCy3, un compuesto alquil-mono-fosfina, un compuesto aril-mono-fosfina, un compuesto alquil-difosfina o un compuesto aril-difosfina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la base es una base inorgánica, que incluye carbonato de potasio, carbonato de cesio, fosfato de potasio y acetato de potasio, o una base amina, incluyendo diciclohexilamina y trietilamina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde el catalizador de paladio es acetato de paladio(II) o bis(di-bencilidenoacetona)paladio(0), tris (dibencilideno-acetona)dipaladio(0) o similares.

La solicitud proporciona un proceso para preparar el compuesto de la fórmula VIII, en donde Yi es un ácido borónico o un boronato de pinacol, que comprende la etapa de: V VIII calentar un compuesto de la fórmula V en la presencia de bis(pinacolato)diboro, un catalizador de paladio, una base y una fosfina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la fosfina es PCy3, un compuesto alquil-mono-fosfina, un compuesto aril-mono-fosfina, un compuesto alquil-difosfina o un compuesto aril-difosfina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la base es una base inorgánica, que incluye carbonato de potasio, carbonato de cesio, fosfato de potasio y acetato de potasio, o una base amina, incluyendo diciclohexilamina y trietilamina .

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde el catalizador de paladio es acetato de paladio(II) o bis (di-bencilidenoacetona)paladio(0), tris(dibencilideno-acetona)dipaladio (0) o similares.

La solicitud proporciona un proceso para preparar el compuesto de la fórmula IV, que comprende las etapas de: .

I VIII IV a) calentar un compuesto de la fórmula VIII, en donde Yi es un ácido borónico o un boronato de pinacol o una mezcla de los dos, de aproximadamente 40°C a 150°C, en la presencia de un compuesto de la fórmula I, un catalizador de paladio, una base y una fosfina; y b) tratar el producto de la etapa a) con un agente reductor tal como borohidruro de sodio o similares, en un solvente tal como metanol o una mezcla de metanol y agua, a una temperatura alrededor de la temperatura ambiente.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la fosfina es PCy3, un compuesto alquil-mono-fosfina, un compuesto aril-mono-fosfina, un compuesto alquil-difosfina o un compuesto aril-difosfina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde la base es una base inorgánica, que incluye carbonato de potasio, carbonato de cesio, fosfato de potasio y acetato de potasio, o una base amina, incluyendo diciclohexilamina y trietilamina.

La solicitud proporciona el proceso anterior, en donde el catalizador de paladio es acetato de paladio(II) o bis(di-bencilidenoacetona)paladio(0), tris (dibencilideno-acetona)dipaladio(0) o similares.

Composiciones farmacéuticas y administración Los compuestos de la presente invención pueden formularse en una gran variedad de formas de dosificación oral y portadores. La administración oral puede realizarse en la forma de tabletas, tabletas recubiertas, cápsulas de gelatina dura y blanda, soluciones, emulsiones, jarabes o suspensiones. Los compuestos de la presente invención son eficaces cuando se administran por otras vías, incluida la continua (goteo intravenoso), tópica, parenteral, intramuscular, intravenosa, subcutánea, transdérmica (que incluye un agente mejorador de la penetración), bucal, nasal, administración por inhalación y mediante supositorio, entre otras vías de administración. El modo preferido de administración es generalmente el oral, utilizando un régimen conveniente de dosis diarias, que puede ajustarse de acuerdo con la severidad de la enfermedad y a la respuesta del paciente al ingrediente activo.

Un compuesto o compuestos de la presente invención, así como sus sales utilizables farmacéuticamente, junto con uno o varios excipientes, portadores o diluyentes convencionales, pueden integrarse en la forma de composiciones farmacéuticas y dosis unitarias. Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación unitarias pueden contener los ingredientes convencionales en proporcionales convencionales, con o sin compuestos o principios activos adicionales y las formas de dosificación unitarias pueden contener cualquier cantidad efectiva adecuada del ingrediente activo, proporcionada al intervalo de dosis diarias que se pretende administrar. Las composiciones farmacéuticas pueden emplearse en la forma de sólidos, por ejemplo tabletas o cápsulas rellenas, semisólidos, polvos, formulaciones de liberación prolongada o líquidos, por ejemplo soluciones, suspensiones, emulsiones, elixires o cápsulas rellenas para el uso oral; o en la forma de supositorios para la administración rectal o vaginal; o en la forma de soluciones inyectables estériles para el uso parenteral. Una preparación típica contiene del 5% al 95% de compuesto o compuestos activos (p/p)· El término "preparación" o "forma de dosificación" puede incluir formulaciones tanto sólidas como líquidas del compuesto activo y el experto en la materia sabrá apreciar que un ingrediente activo puede formar parte de diferentes preparaciones en función del órgano o tejido que son objeto del tratamiento, de la dosis deseada y de los parámetros farmacocinéticos.

El término "excipiente" como se utiliza en la presente significa un compuesto que es útil para preparar una composición farmacéutica, es por lo general seguro, no tóxico y no molto en sentido biológico ni en otros sentidos e incluye tanto los excipientes aceptables para uso veterinario como los de uso farmacéutico humano. Los compuestos de esta invención pueden administrarse solos, pero en general se administrarán mezclados con uno o más excipientes, diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables, que se elegirán teniendo en cuenta la vía de administración pretendida y la práctica farmacéutica estándar.

"Farmacéuticamente aceptable" significa que es útil para preparar una composición farmacéutica, que es segura en general, no tóxica y no molta en sentido biológico ni en ningún otro sentido y que incluye que es aceptable para el uso veterinario y también para el uso farmacéutico humano.

Una forma de "sal farmacéuticamente aceptable" de un ingrediente activo puede conferir también inicialmente una propiedad farmacocinética deseable del ingrediente activo, que esté ausente en la forma no salina y puede afectar incluso positivamente en la farmacodinámica del ingrediente activo con respecto a su actividad terapéutica en el organismo. La frase "sal farmacéuticamente aceptable" de un compuesto significa una sal que es farmacéuticamente aceptable y que posee la actividad farmacológica deseada del compuesto original. Tales sales incluyen: (1) las sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares; o formadas con ácidos orgánicos, tales como ácido acético, ácido propiónico, ácido hexanoico, ácido ciclopentanopropiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido láctico, ácido malónico, ácido succínico, ácido málico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido 3- (4-hidroxibenzoil)benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido 1,2-etano- disulfónico, ácido 2-hidroxietansulfónico, ácido bencensulfónico, ácido 4-clorobencensulfónico, ácido 2-naftalensulfónico, ácido 4-toluensulfónico, ácido alcanforsulfónico, ácido 4-metilbiciclo[2.2.2]-oct-2-eno-1-carboxílico, ácido glucoheptónico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido trimetilacético, ácido terc-butilacético, ácido laurilsulfúrico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido hidroxinaftoico, ácido salicílico, ácido esteárico, ácido mucónico y similares; o (2) sales formadas cuando un protón ácido, presente en el compuesto original, se reemplaza por un ion metálico, por ejemplo, un ion de metal alcalino, un ion de metal alcalinotérreo o un ion de aluminio; o se coordina con una base orgánica como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina y similares.

Las preparaciones de forma sólida incluyen polvos, tabletas, píldoras, cápsulas, obleas, supositorios y gránulos dispersables. Un excipiente sólido puede contener además una o más sustancias que actúen además como diluyentes, aromas, solubilizantes, lubricantes, agentes de suspensión, aglutinantes, conservantes, agentes desintegrantes de tabletas o un material de encapsulado. En los polvos, el excipiente es en general un sólido finamente dividido, mezclado con el principio activo finamente dividido. En las tabletas, el principio activo se mezcla por lo general con el excipiente que tiene una capacidad aglutinante suficiente en proporciones adecuadas y se compacta para adquirir la forma y tamaño deseados. Los excipientes adecuados incluyen pero no se limitan a, carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa, pectina, dextrina, almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, una cera de bajo punto de fusión, manteca de cacao y similares. Además del principio activo, las preparaciones sólidas pueden contener colorantes, aromas, estabilizantes, amortiguadores, edulcorantes artificiales y naturales, dispersantes, espesantes, solubilizantes y similares.

Las formulaciones líquidas son también adecuadas para la administración oral e incluyen preparaciones en la forma líquida, entre las que se cuentan emulsiones, jarabes, elixires, soluciones acuosas y suspensiones acuosas. Se incluyen también las preparaciones en la forma sólida que están destinadas a convertirse en preparaciones de forma líquida inmediatamente antes del uso. Las emulsiones pueden prepararse en soluciones, por ejemplo, en soluciones de propilenglicol acuoso o pueden contener agentes emulsionantes, por ejemplo lecitina, monooleato de sorbíta o acacia. Las soluciones acuosas pueden prepararse disolviendo el componente activo en agua y añadiendo los colorantes, aromas, estabilizantes y espesantes adecuados. Las suspensiones acuosas pueden prepararse dispersando el componente activo finamente dividido en agua con un material viscoso, por ejemplo gomas naturales o sintéticas, resinas, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y otros agentes de suspensión ya conocidos.

Los compuestos de la presente invención pueden formularse para la administración parenteral (por ejemplo por inyección, por ejemplo inyección de bolo o infusión continua) y pueden presentarse en formas de dosificación unitarias en ampollas, jeringuillas pre-envasadas, recipientes de infusión de pequeño volumen o recipientes multidosis, que contienen además un conservante. Las composiciones pueden adoptar también la forma de suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, por ejemplo soluciones en polietilenglicol acuoso. Los ejemplos de excipientes aceitosos o no acuosos, diluyentes, solventes o vehículos incluyen propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales (por ejemplo aceite de oliva) y ésteres orgánicos inyectables (p. ej. oleato de etilo) y pueden contener agentes de formulación, por ejemplo agentes conservantes, humectantes, emulsionantes o de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Como alternativa, el principio activo puede presentarse en la forma pulverulenta, obtenida por aislamiento aséptico de sólido estéril o por liofilización de la solución para la reconstitución antes del uso en un vehículo adecuado, por ejemplo agua estéril, libre de pirógenos.

Los compuestos de la presente invención pueden formularse también para la administración tópica sobre la epidermis en la forma de ungüentos, cremas o lociones o en la forma de emplasto (parche) transdérmico. Los ungüentos y las cremas pueden formularse por ejemplo con una base acuosa o aceitosa añadiendo agentes espesantes y/o gelificantes adecuados. Las lociones pueden formularse sobre una base acuosa o aceitosa y llevarán en general uno o más agentes emulsionantes, estabilizantes, dispersantes, agentes de suspensión, espesantes o colorantes. Las formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen las pastillas en la forma de rombos que contienen un principio activo en una base aromatizada, normalmente sacarosa y acacia o tragacanto; las pastillas que contienen el ingrediente activo en una base inerte, por ejemplo gelatina y glicerina o sacarosa y acacia; y las lociones bucales que contiene el principio activo en un portador líquido adecuado.

Los compuestos de la presente invención pueden formularse para la administración en la forma de supositorios. En primer lugar se funde una cera de bajo punto de fusión, por ejemplo una mezcla de glicéridos de ácidos grasos o manteca de cacao y después se dispersa en ella de modo homogéneo el principio activo, por ejemplo por agitación. A continuación se vierte la mezcla homogénea fundida en moldes del volumen adecuado, se deja enfriar y solidificar.

Los compuestos de la presente invención pueden formularse para la administración vaginal. Se conocen como adecuados en la téenica los pesarios, amortiguadores, cremas, geles, pastas, espumas o pulverizadores que, además del principio activo, contienen excipientes que en la técnica se aceptan como adecuados.

Los compuestos de la presente invención pueden formularse para la administración nasal. Las soluciones o suspensiones se aplican directamente a la cavidad nasal por medios convencionales, por ejemplo con un cuentagotas, una pipeta o un nebulizador. Las formulaciones pueden suministrar en la forma de dosis individual o multidosis. En el último caso de un cuentagotas o pipeta, el uso puede efectuarse por parte del mismo paciente que se administra un volumen predeterminado adecuado de la solución o suspensión. En el caso del nebulizador, el uso puede realizarse por ejemplo mediante una bomba pulverizadora que atomice una cantidad fija, calibrada.

Los compuestos de la presente invención pueden formularse para la administración tal como aerosol, en especial para el tracto respiratorio, incluida la administración intranasal. En general, el compuesto deberá tener un tamaño de partícula pequeño, por ejemplo del orden de cinco (5) mieras o menos. Semejante tamaño de partícula puede obtenerse por medios ya conocidos de la téenica, por ejemplo por micronización. Se suministra el principio activo en un envase presurizado que contiene un propelente adecuado, por ejemplo un hidrocarburo clorofluorado (CFC), por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano o el diclorotetrafluoroetano o dióxido de carbono u otro gas apropiado. De modo conveniente, el aerosol puede contener además un tensioactivo, tal como lecitina. La dosis de fármaco puede controlarse mediante una válvula calibrada. Como alternativa, los principios activos pueden suministrarse en la forma de polvo seco, por ejemplo una mezcla pulverulenta que contiene el compuesto en una base polvo adecuada tal como lactosa, almidón, derivados de almidón tales como hidroxipropilmetilcelulosa y polivinilpirrolidona (PVP). El excipiente pulverulento formará un gel en la cavidad nasal. La composición en polvo puede presentarse en la forma de dosis unitaria, tal como en cápsulas o cartuchos por ejemplo de gelatina o en envases tipo blíster, a partir de los que se administrará el polvo mediante un inhalador.

Si se desea, las formulaciones pueden prepararse con recubrimiento entérico, adaptado a una administración con liberación sostenida o controlada del principio activo. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden formularse en dispositivos de suministro de fármaco transdérmica o subcutánea. Estos sistemas de suministro son ventajosos cuando es necesaria la liberación sostenida del compuesto y cuando la tolerancia del paciente es crucial para el régimen de tratamiento. Los compuestos de sistemas de suministro transdérmicos se alojan con frecuencia en un soporte sólido adherido sobre la piel. El compuesto de interés puede combinarse además con un mejorador de penetración, tal como azona (l-dodecilaza-cicloheptan-2-ona). Los sistemas de suministro con liberación sostenida se insertan subcutáneamente a la capa subdérmica mediante cirugía o inyección. Los implantes subdérmicos encapsulan el compuesto en una membrana soluble en lípidos tal como caucho de silicona o un polímero biodegradable tal como ácido poliláctico.

Las formulaciones adecuadas junto con los portadores, diluyentes y excipientes farmacéuticos se describen en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 1995, editado por E.W. Martin, Mack Publishing Company, 19a edición, Easton, Pennsylvania. Un científico experto en formulaciones podrá modificar las formulaciones dentro de las enseñanzas de la descripción para obtener numerosas formulaciones destinadas a una vía concreta de administración sin por lo tanto inestabilizar las composiciones de la presente invención ni comprometer su actividad terapéutica.

La modificación de los presentes compuestos para hacerlos más solubles en agua o en otro vehículo, por ejemplo, puede llevarse fácilmente a la práctica mediante modificaciones menores (formación de sal, esterificación, etc.), que son bien conocidas de los expertos en la materia. Los expertos en la materia saben además modificar la vía de administración y el régimen de dosificación de un compuesto concreto con el fin de gestionar mejor la farmacocinética de los presentes compuestos para que tengan el efecto beneficioso máximo en los pacientes.

El término "cantidad terapéuticamente efectiva" utilizado en la presente significa la cantidad requerida para reducir los síntomas de la enfermedad en un individuo. La dosis deberá ajustarse a los factores individuales de cada caso particular. Tal dosis puede variar dentro de amplios límites, en función de numerosos factores, como son la severidad de la enfermedad a tratar, la edad y el estado general de salud del paciente, otros medicamentos que el paciente esté tomando, la vía y la forma de administración y las preferencias y la experiencia del facultativo que atiende al paciente. Para la administración oral puede ser apropiada una dosis diaria de 0.01 a 1000 mg/kg de peso corporal al día en régimen de monoterapia y/o de terapia de combinación. Una dosis diaria preferida se sitúa entre 0.1 y 500 mg/kg de peso corporal, especialmente entre 0.1 y 100 mg/kg de peso corporal y muy especialmente preferida entre 1.0 y 10 mg/kg de peso corporal al día. Por lo tanto, para la administración a una persona de 70 kg, la dosis podría situarse entre 7 mg y 0.7 g al día. La dosificación diaria puede administrarse en una sola dosis o toma o dividirse en varias subdosis, por ejemplo entre 1 y 5 subdosis al día. En general, el tratamiento se inicia con dosis pequeñas, inferiores a la dosis óptima del compuesto. A continuación se incrementa la dosis hasta alcanzar el efecto óptimo para el paciente individual. Los expertos en tratar enfermedades tal como descrito aquí serán capaces, sin realizar experimentaciones innecesarias y en base a sus conocimientos y experiencia personal y considerando las enseñanzas de esta aplicación, de evaluar la cantidad terapéuticamente efectiva de los compuestos de la presente invención para una enfermedad y paciente dados.

Las preparaciones farmacéuticas se presentan con preferencia en la forma de dosificación unitaria. En tal forma, la preparación se subdivide en dosis unitarias que contienen las cantidades apropiadas del componente activo. La forma de dosificación unitaria puede ser una preparación envasada, el envase contiene cantidades discretas de la preparación, por ejemplo tabletas, cápsulas y polvos envasados en viales o ampolletas. La forma de dosificación unitaria puede ser también una cápsula, una tableta, una oblea o incluso una pastilla, o puede ser el número apropiado de cualquiera de estas en la forma envasada.

Indicaciones y metodos de tratamiento I Los compuestos de la fórmula genérica I inhiben la tirosina cinasa de Bruton (Btk). La activación de Btk por cinasas cadena arriba se traduce en la activación de la fosfolipasa Cy, que, a su vez, estimula la liberación de los mediadores proinflamatorios. Los compuestos de la fórmula general I, que incorporan cadenas laterales 1-oxo-1H-ftalazin-2-ilo exhiben una actividad inhibidora inesperadamente intensa, si se compara con los análogos que tienen otras cadenas laterales. El sustituyente hidroximetilo del anillo fenilo proporciona además un aumento inesperado de la potencia si se compara con los análogos que tienen sustituyentes alternativos en esta posición. Los compuestos de la fórmula I son útiles para el tratamiento de la artritis y otras enfermedades inflamatorias o autoinmunes. Los compuestos de la fórmula I son, pues, útiles para el tratamiento de la artritis. Los compuestos de la fórmula I son útiles para inhibir la Btk en las células y para modular el desarrollo de las células B. La presente invención se refiere además a composiciones farmacéuticas que contienen compuestos de la fórmula I mezclados con portadores, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Los compuestos descritos en la presente son inhibidores de cinasas, en particular inhibidores de Btk. Estos inhibidores pueden ser útiles para tratar una o más enfermedades a través de la inhibición de la cinasa en cuestión, incluidas las enfermedades que pueden tratarse por inhibición de Btk y/o inhibición de la proliferación de las células B, en mamíferos. Sin asumir ninguna teoría particular, se cree que la interacción de los compuestos de la invención con la Btk se traduce en la inhibición de la actividad de Btk y de ahí deriva la utilidad farmacéutica de estos compuestos. La invención incluye, por lo tanto, un método para tratar a un mamífero, por ejemplo un ser humano, que tenga una enfermedad que pueda responder a la inhibición de la actividad de Btk, y/o para inhibir la proliferación de células B, que comprende administrar al mamífero que sufre tal enfermedad una cantidad efectiva de al menos un compuesto químico descrito en la presente. La concentración efectiva puede determinarse experimentalmente, por ejemplo sometiendo a ensayo la concentración del compuesto en la sangre o, teóricamente, calculando la biodisponibilidad. Además de Btk, otras cinasas que pueden afectarse incluyen, pero no se limitan a, otras tirosina cinasas y serina/treonina-cinasas.

Las cinasas desempeñan papeles importantes en las vías de señalización que controlan los procesos celulares fundamentales, como la proliferación, diferenciación y muerte (apoptosis). Una actividad anormal de cinasa interviene en un amplio intervalo de enfermedades, incluidos los cánceres múltiples, las enfermedades autoin unes y/o inflamatorias y las reacciones inflamatorias agudas. El rol versátil de las cinasas en los mecanismos clave de señalización celular proporciona una oportunidad significativa para identificar nuevos fármacos que se dirigen a las cinasas y las vías de señalización.

Una modalidad incluye un método para tratar a un paciente que sufre una enfermedad autoinmune y/o inflamatoria, o una reacción inflamatoria aguda, que pueda contrarrestarse con la inhibición de la actividad de Btk y/o de la proliferación de las células B.

Las enfermedades autoinmunes y/o inflamatorias que pueden afectarse con el uso de los compuestos y composiciones de la invención incluyen, pero no se limitan a, psoriasis, alergia, enfermedad de Crohn, síndrome del intestino irritable, enfermedad de Sjogren, rechazo de tejido injertado y rechazo hiperagudo de órganos trasplantados, asma, lupus eritematoso sistémico (y glomerulonefritis asociada) , dermatomiositis, esclerosis múltiple, escleroderma, vasculitis (asociada al ANCA y otras vasculitis), estados hemolíticos y trombocitopénicos autoinmunes, síndrome de Goodpasture (y glomerulonefritis y hemorragia pulmonar asociadas), aterosclerosis , artritis reumatoide, púrpura trombocitopénica idiopática crónica (ITP), enfermedad de Addison, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, diabetes, choque séptico y miastenia grave.

En la presente se incluyen los métodos de tratamiento, en los que se proporciona al menos una entidad química, que se administra en combinación con un agente antiinflamatorio. Los agentes antiinflamatorios incluyen, pero no se limitan a, NSAID, inhibidores de enzimas ciclooxigenasas específicos y no específicos de COX-2, compuestos de oro, corticosteroides, antagonistas de receptor de necrosis tumoral (TNF), inmunosupresores y metotrexato.

Los ejemplos de NSAID incluyen, pero no se limitan a, ibuprofeno, flurbiprofeno, naproxeno y naproxeno sodio, diclofenaco, combinaciones de diclofenaco sódico y misoprostol, sulindaco, oxaprozina, diflunisal, piroxicam, indometacina, etodolaco, fenoprofeno cálcico, cetoprofeno, nabumetona sódica, sulfasalazina, toletina sódica e hidroxicloroquma. Los ejemplos de NSAID incluyen además a los inhibidores específicos de COX-2 como celecoxib, valdecoxib, lumiracoxib y/o etoricoxib.

En algunas modalidades, el agente antiinflamatorio es un salicilato. Los salicilatos incluyen, pero no se limitan a, ácido acetilsalicílico o aspirina, salicilato de sodio, colina y salicilato de magnesio.

El agente antiinflamatorio puede ser también un corticosteroide. Por ejemplo, el corticosteroide puede ser cortisona, dexametasona, metilprednisolona, prednisolona, fosfato sódico de prednisolona o prednisona.

En modalidades adicionales, el agente antiinflamatorio es un compuesto de oro, por ejemplo tiomalato sódico de oro o auranofina.

La invención incluye además las modalidades, en las que el agente antiinflamatorio es un inhibidor metabólico tal como inhibidor de dihidrofolato-reductasa, por ejemplo metotrexato o inhibidor de dihidroorotato-deshidrogenasa, por ejemplo leflunomida.

Otras modalidades de la invención son combinaciones, en las que al menos un compuesto antiinflamatorio es un anticuerpo monoclonal anti-C5 (por ejemplo eculizumab o pexelizumab), un antagonista de TNF tal como entanercept o infliximab, que es un anticuerpo monoclonal anti-TNF-alfa.

Aún otras modalidades de la invención son combinaciones, en las que al menos un agente activo es un compuesto inmunosupresor, por ejemplo un compuesto inmunosupresor elegido de metotrexato, leflunomida, ciclosporina, tacrolimus, azatioprina y micofenolato de mofetilo.

Las células B y precursores de células B que expresan la BTK intervienen en la patología de los estados malignos de células B, incluyendo, pero sin limitarse a, linfoma de células B, linfoma (incluyendo linfornas de Hodgkin y no de Hodgkin), linfoma de células vellosas, mieloma múltiple, leucemia mielogénica crónica y aguda y leucemia linfocítica crónica y aguda.

Se ha demostrado que la BTK es un inhibidor del complejo Fas/APO-1 (CD-95) señalizador que induce la muerte (DISC, por sus siglas en inglés) en células linfoides del linaje B. El destino de las células de leucemia/linforna puede residir en el equilibrio entre los efectos proapoptóticos opuestos de las caspasas activadas por el DISC y un mecanismo regulador antiapoptótico anterior (upstream) que comprende Btk y/o sus sustratos (Vassilev et al., J. Biol. Chem.1998, 274, 1646-1656).

Se ha descubierto además que los inhibidores de Btk son útiles como agentes quimiosensibilizadores y, de este modo, son útiles en combinación con otros fármacos quimioterapéuticos, en particular, fármacos que inducen la apoptosis. Los ejemplos de otros fármacos quimioterapéuticos, que pueden utilizarse en combinación con inhibidores de BTK quimiosensibilizadores incluyen los inhibidores de la topoisomerasa I (camptotecina o topotecan), inhibidores de la topoisomerasa II (por ejemplo daunomicina y etoposido), agentes alquilantes (por ejemplo ciclofosfa ida, melfalan y BCNU), agentes dirigidos a la tubulina (por ejemplo taxol y vinblastina), y agentes biológicos (por ejemplo anticuerpos tales como el anticuerpo anti-CD20, IDEC 8, inmunotoxinas y citocinas).

Se ha asociado también la actividad de Btk con algunas leucemias que expresan el gen de fusión bcr-abl resultante de la translocación de partes de los cromosomas 9 y 22. Esta anormalidad se observa habitualmente en la leucemia mielógena crónica. La Btk se fosforila constitutivamente por la cinasa de bcr-abl que inicia cadena abajo de las señales de supervivencia que circunscriben la apoptosis de las células bcr-abl (N. Feldhahn et al., J. Exp. Med. 2005, 201(11), 1837-1852).

Métodos de tratamiento La solicitud proporciona un método para tratar una afección inflamatoria y/o autoinmune que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona un método para tratar una afección inflamatoria que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona un método para tratar la artritis reumatoide que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona un método para tratar el asma que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona un método para tratar una afección inflamatoria y/o autoinmune que conprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I inhibidor de Btk.

La solicitud proporciona un método para tratar la artritis reumatoide que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I inhibidor de Btk.

La solicitud proporciona un método para tratar el asma que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I inhibidor de Btk.

La solicitud proporciona un método para inhibir la proliferación de las células B que comprende administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I inhibidor de Btk.

La solicitud proporciona un método para inhibir la actividad de Btk que comprende administrar el compuesto de la fórmula I inhibidor de Btk, en donde el compuesto inhibidor de Btk exhibe una IC50 de 50 micromolar o inferior en el ensayo bioquímico in vitro de la actividad de Btk.

En una variante del método anterior, el compuesto inhibidor de Btk exhibe una IC50 de 100 nanomolar o inferior en el ensayo bioquímico in vitro de la actividad de Btk.

En otra variante del método anterior, el compuesto inhibidor de Btk exhibe una IC50 de 10 nanomolar o inferior en el ensayo bioquímico in vitro de la actividad de Btk.

La solicitud proporciona un método para tratar una afección inflamatoria que comprende coadministrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto antiinflamatorio en combinación con el compuesto de la fórmula I.

La solicitud proporciona un método para tratar una artritis que comprende coadministrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto antiinflamatorio en combinación con el compuesto de la fórmula I inhibidor de Btk.

La solicitud proporciona un método para tratar un linfoma o una leucemia de células BCR-ABL1+ administrando a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de la fórmula I inhibidor de Btk.

EJEMPLOS Abreviaturas utilizadas habitualmente incluyen: acetilo (Ac), azo-bis-isobutirilnitrilo (AIBN), atmósferas (atm), 9-borabiciclo[3.3.1]nonano (9-BBN o BBN), 2,2'-bis- (difenilfosfino)-1,1'-binaftilo (BINAP), terc-butoxi- carbonilo (Boc), pirocarbonato de di-terc-butilo o anhídrido boc (BOC2O), bencilo (Bn), butilo (Bu), número de registro del Chemical Abstracts (CASRN), benciloxicarbonilo (CBZ o Z), carbonil-diimidazol (CDI), 1 ,4-diazabiciclo[2.2.2]octano (DABCO), trifluoruro de dietilamino-azufre (DAST), dibencilidenoacetona (dba), 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN), 1,8-diazabiciclo [5.4.0]undec-7-eno (DBU), N,N'-di-ciclohexilcarbodiimida (DCC), 1,2-dicloroetano (DCE), diclorometano (DCM), 2,3-dicloro-5,6-diciano-l,4-benzoquinona (DDQ), azodicarboxilato de dietilo (DEAD), azodicarboxilato de di-isopropilo (DIAD), hidruro de di-isobutil-aluminio (DIBAL o DIBAL-H), di-iso-propiletilamina (DIPEA), N,N-dimetil-acetamida (DMA), 4-N,N-dimetilaminopiridina (DMAP), N,N-dimetilformamida (DMF), sulfóxido de dimetilo (DMSO), 1,1'-bis-(difenilfosfino)etano (dppe), 1,1'-bis-(difenilfosfino)ferroceno (dppf), clorhidrato de 1- (3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDCI), 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina (EEDQ), etilo (Et), acetato de etilo (EtOAc), etanol (EtOH), 2-etoxi-2H-quinolina-l-carboxilato de etilo (EEDQ), éter de dietilo (Et20), éter de etilo-isopropilo (EtOiPr), hexafluorfosfato de 0- (7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N'N'-tetrametiluronio (HATU), ácido acético (HOAc), 1-N-hidroxibenzotriazol (HOBt), cromatografía líquida de alta presión (HPLC), iso-propanol (IPA), cloruro de isopropil-magnesio (iPrMgCl), hexametil- disilazano (HMDS), cromatografía líquida - espectrometría de masas (LCMS), hexametildisilazano de litio (LiHMDS), ácido meta-cloro-peroxibenzoico (m-CPBA), metanol (MeOH), punto de fusión (p.f.), MeSÜ2- (mesilo o Ms), metilo (Me), acetonitrilo (MeCN), ácido m-cloroperbenzoico (MCPBA), espectro de masas (MS), éter de metilo y t-butilo (MTBE), metiltetrahidrofurano (MeTHF), N-bromosuccinimida (NBS), n-butil-litio (nBuLi), N-carboxianhídrido (NCA), N-clorosuccinimida (NCS), N-metilmorfolina (NMM), N-metilpirrolidona (NMP), clorocromato de piridinio (PCC), dicloro-((bis-difenilfosfino)ferrocenil)-paladio(II) (Pd(dppf)Cl2), acetato de paladio(II) (Pd(0Ac)2), tris(dibencilidenoacetona)dipaladio(O) (Pd2(dba)3), dicromato de piridinio (PDC), fenilo (Ph), propilo (Pr), iso-propilo (i-Pr), libras por pulgada cuadrada (psi), piridina (pir), 1,2,3,4,5-pentafenil-1'-(di-terc-butilfosfino)ferroceno (Q-Phos), temperatura ambiente (RT o r.t.), sec-nutil-litio (sBuLi), cloruro de 2-(trimetil-silil)etoximetilo (SEMCl), terc-butildimetilsililo o t-BuMe2Si (TBDMS), fluoruro de tetra-n-butilamonio (TBAF), trietilamina (TEA o Et3N), 2,2,6,6-tetrametilpiperidina-1-oxilo (TEMPO), triflato o CF3SO2- (Tf), ácido trifluoracético (TFA), 1,1'-bis-2,2,6,6-tetrametilheptano-2,6-diona (TMHD), tetrafluorborato de O-benzotriazol-l-il-N,N,N',N'-tetrametiluronio (TBTU), cromatografía de capa fina (CCF), tetrahidrofurano (THF), trimetilsililo o Me3Si (TMS), ácido p-toluensulfónico monohidratado (TsOH o pTsOH), 4-Me-C6H4SC>2- o tosilo (Ts), N-uretano-N-carboxianhídrido (UNCA). La nomenclatura convencional, que incluye los prefijos normal (n), iso (i-), secundario (sec-), terciario (tere-) y neo tiene sus significados habituales cuando se aplica a un grupo alquilo (J. Rigaudy and D.P. Klesncy, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford).

Condiciones generales Los compuestos de la presente invención pueden prepararse a partir de productos comerciales aplicando téenica y procedimientos generales de síntesis que los expertos ya conocen. Anteriormente se han presentado los esquemas de reacción apropiados para la preparación de tales compuestos. La ejemplificación adicional se encontrará en los ejemplos específicos.

Ejemplos de preparación 6-terc-butil-2H-ftalazin-1-ona En un matraz de fondo redondo de 11 se mezclan el cloruro de 4-terc-butilbenzoilo (97.2 g, 90 mi, 494 mmol, 1.00 equiv.) y CH2CI2 (375 i), formándose una solución incolora. Se enfría a 0°C. Con un embudo de decantación se añade por goteo la 2-metilpropano-2-amina (79.5 g, 114 mi, 1.09 mol, 2.2 equiv.), manteniendo la temperatura por debajo de 10°C. Se enjuagan las paredes del embudo de decantación con más cantidad de CH2CI2. Se deja calentar la mezcla de reacción a 25°C durante 3 h. Se añade lentamente NaOH 4N hasta que se disuelve la mayor parte de los sólidos (aprox. 300 mi). Se separan las fases. Se extrae la fase acuosa 4X con CH2CI2. Se secan las fases orgánicas (2.51 en total) con Na2SO4 y se concentran hasta aprox.250 mi. Se forma un lote de material precipitado. Se enfría el matraz en un baño de hielo. Se filtra el sólido blanco resultante y se lava 3 X con CH2CI2 y IX con EtOAc, formándose un sólido blanco acicular (72 g), que se seca con el vacío generado por una bomba de aceite. Se reúnen los líquidos filtrados y los lavados y se concentran de nuevo hasta 100 mi. Se forman más cristales. Se enfrían. Se filtran y se lavan con CH2CI2, obteniéndose una segunda cosecha de un sólido blanco, (31.6 g). RMN-H1 (300 MHz, cloroformo-d) d ppm 1.33 (s, 9 H) 1.47 (s, 9 H) 5.91 (ancha s, 1 H) 7.43 (d, J = 8.31 Hz, 2 H) 7.66 (d, J = 8.31 Hz, 2 H).

Esta reacción se realiza en 2 lotes de 26 g, que se reúnen para la separación y purificación. Para cada lote se usa un matraz de 2 1 y tres cuellos, provisto de agitador mecánico, un embudo de adición y una tubería conectada a un burbujeador y una entrada de nitrógeno. Se calienta el sistema en una estufa de secado y se enfría con una corriente de N2. Se mezcla la N,4-di-terc-butilbenzamida (26.2 g, 112 mmol, 1.00 equiv.) con el THF (1.01 1), formándose una solución incolora. Se enfría la mezcla de reacción a -78°C. Con una corriente de N2 se añade lentamente por goteo el sec-butil-litio en ciclohexanos (176 mi de 1.4 M, 247 mmol, 2.2 equiv.). Se forma una solución amarilla. Se calienta la mezcla de reacción a -15°C durante 1 h. Se forma una suspensión amarilla. Se enfría de nuevo la mezcla de reacción a -78°C. Se añade por goteo DMF seca (16.4 g, 17.4 mi, 225 mmol, 2 equiv.). Se deja calentar la mezcla de reacción a 0°C. El análisis por LCMS indica que la reacción ha finalizado.

Se añaden lentamente a 0°C 150 mi de una solución saturada de NH4C1. Se deja calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se transfiere a un erlenmcyer de 41 y se lava con agua y EtOAc. Se reúnen los dos lotes y se transfieren al mismo erlenmeyer de 41.

El volumen total de las 2 mezclas reaccionantes es ligeramente mayor que 3 1. Se concentra cuidadosamente la mezcla de reacción en el evaporador giratorio a 50°C en porciones, empleando un matraz de fondo redondo de 2 1 para evitar la inestabilidad. El volumen queda reducido aproximadamente a 200-300 mi.

Hay gran cantidad de precipitado sólido. El análisis por LCMS indica que no queda producto en la porción líquida. Se recoge el sólido blanco por filtración en un embudo grande vidrio sinterizado. Se suspenden los pedazos en agua dentro del embudo, se trituran en el mortero hasta obtener un polvo fino y se filtran. Se lava el sólido 5 veces con agua y se seca a 50°C en una estufa conectada al vacío durante 2 días, obteniéndose 59.6 g de la 2,5-di-terc-butil-3-hidroxiiso-indolin-1-ona como sólido blanquecino, que se usa tal cual para la etapa siguiente. RMN-H1 (300 MHz, cloroformo-d) d ppm 7.27 (s, 9 H) 7.53 (s, 9 H) 8.26 (d, J = 11.71 Hz, 1 H) 11.90 (d, J = 11.71 Hz, 1 H) 13.40 - 13.46 (m, 1 H) 13.47 (s, 1 H) 13.51 - 13.58 (m, 1 H).

En un matraz de tres cuellos y 21 equipado con un embudo de adición, un condensador enfriado con aire y una entrada de nitrógeno se mezclan la 2 ,5-di-terc-butil-3-hidroxiiso-indolin-l-ona (59.6 g, 228 mmol, 1.00 equiv.) y el ácido acético (868 mi), formándose una solución ligeramente amarilla. Se calienta la mezcla de reacción a 90°C. Se añade por goteo la hidrazina monohidratada (14.8 g, 14.4 mi, 296 mmol, 1.3 equiv.). Se agita la mezcla de reacción a 90°C durante 1 h, se diluye con 300 mi de ¾0 y se deja enfriar lentamente a 25 “C. El análisis por LCMS indica que la reacción ha finalizado y se ha conseguido la conversión neta en el producto deseado. Se concentra la mezcla de reacción hasta un volumen reducido (aprox. 50-100 mi). Se deja la solución en reposo, formándose un sólido incoloro. Se recoge el sólido por filtración, se lava varias veces con agua, IX con éter y 2X con éter/hexanos y se seca al vacío, obteniéndose la 6-terc-butil-2H-ftalazin-1-ona (37 g, rendimiento = 82 %) como sólido blanco. RMN-H1 (400 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 1.44 (s, 9 H) 7.66 - 7.73 (m, 1 H) 7.84 - 7.91 (m, 1 H) 8.18 (d, J 0.51 Hz, 1 H) 8.33 8.42 (m, 1 H) 2-(6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-cloro-benzaldehído En un matraz de tres cuellos y 500 mi, equipado con una entrada de N2, una salida de burbujeador y un agitador mecánico, se mezclan la 6-terc-butilftalazin-1(2H)-ona (6.46 g, 31.9 mmol, 1.00 equiv.), el 2-cloro-6-fluorbenzaldehído (7.6 g, 47.9 mmol, 1.5 equiv.), el carbonato de potasio (8.83 g, 63.9 mmol, 2 equiv.) (polvo fino) y la DMA (70 mi), formándose una suspensión amarilla. Se añade el cloruro de tetraetilamonio (688 mg, 4.15 mmol, 0.13 equiv.) y se calienta la mezcla de reacción a 68°C (temperatura de baño) con agitación vigorosa. Una vez que la mezcla de reacción se ha convertido en solución, se agita a esta temperatura durante 1 h. Se continúa calentando la mezcla de reacción a 75°C (temperatura de baño) durante una noche. Se añade más cantidad del 2-cloro-6-fluorbenzaldehído (5 g, 31.9 mmol, 1.00 equiv.) y se calienta la mezcla de reacción a 75°C (temperatura de baño) durante 3 días. Se vierte la mezcla de reacción sobre 300 mi de H2O y se extrae con CH2Cl2 (5 x 300 mi). Se secan las fases orgánicas con Na2SO4 y se concentran al vacío. Queda un gran volumen de la DMA. Se vierte la mezcla de reacción sobre 500 mi de H20 y se extrae con éter de dietilo (5 x 300 mi). Se lava la fase etérea con salmuera, se seca con MgSC , se filtra y se concentra al vacío. Cuando el volumen llega aproximadamente a 150 mi se forma una gran cantidad de material cristalino blanco. Se aísla el producto por filtración, obteniéndose producto puro (5.4 g). Se concentra el líquido filtrado al vacío y se purifica el residuo empleando un sistema de purificación Analogix con una columna SF25 de 160 g (eluyendo con (una mezcla 3:1 de CH2Cl2/EtOAc) del 5 al 25% en hexano, obteniéndose 4.75 g adicionales del producto deseado. El rendimiento total de 2-(6-terc-butil-1-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-cloro-benzaldehído es de 10.1 g (93 %). RMN-H1 (300 MHz, CLOROFORMO-d) d ppm 7.27 (s, 9 H) 13.30 (d, J = 7.55 Hz, 1 H) 13.34 - 13.51 (m, 2 H) 13.56 (d, J = 1.51 Hz, 1 H) 13.71 (dd, J = 8.50, 1.70 Hz, 1 H) 14.12 (s, 1 H) 14.21 (d, J = 8.31 Hz, 1 H) 16.20 (s, 1 H).

LC/MS hallado [M+H]+ 340.8; [M+Na]+ 362.9. 6-terc-butil-2-(3-cloro-2-hidroximetil-fenil)-2H-ftalazin-1- ona En una corriente de nitrógeno, a una solución del 2-(6-terc-butil-1-oxoftalazin-2(1H)-il)-6-clorobenzaldehído (61 g, 179 mmol, 1.00 equiv.) en CH2CI2 (350 mi) y metanol (350 mi) se añade en porciones de 1 g a 0°C el borohidruro de sodio (7.45 g, 197 mmol, 1.1 equiv.) durante 20 min con agitación vigorosa. Se deja calentar la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se agita a esta temperatura durante 1 h. se añade por goteo agua (100 mi), después el CH2CI2 y agua de nuevo y se separan las fases. Se extrae la fase acuosa 3X con CH2CI2. Se reúnen las fases orgánicas, se lavan con una solución saturada de NH4CI y se secan con sulfato de sodio. Después de la filtración se concentra el líquido amarillo, formándose un sólido de color verde-amarillo. Se tritura este sólido con éter/acetato de etilo = 6:1 y se lava varias veces con el mismo solvente, formándose un sólido de color verde-amarillo pálido. Se suspende este sólido en diclorometano con un 1% de metanol. Se recoge el sólido blanco resultante por filtración, se lava con diclorometano y después con diclorometano/éter, obteniéndose la 6-terc-butil-2-(3-cloro-2-hidroximetil-fenil)-2H-ftalazin-1-ona como sólido blanco (28.3 g). RMN-H1 (300 MHz, cloroformo-d) d ppm 1.45 (s, 9 H) 4.58 (ancha s, 2 H) 7.31 (dd, J = 7.93, 1.51 Hz, 1 H) 7.43 (t, J = 7.93 Hz, 1 H) 7.57 (dd, J = 8.12, 1.32 Hz, 1 H) 7.77 (d, J = 1.89 Hz, 1 H) 7.93 (dd, J = 8.69, 1.89 Hz, 1 H) 8.33 (s, 1 H) 8.44 (d, J = 8.69 Hz, 1 H); LC/MS hallado [M+H]+ 343.0.

Ester 2-(6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-cloro- bencílico del ácido acético A una solución de la 6-terc-butil-2-(3-cloro-2-(hidroximetil)fenil)ftalazin-1(2H)-ona (28.3 g, 82.6 mmol, 1.00 equiv.) en diclorometano (250 mi) se añaden la trietilamina (10.9 g, 10.1 mi, 107 mmol, 1.3 equiv.), el anhídrido acético (11.0 g, 15.1 mi, 107 mmol, 1.3 equiv.) y la DMAP (252 mg, 2.06 mmol, 0.025 equiv.) y se agita la solución a temperatura ambiente durante una noche. Se vierte la mezcla de reacción sobre 300 mi de H2O y se extrae con CH2CI2 (3 x 250 mi).

Se seca la fase orgánica con sulfato de sodio, se filtra y se concentra, formándose un semisólido. Se recoge el semisólido en 300 mi de acetato de isopropilo y se concentra, formándose un sólido ligeramente amarillo. Se tritura este sólido con 150 mi de acetato de isopropilo enfriando, después se filtra y se lava una vez con 30 mi acetato de isopropilo frío y después con 50 mi de una mezcla 2:1 de hexanos: acetato de isopropilo, obteniéndose el éster 2-(6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-cloro-bencílico del ácido acético (23.9 g) como sólido esponjoso blanco. RMN-H1 (300 MHz, cloroformo-d) d ppm 1.44 (s, 9 H) 1.91 (s, 3 H) 5.18 (s, 2 H) 7.31 - 7.38 (m, 1 H) 7.45 (t, J = 7.93 Hz, 1 H) 7.51 - 7.59 (m, 1 H) 7.73 (d, J = 1.89 Hz, 1 H) 7.89 (dd, J = 8.69, 1.89 Hz, 1 H) 8.25 (s, 1 H) 8.40 (d, J = 8.69 Hz, 1 H). LC/MS hallado [M+H]+ 385.0.

Ester 2-(6-terc-butil-1-oxo-lH-ftalazin-2-il)-6-(4,4,5,5- tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencílico del ácido acético En un matraz de fondo redondo de 11 se introducen el acetato de 2- (6-terc-butil-l-oxoftalazin-2(1H)-il)-6-cloro-bencilo (16.4 g, 42.6 mmol, 1.00 equiv.) y el bis-(pinacolato)diboro (20.6 g, 81.0 mmol, 1.9 equiv.). se recoge el material en metil-THF (300 mi) y se agita durante 5 minutos. Se somete la mezcla al vacío y se anula este con argón, tres veces, después se añade rápidamente el acetato de potasio (10.5 g, 107 mmol, 2.5 equiv.) para evitar la humedad. Se añade el acetato de paladio(II) (239 mg, 1.07 mmol, 0.025 equiv.). Se añade X-PHOS (1.02 g, 2.13 mmol, 1.05 equiv.). Se somete la mezcla al vacío y se anula este con argón, tres veces. Se calienta la mezcla de color amarillo anaranjado a 68°C (temperatura de baño) durante 1 h. Después de 1 h se han formado solamente trazas del producto deseado. Se ajusta la temperatura de la mezcla de reacción a 70°C. Se hace un seguimiento constante del progreso de la reacción por LCMS. Se agita la mezcla de reacción a esta temperatura durante 9 horas más, después de lo cual el análisis por LCMS indica que solamente queda una pequeña cantidad del material de partida, trazas del producto secundario LC y una cantidad predominante del producto; la mezcla de reacción conserva un color ámbar pálido. Se agita la mezcla de reacción a 70 “C durante 1 h más para finalizar la reacción. El color vira a marrón. Se deja enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente. Se vierte la mezcla de reacción sobre 400 mi de H2O y se extrae con EtOAc (3 x 250 mi). Se reúnen los extractos orgánicos, se lavan con salmuera, se secan (MgS04), se filtran y se concentran al vacío. Se purifica el residuo empleando un sistema de purificación Analogix con una columna SF25 de 600 g (eluyendo con hexanos al 100% durante 15 min, después con EtOAc del 0 al 25% en hexanos). Por concentración de la porción central del pico del producto, aislada por cromatografía, se obtienen 18 g del áster 2-(6-terc-butil-1-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencílico del ácido acético de una pureza > 95%, como espuma amarilla. R N-H1 (300 MHz, cloroformo-d) d ppm 1.34 (s, 12 H) 1.44 (s, 9 H) 1.87 (s, 3 H) 5.30 (ancha s, 2 H) 7.39 - 7.57 (m, 2 H) 7.72 (d, J = 1.51 Hz, 1 H) 7.87 (dd, J = 8.50, 1.70 Hz, 1 H) 7.97 (dd, J = 6.42, 2.64 Hz, 1 H) 8.24 (s, 1 H) 8.40 (d, J = 8.31 Hz, 1 H). LC/MS hallado para el pico principal de la LC [M+H]+ 477. Nótese que este material se ha obtenido en diversos lotes y la pureza del producto deseado varía desde aprox.50% hasta 6-fluoro-2H-ftalazin-l-ona En un tubo de microondas de gran capacidad se calienta a 50°C durante 45 min una mezcla de N,N-dietil-4-fluoro-2-formil-benzamida (2.94 g, 13.2 mmol), hidrazina monohidratada (Sigma-Aldrich; 725 mg, 14.5 mmol) y EtOH (15 mi). Se añade el AcOH glacial (2 mi) y se calienta la mezcla a 150°C en un microondas tal como Biotage Initiator durante 2 h. Se añade una solución acuosa saturada de NaHC03 (75 mi) y EtOAc (70 ml). Se lava la fase orgánica con una solución acuosa de NaHC03 al 5% y después con salmuera acuosa del 50%. Se extraen de nuevo las fases acuosas con EtOAc (2 x 60 ml). Se reúnen las fases orgánicas, se secan (MgS04), se filtran y se concentran, obteniéndose la 6-fluoro-2H-ftalazin-1-ona (2.14 g, 99%) como polvo ligeramente amarillo. LC/MS hallado [M+H]+ 165. 2-metil-2- (1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il)-propionitrilo Se añade la bis(trimetilsilil)amida de potasio (0.91 M en THF, Alfa-Aesar; 46.6 ml, 42.4 mmol) a una solución de la 6-fluoro-2H-ftalazin-l-ona (1.16 g, 7.1 mmol) en THF (20 ml). Se calienta la mezcla en un baño de aceite a 70°C durante una noche. Se añaden agua (125 ml) y EtOAc (100 ml). Se separan las fases y se extrae de nuevo la fase acuosa con EtOAc (2 x 70 ml). Se reúnen las fases orgánicas, se secan (MgS04), se filtran y se concentran, formándose un sólido amarillo (1.52 g). Se purifica este material por trituración con una mezcla caliente de CH2Cl2/hexanos y después por filtración, obteniéndose el 2-metil-2-(1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il)-propionitrilo (1.12 g, 74%) como polvo ligeramente amarillo. LC/MS hallado [M+H]+ 214. 2- [2-(3-bromo-2-formil-fenil)-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6- il]-2-metil-propionitrilo Se calienta a -110°C durante 2 h una mezcla del 2-metil-2-(1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il)-propionitrilo (1.12 g, 5.23 mmol), 2,6-dibromobenzaldehído (2.21 g, 8.37 mmol), NaHCC>3 (879 mg, 10.5 mmol), yoduro de cobre (I) (996 mg, 5.23 mmol) y DMSO (35.3 mi). Se enfría la mezcla a temperatura ambiente. Se añaden CH2CI2 (40 mi) y agua (40 mi). Se filtra la mezcla a través de Celite y se lava bien el Celite con CH2CI2 y una pequeña cantidad de MeOH. Se separan las fases del líquido filtrado y se lava la fase orgánica con salmuera acuosa del 50%. Se extrae de nuevo la fase acuosa con CH2CI2 (2 x 40 mi). Se reúnen las fases orgánicas, se secan (MgSO4), se filtran y se concentran al vacío. Se purifica el residuo empleando un sistema de purificación Analogix con una columna SF25 de 60 g de gel de sílice (eluyendo con MeOH del 0 al 5% en CH2CI2), obteniéndose el 2-[2-(3-bromo-2-formil-fenil)-1-oxo-1,2-dihidro-ftalazin-6-il]-2-metil-propionitrilo (1.89 mg, 82%) como sólido ligeramente amarillo, de una pureza aprox. del 90%. LC/MS hallado [M+H]+ 396/398.

Ejemplo 1 2-(3-{5-[5-(2-azetidin-1-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2- ilamino]-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-2- hidroximetil-fenil)-6-terc-butil-2H-ftalazin-l-ona 0 Se desgasifica al vacío y se rellena con argón una mezcla de éster 2-(6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6- (4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencílico del ácido acético (compuesto intermedio 5; 177 mg, 371 pmol), 4- [5-(2-azetidin-l-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2-ilamino]-6-5 cloro-2-metil-2H-piridazin-3-ona (que se obtiene del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US 2012-0040949, preparación del compuesto 1-13, etapa 2; 90 mg, 247 pmol), 2- diciclohexil-fosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo (18 mg, 37 mmo?), fosfato de potasio tribásico (144 mg, 0.68 mmol), agua 0 (332 ml) y n-butanol (1.4 mi).

Se añade el bis(dibencilidenoacetona)paladio(0) (10 mg, 17 mtho?) y se desgasifica la mezcla del modo recién indicado. Se calienta la mezcla a 110°C durante 2.5 h. Se añaden agua (35 mi) y EtOAc (35 mi) y se agita la mezcla en 5 un embudo de decantación. Se recoge la fase orgánica y se lava con salmuera (35 mi) . Se extraen de nuevo las fases acuosas con EtOAc (2 x 30 mi) . Se reúnen las fases orgánicas, se secan (MgSO-) , se filtran, se concentran y se purifican empleando un sistema de purificación Analogix con una columna de 24 g (eluyendo con MeOH del 1 al 20% en CH2CI2) , obteniendose una mezcla de éster 2- {5- [5- (2-azetidin-l-il-1, 1-dimetil-etoxi) -piridin- 2 -i lamino] -l-metil-6-oxo-l, 6-dihidropiridazin-3 - il } -6 - (6-terc-butil-l-oxo- IH-f talazin-2 -il) -bencílico del ácido acético y 2- (3- {5- [5- (2-azetidin-l-il-1, 1-dimetil-etoxi) -piridin- 2 -ilamino] -l-metil-6-oxo-l, 6-dihidro-piridazin-3 -il } -2 -hidroximetil- f enil) -6-terc-butil-2H-ftalazin-l-ona (112 mg) como aceite viscoso ligeramente amarillo. Se añaden el dioxano (572 m?) y NaOH acuoso 2N (980 m? , 1.96 mmol) y en atmósfera de argón se calienta la mezcla a 50 °C durante 2 h. Se añaden agua (25 mi) y EtOAc (50 mi) y se agita la mezcla en un embudo de decantación. Se recoge la fase orgánica y se lava con salmuera (50 mi) . Se extrae de nuevo la fase acuosa con EtOAc (2 x 40 mi) . Se reúnen las fases orgánicas, se secan (MgSQ) , se filtran, se concentran y se purifican empleando un sistema de purificación Analogix con una columna de 12 g (eluyendo con MeOH del 1 al 15% en CHCI ) , obteniéndose la 2-( 3 - { 5 - [5- (2-azetidin-l-il-l, 1-di-metil-etoxi) -piridin- 2 -ilamino] -1-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-2-hidroximetil-fenil) -6-terc-butil-2H-ftalazin-l-ona (81 mg, 52%) ccma sólido ligeramente amarillo. LC/MS hallado [M+H] + 636.0.

Ejemplo 2 6-terc-butil-2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(1'-metil- 1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-l,6- dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-2H-ftalazin-1-ona En un vial de microondas se purga una mezcla de áster 2-(6-terc-butil-1-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencílico del ácido acético (que puede obtenerse del modo descrito en el ejemplo 5; pureza -75%; 214 mg, -0.34 mmol), 6-cloro-2-metil-4-(5-(l-metilpiperidin-4-il)piridin-2-ilamino) piridazin-3(2H)-ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al. US-2012-0040949, compuesto intermedio del ejemplo 56; 100 mg, 0.3 mmol), bis(dibencilidenoacetona)paladio (Aldrich; 8.6 mg, 15 pinol), XPhos (2-(diciclohexilfosfino)-2',4',6'-tri-i-propil-1,1'-bifenilo, Strem Chemicals; 14.3 mg, 30 pmol) y fosfato de potasio tribásico (159 mg, 0.75 mmol) y se añade una mezcla de n-butanol desgasificado (2.4 mi) y agua (600 ml). Se calienta la mezcla a 115°C sobre un baño de arena durante una noche. Se filtra la mezcla a través de Celite, se concentra y se purifica por cromatografía (eluyendo con MeOH del 0 al 25% en CH2CI2), formándose un aceite amarillo (150 mg) . Se añaden el MeOH (2.3 mi) y carbonato de potasio (96 mg, 0.7 mmol) y se calienta la mezcla a 45 °C durante 1 h. Se añade el CH2CI2 para mejorar la solubilidad y se calienta de nuevo la mezcla a 45°C. Se enfría la mezcla a temperatura ambiente y se añade agua por goteo. Se agita la mezcla resultante a temperatura ambiente durante una noche y se extrae con CH2CI2. Se concentra el extracto orgánico y se tritura el residuo con acetato de isopropilo. Se separa el sólido por filtración, se lava con eter y se seca en una estufa conectada al vacío durante varias horas, obteniéndose la 6-terc-butil-2- {2-hidroximetil-3- [l-metil-5-( 1 ' -metil-1' ,2' ,3' ,4' ,5' ,6' -hexahidro- [3,4'] bipiridinil -6 -ilamino) -6-oxo-l, 6-dihidro-piridazin-3-il] -fenil} -2H-ftalazin-l-ona (100 mg, 55%) como cristales blancos mate. La RMN indica la presencia de una pequeña cantidad de acetato de isopropilo. LC/MS hallado [M+H] + 606.1.

Ejemplo 3 2-{3-[5-(5-azetidin-l-ilmetil-l-metil-1H-pirazol-3-ilamino)- l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-2-hidroxi-metil- fenil }-6-terc-butil-2H-ftalazin-l-ona En un vial de microondas se purga con nitrógeno una mezcla del éster 2-(6-terc-butil-1-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-(4,4,5,5-tetrameti1-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencílico del ácido acético (que puede obtenerse del modo descrito en el ejemplo 5; pureza -75%; 206 mg, -0.32 mmol), 4-(5-(azetidin- 1-ilmetil)-l-metil-lH-pirazol-3-ilamino)-6-cloro-2-metilpiridazin-3(2H)-ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2012-0040949, compuesto intermedio del ejemplo 58; 89 mg, 0.29 mmol), bis(dibencilidenoacetona)paladio (Aldrich; 8.3 mg, 14 pmol), el XPhos (2-(diciclohexilfosfino)-2',4',6'-tri-1-propil-1,1'-bifenilo, Strem Chemicals; 13.7 mg, 29 mmo?) y fosfato de potasio tribásico (184 mg, 0.87 mmol) y se añade una mezcla de n-butanol desgasificado (2.3 mi) y agua (576 ml). Se calienta la mezcla a 115°C en un baño de arena durante una noche. Se concentra la mezcla y se purifica por cromatografía (eluyendo con MeOH del 0 al 25% en CH2CI2), obteniéndose un aceite amarillo (150 mg). Se añaden el MeOH (2.4 mi) y carbonato de potasio (83 mg, 0.6 mmol) y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 1 h. Se añade agua por goteo y se agita la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1 h. Se separa el sólido por filtración y se seca en una estufa conectada al vacío durante una noche, obteniéndose la 2-{3- [5-(5-azetidin-l-ilmetil-l-metil-lH-pirazol-3-ilamino)-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-2-hidroximetil-fenil}-6-terc-butil-2H-ftalazin-l-ona (72 mg, 43%) como sólido cristalino blanquecino. LC/MS hallado [M+H]+ 581.4.

Ejemplo 4 . 0 6-terc-butil-2- (2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-((S)-1-metil- pirrolidin-2-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro- piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-1-ona En un vial de microondas se purga una mezcla de éster 2-(6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-(4,4,5,5-5 tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencílico del ácido acético (que puede obtenerse del modo antes descrito; pureza -75%; 172 mg, -0.27 mmol), la (S)-6-cloro-2-metil-4-(5-(1- metilpirrolidin-2-il)piridin-2-ilamino)piridazin-3(2H)-ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et 0 al., US-2012-0040949 ejemplo 18, etapa 3; 77 mg, 0.24 mmol), bis(dibencilideno-acetona)paladio (Aldrich; 6.9 mg, 12 pmol), el XPhos (2-(diciclohexilfosfino)-2',4',6'-tri-i-propil-1,1'- bifenilo, Strem Chemicals; 14.3 mg, 30 pmol) y fosfato de potasio tribásico (153 mg, 0.72 mmol) y se añade una mezcla 5 de n-butanol desgasificado (2.4 mi) y agua (600 ml). Se calienta la mezcla a 115°C en un baño de arena durante 2.5 h.

Se filtra la mezcla a través de Celite, se concentra y se purifica por cromatografía (eluyendo con MeOH del 0 al 25% en CH2CI2), obteniéndose 100 mg de una mezcla de productos. Se añade MeOH (1.58 mi) y después el CH2CI2 para disolver el sólido. Se añade el carbonato de potasio (65.4 mg, 0.47 mmol) y se calienta la mezcla a 44°C durante 1.5 h. Se añade agua por goteo y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Se filtra la mezcla, se lava el sólido con agua y Et20 y se seca al vacío durante un fin de semana, obteniéndose la 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-((S)-1-metil-pirrolidin-2-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-1-ona (85 mg, 91%) como sólido cristalino blanquecino. [M+H]+ 592.5.

Ester 2-(6-terc-butil-1-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-{l-metil-5- [5-((S)-l-metil-pirrolidin-3-il)-piridin-2-il-amino]-6-oxo- 1,6-dihidro-piridazin-3-il}-bencílico del ácido acético Se desgasifica en atmósfera de argón una mezcla de la 6-cloro-2-metil-4- [5-((S)-1-metil-pirrolidin-3-il)-piridin-2-ilamino]-2H-piridazin-3-ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2012-0040949, ejemplo 32, etapa 4; 150 mg, 469 pmol), bis(pinacolato)diboro (155 mg, 610 mmo?), acetato de potasio (138 mg, 1.41 mmol) y dioxano (7 mi). Se añaden XPhos (2-(diciclohexil-fosfino)-2',4',6'-tri-i-propil-1,1'-bifenilo, Strem Chemicals; 33.5 mg, 70.4 pmol) y acetato de paladio(II) (5.3 mg, 23.5 mtho?) y en atmósfera de argón se agita la mezcla de reacción a 100°C (temperatura externa) durante 30 min. Se saca el matraz del baño de calentamiento y se añaden el acetato de 2-(6-terc-butil-l-oxoftalazin-2(1H)-il)-6-clorobencilo (ejemplo 4; 199 mg, 516 mtho?), carbonato de potasio (194 mg, 1.41 mmol), triciclohexilfosfina (13.2 mg, 46.9 pmol), bis(dibencilidenoacetona)paladio(0) (13.5 mg, 23.5 pmol) y agua (1.5 mi). Se hace burbujear argón a través de la mezcla de reacción y se calienta con agitación vigorosa a 80°C durante 7 h. Se enfría la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se vierte sobre agua y EtOAc. Se separa la fase de EtOAc y se extrae la fase acuosa con EtOAc. Se reúnen las fases orgánicas, se lavan con salmuera, se secan (a2SO4), se filtran y se concentran. Se purifica el residuo empleando un sistema Analogix con una columna de 12 g (eluyendo con CH2Cl2/ e0H/NH40H de 89:9:2 a 66:27:7), obteniéndose el éster 2-(6-terc-butil-1-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-{l-metil-5-[5-((S)-l-metil-pirrolidin-3-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-bencílico del ácido acético (78 mg, 26%). LC/MS hallado [M+H]+ 634.

Ejemplo 5 . 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-((S)-1-metil- pirrolidin-3-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro- piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-1-ona Se agita a 40°C durante 75 min una mezcla del áster 2-(6-terc-butil-l-oxo-lH-ftalazin-2-il)-6-{l-metil-5-[5-((S)-l-metil-pirrolidin-3-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-bencílico del ácido acético (78 mg, 0.124 mmol), K2CO3 (34.2 mg, 0.247 mmol) y MeOH (10 mi) y se enfría a temperatura ambiente. Se añaden agua y CH2CI2 y se extrae la fase acuosa con CH2CI2. Se reúnen las fases orgánicas, se secan (Na2SO4), se filtran y se concentran. Se tritura el residuo con Et20 y se seca el sólido resultante al vacío durante una noche, obteniéndose la 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-((S)-1-metil-pirrolidin-3-il)- piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-1-ona (57 mg, 79%) como sólido amarillo. LC/MS hallado [M+H]+ 592. 2- (6-terc-butil-l-oxo-1H-f talazin-2-il) -6- {l-metil-5- [5- ( (R) - l-metil-pirrolidin-3-il) -piridin-2 - i lamino] -6-oxo-l, 6- dihidro-piridazin-3 -il } -benzaldehido Se desgasifica en atmósfera de argón una mezcla de la 6-cloro-2-metil-4- [5- ( (R) -l-metil-pirrolidin-3 -il) -piridin-2 -ilamino] -2H-piridazin-3 -ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2012-0040949, ejemplo 33, etapa 1; 150 mg, 469 pmol) , bis (pinacolato) diboro (155 mg, 610 pmol) acetato de potasio (138 mg, 1.41 mmol) y dioxano (7 mi). Se añaden XPhos (2- (diciclohexil-fosf ino) -2' ,4' , 6' -tri-1-propil-1, 1' -bifenilo, Strem Chemicals; 33.5 mg, 70.4 pinol) y acetato de paladio(II) (5.3 mg, 23.5 p ol) y en atmósfera de argón se agita la mezcla de reacción a 100 °C (temperatura externa) durante 30 min. Se saca el matraz del baño de calentamiento y se añaden el 2- (6-terc-butil-l-oxoftalazin-2 (1H) -il) -6-clorobenzaldehído (ejemplo 2; 160 mg, 469 pinol) , carbonato de potasio (194 mg, 1.41 ntnol) , triciclohexilfosfina (13.2 mg, 46.9 p ol) y bis (dibencilidenoacetona) paladio ( 0 ) (13.5 mg, 23.5 pmol ) , y agua (1.5 ml) . Se hace burbujear argón a través de la mezcla de reacción y se calienta con agitación vigorosa a 80 °C durante 1 h. Se enfría la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se vierte sobre agua y EtOAc. Se separa la fase de EtOAc y se extrae la fase acuosa con EtOAc. Se reúnen las fases orgánicas, se lavan con salmuera, se secan (Na2SO4) , se filtran y se concentran. Se purifica el residuo empleando un sistema Analogix can una columna Supelco de 24 g (eluyendo con OfcC MeOH/NH OH = 77 :18 :5) , obteniéndose el éster 2- (6-terc-butil-l-oxo-1H-f talazin-2 -il) -6 - { l-metil-5 - [5- ( (R) -l-metil-pirrolidin-3 -il) -piridin-2 - ilamino] -6 -oxo-l , 6-di -hidro-piridazin-3 - il } -bencílico del ácido acético ( 16 mg, 6%) . LC/MS hallado [M+H] + 633 . 9.

Ej emplo 6 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-((R)-1-metil- pirrolidin-3-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro- piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-l-ona Preparación de la 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3- (l-metil-5- [5-((R)-l-metil-pirrolidin-3-il)-piridin-2 ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H- ftalazin-1-ona En atmósfera de nitrógeno se agita durante 30 min una mezcla del áster 2- (6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il) -6- {l-metil -5- [5- ( (R) - 1 -metil-pirrolidin-3 - il ) -piridin-2-ilamino] -6-oxo-l , 6 -dihidro-piridazin-3-il} -bencílico del ácido acetico (16 g, 27 pinol) , borohidruro de sodio (1.64 g, 43.4 pinol) y metanol (1 mi) . Se añade una solución acuosa saturada de N¾C1, se agita la mezcla durante 5 min y se extrae dos veces con CH2CI2. Se reúnen las fases orgánicas, se secan, se filtran y se concentran. Se purifica el residuo por cromatografía de columna (eluyendo con CH2Cl2/MeOH/NH4OH de 89 : 9 : 2 a 66 : 27 : 7) y se seca el producto a 50 °C en una estufa conectada al vacío durante una noche, obteniéndose la 6- terc-but il-2 - (2 -hidroxi-metil-3 - { 1-metil-5- [5- ( (R) - 1 -metil-pirrolidin-3-il) -piridin- 2 -ilamino] -6-oxo-1, 6-dihidro-piridazin-3-il} -fenil) -2H-ftalazin-l-ona (11.8 mg, 74%) como sólido ligeramente amarillo. LC/MS hallado [M+H] + 592. 2-(2-{2-formil-^-Jl-metil-5-(1'-metil-1',2',3',4',5',6'- ? hexahidro- [3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-l,6-dihidro- piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il)-2- metil-propionitrilo Se prepara la solución A del modo siguiente : se desgasifica al vacío a presión reducida una mezcla de la 6-cloro- 2-metil-4 -(5-(1-metilpiper idin-4-i1 )piridin-2-ilamino) -piridazin-3 (2H)-ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2012-0040949, preparación del compuesto 1-67, etapa 2; 125 mg, 0.374 mmol), XPhos (2- (diciclohexilfosf ino)-2',4 ',6'-1ri-i-propil-1, 1'-bifenilo, Strem Chemicals; 27 mg, 56 pmol), acetato de potasio (110 mg, 1.1 mmol), bis (pinacolato)diboro (124 mg, 0.49 mmol) y dioxano (4.4 mi) y se protegen con atmósfera de argón. Se añade a temperatura ambiente el acetato de paladio(II) (9.25 mg, 41.2 mmo?) y se repite el ciclo de desgasificación al vacío. En atmósfera de argón se agita la mezcla de reacción a 100°C (temperatura externa) durante 16 min. Se enfría la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se filtra a través de un cartucho de Celite empleando presión de argón (lavando el Celite con 2.5 mi más de dioxano) , obteniéndose la solución A.

Se prepara la solución B del modo siguiente: se desgasifica una mezcla del 2-(2-(3-bromo-2-formil fenil)-1-oxo- 1,2-dihidroft alazin-6-i1 )-2-metilpropanoni trilo (ejemplo 8; 158 mg, 399 pmol), triciclohexilf osfina (34.2 mg, 122 pmol), K2C03 (276 mg, 2 mmol), el n-BuOH (486 ml), agua (1.52 mi) y dioxano (2.03 mi). Se añade a temperatura ambiente el bis (dibencilidenoacetona) paladio(O) (34.4 mg, 59.8 mmo?) . Se desgasifica la mezcla de nuevo al vacío y se calienta sobre un baño de calentamiento mantenido a 110 °C.

Se añade la solución A a la solución B y se agita la mezcla resultante a 110°C durante 35 min. Se interrumpe el calentamiento y se mantiene la mezcla de reacción en agitación durante una noche. Se filtra la mezcla de reacción a través de Celite y se lava el Celite con EtOAc. Se añaden EtOAc (30 mi) y agua (30 mi) al líquido filtrado y se agita el líquido filtrado en un embudo de decantación. Se recoge la fase de EtOAc. Se extrae de nuevo la fase acuosa con EtOAc (2 x 20 mi), se reúnen las fases orgánicas, se secan (Na2SO4), se filtran y se concentran. Se purifica el residuo por cromatografía empleando un sistema Analogix con una columna SF15 de 24 g (eluyendo con MeOH del 3 al 18% en CH2CI2), obteniéndose el 2- {2-{2-formil-3- [l-metil-5-(1'-metil-1'í2'/3'4'5,,6' -hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il)-2-metil-propionitrilo (178 mg, 73%) como polvo gris. LC/MS hallado [M+H]+ 615.

Ejemplo 7 2-(2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(1'-metil- 1',2',3',4',5',6'-hexahidro- [3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6- oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-1,2-dihidro- ftalazin-6-il)-2-metil-propionitrilo Se recoge una mezcla del 2-(2-{2-formil-3-[1-metil- 5-(l'-metil-l',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il)-2-metil-propionitrilo (ejemplo 17; 178 mg, 0.29 mmol) en MeOH (4 mi) y CH2CI2 (2.3 mi) y se enfría a 0°C. Se añade por goteo una solución de NaBH4 (55 mg, 1.5 mmol) en agua (0.5 mi) y se agita la mezcla durante 10 minutos. Se añade más cantidad de NaBH4 (55 mg, 1.5 mmol) en agua (0.5 mi) y se agita la mezcla durante 10 minutos más. Se añaden agua (60 mi) y CH2CI2 (60 mi) y se agita el material en un embudo de decantación. Se recoge la fase orgánica, se lava con una solución de salmuera diluida al 50% y se extraen de nuevo las fases acuosas con CH2CI2 (2 x 40 mi). Se reúnen las fases orgánicas, se secan (MgSO4), se filtran y se concentran. Se purifica el residuo empleando un sistema de purificación Analogix con una columna SF15 de 12 g de gel de sílice (eluyendo con MeOH del 3 al 14% en CH2CI2), obteniéndose un sólido ligeramente amarillo (138 mg), que se recristaliza en CH2Cl2/hexanos, obteniéndose el 2-(2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(1'-metil-1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bi-piridinil-6-ilamino)-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il)-2-metil-propionitrilo (109 mg, 61%) como cristales blancos. LC/MS hallado [M+H]+ 617.

Ejemplo 8 6-terc-butil-2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(5-metil-4,5,6,7- tetrahidro-pirazolo [1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-l,6- dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-2H-ftalazin-1-ona En un vial de microondas se introduce una mezcla desgasificada del n-BuOH (4 i) y agua (1 mi) a una mezcla del éster 2-(6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-(4,4,5,5-tetra-metil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencílico del ácido acético (que puede obtenerse del modo descrito en el ejemplo 5; pureza -75%; 364 mg, -0.57 mmol), la 6-cloro-2-metil-4-(5- metil-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]-pirazin-2-ilamino)-2H-piridazin-3-ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2012-0040949, compuesto intermedio de la preparación del compuesto del ejemplo 59; 150 mg, 0.51 mmol), bis(dibencilidenoacetona)paladio (Aldrich; 14.6 mg, 25 pmol), XPhos (2-(diciclohexilfosfino)-2',4',6'-tri-i-propil-1,1'-bifenilo, Strem Chemicals; 24.3 mg, 51 pmol) y fosfato de potasio tribásico (324 mg, 1.5 mmol). Se cierra el vial y se calienta la mezcla a 115°C en un baño de arena durante 2.5 h. Se filtra la mezcla a través de Celite, se concentra y se purifica por cromatografía (eluyendo con MeOH del 0 al 25% en CH2CI2), obteniéndose 175 mg de una mezcla de productos. Se añaden el MeOH (2.9 mi) y carbonato de potasio (119 mg, 0.86 mmol) y se agita la mezcla a 40°C durante 1 h. Se añade agua por goteo y se agita la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1 h. Se añade agua por goteo y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 1 h. Se separa el sólido resultante por filtración y se seca en una estufa conectada al vacío durante una noche, obteniéndose la 6-terc-butil-2-{2-hidroximetil-3-[1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo [1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-2H-ftalazin-1-ona (147 mg, 51%) como sólido cristalino blanco. LC/MS hallado [M+H]+ 567.0.

Ejemplo 9 6-terc-butil-2-{3-[5-(1'-etil-1',2',3',4',5',6'-hexa-hidro-0 [3,4']bipiridinil-6-ilamino)-1-metil-6-oxo-l,6-dihidro- piridazin-3-il]-2-hidroximetil-fenil}-2H-ftalazin-l-ona Se hace burbujear argón a traves de una mezcla de 6-cloro-4-(1'-etil-1',2',3',4',5',6'-hexahidro[3,4']bi- piridinil-6-ilamino)-2-metil-2H-piridazin-3-ona (que puede 5 obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US- 2012-0040949, compuesto intermedio del compuesto del ejemplo 69; 133 mg, 0.38 mmol) , acetato de 2-(6-terc-butil-l- oxoftalazin-2(1H)-il)-6-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxa- borolan-2-il)bencilo (que puede obtenerse del modo descrito 0 en el ejemplo 5; pureza -75%; 242 mg, 381 pmol) y fosfato de potasio tribásico (202 mg, 953 mmo?), agua (1.25 mi) y n-BuOH (5 mi) durante 5 min. Se añaden el XPhos (2-(diciclo- hexilfosfino)-2',4',6'-tri-1-propil-1,1'-bifenilo, Strem Chemicals; 18.2 mg, 38 mpio?) y el bis(dibencilidenoacetona)-5 paladio(O) (Strem Chemicals; 11.0 mg, 19.1 mmo?). Se sella el tubo y se calienta la mezcla de reacción a 115°C durante 6 h. Se vierte la mezcla de reacción sobre agua (100 mi) y se extrae la mezcla con EtOAc (3 x 75 mi). Se reúnen las fases orgánicas, se lavan con salmuera, se secan (MgSO4), se filtran y se concentran. Se purifica el residuo por cromatografía (eluyendo con MeOH del 0 al 6% en CH2CI2 y después con NH4OH/MeOH/CH2Cl2 = 4:14:82) y se tritura con Et0Ac/Et20, obteniéndose la 6-terc-butil-2-{3-[5-(l'-etil-1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-1-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-2-hidroximetil-fenil}-2H-ftalazin-1-ona (32 mg, 13%) como sólido blanquecino. RMN-H1 indica la presencia de <3% de una impureza, áster 2-(6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-[5-(1'-etil-1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-bencílico del ácido acético. LC/MS hallado [M+H]+ 620.1.

Ejemplo 10 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-(morfolina-4- carbonil)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3- il}-fenil)-2H-ftalazin-1-ona En un vial de microondas se añade una mezcla desgasificada de n-BuOH (2.29 mi) y agua (0.57 mi) a una mezcla del áster 2-(6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencílico del ácido acético (que puede obtenerse del modo descrito en el ejemplo 5; pureza -75%; 204 mg, -0.32 mmol), 6-cloro-2-metil-4-[5-(morfolina-4-carbonil)-piridin-2-ilamino]-2H-piridazin-3-ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2012-0040949, preparación del compuesto 1-2; 100 mg, 0.29 mmol), bis(dibencilidenoacetona)paladio (8.2 mg, 14.3 mmo?), XPhos (2-(diciclohexilfosfino)-2',4',6'-tri-1-propil-1,1'-bifenilo, Strem Chemicals; 13.6 mg, 28.6 pmol) y fosfato de potasio tribásico (152 mg, 0.72 mmol). Se calienta la mezcla a 115°C en un baño de arena durante una noche. Se filtra la mezcla a través de Celite, se concentra y se purifica por cromatografía (eluyendo con MeOH del 0 al 20% en CH2CI2), formándose un sólido. Se añade metanol, se filtra la mezcla y se seca en una estufa conectada al vacío durante un fin de semana, obteniéndose la 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-(morfolina- -carbonil)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-l-ona (46 mg, 26%) como polvo blanco. LC/MS hallado [M+H]+ 622.4. 2- [2-(3-{5-[5-(2-azetidin-1-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2- ilamino]-l-metil-6-oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il}-2-formil-0 fenil)-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il]-2-metil-propionitrilo Se prepara la solución A del modo siguiente: se desgasifica al vacío a presión reducida una mezcla de la 4- [5-(2-azetidin-l-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2-ilamino]-6- cloro-2-metil-2H-piridazin-3-ona (que puede obtenerse del 5 modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2012-0040949, preparación del compuesto 1-13, etapa 2; 150 mg, 0.41 mmol), XPhos (2-(diciclohexilfosfino)-2',4',6'-tri-i-propil-1,1'- bifenilo, Strem Chemicals; 29.5 mg, 62 pmol), acetato de potasio (121 mg, 1.2 mmol), bis(pinacolato)diboro (Matrix 0 Scientific; 136 mg, 0.54 mmol) y dioxano (5.3 mi) y se protege con atmósfera de argón. Se añade a temperatura ambiente el acetato de paladio(II) (10.2 mg, 45 pmol) y se repite el ciclo de desgasificación al vacío. En atmósfera de argón se agita la mezcla de reacción a 100°C (temperatura de 5 baño de aceite) durante 16 min. Se filtra la mezcla de reacción a través de un cartucho de Celite aplicando presión de argón (lavando el Celite con 2.5 mi más de dioxano), obteniéndose la solución A.

Se prepara la solución B del modo siguiente: se desgasifica una mezcla del 2-(2-(3-bromo-2-formilfenil)-1-oxo-1,2-dihidroftalazin-6-il)-2-metilpropanonitrilo (ejemplo 8; 156 mg, 394 pmol), triciclohexilfosfina (33.8 mg, 120 pmol), K2C03 (276 mg, 2 mmol), n-BuOH (480 ml), agua (1.5 mi) y dioxano (2 mi). Se añade a temperatura ambiente el bis(dibencilidenoacetona)paladio(0) (34 mg, 59 pmol) . Se desgasifica la mezcla de nuevo al vacío y se calienta sobre un baño de aceite mantenido a 110°C.

Se añade la solución A a la solución B y se agita la mezcla resultante a 110°C durante 60 min. Se enfría la mezcla de reacción a temperatura ambiente y se filtra a través de Celite. Se lava el Celite con EtOAc. Se añaden al líquido filtrado el EtOAc (30 mi) y agua (30 mi) y se recoge la fase de EtOAc. Se extrae de nuevo la fase acuosa con EtOAc (2 x 20 mi), se reúnen las fases orgánicas, se secan (Na2SO4), se filtran y se concentran. Se purifica el residuo por cromatografía empleando un sistema Analogix con una columna SF15 de 12 g (eluyendo con MeOH del 3 al 18% en CH2CI2), obteniéndose 2 -[2-(3-{5-[5-(2-azetidin-1-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2-ilamino]-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-2-formil-fenil)-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6- il]-2-metil-propionitrilo (201 mg, 79%) como polvo ligeramente marrón. LC/MS hallado [M+H]+ 645.0.

Ejemplo 11 0 2- [2-(3-{5-[5-(2-azetidin-1-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2- ilamino]-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-2- hidroximetil-fenil)-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il]-2-metil- propionitrilo 5 A una mezcla del 2-{5-[5-(2-azetidin-l-il-l,1- dimetil-etoxi)-piridin-2-ilamino]-l-metil-6-oxo-l,6- dihidropiridazin-3-il}-6-(6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2- il)-benzaldehído (201 mg, 0.31 mmol) en MeOH (4.5 mi) y CH2CI2 (2.3 mi) se añade por goteo una solución del NaBH4(59 mg, 1.6 0 mmol) en agua (0.5 mi) y se agita la mezcla resultante a 0°C durante 10 min. Se añade una solución del NaBH4 (59 mg, 1.6 mmol) en agua (0.5 mi) y se agita la mezcla durante 10 min más. Se añaden agua (60 mi) y CH2CI2 (60 mi) y se separan las f ses. Se lava la fase orgánica con salmuera acuosa del 50% 5 (60 mi), se reúnen las soluciones acuosas y se extraen de nuevo con CH2CI2 (2 c 40 mi). Se reúnen las fases orgánicas, se secan (MgSC), se filtran y se concentran. Se purifica el residuo empleando un sistema de purificación Analogix con una columna SF15 de 12 g (eluyendo con MeOH del 2 al 14% en CH2CI2) y se recristaliza en CH2Cl2/hexanos, obteniéndose el 2-[2-(3-{5- [5-(2-azetidin-1-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2-ilamino]-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-2-hidroxi-metil-fenil)-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il]-2-metil-propio-nitrilo (145 mg, 72%) como cristales blancos. LC/MS hallado [M+H]+ 647.1.

Ester 2-(6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-(5-{5-[2-(3-hidroxi-propilamino)-1,1-dimetil-etoxi]-piridin-2-ilamino}-1- metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il)-bencílico del ácido acético Se hace burbujear argón a través de una mezcla de la 4-[5-(2-azetidin-l-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2-ilamino]-6-cloro-2-metil-2H-piridazin-3-ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2012-0040949, preparación del compuesto 1-13, etapa 2; 1.50 g, 4.12 mmol), éster 2-(6-terc-butil-1-oxo-1H-ftalazin-2-il)-6-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencílico del ácido acético (ELN-003987-149; pureza: 83%; 2.95 g, 5.14 mmol), bis- (dibencilidenoacetona)paladio (Strem Chemicals; 119 mg, 0.21 mmol), XPhos (2-(diciclohexilfosfino)-2',4',6'-tri-1-propil-1,1'-bifenilo, Strem Chemicals; 197 mg, 0.41 mmol), fosfato de potasio tribásico (2.19 g, 10.3 mmol), n-BuOH (33 mi) y agua (8.25 mi) y se calienta a 100°C durante una noche. Se filtra la mezcla a través de Celite y se concentra. Se purifica el residuo empleando un sistema de purificación Analogix (eluyendo con CH2CI2 y después con CH2Cl2/MeOH/NH4OH = 82:14:4). La bomba utilizada para el sistema de purificación empieza a funcionar mal durante la purificación. Se eluye el producto de la columna empleando un sistema de purificación diferente del Analogix, utilizando como eluyente una mezcla CH2Cl2/MeOH/NH4OH (de 82:14:4 a 55:36:9). Se suspende/disuelve el producto en Et20/Et0Ac (2:1) y se deja la mezcla en reposo durante 48 h. Se filtra el sólido, obteniéndose el éster 2-(6-terc-butil-l-oxo-lH-ftalazin-2-il)-6-(5-{5-[2-(3-hidroxi-propilamino)-1,1-dimetil-etoxi]-piridin-2-ilamino}-1-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il)-bencílico del ácido acético (525 mg, 19%) como sólido ligeramente amarillo. LC/MS hallado [M+H]+ 696.0.

Ejemplo 12 6-terc-butil-2- [2-hidroximetil-3- (5-{5- [2- (3-hidroxi-propilamino) -1, 1-dimetil-etoxi] -piridin-2-ilamino} -l-metil-6- oxo-1, 6-dihidro-piridazin-3-il) -fenil] -2H-f talazin-l-ona Se agita a 40 °C durante 75 min una mezcla del ester 2- (6-terc-butil-l-oxo-1H-ftalazin-2-il) -6- (5-{5- [2- (3-hidroxi-propilamino) -1, 1-dimetil-etoxi] -piridin-2 - ilamino} -1-metil-6-oxo-l, 6-dihidro-piridazin-3-il) -bencílico del ácido acético (ejemplo 24; 295 mg, 0.42 mmol) , K2CO3 (117 mg, 0.85 mmol) y MeOH (30 mi) y se enfría a temperatura ambiente. Se añaden agua y CH2CI2 y se extrae la fase acuosa con CH2CI . Se reúnen las fases orgánicas, se secan (Na2S0) , se filtran y se concentran. Se purifica el residuo por cromatografía empleando una columna Silicycle de 12 g (eluyendo con MeOH del 1 al 15% en CH2CI2) . Se concentran las muestras homogéneas del producto y se seca el residuo a 50 °C al vacío, obteniéndose la 6- terc-butil-2 - [2 -hidroximetil-3 - (5- (5- [2- (3-hidroxi-propilamino) -1 , 1-dimetil-etoxi] -piridin-2-ilamino} -1-metil-6-oxo-l, 6-di-hidro-piridazin-3-il) -fenil] -2H-f talazin-l-ona (119 mg, 43%) como espuma ligeramente amarilla. LC/MS hallado [M+H] + 654.2.

Ejemplo 13 6-terc-butil-2-{2-hidroximetil-3- [l-metil-5-(1'-oxetan-3-il- 1',2',3',4',5',6'-hexahidro- [3,4']bipiridinil-6-il-amino)-6-0 oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-2H-ftalazin-1-ona Se hace burbujear argón a traves de una mezcla de 6 -cloro -2 -metil-4 - (1' -oxetan-3-il-l' ,2' , 3' , 4' , 5', 6'- hexahidro- [3 , 4 ' ] bipiridinil-6-ilamino) -2H-piridazin-3-ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2012-0040949, 5 ejemplo 80, etapa 1; 213 mg, 567 mpio?) , éster 2- (6-terc-butil-l-oxo-1H- ftalazin-2-il) -6- (4, 4, 5, 5-tetrametil- [l,3,2]dioxaborolan-2-il) - bencílico del ácido acético (que puede obtenerse del modo descrito en el ejemplo 5; pureza -75%; 648 mg, -1.0 nmol) , fosfato de potasio tribásico (301 g, 1.42 mmol) , agua (1.25 mi) y n-BuOH (5 mi) durante 5 0 min. Se añaden XPhos (2- (diciclohexilfosfino) -2' ,4' ,6' -tri-1-propil- 1, 1' -bifenilo, Strem Chemicals; 27 mg, 57 pmol) y bis (dibencilidenoacetona) paladio ( 0 ) (Strem Chemicals; 16.3 mg, 28 pmol) . Se sella el tubo y se calienta la mezcla de reacción a 115 °C durante 4 h. Se vierte la mezcla de reacción 5 sobre agua (100 mi) y se extrae la mezcla con CH2CI2 (5 x 75 mi) , Se reúnen las fases orgánicas, se lavan con salmuera, se secan (Na2SO4) , se filtran y se concentran. Se purifica el residuo por cromatografía (eluyendo con MeOH del 0 al 4% en CH2CI2) , obteniendose una mezcla de los productos alcohol y acetato (374 g) . Se añaden el THF (12 mi) y NaOH 1 N (2 mi) y se calienta la mezcla a 60°C durante una noche. Se vierte la mezcla sobre agua y se extrae tres veces con EtQAc y una vez con CH2CI2. Se lava el extracto orgánico con salmuera, se seca (Na2S04) , se filtra y se concentra. Se purifica el residuo por cromatografía (eluyendo con MeOH del 1 al 5% en CH CI2) , obteniéndose un vidrio. Se añaden el EtOAc (4 mi) y Et2Ü (30 mi) , se separa el precipitado blanco por filtración y se lava con éter, obteniéndose la 6-terc-butil-2- {2-hidroximetil-3-[l-metil-5- (1 ' -oxetan-3-il-l ' ,2' ,3' , 4', 5' , 6' -hexahidro-[3,4'] bipiridinil -6 -i lamino) -6-oxo-l , 6-dihidro-piridazin-3-il] -fenil} -2H-f talazin-l-ona (246 mg, 67%) como polvo blanco. LC/MS hallado [M+H] + 648.1. 6-Cloro-4-{5-[2-(3,3-difluoro-azetidin-l-il)-1,1-di-metil- etoxi]-piridin-2-ilamino}-2-metil-2H-piridazin-3-ona Se agita a temperatura ambiente durante 1 h una mezcla del 2-[6-(6-cloro-2-metil-3-oxo-2,3-dihidro-piridazin- 4-il-amino) -piridin-3-iloxi] -2-metil-propionaldehído (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2012-0040949, preparación del conpuesto 1-13, etapa 1; 665 mg, 2.06 mmol) , clorhidrato de 3, 3-dif luorazetidina (347 mg, 2.68 mmol) y 1,2-dicloroetano (70 mi) . Se añade el triacetcxiborohidruro de sodio (655 mg, 3.09 irmol) y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 18 h. Se añade una solución acuosa saturada de NaHCCh y se extrae la mezcla con CH CI (5 x 20 mi) . Se reúnen las fases orgánicas, se secan (MgSO4) , se filtran y se concentran. Se purifica el residuo por cromatografía (EtOAc del 30 al 50% en hexanos) , obteniendose la 6-cloro-4- {5- [2- (3 , 3-difluoro-azetidin-l-il) -1 , 1-di-metil-etoxi] -piridin- 2- i lamino} -2-metil-2H-piridazin-3-ona (566 mg, 69%) como polvo blanco. LC/MS hallado [M+H] + 400.0.

Ejemplo 14 6-terc-butil-2-[3-(5-{5-[2-(3,3-difluoro-azetidin-l-il)-1,1-dimetil-etoxi]-piridin-2-ilamino}-l-metil-6-oxo-l,6-di-hidro- piridazin-3-il)-2-hidroximetil-fenil]-2H-ftalazin-l-ona Se desgasifica por acción del vacío y rellenando con argón una mezcla de la 6-cloro-4-{5-[2-(3,3-difluoro-azetidin-1-il)-1,1-dimetil-etoxi]-piridin-2-ilamino}-2-metil-2H-piridazin-3-ona (ejemplo 27; 120 mg, 0.3 mmol), éster 2- (6-terc-butil-1-oxo-IH-ftalazin-2-il)-6-(4,4,5,5-tetra-metil-(1,3,2]dioxaborolan-2-il)-bencílico del ácido acético (que puede obtenerse del modo descrito en el ejemplo 5; 310 mg, 0.39 mmol), fosfato de potasio tribásico (140 mg, 0.66 mmol), el n-BuOH (4 mi) y agua (1 mi). Se añaden XPhos (2-(diciclohexil-fosfino)-2',4',6'-tri-i-propil-1,1'-bifenilo, suministrado por Strem Chemicals; 21.5 mg, 45 pinol) y bis(di-bencilidenoacetona)paladio(0) (suministrado por Strem Chemicals; 12.1 mg, 21 mol). Se desgasifica la muestra de nuevo y se calienta a 115°C durante 3 h. Se añaden agua (35 mi) y EtOAc (35 mi). Se lava la fase EtOAc con salmuera (35 mi) y se extrae de nuevo la fase de salmuera con EtOAc (2 x 30 mi). Se reúnen las fases orgánicas, se secan (Na2SO4), se filtran y se concentran. Se purifica el residuo por cromatografía (EtOAc del 50 al 70% en hexanos), obteniéndose la 6-terc-butil-2-[3-(5-{5-[2-(3,3-difluoro-azetidin-l-il)-1,1-dimetil-etoxi]-piridin-2-ilamino}-l-metil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-3-il)-2-hidroximetil-fenil]-2H-ftalazin-l-ona (130 mg, 65%) como sólido blanco. LC/MS hallado [M+H]+ 672.O. 2-(2-{2-formil-3-[l-metil-5-(l'-metil-l',2',3',4',5',6'- hexahidro- [3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-1,2,3,4-tetra-hidro-isoquinolin- 6-il)-2-metil-propionitrilo Se desgasifica al vacío y rellenado con argón una mezcla de la 6-cloro-2-meti1-4 -(5-(1-metilpiperidin-4-i1 )-piridin-2-ilamino) piridazin- 3(2H)-ona (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-20 12-0040949, preparación del compuesto 1-67, etapa 2; 140 mg, 0.42 mmol), XPhos (2-(diciclohexilf osfino)- 2',4 ',6'-1ri-i-propi 1-1,1'-bifeni lo, Strem Chemicals,· 30 mg, 63 pmol), acetato de potasio (123 mg, 1.26 mmol), bis (pinacolato)diboro (Matrix Scientific; 138 mg, 0.55 mmol) y dioxano (7 mi). Se añade el acetato de paladio(II) (10.4 mg, 46 pmol) y se desgasifica la muestra de nuevo. En atmósfera de argón se calienta la mezcla a 100°C durante 16 min. Se filtra la mezcla de reacción a través de un cartucho de Celite empleando presión de argón (lavando el Celite con 2.5 mi más de dioxano) , obteniéndose la solución A.

Se prepara la solución B del modo siguiente: se desgasifica una mezcla del 2 -[2-(3-bromo-2 -formi1-fenil) -1-oxo-1,2 ,3,4-1etrahidro -isoquino1in- 6-i1]-2-metil-propionitrilo (que puede obtenerse del modo descrito por Berthel, S.J. et al., US-2010-0222325 , ejemplo 153; 166 mg, 0.42 mmol), triciclohexilf osfina (36 mg, 128 mmo?), K2C03 (290 mg, 2.1 mmol), n-BuOH (534 ml), agua (2.1 mi) y dioxano (2.22 mi). Se añade a temperatura ambiente el bis(di-bencilidenoacetona) paladio (0) (36.1 mg, 63 pmol). Se desgasifica la mezcla de nuevo al vacío y se calienta sobre un baño de calentamiento mantenido a 110°C.

Se añade la solución A a la solución B y se agita la mezcla resultante a 110°C durante 60 min. Se interrumpe el calentamiento y se mantiene la mezcla de reacción en agitación durante una noche. Se filtra la mezcla de reacción a través de Celite y se lava el Celite con EtOAc. Se añaden el EtOAc (30 mi) y agua (30 mi) al líquido filtrado y se recoge la fase de EtOAc. Se extrae de nuevo la fase acuosa con EtOAc (2 x 20 mi), se reúnen las fases orgánicas, se secan (Na2SO4), se filtran y se concentran. Se purifica el residuo por cromatografía empleando un sistema Analogix con una columna SF25 de 24 g (eluyendo con MeOH del 2 al 13% en CH2CI2), obteniéndose el 2-(2-{2-formi1-3- [1-metil-5-(1' metil -1',2',3',4', 5',6'-hexahidro- [3,4']bi iridinil-6-il-amino) -6-oxo-l, 6-dihidro-piridazin-3 -il] -fenil}-1-oxo- 1,2,3,4-tetrahidro- isoquinol in-6-il)-2 -metí1-propionitrilo (158 mg, 61%) como semissólido ligerament marrón. LC/MS hallado [M+H]+ 616.0.

Ejemplo 15 . 2-(2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(1'-metil- l',2',3',4',5',6'-hexahidro- [3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6- oco-1,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-l,2,3,4-tetra- hidro-isoquinolin-6-il)-2-metil-propionitrilo Se añade una solución de NaBH4 (49 mg, 1.3 mmol) en agua (0.75 mi) a una mezcla enfriada (~0°C) del 2-(2-{2-formil-3-[l-metil-5-(l'-metil-l',2',3',4',5',6'-hexahidro- [3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-l,2,3,4-tetrahidro-isoquinolin-6-il)-2-metil-propionitrilo (158 mg, 0.26 mmol), el CH2CI2 (2 mi) y MeOH (2 mi). Se agita la mezcla durante 10 min. Se añade una solución del NaBH4 (49 mg, 1.3 mmol) en agua (0.75 mi) y se agita la mezcla durante 10 min. Se añade una solución del NaBH4 (66 mg, 1.7 mmol) en agua (0.75 i) y se agita la mezcla durante 5 min. Se separa la capa acuosa superior y se añade el MeOH (1 mi) . Se añaden dos porciones adicionales del NaB¾ (66 mg, 1.7 mi) en agua (0.75 mi) a intervalos de 10 minuto y se agita la mezcla de reacción durante 10 min. Se añaden agua (60 mi) y CH2CI2 (50 mi) . Se agita la mezcla en un embudo de decantación y se separa la fase orgánica. Se lava la fase orgánica con salmuera acuosa del 50% (50 mi) , se reúnen las fases acuosas y se extraen de nuevo con CH2CI2 (2 x 40 mi) . Se reúnen las fases orgánicas, se secan (MgSO4) , se filtran y se concentran. Se purifica el residuo empleando un sistema de purificación Analogix can una columna SF15 de 12 g (eluyendo con MeOH del 1 al 16% en CH2C12) , obteniendose un sólido blanquecino (101 mg) , que se recristaliza en CH2CI2/ hexanos, obteniéndose el 2- (2-{2-hidroximetil-3- [l-metil-5- (I' - etil-1' ,2' ,3' ,4' ,5' ,6' -hexahidro- [3,4' ]bipiridinil-6-il-amino) -6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il] -fenil} -1-oxo-l , 2, 3 , 4 - tetrahidro-isoquinolin-6-il) -2-metil-propionitrilo (81 mg, 92%) como polvo blanquecino. LC/MS hallado [M+H] + 618.2.

Ejemplos biológicos Ensayo de inhibición de la tirosina cinasa de Bruton (Btk) Este ensayo es una captura del producto fosforilado radiactivo P33 por filtración. Las interacciones de Btk, el sustrato peptídico SH2 biotinilado (homología Src) y el ATP conducen a la fosforilación del sustrato peptídico . El producto biotinilado se une a las perlas de estreptavidina-Sefarosa . Todos los productos radiomarcados , unidos , se detectan con un contador de centelleo .

Las placas utilizadas para el ensayo son placas de polipropileno de 96 cavidades (Greiner) y placas filtro PVDF hidrófilas de 1.2 mpi de 96 cavidades (Millipore) . Las concentraciones que aquí se indican son concentraciones finales del ensayo : compuestos 10- 100 mM en DMSO (Burdick y Jackson) , enzima Btk 5-10 nM (marcada con His , de longitud completa) , sustrato peptídico 30 mM (biotina-Aca-AAAEEIYGEI-NH2) , ATP 100 mM (Sigma) , imidazol 8 mM (Sigma, pH = 7.2 ) , glicerina-2 -fosfato 8 mM (Sigma) , EGTA 200 mM (Roche Diagnostics) , MnCl2 1 M (Sigma) , MgCl2 20 mM (Sigma) , 0.1 mg/ml de BSA (Sigma) , DTT 2 mM (Sigma) , ATP-P33 1 pCi (Amersham) , perlas del 20% de estreptavidina-Sefarosa (Amersham) , EDTA 50 mM (Gibco) , NaCl 2 M (Gibco) , NaCl 2 M p/1% de ácido fosfórico (Gibco) , Microscint-20 (Perkin Elmer) .

Las determinaciones de la IC50 se calculan a partir de 10 puntos de datos por compuesto empleando los datos obtenidos en un molde de ensayo de placa estándar de 96 cavidades. Se ensayan un compuesto de control y siete inhibidores desconocidos en cada placa y cada placa se analiza dos veces . De forma típica se diluyen los compuestos en concentraciones semi-logarítmicas partiendo de 100 mM y terminando en 3 nM . El compuesto de control es la estaurosporina. La base se cuenta en ausencia del sustrato peptídico. Se determina la actividad total en la presencia del sustrato peptídico. Se aplica el método siguiente para determinar la inhibición de Btk. 1) preparación de la muestra: se diluyen los compuestos de prueba en incrementos semi-logarítmicos en el amortiguador de ensayo (imidazol, glicerina-2-fosfato, EGTA, MnCl2, MgCl2, BSA). 2) preparación de las perlas: a.) enjuague las perlas por centrifugación a 500 g. b.) reconstituya las perlas con PBS y EDTA para producir una suspensión con un 20% de perlas. 3) preincube la mezcla de reacción sin sustrato (amortiguador de ensayo, DTT, ATP, ATP-P33) y mezcla con sustrato (amortiguador de ensayo, DTT, ATP, ATP-P33, sustrato peptídico) a 30°C durante 15 min. 4) para iniciar el ensayo se preincuban 10 ml de Btk en amortiguador enzimático (imidazol, glicerina-2-fosfato, BSA) y 10 ml de los compuestos de prueba a r.t. durante 10 min. 5) añada 30 m? de la mezcla de reacción sin o con sustrato a la Btk y compuestos. 6) incube 50 m? de la mezcla de ensayo total a 30°C durante 30 min. 7) transfiera 40 m? de amortiguador de ensayo a 150 ml de suspensión de perlas en placa de filtro para interrumpir la reacción. 8) después de 30 min lave la placa de filtro, con las etapas siguientes: a. 3 x 250 ml de NaCl b. 3 x 250 m? de NaCl que contiene un 1% de ácido fosfórico c. 1 x 250 m? de H2O 9) seque la placa a 65°C durante 1 h o a r.t. durante una noche 10) añada 50 m? de Microscint-20 y cuente el P33 en cpm en el contador de centelleo.

Calcule la actividad porcentual a partir de los datos obtenidos cpm: actividad porcentual = (muestra - bkg) / (actividad total -bkg) x 100 Calcule la IC5o a partir de la actividad porcentual, empleando un modelo sigmoidal de respuesta a dosis en un sitio: y = A + ((B - A) / (1 + ((x / C)D))) x = concentración del compuesto, y = actividad en %, A = mín, B = máx, C = IC5o, D = 1 (pendiente de Hill).

Inhibición de la activación de las células B en sangre total medida mediante la expresión de CD69 A continuación se describe un procedimiento para probar la capacidad de los inhibidores de Btk para suprimir la activación de las células B en sangre humana mediada por el receptor de células B.

Se obtiene la sangre total humana (HWB, por sus siglas en inglés) de donantes voluntarios sanos, con las restricciones siguientes: no haber tomado fármacos en las últimas 24 h y no ser fumadores. Se recoge la sangre de la punción en la vena en tubos Vacutainer y se anticoagula con heparina de sodio. Se diluyen los compuestos de prueba diez veces hasta una concentración inicial deseada en PBS (20x), después se diluyen en series de tres en DMSO al 10 % en PBS para obtener una curva de dosis-respuesta de nuevo puntos. Se añaden 5.5 ml de la dilución de cada compuesto por duplicado a una placa de 96 cavidades de 2 mi de fondo en V (Analytical Sales and Services, n" 59623-23); se añaden 5.5 ml de DMSO al 10% en PBS a los cavidades de control y exentos de estímulo. Se añade la HWB (100 m?) a cada cavidad y, una vez mezcladas las placas, se incuban a 37°C, con un 5% de CO2, 100% de humedad, durante 30 minutos. Se añade a cada cavidad la IgM de cabra F(ab')2 anti-humana (Southern Biotech, n° 2022-14) (10 m? de una solución de 500 mg/ml, concentración final: 50 mg/ml) (excepto los cavidades carentes de estímulo), se mezclan y se incuban las placas durante 20 horas más.

Al término de las 20 horas de incubación, se incuban las muestras con anticuerpos marcados con una sonda fluorescente (15 m? de CD20 PE de ratón anti-humano, de BD Pharmingen, n° 555623, y/o 20 m? de CD60 APC de ratón anti humano, de BD Pharmingen, n° 555533) durante 30 minutos, a 37°C, con un 5% de CO2, 100% de humedad. Se incluyen el control inducido, las cepas no teñidas y las individuales para los ajustes de compensación y los ajustes iniciales de voltaje. Después se lisan las muestras con 1 mi de amortiguador de lisis IX Pharmingen Lyse Buffer (BD Pharmingen, n° 555899) y se centrifugan las placas a 1800 rpm durante 5 minutos. Se separan los líquidos sobrenadantes por succión y se lisan las pelotillas restantes contra otro mi de amortiguador de lisis IX Pharmingen Lyse Buffer y se centrifugan de nuevo las placas. Se aspiran los líquidos sobrenadantes y se lavan las pelotillas restantes con amortiguador FACs (PBS + 1% de FBS) . Después de la centrifugación final se separan los líquidos sobrenadantes y se suspenden de nuevo las pelotillas en 180 ml de amortiguador FACs. Se transfieren las muestras a una placa de 96 cavidades adecuada para el uso en el sistema de 96 cavidades HTS del citómetro de flujo BD LSR II.

Empleando longitudes de onda apropiadas de excitación y de emisión para los fluoróforos seleccionados se obtienen datos y con el programa informático de Cell Quest se calculan los valores celulares porcentuales positivos. Los resultados se analizan inicialmente con un programa informático de análisis de FACS (Flow Jo). El valor de la IC50 de los compuestos ensayados se define como la concentración que produce una disminución del 50 % en el porcentaje de las células positivas de CD69, que también son positivas de CD20 después de la estimulación con una anti-IgM (promedio de 8 cavidades de control después de la sustracción del promedio de 8 cavidades para la línea de fondo carente de estímulo). Los valores IC50 se calculan con el programa informático XLfit, versión 3, ecuación 201.

Los datos de los compuestos representativos para este ensayo se recogen en la siguiente tabla II.

Tabla II Inhibición de la activación de las células B - ensayo FLIPR de células B en células de Ramos Se demuestra la inhibición de la activación de las células B provocada por los compuestos de la presente invención determinando el efecto de los compuestos de ensayo en las respuestas de las células B estimuladas con anti-IgM.

El ensayo FLIPR de las células B es un método funcional de base celular para determinar el efecto de inhibidores potenciales del incremento del calcio intracelular a partir de la estimulación con un anticuerpo anti-IgM. Se cultivan las células de Ramos (línea celular de linfoma de Burkitt humano, ATCC n" CRL-1596) en medio de crecimiento (descrito a continuación). Un día antes del ensayo se suspenden de nuevo las células de Ramos en medio de crecimiento fresco (el mismo que antes) y se ajustan a una concentración de 0.5 x 106/ml en frascos de cultivo de tejidos. El día del ensayo se cuentan las células y se ajustan a una concentración de 1 x 106/ml en medio de crecimiento suplementado con FLUO-3AM 1 mM (TefLabs, n° de cat. 0116, preparado en DMSO anhidro y 10% de ácido plurónico) en un frasco de cultivo de tejidos y se incuban a 37°C (4% de CO2) durante una h. Para eliminar el colorante extracelular se recogen las células por centrifugación (5 min, 1000 rpm), se suspenden de nuevo en amortiguador FLIPR (descrito a continuación) a razón de 1 x 106 células/ml y después se dispensan en placas de 96 cavidades negro/transparente recubiertas con poli-D-lisina (BD n° de cat. 356692) a razón de 1 x 105 células por cavidad. Se añaden los compuestos de prueba en diferentes concentraciones que van de 100 mM a 0.03 mM (7 concentraciones, ver detalles a continuación) y se mantienen en incubación con células a r.t. durante 30 min. Se estimula la señalización de Ca2+ de las células de Ramos con la adición de 10 mg/ml de anti-IgM (Southern Biotech, n° de cat. 2020-01) y se mide en un aparato FLIPR (Molecular Devices, captura las imágenes de placas de 96 cavidades utilizando una cámara CCD con un láser de argón de excitación a 480 nm).

Medios/amortiguadores: Medio de crecimiento: medio RPMI 1640 con L-glutamina (Invitrogen, n° de cat.61870-010), 10% suero fetal bovino (FBS, Summit Biotechnology, n° de cat. FP-100-05); piruvato de sodio 1 mM (Invitrogen, n’ de cat.11360-070).

Amortiguador FLIPR: HBSS (Invitrogen, n° de cat. 141175-079), CaCl2 2 mM (Sigma, n° de cat. C-4901), HEPES (Invitrogen, n° de cat. 15630-080), probenecida 2.5 mM (Sigma, n° de cat. P-8761), 0.1% BSA (Sigma, n° de cat. A- 7906), glucosa 11 mM (Sigma, n° de cat. G-7528).

Detalles de dilución del compuesto: Con el fin de conseguir la mayor concentración final de ensayo de 100 mM, se añaden directamente 24 ml de la solución patrón 10 mM del compuesto (en DMSO) a 576 ml de amortiguador FLIPR. Se diluyen los compuestos de prueba en amortiguador FLIPR (empleando el aparato pipeteador Biomek 2000 Robotic) obteniéndose el siguiente esquema de dilución: vehículo, 1.00 x 104 M, 1.00 x 10~s, 3.16 x 106, 1.00 x 10-6, 3.16 x 107, 1.00 x IO7, 3.16 x lO8.

Ensayo y análisis: Los incrementos intracelulares de calcio se obtienen empleando una estadística de máx - mín (restando la línea de base restante del pico provocado por la adición del anticuerpo estimulador empleando un control de FLIPR de Molecular Devices y un programa informático de exportación estadística. Se determina la IC5o empleando un ajuste de curva no lineal (programa informático GraphPad Prism).

Artritis en ratones inducida por colágeno (mCIA) En el día 0 se inyecta a los ratones una emulsión de colágeno tal como II en adyuvante completo de Freund (CFA) , por vía intradermal ( i . d. ) en la base de la cola o en diversas zonas de la espalda . Como consecuencia de la inmunización al colágeno, los animales desarrollarán la artritis al cabo de 21-35 días . El inicio de la artritis se sincroniza (revacunación) mediante la administración sistemica de colágeno en adyuvante incompleto de Freund (IFA; i .d. ) el día 21. A partir del día 20, los animales se examinan a diario para observar cualquier inicio de artritis moderada (puntuación 1 o 2 ; véase la descripción de la puntuación en páginas siguientes) , que es la señal de revacunación. Después de la revacunación se puntúan los ratones y reciben las dosis de agentes terapéuticos candidatos durante el tiempo prescrito (por ejemplo 2-3 semanas) y con la frecuencia de dosificación prescrita : diaria (QD) o dos veces al día (BID) . Artritis en ratas inducida por colágeno (rCIA) En el día 0 se inyecta a las ratas una emulsión de colágeno bovino tal como II en adyuvante incompleto de Freund (IFA), por vía intradermal (i.d.) en diversas zonas de la espalda. Se aplica una inyección de refuerzo de emulsión de colágeno en torno al día 7 (i.d.) en la base de la cola o en sitio alternativos de la espalda. En general se observa la artritis en los días 12-14 después de la inyección inicial del colágeno. Puede evaluarse el desarrollo de la artritis en los animales del modo descrito a continuación (evaluación de artritis) del día 14 en adelante. Se administran a los animales dosis de agentes terapéuticos candidatos de manera preventiva, empezando en el período de la prueba secundaria y durante el tiempo prescrito (por ejemplo 2-3 semanas) y la frecuencia de dosificación, una vez al día (QD) o dos veces al día (BID).

Evaluación de la artritis En los dos modelos se cuantifica el desarrollo de la inflamación en las articulaciones de las patas y cadera empleando un sistema de puntuación que implica la evaluación de las 4 patas de acuerdo con los criterios que se describen seguidamente: puntuación: 1 = hinchamiento y/o rojez de la pata o de un dedo. 2 = hinchamiento de dos o más articulaciones. 3 = hinchamiento grande de la pata que afecta a más de dos articulaciones. 4 = artritis severa de toda la pata y los dedos.

Las evaluaciones se realizan en el día 0 para la medición de la línea de base y se parte de nuevo con los primeros signos o hinchamiento hasta tres veces por semana hasta el final del ensayo. El índice artrítico de cada ratón se obtiene sumando las cuatro puntuaciones de las patas individuales, que pueden alcanzar una puntuación máxima de 16 por animal.

Modelo de asma in vivo en ratas Se sensibilizan ratas pardas, machos, por vía i.p. con 100 mg de ovalbúmina (OA) en 0.2 mi de alumbre, una vez por semana durante tres semanas (días 0, 7 y 14). El día 21 (una semana después de la última sensibilización), se administran a las ratas una vez al día el vehículo o la formulación que contiene compuesto, por vía subcutánea, 0.5 horas antes de exponerlas al aerosol de OA (OA al 1 % durante 45 minutos) y se termina al cabo de 4 o 24 horas después de la exposición. En el momento del sacrificio se recogen el suero y el plasma de todos los animales para el estudio de serología y PK, respectivamente. Se inserta una cánula en la tráquea y se lavan los pulmones 3 veces con PBS. Se analiza el líquido BAL para determinar el número total de leucocitos y el número diferencial de leucocitos. El número total de leucocitos se determina en una parte alícuota de las células (20-100 ml) mediante un contador tal como Coulter. Para los números diferenciales de leucocitos se centrifugan 50-200 ml de la muestra en una máquina Cytospin y se tiñe la pelotilla con Diff-Quik. Se cuentan las proporciones de monocitos, eosinófilos, neutrófilos y linfocitos con un microscopio de luz, aplicando criterios morfológicos estándar y se expresan como porcentaje. Los inhibidores representativos de Btk presentan un número total de leucocitos menos en el BAL de ratas sensibilizadas y expuestas a la OA, si se comparan con los niveles que presentan los animales de control.

La anterior invención se ha descrito con algún detalle a título ilustrativo y de ejemplo, para facilitar la claridad y la comprensión. Para los expertos en la materia es obvio que se pueden introducir cambios y modificaciones dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. Por lo tanto, se da por supuesto que la anterior descripción tiene una finalidad ilustrativa y no restrictiva. El alcance de la invención no se determinará por lo tanto con referencia a la descripción anterior, sino que se determinará con referencia a las reivindicaciones anexas siguientes, junto con el pleno alcance de equivalentes a los que dichas reivindicaciones se refieren.

Todas las patentes, solicitudes y publicaciones de patente citadas en esta solicitud se incorporan a la misma como referencias en su totalidad para todos los fines en la misma extensión que cada patente, solicitud o publicación de patente individual que se indican en este sentido a título individual.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (19)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Un compuesto de la fórmula I: I caracterizado porque: — es un enlace sencillo o doble; X es N; R es H, -R1, -R1-R2-R3, -R -R3 O -R2-R3; R1 es arilo, heteroarilo, heteroarilo bicíclico, cicloalquilo o heterocicloalquilo, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior, hidroxi, hidroxi-alquilo inferior, alcoxi inferior, halógeno, nitro, amino, amido, ciano, oxo o haloalquilo inferior; R2 es -C(=0), -C(=0)0, -C(=0)NR2', -NHC(=0)0, - C(R2'}2, -O, -S, -C(=NH)NR2' O -S(=0)2; cada R2' es independientemente H o alquilo inferior; R3 es H o R4; R4 es alquilo inferior, haloalquilo inferior, alcoxi inferior, amino, alquilo inferior-amino, cicloalquil-amino, dialquilo inferior-amino, arilo, arilalquilo, alquilarilo, heteroarilo, alquil-heteroarilo, heteroaril-alquilo, cicloalquilo, alquil-cicloalquilo, cicloalquil-alquilo, heterocicloalquilo, alquil-heterocicloalquilo, heterocicloalquil-alquilo, cicloalquilo bicíclico, heterocicloalquilo bicíclico, espirocicloalquilo, espiroheterocicloalquilo o espiroheterocicloalquilo bicíclico, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior, halógeno, alquilo inferior-amino, dialquilo inferior-amino, hidroxi, hidroxialquilo inferior, alcoxi inferior, alcanoilo inferior, halógeno, nitro, amino, amido, acilo, ciano, oxo, sulfonilo, alquilo inferior sulfonilo, guanidino, hidroxil-amino, carboxi, carbamoilo, carbamato, haloalcoxi inferior, heterocicloalquilo o haloalquilo inferior, en donde dos grupos alquilo inferior juntos pueden formar un anillo; Y4 es Y4a, Y4b, Y4C o Y4d; Y4a es H o halógeno; Y4b es alquilo inferior opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de haloalquilo inferior, halógeno, hidroxi, amino, ciano y alcoxi inferior; Y4c es cicloalquilo inferior opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alquilo inferior, haloalquilo inferior, halógeno, hidroxi, amino, ciano y alcoxi inferior; y Y4d es amino opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior, alcoxi alquilo inferior o hidroxialquilo inferior; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R es -R1-R2-R3; R1 es piridilo; R2 es -S(=0)2, R3 es R4; y R4 es alquilo inferior.

3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R es -R1-R2-R3; R1 es piridilo; R2 es -C(CH3)2; R3 es R4; y R4 es alquilo inferior-amino, dialquilo inferior-amino, o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior.

4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R es -R!-R^R3; R1 es fenilo o piridilo R2 es -C =0 R es R y R4 es morfolina o piperazina opcionalmente sustituidas con uno o más alquilo inferior.

5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Y4 es tere-butilo.

6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Y4 es en donde Y5 es H, halógeno, alquilo inferior o haloalquilo inferior.

7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque Y4 es en donde, Y5 y Y6 son independientemente H o alquilo inferior.

8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque R es -R -R R1 es piridilo o pirazolopirazina; R3 es R4; y R4 es alquilo inferior opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo o alquil-heterocicloalquilo.

9· El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque R es -R1—R2—R3; R1 es piridilo; R2 es -C(CH3)2; R3 es R4; y R4 es alquilo inferior-amino, dialquilo inferior-amino o heterocicloalquilo opcionalmente sustituido con uno o más alquilo inferior.

10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque R es -R!-RZ-R3; R1 es piridilo; R2 es -C(=0); R3 es R4; y R4 es heterocicloalquilo opcionalmente sustituido o espiroheterocicloalquilo bicíclico.

11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque R4 es morfolina o piperazina opcionalmente sustituida.

12. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-11, caracterizado porque se selecciona del grupo que consiste de: 2-(3-{5-[5-(2-azetidin-1-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2-il-amino]-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3- il}-2-hidroxi-metil-fenil)-6-terc-butil-2H-ftalazin-1-ona; 6-terc-butil-2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(1'-metil-1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-2H-ftalazin-1-ona; 2-{3-[5-(5-azetidin-1-ilmetil-l-metil-1H-pirazol-3 ilamino)-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-2-hidroximetil-fenil}-6-terc-butil-2H-ftalazin-1-ona; 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-((S)-l-metil-pirrolidin-2-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-1-ona; 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-((S)-l-metil-pirrolidin-3-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-l-ona; 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{l-metil-5-[5-((R)-l-metil-pirrolidin-3-il)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-l-ona; 2-(2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(1'-metil-1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-1,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-1-oxo-1,2-dihidro-ftalazin-6-il)-2-metil-propionitrilo; 6-terc-butil-2-{2-hidroximetil-3-[1-metil-5-(5-metil-4,5,6,7-tetrahidro-pirazolo[1,5-a]pirazin-2-ilamino)-6 oxo-1,6-di-hidro-piridazin-3-il]-fenil}-2H-ftalazin-1-ona; 6-terc-butil-2-{3-[5-(1'-etil-1',2',3',4',5',6'- hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-1-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-2-hidroximetil-fenil}-2H-ftalazin-1-ona; 6-terc-butil-2-(2-hidroximetil-3-{1-metil-5-[5-(morfolina-4-carbonil)-piridin-2-ilamino]-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-fenil)-2H-ftalazin-l-ona; 2-[2-(3-{5-[5-(2-azetidin-l-il-l,1-dimetil-etoxi)-piridin-2-ilamino]-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il}-2-hidroxi-metil-fenil)-1-oxo-l,2-dihidro-ftalazin-6-il]-2-metil-propio-nitrilo; 6-terc-butil-2-[2-hidroximetil-3-(5-{5-[2-(3-hidroxi-propil-amino)-1,1-dimetil-etoxi]-piridin-2-ilamino}-l-metil-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il)-fenil]-2H-ftalazin-1-ona; 6-terc-butil-2-{2-hidroximetil-3-[l-metil-5-(I'-oxetan-3-il-1',2',3',4',5',6'-hexahidro-[3,4']bipiridinil-6-ilamino)-6-oxo-l,6-dihidro-piridazin-3-il]-fenil}-2H-ftalazin-l-ona; y 6-terc-butil-2-[3-(5-{5-[2-(3,3-difluoro-azetidin-1-il)-1,1-dimetil-etoxi]-piridin-2-ilamino}-l-metil-6-oco-1,6-dihidro-piridazin-3-il)-2-hidroximetil-fenil]-2H-ftalazin-l-ona .

13. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-12 mezclado con al menos un portador, excipiente o diluyente farmacéuticamente aceptable.

14. Uso del compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o un trastorno autoinmune.

15. Uso del compuesto de conformidad con la reivindicación 14, en donde tal trastorno es la artritis reumatoide o asma.

16. Uso de un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, para el tratamiento de un trastorno inflamatorio o autoinmune.

17. Uso de un compuesto de conformidad con la reivindicación 16, en donde tal trastorno es la artritis reumatoide o asma.

18. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-12, para usarse en el tratamiento de trastorno inflamatorio o autoinmune.

19. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque tal trastorno es la artritis reumatoide o asma.